Modelare neuronal

21

MODELARE NEURONAL
Dr. Szilgyi Tibor, Dr. Metz Jlia

PRINCIPII TEORETICE
n celulele excitabile semnalele electrice sunt purtate n primul rnd de curenii ionici
transmembranari, care provoac modificarea tensiunii transmembranare. Micarea acestor
ioni este guvernat de legile fizicii. Sursa de energie a micrilor ionice este gradientul de
concentraie peste membran, care este meninut de pompele ionice care iau energia din
hidroliza moleculelor de ATP. Acest gradient de concentraie stabilete un potenial
electrochimic prin membran care dirijeaz micarea ionic conform legilor difuziei i a
driftului electric.
Neuronii, ca i restul celulelor, sunt nconjurai de membrane bilipidice care conin un
numr mare de macromolecule proteice. Stratul bilipidic permite ca compoziia mediului
intern i extern s fie foarte diferit. Pentru semnalizarea electric este important diferena
de concentraie a ctorva ioni cheie. Pe exterior Na+, Ca2+ i Cl- exist n concentraie mai
mare, pe cnd n interior K+ i anionii impermeabili membranei ( A-)sunt mai concentrai.
Proteinele membranare au funcii foarte variate. Cele care stau la baza semnalizrii
electrice sunt molecule mari care formeaz canale ionice. Aceste canale au cteva
proprieti importante: posed un por umplut cu ap prin care ionii traverseaz membrana;
de obicei sunt selective pentru anumii ioni (K+, Na+, Cl- i Ca2+); sensibilitate pentru (sunt
nchise sau deschise de) potenialul electric transmembranar sau substane
neurotransmitoare sau ambele; pot fi influenate de o mulime de semnale biochimice intrasau extracelulare.
Deoarece ionii sunt dispui inegal pe cele dou pri ale membranei, tind s difuzeze
conform gradientului de concentraie spre mediul cu concentraie mai sczut. In acelai
timp micarea ionilor, fiind ncrcai electric, este influenat de cmpul electric
transmembranar. Diferena de potenial transmembranar la care fora termodinamic de
difuzie i fora electric sunt egale este denumit potenial de echilibru, i este diferit
pentru fiecare ion. La acest potenial curentul net transmembranar al ionului respectiv este
zero. Potenialul de echilibru este important n determinarea efectului activrii (sinaptice sau
intrinsece) a curentului respectiv.
Potenialul de echilibru (EIon) se calculeaz dup ecuaia stabilit de Nernst n 1888:
RT [Ion]e
ln
zF [Ion]i
Unde R este constanta universal a gazelor, T: temperatura absolut, F: constanta lui
Faraday, z: valena ionului, [Ion]e i [Ion]i: concentraia ionului n spaiul extra- i intracelular.
Concentraiile i potenialul de echilibru la o celul tipic de mamifere este redat n
Tabelul 1.
EIon =

Tabelul 1. Concentraiile ionice i potenialele de echilibru.

K+
Na+
ClCa2+

Interior (mM)
140
5-15
7
10-4

Exterior (mM)

5
145
110
2.5-5

Pot. de echilibru (mV)

-89
+90-(+61)
-74
+136-(+145)

Uurina cu care un ion difuzeaz prin membran denumim permeabilitate. Creterea

permeabilitii membranei pentru un anumit ion (crescnd probabilitatea deschiderii canalelor
membranare pentru ionul respectiv) crete conductana electric i trage potenialul de
membran spre potenialul de echilibru al ionului. Aceast regul este adevrat indiferent
dac potenialul de membran este mai negativ (hiperpolarizare) sau mai pozitiv
(depolarizare) dect potenialul de echilibru.

22

Lucrri practice de fiziologie

Potenialul de repaus. n absena activrii sinaptice sau cnd neuronul este n

repaus membrana celular este dominat de permeabilitatea de K+. Dac membrana ar fi
permeabil numai pentru K+, potenialul de membran ar fi egal cu EK. Totui, chiar i n
repaus, membrana neuronal este permeabil i pentru ali ioni, n special pentru Na+ i Cl-,
deci potenialul de membran deviaz spre ENa (+65mV) i ECl (-75mV). Punctul la care
micarea acestor ioni este n echilibru (deci curentul net prin membran este zero),
corespunde potenialului de repaus i este n mod tipic ntre 60 i 75mV.
Potenialul de aciune (PA). Semnalizarea rapid n celulele nervoase se realizeaz
prin modificri scurte ale potenialului de membran. Forma cea mai caracteristic este
potenialul de aciune, sau impulsul nervos (spike).
Modificrile de permeabilitate ionic a membranei care stau la baza potenialului de
aciune au fost prima dat descrise corect de Hodgkin i Huxley n 1952 la preparatul de
axon de sepie. Aceste experiene au artat c ascensiunea rapid a potenialului de
membran se datoreaz creterii regenerative a unui curent tranzitoriu de Na+, denumit INa,t.
Deoarece INa,t este activat rapid de depolarizare i acest curent nsui cauzeaz
depolarizare, se creeaz un feed-back pozitiv, autoamplificant.
Depolarizarea cauzat de intrarea Na+ se propag electrotonic la membrana
adiacent, cauznd depolarizarea acestuia. Pe urm se activeaz aceleai mecanisme
regenerative n aceste locuri, determinnd propagarea potenialului de aciune de-a lungul
axonului.
Repolarizarea potenialului de aciune este esenial deoarece o celul nu numai odat
se descarc n cursul vieii dar i pentru c aceasta influeneaz cum va rspunde celula la
stimulare repetat. Dou procese sunt eseniale pentru repolarizare: inactivarea rapid a INa,t
i activarea curenilor de K+. Rata inactivrii (denumit cinetica inactivrii) este abia puin mai
lent dect rata activrii. Chiar i n faza de ascensiune a potenialului de aciune, numrul
canalelor de Na+ disponibile se reduce treptat din cauza inactivrii. Simultan, dar cu o
desfurare mai lent, depolarizarea activeaz un curent de K+, denumit IK (delayed
rectifier), permind ionilor de K+ s prseasc celula. La un anumit punct influena
hiperpolarizant a K+ va depi influena depolarizant a Na+ i potenialul de aciune se
termin, membrana se repolarizeaz.
Declanarea potenialului de aciune are loc, dac neuronul este depolarizat pn la
pragul de excitare. La majoritatea neuronilor acest potenial este aproximativ ntre 50 i
-55 mV. La prag, generarea potenialului de aciune este un fenomen cu caracter tot sau
nimic. Dac pragul este depit, se genereaz un potenial de aciune care se propag
nealterat de-a lungul axonului i cauzeaz eliberarea neurotransmitorilor la terminaiile
sinaptice. Dac nu se atinge pragul, nu apare potenialul de aciune, evenimentul nu este
transmis la alte celule. Totui o depolarizare sub prag poate modifica probabilitatea ca alte
poteniale postsinaptice s declaneze descrcarea celulei.
Canalele de sodiu inactivate de o depolarizare prelungit pot fi deschise din nou numai
dac membrana este prima dat repolarizat. Din acest motiv, n timpul potenialului de
aciune (cnd membrana este depolarizat) nu se poate declana un alt potenial de aciune,
deci celula este inexcitabil, adic este n perioad refractar.
Canalele voltaj-dependente pot fi studiate cel mai bine prin metoda voltage-clamp
(Figura 9). Esena metodei este c potenialul de membran se fixeaz la valoarea dorit
(clamp = prindere, legare) n timp ce se msoar curentul care curge prin membran. Vm
fiind meninut constant la o valoare cunoscut, din curentul transmembranar se poate calcula
conductana canalelor ionice pe baza legii lui Ohm. Astfel se poate caracteriza detaliat
activarea i inactivarea curenilor ionici.

Modelare neuronal

23

Figura 9. Metoda voltage-clamp. Potenialul de membran (Vm) este

nregistrat cu ajutorul unui microelectrod introdus n celul (ME1), care se
cupleaz la un amplificator (A1) cu impedan de intrare mare, cu
amplificare unitar. Vm este comparat cu potenialul de comand (Vcmd) cu
ajutorul unui amplificator diferenial (A2). Ieirea acestui amplificator este
proporional cu diferena dintre Vm i Vcmd. Tensiunea de ieire a A2
genereaz un curent care curge prin microelectrodul ME2 spre interiorul
celulei i modific potenialul de membran. Polaritatea curentului care
curge prin ME2 este stabilit astfel nct s reduc diferena dintre Vm i Vcmd.

MODELAREA CELULELOR EXCITABILE

Membranele biologice au proprieti similare cu circuitele electrice. Este o metod
obinuit n fiziologie de a descrie comportamentul electric al membranelor n termenii
circuitelor electrice. Circuitul electric echivalent al membranei tipice este redat n Figura 10.

Figura 10. Circuitul electric echivalent al membranelor biologice. n acest exemplu

simplificat curentul ionic nu este defalcat pe specii ionice. Detalii vezi n text.

24

Lucrri practice de fiziologie

Capacitatea membranei (Cm) este determinat de proprietile dielectrice ale

membranei n ansamblu (stratul bilipidic) i este independent de variaiile locale de
permeabilitate date de canalele ionice. Capacitatea membranar specific (capacitatea
raportat la suprafa unitar) este constant n majoritatea neuronilor i are valoarea n jur
de 1 F/cm2.
Rezistena membranei (Rm) (i reciprocul su: conductana, Gm) reprezint proteinele
transmembranare (canalele ionice) prin care ionii pot traversa membrana. Spre deosebire de
capacitatea membranei, rezistena este foarte dependent de potenialul transmembranar i
de timp. Modificrile dependente de voltaj i timp ale conductanelor membranare sunt
controlorii primordiali ale semnalizrii electrice din celulele excitabile.
Din circuitul echivalent (Figura 10) i legile lui Kirchhoff se poate scrie ecuaia
diferenial pentru intensitatea curentului total care curge printr-un petec de membran (Im).
Intensitatea acestui curent este egal cu suma intensitii curentului capacitiv (IC) i a
intensitii curentului ionic (Iion), care curge prin canalele ionice.

I ion

I m = I C + I ion
dV
I C = Cm m
dt
= I Na + I K + I Cl + ... +

Fiecare tip de ion conduce un curent al crui intensitate este egal cu produsul dintre
conductana membranei pentru ionul respectiv (g) i diferena dintre potenialul de
membran (Vm) i potenialul de echilibru al ionului (E). De exemplu: INa=gNa(Vm-ENa).
Simulrile au fost implementate n programul de modelare NEURON
(http://neuron.duke.edu/ sau http://www.neuron.yale.edu/neuron/), realizat de John W.
Moore, Michael Hines i Ted Carnevale la Duke i Yale University, USA.

Modelare neuronal

25

INSTRUCIUNI PENTRU COMPLETAREA FIEI DE LUCRU

1. Determinai experimental potenialul de echilibru al ionilor de potasiu, msurnd
intensitatea curentului transmembranar la diferite poteniale de membran.
(recomandm 30, 0, -30, -60, -90, -120mV)
Alegei simularea: Potenial de echilibru
Fereastra Alegerea Simulrilor Pot ech
Activai sistemul de voltage clamp
Fereastra VClamp Click VClamp
Reglai potenialul de membran
Fereastra VClamp Introducei valoarea dorit la amplitudine Enter
Rulai simularea
Fereastra RunControl Simuleaz
Click pe grafic n fereastra Graph[1] Citii valorile n antetul ferestrei
2. Determinai potenialul de echilibru cu ajutorul ecuaiei Nernst tiind concentraiile ionilor
de potasiu:
[K+]in = 140 mol/l
[K+]ext = 5 mol/l
R = 8,31 J/(mol*K)
T = 310 K
F = 96,5*103 C/mol
Putei folosi calculatorul din Windows
Start Programs Accessories Calculator
3. Efectuai experimentul voltage-clamp, pe un model de celul, membrana creia conine
canale de sodiu de tip tranzient (INa,t) i canale de potasiu de tip delayed rectifier (IK).
Parametrii sunt similari cu cele din experimentele originale ale lui Hodgkin i Huxley.
Alegei simularea: Model Hodgkin - Huxley
Fereastra Alegerea Simulrilor HH
Activai sistemul de voltage clamp
Fereastra VClamp Click VClamp
Rulai simularea
Fereastra RunControl Simuleaz
Observai i desenai curentul transmembranar (prima dat spre interior iar dup aceea spre
exterior).
4. Aplicai tetrodotoxin (TTX, un blocant selectiv al canalelor de sodiu) i repetai
experimentul.
Simulai efectul TTX reglnd conductana canalelor de sodiu la zero
FereastraConductante Introducei valoarea dorit la gNa Enter
Rulai simularea
Fereastra RunControl Simuleaz
Observai i desenai cu o alt culoare curentul transmembranar.
5. Aplicai tetraetilamoniu (TEA, care n concentraie mare este un blocant al canalelor de
potasiu de tip delayed rectifier).
Simulai efectul TEA reglnd conductana canalelor de potasiu la zero
FereastraConductante Introducei valoarea dorit la gK Enter
Readucei conductana canalelor de sodiu la valoarea iniial

26

Lucrri practice de fiziologie

FereastraConductante Click pe ptrelul bifat

Rulai simularea
Fereastra RunControl Simuleaz
Observai i desenai cu o alt culoare curentul transmembranar.
6. Construii diagrama tensiune - curent al canalelor de sodiu. Rulai simularea la diferite
poteniale de comand, msurai fiecare dat curentul maxim i marcai valorile n sistemul
de coordonate. Determinai potenialul de membran la care se activeaz aceste canale.
Msurai potenialul de echilibru al ionilor de sodiu.
Reglai potenialul de membran
Fereastra VClamp Introducei valoarea dorit la amplitudinea Nivel 1 Enter
Rulai simularea
Fereastra RunControl Simuleaz
Click pe grafic n fereastra Graph[1] Citii valorile n antetul ferestrei
Recomandm reglarea potenialului de comand iniial la -60 mV, dup care repetai
simularea n trepte de 10 mV pn la 60 mV.
7. Studiai dependena conductanei canalelor de sodiu de potenialul de membran.
Calculai conductana pe baza rezultatelor experimentului anterior i legii lui Ohm:
I= U/R = U*G = (Vm-ENa)*G
Reprezentai grafic GNa n funcie de Vm.
8. Studiai inactivarea i ndeprtarea inactivrii canalelor de sodiu, explicai faza refractar
absolut i relativ.
Alegei simularea: Perioad refractar
Fereastra Alegerea Simulrilor Refr
Activai sistemul de voltage clamp
Fereastra VClamp Click VClamp
Rulai simularea
Fereastra RunControl Simuleaz
Observai inactivarea curentului n aprox. 2 ms
Dup inactivare repolarizai membrana pe o perioad de 4 ms, dup care repetai
depolarizarea. Aceast simulare const dintr-un voltage-clamp realizat n trei etape. Durata
i potenialul de comand se poate regla pentru fiecare etap.
Fereastra VClamp Introducei valoarea dorit la amplitudinea Nivel 1 Enter
Rulai simularea
Fereastra RunControl Simuleaz
Msurai i notai intensitatea maxim a curentului de sodiu n perioada a treia (de
depolarizare). Repetai simularea la 20, -40, -60, -80, -100, -120 mV. Comparai valorile cu
intensitatea maxim din prima etap (depolarizare iniial). Explicai de ce apare un curent
cu intensitate mai mare dac membrana este puternic repolarizat.
9. Studiai conducerea potenialului de aciune ntr-un axon de tip C (subire i nemielinizat).
Observai deplasarea undei de depolarizare de-a lungul axonului. Determinai viteza de
conducere a excitaiei.
Alegei simularea: Axon
Fereastra Alegerea Simulrilor Axon
Rulai simularea
Fereastra RunControl Simuleaz
Msurai momentul declanri potenialului de aciune n trei puncte de-a lungul axonului
(negru: 2 mm de la corpul celular, albastru 5 mm i rou 8 mm)

Modelare neuronal

27

Click pe grafic n fereastra Graph[0] Citii valorile n antetul ferestrei

10. Studiai influena diametrului axonului asupra conducerii potenialului de aciune.
Modificai diametrul axonului de la 2 la 10 m
Fereastra Diametru axon Introducei valoarea dorit
Rulai simularea
Fereastra RunControl Simuleaz
Determinai viteza de conducere a excitaiei ca n experimentul anterior.
11. Studiai conducerea potenialului de aciune ntr-un axon de tip A (gros i mielinizat).
Determinai i aici viteza de conducere a excitaiei.
Alegei simularea: Axon cu mielin
Fereastra Alegerea Simulrilor Mielin
Rulai simularea
Fereastra RunControl Simuleaz
Msurai momentul declanri potenialului de aciune n trei puncte de-a lungul axonului
(negru: 20 mm de la corpul celular, albastru 50 mm i rou 80 mm).