Kt-foton mikroszkpia a

neurobiolgiban

Tth Tmea
Info-bionika MSc

Fluoreszcens s konfoklis
mikroszkpia

Henry Mhlpfordt

https://www.microscopyu.com/articles/confoc
al/confocalintrobasics.html

Mirt nem konfoklis mikroszkpot

hasznlunk l llathoz?

Fritjof Helmchen & Winfried Denk

Nature Methods 2, 932 - 940 (2005)

Mirt nem konfoklis mikroszkpot

hasznlunk l llathoz?

Stem cell-based photodynamic therapy

Tej B. Shrestha et al.
Photochem. Photobiol. Sci., 2012,11, 1251-1258

Szrs
Rayleigh-fle szrs:
A szrt fny intenzitsnak szgeloszlst a
kvetkez sszefggs rja le:

I: fnyintenzits, : szgeltrs, : hullmhossz

Ha
a
kpalkotst
a
kzeli-infravrs
fnytartomnyban vgezzk, minimalizlhatjuk az
abszorpci s a szrs okozta kellemetlensgeket

Egy-fotonos s kt-fotonos gerjeszts

Mindkt fotonnak egyidben

kell rkeznie (<1 fs)
http://mcb.berkeley.edu/labs2/robey/content/2-photon-imaging

Kt-fotonos gerjeszts
A folyamat ltrejtthez szksges, hogy a kt
foton szinte egyidben rkezzen
=> gerjeszts csak a fkuszpont kzelben
trtnik (ahova lzerfny a legkoncentrltabban rkezik)

Egy- s kt-foton mikroszkpia

http://parkerlab.bio.uci.edu/microscopy_construction/build_your_own_twophoton_
microscope.htm

Lzer
Mindez femtoszekundum pulzushosszsg, n.
"mode-lock" lzer hasznlatval lehetsges,
amely a pulzusok ideje alatt a ktfotongerjesztshez szksges igen nagy fotonfluxust
kpes ellltani, ugyanakkor a kt pulzus kztt
eltelt nanoszekundumos id alatt "alszik",
amivel az tlagos energiakzls rendkvl
alacsony szinten tarthat (Denk s Svoboda,
1997).

Egy- s kt-foton mikroszkpia

http://parkerlab.bio.uci.edu/microscopy_construction/build_your_own_twophoton_
microscope.htm

Kt-foton mikroszkpia
Kt-foton
mikroszkpinl
Nincs szksg
konfoklis rsre
Mivel minden emittlt
fny a fkuszpontbl
rkezik, nem kell rla
kpet alkotni, csak
intenzitst rgzteni
Egsz minta psztzsa
https://www.microscopyu.com/articles/fluorescence/
multiphoton/multiphotonintro.html

Kt-foton mikroszkpia elnyei

Penetrci
Foklis gerjeszts
A fotonszrds kihasznlsa
Hangolhatsg
Idbeni felbonts

Pldk
Egr neocortex
Transgenic egr
Clomeleont expresszl
Clomeleon: fzis protein,
ami kt fluorofrt tartalmaz
(YFP s CFP)

Fritjof Helmchen & Winfried Denk

Nature Methods 2, 932 - 940 (2005)

Pldk

Aurlie Pala and Carl

C.H. Petersen
Neuron 85, 6875,
January 7, 2015

GABAerg neuronok
PV: paralbumint expresszl
Sst: szomatosztatint expresszl
Genetikai mdosts: tdTomato protein-expresszi (piros)
ChR2-t expresszl neuron (zld)

Pldk
Piramissejtek
EGFP fehrjt (Enhanced
Green Fluorescent Protein)
tartalmaz piramissejtek egy
patkny szomatoszenzoros
krgben l, altatott llatban
Az fluoreszkl fehrje gnjt
vrusok segtsgvel jutattk
az llat agyba.
Balazs Lendvai et al.
Learn. Mem. 2000 7: 433-441

Felhasznlt irodalom
https://www.microscopyu.com/articles/confocal/confocalintr
obasics.html
Deep tissue two-photon microscopy : Fritjof Helmchen &
Winfried Denk, Nature Methods 2, 932 - 940 (2005)
http://www.termeszetvilaga.hu/szamok/kulonszamok/k0602/l
endvai.html
http://mcb.berkeley.edu/labs2/robey/content/2-photonimaging

Ksznm a figyelmet!