CUANTIFICAREA UNOR PARAMETRII FARMACOCINETICI

NECESARI EVALURII BIOECHIVALENEI PRODUSULUI

ANIPRATEL
QUANTIFICATION OF SOME PHARMACOKINETICS
PARAMETERS NECESARY IN THE BIOEQUIVALANCE
EVALUATION OF THE ANTIPRATEL PRODUCT
L. OGNEAN, CRISTINA CERNEA, M. CERNEA, V. MICLU., MARIA PRV
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Cluj

Cuvinte cheie: antihelmintice, cini, bioechivalen, farmacocinetic

Key words: antihelmintics, dogs, bioequivalence, parmacokinetic

SUMMARY
By pharmacokinetics investigating on 12 dogs of Romanian Sheperd breed, it was certified
the bioequivalance of two medicament formulas based on fenbendazole praziquantel and pyrantel,
the test product was represented by Anipratel ( produced by Animal Med ltd.) and the reference
product was represented by Cestal Plus. Using the ANOVA operating system permated the evaluation,
of the aditionaly secundary and primary pharmacokinetics parameters, requested by the KINETICA
program version 4.4.1 (Cmax , Tmax , AUCtot). With that, the products investigated hat diferent quantitys
of fenbendazole, (214,9 mg test formula and 200 mg reference formula), the tested
pharmacokinetics parameters had similar evolution. We also realized usualy statistics analyses
(average, standard deviation, standard error, minimum, maximum and the 95% trust range limits) and
for the finale apreciation we resort to quantification of the probability index, considereting the valus
biger then 0.05 and the absence of statistic diferences as necesary bioequivalance indicatores. To
notice that even if the test product had praziquantel in a larger quantity (51,1 mg) than the refernce
formula (50 mg), the probability index valuse obtenided from the comparation tests C max, Tmax i
AUCtot, did not revaled statistic diferences. In the same context it is explained also why the biger
quantity of pyrantel from the reference product (144 mg) did not influienced semnificatly two of the
tested parameters: Cmax (p=0,6970) i AUCtot (p=0,3664). The esambly of the obtenied data reveled the
bioequivalance of the product Antipratel tablets, the diferences beetwin the bioequivalance indicatores
were statisticaty insignificant (p>0,05).

Eficiena unei substane medicamentoase introduse n organismul

animal depinde
de cantitatea n care ea ajunge la locul aciunii
farmacologice, adic n imediata vecintate a receptorilor biologici i de
durata meinerii unei concentraii corespunztoare la acest nivel. Astfel, pe
baza afinitii i reactivitii fa de receptori, o anume substan ajunge si exercite aciunea biologic dorit. Perfecionarea tehnicilor de dozare i
analiz a concentraiei substanelor medicamentoase din lichidele biologice,
concomitent cu extinderea utilizrii calculatoarelor, au condus la dezvoltarea
rapid a farmacocineticii, mai ales n ultimii 15 - 20 de ani, att n privina
conceptelor i metodelor, ct i a aplicaiilor (Leucua, 1989). n acest

studiu,
ncadrabil
n
domeniul
farmacocineticii,
investigm
biodisponibilitatea fenbendazolului, praziquantelului i pyrantelului,
substane active care compun un produs test supus bioechivalrii (Anipratel;
productor Animal-Med ltd) i unul referin (Cestal Plus).
MATERIAL I METOD

Investigaiile au fost efectuate n perioada februarie - iunie 2006, pe

un lot de cini aduli (n=12), din rasa Ciobnesc Romnesc, respectnd
protocolul prezentat n tabelul 1
Tabelul 1
Rezumatul studiului (cuvinte cheie)
COMPANIA
PRODUSUL TEST
SUBSTANE ACTIVE
PRODUSUL REFERIN
SUBSTANE ACTIVE
SCHIA STUDIULUI
MRIMEA EANTIONULUI
NUMRUL DE ANIMALE INTRODUSE N
TESTARE
MOD DE ADMINISTRARE
DURATA TRATAMENTULUI
PARAMETRI PRIMARI
PARAMETRI SECUNDARI
PARAMETRI ADIIONALI
PARAMETRI DE SIGURAN

PROCEDURA (METODA) DE STUDIU

ANALIZA PROBELOR
CALCULE STATISTICE

ANIMAL - MED Kft

ANIPRATEL Tablete
Fenbendazol - 214.9 mg
Praziquantel - 52.1 mg
Pyrantel pamoat - 107.6 mg
CESTAL PLUS
Fenbendazol - 200 mg
Praziquantel - 50 mg
Pyrantel pamoate -144 mg
2 perioade, 2 secvene, ncruciare, randomizare, o
singur doz, studiul compartiv de biodisponibilitate
pe cini sntoi
12 cini
12 cini
1 tablet/10 kg greutate corporal pentru ambele
produse TEST respectiv REFERIN
oral
2 doze orale la interval de 7-14 zile
AUC0-t i Cmax pentru fenbendazol, praziquantel i
pyrantel
Tmax, AUC0-inf
% extrapolat AUC, t, MRT
Efecte adverse, teste clinice i de laborator i examene
de supraveghere
La fiecare animal se va administra o singur doz oral
din cele dou substane -TEST i REFERIN- cele
dou tratamente fiind separate ntre ele de o perioad
de 7-14 zile. Iniial i dup administrea fiecrui produs
se vor recolta probe de snge la diferite intervale de
timp: 0.0, 0.5, 1.0, 1.5, 2, 4, 8, 12, 24, 36, i 48 ore.
Metoda HPLC cu detectare UV.
ANOVA (incluznd modelele: tratamente, secvene,
subieci i perioade de administrare) bazat pe
transformarea
logaritmic
a
parametrilor
farmacocinetici primari )

Calculul statistic a fost efectuat prin sistemul de operare ANOVA, iar

pentru evaluarea parametrilor farmacologici primari, secundari i adiionali
a fost utilizat programul KINETICA (versiunea 4.4.1). In vederea stabilirii
bioechivalenei celor 2 forme medicamentoase (test-referin), pentru fiecare
dintre substanele active au fost luate n calcul urmtoarele 3 variabile: C max
(concentraie plasmatic maxim), Tmax (timpul la care a fost nregistrat
concentraia plasmatic maxim), AUCtot (aria de sub curb). Analizele
statistice au mai inclus: media, deviaia standard, eroarea standard, minima,
maxima i limitele intervalului de ncredere 95%. Pentru evaluarea final
am recurs la cuantificarea indicelui de probabilitate p, considernd
valorile mai mari de 0,05 i lipsa diferenelor statistice drept indicatori ai
biochivalenei celor dou formule medicamentoase.
REZULTATE I DISCUII

Evaluarea comparativ a biodisponibilitii a dou sau mai multe

formule ale aceluiai ingredient activ, administrate n acelai mod, constituie
bazele bioechivalenei. Mai mult, studiile de bioechivalen compar att
rata, ct i ntinderea de absorbie a diverselor formule medicamentoase i
arat c atunci cnd cele dou formule (test i referin) au profile
concentraie-timp similare n snge/plasm, efectele lor terapeutice sunt
identice. n acest sens, precizm c biodisponibilitatea reflect suprafaa
disponibilitii sistemice a substanei terapeutice active i este stabilit prin
msurarea ariei de sub curba concentraie-timp (AUC), concentraiei
maxime din plasm (Cmax) i a timpului de atingere a C max (Tmax). Practic,
disponibilitatea sistemic este determinat de durata absorbiei substanei
active, fiind influenat de: natura substanei active, forma de dozare i
interaciunile acestora cu mediul complex al locului de absorbie (Rani i
Pargal, 2004). n ceea ce privete studiul ntreprins, acesta a pornit de la
premisa c bioechivalena presupune absena unei diferene mai mari dect
cea permis ntre biodisponibilitatea sistemic a unui produs test i cea a
unui produs referin. n acest sens precizm c analiza statistic a fost
efectuat pentru fiecare substan activ din compoziia celor dou produse
evaluate (tabel 2; 3; 4).
Cantitatea variabil de fenbendazol coninut de cele dou produse
testate (214,9 mg n formula TEST i 200 mg n formula REFERIN tabel 1), d o diferen care nu se regsete ns i n mediile C max; valorile
acesteia fiind apropiate (236,82170,92 respectiv 264,17138,35 ng/ml).
Precizm de asemenea c limitele IC 95% au fost asemntoare n cazul

celor dou formule analizate (tabel 2), iar variaia mediilor Tmax (de la
4,663,53 h pentru TEST la 4,873,37 h pentru REFERIN) nu a
relevant diferene importante n ceea ce privete limitele IC 95% (tabel 2).
Analiza valorilor AUCtot arat variaii largi ale acestui parametru n cazul
celor dou formule, cu toate acestea valoarea indicelui de probabilitate
(p=0,605) confirm c nu exist semnificaie statistic ntre nivelurile
nregistrate (tabel 2).
Tabel 2
Analiza comparativ a parametrilor farmacocinetici i statistici pentru dinamica
fenbendazolului
subiect
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
Medie
Dev.st
Er. st.
Minima
Maxima
L.inf.IC 95%
L.sup.IC 95%
valoare p

Cmax (ng/ml)
T
R
204,2
454,2
686,8
328,0
152,3
211,6
221,1
433,5
262,2
156,0
19,8
397,0
182,0
231,7
130
199,0
142,7
50,3
199,2
81,3
430,1
213,3
211,5
414,2
236,82
264,17
170,92
138,35
49,34
39,93
19,80
50,30
686,80
454,20
128,22
176,27
345,43
352,08
0,6710

Tmax (h)
T
R
1,5
4
8
4
2
1,5
12
2
4
1,5
0,5
12
4
8
2
8
2
1,5
8
4
4
8
8
4
4,66
4,87
3,53
3,37
1,01
0,97
0,50
1,50
12,00
12,00
2,42
2,72
6,91
7,02
0,8840

AUCtot(ng/ml*h)
T
R
986,5
2830,1
5109,0
2629,4
2967,9
4281,4
5333,7
2557,3
2431,0
795,7
120,2
6743,4
2201,9
2287,0
2753,0
4355,4
682,2
346,8
624,4
880,9
3437,0
2835,1
2849,5
3392,4
2458,02
2827,90
1677,90
1773,00
484,37
511,81
120,20
346,80
5333,7
6743,40
1391,90
1701,40
3524,10
3954,40
0,6051

T=test; R=referin

Referitor la dinamica praziquantelului, sunt de remarcat fluctuaii

individuale deosebit de largi ale Cmax, mediile fiind, aa cum reflectat i
limitele IC 95%, mai mari la formula TEST (666,07298,66 ng/ml) dect la
REFERIN (541,20218,67 ng/ml) (tabel 3). De remarcat sunt valorile
mai crescute ale parametrul Tmax, nregistrate n cazul formulei referin,
precum i unele diferene fr semnificaie statistic aprute n evoluia
AUCtot. Cu toate c produsul TEST a coninut o cantitate de praziquantel
mai mare (51,1 mg) dect REFERINA (50 mg), testele de comparare au
relevat o valoare a indicelui de probabilitate care nu indic diferene
statistice (p>0,05) (tabel 3).

Tabel 3
Analiza comparativ a parametrilor farmacocinetici i statistici pentru dinamica
praziquantelului
Cmax (ng/ml)

subiect
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
Medie
Dev.st
Er. st.
Minima
Maxima
L.inf.IC 95%
L.sup.IC 95%
valoare p

Tmax (h)
R

657,7
636,3
403,0
201,8
872,0
570,6
1031,0
824,4
638,9
823,8
214,4
234,5
1227,2
541,3
789,5
623,0
597,8
454,2
228,6
240,5
614,3
734,6
718,5
609,4
666,07
541,20
298,66
218,67
86,21
63,12
214,40
201,80
1227,20
824,40
476,31
402,26
855,84
680,14
0,2563

0,5
0,5
1
4
1,5
0,5
2
2
0,5
1
1,5
8
1
4
1,5
1
1
1,5
4
4
2
2
4
2
1,70
2,54
1,17
2,15
0,33
0,62
0,50
0,50
4,00
8,00
0,96
1,17
2,45
3,91
0,2564

AUCtot(ng/ml*h)
T
R
1401,8
1776,3
1596,9
2249,0
4400,9
3985,5
7334,9
3886,9
2902,0
2374,9
877,5
3347,8
5994,9
9720,6
3683,0
4233,67
1581,2
1751,4
3913,9
1778,8
2884,6
5438,7
5388,0
2853,4
3496,63
3616,41
2018,80
2245,80
582,78
648,30
877,50
1751,40
7334,90
9720,60
2213,90
2189,50
4779,30
5043,30
0,8920

T=test; R=referin
Tabel 4
Analiza comparativ a parametrilor farmacocinetici i statistici
pentru dinamica pyrantelului
subiect
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
Medie
Dev.st
Er. st.
Minima
Maxima
L.inf.IC 95%
L.sup.IC 95%
valoare p

Cmax (ng/ml)
T
R
453,7
519,8
655,6
395,6
700,1
703,8
629,3
721,6
666,8
497,0
225,7
497,1
885,5
431,0
739,8
792,0
544,1
825,1
446,3
433,6
569,8
791,8
590,4
826,0
592,25
619,53
167,34
171,10
48,30
49,39
225,70
395,60
885,50
826,00
485,94
510,82
698,58
728,25
0,6970

T=test; R=referin

Tmax (h)
T
1,5
2
1,5
4
1
4
2
1,5
2
4
4
4
2,62
1,24
0,35
1,00
4,00
1,83
3,41

R
4
8
4
4
2
8
4
4
4
8
4
4
4,83
1,99
0,57
2,00
8,00
3,56
6,09
0,0044

AUCtot(ng/ml*h)
T
R
3233,5
3480,3
4837,7
4563,0
4857,9
8858,2
7004,0
5516,9
4643,2
2637,2
3675,8
6789,8
5776,0
7516,2
5354,5
9967,9
3242,1
6366,7
6832,1
4870,2
7086,2
5501,6
7231,5
5954,6
5314,54
6001,88
1488,80
2098,80
429,79
605,84
323,50
2637,20
7231,50
9967,90
4368,60
4668,40
6260,50
7335,40
0,3664

Analiza compoziiei chimice a formulelor testate a artat c n cazul

pyrantelului, cantitatea coninut a fost mai mare n produsul REFERIN
(144 mg) dect n produsul TEST (107,6 mg) (tabel 1), dar fr a influena
statistic semnificativ parametrii Cmax (p=0,6970) i AUCtot (p=0,3664).
Diferene distinct semnificative statistic au fost observate ns n cazul T max
(p=0,0044), mediile acestui parametru fiind de 2,621,24 h pentru formula
TEST i de 4,831,99 h pentru formula REFERIN (tabel 4). Subliniem
de asemenea c indicatorul de biodiponibilitate T max se comport diferit fa
de AUC i Cmax, deoarece se msoar direct i cu o eroare care depinde de
timpii de eantionare ai studiului (Rani i Pargal, 2004). Cu toate c, dup
Hauck i Anderson (1984) nici una dintre procedurile statistice disponibile
studiilor de bioechivalen nu este adecvat pentru Tmax, Westlake (1988)
utilizeaz, dup analiza varianei datelor netransformate, determinarea IC
pentru diferena mediilor Tmax. La ora actual este recomandat ca diferenele
mediilor pentru Tmax s fie evaluate prin teste neparametrice (testul t
Wilcoxon) aplicate valorilor netransformate (model aditiv). Precizm c noi
am utilizat pentru evaluare teste parametrice (test t Welch modificat), motiv
pentru care diferena statistic nregistrat poate fi ignorat.
Analiza global a rezultatelor obinute relev c produsele utilizate
sunt bioechivalente. n acest sens, ghidul FDA (2001) pentru studiile de
biodisponibilitate arat c produsele a cror rat i durat/ ntindere de
absorbie difer prin 20% sau mai puin sunt, n general, bioechivalente.
Practic, biodisponibilitatea este confirmat dac diferena nu se abate cu mai
mult de 20% fa de media de referin. Mai mult dect att, Hui-chang Bi
et al. (2005) arat c produsele medicamentoase sunt considerate
bioechivalente dac diferena dintre cel puin doi parametrii investigai este
nesemnificativ statistic (p>0,05).
3.CONCLUZII
Investigaiile farmacocinetice efectuate pe un lot de cini aduli
(n=12) n vederea testrii bioechivalenei produsului Anipratel tablete
(productor Animal-Med ltd), avnd drept referin produsul Cestal plus, au
evideniat urmtoarele:
3.1. Evoluii similare ale parametrilor farmacocinetici testai (Cmax,
Tmax, AUCtot) la cele dou produse investigate, dei acestea au coninut
cantiti diferite de fenbendazol (214,9 mg -formula test i 200 mg -formula
referin);

3.2. Lipsa diferenelor statistice ntre valorile indicelui de

probabilitate (calculat la testele de comparare ale C max, Tmax i AUCtot) cu
toate c produsul test a coninut o cantitate mai mare de praziquantel (51,1
mg) dect referina (50 mg);
3.3. Influene nesemnificative statistic a diferenelor de concentraie
n cazul pyrantelului (144 mg n produsul referin, respectiv 107,6 mg n
produsul test) la parametrii Cmax (p=0,6970) i AUCtot (p=0,3664);
3.4. Diferene nesemnificative statistic (p>0,05) n cazul
parametrilor farmacocinetici investigai, care arat c cele dou produse
testate (Anipratel tablete i Cestal plus) pot fi considerate bioechivalente.
BIBLIOGRAFIE
1. Hauck,W, S. Anderson A new statistical procedure for testing equivalence in two group
comparative bioavailability trials. J. Pharmacokinet Biuopharm (12), 83-91, 1984
2. Hui- chang Bi, Z. Guo-ping, Z. Shufeng, H. Li-hui, Z. Gui-xiong Buioequivalence evaluation
of two tablet formulation of carbocystein in healthy chinese men J. Of Applied research, (5),
598-604, 2005
3. Leucua Sorin Farmacocinetica n terapia medicamentoas. Editura Medical, Bucureti,
1989
4. Rani S, A Pargal, bioequivalence: An onverview of statistical concept. Indian J Pharmacol
(4), p. 209-216, 2004
5. Westlake, W.J. Bioavailability and bioequivalence of pharmaceutical formulations
Biopharmaceutical statistics for drug development, Ed. 1, Peace KE, New York, 1988
6. ***Food and Drug Administation (FDA) Ghuidance for Industry: statistica approaches to
establishing bioequivalence, 2001.