Voorkomen en screening van

antioxidanten

Ian Cailliau
Promotor: Prof. dr. ir. K. Raes

Wat is ORAC? Oxygen Radical Absorbance Capacity

Methode om antioxidanten te detecteren
Principe :
1 Fluorescene (probe) degraderen via radicalen
2 In welke mate kan AO (staal) afbraak tegenhouden

Radicalen
Def. Molecule of Atoom met ongepaard electron

(Smiths, Marks &

Lieberman, 2005)

(CaymanChem, 2015)
3

Antioxidant
Def. Antioxidant is stof die oxidatieve schade bij een
target molecule vertraagt, verhindert of ongedaan
maakt (Halliwell).
In praktijk context gebonden.
Twee mechanismen : HAT & ET

(HAT)
(ET)

Antioxidant
Def. Antioxidant is stof die oxidatieve schade bij een
target molecule vertraagt, verhindert of ongedaan
maakt (Halliwell).
In praktijk context gebonden.
Synergin complexiteit
Vitamine
C
Vitamine
E

Wat is ORAC? Oxygen Radical Absorbance Capacity

Methode om antioxidanten te detecteren
Principe :
1 Fluorescene (probe) degraderen via radicalen
2 In welke mate kan AO (staal) afbraak tegenhouden

(Sveinsdottir,
2014)

(Schaich,
2015)

Opstelling - componenten
Radicaal-generator (AAPH)
Fluorescene (probe)
Trolox/Staal

AAPH

Trolox

Fluorescen
e

Opstelling - parameters
Zuurstof-gehalte
Temperatuur
AAPH AO Fl concentraties
Metaalionen EDTA ?
Homogeen heterogeen

(Schaich,
2015)

Opstelling Labo
Cuvette
2 ml
Plastic container
10 ml
Temperatuur ? ideaal: 37C, bij cuvette :
kamertemperatuur
Trolox
Fl

AAPH

Resultaten
1200
1000
800

Absolute intensiteit

600
400
200
0

10

15

20

25

tijd (min)

(Schaich, 2015)

10

Resultaten
1200
1000

Absolute intensiteit

800

1 Afname te traag

600

2 Initile intensiteit

400

3 Intensiteit gaat
omhoog

200
0

10

15

20

25

tijd (min)

11

Resultaten - AAPH
160 mg 1

160 mg 2

160 mg 3

400 mg 1

400 mg 3

1000 mg 1

1000 mg 2

1000 mg 3

400 mg 2

1.2

0.8

Relatieve absorbantie

0.6

0.4

0.2

10

15

20

25

30

35

tijd (min)

12

Resultaten - Temperatuur
25C 1

25C 2

25C 3

37C 1

37C 2

37C 3

50C 1

50C 2

50C 3

1.4
1.2
1
0.8
Relatieve absorbantie

0.6
0.4
0.2
0

10

20

30

40

50

60

70

tijd (min)

13

Conclusie
ORAC niet reproduceerbaar in labo
Literatuur ? 1,9 nM (Schaich) vs 14 uM (Prior) ?

14

Vragen?

15