Professional Documents
Culture Documents
GENERALITATI
Microorganismele traiesc n mediul nconjurator n prezenta anumitor factori fizici,
chimici si biologici care influenteaza n mod favorabil sau defavorabil dezvoltarea si
nmultirea lor. De-a lungul timpului, omul a nvatat sa selecteze acei factori care sa-i
permita distrugerea speciilor patogene sau selectarea speciilor folositoare.
n cele mai vechi civilizatii s-au cunoscut practici care au prevenit alterarea
alimentelor, putrefactia cadavrelor, fara a se cunoaste rolul microorganismelor n aceste
procese. Astfel, alimentele perisabile au fost conservate prin adaus de sare, uleiuri
aromatice, afumare sau fermentatie acida. Conservele au aparut cu 50 de ani naintea
cercetarilor lui Pasteur, fara a fi fost lamurit principiul care sta la baza lor. La nceputul
secolului al XVIII-lea s-a folosit pentru prima oara clorura de var si fenolul pentru
dezodorizarea gunoaielor si n final pentru curatirea plagilor, fara a se cunoaste
actiunea bactericidaa a acestor substante.
Tehnicile de sterilizare s-au dezvoltat initial n laboratoare pentru a permite izolarea
miocrobilor n culturi pure, ele fiind apoi rapid preluate de toate specialitatile medicale
pentru a preveni raspndirea infectiilor.
Se folosesc doi termeni pentru a desemna distrugerea sau nlaturarea
microorganismelor, sterilizarea si dezinfectia, diferenta dintre ele fiind importanta.
Prin termenul de sterilizare, care este un termen absolut, se nteleg procedeele
fizice ssi chimice care elimina toti germenii viabili (bacterii, spori, fungi, virusuri, paraziti)
de pe un obiect. Se desemneaza ca steril un obiect care a fost supus unui procedeu de
sterilizare ssi protejat n mod corespunzator pentru a preveni contaminarea sa.
Se folosesc, n principiu, 4 metode de sterilizare:
sterilizarea prin calduraa;
filtrarea prin filtre bacteriologice care retin bacteriile din lichidele ce nu pot fi
supuse temperaturilor ridicate;
iradierea cu raze UV sau raze ionizante;
sterilizarea chimica, metoda evitata n general deoarece doar ctiva dezinfectanti,
foarte toxici si iritanti (ca de exemplu, formaldehida, oxidul de etilen etc.) folositi n
conditii riguros controlate, sunt capabili sa omoare toate formele de viata inclusiv
sporii, fara a deteriora obiectele de sterilizat.
Trebuie specificat, nsa, ca sterilizarea nu este identica cu distrugerea fizica a
bacteriei, cu toate ca cele doua notiuni se folosesc des una n locul celeilalte. Acest
aspect este foarte important, deoarece solutiile perfuzabile, care sunt sterile dar contin
bacterii omorte, a caror produsi de degradare au efecte pirogene, dau reactii toxice a
caror gravitate merge pna la socul endotoxinic. Deci, apa si lichidele care vor servi la
prepararea solutiilor injectabile sau perfuzabile trebuie sa fie nu numai sterile, dar sa
aiba un grad pronuntat de puritate.
Dezinfectia se referaa n general la distrugerea ttintita a potentialului infectios n
scopul de a mpiedica raspndirea microbilor dintr-un anumit focar de infectie, rezultatul
nefiind ntotdeauna omorrea tuturor formelor microbiene, mai ales a endosporilor.
Dezinfectantele sunt substante puternic bactericide, cel mai des toxice pentru
1
punctul termic letal, care se defineste ca cea mai joasa temperatura care distruge
bacteriile dintr-o cultura cu densitate data n 10 minute. Pentru E.coli valoarea se
situeaza la 55C, pentru bacilul tuberculos la 60C, iar pentru majoritatea sporilor
la 120C;
timpul termic letal, care se defineste ca timpul minim n care are loc distrugerea
bacteriilor la o temperatura data.
Data fiind sensibilitatea diferita a tulpinilor din cadrul unei specii se prefera ca index
pentru timpul n care sunt distruse bacteriile timpul zecimal de reducere, sau valoarea
D10, care este timpul minim exprimat n minute care reduce viabilitatea culturii
bacteriene cu 90% la o temperatura data n conditii standard.
2.1. Sterilizarea prin caldura uscata
Caldura uscata omoara microorganismele prin oxidarea distructiva a
componentelor celulare. Cei mai rezistenti spori sunt distrusi de caldura uscata la 160 o,
timp de 60 de minute. Caldura uscata de 100 o C distruge n 60 de minute bacteriile
care sunt omorte prin calduraa umedaa la 60 oC n 30 de minute. Sporii fungilor sunt
distrusi n 60 de minute la 115 oC, iar cei bacterieni la temperaturi cuprinse ntre 120160oC. n laboratorul de microbiologie se utilizeaza urmatoarele tehnici de sterilizare:
ncalzirea la rosu n flacara a obiectelor se aplica anselor bacteriologice n
laboratorul de microbiologie;
flambarea (trecerea prin flacara pentru cteva secunde) se aplica gtului
baloanelor, eprubetelor dupa deschiderea si nainte de nchiderea lor, pipetelor
nainte de utilizare pentru a preveni contaminarea cu germenii din aer. Se mai
sterilizeaza prin flambare instrumente de mica chirurgie, dupa ce se stropesc cu
alcool, dar temperatura produsa nu este suficient de nalta pentru a asigura o
sterilizare optima;
sterilizarea la pupinel. Pupinelul sau cuptorul cu aer cald este o cutie metalica cu
pereti dubli ntre care se gaseste un strat de azbest care mpiedica pierderile de
caldura, o sursa de caldura care este energia electrica si un termoregulator. n
interior pupinelul este prevazut cu rafturi pentru obiectele de sterlizat.
Temperatura de sterilizarea la pupinel este de 180 oC timp de o ora. La pupinel se
sterilizeaza ntreaga sticlarie de laborator, instrumentarul de stomatologie, seringi
fara armatura metalica, pudre, uleiuri etc. Pupinelul nu trebuie sa fie
suprancarcat, pentru ca aerul sa poata circula nestingherit printre obiectele de
sterilizat.
sterilizarea cu raze infrarosii este folosita pentru sterilizarea seringilor faraa
armaturaa metalicaa la o temperatura de 180 oC. Sterilizarea se poate efectua ssi
la 200oC n vid, aplicndu-se instrumentelor chirurgicale.
4. ANTISEPTICE SI DEZINFECTANTE
Dezinfectantele sunt substante puternic bactericide la concentratii relativ scazute,
folosite la decontaminarea obiectelor si ncaperilor. Spre deosebire de radiatiile letale
care actioneaza asupra DNA si a agentilor chimioterapici care interactioneaza ireversibil
cu multiple sisteme metabolice, tinta de atac a majoritatii dezinfectantelor este peretele
celular, membrana celulara cu enzimele asociate si citoplasma. Ele actioneaza prin
dizolvarea lipidelor din nvelisurile celulare (detergenti, solventi lipidici) sau prin
denaturarea proteinelor structurale si enzimatice (oxidanti, agenti alkilanti, reactivi
sulfhidrilici etc.).
Antisepticele sunt substante cu actiune bacteriostatica, uneori bactericida, putnd fi
aplicate pe tegumente sau ca spalaturi ale unor mucoase (vaginala, uretrala, otica etc.).
Aceeasi substanta poate fi antiseptic sau dezinfectant n functie de concentratie.
4.1 Determinarea potentialului dezinfectant
Indicele fenolic (testul Rideal-Walker). Dupa folosirea de catre Lister a fenolului
pentru dezinfectia salilor de operatii, s-a convenit ca acest compus sa fie socotit
dezinfectantul standard, cu toate ca actioneaza n concentratii mai mari dect
majoritatea dezinfectantelor folosite astazi. Indicele fenolic a unui dezinfectant
reprezinta raportul dintre concentratia minima bactericida a fenolului si cea
dezinfectantului. Concentratia folosita n dezinfectie este n general de 5 ori mai mare
dect CMB. Microorganismele recomandate pentru a testa puterea bactericida a
dezinfectantelor sunt n general S.aureus, Ps.aeruginosa, S.typhi, dar si altele. Indicele
fenolic se recomanda pentru aprecierea activitatii bactericide a derivatilor de fenol,
deoarece alti dezinfectanti nenruditi cu fenolul au o alta evolutie a curbei de
concentratie si susceptibilitatea diferita fata de agentii neutralizanti ai mediului.
Unii agenti dezinfectanti (sarurile de mercur, detergenti) adera de bacterii si exercita
o actiune bacteriostatica, care mimeaza un efect bactericid. De aceea, cnd se
nsamnteaza bacteriile ntr-un nou mediu pentru a aprecia daca celulele bacteriene
sunt viabile, este importanta includerea n mediu a unui compus neutralizant care sa
desprinda dezinfectantul de pe suprafata mediului permitnd astfel bacteriei sa se
nmulteasca
Eficienta unui dezinfectant depinde de mai multi factori, cum sunt concentratia
dezinfectantului, densitatea celulelor bacteriene, speciile carora le apartin, prezenta
formelor sporulate si timpul de actiune al dezinfectantului. La acesti factori se mai
adauga o serie de variabile, cum sunt:
curatenia materialului care este supus decontaminarii. Continutul mare n
substante organice a produsului de dezinfectat modifica chimic dezinfec-tantul si-i
reduce actiunea bactericida. Ideal este, deci, sa se testeze actiunea
antibacteriana a unui dezinfectant n conditiile n care este aplicat,
accesibilitatea dezinfectantului. Astfel, de pilda, nici dezinfectantii gazosi si nici cei
lichizi nu pot actiona asupra bacteriilor, daca acestea sunt prinse n cristale care
s-au format n urma desicarii produsului n care sunt continute,
hipocloritul de sodiu se foloseste tot pentru dezinfectia apei, a veselei si a WCurilor, la curatirea suprafetelor n industria alimentara, n unitati de alimentatie
publica etc;
cloramina este folosita ca dezinfectant pentru vesela, lenjerie, n concentratie de
2-3% si ca antiseptic n concentratie de 1%;
Iodul este un oxidant puternic si se combina ireversibil cu proteinele bacteriene.
Se foloseste sub forma de:
solutie alcoolica 1-2% ca antiseptic cutanat
tinctura de iod care contine 4-5% iod si 2-5% iodura de potasiu se utilizeaza
tot ca antispetic cutanat pentru antiseptizarea pielii nainte de interventii
chirurgicale. Att solutia alcoolica ct si tinctura nu pot fi aplicate direct pe
plagi deoarece au efect distructiv asupra tesuturilor;
iodoforii contin iod complexat cu un detergent anionic au o serie de avantaje. Au o
penetrabilitate foarte buna a pielii, nu sunt iritanti deoarece iodul este eliberat
treptat din combinatie si nu pateza lenjeria. Un exemplu este betadina, un
complex hidrosolubil al iodului cu polivinilpirolidona. Preparatul poate fi folosit
pentru antiseptizarea plagilor superficiale.
Dezavantajul antisepticelor cu iod este alergizarea pe care o produc la unele
persoane.
4.5. Formaldehida si glutaraldehida
Formaldehida nlocuieste atomii labili de H din gruparile NH 2 sau -OH, frecvente n
nucleoproteine si din gruparile -COOH si -SH ale proteinelor. Este la fel de activa fata
de spori ca si fata de formele vegetative, probabil pentru ca poate patrunde usor n
celula bacteriana datorita dimensiunilor reduse ale moleculei si pentru ca reactioneaza
n lipsa apei.
Formaldehida este un gaz, forma obisnuita de prezentare fiind o solutie de 37%
numita formalina.
n concentratie de 0,1% a fost utilizat mult timp n prepararea vaccinurilor prin
detoxifierea toxinelor.
se poate utiliza sub forma gazoasa sau lichida pentru sterilizarea diferitelor
suprafete. Formaldehida gazoasa este pusa n libertate dintr-un polimer,
paraformaldehida si este folosita la dezinfectia ncaperilor, a mobilierului si n general a
obiectelor care nu pot fi sterilizate prin caldura. Ea nu deterioreaza obiectele supuse
dezinfectiei (mbracaminte, obiecte de metal, lemn, piele etc.), dar are o actiunea
iritanta asupra conjunctivei si cailor respiratorii.
Glutaraldehida 2% n solutie apoasa este mai activa dect formolul si mai putin
iritanta. Este mai activa n mediu alcalin fiind bactericida, sporicida si virulicida. Este
indicata n sterilizarea unor instrumente medicale ce nu pot fi supuse sterilizarii prin
caldura, ca, de pilda, cistoscoape, echipament de anestezie, materiale plastice si
termometre.
10
11