WI OO 3-494 Wes NORMA VENEZOLANA AGUA POTABLE. METODO DE DETERMINACION DEL NUMERO MAS PROBABLE DE BACTERIAS COLIFORMES COVENIN 3047-93 ccaPROLOGO La Comisién Venezolana de Normas Industriales (COVENIN), creada en 1958, es el organisma encargado de programar y coordinat: Ins actividades de Normalizacién y Calidad en ef pats. Para levar a cabo el trabajo de elaboracién de normas, ta COVENIN constituye Comités -y Comisiones ‘Téenicas de Normalizacién, donde participan organizaciones gubernamentales y ‘no-gubernamentales relacionadas con un rea especifica. ‘La presente norma fue claborads por el Camité Técnico de Normalizacién CT 10y eprobeda por la COVENIN.en su reunién No 123 de fecha 13/10/93NORMA YENEZOLANA COVENIN AGUA POTABLE 3047-93 DETERMINACION DEL, NUMERO MAS PROBABLE DE. BACTERIAS COLIFORMES 1 NORMAS COVENIN A CONSULTAR COVENIN 1126-89 Alimentos, Ideotifleacion. preparacién de muestras pare el andlisis microbioldgico. COVENIN 2614-89 Agua potable. Toma de mues- tras 2 OBJETO Y CAMPO DE APLICACION Esta Norma Venezolana contempla el método de ensayo dde rutina para Ia determinacién del mimero mas probable de bacterias coliformes en agua potable, 3. PRINCIPIO DEL METODO. EI método consiste en inacular volmenes conocidos de tuna muestra de agua potable,en ciu de $6 10 tubos de ensayo, con un medio de cultive no selectivo, doble eon centrado, y con tubos de fermentacién incorparados, Después del perfodo de incubsclén se observan los tubos ‘que presenten formacién de gas y/o turbidez, se confirman ‘en un medio de cultivo selectivo, y se obtiene el NMP de bacterias coliformes, utiizando las tablas disefiadas para tal fin, 4 EQUIPOS E INSTRUMENTOS 4.1. Equipo para la preparacién de muestras (Noma CO- VENIN 1126) 422 Incubadora con regulador de temperatura 4.3 Pipetas graduadas, de | y 10 ml, estériles 44 Tubos de ensayo de 150.x 1$ mm y 150 x 20mm 4.5 Tubos de Durham ode fermentacién, de 10 x 75 mm 4.6 Equipo demso comin en el laboratorio 5 MEDIOS DE CULTIVO 5.1 Caldo Iaurif sulfato triptosa, doble concentrado (Anexo 1) 5.2. Caldo lactosa bilis verde brillante (2%) (Anexo 1) 6 MATERIAL A ENSAYAR Bl material» ensayar consiste en una muestra representati~ va de agua potable, coh ablin Moale toni COVENIN 2614, 7. RROCEDIMIENTO 7. La muestra se identifica y prepare segin la Noma ‘Venezolana COVENIN 1126 7.2. PRUEBA PRESUNTIVA, 7.2.1 Se inoculan volimenes de 10 mi de muestra en eada uno de $ tubos que contengan caldo lauri! sulfuttriptosa, doble concentrado, con tubo de fermentacién invertido. ‘Se mezcla suavemente. NOTA.L: Si se requiere mayor precisi6n en ef métado, s¢ inoeulan 10 tubos ‘F.22 Se incuban a 35 + 0,5°C. Después de 24 +2 agi- te suavemente cada tubo y observe la aparicién de gas y/o turbiedad, si ambas son negativas se reineuban por 24 + 2 hadicionales. 72.3. Se consideran como tubos pasitivas. en Ia prucba presuntiva aquellos que presenten cualquier cantidad de sas enel tubo Durkan y/o turbiedad en el medinde cult ‘Vo, después de 24 48 horas de incubaciéin, 74 PRUEBA CONFIRMATORIA 73.1 Se agita suavemente cada uno de los tubos positives de Ie prueba anterior, y se transfiere una asada del cultivo: a tubos que gontengan caldo lactose bis verde brilante (2%), com tube de fermentaciin invertido. 742 Seinoudan a 35° + 0,5°C durante 48 brs. 7.3.3 Finalizado et perfodo de incubacién se consideran ‘como tubos postivos en Ia prueba confirmatoria, aquellos donde se observa la sparcién de gas, 7.3.4 Se cuenta et nimera de tubos positivos obienidos y el resultado 9¢ Hleva a las tablas de: nimero mis probable (que corresponds (er tabtas del anexo M1). 8 EXPRESION DE LOS RESULTADOS 8.1. Et resultado se expresa cono Numero mas probable de bacteriagcoliformes por 100ml de muestra. 82. En caso de que todos los tubos sean negativos, ef re- sultada se expresa como “menos de 2,2 0 menos de 1.1", segin se hayan utitizado-$ 6 10 tubos respectivamente. 18.3 En caso de que todos los tubo8 sean positivos, el resul- tado se expresa como "mis de 16,0 0 més de 23,0%, segiin se hayan inoculado 5 6 10 tubis respeetivarnente. 9 INFORME 9.1 El informe del ensayo deberd indicar como mfnimo lo siguiente: 9.1.1. Ensayo realizado segin ta Noma Venezolana CO- VENIN correspondiente 9.1.2 Fecha en la cual se realiz6 el ensayo y nombre de quien fo realize 9.14 Resultados del ensayo 9.1.5 Observaciones BIBLIOGRAFIA APHA 1989 Standard Methods for the examination of water and waste - water. 17 th edition. Washington D.C. [APHA 1992 Compendium of methods for the microbiolo- ical examination of food . Third edition. Washington DE.ANEXOT 1 MEDIOS DE CULTIVO 1.1 CALDO LAURIL SULFATO TRIPTOSA, DOBLE CONCENTRADO Formula “Triptosa 20,08 Lactosa 508 K,HPO, 2158 KH PO, 2188 NaCl 5,08 Lauril sulfato de sodio ols ‘Agua destiloda 00m Preparacién: Disolver los ingredientes en $00 ta! de agua destlada. Distributro em cantidades de 10 ml, en tubas $0 x 20 mm, con tu- ‘bos de Durham invertidos (75 x 10 mn), Esterilizar en autoclave 121°C durante 10 minutos, pH final 6,8. NOTA 2: El medio existe comercialmente en forma deshiratada. Para su preparacin se pesa el dabe de a cantidad in- dicada por el fabricante y se siguen las recomendaciones de este. 1.2 CALDO LACTOSA BILIS VERDE BRILLANTE (2%) Eola: Peptona 100g Lactosa 100g Bilis de buey deshidatada 2008 Verde brillante 0.0133 g ‘Agua destilada 1000 mi Preparacién: Se disuelven a peptona y la Tactosa en 500ml de agua aproximadamente. Se disueve fa tilis de buey deshidratada en 200 til de agua destilada y s¢ mezcla con 1a solucion de peptona y lactosa (el pH de la salucid serd de: 2,0 - 7,5). Se afladen 13.3 ml de soluciéa acuosa de verde brillang al 0,1% y se Neva el volume final hasta 1000 mi de agua destilada, Se reparten cantidades de 10 rl 2a cada tubo de ensayo ona tubo Durharh invertido, Se esterilizan en autoclave @ 121°C x 1S min. El pH firal deberd estar entre 7,1 y 7.4ANEXOTI TABLA Ne Indices de NMP y Ifmites de confianza de 95% para vasies combinaciones de resultados positivos y negativos, cuando se ut lizan 5 tubos inoculados con 10 ml de muestra. No, de tubos positives] Indice NMP/100 mi Limites de Confianza de 95% Inferior Superior 0 $22 0 6 1 22 Ou 126 2 Si 05 19,2 3 92. 16 29,4 4 16 33 329 $ 216 8 Infinito TABI Indices de NMP y limites de confianza de 95% para varias eorabinaciones de resultados positivos y negativos, cuando se uti lizan 10 rubos inoculados con 10 ml de muestra. [’No. de tubos positives | Indice NMP/100 mi Limites de Confianza de 95% Inferior [ Superior oO sil 0 3 1 LL 0,03 59 2 2,2 0.26 1 3 36 09 106 4 51 13 4 5 69 21 168 6 9,2 31 21,1 7 tT 12 43 27,1 8 16,1 59 36,8 9 23 81 59,5 10 223 13,5 InfinitoCOVENIN 3047-93 COMISION VENEZOLANA DE NORMAS INDUSTRIALES MINISTERIO DE FOMENTO Av. Andrés Bello Edif. Torre Fondo Comin Pisos U1 y 12 ‘elf. $75.41. 11 Fax: $74.13. 12 ‘CARACAS. publicacién de: J IMPRESO EN EL TALLER DE COVENIN FONDONORMA. ‘Cualquiertraduccin o reproducciin parcial o total dh presente DU: 644.61.542.5:39 [Nomta debert ser autorizaa por el Ministerio de Forento ISBN:980-06-1169-X Deseriptorest Método microblolégico, Agua potable