Professional Documents
Culture Documents
Osnovna Načela Validacije Analitičkih Metoda
Osnovna Načela Validacije Analitičkih Metoda
Validacija analitikih
metoda osnovna naela
Katica Lazari
Validacija analitikih metoda postupak je kojim dokazujemo da naa metoda slui svrsi, a zahtijeva je
i regulativa i analitika profesija.
Validirane metode u najveoj e
mjeri osigurati pouzdanost i tonost analitikih podataka.
laboratoriji
Preciznost pod uvjetima obnovljivosti ili obnovljivost promjenljivi uvjeti ukljuuju razliite laboratorije. Taj se parametar
odreuje u svrhu normiranja metode i rijetko je sastavni dio
validacije koju provodi sm laboratorij. Eksperimentima preciznosti kvantificiraju se sluajne pogreke metode, a numeriki je pokazatelj standardna devijacija, koeficijent varijacije
ili varijanca. Kod eksperimenata meupreciznosti iznimno je
vano mjerenja koja se ponavljaju provoditi u uvjetima koji
su to sliniji onima pri rutinskoj uporabi metode. U sluaju
rezultata koji ne zadovoljavaju treba otkriti najvaniji izvor
pogreke i pokuati ga ukloniti.
Vano je naglasiti da se eksperimenti preciznosti rade na homogenom autentinom uzorku, odnosno umjetno pripremljenom uzorku, a postupak se ponavlja prema propisu u
metodi upravo onako kako e se ubudue raditi u praksi. Broj
ponavljanja treba zadovoljiti zahtjeve statistike. Najee se
radi po tri ponavljanja na nekoliko koncentracijskih razina
koji se, naravno, poklapaju s podrujem linearnosti. Kriteriji prihvatljivosti ovise o vrsti analize, matrici uzorka i koncentraciji analita koji se odreuje.
Istinitost metode definira se kao stupanj podudaranja izmeu stvarne, tj. prihvaene referencijske vrijednosti, i
srednje vrijednosti dobivene primijenjenim postupkom
odreeni broj puta. Numeriki pokazatelj istinitosti eksperimentalno je utvreno sustavno odstupanje (eng. bias) metode, dobiven je kao razlika aritmetike sredine rezultata i
referencijske vrijednosti ili kao njihov odnos, to se posebno
primjenjuje kod odreivanja iskoritenja. Eksperimenti se
provode nakon odreivanja selektivnosti, linearnosti i preciznosti, najmanje tri puta za najmanje tri koncentracijske ra-
Odziv detektora
Odziv
detektora / koncentracija
U puno sluajeva podruje je odreeno svrhom metode i nema potrebe za ispitivanjem krajnjih mogunosti metode. Naprotiv, suavanjem podruja na koncentracijski raspon uzoraka postiu se bolja tonost i preciznost metode. Meutim,
Koncentracija
62
Logaritam
Ako se zahtijeva da metoda ima zadanu preciznost na granici kvantifikacije, pripremi se vie uzoraka poznate koncentracije u podruju oko mogue granice kvantifikacije, svaki se
izmjeri 56 puta i izraunaju se relativne standardne devijacije za svaku koncentraciju. Zatim se grafiki prikae odnos
RSD-a prema koncentraciji i iz grafa odredi koncentracija na
granici kvantifikacije s tono odreenom preciznou kako
se vidi na 3. slici. U praksi se obino pripremi uzorak tako
odreene koncentracije i potvrdi preciznost viekratnim mjerenjem.
laboratoriji
Parametar granice kvantifikacije iznimno je vaan kod metoda kojima se odreuju analiti u tragovima koji i u vrlo niskim
koncentracijama mogu tetno djelovati na zdravlje ljudi i
okoli.
NEPRECIZNO I
NETONO
PRECIZNO ALI
NETONO
PRECIZNO I
TONO
laboratoriji
Analiza tragova
Identifikacijski
Sadraj
testovi
kvantitativna Limit Test
istinitost
preciznost
ponovljivost
meupreciznost
selektivnost
GD
GK
linearnost
podruje
4. slika Postojanost metode utjecaj
temperature kolone i pH mobilne faze
ne
da
ne
da
ne
ne
da
ne
ne
ne
ne
da
da
da
ne
da
da
da
ne
ne
da
da
ne
ne
ne
da
da
da
ne
ne
da
da
Prema: ICH Harmonised Tripartite Guideline Validation Of Analytical Procedures: Text And Methodology Q2(R1)
Zakljuak
Validacijom analitike metode dobit e se obavijesti o njezinoj tonosti i preciznosti, o odnosu izmeu koncentracije
uzorka i odziva metode, o moguim interferencijama iz matrice uzorka, o najmanjim koncentracijama koje e se moi
utvrditi ili kvantificirati tom metodom i doznat e se njezine najslabije, ali i najjae strane. Validacija analitikih metoda je regulatorni zahtjev kao i profesionalna odgovornost
analitiara. Vrijeme i novac uloeni u validaciju investicija
su koja e se viestruko isplatiti tijekom koritenja metode
pruajui sigurnost analitiarima i vjerodostojnost njihovim
rezultatima.
Literatura
[1] The European Community Guidelines: CPMP Committee for Proprietary Medicinal Products (http://
www.eudra.org)
[2] USA Guidelines: US Food and Drug Administration (http://www.fda.gov)
[3] USP (http://www.usp.org)
[4] cGMP (http://www.cgmp.com)
[5] International Committee for Harmonisation (http://www.ich.org) ICH Guidance for Industry Q2(R1)
Validation of Analytical Procedures Methodology
[6] Eurachem (http://www.vtt.fr/ket/eurachem) The Fitness for Purpose of Analytical Methods
[7] AOAC How to Meet ISO 17025 Requirements for Method Verification Prepared by AOAC INTERNATIONAL 481 N. Frederick Ave, Suite 5002007
[8] IUPAC Technical Report: Harmonized Guidelines for Single Laboratory Validation of Methods of Analysis,
Pure Appl. Chem., Vol. 74, No. 5, pp. 835855, 2002
[9] NATA: Technical Note #17 Guidelines for the Validation and Verification of Chemical Test Methods, April
2009
64