Licda Nora Morales de Morales

Laboratorio Multidisciplinario, 3er. Ao Medicina

PRUEBAS INMUNOLGICAS EN EL DIAGNSTICO DE ENFERMEDADES

A diferencia de todas las dems pruebas de Laboratorio, las pruebas inmunolgicas, detectan reacciones
Antgeno-Anticuerpo.
El anlisis cualitativo y cuantitativo de las respuestas inmunitarias hace que el Mdico comprenda mejor el estado
de la patologa.
Importancia:
1. Diagnstico
2. Tratamiento
3. Pronstico
Con las Pruebas Inmunolgicas se detectan por ejemplo:

Respuestas inmunitarias y patolgicas.

Concentraciones de Antgeno o Anticuerpo, en forma cualitativa y/o cuantitativa.

IMPORTANTE:

Para el Mdico, NO importa tanto cmo se realizan las pruebas, sino ms bien el principio de accin de cada
una y especialmente su aplicacin a los problemas clnicos.
SON 8 GRANDES GRUPOS DE PRUEBAS INMUNOLGICAS:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.

Inmunodifusin.
Electroforesis e Inmunoelectroforesis.
Mtodos Inmunoqumicos y fisicoqumicos.
Anlisis de Fijador de Ligando.
Tcnicas Inmunohistoqumicas.
Aglutinacin.
Anlisis del Complemento.
Anticuerpos Monoclonales.

1. INMUNODIFUSIN

Detecta la reaccin Antgeno-Anticuerpo mediante precipitacin.

Aunque dicha reaccin depende del tipo de agar que se utiliza, del pH de reaccin, de los electrolitos del
amortiguador, de la Temperatura, etc., lo ms importante es la Concentracin de Antgeno o Anticuerpo
presente en la muestra.
Tiene aplicacin clnica en el anlisis cuantitativo y cualitativo de muchos Ags o Acs, pero pruebas ms
sensibles y automatizadas como ELISA o RIA, son ms utilizadas.

Hay dos tipos de Difusin:

Doble Difusin en agar (en donde migran tanto antgenos como anticuerpos, para poder encontrarse y
precipitar)
Difusin radial simple (en donde migra solo el Ag o solo el Ac)
2. ELECTROFORESIS E INMUNOELECTROFORESIS

Utiliza un campo elctrico

Se agrega una pequea cantidad de suero o muestra
Se tien las tiras en donde han migrado las protenas
Se analizan las grficas obtenidas con un densitmetro.

Hay dos tipos de Electroforesis:

Electroforesis de Zona: til en mieloma mltiple, macroglobulinemia de Waldestrom, etc..
Inmunoelectroforesis: que combina separacin electrofortica con la Precipitacin Inmunitaria de las
protenas. Las bandas formadas pueden fotografiarse o teirse.
Es importante por ejemplo para detectar incrementos en las cantidades de protenas en LCR en
enfermos neurolgicos, etc.

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Electroinmunodifusin: en donde se une Electroforesis y Difusin. El encuentro Ag-Ac se incrementa

mucho al dirigir por medio de electricidad el encuentro de ambos.
Se utiliza por ejemplo en la deteccin de Ags. Para Criptococcus en LCR, Ag. Carcionoembrionario, Ags.
Para meningococo en LCR, etc.

3. MTODOS INMUNOQUMICOS Y FISICOQUMICOS

Son ms detallados que los dos anteriores, pero muy complejos.
Entre ellos tenemos:
Cromatografa: til para el fraccionamiento de protenas y aislamiento de Inmunoglobulinas.
Viscosidad srica: conociendo la viscosidad srica normal es de 1.4 a 1.9. Es una tcnica simple y
valiosa para evaluar por ejemplo, pacientes con problemas en las concentraciones de protenas, en los
cuales la viscosidad srica variar. As, en Macroglobulinemia de Waldestrom, mieloma mltiple,
Crioglobulinemia, artritis reumatoidea, lupus eritematoso, etc.
Crioglobulinas: son protenas con propiedad de precipitar o formar gel en frio. Hay tres tipos de
crioglobulinas:
o IgM/IgG en leucemia linfoctica crnica.
o IgM/IgG en hepatitis C.
o IgM/IgG/IgA en lupus eritematoso.
Piroglobulinas: son protenas que forman precipitado al calentar a 56 oC. Generalmente en Mieloma
mltiple, pero tambin en otras como por ejemplo, en macroglobulinemia, lupus, carcinoma y algunas
veces sin enfermedad.
Deteccin de complejos inmunitarios: en enfermedades hematolgicas, reumticas y renales, se
encuentran complejos inmunitarios en los tejidos, que pueden ser medidos. Sin embargo en nuestro
pas, no son muy utilizadas.
Nefelometra: es un mtodo rpido y simple para cuantificar Ags en lquidos biolgicos (Utiliza
mediciones de luz y un aparato muy sofisticado). Es una prueba muy cara y la que en pases
desarrollados ha llegado a sustituir a ELISA y RIA.
4. ANLISIS DE FIJADOR DE LIGANDO

Es uno de los mtodos ms importantes en Guatemala. Se pueden cuantificar hormonas, frmacos,

marcadores tumorales, alergenos, etc.
Deteccin de Ags. Bacterianos, virales, fngicos y parasitarios en enfermedades infecciosas.
o RIA: Radioinmunovaloraci o Anlisis.
o Mtodos analticos:
Marcas radioisotpicas:
IRMA (Anlisis Inmunoradiomtrica)
Marcas enzimticas:
EMIT (Inmunovaloracin para mltiples enzimas)
ELISA (Valoracin ligada a enzimas)
Marcas fluoromtricas:
FPIA (Inmunovaloracin de polarizados fluorescentes).

5. TCNICAS INMUNOHISTOQUMICAS

Inmunofluorescencia:
Detecta Ags. En clulas o tejidos.
El Ac. Especfico se conjuga con compuestos fluorescentes.
Se aade al tejido y ocurre reaccin Ag-Ac.
Se lava para eliminar Ac. No fijado.
Se observa en un microscopio de fluorescencia.
Se detectar color brillante.

Hay inmunofluorescencia Directa, Indirecta, con Biotina o Avidita.

Se aplica por ejemplo para identificar Clulas T y B en sangre, identificar cromosomas, localizar
hormonas, etc.
Otras tcnicas Inmunohistoqumicas:
Anticuerpos unido a enzima
o
o

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Anticuerpos acoplados a ferritina

Autorradiografa (utiliza istopos radioactivos como I-125)
6. AGLUTINACIN
Son pruebas semicuantitativas.
Tipos de aglutinacin:
Directa: reaccin directa entre el Antgeno y el Anticuerpo.
Indirecta: se utilizan clulas pasivas recubiertas de Ag o Ac que reaccionar con el contrario del suero.
Inhibicin de la Aglutinacin.
7. ANLISIS DEL COMPLEMENTO

Anlisis hemoltico del complemento.

Medicin de componentes individuales del complemento.
Pruebas de fijacin del Complemento.

Enfermedades relacionadas:
Reduccin de la Actividad hemoltica del complemento:
o Lupus eritematoso
o Glomerulonefritis aguda
o Cirrosis heptica
o Deficiencia hereditaria del C2
o Linfoma
Concentraciones elevadas del complemento srico:
o Tiroiditis
o Diabetes
o Gota
o Fiebre tifoidea
Aplicacin de Fijacin del Complemento:
o Antgeno relacionado con Hepatitis B.
o Anticuerpos Antiplaquetas.
Anti DNA
Inmunoglobulinas
8. ANTICUERPOS MONOCLONALES

PRUEBAS DE AGLUTINACIN

Los resultados se leen mediante la observacin de aglutinacin.

Son Semicuantitativas.

Son conocidas como pruebas Serolgicas.

Son muy baratas y sencillas, y por lo tanto las ms utilizadas en nuestro medio.

Sin embargo, son pruebas muy sensibles pero poco especficas, por lo que pueden dar falsos positivos.

LAS PRUEBAS SEROLGICAS MS IMPORTANTES EN NUESTRO MEDIO SON:

1. Grupo Sanguneo y Factor Rh:
Prueba mediante la cual se puede saber el grupo sanguneo y el Factor Rh de cada persona.
2. Cardiolipina (VDRL):

Es la reaccin ms comnmente empleada hoy en da en forma rutinaria, para demostrar la

presencia de Treponema pallidum (bacteria), causante de la Sfilis.

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Se hace positiva despus de 10 das o ms, con una sensibilidad del 91%, pero solo el 40% de
especificidad.
Por ser de aglutinacin, en caso de duda Falso Positivo, se debe recurrir a la prueba llamada FTAABS (no serolgica), que es especfica un 99% para sfilis. Una reaccin positiva por sfilis,
permanece en dicho estado de por vida.
RPR es otra prueba serolgica para sfilis, pero en nuestro medio es ms utilizado el VDRL.
3. Antiestreptolisina O (ASO):

Prueba que detecta anticuerpos Antiestreptolisina O, producidos por el husped en presencia del
Streptococcus pyogenes (bacteria que produce amigdalitis). Esta bacteria produce estreptolisina O,
la que tiene la capacidad de lisar los eritrocitos.
Ttulos elevados de ASO, indican no solo la positividad para Fiebre reumtica, sino tambin le
sugiere que las secuelas por infeccin estreptoccica estn latentes y stas podran ser:
o Escarlatina
o Glomerulonefritis aguda
o Endocarditis bacteriana.

4. Factor Reumatoideo (FR):

El FR est presente en el suero de la mayora de los pacientes afectados por artritis reumatoide.
Ttulos bajos pueden relacionarse con muchas enfermedades, por ejemplo mononucleosis
infecciosa, lupus eritematoso, etc.
Por tal razn, debe tomarse en cuenta adems de los ttulos del FR, el cuadro clnico delpaciente.
Los valores elevados demuestran presencia de Artritis reumatoide.

5. Proteina C Reactiva (PCR):

Es una protena de fase aguda, que se utiliza de igual forma que la VES.
No aparece en individuos sanos.
Es altamente inespecfica, pero muy sensible.
Por tanto, puede ayudar a valorar la eficacia de un tratamiento.
Es de mucha utilidad en el infante que padece meningitis, pues si la prueba est positiva, indica que
el proceso es bacteriano, descartando as otras etiologas (presencia de un virus, por ejemplo)
Existe una PCR diferente, que mide carga viral en pacientes con Sida.

6. Prueba de Widal:

Prueba utilizada en el diagnstico de Fiebre tifoidea, en la cual se ponen de manifiesto el antgeno

flagelar H y el somtico O, producidos por Salmonella tiphy (bacteria).
La reaccin se hace positiva despus de 10 das de iniciada la enfermedad.
o Debido a que la reaccin de Widal no es 100% especfica para fiebre tifoidea, deben
considerarse otras pruebas de laboratorio para poder realizar el diagnstico. (Hematologa
completa y pruebas bacteriolgicas como cultivos de heces y sangre).

7. Reaccin de Weil Felix:

Prueba utilizada anteriormente para el diagnstico de la Fiebre tifoidea, sin embargo, ha dejado de
utilizarse para dicho diagnstico por los falsos positivos que se obtenan.

8. Prueba de Coombs:

Directa: Positiva en casos de recin nacido, que est sensibilizado y padezca de eritroblastosis, por
ser hijo de madre RH negativa.
Indirecta: Positiva en casos de incompatibilidad feto materna por factor RH. Se puede detectar
desde los primeros meses de embarazo.
Importantsimo: DEBEMOS TENER PRESENTE QUE:

Todas las pruebas inmunolgicas son altamente especficas, por lo que se deben de solicitar con el
nombre exacto de lo que se desea medir.
La IgE, nos indica procesos alrgicos.
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La IgG nos demuestra procesos anteriores (memoria)

La IgM nos demuestra procesos actuales.

Por lo cual, debemos considerarlo a la hora de solicitar una prueba inmunolgica en el Laboratorio.
Recopilacin realizada por:
Licda. Nora Morales de Morales
Qumica Biloga

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