Instrutivo denice para Recvento de tieroorganimos HILE “BP | sorobis Messtion Mesiante Tecnica Petri © AOAC jorSneumcrRn eae ‘Ofeia Mothod $80.12. Instrucrwo Tecnico Pana RECUeNTO Di MICROORGANISMS AEROBIOS MESOFiLOS MenianTe TECNICA PETRruM [AOAC OFFICIAL Merion 990.12 ‘Tabla de Contenido Somtenido in 1 Objtvos y Azanee 2 Referncs y Documentos Resonados. 3. Detrisenesy Abrevats, 4 Requistos a 41 Raquisos nkaostcturseaubos, matrles yeas 42 Requisios de persona. 43° Renuitos spectene 44 Mesios de vertcacn de esto. 5 Andlaensayo : 51 Caplcin yoo de le mucra 52 Recepcn ymanso de lamest 53 Metodsgia, 7 59.1 Caracterisiess dl procediene de ensayo 53.2 Prepsrcio la musts = 533. Protcco de uae, 54 ciclo yexpesndeos resus 54.4 Célouo inome de ls reeuetae en paca Fesistoy envio e esutaor. ‘Supervision a lnbortonoesteiados, : ° esis por ncualininta a) ANEXOS. 4 94 Liste de ansstats) ol laborateovnclads al dagnéeico 1 Cig TBInstructvetienice para Recuenla de Wicroorganiamos -Aorobios Mesos Meclante Tecnica Perfim © AOAC ‘Otel Mathod 890.2. El objetva dal instructive es dara conoce los rquistos especicos paral acreiiacon de Isboratris por pare del SAG para ls reatzacion del andlsislensaye para Recueno de IiccorgenisTos.Aerobios Meséflos Mesiente Tecnica PETRIFILM © AOAC Offcal Metron 980.12. et mismo medo, en este documento e estioulan insrccionestéencas que deben cunpir los leboretorios pare que cbtengan y mantengan tl acrediscion, Este procedimientoaplica para muesias de pie! de cuelo de ave as cuales corresponden ' mupsteos micrbioégicos aficales tomados desde plants ge faenamiento de productos pecuarios de exporacin. 2 REFERENCIAS Y DOCUMENTOS RELACIONADOS = Metedo Oficial AOAC 990.12: Recuento de Mictoorganismos Aerobios Maséfles en ‘ants, métocos dal fim seco ehicratatla, - AOAC. Subchapster 2: Child, frozen, precooked or prepared foods, and nuimeats, Mirobiciogcal Methods, Ofeial Method 866.23 = Manual de Procedimiantos para Mucstro Mlcrobolégico Ofeial en Carnes faenadas on [Mataderes co Exportacion SAG. Version vgente, Programa de Conte! Micotioligice de cares faonaas para exportacin. SAG. ‘Version vigente = Norma Chena Ofelal NCh-SO 17025, Version vigente, = Norma Chitena Oficial NCh 2726 OF. 2002 ~ Norms Chilena Ofecial NCh 42672 OF 87. ~ Nh 3162/1.072006, Microbiologia de los alimentos para consumo humano y animal ‘Gula para Ia prepafacon y preduecion de" medios de cultvo- Pane F Diectices {generales para el aseguramienta de le cacad par la preperecién de medios de cultvo ene borate = Nh 318272.02008, Mxebiologa de los alimentos para coosumo humaro y animal ‘Gula para le preparecien y produccion ce metios de culvo- Parte I: Gula practica ara os ensayos de rendimiento de los medios de culvo. ~ Resoluién Exanta N* 355 de 2006 del Servicio Agricola y Ganadeco © aquela qua la Feemplace, que Apcueba Reslamento especticn para la acrectacion de iborators de Shale fensayese Instucives tecnicos que inca y dercga Resolucin N° 1463/1081 = Reglamento especco para la Acredlacion de Laboratoles AnaliivEnsaye. version genie ~ Acias Reusiones entre Subdepartamento Laboratories Pecuarios y Laboraioios pablitados, Laboratory Biosafety Guidlines, Medic! Research Counc, Canad Version gente aCHILE aap | ERR ec para Recaro de Mroorasniomos Aeroblos Mesotios Medante Tecnica Petifim ® AOAC Sein ‘Ortelas Menoa veers 3 DEFINICIONES ¥ ABREVY Protocolo Ofcial — Decumentos emitides por profesionales del SAG: “Protocolo de Tome de SAG Mussa E.al. Programa da Reuccion de Patégenos'. ‘Protocolo de Toma de Muesiasyy Resuitades Laborato Rava Recuento de miroorganismos Aerobios Masdfios. usbA Unites States Department Agicture Fsis Food Safety and Inspection Serve sas Senco Agricola y Ganadero, '80 Intemational Organization for Standarciation AOAC [Association of OffealAnalycal Chemists sac Sistema de Aseguramianto de a Calisad mvo. Medico Vetenato Oficial del SAG, nw Insituto National de Nocmalzacon 4 REquisiTOs 4A Requisitos i es 1 Infrasstructua: ~ nreestuctura requeride para leva a cabo ls actvidades contempladas en el alcance, ‘urliendo fo seflaco en los puntos corresponaienies dela NChISO 17025, Vara gente. ~ Equipamionto bésico pera realzar las actvdadas comprendidas en el sleance de la heditacén, oe acuerdo requistos senaiados en NChIGO 17028. Version uigerts, ~ El Laboratorio debe poseer infrastructure adecuads a un nivel Bioseguridad 2, de overdo @ Laboratory Biosafety Gucalines, Medical Reseach Gounel, Canada Version Viger. 1) Equipos, instrumentes y materiales: Stomacher = Boisss pare Stomacher etéries ~ Material estét para coniener los volimenes de Diluyente Butterel's Tamponado necosarics ara lanai. ~ Pipetas graduadss estrles ylo meronipetas, = Probeta este = Tubos de ensayo estéries "Bg TTAB 8 Pag ae T7CHILE | SESacing ate as ain sone Kee cS shea = Balanza = Etqueta (denefeacion de muestras)olaplz mercadr indelbie, = Gabinete de Bioseguridad, = Machero, = Vortex 0 Aaitador de Tubos = Aplcadoe Pate. = Eetua de Incubacion 2 35°C 2 180, = Coniacor de colonias 0 equivalent, tw Resctivos, soliclonesy meds de cutivo Diuyente Buteriek’s Tamponado (Offical Method 966.23 A (m). Ver punto 2) en ‘anidad necesaria para pracesa las muestas y ademés dispensada en mi an sDae Se ensayo paral cluctones, — Places Patifim © 2M, para Reovento de Microorgansmes Aecobios Mesifios dente el perodo de vigonca Iv) Estindares: Se ulizaran como esténdares Copas ATCC de Escherichia col (25822) u ora equator, [a cual sre manterida y ubizada Ge acuerdo alo sefaiado en ia Norma Chilena 2728. Las c2pas oe Vatajp cbtentas a parirde dichas cepas ATCC, serin utlzadas tanto para el ‘contol de calidad de los metios de cull, como para el cniol de mélodo de ensayo. 42 Requisiios de personal 1) Responsable técnico Segiin lo dispuesto en el numeral 42 del Reglamento Espectica para la scrciacion do Loratoros de analisis ensayo, e!Laboretora debe conta con un responsable ténico, ‘quen sora ta conrapare del SAG, en temas tecnicos asociados a su actvidad como {orator acreataco, el cual date cumple con lo siguientes requermientos. = Titulo profesional caificado en el area biiigca, de una carera de al menos acho Semestes scademans, con expatianes labora comprobabie on el rea do analsis de laboratonio de l menes des afas, une de ellos en el rea de bacercogia, Haber reciida capactacin en la vealzacion dol Método Ofcial AOAC 880.12 para Recuonto de Microorganismos Aerobios Messiilos Mediante Técnica PETRIFILM ©, enel tipo de muestasinvolucradas en el aleance de la acredtacién, comorobable mediante cenicade carespondients = De existr un subroganta para este cargo, éste deberd cumpli los rismos requisios Inaicedos en este punto. ~ Celfcada y capactado en el uso de procetinienos, insrucivos, manuales y otros ocurentos, tanto on los aspectos de geslén como en las metodoiogias que se desean ‘ereltar, cumpliendo Io sefalado en los puntos correspancientes we la NChiSO $7028, Version vigente Ska TB ceinv Weipa Revi de Wereoreanianos CHILE £@ | serve hestoe Means TeannPeifin © KORG petnna Rn ata Sintec 1) Analstais) Ellaboratoo debera contar con anaistas on nimere adecuado de acuerdo ala cana de andlsis a realizar, quienes deben cumplt con ol siguiente per ~ Cantar con un tue profesional o ten compte cone! desarolo de fas funciona _socadss a rea ce aoreditactn Haber recbido capactacién en la resizacion dei Método Oficial AOAC 990.12 pare Recuenio de Micoorganismos Aerooios Mescflas Mecsante Técnica PETRIFILM @, on fl tipo de muestras inolucradas en el sicance de la ecredtacién, comprobaole ‘edante eeriead correspondiente = Caifleado y capacitado on el usa de procedinientos, instutves, manusles y otos ‘documentos, tato en los aspectos de gestion como en ins matodlaglas ue se Jesean ‘creda, cumplendo 19 sefalado en los puntos correspancientes de l= NCMISO 47025. Version vigente, 43 Requisitos espectficos = 1 Laboratena dave poseer documentacén técnica y de geston que avale el Cumpimienta de NCh-S0 17025. Veron vignte, para 1 cual debe estar acredtod {ente el INN en alguna de as areas calacionadas con anil bactanalgicos ~ Una ver que el laboratoro soictanteobtenga Ie acreitacién de las teonicas por el SAG, tole olorgara un paz de 2 to pare lograria selec de etsy ae INN, = El Laboratorio debe contar con ls siguientes documentos: + Procadimieniotinstuctvo Manejo de Muestas involucedes en el alcance de Ia acrostacion ~ Pracosimiento e Insirusves Preparacon de Medios de Gultvo nvolucades en el Bseance de a screctacion + Procedimientoinsiracvo Preparacion y Esteizacén de Material de Vidio. * Provedimiento instructive Elmnacién y Descantaminacign de Residuos y Materiales. Procedimintonsrucivo Aseo y Limpleza de Laboratories, Procediminta /nstrucivo Cantrol Bildgco de Esteridad en Autcleves. Prooedimiento/nstuciva de Veifescon de Equipos Procadimienionstucivo Cantal Matera Lava, rocedimiento instuctwe Cartal de Caldad Intemo. rocedimiento/nstuctve Contal de Abie Procedimiantosnsrucive Manejo de Cepas Contr “sta Maesta de Equipes ¢ Instumentos de Matlin involucrados en elalcance de la acreditacon, Instructs ce Uso de los equinosinvluerados en el loance de ta screctacion = Programe de Manfoncin IVenficalen Casbracion de los equipos involucrades en tl acance ge ia scredtanin, ~ Insiuciva de Manejo y Poteclén de datos computacionales. Pag. 8071Tnatructvo nice para Recueria de Mieroorgariemos ‘Aarobios Mesos Wesiante TéeriesPotfim © AOAC ‘iii! Motos 8012. Elaboratoa sclctente debera prasentar todos los documentos gue avalen al Sistema de ‘Aseguramento de le Calidad, implementado en el laoratoro y cue demuasiren ls ‘ctetacién en NCHISO 17026. Version vigente, en alguna de sus seas ce anal, bactericigices, El laboratoo posilanle debe adjuntar a fa golictud de Acredtacén, ademas de los antecedentes establecos en el numeral 6.1 del Reglamento para la Acrediacion de Laboratoros de Analisis Ensayo dei Servicio Agricola y Ganadoro (itovww-s5n.acb los documentos que a contnuacin se detatan y que dan oventa del cumpiesanto los requistos establecides pr el SAG en este capitulo, ~ Croguis de! laboratorio,identfcando uso de areas (jo de areas imply sucias) y eleacien de equvos. ~ Lista de emuipos crtics, indicando nombre, marea, modelo, fecha de puesta en servic, capecdad cuando corresponds, y que incuya la mantencin y calibraién dk ~ Usa de materiales, reacties y Kis. Ustad registro tecnicos y de calidad ulizados en el alcance, ~ Formula ¢e identiacion del personal que se desempet como analst, segin formeta (nono 1} ~ Cartiicado de tle del Responsable Técrico, on rginal fotecopia lagaizada. = Cortiicado de tive de esis anita entficades, en orginal 0 fotocopia legalized = Documentos que accedten la eapscitacisn tanto deta responsable tecnico coma de losfas anaistas ena técnica de culvo corespendlente ~ Instructves especfeados ene! numeral 4.2 de est Instruct. Sin peruicio de Jo anterior, el cumpimiento de ios requstos desttos tanto en el Reslamento Espociica de Accedtacon como en ast instuctvo, eran oonmads por el Servicio ena visita de vriieaion por los medios que consider iéneos para tal efecto. (Con este fh, el SAG podra someter al Responsable Técnico y 3 uno o mds anaistas identficados por l postuante, 2 una evaiuacion teria yo practca, 5 ANALISISIENSAYO 54° Captacion y envio de ia muestra La captacion de las muesiras no es una actividad inctuida en fa competencia del labortorio acres pars este andisis. Pre ese tipo de andisis no se ulizarén contramuestras, La toma y envio de muesras deben ser reaiad por el Médico Veternaio Oficial do! SAS (NeV0}, et cual sabe agjuntar las muestra a un Protocole Oeil SAG, en cya documents age Rag cat‘nstrstvetcnico para Recvento de Wicroorganiomos ‘Acrobios Mesos Mediants TeeniesPetnfim © AQAG ‘Oeil Method 990.12. debe sefialar al menos la dontcacién de cada una de elas, e too de muesiras, la fecha y Ia hora dela recoleccién de esas, Lo anterior debe realzarae de ccuerdo lo Gefinido en el“Manual de Procedinientos pa Muesteo Wicrobioiogico Oficial en Carnes feenacas en Mataderoe de Exporiacion SAG" ota version vigente 5.2 Recepcién y mansio dela muestra a recepcién y manejo de las mussiras on ol Iaboratori debe reaizarse de acuerdo lo Sefalado en el “Manual do Precedimientos para Musstreo Microbiologia Oficial on Camas faenadas en Mataderos de Exportacon. SAG" Version vigante. Cabo serie is importanca de verfiea los siguientes puntos: ~ Temperatura de recepcin (rango eceplado: 48°C), ~ Temp entre la toma de muosirasy la recgpelon, ye que DEBEN SER PROCESADAS DENTRO DE LAS 24 HORAS DESOE LA TOMA DE LAS MUESTRAS. ~ Inlegrides ce tas muestas, ~ Cantidad sufcente de muestas para el ands = ldentieacién sdecuada = Conlanedor con sallo SAG intact, ~ Prolecoi fuera del contenedor y con los datos raquerdos de acuerdo al Manual anierormente mensionaco. 53. Metodolonia 534 Caractristicas del procedimionto de ensayo Las pleces Petinin para ei Recuerto de Microrgenismos Aerobios Meséfios estan siseRades para determina” las pobiaconesteales de Bacletias aeobies, Se basa on ol crecimiento de colonias de la fora serobia masala que leva ia muest, El serio de este placa presenia una pelicula con nueniesy agentes gelicantes sowble en ‘agua yin inci oj de Tetrazalo para bindar un mejor contrast facile essen, 53.2 Proparacién de a muestra + Plot custo de ave ~_Atipticamente pasar ao menos (manteniend rlacién 1:10 con ol diuyente) 10-04 g de muestra represeniaiva donro de una bola ester Stomacher ~ Agregar 80 mi de Divyente Buttri's Tamponado, Esta diucion es derominada 10" ‘No usar tampones que coniengan cial, BisuMoo Hosufat con is paca Petri, ya |e pueden inno! ercimianto ~ Homogerizarla muestra en equip Stomscher port minuto @ velocidad mesa, ~ Luege depestar 1 mide esta clucién de acuerdo a lo escrito en punto 53.3. C6 TR Peg TaeTiCHILE | Nitin tention Metts Tesie patie © ORC peerings ‘Sireui nme sae La slombra en dupleado quela@ etero dl laboatorio, para lo eval se debe ropeti et rocedimiento antes desta, + A pasts dela divin anterior tomar 1 my depostario en un tubo que cantenga 9 ml de Diuyante Buterelde Tamponade, Esta ciciéa vs denominada 10" Con estas 2 sfiucones ee continua en el punto. 3.3. + En.caso de ser necesaro, elaborsioso puede realizar mas dlucones sucesivas con el ‘objeto de obtener placas con recuerios conables, 53.3 Protocolo de trabajo ~ Rotular las plecas Petrfim con la identiicacion de los muesias y Ja clucion correspondiente, + Covocar 1 placa Petifim Recuento de Mircorgarismas Aerobias Mesbflos en una superficie pana, Levanta el fim superior @inocular 1 ml dela ucibn decimal apropiads en el conto cel fim inferior. = Balar culdadosamente ol fm superior encima de la muestra, evtando la formacién de burbujas de ae + Coloear el spicadr con la cara isa hacia atiba eno canto deta placa = Prasionarligeramenis el centro del apicador para dst fa muestra unlormerente Bistibuir el ndeulo por toda el Sres de recmionto del Pevifim antes de que e forme el {gel No cestzar el apicador por e im. + Sacar a! apcado y esperar al menos un minuto para permit que sobifque e Por cada duc exstentesiembre en una 0 dos places, + tevbar la places en posicién horizontal, cara aba, en plas de hasta 20 placas. La Ineubsdora debe estar humieticada Inevba as placas Peifim Recuento de Mcroorgarimos Aerobics Meséfis por 48 ¢ 3 sa 35°C 8c. 54 Céleulo v expresion de los resultados = Contabizar todas las colonia rojas de bowe regular, ndependentemene de amano © Intenedad en al coer =) rea de cracimiano cular del Pevifim es aproximadamente de 20 on. Pesden Tealzarse estmaciones en placas que contengan mas de 300 colonies contendo el homered coloras en uno o mas cuadrades repesentatios y oleniendo al promo, [Mutipear dicho nimero por 20 para cbtaner el recuent ttl por paca, = Alas concenraciones de colorias en las placas acasionara que toda ol area de ‘racimento so wolva fla o rosaca. Ocasionalmenta, en plscas demasiado cargadas, el {ania da fa placa puede careoer de colonaa visibes, pero pueden sprecarse muches Colonia pequoras en los bordes. Cuando esto ocute, due més ia mugsta para ‘biomes un recuento més preciso. Cigar TRB Poa~_Algunos organisms pueden lover el ge, pudiéndose produc na dfusin que acute fe presencia de otas colonas, S| la ieuacén del gel interfere con el recuenta, debe Felzarse un recuentoestimado contando las areas no afectadas Tras la incubacién, tas placas pueden conservarse, para recuentos posterores, en congelacion e temparaturas bajo gual alos ~ 15 eC por un maximo ge une semane. pera electuar ol conta. Esto es £010 para casos de emergencia, noe debe establece ‘como procedinsete rina 544, Céleuloeinforme de los recuentos en placa ~ Seleccionar las piacas que presenton un rango de cantao ent $0 300 colonias. ~ Pare muestras de piel de cuell, on caso de reslzar divcones en duplcada se deben promecay oN" colonise encontaas en amas placas dela misma cluciony mutplcar por el Inverse de ia clucn En caso de realizar sdlo una placa en cilcones ‘canseoutvas, registrar el numero de colrias de cada dln, maltpear por el verso ela alueién y luego cetermnar el promedio del recuento bacterane entre ambes dlucones. ~ Les recuentos 39 informerén con 2 digios. Cuando el tercer digta es 5, agregar una Lnided a! segundo digo si éste es impar y mantener el segunda digto si estes pa. Userce‘os para los dems digtos hacia derecha = Seinformara came UFC! 9, = En el caso de valores cbtenidos sobre © bajo el ranga deben ser informados como Recuenta Estimad on Piaca (RESP) ~ En caso de recuentos incontabos se inormard como Muy Numeroso Para Cortar (aan), ~ En caso de no obtener desarola en las placas se debe Infrmar de acuerdo al limite de deteccién de la técnica. Elemlo: < 10 UFC /g > Muestas de pie de cunta de ave en lucien 10° 6 REGISTRO Y ENVIO DE RESULTADOS ‘Les resultados deben ser registrados en el Protocole Oficial del SAG, el eval debe Ccontener lama y nombre do responsabi de laberaior. El esponsabie del laboratria debe enva’ los resultados en e! Protocolo Oficial del SAG. Ge acuerdo a lo sefalado en los Manvales cortespancientes. Cabo eafilar, que ademés ‘debe mantener un copia Ge fos resuitodes para sus rogistos, 7 SUPERVISION A LOS LABORATORIOS ACREDITADOS Todo tateratorio acrecitado seré superisado mediante vistas de audtorias de s2guimianto al menos ura vez a! ao. El Servicio posré realizar audtoras ediciones {uando lo este convenient. Le respuesta alas No Conformdacae y Observacones ‘ercontrases durante la Audtoria, debersn se° conlestadas por el Laberaloro, ‘Acritado, en un plazo no superior a 10 clas habs Gest la recepccn do informe de. = ——_————————— Cige LAB Fat Pog eetCHILE 2B | scosoe wonton Woda Tonics Pt © AONE =e Sincal othes S002. ‘autora emi por of Deparamanto de Laboratovos y Estaciones Cuarentsnaras. La Tenovacion de la acredacion quedard supediada 2 la emision de un informe, qUe Indigue que el Laboratorio Acredtado no posee No Conformigaces que sfecian et ‘desempeia, conform alas especticaciones conteidas en las Insrucives TeCnio0s RReglamento Especiico de Acrediscon. 1) Los laborstorios deberén partcipar on programas de ensayos intetaboratorios acionales yo inlemacionales que ncorporen el ands del alcance, al menos una vez 1 afo, cuyos resuades Cebevan ser remvisos sl Departamento. de Laboratoroe Estaciones Cusrentonacas, li) laboratoro acredtado deberd estar dispuesio a recibir audtorias nacionales ylo Intemacionaes, en el momento que el Servicio lo requera, 8 MEDIDAS POR INCUMPLIMIENTO El Servicio aplcara las sanciones contenisas en el Reglamento especifico pare la ‘Acedltacion de Laborstorios AnalisivEnsayo & aquellos laborsioros aoredtados que no ‘cumplan con lo estableciéo en el cade Reglamentoy en el presente insrucvo téenco. ‘Sin payjuio de la anterior, y de conformidad con la dspuasto en ls cldusula sexta de! conven de actedtacién si producto da las accionas de audloria o supeisén el Servicio Setoca falas on el desumpono dl laboraloo acredtade que afecten negatvarente et festa dal programa cel SAG acca, al Senin podra ine al Inborstono ‘Beellaco, mediante cata suscta por el Jefela) dal Departamento de Laborstoros y Estaciones Cusrentenarias, un Drecto(a) Regionale Jefa) de Ochna, ol ceseinmediato ‘de [a secucién de todos o algunos de los analisia que orman parte de sleance de ‘erelacién hasta que el SAG resuete en dfiiiva su caso, Cig TRB HECHILE instructive tnico pra Recuento de Wicroorganamoa ‘Acrobios Mesehios Modlnts Teenica Petrfim © AOAC ‘Oflal tathos 980.12, 9 ANEXOS oa anal rio vincut néstico Nombre Campa Ne ciauie de ram ‘Teewies au reales dented ad Fr del porarieoropesenant egal Fecha, Pag irae tt