Sesién 1 (primera parte) | * Se administra a la rata sulfacetamids en dosis de 10 mg/Ke de peso. Se coleca el animal en una jaula ————__} Sino se ha colectade orina en este intervalo de tiempo, induzce al animal presionandole levemente la parte inferior del abdomen. ] , ~ 6 Anestesic al animal y preparelo en la mesa de cirugia. Abra la cavidad abdominal (en este momento puede obtener orina por incisién directa en la vejiga, si no se logr: amteriormente). “ sae Procesamiento de las muestras ~ c pp SS Sangre a Lleve lee de sangre a un tubo que ‘contenge Scc de agua y agite en wortex. Tome dec de esta dilucién y ‘twansfiérala a otro tubo, adicione 12cc de agua y agite de nuevo & ,——_+_____.,. Agregue dc de ATC al 15% y agite e | pord minuto. Centriftugue a 3,000 rpm por 3 mi Del sobrenadante tome una muestra | _/ de 5Sccy pasela a un tubo limpio. Etiquetar el tubo especificando fecha, laboratoric, numero de equipo y contenids. Guardar en congelaciénOring Tejidos y Organs En el tubo que contiene ia muestra y la solucién de NaOH deberd agitarse en wortex por 1 minuto en 3 ocasiones, en un veriode de 10 minutos + a. Después se dejar reposar por 45 minutos. Se toman 2c del sobrenadante y se adicionan 2cc de TCA al 15%, agitar par 30 seg. Adicionar Gec de agua y agitar de nuevo. Centrifugar por S minutes 2 3.000 rem ae ¥ ‘Tomar del sobrenadante una muestra de Scc y pasar a un tubo limpio. Etiquetar el tubo ‘especificando fecha, laboratorio, niimero de equipo y contenido. Guardar en congelaciénSesidn 2 (segunda parte) Para iniciar con esta sesién, permita que las muestres se descongelen @ temperatura ambiente, o en bafio de agua a temperatura ambiente S —__# + ‘Cuantificacion de Sulfacetamida por la técnica analitics de Bratton— Marshal | + A Sec del sobrenadante sele adiionan icc de HCI 4N, Icc de Nitrito de sodio al 0156 y se agit en vortex gor 5 minutos. _ _ Posteriormente agregar ec de Sulfamato de amanio al 0.5% y agite de nuevo por 3 minutes, manualmente de manera vigorosa. Por ultimo adicione Lec de alfa naftiletilendiamina al 0.1%, agite y repose en la oscuridad por 10 Les la absorbancia en espectrofotémetre a una longitud de onda de 546 nm. Hacer exactamente este mismo procedimiento a un blanco que consist en Sec de agua, que se trata ala parcon las muestras