Diagnostic de

laborator
in neuroviroze

2 aspecte clinice
Meningite

virale

Encefalite

virale

1. SUSPICIUNEA CLINICA

Definitie de caz meningita virala

Febra 38.5 C asociata cu minim un simptom dintre:

Cefalee severa i persistenta;

Redoare de ceafa

Durere de ceafa asociata cu minim 2 din urmatoarele:

Fotofobie
Greata
Varsaturi
Faringita exudativa
Dureri abdominale
La sugari si copiii mici semnele principale sunt febra
38.5 C asociata cu iritabilitate si pulsarea fontanelei

ETIOLOGIE POSIBILA
SINDROM

ETIOLOGIE
POSIBILA

80%-90%
Enterovirusuri
MENINGITA
ASEPTICA

Polio
Cocsackie A si B
E.C.H.O.
10 - 20%

alte virusuri:
VZV
V. URLIAN
HSV
CMV
V. PARAGRIPALE

V. Poliomielitice

Paralizie flasca
Distala
Asimetrica
Sensibilitate pastrata

Subgenul

Serotip Boala asociata

Polio

1-3

Paralizii

Coxsackie A

1-24

Meningite, faringite,
exantem, herpangina

Coxsackie B

1-6

ECHO

1-33

Miocardita,
pancreatite,
pericardite,boala
Bornholm
Exanteme,
IACRS,
conjuctivite

Heparnavirus

72

Hepatita virala
VHA

Boala mana picior gura Coxsackie A

Algoritm de diagnostic virusologic

meningite virale
ETIOLOGIE
POSIBILA

80%-90%
Enterovirusuri

Polio
Cocsackie A si B
E.C.H.O.

Produs
Patolog

MF
SNF
LCR

IZOLARE

Dg. DIRECT
=detectie
directa

Dg. INDIRECT
=serologie

De electie
Culturi celulare
Animal de
laborator

NU

DA

Produse patologice
Materiile fecale(MF)

Recoltare. Materiile fecale pot fi recoltate ca atare in

cantitate de 4-8 grame sau corespunzator volumului
extremitatii falangei distale a indexului de adult. De
asemenea, se pot recolta intr-o solutie 1 M de Mg SO4
(stabilizeaza infectivitatea enterovirusurilor)
Precizari. Este important de notat ca enterovirusurile se
excreta saptamani la rand, dar sansele de izolare scad.
Se recomanda recoltarea a 2 - 3 probe de la pacient la
interval de 24-48 ore.
Stocare si transport. Produsele patologice sunt
transportate si stocate la 2-4 C.
Prelucrare. In vederea izolarii de virus suspensia de
materii fecale se prepara amestecand proba recoltata
cu 15 ml de solutie Hanks si bile de sticla sterile intr-un
tub de centrifuga inchis. Se agita puternic, se
centrifugheaza , si se recolteaza supernatantul.

Produse patologice
Lichid cefalorahidian (LCR)

Recoltare. Se realizeaza prin punctie la nivelul L4-L5,

cat mai rapid posibil de la debutul simptomatologiei,
inainte de inceperea tratamentului antibiotic, respectand
strict masurile de asepsie.
1 ml de LCR este suficient pentru investigatii virusologice.
Cantitatea recoltata nu trebuie sa depaseasca 5-6 ml in 3
tuburi sterile. Se determina numarul de celule, proteine
totale, glicorahia si presiunea LCR. Sansa de izolare din
acest produs creste cnd participarea meningiana este
evidenta. Acest lucru se traduce prin pleiocitoza
(cresterea numarului de celule limfo-monocitare in LCR).
Stocarea. Se pastreaza la 2-4 C, fara adaos de mediu de
transport viral.
Transportul. Se realizeaza cat mai rapid posibil. Daca se
depaseste 1 ora de la recoltare transportul se face
obligatoriu pe gheata sau la -70 C.

Exsudat faringian/SNF

IZOLAREA ENTEROVIRUSURILOR IN CULTURI

DE CELULE
ECP PICNOTIC LITIC

ECP picnotic litic

Identificarea enterovirusurilor:
REACTIA DE SERONEUTRALIZARE
IDENTIFICAREA VIRUSURILOR = VIRUS NEUTRALIZARE
TITRAREA ANTICORPILOR = REACTIA DE SERONEUTRALIZARE

VIRUSNEUTRALIZARE

VIRUS NECUNOSCUT
ANTICORPI CUNOSCUTI=SER IMUN
DE REFERINTA

SERONEUTRALIZARE

TITRU DE ANTICORPI NECUNOSCUT

VIRUS CUNOSCUT = TULPINA DE
REFERINTA

ETAPE RSN
1.

TITRAREA INFECTIVITATII
VIRALE

2.

BLOCAREA INFECTIVITATII
VIRALE

3.

DEMONSTRAREA
NEUTRALIZARII INFECTIVITATII
VIRALE

1.

TITRAREA INFECTIVITATII VIRALE

metoda plajelor
Dilutii seriale
ale virusului

Insamantare pe celule
susceptibile
dupa adsorbtie, 1h la 37,
se acopera cu agar
Restrictia raspandirii
virusului determina liza
focalizata a monostratului
celular vizibila sub forma
plajelor, PFU

Metoda plajelor

Caractere ale plajelor la titrarea virusurilor PR8 (H1N1) cu gena NS1 integra sau defectiva
pe substraturi celulare cu sistem interferon tip I activ (MDCK) sau ineficient (Vero)
Dilutie:

PR8-salbatic
MDCK

PR8-delNS1
Vero

104

105

106

2. BLOCAREA INFECTIVITATII VIRALE

3. DEMONSTRAREA NEUTRALIZARII
INFECTIVITATII VIRALE

= Repetarea etapei 1 cu amestecurile

antigen-anticorp

Identificarea enterovirusurilor dupa metoda Tabla de sah

Lim - Benyesh Melnick

ENCEFALITE Algoritm de diagnostic virusologic

SINDROM

ENCEFALITA
ACUTA
MENINGOENCEFALITA
ENCEFALOMIELITA

ETIOLOGIE
POSIBILA

Prod.
Patologic

IZOLARE

Dg.
DIRECT
=detect.
directa

Dg.
INDIRECT
=serologie

HERPES
VIRUSURI:

Lichid vezicular
LCR
Biopsie cerebrala

Culturi
celulare
Animal de
laborator

PCR
IF

NU

Saliva,

Culturi
celulare
Animal de
laborator

PCR
IF

HSV1
HSV2
VZV,EBV,CMV

V. RABIC

Amprente dermice,

corneene,
Biopsie cerebrala

De electie pt.
ARBO
VIRUSURI

ARBOVIRUSURI
TOGAVIRUSURI
FLAVIVIRUSURI
BUNYAVIRUSURI
POSTINFECTIOASE
V. RUJEOLOS
V. URLIAN
V. GRIPALE
VZV

LCR
SANGE

SALIVA,
BIOPSIE
CEREBRALA
LCR

Culturi
celulare

PCR
IF

NU