Bioseparaciones

El libro de Bioseparaciones est diseado para ser usado por estudiantes de licenciatura,
de posgrado y profesionales de la industria, de los diversos campos relacionados con los

procesos biotecnolgicos.
El texto se divide en seis partes. La primera parte constituye una introduccin a los
procesos de bioseparacin. En las siguientes cuatro partes: Recuperacin del Producto,
Concentracin, Puricacin y Acabado; se abordan las principales operaciones de bioseparacin siguiendo una secuencia tpica de un bioproceso, tratando con ello de conservar un
enfoque unitario ms que describir procesos particulares. La ltima parte se relaciona con el
Diseo del Bioproceso e integra los aspectos que se revisan en las partes previas.
En cada captulo, dedicado a una operacin determinada, se presentan los fundamentos
de dicha operacin, los equipos comnmente empleados para realizarla y los principales
mtodos de diseo.
Aspectos relevantes
Se presenta un tratamiento detallado y actualizado de las principales operaciones
de bioseparacin utilizadas en los bioprocesos.
Se incluyen varios ejemplos y problemas propuestos en cada captulo.
Un buen nmero de ejemplos y problemas propuestos se resuelven con MATLAB.
Cada captulo contiene bibliografa de consulta.
Se incluye un captulo nal integrador sobre el anlisis y evaluacin de esquemas de
bioseparacin utilizando paquetes de computacin.
Acerca de los autores
Armando Tejeda Mansir. Es Profesor-Investigador de la Universidad de Sonora, dedicado
a la enseanza y estudio de las Bioseparaciones. Su investigacin est orientada a los
aspectos fundamentales y de aplicacin de estas operaciones.
Rosa Mara Montesinos Cisneros. Es Profesora-Investigadora de la Universidad de
Sonora. Realiza trabajos sobre operaciones de purificacin de biomolculas y solucin
de modelos dinmicos del comportamiento de columnas cromatogrcas.
Roberto Guzmn Zamudio. Es Profesor del Departamento de Ingeniera Qumica y
Ambiental de la Universidad de Arizona. Su investigacin se centra en la tecnologa de
interacciones de anidad con nfasis en la separacin de iones metlicos y protenas.
UIVERSIDAD DE SOORA
Bioseparaciones
Segunda Edicin
Armando Tejeda Mansir
Departamento de Investigaciones Cientficas y Tecnolgicas
Universidad de Sonora
Hermosillo, Sonora Mxico
Rosa Mara Montesinos Cisneros

Departamento de Matematicas
Universidad de Sonora
Hermosillo, Sonora Mxico
Roberto Guzmn Zamudio

Department of Chemical and Environmental Engineering
University of Arizona
Tucson, Arizona USA
ZZZPHGLOLEURVFRP
Datos de catalogacin bibliogrfica
Tejeda Mansir, Armando; Montesinos Cisneros,

Rosa Mara; Guzmn Zamudio, Roberto.
Bioseparaciones. Segunda edicin.

PEARSON EDUCACIN, Mxico, 2011
ISBN: 978-607-32-0945-8
Formato: 18.5 x 23.5 cm
Pginas: 704
Todos los derechos reservados

Editores:
Editor de desarrollo:
Carlos Mario Ramrez Torres

carlosmario.ramirez@pearsoned.com
Marianna Lyubarets (Universidad de Sonora)
Claudia Silva Morales
SEGUNDA EDICIN, 2011

D.R. 2011 por Universidad de Sonora
Av. Rosales y Blvd. Encinas S/N
Col. Centro
83000, Hermosillo, Sonora
www.uson.mx
D.R. 2011 por Pearson Educacin de Mxico, S.A. de C.V.
Atlacomulco 500- 5o Piso
Industrial Atoto
53519, Naucalpan de Jurez, Estado de Mxico
Cmara Nacional de la Industria Editorial Mexicana. Reg. Nm. 1031
Reservados todos los derechos. Ni la totalidad ni parte de esta publicacin pueden reproducirse, registrarse o transmitirse, por un
sistema de recuperacin de informacin, en ninguna forma ni por ningn medio, sea electrnico, mecnico, fotoqumico, magntico o electroptico, por fotocopia, grabacin o cualquier otro, sin permiso previo por escrito de los coeditores.
El prstamo, alquiler o cualquier otra forma de cesin de uso de este ejemplar requerir tambin la autorizacin de los coeditores
o de sus representantes.
Este libro se public con el apoyo del Programa de Mejoramiento del Profesorado PROMEP/103.5/11/1535
ISBN: 978-607-32-0945-8
ISBN e-book: 978-607-32-0946-5
ISBN e-chapter: 978-607-32-0947-2
ISBN: 978-607-8158-28-7 (UNISON)
Impreso en Mxico. Printed in Mexico.
1 2 3 4 5 6 7 8 9 0 14 13 12 11
ISBN: 978-607-32-0945-8
Contenido
Prefacio
XI
El Proceso de Bioseparacin
1 Una Perspectiva de las Bioseparaciones

1.1 Introduccin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
1.1.1 Productos Biotecnolgicos . . . . . . . . . . . . . . . . .
1.1.2 Bioprocesos y Bioseparaciones . . . . . . . . . . . . . . .
1.2 Tipos de Bioprocesos y Bioproductos . . . . . . . . . . . . . . .
1.2.1 Propiedades de los Bioproductos . . . . . . . . . . . . .
1.3 Operaciones de Bioseparacin . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
1.3.1 Esquema RIPP . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
1.3.2 Bioproceso Tpico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
1.3.3 Comportamiento del Bioproceso y Calidad del Producto
1.4 Importancia Econmica de las Bioseparaciones . . . . . . . . .
1.5 Comercializacin del Bioproducto . . . . . . . . . . . . . . . . .
1.5.1 Desarrollo del Bioproceso . . . . . . . . . . . . . . . . .
1.5.2 Diseo Interior . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
1.6 Tendencias en Bioseparaciones . . . . . . . . . . . . . . . . . .
1.7 Sumario . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
1.8 Problemas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
1.9 Bibliografa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
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2 Sntesis del Bioproceso

2.1 Introduccin . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2.2 Fundamentos . . . . . . . . . . . . . . . . .
2.2.1 Enfoque de Diseo . . . . . . . . . .
2.2.2 Consideraciones Tcnicas de Diseo
2.3 Equipo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2.3.1 Recuperacin . . . . . . . . . . . . .
2.3.2 Concentracin . . . . . . . . . . . .
2.3.3 Purificacin . . . . . . . . . . . . . .
2.3.4 Acabado . . . . . . . . . . . . . . . .
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CONTENIDO

2.4. Diseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2.4.1. Sntesis del Bioproceso . . . . . . . .
2.4.2. Anlisis y Evaluacin del Bioproceso
2.5. Sumario . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2.6. Problemas . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2.7. Bibliografa . . . . . . . . . . . . . . . . . .
II
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Recuperacin del Producto
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3. Filtracin
3.1. Introduccin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
3.2. Fundamentos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
3.2.1. La Filtracin como Parte de los Sistemas de
3.2.2. Pretratamiento de Caldos para BSL . . . .
3.2.3. Teora de la Filtracin Convencional . . . .
3.2.4. Teora de Filtracin de Lecho Profundo . .
3.3. Equipo de Filtracin . . . . . . . . . . . . . . . . .
3.3.1. Filtros por Lotes a Presin . . . . . . . . .
3.3.2. Filtros Continuos al Vaco . . . . . . . . . .
3.3.3. Filtros de Lecho Profundo . . . . . . . . . .
3.4. Diseo de Equipo de Filtracin . . . . . . . . . . .
3.4.1. Filtracin por Lotes . . . . . . . . . . . . .
3.4.2. Filtracin Continua . . . . . . . . . . . . .
3.4.3. Filtracin de Lecho Profundo . . . . . . . .
3.4.4. Sistemas Expertos en Filtracin . . . . . . .
3.5. Sumario . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
3.6. Problemas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
3.7. Bibliografa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
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BSL
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4. Centrifugacin
4.1. Introduccin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
4.2. Fundamentos de la Centrifugacin . . . . . . . .
4.2.1. Ley de Stokes . . . . . . . . . . . . . . . .
4.2.2. Sedimentacin por Accin de la Gravedad
4.2.3. Sedimentacin Centrfuga . . . . . . . . .
4.2.4. Factor G . . . . . . . . . . . . . . . . . .
4.3. Equipo de Centrifugacin . . . . . . . . . . . . .
4.3.1. Equipos de Sedimentacin Centrfuga . .
4.3.2. Equipos de Filtracin Centrfuga . . . . .
4.4. Diseo de Equipo de Centrifugacin . . . . . . .
4.4.1. Diseo de Centrfugas Tubulares . . . . .
4.4.2. Centrfuga de Discos . . . . . . . . . . . .
4.4.3. Escalamiento . . . . . . . . . . . . . . . .
4.4.4. Filtracin Centrfuga . . . . . . . . . . . .
4.5. Sumario . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
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CONTENIDO
4.6. Problemas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 149

4.7. Bibliografa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 154
5. Rompimiento de Clulas
5.1. Introduccin . . . . . . . . . . . . . . . . . .
5.2. Fundamentos . . . . . . . . . . . . . . . . .
5.2.1. Estructura de la Pared Celular . . .
5.2.2. Sistemas Celulares de Secrecin . . .
5.2.3. Mtodos de Rompimiento Celular . .
5.2.4. Mtodos de Permeabilizacin . . . .
5.3. Equipo de Rompimiento Celular . . . . . .
5.3.1. Molino de Perlas de Alta Velocidad .
5.3.2. Homogeneizador de Alta Presin . .
5.3.3. Microfluidizador . . . . . . . . . . .
5.4. Diseo de Equipo de Rompimiento . . . . .
5.4.1. Molino de Perlas de Alta Velocidad .
5.4.2. Homogeneizador de Alta Presin . .
5.5. Sumario . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
5.6. Problemas . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
5.7. Bibliografa . . . . . . . . . . . . . . . . . .
III
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Concentracin del Producto
6. Extraccin
6.1. Introduccin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
6.2. Fundamentos de la Extraccin . . . . . . . . . . . . . .
6.2.1. Tipos de Sistemas de Extraccin Lquido-Lquido
6.2.2. Qumica de la Extraccin Lquido-Lquido . . . .
6.2.3. Seleccin del Solvente . . . . . . . . . . . . . . .
6.2.4. Extraccin en Dos Fases Acuosas Inmiscibles . .
6.3. Equipo de Extraccin . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
6.3.1. Equipo de Extraccin por Lotes . . . . . . . . . .
6.3.2. Equipo de Extraccin Continua . . . . . . . . . .
6.4. Diseo de Equipo de Extraccin . . . . . . . . . . . . .
6.4.1. Extraccin por Lotes . . . . . . . . . . . . . . . .
6.4.2. Extraccin Continua . . . . . . . . . . . . . . . .
6.4.3. Extraccin Diferencial . . . . . . . . . . . . . . .
6.4.4. Extraccin por Etapas no en Equilibrio . . . . .
6.4.5. Extraccin Fraccionaria . . . . . . . . . . . . . .
6.5. Sumario . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
6.6. Problemas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
6.7. Bibliografa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
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157
158
158
160
160
164
167
168
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180
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210
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230
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233
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266
267
272
CONTENIDO
7. Adsorcin
7.1. Introduccin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
7.2. Fundamentos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
7.2.1. Tipos de Adsorcin: Interaccin Soluto-Adsorbente
7.2.2. Tipos de Adsorbentes . . . . . . . . . . . . . . . .
7.2.3. Relaciones de Equilibrio . . . . . . . . . . . . . . .
7.2.4. Cintica de la Adsorcin . . . . . . . . . . . . . . .
7.3. Equipos de Adsorcin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
7.4. Diseo de Adsorbedores . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
7.4.1. Adsorbedores Tipo Tanque Agitado por Lotes . . .
7.4.2. Adsorbedores Tipo Tanque Agitado Continuo . . .
7.4.3. Adsorcin en Lecho Fijo . . . . . . . . . . . . . . .
7.5. Sumario . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
7.6. Problemas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
7.7. Bibliografa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
IV
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Purificacin del Producto
8. Cromatografa por Elucin

8.1. Introduccin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
8.2. Fundamentos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
8.2.1. Tipos de Cromatografa Lquida: Principio de Separacin
8.2.2. Matrices . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
8.2.3. Tipo de Cromatografa por Presin de Operacin . . . . .
8.2.4. Relaciones de Equilibrio . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
8.2.5. Cintica de la Adsorcin . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
8.3. Equipos Cromatogrficos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
8.4. Diseo de Columnas Cromatogrficas . . . . . . . . . . . . . . . .
8.4.1. Teora de Cromatografa Lineal . . . . . . . . . . . . . . .
8.4.2. Modelos lineales . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
8.4.3. Evaluacin del Comportamiento de las Columnas: Resolucin, Pureza y Rendimiento . . . . . . . . . . . . . . . . .
8.4.4. Escalamiento y Optimizacin . . . . . . . . . . . . . . . .
8.5. Sumario . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
8.6. Problemas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
8.7. Bibliografa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
275
275
276
277
277
281
286
294
295
295
310
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350
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365
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9. Precipitacin
421
9.1. Introduccin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 421
9.2. Fundamentos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 422
9.2.1. Precipitacin por Disminucin de la Solubilidad . . . . . . 423
9.2.2. Precipitacin de Protenas por Desnaturalizacin Selectiva 437
9.2.3. Precipitacin por Afinidad . . . . . . . . . . . . . . . . . . 441
9.3. Equipo de Precipitacin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 443
9.4. Diseo de Precipitadores . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 444
CONTENIDO
9.4.1. Cintica de la Precipitacin

9.4.2. Mtodos de Diseo . . . . .
9.5. Sumario . . . . . . . . . . . . . . .
9.6. Problemas . . . . . . . . . . . . . .
9.7. Bibliografa . . . . . . . . . . . . .
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10.Ultrafiltracin
10.1. Introduccin . . . . . . . . . . . . .
10.2. Fundamentos . . . . . . . . . . . .
10.2.1. Procesos con Membranas .
10.2.2. Flujo Cruzado o Tangencial
10.2.3. Teora de la Ultrafiltracin
10.3. Equipos de Ultrafiltracin . . . . .
10.3.1. Membranas . . . . . . . . .
10.3.2. Mdulos . . . . . . . . . . .
10.4. Diseo de Equipos de UF . . . . .
10.4.1. Objetivo de la UF . . . . .
10.4.2. Mecnica de Fluidos . . . .
10.4.3. Mtodos de Operacin . . .
10.4.4. Diseo de la Unidad de UF
10.5. Sumario . . . . . . . . . . . . . . .
10.6. Problemas . . . . . . . . . . . . . .
10.7. Bibliografa . . . . . . . . . . . . .
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11.Electroforesis
11.1. Introduccin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
11.2. Fundamentos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
11.2.1. Carga y Punto Isoelctrico de las Protenas
11.2.2. Teora Electrocintica . . . . . . . . . . . .
11.2.3. Fenmenos de Dispersin . . . . . . . . . .
11.2.4. Medios y Modos de la Electroforesis . . . .
11.3. Equipos de Electroforesis . . . . . . . . . . . . . .
11.3.1. Equipos de Flujo Libre . . . . . . . . . . . .
11.3.2. Equipos de Flujo Libre con Recirculacin .
11.3.3. Equipos Electrocromatogrficos . . . . . . .
11.4. Diseo de Equipo de Electroforesis . . . . . . . . .
11.4.1. Teora de Platos . . . . . . . . . . . . . . .
11.4.2. Teora Cintica . . . . . . . . . . . . . . . .
11.5. Sumario . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
11.6. Problemas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
11.7. Bibliografa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
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CONTENIDO
Operaciones de Acabado
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12.Cristalizacin
12.1. Introduccin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
12.2. Fundamentos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
12.2.1. Tipos de Cristales . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
12.2.2. Pureza de los Cristales . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
12.2.3. Equilibrio: Solubilidad y Sobresaturacin . . . . . . . . .
12.2.4. Seleccin del Modo de Operacin . . . . . . . . . . . . . .
12.2.5. Cintica de la Cristalizacin . . . . . . . . . . . . . . . . .
12.2.6. Distribucin de Tamao en Poblaciones de Cristales . . .
12.3. Equipos de Cristalizacin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
12.3.1. Cristalizadores por Lotes . . . . . . . . . . . . . . . . . .
12.3.2. Cristalizadores Continuos . . . . . . . . . . . . . . . . . .
12.4. Diseo de Cristalizadores . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
12.4.1. Cristalizadores por Lotes . . . . . . . . . . . . . . . . . .
12.4.2. Cristalizador Continuo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
12.4.3. Cristalizadores Continuos con Remocin Selectiva . . . .
12.4.4. Balances de Masa y Energa en Cristalizadores Continuos
12.5. Sumario . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
12.6. Problemas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
12.7. Bibliografa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
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13.Secado
13.1. Introduccin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
13.2. Fundamentos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
13.2.1. Equilibrio y Propiedades Trmicas . . . . . . . . . . .
13.2.2. Mtodos de Secado . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
13.2.3. Velocidad de Secado: transferencia de calor y masa . .
13.2.4. Efectos Colaterales del Secado . . . . . . . . . . . . .
13.3. Equipos de Secado . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
13.3.1. Secadores Adiabticos . . . . . . . . . . . . . . . . . .
13.3.2. Secadores no Adiabticos . . . . . . . . . . . . . . . .
13.4. Diseo de Secadores . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
13.4.1. Diseo de Secadores Adiabticos: Calor convectivo . .
13.4.2. Diseo de Secadores no Adiabticos: Calor conductivo
13.5. Sumario . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
13.6. Problemas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
13.7. Bibliografa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
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VI
Diseo del Bioproceso
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14.Anlisis del Bioproceso

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14.1. Introduccin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 663
14.2. Fundamentos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 663
CONTENIDO
14.2.1. Escala y Modo de Operacin . . . . . .
14.2.2. Modelo del Bioproceso . . . . . . . . . .
14.2.3. Balances de Masa y Energa . . . . . . .
14.2.4. Evaluacin Econmica . . . . . . . . . .
14.3. Caso de Diseo . . . . . . . . . . . . . . . . . .
14.3.1. Plsmidos . . . . . . . . . . . . . . . . .
14.3.2. Diagrama de Bloques del Bioproceso . .
14.4. Desarrollo del Diseo . . . . . . . . . . . . . . .
14.4.1. Descripcin general del bioproceso . . .
14.4.2. Bases de Diseo . . . . . . . . . . . . .
14.4.3. Preparacin del Diagrama de Flujo . . .
14.4.4. Incorporacin de los Procesos Unitarios
14.4.5. Especificaciones de Equipos y Corrientes
14.4.6. Bases del Anlisis Econmico . . . . . .
14.4.7. Simulacin del Bioproceso . . . . . . . .
14.4.8. Anlisis de Resultados . . . . . . . . . .
14.5. Sumario . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
14.6. Problemas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
14.7. Bibliografa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
ndice alfabtico

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Prefacio
Actualmente, es impresionante el impacto que tiene la biotecnologa en diversas reas, particularmente en la diversificacin y optimizacin de los bioprocesos
para la produccin de alimentos y medicamentos, lo cual permite incrementar
nuestra capacidad para cubrir dos de las necesidades humanas bsicas.
Una parte importante de los bioprocesos, tanto desde el punto de vista
econmico como del tcnico, la constituye las operaciones de bioseparacin necesarias para procesar los caldos biolgicos y obtener los productos de acuerdo con
las especificaciones requeridas.
La motivacin para realizar este trabajo se deriva de nuestro convencimiento
de la importancia de la enseanza e investigacin de los principios bsicos y
las aplicaciones de las operaciones de bioseparacin, para poder complementar
los esfuerzos que se realizan en otros campos de estudio de los bioprocesos.
En este sentido, es nuestra intencin aportar un documento que contribuya a
sistematizar y ampliar la enseanza de las bioseparaciones.
Este libro est escrito para servir de introduccin al estudio de las bioseparaciones, puede ser utilizado por alumnos de los ltimos semestres de carreras
de biotecnologa, qumica de alimentos, ingeniera bioqumica, ingeniera sanitaria, ingeniera en alimentos, ingeniera qumica o bien en los primeros cursos
de programas de posgrado en el rea de biotecnologa o reas afines.
Este trabajo se divide en seis partes y 14 captulos. La primera parte es una
introduccin a los procesos de bioseparacin y a los aspectos principales de la
seleccin de las operaciones que los integran. En las siguientes cuatro partes:
Recuperacin del producto, Concentracin, Purificacin y Acabado se abordan
las principales operaciones de bioseparacin siguiendo una secuencia tpica de un
bioproceso, tratando con ello de conservar un enfoque unitario ms que describir
procesos particulares. La ltima parte del libro se relaciona con el Diseo del
Bioproceso e integra los aspectos que se revisan en las partes previas.
En cada captulo dedicado a una operacin determinada, se presentan los
fundamentos de la operacin, los equipos comnmente empleados para realizarla
y los principales mtodos de diseo. En cada seccin se incorporan ejemplos
ilustrativos que se complementan con problemas de final de captulo.
En esta segunda edicin que aparece 15 aos despus de la primera, hemos
realizado un esfuerzo por mejorar y actualizar el contenido del libro. Tambin
hemos renovado la presentacin de las ecuaciones y figuras del texto.
PREFACIO
Un aspecto distintivo de esta nueva edicin es el uso de ms apoyo de programas de computacin. Se han incluido en los captulos del libro varios ejemplos
resueltos y problemas propuestos utilizando Matlab. As mismo, se introduce el
uso de paquetes computacionales para el diseo de bioprocesos.
Varios factores se combinaron para la publicacin del presente trabajo. Nuestros estudiantes han contribuido a la discusin del contenido del material de este
libro y estimularon su publicacin. Sin duda un apoyo determinante para lograr este objetivo fue el que se nos brind por parte de la Universidad de Sonora
y de la Universidad de Arizona, a travs de nuestros respectivos departamentos. Nuestro intercambio acadmico con el Departamento de Biotecnologa y
Bioingeniera del CINVESTAV-IPN, el Departamento de Biotecnologa de la
UAM-Iztapalapa y el Instituto de Biotecnologa de la UNAM, motivaron y contribuyeron significativamente a la realizacin del trabajo. Deseamos expresar un
sincero agradecimiento por todos estos apoyos recibidos.
Dr. Armando Tejeda Mansir
Dra. Rosa Ma. Montesinos Cisneros
Dr. Roberto Guzmn Zamudio
Parte I
El Proceso de Bioseparacin
3
Esta primera parte del libro destaca la importancia de las bioseparaciones en
los procesos para la obtencin de productos biotecnolgicos o bioprocesos. En el
Captulo 1 se presenta una perspectiva de las operaciones de bioseparacin y sus
principales caractersticas. El Captulo 2 trata sobre los factores y metodologas
que deben tomarse en cuenta para la correcta seleccin de un bioproceso.
Captulo 1
Una Perspectiva de las

Bioseparaciones
1.1.
Introduccin
El cultivo de clulas con el objeto de obtener productos tiles, es una actividad que ha realizado el hombre prcticamente durante toda su historia.
Recientemente este tipo de bioprocesos se enmarcan dentro de lo que ahora se
conoce como Biotecnologa. sta ha evolucionado a partir de los conocimientos
generados en diversas disciplinas, tanto del rea de las ciencias bsicas como de
las ingenieras. Hoy, la biotecnologa puede ser definida como la aplicacin de
la ciencia y la tecnologa en organismos vivos, as como a sus partes, productos
y modelos, para modificar materiales vivos o no vivos para la produccin de
conocimiento, bienes y servicios (OECD, 2005).
1.1.1.
Productos Biotecnolgicos
El mercado actual de productos biotecnolgicos es del orden de miles de

millones de dlares (Demain, 2007). Los bioprocesos correspondientes presentan
una enorme versatilidad que involucra desarrollos basados en microorganismos,
enzimas, clulas de mamfero, plantas y animales. Comprenden la produccin
de metabolitos primarios como aminocidos, nucletidos, vitaminas, solventes y
cidos orgnicos; metabolitos secundarios como antibiticos y glicopptidos; bioprocesos de biotransformacin para produccin de agentes hipocolesterolmicos,
inmunosupresores, compuestos anticancergenos y biopesticidas; y biofarmaceuticos como protenas recombinantes (hormonas, factores sanguneos, agentes
trombolticos, factores hematopoyticos), vacunas, interferones, interleucinas y
anticuerpos monoclonales.
CAPTULO 1. UNA PERSPECTIVA DE LAS BIOSEPARACIONES
1.1.2.
Bioprocesos y Bioseparaciones
Las operaciones que comprenden los bioprocesos reactivos a escala comercial (Fig. 1.1), se han dividido tradicionalmente en operaciones previas (procesos upstream) y operaciones posteriores o bioseparaciones (procesos downstream).
Figura 1.1: Operaciones de un bioproceso. a) Operaciones previas y b)

Operaciones posteriores o bioseparaciones. Adaptada de: Bujurstrom, 1985.
Reproducida
con
el
permiso
de
c 1985. Todos los derechos reserM cGraw-Hill. Copyright
vados.
Las operaciones previas comprenden la preparacin del medio, la esterilizacin y el funcionamiento del biorreactor (Cooney, 1990). Los procesos de
bioseparacin involucran la recuperacin, concentracin, purificacin y acabado
de los productos provenientes del biorreactor. Comprenden todos los tratamientos que requiere el caldo de cultivo para la obtencin del producto en las condiciones de pureza, y actividad deseadas. Cuando el producto de inters es in-
1.2. TIPOS DE BIOPROCESOS Y BIOPRODUCTOS
tracelular es necesario romper las clulas y separar los restos celulares. En el

caso de que el producto sea extracelular (o cuando las clulas son el producto),
se requiere separar las clulas del caldo. Una vez obtenido el caldo de inters
ste se somete a las operaciones de recuperacin, concentracin, purificacin y
acabado necesarias para obtener el producto en las condiciones necesarias.
Las bioseparaciones tambin son muy empleadas en los bioprocesos extractivos, donde el producto de inters se obtiene directamente de sus fuentes naturales como la obtencin de protenas del plasma sanguneo, enzimas de tejidos animales y taninos de plantas. Otro campo de aplicacin de las bioseparaciones es en los bioprocesos enzimticos para el procesamiento de los productos
obtenidos, como en la obtencin de jarabes fructosados. La aplicacin de las
bioseparaciones es muy amplia, pero los principios en que estn basadas son
utilizados de manera similar en los diferentes bioprocesos.
1.2.
Tipos de Bioprocesos y Bioproductos
Actualmente se pueden distinguir de manera general tres generaciones de

bioprocesos, en relacin al tipo de bioseparaciones que stos involucran (Tabla
1.1). La primera generacin comprende el conjunto de bioprocesos desarrollados
mediante cultivos de organismos no recombinantes, cuyos productos se obtienen
en forma activa tanto si son intracelulares o si son secretados al medio de cultivo.
En esta generacin se encuentran los bioprocesos de la biotecnologa tradicional
como los de la produccin de etanol, enzimas, cido ctrico y antibiticos. Los
productos de estos bioprocesos se presentan en concentraciones altas al inicio de
la etapa de separacin y no requieren de una extremada pureza para su venta.
Los descubrimientos asociados con la biologa molecular y la ingeniera gentica logrados en las ltimas dcadas, han ampliado las capacidades biotecnolgicas
del hombre. En esta etapa podemos situar una segunda generacin de productos
de la biotecnologa como la insulina humana, la hormona de crecimiento y el
alfa interfern, entre otros. Estos son producidos intracelularmente utilizando
clulas recombinantes de Escherichia coli. Se caracterizan por encontrarse en
bajas concentraciones dentro de la clula, son de elevado peso molecular, tienen
propiedades similares a los contaminantes y requieren un alto grado de pureza.
Adems, generalmente al producirse en la clula no poseen actividad biolgica
por tratarse de cadenas peptdicas sin la conformacin o estructura apropiada; lo que se traduce en la necesidad de aplicarles tratamientos fisicoqumicos
adicionales para lograr obtener el producto en su estado activo. Los desarrollos
recientes en investigaciones teraputicas tales como el uso de DNA plasmdico
(pDNA) en terapia gnica y vacunas han fomentado el desarrollo de bioprocesos
novedosos para la produccin de pDNA a gran escala utilizando tambin E. coli
como clula hospedera (Tejeda y Montesinos, 2008).
La tercera generacin de la biotecnologa, la podemos caracterizar por bioprocesos mediante los cuales se obtienen productos extracelulares en clulas
recombinantes, la mayora de las cuales son eucariticas. En estos sistemas
se ha observado la capacidad no slo de producir exgenamente el producto

Tabla 1.1: Caractersticas de los Bioprocesos y los Bioproductos.
Caracterstica
Perodo
Tipo de clulas
Fortaleza de
las clulas
Crecimiento
M antenimiento
Conocimiento de propiedades bsicas
Conocimiento
Tecnolgico
Tipo
Localizacin
Tam ao
Actividad
al secretarse
Pureza deseada
Similitud con
contaminantes
Valor
Primera
Generacin
Segunda
Tercera
- 1975
No recombinantes
Alta
1975 Recombinantes
Alta
1985 Recombinantes
Ba ja
Rpido
Ba jo
Alto
Rpido
Ba jo
Alto
Lento
Alto
M edio
Alto
Alto
M edio
Productos
Antibiticos
Insulina hum ana
Aminocidos
HC
Extracelular
Intracelular
e intracelular
Interm edio
M acrom olculas
S
No
Factor VIII, tPA

EPO, mAb
Extracelular
M acromolculas
S
Alta
Ba ja
M uy alta
Alta
M uy alta
Alta
Ba jo
Alto
Alto
deseado, sino que ste se obtiene en forma activa. El factor VIII de la sangre, la eritropoyetina (EPO) estimuladora de la formacin de eritrocitos, el
agente tromboltico activador del plasmingeno tisular (t-PA), los anticuerpos
monoclonales (mAb) para el tratamiento del cncer y las citoquinas como los
interferones y con actividad antiviral, son productos caractersticos de esta
generacin. Debido a su empleo con fines teraputicos, estos productos deben
ser obtenidos con un alto grado de pureza (Datar et al., 1993).
Actualmente, de 151 productos recombinantes aprobados por la FDA y la
EMEA, 59 (39 %) son obtenidos en clulas de mamfero, 45 (29.8 %) en E. coli,
28 (18.5 %) en S. cerevisiae, 17 (11.2 %) en clulas de hibridomas, 1 (0.67 %) en
leche de cabra y 1 (0.67 %) en clulas de insecto (Ferrer-Miralles et al., 2009).
Varios bioprocesos tanto de la segunda como de la tercera generacin pueden
considerarse bien establecidos y muy eficientes. Otros se encuentran en una etapa
de desarrollo que requiere ampliar el conocimiento de los aspectos fundamentales del comportamiento de las operaciones principales, para contribuir a su
optimizacin y facilitar su validacin (Asenjo y Andrews, 2008).
1.2.1.
Propiedades de los Bioproductos
El diseo del esquema de bioseparacin de un producto dado debe tomar en

cuenta la naturaleza del material inicial, la localizacin del producto (si el producto es intracelular o extracelular), el volumen a procesar y la concentracin
inicial del producto. El diseo tambin debe tomar en cuenta la sensibilidad del
1.3. OPERACIONES DE BIOSEPARACIN
producto a factores como la temperatura, pH, fuerza inica, enzimas degradativas o sustancias qumicas. La forma fsica, la pureza y los requerimientos de
calidad del producto tambin son factores que deben ser considerados en el
diseo.
El conocimiento tecnolgico de los procesos biotecnolgicos de segunda y tercera generacin es limitado. Actualmente es necesario profundizar en los mtodos de escalamiento de algunas operaciones, ya que generalmente se han adaptado a escala comercial a partir del laboratorio. En el proceso de escalamiento
es necesario considerar los volmenes y normas del mercado para el producto
(Null, 1987).
La biotecnologa ha adoptado con xito operaciones de la ingeniera qumica para la purificacin de productos biotecnolgicos tradicionales. Sin embargo,
existen limitantes para lograr sto cuando se trata de obtener productos caractersticos de la segunda y tercera generacin. Existe una necesidad real de desarrollar procesos de bioseparacin apropiados, con la participacin de ingenieros,
bioqumicos y bilogos con el propsito de lograr, tanto la pureza deseada del
producto, como la eficiencia y rentabilidad del mismo (Wang, 1988).
1.3.
Operaciones de Bioseparacin
Las operaciones de bioseparacin se basan en las diferencias que existen

entre las propiedades fisicoqumicas de los componentes presentes en el caldo
de cultivo. El objetivo del diseo de un proceso de bioseparacin es explotar
esta diferencia en las propiedades en la forma ms econmica. Generalmente
existe una propiedad especfica que es la base primaria para la separacin. Los
mtodos de bioseparacin usados con ms frecuencia, as como la propiedad en
la que se basan, se muestran en la Tabla 1.2.
1.3.1.
Esquema RIPP
Las bioseparaciones generalmente comprenden varias operaciones que se

agrupan de acuerdo con un esquema tpico en operaciones de: recuperacin
(remocin de slidos y ruptura celular), concentracin, purificacin y acabado
(RIPP de sus siglas en ingls). Esta estrategia involucra el uso de operaciones
de baja resolucin en la recuperacin y concentracin (e.g. filtracin, extraccin) y operaciones de alta resolucin para la purificacin y el acabado (e.g.
cromatografa, cristalizacin, electroforesis).
1.3.2.
Bioproceso Tpico
Los bioprocesos para la produccin de insulina humana estn bien documentados en la literatura y permiten presentar la gran diversidad de operaciones unitarias que deben ser consideradas en las bioseparaciones (Ladish y
Kolmann, 1992). La insulina es una hormona pancretica que ha sido utilizada en el tratamiento de la diabetes tipo I desde principios del siglo pasado. La
10

Tabla 1.2: Operaciones de bioseparacin y su propiedad bsica.
Tipo
Recuperacin
Concentracin
Purificacin
Acabado
Mtodo (Operacin)
Filtracin
Centrifugacin
Rompimiento celular
Extraccin
Adsorcin
Destilacin
Cromatografa
Precipitacin
Ultrafiltracin
smosis inversa
Electroforesis
Dilisis
Electrodilisis
Cristalizacin
Secado
Propiedad
Tamao
Tamao, densidad
Estructura celular
Distribucin entre fases
Sorcin superficial
Presin de vapor
Depende de fase estacionaria
Solubilidad
Tamao molecular
Difusividad y solubilidad
Carga elctrica y movilidad
Difusividad
Carga elctrica y movilidad
Punto de fusin o solubilidad
Temperatura, humedad
insulina est formada por las cadena peptidicas A y B unidas por puentes disulfuro. La cadena A consta de 21 residuos de aminocidos y la cadena B de 30.
La demanda mundial de insulina en el 2006 oscil entre 7,000 y 10,000 kg/ao
y se proyecta que alcanzar entre 15,000 y 20,000 kg/ao para el ao 2012. El
mercado mundial de la insulina se estima en $4,000 millones de dlares y las
principales compaas productoras son Novo Nordisk, Eli Lilly y Sanofi Aventis.
(Ainsworth, 2005).
Al menos tres tecnologas han sido desarrolladas para producir insulina
basadas en bioprocesos con clulas recombinantes. El Mtodo de las dos cadenas fue desarrollado por la compaia Genetech y escalado por Eli Lilly. En
este mtodo las cadenas A y B de la insulina se producen en E. coli por separado
y posteriormente se fusionan para formar la insulina recombinante. El Mtodo
de la proinsulina intracelular ha sido comercializado por Eli Lilly y se basa en
la produccin en E. coli de las cadenas A y B fusionadas formando un complejo
llamado proinsulina que una vez procesado da lugar a la insulina recombinante.
El Mtodo de la proinsulina extracelular fue desarrollado por Novo Nordisk y
se basa en la produccin en S. cerevisiae de las cadenas A y B fusionadas formando un precursor que es excretado por la clula y posteriormente procesado
para obtener insulina recombinante.
Mtodo de la proinsulina intracelular
En la Figura 1.2 se presentan los principales pasos para la produccin de
insulina por el Mtodo de la proinsulina intracelular. Las clulas de E. coli sobreproducen cuerpos de inclusin (CI) formados por el complejo Trp-LE-Metproinsulina (preproinsulina). Trp-LE-Met es una seal peptdica de 121 residuos
11
de aminocidos unida a la proinsulina de 82 residuos. La proinsulina se obtiene

mediante la recuperacin de los CI, la solubilizacin de stos y la ruptura del
enlace de la seal peptdica utilizando bromuro de ciangeno (CNBr) que corta
por el lado carboxlico el residuo de metionina. Dado que las cadenas peptdicas
A, B y C no contienen residuos de metionina o triptfano, estas permanecen
intactas. La molcula de proinsulina obtenida, se somete a replegamiento para
permitir que se formen los enlaces disulfuro entre las cadenas. La proinsulina
es luego sometida a sulfitolisis oxidativa para su plegamiento apropiado. Finalmente, se elimina la cadena peptdica C que une las cadenas A y B para obtener
la insuluna sinttica (Datar y Rosn, 1990).
Figura 1.2: Los principales pasos para la produccin de insulina por el "Mtodo
de la proinsulina intracelular"se basan en la obtencin de: 1) E. coli por cosecha,
2) CI por rompimiento celular, 3) preproinsulina por solubilizacin de los CI,
4) proinsulina por rompimiento con CNBr, 5) proinsulina-SSO3 por sulfitolisis
oxidativa y 6) insulina por accin enzimtica.
En la Figura 1.3 se presenta el diagrama de flujo del bioproceso para obtencin de insulina mediante el Mtodo de la proinsulina intracelular. El diagrama completo consta de las operaciones previas y las operaciones posteriores o
bioseparaciones.
Operaciones previas: Seccin de fermentacin

Las operaciones previas del bioproceso son la preparacin y esterilizacin del
medio, la compresin y esterilizacin del aire, as como la fermentacin (Fig. 1.3).
El medio de cultivo se prepara en el tanque V-101 y se esteriliza continuamente
en el equipo ST-101. El aire es provisto por el compresor G-101 y se mezcla
12
Figura 1.3: Diagrama de flujo de un proceso para la produccin de insulina recombinante humana (biosinttica). Adaptada de Heinzle et al., 2006.
Reproducida
dos.
con
el p erm iso
c 2006. Todos los derechos reservade W iley-VCH. Copyright
13
con amonaco, para posteriormente esterilizarse por filtracin en el equipo AF101.Tanto el medio como la mezcla aire amonaco se alimentan al fermentador
V-102. Este fermentador es inoculado mediante un tren de preparacin de inculo de dos pasos (no se muestra). Al final de la fermentacin se obtiene en el
biorreactor un caldo celular de E. coli conteniendo los CI formados por TrpLE-Met-proinsulina, que es bombeado a un tanque de almacenamiento donde
se mezcla con una solucin del cido etilendiaminotetraactico (EDTA).
Bioseparaciones
Las bioseparaciones para la produccin de insulina por el mtodo de la proinsulina intracelular, constan de las etapas de recuperacin, concentracin, purificacin y acabado.
Recuperacin
Cosecha celular El primer paso de la ruta de bioseparacin consiste en
la recuperacin de las clulas por centrifugacin. El caldo concentrado se enva
a un tanque de almacenamiento V-106 que es la interfase entre las operaciones
previas y las bioseparaciones. Este paso se realiza por medio de 3 centrfugas de
disco operando en paralelo DS-101 (slo se muestra una en el diagrama), bajo el
procedimiento 9 (P-9). El lodo recuperado se diluye con una solucin de EDTA
en buffer TRIS en el tanque de mezclado V-109 para facilitar la separacin de
los CI de los restos celulares.
Rompimiento celular y recuperacin de CI En este caso, el producto
es intracelular y se requiere el rompimiento de las clulas por medio de homogeneizadores de alta presin HG-101 para liberar los CI. El homogeneizado
obtenido es centrifugado para recuperar los CI, utilizando las mismas centrfugas
DS-101 bajo el procedimiento 13 (P-13). Los CI se recuperan en la fase pesada
y la mayora de los restos celulares quedan en la fase ligera, debido a la mayor
densidad y tamao de los CI. La fase pesada es mezclada con una solucin del
detergente Triton-X100 y recentrifugada en las centrfugas DS-101. Este lavado
facilita la separacin de los CI de protenas solubles y restos celulares.
Solubilizacin de CI La suspensin que contiene los CI se transfiere a
un reactor recubierto de vidrio V-103, donde se hace reaccionar con urea y
2-mercaptoetanol. La urea es un agente caotrpico que disuelve las protenas
desnaturalizadas de los CI y el 2-mercaptoetanol es un agente que reduce los
enlaces disulfuro. Al final de la reaccin de solubilizacin, se reemplaza la urea y
el 2-mercaptoetanol por agua para inyeccin (API) y se concentra la solucin en
la unidad de diafiltracin DF-101. Las partculas finas remanentes se eliminan
en el filtro DE-101 para evitar problemas en los equipos de cromatografa.
Reacciones
14
Rompimiento con CNBr La protena quimrica Trp-LE-Met-proinsulina es fragmentada utilizando bromuro de ciangeno (CNBr) en una solucin de
cido frmico en el reactor V-103, obtenindose la proinsulina desnaturalizada y
la secuencia Trp-LE-Met. La proinsulina se obtiene intacta ya que no contiene
residuos de metionina ni triptfano que son los sitios donde hidroliza el CNBr.
Al final de esta reaccin, el cido frmico, el CNBr que no reaccion y el gas
cianuro producido se eliminan en un evaporador rotatorio al vaco CSP-101. El
gas cianuro es txico y es necesario eliminarlo en un adsorbedor con una solucin
de hipoclorito.
Sulfitolisis La sulfitolisis de la proinsulina desnaturalizada se efecta en
el reactor V-105, adicionando hidrocloruro de guanidina (GuHCl), bicarbonato de amonio (NH4 HCO3 ), sulfito de sodio (Na2 SO3 ) y tetrationato de sodio
(Na2 S4 O6 ). Esta operacin se utiliza para desdoblar la proinsulina, romper los
enlaces disulfuros y adicionar grupos sulfito (SO2
3 ) a los residuos de azufre
de las cistenas. Este paso es necesario debido a que la proinsulina puede no
estar correctamente plegada desde su sntesis o porque el tratamiento con CNBr
rompe enlaces disulfuro existentes. El GuHCl previene el replegamiento de la
molcula y el entreplegamiento entre distintas molculas. Al final de la sulfitolisis
la solucin es diafiltrada con API en la unidad DF-101.
Concentracin
Cromatografa de intercambio inico La proinsulina (S-SO3 ) obtenida
en el paso anterior, se hace pasar por tres columnas de intercambio catinico de
S-sefarosa (sulfopropil) C-101operando en paralelo. En la elucin de la columna
se utiliza una solucin de urea para prevenir el replegamiento. La operacin
permite concentrar la solucin y eliminar protenas contaminantes.
Replegamiento Esta operacin permite la remocin de los grupos sulfito
(SO2
3 ), la formacin de los enlaces disulfuro y el plegamiento correcto de la
proinsulina en su forma nativa. Se realiza en el reactor V-107 e involucra una
reduccin con una solucin diluida mercaptoetanol (MrEtOH) que facilita la
formacin de los enlaces disulfuro y evita entre-plegamiento. Al final del paso
de replegamiento el MrEtOH se sustituye por API y se concentra la solucin en
la unidad de diafiltracin DF-102. La solucin de proinsulina obtenida se hace
pasar por una columna de cromatografa de interaccin hidroffica C-102 (HIC
de sus siglas en ingls), para eliminar gran parte de las protenas contaminantes.
Conversin enzimtica La remocin de la cadena C de la proinsulina
que conecta las cadenas A y B, se realiza enzimticamente utilizando tripsina
y carboxipeptidasa B en el reactor V-108. La tripsina rompe en el extremo
carboxi entre residuos lisina y arginina. La carboxipeptidasa B remueve grupos
aminocidos terminales. La solucin obtenida se lava con API y se concentra 4
veces en la unidad de diafiltracin DF-102.
15
Purificacin
Cromatografa de intercambio inico La insulina se purifica mediante
una secuencia cromatogrfica multimodal basada en diferencias de carga, hidrofobicidad y tamao entre la insulina y sus contaminantes. El primer paso de
purificacin de la solucin que contiene la insulina se realiza en una columnas
de intercambio catinico de S-sefarosa C-103. En este paso se elimina gran parte
de la proinsulina no convertida y de las protenas contaminantes. Al final de la
operacin se lava la solucin para eliminar el buffer de elucin con API y se
concentra la solucin dos veces en la unidad de diafiltracin DF-103.
Cromatografa de fase reversa La purificacin contina utilizando la
columna C-104 de cromatografa de alta resolucin de fase reversa (RP-HPLC)
de cido fenil bornico (PBA). Mediante la operacin se logra eliminar las diversas proinsulinas y el resto de las protenas contaminantes. La solucin obtenida
se lava con API y se concentra 2 veces en la unidad de diafiltracin DF-103.
Cromatografa de filtracin en gel La purificacin se completa en una
columna de filtracin en gel C-105 en donde la insulina se obtiene prcticamente
pura. Al final de la operacin la solucin se lava con API y se concentra 10 veces
en la unidad de diafiltracin DF-104.
Acabado
Cristalizacin La solucin obtenida se alimenta a un cristalizador enchaquetado V-111, donde se mezcla con acetato de amonio (CH3 -COO-NH4 )
y cloruro de cinc (ZnCl2 ) . La insulina cristaliza como Zn2 -Insulina6 . Al final
de la cristalizacin, los cristales son recuperados en una centrfuga de canasta
BCF-101.
Secado Finalmente, los cristales se secan en el liofilizador FDR-101. El
rendimiento global del bioproceso es del 32 % y la pureza de la insulina obtenida
vara entre 99.5 a 99.9 %.
1.3.3.
Comportamiento del Bioproceso y Calidad del Producto
Las especificaciones son los estndares tcnicos, regulatorios y legales que el

producto debe cubrir de acuerdo a su uso. Los aspectos de rendimiento, pureza y
actividad del producto son bsicos para determinar la viabilidad de un bioproceso, debido a que para lograr el grado de purificacin requerido en los productos
biotecnolgicos, generalmente el bioproceso debe realizarse en varios pasos.
16
Rendimiento
Las operaciones de bioseparacin para un proceso deben seleccionarse cuidadosamente con el fin de que el costo sea mnimo. Es decir, si el rendimiento por
paso es bajo y se requieren varias pasos, puede tenerse un bioproceso no viable
econmicamente debido a su an ms bajo rendimiento global. El rendimiento
est dado por:
Rendimiento =
cantidad de producto obtenido

cantidad de producto alimentado
(1.1)
Para un bioproceso de n pasos, con un rendimiento por paso RP %, se puede

establecer que el rendimiento global RG % est dado por:
RG % = (RP )n 100
(1.2)
Ejemplo 1.1. Clculo del rendimiento global de un esquema de

bioseparacin.
Calcular el rendimiento global (RG %) de un esquema de bioseparacin de
n = 10 pasos. Cuando el rendimiento por paso (RP %) es de: a). 60 % y b).
30 %
Solucin:
Utilizando la ecuacin (1.2) se tiene:
a)
RG % = (0.6)10 100 = 0.006 100 = 0.6 %
b)
RG % = (0.3)10 100 = 0.000006 100 = 0.0006 %
Esto significa que se requiere 1000 veces ms cantidad de materia prima
para lograr la misma masa de producto purificado, cuando el RP desciende de
60 a 30 %. Por otra parte si el rendimiento promedio por paso fuese de 95 %, el
rendimiento total alcanzado sera del 60 % (Hearn y Anspach, 1990).
Ejemplo 1.2. Grfica del rendimiento global
Graficar el efecto del rendimiento por paso (RP %) y el nmero de pasos (n)
sobre el rendimiento global (RG %) de un bioproceso, considerando rendimientos
por paso de 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, y 95 %.
Solucin:
El programa MATLAB para la solucin del ejemplo se presenta en la Figura
1.4.
La Figura 1.5 muestra como vara el rendimiento global en funcin del
nmero de pasos y el rendimiento por paso. El rendimiento global aumenta
conforme se disminuye el nmero de pasos de procesamiento y se aumenta el
rendimiento por paso.
17
Figura 1.4: Programa MATLAB para la solucin del Ejemplo 1.2.

Pureza
La pureza necesaria y actividad generalmente estn definidos por agencias
reguladoras como la FDA de acuerdo al uso que se le va a dar al producto. En el
caso de productos para uso parental en humanos la pureza requerida es mayor
al 99.5 % generalmente. La pureza est dada por:
Pureza =
cantidad de producto
cantidad total
(1.3)
Actividad especfica
Una medida de la pureza de un producto es la actividad especfica que est
dada por:
Actividad especfica =
unidades de actividad biolgica

masa
(1.4)
Ejemplo 1.3. Estimacin del rendimiento y la pureza y de una

enzima en un proceso de purificacin.
En el desarrollo de un bioproceso para la obtencin de una enzima a partir
de E. coli, se sabe que la bacteria tiene un 80 % de humedad y que el 60 % de su
peso seco es protena. El proceso de purificacin de la enzima consta de 4 pasos
(Fig. 1.6).
18
Figura 1.5: Representacin grfica del rendimiento global de un proceso

de purificacin de un producto biotecnolgico en funcin del rendimiento por paso y el nmero de pasos. Fuente: Hearn y Anspach, 1990.
Reproducida
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el
permiso
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de M arcel Dekker Inc. Copyright
reservados.
En la tabla siguiente se presenta la cantidad de enzima y de protena total

al final de cada paso.
Paso
Romp. celular
Precipitacin
Inter. inico
Cromat. gel
Protena
total (g)
12.000
1.800
0.240
0.036
Enzima
total (g)
0.080
0.060
0.048
0.036
Fraccin
enzima 103
6.667
33.333
200.000
1000.000
Se pide: Obtener el factor de purificacin de la enzima en cada paso, el

rendimiento por paso y el rendimiento global.
Solucin:
El factor de purificacin, el rendimiento por paso y el rendimiento global del
proceso se presentan junto con los datos del problema en la tabla siguiente:
19
Figura 1.6: Proceso hipottico de cuatro pasos para la purificacin de una enzima.
Paso
Romp. celular
Precipitacin
Inter. inico
Cromat. gel
Prot.
tot. (g)
Enzima
tot. (g)
12.000
1.800
0.240
0.036
0.080
0.060
0.048
0.036
Fraccin
enz. 103
6.667
33.333
200.000
1000.000
Factor de
purific.
1
5
30
150
% Rendimiento
Por etapa Global
100
75
80
75
100
75
60
45
a) El factor de purificacin se obtiene mediante el cociente de la fraccin de

enzima en cada paso, entre la fraccin de enzima inicial.
b) El rendimiento en cada paso est dado por el cociente de la cantidad de
enzima total obtenida en cada paso, entre la cantidad total de enzima al inicio
del paso.
c) El rendimiento global al final de cada paso est dado por el cociente de la
cantidad de enzima total obtenida en ese paso entre la cantidad total de enzima
inicial.
20
GMP
La obtencin de un producto biotecnolgico debe realizarse conforme a las
prcticas de buena manufactura para la industria (GMP de sus siglas en ingls),
para los mtodos, instalaciones y controles utilizados para la fabricacin, procesamiento, empaque o manejo de una sustancia, para asegurar que sta cumpla
con los requerimientos de accin segura, y que presente la identidad y fuerza,
y cumpla con las caractersticas de calidad y pureza que pretende o represente
tener (L K Biosciences, 2009).
Todos los procedimientos deben mantenerse dentro de los lmites especificados en los reportes de validacin de la empresa, para poder demostrar la
reproducibilidad de la operacin y la calidad del producto final. En el contexto
de la bioseparaciones, los procesos de validacin comprenden todos los pasos
crticos del proceso, especialmente las operaciones con membranas y las operaciones cromatogrficas, particularmente las empleadas para remover bacterias y
virus contaminantes (Kalyanpur, 2002).
Instalaciones
Debido a que la mayora de los bioprocesos requieren control microbiolgico,
las instalaciones deben ser diseadas bajo las normas apropiadas (HVAC), con
gradientes positivos de presin de aire y entradas seguras para el personal. Las
operaciones secuenciales deben estar prximas una a la otra (proximidades de
proceso) para minimizar tiempos y costos. Es recomendable la segregacin de las
etapas del bioproceso para prevenir la contaminacin. El grado de segregacin
depende del nmero de productos de la planta.
1.4.
Importancia Econmica de las Bioseparaciones
La obtencin de productos a partir de materiales biolgicos generalmente

requiere operaciones de bioseparacin apropiadas que son costosas y pueden ser
el factor limitante en el desarrollo del bioproceso (Rito-Palomares, 2008). Esto
es debido principalmente a la baja concentracin de producto en los caldos que
entran al proceso de bioseparacin y a la alta pureza requerida por la mayora
de los productos finales (Woodley et al., 2008). Frecuentemente, la parte correspondiente a las bioseparaciones puede representar hasta un 60 % del costo
total de produccin sin considerar las materias primas (Kalk, 1986). Debido a
lo anterior, existe una relacin inversa entre el precio de venta de un producto
biotecnolgico y la concentracin de ste en el caldo del biorreactor (Fig. 1.7).
Es obvio que no slo la concentracin del producto en el fermentador determina el precio, tambin deben ser consideradas la escala, la productividad y
el rendimiento global de la recuperacin. Puede decirse entonces que el xito
comercial de un proceso biotecnolgico depende en gran medida de la adecuada
1.5. COMERCIALIZACIN DEL BIOPRODUCTO
21
seleccin del esquema de bioseparacin, particularmente conforme el margen de

utilidad (precio-costo) disminuye.
Figura 1.7: Relacin entre la concentracin inicial del producto en el

caldo y el precio final de venta del producto. Fuente: Dwyer, 1984.
c 1984. Todos los derechos
Reproducida con el permiso de Nature Publishing Co. Copyright
reservados.
1.5.
Comercializacin del Bioproducto
El desarrollo sustentable de un proceso biotecnolgico para la obtencin de

un producto de inters comprende varios aspectos, principalmente los ambientales y sociales relacionados con su impacto en la poblacin, los econmicos
relacionados con el mercado y los tcnicos que involucran el diseo del bioproceso. El estudio de mercado permite evaluar el potencial econmico o social del
proceso y es requisito indispensable para la formulacin del proyecto a desarrollar. Por ejemplo, an cuando la factibilidad tcnica de un proceso dado pueda
ser atractiva, el valor esperado del producto pudiera no justificarlo (Knight,
1990).
El tiempo de desarrollo de un producto biotecnolgico es largo y puede
comprender varios aos en condiciones normales. Desde el punto de vista tcnico
el escalamiento del proceso pasa de la escala de laboratorio de mg, a la escala
piloto de g y finalmente a la escala productiva de kg. Cuando es necesario, las
pruebas del producto pasan por las fases clnicas I, II y III, paralelamente.
22
1.5.1.
Desarrollo del Bioproceso
El diseo del bioproceso comprende todo el trabajo conceptual necesario que

debe realizarse antes de la construccin o modificacin de una planta de proceso.
Este trabajo debe ser completo y cuidadoso, de tal manera que permita desarrollar y evaluar varios esquemas de operacin con el propsito de aproximarse al
diseo ptimo, bajo las restricciones presupuestales establecidas (Kelly, 1987).
El diseo del bioproceso se realiza utilizando metodologas ingenieriles bsicas
como la sntesis y el anlisis del proceso. La sntesis del proceso es la seleccin
del esquema del proceso o diagrama de flujo que permita producir el producto
de inters a un costo y calidad aceptables. El anlisis del proceso consiste en
evaluar y comparar diferentes esquemas obtenidos mediante la sntesis.
1.5.2.
Diseo Interior
El concepto de diseo interior (design in) ha sido recomendado para ahorrar

costos y tiempo en el escalamiento de un bioproceso (L K Biosciences, 2009).
En este enfoque se propone considerar los aspectos relacionados con la seguridad, robustez, GMP, adaptabilidad, restricciones y acceso al mercado, desde los
trabajos a escala de laboratorio. Partiendo de que la normatividad del proceso
define al producto, en este enfoque se recomienda la integracin de un paquete
de transferencia tecnolgica que comprenda la documentacin de la justificacin
del proceso, el diagrama de flujo, la lista de materias primas, la descripcin de
las operaciones unitarias, las especificaciones y criterios de aceptacin, los datos
de lotes, el protocolo del proceso, la descripcin de los mtodos analticos, el
reporte de la caracterizacin del proceso y el reporte del desarrollo (Tabla 1.3).
Tabla 1.3: Conceptos para la integracin de un paquete biotecnolgico.
CONCEPTO
Diseo del proceso
Lnea celular
Materias primas
Diagrama de flujo
Operaciones unitarias
Sustancia
Producto
Control del proceso
Control de calidad
Mtodos analticos
Carac. proceso
Pruebas del proceso
DESCRIPCIN
Anlisis ingenieril: escalabilidad, costos, rendimiento,
facilidad de implementacin, robustez
Descripcin y status del banco de clulas
Lista y justificacin
Diagrama y plan de muestreo
Documentacin de corridas y protocolo
Pureza, composicin, justificacin y almacenamiento
Formulacin, justificacin y almacenamiento.
Lista de anlisis de control
Especificaciones, criterios de aceptacin y manual
Demostracin de la aplicabilidad de los mtodos
Rangos aceptables probados y parmetros crticos
Datos de varios lotes de laboratorio
1.6. TENDENCIAS EN BIOSEPARACIONES
1.6.
23
Tendencias en Bioseparaciones
En la era de la genmica funcional y la biologa de sistemas, la obtencin de

bioproductos ha evolucionado cada vez ms hacia el uso de estrategias ms sistemticas que las usadas previamente. El anlisis integral del fenmeno celular
est siendo utilizado para reprogramar clulas a nivel molecular para mejorar
los bioprocesos. La manipulacin gentica y su anlisis subsecuente, se ha combinado con estrategias ingenieriles para el diseo de estos bioprocesos (Fig. 1.8).
El enfoque comprende una primera etapa para la obtencin de la cepa modificada base, una segunda etapa de ingeniera de la cepa modificada base utilizando
HTA (High throughput analysis) y simulacin in silico, adems de una tercera
etapa de diseo del proceso fermentativo y las bioseparaciones (Park et al.,
2008). El enfoque HTA tambin est siendo utilizado en esta ltima etapa para
la optimizacin de operaciones como la cromatografa (Wiendahl et al., 2008).
La tecnologa de anlisis de proceso (PAT) ha sido recomendada por la
FDA como un sistema para disear, analizar, y controlar el bioproceso mediante
mediciones de atributos crticos de calidad y comportamiento de materias primas, materiales en proceso, y procesos; con el objetivo de asegurar la calidad
final del producto (Knskoski et al., 2006). Es importante hacer notar que el
trmino anlisis es general e incluye los anlisis qumicos, fsicos, microbiolgicos, matemticos y de riesgo de manera integrada. El objetivo de la PAT es
mejorar el entendimiento y control del proceso de fabricacin, que es consistente
con el objetivo de los actuales sistemas de control de calidad: la calidad no se
prueba en los productos, sta debe ser inherente al producto o debe estar presente
por diseo (FDA, 2004).
En varios casos, este enfoque biolgico combinado con estrategias ingenieriles
de optimizacin ya ha producido un mejoramiento considerable de varios bioprocesos. Uno de los ejemplos ms promisorios es la produccin de anticuerpos
teraputicos en clulas de mamferos donde se han alcanzado concentraciones
de ms de 10 g/L en el proceso fermentativo. Esta tendencia plantea nuevos
retos en el diseo de las bioseparaciones para aprovechar las altas concentraciones obtenidas, ya que las operaciones convencionales como la cromatografa
que se caracterizan por su baja capacidad volumtrica, es muy probable que se
conviertan en cuello de botella de las bioseparaciones (Flaschel, 2008).
En este sentido, algunas operaciones tradicionales como la extraccin y las
operaciones hbridas como la cromatografa en columnas de membranas estn
siendo consideradas para cubrir este tipo de procesos (Gottschalk, 2008). En
el caso de productos intracelulares, stos demandan tcnicas novedosas de liberacin selectiva como una forma posible de mejorar la eficiencia de las bioseparaciones involucradas (Balasundaram et al., 2009).
Las aplicaciones clnicas de los desarrollos biotecnolgicos tambin impactarn los procesos de bioseparacin. La tecnologa de las clulas troncales requerir
mtodos de cosecha apropiados para el procesamiento de este tipo de biomasa.
Las vacunas de DNA y la terapia gnica ya estimulan el desarrollo de bioseparaciones apropiadas, que presentan particularidades que las hacen diferentes a
los esquemas de las protenas (Haynes, 2004). En cuanto al proceso, los equipos
24
Figura 1.8: Desarrollo de nuevos bioprocesos. a) Obtencin de la

cepa modificada base, b) Ingeniera de la cepa modificada base utilizando HTA y simulacin in silico y c) Diseo de la etapa fermentativa y de bioseparaciones.
Adaptada de Park et al., 2008.
c 2009. Todos los derechos reservados.
Reproducida con el p erm iso de Elsevier. Copyright
1.7. SUMARIO
25
y accesorios desechables representan una alternativa cada vez ms econmica

en las bioseparaciones debido al ahorro en costos de limpieza y de validacin de
los procesos (Rao et al., 2009).
Hoy, los bioprocesos bien establecidos pueden utilizar modelos matemticos
en la optimizacin y simplificacin de la validacin de operaciones de bioseparacin como la cromatografa. Este enfoque ser extendido a ms procesos y
procedimientos experimentales (Asenjo y Andrews, 2008). La simulacin ser
cada vez ms utilizada en el desarrollo inicial de un concepto, en el diseo del
proceso o en la operacin de una planta. Esto involucra la elaboracin de diagramas de flujo, balances de masa y energa, dimensionamiento de equipo y
costos de capital y operacin.
Varios paquetes computacionales comerciales estn disponibles para realizar
estas tareas como SuperPro Designer y ASPEN. Algunos desarrollos recientes
sobre el uso de modelos en bioprocesos son del rea de dinmica computacional
de fluidos (CFD), principalmente para el estudio de tiempos de residencia y
mezclado en equipo de proceso. El comportamiento de algunos esquemas de
bioseparacin frecuentemente es muy dependiente de algunas operaciones unitarias claves como la extraccin y la cromatografa. La modelacin y simulacin
de estas operaciones puede ayudar a reducir tiempos y costos en el desarrollo y
operacin de los bioprocesos. Para realizar este tipo de simulaciones es frecuente
utilizar paquetes y programas como Matlab, Mathcad y Fortran (Gosling, 2005).
1.7.
Sumario
Los procesos de bioseparacin involucran operaciones de recuperacin, concentracin, purificacin y acabado de productos provenientes del biorreactor.
Las bioseparaciones comprenden todos los tratamientos que requiere el caldo de
cultivo para obtener un producto biotecnolgico en las condiciones de pureza
y actividad requeridas. La sustentabilidad de los procesos biotecnolgicos depende en gran medida de las operaciones de bioseparacin que involucran, de tal
manera que la correcta seleccin y diseo de estas operaciones tiene un fuerte
impacto en el xito del proceso.
26
1.8.
Problemas
1.1. Anlisis comparativo de esquemas de bioseparacin. Efectuar

un anlisis comparativo, en relacin a las operaciones de separacin que utilizan,
de los procesos para la produccin de cido ctrico, penicilina e insulina.
1.2. Clculo de prametros del comportamiento de un bioproceso.
Un proceso para la recuperacin de hidroxibutirato deshidrogenasa consta de
tres pasos: Un rompimiento de las clulas para liberar la enzima intracelular,
seguido de dos pasos de adsorcin/desorcin por afinidad. En la tabla siguiente
se presentan los datos obtenidos de actividad de enzima y protena total al final
de cada paso.
Se pide: Calcular la actividad especfica, el factor de purificacin y el % de
rendimiento.
Paso
Rompimiento
Ads/Des (1)
Ads/Des (2)
Actividad Total
(Unidades)
6,860
6,800
5,380
Protena Total
(mg)
76,200
2,200
267
A Esp.
F Purif.
Rend.
1.3. Anlisis de purificacin. Completar la siguiente tabla relacionada

con la purificacin de una enzima:
Vol.
Conc.
Prot.
Act.
Act.
Act.
prot.
total
enzim.
total
esp.
mg
U/ml
U/mg
M aterial
ml
mg/ml
Extracto
1500
12.0
20,000
1er. paso
550
11.0
16,940
2do paso
125
4.5
14,387
Rend.
Etapa
Total
Fac.
purif.
1.4. Precio y costo. En un proceso biotecnolgico que se encuentra en

desarrollo para producir una enzima, se obtiene una concentracin de 0.1 mg/ml
de la enzima en el caldo inicial. A los proyectos de la empresa se les exige un
margen sobre ventas del 50 % (MSV = Precio - Costo).
Se pide: Estimar el costo de produccin mximo del producto utilizando la
Figura 1.7.
1.5. Esquema de bioseparacin de pDNA. Se requiere disear un proceso para producir plsmidos de DNA (pDNA) purificados, a partir de cultivos
de E. coli. Los pDNA se producen dentro de las clulas, en forma de DNA circular cerrado superenrollado, son de tamao mucho menor al genoma bacteriano,
1.8. PROBLEMAS
27
pero mucho ms grandes que las protenas. Su peso molecular es de 3,000 kDa
y a un pH = 8.0 su carga externa es muy negativa debido a los grupos fosfatos.
Para la produccin del plsmido se cuenta con los siguientes equipos:
a) Una columna de inercambio catinico.
b) Una columna de intercambio aninico.
c) Una centrfuga para cosechar clulas.
d) Una columna cromatogrfica de SEC que retiene molculas de peso molecular menor a 100 kDa.
e) Un equipo de choque osmtico para romper clulas.
f) Una unidad de ultrafiltracin.
Se pide: Disear un esquema de bioseparacin del plsmido.
1.6 Rendimiento. En una operacin de ultrafiltracin/diafiltracin se
procesan 120 L de una solucin eluda de una columna de Q Sefarosa, que
tiene una concentracin de protena de 1.9 mg/mL. La solucin concentrada
(retenido) ocupa un volumen de 30 L y tiene una concentracin de 7.4 mg/mL.
Se pide: Calcular el rendimiento de la etapa.
Resp. 97 %
28
1.9.
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121123.
Captulo 2
Sntesis del Bioproceso

2.1.
Introduccin
El trabajo que se realiza para seleccionar la secuencia de operaciones (diagrama de flujo) de un bioproceso para transformar una serie de materias primas
en productos, se llama sntesis de proceso. El diagrama de flujo generalmente
se obtiene combinando el conocimiento fundamental de cada operacin, plasmado en modelos y simulacin, con experimentos a nivel laboratorio, cuidando
de utilizar operaciones escalables y reactivos que puedan ser utilizados comercialmente. Actualmente, es necesario disear los bioprocesos bajo criterios de
sustentabilidad econmica, ecolgica y social, esto estimula el xito del bioprocesos en el largo plazo y ayuda a cumplir con las regulaciones establecidas y
futuras.
En este captulo, en la seccin 2.2 se presenta la metodologa general del
diseo de bioprocesos y los principales aspectos tcnicos y normativos a considerar en este tipo de estudios. Los equipos ms utilizados para realizar dichas
operaciones se describen en la seccin 2.3. Las metodologas utilizadas para la
seleccin apropiada de la secuencia de bioseparaciones de un bioproceso y su
evaluacin se establecen en la seccin 2.4.
2.2.
Fundamentos
El diseo de un proceso comprende todo el trabajo conceptual que es necesario realizar antes de construir una planta productiva. Para desarrollar un bioproceso eficientemente es necesario seleccionar las operaciones ms apropiadas y
combinarlas de manera lgica para obtener el producto bajo las especificaciones
necesarias, en un mnimo de pasos (Nfor et al., 2008). Esta seccin trata de dos
aspectos del diseo de los bioprocesos:
El enfoque para el diseo.
Consideraciones tcnicas de diseo.
32
CAPTULO 2. SNTESIS DEL BIOPROCESO
2.2.1.
Enfoque de Diseo
El diseo del bioproceso se realiza combinando herramientas de diseo con

un enfoque de diseo apropiado (Fig. 2.1). Una vez definido el problema de
diseo, la informacin obtenida mediante experimentacin y de la literatura
permitir caracterizar las corrientes para realizar los estudios de modelacin y los
balances de materia. Mediante la metodologa de sntesis y anlisis se desarrolla
y selecciona el diagrama de flujo del bioproceso. A travs de experimentacin
adicional es posible optimizar el bioproceso, para concluir con el diseo detallado
del mismo.
Figura 2.1: Enfoque terico experimental para el diseo de un bioproceso.
2.2.2.
Consideraciones Tcnicas de Diseo
En el diseo de un bioproceso es necesario considerar las caractersticas tcnicas bsicas del mismo como: a) la secuencia de operaciones unitarias del bioproceso, b) la escala del bioproceso, c) el nmero de etapas por operacin unitaria
y d) los procesos unitarios.
2.2. FUNDAMENTOS
33
Operaciones unitarias de separacin y su secuencia

Una vez definido el producto (o productos) que se desea obtener, as como su
concentracin, pureza, actividad y la recuperacin deseada, el siguiente paso es
determinar qu operaciones son capaces de realizar la produccin y la separacin
del bioproducto. Esto se plasma en el diagrama de flujo del bioproceso que
contiene las operaciones unitarias del mismo como esterilizacin, fermentacin,
filtracin, extraccin y cristalizacin.
Escala de operacin
Frecuentemente la escala de operacin o volumen de produccin, es el factor econmico determinante en la seleccin entre bioprocesos de bioseparacin
alternativos. Cualquier proceso de bioseparacin que se escoja, deber ser compatible con la escala industrial a la cual se va a disear. Esto es importante
porque varios procesos desarrollados en el laboratorio no tienen su contraparte
industrial. Muchas operaciones de bioseparacin tienen un lmite respecto de la
capacidad mxima que pueden manejar y esto limita la escala de produccin
para la cual esa operacin puede ser considerada. En algunos casos, este lmite
superior se debe a una restriccin impuesta por un fenmeno fsico inherente a
la operacin de separacin, mientras que en otros casos el lmite superior se debe
simplemente a las limitaciones que ofrece la fabricacin de equipo comercial. En
la Tabla 2.1 se pueden observar las capacidades mximas en una sola etapa de
algunas operaciones de separacin.
Tabla 2.1: Capacidades mximas por operacin de bioseparacin.
Operacin de
separacin
Destilacin
Extraccin
Cristalizacin
Adsorcin
smosis inversa
Ultrafiltracin
Intercambio inico
Electrodilisis
Electroforesis
Cromatografa
Filtracin por gel
Lmite comercial
por operacin simple
Sin lmite
Sin lmite
10-70 106 kg/ao
Sin lmite
0.45 106 kg/ao flujo de agua por mdulo,
con varios mdulos por unidad
0.45 106 kg/ao deflujo de agua por mdulo,
con varios mdulos por unidad
450 106 kg/ao de flujo de agua
0.45 106 kg/ao de flujo de agua
1000 kg/ao de producto
0.99 106 kg/ao de lquido
100 kg/ao de producto
Fuente: Null, 1987.

c 1987.
Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. Copyright
Todos los derechos reservados.
34
Cada operacin de separacin tiene en s misma una determinada confiabilidad que es producto de la experiencia y conocimiento de la misma. As, se tiene
que la destilacin es la operacin ms confiable de los procesos de separacin
por el conocimiento que de ella se tiene. La electroforesis, en cambio, es una
operacin que se realiza a pequea escala, entonces la nica forma de tener
confiabilidad a gran escala es usando mltiples unidades en arreglo paralelo.
Debido a consideraciones de confiabilidad del diseo, puede ser necesaria
una planta piloto para probar la operacin integrada del bioproceso. En tal
caso, todas las operaciones deben ser incluidas en la planta piloto an cuando
no se requieran pruebas individuales de confiabilidad de cada una de ellas.
Nmero de etapas por operacin unitaria
Otra variable importante en la seleccin de un proceso de bioseparacin, es
el nmero de etapas de contacto que se realizan por operacin. En la mayora de
los casos una operacin de una sola etapa es ms econmica que una operacin
de etapas mltiples. Las operaciones de bioseparacin tienen diferente habilidad
para realizar una separacin en una sola etapa. Por ejemplo, la destilacin es una
operacin capaz de separar una mezcla binaria en una sola columna, siempre y
cuando no haya formacin de mezclas azeotrpicas entre los componentes que
sern separados. La extraccin requiere de al menos dos etapas de contacto
para separar un flujo de alimentacin en dos corrientes y obtener el producto
en condiciones aceptables.
Tericamente la ultrafiltracin puede separar dos solutos de alto peso molecular si la diferencia en tamao molecular es del orden de 10; en caso de que esto
no sea as, la separacin requiere varias etapas. En el caso de las operaciones de
electroforesis, cromatografa, y la filtracin en gel, dado que separan el producto
por dilucin, requieren etapas de concentracin posteriores.
Procesos unitarios
Un proceso unitario es el conjunto de operaciones que se realizan secuencialmente en un equipo. Por ejemplo, la adsorcin se realiza mediante un proceso
unitario que consiste en 4 operaciones: la adsorcin, el lavado, la elucin y la
regeneracin.
Ejemplo 2.1. Enfoque en el escalamiento
En el desarrollo de un bioproceso se estima un volumen de lecho (CV) de
una columna cromatogrfica a escala industrial de CV = 820 L. La elucin de
la columna se realizar con 2 CV de buffer 1.0 M de (NH4 )2 SO4 . Por cada lote
de fermentacin la columna se operar 5 ciclos y se producirn 40 lotes por ao.
Se pide calcular:
a) El volumen de buffer de elucin requerido anualmente.
b) La masa de sal requerida anualmente.
c) El ahorro volumtrico anual en buffer si en el desarrollo del bioproceso se
logra una diminucin del 10 % en el volumen de elucin.
2.3. EQUIPO
35
d) El ahorro msico anual en sal si en el desarrollo del proceso se logra

adems una disminucin del 10 % en la concentracin de buffer de elucin.
Solucin:
a)
Volumen de buffer = 820
CV
Ciclo
Lote
L
2
5
40
= 328 103 L
CV
Ciclo
Lote
ao
b)
Masa de sal = 328 103 L 1.0
mol
g
kg
132.14
= 43, 342 kg
L
mol 103 g
c)
3
Ahorro volumen = 328 10 L
2 1.8
2
= 32.8 103 L
d)
Masa de sal = 295.2 103 L 0.9
mol
g
kg
132.14
3 = 35, 107 kg
L
mol 10 g
Ahorro de sal = (43, 342 35, 107) kg = 8, 235 kg
2.3.
Equipo
Parte importante en la seleccin de un proceso biotecnolgico consiste en

determinar el equipo necesario para realizar una determinada operacin. Varios
tipos de equipos pueden ser empleados para una misma operacin y la seleccin
depende en gran medida del tipo de producto que va a obtenerse. A continuacin
se describen los principales equipos que se utilizan en cada una de las etapas de
las bioseparaciones.
2.3.1.
Recuperacin
La recuperacin generalmente hace uso de equipos de remocin de insolubles

y de rompimiento celular.
Remocin de insolubles
Con frecuencia se usan sistemas de filtracin al vaco, sistemas de filtracin
por lotes, as como centrfugas tubulares, de discos con descarga intermitente o
de canasta. Los sistemas de microfiltracin son cada vez ms utilizados en estas
operacines,
36
Rompimiento celular
En esta etapa los equipos que ms se manejan son los homogeneizadores y
los molinos de perlas. La lisis alcalina en tanques agitados o sistemas tubulares
ha sido considerada en varios desarrollos.
2.3.2.
Concentracin
En la concentracin del producto se emplean extractores que pueden funcionar en forma continua o intermitente, as como tambin lechos empacados
con diversos tipos de adsorbentes. La precipitacin con sales o solventes en tanques agitados tambin es empleada en este nivel. Los sistemas de ultrafiltracin
y dilisis participan cada vez ms en estas etapas.
2.3.3.
Purificacin
En esta etapa se utilizan diversos sistemas cromatogrficos que se traducen

en la utilizacin desde equipos muy sencillos como puede ser una simple columna,
hasta equipos muy sofisticados como los utilizados en cromatografa lquida de
alta resolucin. Tambin son utilizados en esta etapa sistemas de electroforesis.
2.3.4.
Acabado
En la etapa de acabado, dependiendo de la presentacin con que se va a

lanzar el producto al mercado, pueden utilizarse liofilizadores, secadores y cristalizadores.
2.4.
Diseo
El diseo de un bioproceso comprende diversas actividades basadas en la experiencia, la teora y el apoyo computacional disponible. Entre estas actividades
podemos destacar las siguientes:
Sntesis: establecimiento de las operaciones del proceso o diagrama de flujo.
Anlisis: modelacin y establecimiento de los valores de las variables del proceso.
Evaluacin: econmica, ambiental y social.
2.4.1.
Sntesis del Bioproceso
El xito de un diseo depende fuertemente de la sntesis del bioproceso ya

que las tres actividades restantes: anlisis, evaluacin y optimizacin, se derivan
del diagrama de flujo seleccionado. Para tratar de automatizar esta tarea se han
desarrollado varias metodologas computacionales basadas en mtodo algortmicos (Prokopakis y Asenjo, 1990) o bien en sistemas expertos (Asenjo y Andrews
2.4. DISEO
37
2008). Sin embargo, en la prctica los esquemas de bioseparacin se obtienen

mediante reglas derivadas de la experiencia conocidas como heursticas.
Mtodo heurstico
El mtodo heurstico consiste en la prctica normal de diseo, que se inicia
definiendo un caso base, que representa el juicio cualitativo del ingeniero de
diseo y presupone ser el bioproceso de separacin ms econmico que pueda ser
desarrollado dentro de las restricciones que en tiempo y dinero tiene el proyecto
(Null, 1987).
Una vez que el caso base ha sido seleccionado, el diseador de proceso determinar los costos de operacin y capital con el mayor detalle posible. Cuando
el caso base ha sido evaluado, se hace un juicio sobre el ms prximo proceso
econmicamente competitivo. El proceso alternativo se evala con las mismas
restricciones que el caso base. Si el proceso modificado tiene costos de operacin
y capital ms bajos, entonces ste nos lleva a un nuevo caso base de diseo. Este
nuevo caso base vuelve a probarse hasta encontrar un caso base ptimo.
Reglas generales del mtodo heurstico El mtodo heurstico trata de
limitar las alternativas posibles para un bioproceso usando reglas desarrolladas
a travs de diseos previos y la experiencia. Al basarse en la experiencia, el sentido comn y la intuicin del ingeniero, la aproximacin heurstica no garantiza
la solucin ptima. An as, estos mtodos han probado ser una herramienta valiosa en la optimizacin de la estructura del bioproceso. Algunas de estas reglas heursticas son generales y aplicables para la sntesis de procesos de
bioseparacin. Cinco de tales reglas heursticas son (Petrides et al., 1989):
1. Remover primero la impureza ms abundante.
2. Remover primero la impureza que sea ms fcil.
3. Hacer las separaciones ms caras y difciles al final.
4. Seleccionar el esquema de bioproceso que permita aprovechar al mximo
las diferencias entre las propiedades del producto y los contaminantes.
5. Seleccionar y secuenciar procesos que exploten diferentes fuerzas impulsoras de la bioseparacin.
Reglas especficas del mtodo heurstico Existen reglas heursticas ms
especficas que las mencionadas anteriormente, como las usadas en el diseo de
bioprocesos de purificacin de protenas a gran escala:
1. Si el producto es intracelular, se requiere romper la clula.
2. Si la clula cultivada es de mamfero, el producto es extracelular.
3. Si el rompimiento de la clula se lleva a cabo por mtodos mecnicos, se
requiere precipitar los cidos nucleicos.
38

4. Si la concentracin de la protena total al final de la recuperacin y antes
de la purificacin, es menor que 60 g/L, se requiere concentrar el producto.
5. Si la alimentacin para la purificacin por cromatografa no es un caldo
claro, se requiere un pretratamiento.
6. Si uno o dos pasos de intercambio inico producen una pureza similar a
la de cromatografa de afinidad, debe escogerse el intercambio inico.
7. La filtracin en gel se puede utilizar como una etapa de separacin intermedia slo para la eliminacin de sales.
8. La filtracin por gel se puede utilizar como un paso de acabado slo para
separar fracciones proteicas.
Este tipo de reglas son utilizadas conjuntamente con otras an ms especficas, en el desarrollo de bases de conocimientos para sistemas expertos
(Prokopakis y Asenjo, 1990).
Aproximacin heurstica para la seleccin de un proceso de bioseparacin.
Se presenta en esta seccin una aproximacin heurstica de la sntesis de un
proceso de bioseparacin de materiales biolgicos tpico (Petrides et al., 1989).
El primer paso en la sntesis de un proceso, consiste en desarrollar un diagrama
de bloques de sus principales etapas. Posteriormente, se seleccionan para cada
etapa las operaciones alternativas posibles. El desarrollo del diagrama de bloques
est basado en la estructura general que se presenta en la Figura 2.2. Para
cada tipo de producto (intracelular o extracelular) existen varias rutas posibles.
La seleccin de la ruta y la operacin especfica en cada etapa se basa en las
propiedades del producto, las impurezas y el tipo de clula; as como en las cinco
reglas heursticas descritas anteriormente.
Etapa de recuperacin : Productos intracelulares En el desarrollo de
un diagrama de bloques para un nuevo bioproceso, es necesario distinguir entre
productos extracelulares e intracelulares. El procesamiento de los productos
extracelulares es comparativamente ms fcil de realizar que la de los productos
intracelulares. En el caso de los productos intracelulares, las operaciones que se
utilizan son las siguientes:
Cosecha de clulas El primer paso en un proceso para la recuperacin
de productos intracelulares es la cosecha de clulas. Remover primero el lquido
extracelular, est en completa concordancia con la primera regla heurstica:
remover primero la impureza ms abundante. Como se establece en la Figura
2.2, la centrifugacin y la filtracin por membrana son las nicas tcnicas usadas
para cosecha de clulas a gran escala. La centrifugacin tiene ventajas para
microorganismos grandes (dimetro mayor que 2 m y densidad mayor que
1, 030 kg/m3 como las levaduras).
2.4. DISEO
39
Figura 2.2: Diagrama de bloques general de un proceso de bioseparacin con las etapas caractersticas. Fuente: Petrides et al., 1989.
c
Reproducida con el permiso de Am erican Institute of Chem ical Engineers. Copyright 1989
AIChE.
40
Para microorganismos ms pequeos pueden usarse tcnicas de coagulacin

para aumentar el tamao de la partcula que sedimentar. La filtracin por
membrana tiene ventajas para cosechar clulas pequeas y ligeras como la de
E. coli. Cuando el flujo es mayor que 20 L/m2 -h, la filtracin por membrana es
la que produce mejores resultados. Otra ventaja de la filtracin por membrana
es la recuperacin del producto. Con la centrifugacin siempre se pierden de 1 a
5 % de las clulas. Con filtracin por membrana se recuperan todas las clulas,
siempre que no se presente rompimiento o lisis.
Rompimiento de clulas Con frecuencia el segundo paso en la obtencin
de productos intracelulares es el rompimiento de la clula. El rompimiento de
bacterias y levaduras es realizado por homogeneizadores a alta presin o con
molinos de perlas. Para altas capacidades (varios m3 /h) solamente se puede
disponer de homogeneizadores. Para el rompimiento celular, tambin se utilizan
mtodos qumicos. Dentro de stos se puede destacar el uso de la digestin
enzimtica para liberar protena intracelular de bacterias gram-positivas, la disolucin lipdica para el caso de bacterias gram-negativas, as como el choque
osmtico que puede utilizarse para liberar protenas del espacio periplsmico.
En el caso de produccin de plsmidos se utiliza frecuentemente la lisis alcalina. Antes de la ruptura frecuentemente se diluye la corriente a un 5-10 % con
buffer para minimizar la desnaturalizacin del producto. En el caso de bacterias conteniendo CI, se requieren varios pasos por el homogeneizador a 500-1000
bars, para lograr el rompimiento y liberacin de los CI.
Remocin de desechos celulares Una vez que la clula se rompe y el
producto es liberado, los desechos son eliminados por medio de una o varias
operaciones como: centrifugacin, microfiltracin o filtracin por presin.
Cuando el producto es soluble, ste es recuperado en la fase ligera de una
centrfuga o en el filtrado de un filtro. Las centrfugas son eficientes para la
separacin de partculas grandes como los restos celulares, de tal manera que
cuando se usen para este efecto, deben ser acompaadas de una operacin de
filtrado para eliminar las partculas ms pequeas; debido a que stas pueden
ocasionar problemas en etapas de bioseparacin posteriores, principalmente en
las de cromatografa. Cuando se usan microfiltros para remover los desechos, se
requiere posteriormente realizar una diafiltracin.
Cuando el producto es insoluble (por ejemplo los cuerpos de inclusin), debe
ser separado primero de otras partculas y posteriormente tratado para que
adquiera su forma activa. Este es un problema comn de muchas protenas eucariticas producidas por microorganismos procariotes, por ejemplo la hormona
de crecimiento producida por E. coli. Las protenas recombinantes forman cuerpos de inclusin dentro de la clula husped. Estos pueden ser separados de
los restos celulares con una centrfuga de discos. La separacin es realizada por
resuspensin y recentrifugacin de la fase pesada en 2 o 3 pasos. Posteriormente
se pueden usar detergentes para remover otros contaminantes.
La separacin del producto de los desechos puede realizarse ya sea por ad-
2.4. DISEO
41
sorcin o por extraccin con solventes orgnicos o con algunas soluciones de

polmeros. Los sistemas de dos fases acuosas han sido aplicados para la recuperacin de protenas.
La separacin del producto de los desechos y su concentracin simultnea
puede ser alcanzada utilizando tcnicas de adsorcin ya sea con adsorbentes de
afinidad o de intercambio inico. En este proceso, las clulas rotas y el producto
son mezclados en un tanque agitado con el adsorbente. Posteriormente se realiza
un lavado en el cual muchos de los desechos y contaminantes son eliminados.
La adsorcin en lechos expandidos tambin se ha utilizado recientemente para
separar protenas de los restos celulares.
Renaturalizacin Las protenas eucariticas producidas por organismos
procariticos, frecuentemente forman cuerpos de inclusin en la clula recombinante. Estos cuerpos de inclusin pueden ser solubilizados mediante el uso de
sales y agentes reductores. Despus que la protena desnaturalizada es solubilizada, se eliminan los solubilizantes utilizando cromatografa o diafiltracin. Al
final se obtiene una solucin de protena diluida.
Etapa de recuperacin : Productos extracelulares La eliminacin de
biomasa es el primer paso que se realiza en un proceso de bioseparacin cuando
el producto es extracelular. Este paso se ajusta a la segunda regla heurstica:
remover primero la impureza que sea ms fcil. En esta operacin los equipos
ms empleados son: los filtros al vaco, la centrfuga de discos, la centrfuga
decantadora, los filtros prensa, los filtros con membranas y la flotacin. Cada
uno de ellos tiene ventajas y desventajas segn el tipo de producto y tipo de
clula, haciendo de la seleccin un problema difcil. No hay una alternativa nica
para todos los productos.
Etapa de concentracin Al final de la etapa de recuperacin el producto se
encuentra diluido y es necesario concentrarlo mediante operaciones como: ultrafiltracin, extraccin, smosis inversa, evaporacin, precipitacin y destilacin.
Ultrafiltracin Es una operacin usada ampliamente para la concentracin
de protenas. La membrana se selecciona para evitar el paso del producto y permitir el paso de las impurezas. La presin de operacin tpica vara entre 0.2 y
0.5 MPa y el flujo promedio entre 20 y 50 L/m2 -h.
Extraccin La extraccin con solventes es una operacin ampliamente
usada en la concentracin de productos biotecnolgicos, particularmente en la
obtencin de antibiticos. Se requiere que el coeficiente de particin del sistema
sea alto para poder llevar a cabo la concentracin del producto en el menor
nmero de etapas de contacto.
42
smosis inversa Se usan unidades con membranas de tamao de poro

pequeo para la concentracin de soluciones de productos con bajo peso molecular como aminocidos y antibiticos. Operan a altas presiones (4 a 6 MPa) y
a bajas temperaturas.
Evaporacin Se utilizan evaporadores de pelculas delgadas los cuales operan a bajas temperaturas (40-50 o C) al vaco. Estas unidades compiten en
el mercado con la ultrafiltracin y la smosis inversa para la concentracin de
compuestos tanto de alto como de bajo peso molecular.
Precipitacin Es una operacin usada para concentracin y purificacin.
Comnmente se usan sales, solventes y polmeros para la precipitacin selectiva
de compuestos de inters. La precipitacin es usada para remover contaminantes.
Destilacin En los procesos de bioseparacin esta operacin se utiliza generalmente para la recuperacin de solventes orgnicos como etanol y cido
actico.
Etapa de purificacin Las operaciones para la purificacin final dependen
fuertemente de la pureza requerida del producto, distinguindose los productos
farmacuticos por su alta pureza en comparacin a la de los productos industriales. Para productos de pureza relativamente baja como las enzimas para
detergentes, la operacin de purificacin final consiste slo en la eliminacin del
solvente. Para productos de alta pureza, las operaciones de purificacin finales
son normalmente la cromatografa y la ultrafiltracin.
Cromatografa Es una operacin que se realiza al final de un proceso,
en concordancia con la reglas heursticas: hacer las separaciones ms difciles y
caras al final. Existen diferentes tipos de cromatografa como la de intercambio
inico, la de filtracin por gel y la de afinidad, entre otras. Normalmente se
requiere de una secuencia de varias operaciones cromatogrficas para alcanzar
la pureza deseada del producto. Para la seleccin de la secuencia de estas operaciones deben observarse la cuarta y quinta regla heursticas: seleccionar
el esquema de bioproceso que permita aprovechar al mximo las diferencias
entre las propiedades del producto y los contaminantes; seleccionar y secuenciar
procesos que exploten diferentes fuerzas impulsoras de la bioseparacin. Los
principales tipos de cromatografas son los siguientes:
1. Cromatografa de filtracin en gel (SEC). Este tipo de cromatografa separa molculas con base a su tamao molecular; tiene dos aplicaciones
principales: remocin de pequeas molculas como sales y remocin de
protenas contaminantes del producto. En el fraccionamiento de protenas,
la filtracin por gel es lenta comparada con otras tcnicas cromatogrficas.
2. Cromatografa de intercambio inico. Esta separacin se basa en la diferencia de la carga molecular de las biomolculas. Puesto que la carga depende
2.4. DISEO
43
del pH y la fuerza inica, cualquier anin o catin en un soporte puede ser

usado para realizar la separacin. En la prctica sin embargo, la seleccin
normalmente est determinada por el pH al cual es estable el producto
que se desea purificar.
3. Cromatografa de afinidad. Las separaciones por afinidad o reconocimiento
molecular, estn basadas en las interacciones especficas entre biomolculas. Es una operacin apropiada en cualquier etapa de la purificacin del
producto y particularmente lo es para el manejo de grandes volmenes de
material con baja concentracin de producto y gran cantidad de contaminantes. Es una operacin altamente eficiente (ms del 90 %). Su limitante
es el alto costo de los materiales (ligandos) involucrados.
Ultrafiltracin La ultrafiltracin es comnmente utilizada entre pasos
cromatogrficos para intercambiar buffers (diafiltracin) y concentrar soluciones.
Etapa de acabado Las operaciones de acabado comprenden aquellas que
se realizan para obtener el producto en su presentacin final. Las principales
operaciones utilizadas son: cristalizacin, secado, esterilizacin y estabilizacin
del producto.
Cristalizacin La cristalizacin se utiliza para obtener el producto en
forma slida, mejorando su manejo y conservacin.
Secado Se realiza mediante secadores por aspersin, lechos fluidizados y
secadores en charolas. En el caso de productos termolbiles se utilizan los liofilizadores.
Esterilizacin Los microfiltros de membrana son utilizados para esterilizar soluciones biofarmacuticas, removiendo cualquier contaminacin bacteriana. Una limitante de estas membranas es la incapacidad para la remocin de
pirgenos y virus. Para minimizar el riesgo de contaminacin, el agua utilizada
deber estar libre de pirgenos.
Estabilizacin Para incrementar la vida del producto se utilizan como
agentes estabilizadores algunas sales como sulfato de amonio, cloruro de calcio
o cloruro de sodio. Algunos productos son ms estables como slidos.
2.4.2.
Anlisis y Evaluacin del Bioproceso
Una vez establecido el diagrama de flujo del bioproceso es necesario realizar

el anlisis econmico, ambiental y social del mismo. Este tipo de anlisis puede
apoyarse con el uso de paquetes computacionales apropiados.
44
Evaluacin econmica
El anlisis del bioproceso desde el punto de vista econmico comprende actividades como: a) el anlisis del mercado y el establecimiento de las especificaciones del producto y b) la evaluacin econmica del bioproceso.
Mercado y especificacin del producto El mercado es un factor muy
importante para el establecimiento de un bioproceso, ya que determina el precio
del producto (o la necesidad de su produccin) y el volumen de la demanda.
Es obvio que entre mayor sea el precio del producto, mayor es el ingreso esperado por ventas. La demanda y la participacin esperada sirven de base para
determinar el volumen de produccin. Uno de los objetivos cuando se disea
un bioproceso es maximizar la productividad (kg/L-ao) del producto en el
fermentador y el porcentaje de rendimiento global en las operaciones de bioseparacin, ya que esto minimiza el volumen de produccin (VPrd), que se puede
expresar como:

kg
[Participacin ( %)]
Demanda
ao

VPrd =
kg
Productividad
[Rendimiento global ( %)]
L ao
(2.1)
El mercado de los productos biotecnolgicos puede enmarcarse entre dos

casos extremos (Tabla 2.2): a) productos de alto valor, bajo volumen de produccin y libres de competencia, como el t-PA y b) productos de alto volumen
de produccin, en mercados muy competitivos, como la rBST. En los productos
libres de competencia, es posible que se seleccione el primer proceso exitoso que
se logre en el laboratorio. Sin embargo, si el mercado del producto aumenta y
aparecen nuevos competidores, la economa del proceso cobra especial importancia (Spalding, 1991).
Tabla 2.2: Influencia de la demanda del mercado en el precio del producto. Datos
de USA.
Compaa
GENENTECH
Diversas
Producto
t-PA (Activasa)
rBST
$/dosis
$ 2,000.00
$
0.50
No. dosis
150,000
5 108
Masa
15 kg
50 ton
Datos Spalding, 1991

* Somatotropina de Bovino
Actualmente varios productos biotecnolgicos modernos estn libres de competencia, pero existe una tendencia hacia un incremento en la competitividad
2.4. DISEO
45
del mercado, particularmente en el uso de genricos por patentes vencidas. Es

en esta transicin donde el diseo adecuado de los bioprocesos cobra especial
relevancia.
El primer paso en la seleccin de un proceso es la definicin del objetivo del
mismo, especificando claramente la pureza y rendimiento que se desea obtener.
Con frecuencia las especificaciones sobre pureza del producto son establecidas
por regulaciones legales o por el mercado. Las especificaciones de rendimiento
son fijadas para asegurar la economa del proceso. De manera ideal el rendimiento debe ser una variable dependiente del diseo de proceso, en la bsqueda de
la optimizacin del mismo. En la prctica, debido a limitaciones de tiempo esta
fase no siempre se concluye (Null, 1987).
Ejemplo 2.2. Variacin del volumen de fermentacin con la productividad y el rendimiento.
Graficar el efecto de la productividad (intervalo 0.01 0.20 kg/Lao) y
rendimiento global (intervalo 10 100 %) sobre el volumen de fermentacin,
cuando la demanda de un producto es de 1000 kg/ao y la participacin de
mercado del 50 %.
Solucin:
El programa MATLAB para la solucin del ejemplo se presenta en la Figura
2.3.

La Figura 2.4 muestra el efecto de la productividad y el rendimiento global
sobre el volumen de fermentacin bajo las condiciones estudiadas. Conforme la
productividad y el rendimiento disminuyen, el volumen de fermentacin aumenta en un amplio rango de 2, 500 a 500, 000 L.
46
Figura 2.4: Solucin Ejemplo 2.2. Variacin del volumen de fermentacin con la
productividad y el rendimiento.
Economa del bioproceso La evaluacin econmica del bioproceso es una
herramienta que involucra el anlisis de los ingresos esperados, los costos de
adquisicin del equipo, la inversin total de capital, el costo anual de operacin,
el flujo de efectivo y la rentabilidad del proceso (Datar y Rosn, 1990).
Ingresos anuales Los ingresos anuales esperados (I) de un proyecto, se
obtienen de multiplicar del precio unitario del producto (P ) por las unidades de
producto(s) vendidas anualmente (X) , es decir:
I = PX
(2.2)
Anlisis de costos Una vez que ha sido definido el objetivo de la bioseparacin, esto es, que se ha identificado el producto que se desea obtener y se
ha establecido el bioproceso, se deben estimar los costos asociados al mismo. En
la Figura 2.5 se presenta un enfoque para la estimacin de costos basado en el
costo de adquisicin del equipo.
Costo de adquisicin de equipo. Una vez definido el diagrama de flujo
propuesto y el volumen de producto a producir, se dimensionan los equipos, se
estima su costo y se calcula el costo de adquisicin del equipo (P C). El costo
de adquisicin de un equipo representa el desembolso para adquirirlo y ponerlo
en condiciones de ser utilizado en la actividad. ste incluye la compra y dems
erogaciones necesarias, como fletes, seguros, honorarios de aduana, trmites de
registro en el caso de ser necesario, la construccin de plataformas, el montaje,
la puesta en operacin, los ensayos de puesta en marcha, el entrenamiento del
2.4. DISEO
47
Figura 2.5: Pasos para la estimacin del capital de inversin y los costos de
operacin de un bioproceso.
personal, entre otros. Puede incluirse tambin un estimado del costo de equipo
perifrico necesario, no incluido en el diagrama de flujo. Como el PC es la base
de la estimacin del capital, la precisin del clculo depender en gran medida
de este rubro. Las cotizaciones de los fabricantes y los datos de la literatura son
las principales fuentes de informacin.
Inversin total de capital. A partir del costo total de adquisicin del
equipo, mediante el uso de multiplicadores se estima el monto de la inversin
total de capital (T CI). En la Tabla 2.3 se presentan los rubros que integran la
T CI y algunos valores tpicos de los multiplicadores utilizados.
La inversin total de capital (T CI) se refiere a todos los fondos necesarios

para el diseo, construccin y arranque de la planta. Cuando se comparan dos
procesos de bioseparacin alternativos, se escoge el que requiere mayor capital
solamente si la rentabilidad generada es tan grande que justifica la diferencia de
requerimientos de capital entre ambas alternativas.
En este enfoque se utilizan multiplicadores para el clculo de los diversos
conceptos de la inversin total de capital (T CI). sta se integra por la inversin fija directa (DF C), el capital de trabajo (W C) y el costo de arranque y
validacin (SV C), de tal manera que:
T CI = DF C + W C + SV C
(2.3)
La inversin fija directa est relacionada con los desembolsos para construir
la planta. El capital de trabajo es la inversin adicional necesaria para desa-
48
Tabla 2.3: Rubros para la estimacin de la inversin total de capital (TCI).

Rubro
Concepto
Monto
Costos directos totales de planta (T P DC)
Adquisicin de equipo
1.00 P C
Instalacin de equipo
0.50 P C
Tubera
0.40 P C
Instrumentacin
0.35 P C
Aislamiento
0.03 P C
Electricidad
0.15 P C
Edificios
0.45 P C
Acondicionamiento
0.15 P C
Servicios
0.50 P C
Costos indirectos totales de planta (T P IC)
Ingeniera
0.25 T P DC
Construccin
0.33 T P DC
Costo total de planta (T P C)
T P DC + T P IC
Otras inversiones (AC)
Consultoras
0.05 T P C
Contingencias
0.10 T P C
Inversin fija directa (DF C)
T P C + AC
Capital de trabajo (W C)
Mano de obra
30 das
Materias primas
30 das
Servicios
30 das
Tratamientos
30 das
Capital de arranque y validacin (SV C)
0.05 DF C
rrollar la operacin normal de la planta una vez construida y comprende los
requerimientos de sueldos, servicios e inventarios. Los costos de arranque y validacin estn asociados a las erogaciones necesarias antes del la operacin de
la planta.
Ejemplo 2.3. Clculo de la inversin total de capital

Una planta mediana de produccin de MAbs se ha diseado para operar
con un fermentador de produccin de un volumen de 20, 000 L (Farid, 2007).
El costo total de la adquisicin del equipo se ha estimado en $21,400 (todo en
miles). El capital de trabajo es de $3,294 y el costo de arranque y validacin
de $30,654 (por arriba del valor tpico).
Se pide: Calcular el monto de la inversin total de capital.
Solucin: En la tabla siguiente se presenta el clculo de la inversin fija
directa (DFC) utilizando los multiplicadores.
2.4. DISEO
49
Rubro
Clculo
Monto
1.00 21, 400
$21, 400
0.50 21, 400
10, 700
Tubera
0.40 21, 400
8, 560
Instrumentacin
0.35 21, 400
7, 490
Aislamiento
0.03 21, 400
642
Electricidad
0.15 21, 400
3, 210
Edificios
0.45 21, 400
9, 630
Acondicionamiento
0.15 21, 400
3, 210
Servicios
0.50 21, 400
10, 700
T P DC
3.53 21, 400
75, 542
Ingeniera
0.25 75, 542
18, 886
Construccin
0.33 75, 542
24, 929
T P IC
0.58 75, 542
43, 814
TPC
T P DC + T P IC
119, 356
Consultoras
0.05 119, 356
5, 968
Contingencias
0.10 119, 356
11, 936
AC
0.15 119, 356
17, 904
DF C
T P C + AC $137, 260
Utilizando la ecuacin (2.3) se tiene:
T CI = $137, 260 + $3, 294 + $30, 654 = $171 , 208
Costo anual de operacin. El costo de operacin o fabricacin est integrado por todos los costos para operar la planta y recobrar la inversin de
capital. Como se muestra en la Tabla 2.4, el costo anual de produccin se divide comnmente en dos partes: costos de fabricacin y gastos generales. En los
costos de fabricacin se ubican los costos de operacin directos, los costos fijos
y la parte proporcional de los gastos generales de la planta.
Dentro de los costos de operacin directos se puede resaltar los costos de las
materias primas que son consumidas directamente en el proceso de produccin
del producto o que son usadas en la recuperacin del mismo, debido a que stas
constituyen la mayor parte de estos costos. Los costos de las materias primas
son ms relevantes en sistemas de produccin basados en procesos biolgicos
que en plantas qumicas convencionales. En los primeros las materias primas
pueden representar del 30 al 80 % del costo de produccin, mientras que en los
convencionales slo representan del 10 al 50 % de ese costo (Kalk y Langlykke,
1986).
50
Tabla 2.4: Rubros del costo anual de operacin.

I. Costos de Operacin Directos Variables
A. Materias primas y suministros
a. Materia prima primaria
b. Materia prima secundaria
c. Fletes
d. Operacin
e. Mantenimiento
f. Laboratorio
g. Otros
B. Mano de obra y supervisin
a. Salarios y estmulos
b. Horas extras
C. Servicios
a. Vapor
b. Electricidad
c. Agua
d. Tratamiento de desechos
II.
Costos Fijos
A. Depreciacin
B. Impuestos
C. Seguros
D. Renta
III. Proporcin de Gastos de Generales de la Planta
IV. Administracin
V.
Mercadotecnia
VI. Investigacin y Desarrollo
Para estimacin de costos:
Costo de Fabricacin (CF) = I+II+III
Gastos Generales (GG) = IV+V+VI
Costo Total del Producto = CF+GG
En los procesos de produccin biotecnolgicos, no solamente las materias

primas principales (aquellas que se convierten directamente a producto) tienen
un impacto significativo sobre la economa del proceso, sino que tambin las
materias primas secundarias como cofactores, enzimas, inductores y materiales
de recuperacin, influyen considerablemente en los costos de produccin. Los
sueldos y salarios representan una fraccin importante del total de los costos de
fabricacin, esto es, del 10 al 40 %. Los costos fijos comprenden la depreciacin de
maquinaria y equipo, impuestos y seguros principalmente. La parte proporcional
de los gastos generales de la planta que se le asignan al producto, son aquellos
que se requieren para la operacin eficiente de la planta pero no son asignables
directamente al producto y se estiman entre el 10 y 50 % de los sueldos y salarios
(Kalk y Langlykke, 1986). En la Figura 2.6 se presenta una estructura de costos
tpica para un producto biotecnolgico.
2.4. DISEO
51
Figura 2.6: Estructura de costos tpica de un producto biotecnolgico. I) costos

de operacin directos (59 %), II) costos fijos (11 %), III) Proporcin de gastos
generales de planta (10 %) y IV) Gastos generales (19 %).
Flujo de efectivo Una vez que se han estimado los ingresos, la inversin
total de capital y los costos de operacin de un proyecto, es necesario estimar
el flujo de efectivo del proyecto. El flujo de efectivo anual (para cada uno de los
aos del proyecto) se puede calcular de la siguiente manera:
Ingresos
Costo operacin
Utilidad bruta
ISR
Utilidad neta
+ Depreciacin
Flujo de efectivo
Anlisis de rentabilidad Con los flujos de efectivo estimados es posible
evaluar la rentabilidad del bioproceso. Existen varios ndices que se utilizan en
forma integral para medir la rentabilidad siendo los ms utilizados el margen
bruto, el retorno sobre la inversin y el periodo de pago en aos.
Margen bruto. Se define como la utilidad bruta sobre las ventas netas.
Expresa la utilidad bruta que se est generando por cada peso vendido y se
puede expresar como:
Margen bruto =
Utilidad bruta
100
Ingresos
(2.4)
Retorno sobre la inversin (ROI). Se define como el flujo de efectivo

sobre la inversin total de capital. Es una medida de los beneficios del proyecto
y se expresa como:
52
Flujo de efectivo
100
(2.5)
Inversin total
Periodo de retorno. Corresponde al periodo de tiempo necesario para que
el flujo de efectivo cubra el monto total de la inversin. Es una medida del
tiempo necesario para recuperar la inversin. Para caso particular que el flujo
de efectivo anual sea igual a travs de los aos, se tiene:
ROI =
Inversin total
(2.6)
Flujo de efectivo
Ejemplo 2.4. Rentabilidad de un proceso para la produccin de
MAbs.
Se desea producir MAbs y se cuenta con los siguientes datos de mercado y
de produccin:
Periodo de retorno =
Concepto
Precio
Dosis
Demanda
Conc. fermentador
Rendimiento
Ciclo
Ao
Mercado
Produccin
Monto
$200, 000/kg
1.0 g/dosis
1, 555, 260 dosis/ao
1.992 g/L
63.5 %
84 h
330 das
La demanda anual es:

Demanda = 1.0
g
dosis
kg
kg
1, 555, 260
3 = 1, 555.26
dosis
ao
10 g
ao
El volumen de fermentacin total (Vt ) se estima en:

1, 555.26
Vt =
kg
ao
g
kg
1.992
0.635
L 1000 g
= 1.23 106
L
ao
Volumen de fermentacin por ciclo (Vc ):

L
L
ao
Vc =
= 13, 045
da
ciclo 24 h
ciclo
330
ao 84 h
da
1.23 106
Este volumen de 13, 045 L/ciclo puede ser manejado por un solo fermentador.
Si se considera el volumen de fermentacin como el 70 % del volumen total del
fermentador, entonces el volumen del fermentador seleccionado Vf es:
Vf = 20, 000 L
2.4. DISEO
53
Considerando este fermentador se realizan las siguientes estimaciones de costos (miles dlares).
Inversin total de capital.
T CI = $171 , 208
Costo anual de operacin (miles).
Costos de operacin directos
Materias primas y suministros
materia prima primaria
consumibles
laboratorio
Mano de obra y supervisin
Servicios
luz, agua, electricidad
tratamiento de desechos
Costos Fijos
depreciacin
impuestos, seguros y renta
Total
$16, 524
22, 756
9, 772
19, 544
46
82
13, 039
12, 148
$93, 911
Se pide estimar para este proceso:

a) Ingreso anual
b) El flujo de efectivo anual (ISR = 40 %)
c) El margen bruto
d) El retorno sobre la inversin.
e) El periodo de pago
f) El costo promedio del producto.
Solucin:
a) Ingreso anual (miles) por ecuacin (2.2),
I = 1, 555.26
$200, 000
kg
= $311, 052
ao
kg
b) Flujo de efectivo (miles).

Ingreso anual
Menos costo anual
Utilidad bruta
Menos 40 % ISR
Utilidad neta
Ms depreciacin
Flujo de efectivo
$311, 052
93, 911
217, 141
86, 856
130, 285
13, 039
$143, 324
54

c) Margen bruto por ecuacin (2.4),
Margen bruto =
$217, 141
100 = 70 %
$311, 052
d) Retorno de la inversin por ecuacin (2.5),

ROI =
$143, 324
100 = 83.7 %
$171 , 208
e) Periodo de retorno por ecuacin (2.6),

Periodo de retorno =
$171, 208
= 1.2 aos
$143, 324
f) El costo promedio (miles) se obtiene mediante el cociente del costo anual

y la produccin estimada del producto, esto es:
$93, 911
$60.39
ao
=
Costo promedio =
kg
kg
1, 555.2
ao
Evaluacin ambiental
Durante el desarrollo del bioproceso se debe realizar la evaluacin ambiental
que comprende identificar, analizar y manejar tan pronto como sea posible,
los daos potenciales a la salud, la seguridad y el ambiente que se derivan del
mismo, para evitar consecuencias negativas (riesgos, costos y mayores tiempos
de desarrollo). La evaluacin de los efectos ambientales de un bioproceso puede
contribuir significativamente a evitar agravar los problemas ambientales como
el cambio global y el agotamiento de los combustibles fsiles. Existen varios
reportes en la literatura para realizar este tipo de evaluaciones basados en diferentes suposiciones, lmites y metodologas, por lo que sus resultados son difciles
de comparar ( Hermann et al., 2007).
Recientemente, ha sido propuesto un mtodo con una estructura sencilla
que permite realizar una evaluacin ambiental en las primeras etapas de un
bioproceso en desarrollo (Biwer y Heinzle, 2004). El mtodo puede manejar la
incertidumbre en las fases tempranas del desarrollo del bioproceso, incluyendo
los impactos ambientales relevantes y es simple y fcil de aplicar. En el mtodo
se establecen 14 categoras de impacto, donde cada compuesto es clasificado
de acuerdo a la metodologa ABC, en funcin de su relevancia alta, media o
baja dentro de una de las categoras. Por ejemplo, en la categora de Grado
de toxicidad, una sustancia muy txica se asigna como clase A, una sustancia
menos txica a la clase B y una sustancia no txica a la clase C (Zhang et al.,
2008).
Las categoras de impacto se agrupan a su vez en seis grupos: Recursos,
Entradas grises, Riesgo del componente, Organismos, Aire y Agua/Suelo. A
2.4. DISEO
55
partir de stas se deducen los factores ambientales de los componentes de entrada

y de los componentes de salida, que representan la relevancia ambiental de cada
sustancia. Estos factores se combinan con los balances de masa para generar un
conjunto de ndices que pueden ser utilizados para optimizar el comportamiento
ambiental del bioproceso de una manera integral. Particularmente, el ndice de
masa (MI) permite establecer la masa consumida de un componente por unidad
de producto final y el ndice ambiental (EI) se utiliza para evaluar la relevancia
ambiental de determinado compuesto. La suma de los ndices individuales se
conoce como ndice general y permite comparar procesos alternativos.
Evaluacin social
Los bioprocesos pueden contribuir al desarrollo sustentable, pero esto no
ocurre automticamente. Para evaluar la sustentabilidad social de los bioprocesos, recientemente se han desarrollado varios conceptos y una metodologa
novedosa (Geibler et al., 2005). Mediante un enfoque multiperspectivo se han
identificado ocho aspectos que son significativos para realizar esta evaluacin
(Tabla 2.5).
Tabla 2.5: Indicadores para describir y evaluar la sustentabilidad social.
Aspecto
Salud y seguridad
Calidad de las
condiciones de trabajo
Empleo
Educacin y entrenamiento
Manejo del conocimiento
Potencial de innovacin
Aceptacin y beneficio
social del producto
Dilogo social
Indicadores
Desarrollo tecnolgico Aplicacin de la tecnologa
- Grupos de riesgo
- Riesgo esperado
- Factores de riesgo
- Sustancias txicas
- Pruebas en voluntarios
- Mediciones de salud
- Tiempo de trabajo
- Tiempo de trabajo esperado
- Participacin de mujeres - Participacin esperada
- Condiciones de trabajo
- Medidas para mejorar stas
- Estabilidad
- Estabilidad esperada
- Regiones de creacin
- Regiones posibles
- Continuidad
- Efecto en el mercado laboral
- reas de entrenamiento
- Planeacin
- Manejo de recursos
- Necesidades
- Calidad del intercambio
- Planeacin
- Sistemas de informacin
- Planeacin
- Potencial comercial
- Grado proyectado
- Contribucin cientfica
- Penetracin de mercado
- Patentes
- Nmero y tipos
- Participacin de clientes - Aceptacin del producto
- Uso de Ing. Gentica
- Planeacin
- Beneficio social
- Contribucin
- Reportes voluntarios
- Canales de informacin
- Comunidad local
- Comunicacin planeada
- Participacin poltica
- Promocin del dilogo
56
Los aspectos que se consideran son: salud y seguridad, calidad de las condiciones de trabajo, empleo, educacin y entrenamiento, manejo del conocimiento,
potencial de innovacin, aceptacin y beneficio social del producto, y dilogo
social. Para cada aspecto se han identificado 8 indicadores (en la Tabla 2.5 slo
aparecen algunos de stos) que cubren dos niveles de evaluacin: a. desarrollo
tecnolgico y b. aplicacin de la tecnologa. Esta distincin se ha hecho debido a
que las condiciones en que se desarrolla un bioproceso pueden ser muy diferentes
a las condiciones de su aplicacin. A cada indicador se le asigna una puntuacin
mxima de 3 puntos, de tal manera que cada nivel de evaluacin puede alcanzar
una puntuacin mxima de 96 puntos (8 aspectos 4 indicadores 3 puntos).
Este mtodo sencillo permite evaluar la sustentabilidad social de un bioproceso
y puede ser adaptado a diferentes contextos.
2.5.
Sumario
El diseo de un bioproceso comprende diversas actividades basadas en la

experiencia, la teora y el apoyo computacional disponible. Estas actividades
comprenden la sntesis, el anlisis, la evaluacin y la optimizacin del bioproceso. La sntesis del bioproceso consiste en establecer el diagrama de flujo del
bioproceso, que en la prctica se realiza mediante el mtodo heurstico. Actualmente, existen diversos paquetes computacionales para realizar el anlisis y la
evaluacin del bioproceso a partir del diagrama de flujo establecido.
2.6. PROBLEMAS
2.6.
57
Problemas
2.1. Rendimiento global. El proceso de obtencin de una enzima consta

de cuatro operaciones de separacin, cada una de ellas presenta un rendimiento
del 80 %. Estimar el rendimiento global del proceso.
2.2. Precio y ROI.
insulina recombinante:
Se cuenta con los siguientes datos para producir
(A) Mercado
Produccin
(B) Costos anuales
Ao 1
Aos 2-10
(C) Depreciacin
(D) Inversin fija directa y de arranque
(E) Capital de trabajo
(F) ISR
1, 000 kg/ao
Miles
$34, 877.00
$31, 525.00
$2, 766.00
$30, 468.00
$2, 742.00
45 %
Se pide estimar:
a) El precio de venta para obtener un retorno sobre la inversin (ROI) del
40 %.
b) El periodo de retorno.
Resp. a) $54, 000/kg
2.3.Comparacin de esquemas de bioprocesos. Una protena puede ser
purificada por afinidad, mediante los siguientes 2 enfoques:
a) La protena se produce fusionada a una seal peptdica y a una cola
que permiten que la protena sea excretada al medio de cultivo y pueda ser
eficientemente purificada por afinidad. Despus de la purificacin la protena
requiere de un paso enzimtico para eliminar la cola.
b) La protena se produce en forma convencional y se purifica mediante
afinidad con anticuerpos monoclonales como ligandos.
Se pide: Desarrollar y comparar los diagramas de flujo de los dos enfoques.
2.4. Esquemas de produccin en animales y plantas. Actualmente
existe un gran inters en la produccin de protenas y vacunas tanto en animales como en plantas, dado que ofrecen ventajas como mayor facilidad de la
purificacin respecto a sistemas bacterianos.
Se pide: Desarrollar y comparar los diagramas de flujo para la produccin
de una protena a partir de leche de cabra y de plantas de tabaco transgnicas.
Determine la informacin necesaria para realizar la evaluacin del mismo.
2.5. Efecto de la concentracin de los caldos sobre la escala de
produccin. Una planta industrial con un volumen de produccin V P rd (L),
58
produce un nmero de lotes por ao n, con una concentracin de producto C

(g/L). La recuperacin global es RG.
Se pide:
a) Escribir la expresin de la produccin anual de la planta P A (kg/ao) en
funcin de n, V P rd, C y RG.
b) Escribir una expresin para calcular el volumen de produccin (escala)
V P rd (L) para cumplir con una demanda de D (kg/ao) .
c) Graficar el efecto de la demanda sobre la escala de produccin para n = 20
lotes/ao, RG = 50 % y valores de C de 0.5, 1.0, 1.5, 2.0 y 2.5 g/L.
Resp. inciso c)
Figura 2.7: Solucin del problema 2.5 inciso c. n = 20 lotes/ao y RG = 50 %.

2.6. Esquema de bioseparacin de un virus. Un nuevo virus del SARS
(150 nm de dimetro) se produce en un cultivo de clulas Vero inmovilizadas en
microacarreadores, para la produccin de una vacuna. Inicialmente se propagan
las clulas a una alta concentracin y posteriormente se infectan con el virus
para su reproduccin. Las clulas infectadas eventualmente se rompen y secretan
los nuevos virus al medio, producindose adems una cantidad apreciable de
desechos celulares. Para la recuperacin de los microacarreadores (partculas de
200 m) se utiliza una malla de 50 m. A partir del filtrado se recuperan los
virus separndolos de los restos celulares y dems contaminantes.
El bioproceso de produccin cuenta con el siguiente equipo que puede ser
utilizado en ms de un paso:
a) Una unidad de microfiltracin con poros de 0.1 m.
b) Una columna cromatogrfica de SEC que retiene protenas de peso molecular menor a 300 kDa.
c) Una unidad de ultrafiltracin de 200 kDa de tamao de corte (poro de 10
nm).
2.6. PROBLEMAS
59
d) Una columna cromatogrfica de intercambio catinico.

Se pide: Disear el esquema de bioseparacin del virus y explicar su fundamentacin. Los equipos pueden ser reutilizados varias veces.
2.7. Esquema de bioseparacin de una protena extracelular. En un
bioproceso con clulas de mamfero se obtiene como producto extracelular la
protena MX de 100 kDa de peso molecular y punto isoelctrico de 6.5. A la
salida del fermentador de produccin se obtienen 1000 L de caldo con un pH =
7.1 y con la composicin siguiente:
Componente
Clulas
Protena MX
Protena total
Orgnicos de bajo PM
Sales inorgnicas
Cantidad por litro

1.0 g
1,000 unidades
2.0 g
3.0 g
10.0 g
En el bioproceso se utilizan las siguientes bioseparaciones unitarias:

a) Una ultrafiltracin de 40 kDa de tamao de corte.
b) Una diafiltracin de 4 kDa de tamao de corte.
c) Una microfiltracin de 1.0 m de tamao de poro.
d) Una columna cromatogrfica de intercambio catinico de elucin por gradiente.
e) Una columna de afinidad con un anticuerpo para protena MX como
ligando, cuya mxima capacidad se obtiene a un pKa = 8.5.
El bioproceso se puede representar de la siguiente forma:
Representacin del bioproceso del Ejemplo 2.7.

La composicin de las 5 corrientes a la salida de las bioseparaciones es la
siguiente:
Componente
Clulas (g/L)
Protena MX (unidades/L)
Protena total (g/L)
Orgnicos de bajo PM (g/L)
Sales inorgnicas (g/L)
Volumen colectado (L)
pH
0.0
500
1.0
1.5
8.0
1800.0
7.0
Corrientes (no ordenadas)

0.0
0.0
0.0
0.0
9, 800 8 105 9 106 1 106
18.5
500.0
560.0
625.0
1.2
0.0
0.0
0.0
5.0
5.0
5.0
5.0
90.0
1.0
1.3
0.8
7.0
4.0
6.0
6.0
60
Se pide:
a) Establecer la secuencia de las bioseparaciones(1-5) y especificar la composicin de corrientes (A-D) del bioproceso y razonar su respuesta.
b) Si la solucin final de protena MX debe estar a un pH =7.4, se requieren
bioseparaciones adicionales?.
2.8. Secuencia de bioseparacin de un antgeno. Un antgeno de superficie de peso molecular de 100 kDa de un virus es producido en un cultivo
de clulas de ratn recombinantes. Al final de la fermentacin el caldo de cultivo contiene 107 clulas/cm3 y 500 g/cm3 de la protena de inters. El caldo
contiene adems, aproximadamente 900 g/cm3 de protenas contaminantes (no
consumidas como nutrientes o liberadas en la lisis de algunas clulas) y varios
compuestos de bajo peso molecular como aminocidos, vitaminas y sales. La
mayora de las protenas contaminantes tienen un peso molecular mayor a 50
kDa. El producto requiere un alto grado de pureza dado que es para uso humano
en forma inyectable.
En el bioproceso se utilizan las siguientes bioseparaciones unitarias:
a) Una microfiltracin (dimetro de poro 0.2 m)
b) Una columna de intercambio catinico que se opera con un gradiente de
elucin de pH con buffer de acetatos.
c) Una columna cromatogrfica de SEC de rango entre 50 y 150 kDa.
d) Una ultrafiltracin de tamao de corte de 10 kDa.
e) Una columna de intercambio aninico que se eluye con un gradiente salino
de NaCl.
f) Una unidad de diafiltracin para intercambio de buffers.
g) Una columna de slica gel para adsorcin de DNA que es altamente selectiva
h) Uno de los equipos se utiliza ms de una vez.
Los datos de control de calidad del bioproceso sobre la actividad especfica y
la concentracin del producto, as como la concentracin de DNA contaminante,
se presentan en la siguiente tabla:
Paso
1
2
3
4
5
6
7
8
Producto
g/cm3 g/g total
500
0.36
5,000
0.35
9,000
0.50
9,000
0.50
8,000
0.95
1,000
>0.99
800
>0.99
3,000
>0.99
DNA
pg/mg
ND
ND
ND
ND
2
0.1<
0.1<
0.1<
Operacin
Se pide: Establecer la secuencia de las bioseparaciones que se emplean y

razonar su respuesta.
2.6. PROBLEMAS
61
2.9. Esquema de bioseparacin de una polimerasa resistente a temperatura. Se va a producir DNA polimerasa que es estable a 90 C y ha sido
clonada en E. coli de Archeabacterium. La E. coli no es termoflica de tal manera que prcticamente todas sus protenas nativas son destruidas si se someten
a un tratamiento a 60 C por 30 min. La polimerasa ser utilizada en un procedimiento de PCR para elaborar un producto de DNA que se va utilizar en un
chip de genes. Por lo tanto, la polimerasa no requiere estar muy pura, pero si
libre de DNA y RNA y enzimas relacionadas con DNA.
Se pide: Proponer un esquema de bioseparacin de la DNA polimerasa.
2.10. Preparacin de soluciones. Una planta prepara lotes de 1000 L de
solucin 2.0M de NaCl. Esta solucin es utilizada para regenerar una columna de
intercambio aninico de 70 L de volumen de operacin, para lo cual se requieren
3 CV de solucin 2.0M de NaCl por cada corrida.
Se pide: Estimar el nmero de corridas que pueden realizarse por cada lote
de solucin preparada.
62
2.7.
Bibliografa
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Parte II
Recuperacin del Producto
65
En esta Parte II del libro se revisan las operaciones de remocin de insolubles
y de ruptura celular que son utilizadas en las primeras etapas de los esquemas
de bioseparacin de acuerdo a las tres primeras reglas heursticas de la seleccin
de un bioproceso. Estas operaciones presentan retos importantes debido a que
deben ser ejecutadas de manera expedita para minimizar prdidas y cumplir
con las normas requeridas (Roush y Lu, 2008).
En la remocin de insolubles de un caldo pueden ser utilizados diversos
tipos de equipos. La seleccin depende de varios factores particularmente del
tipo de material a tratar, as como de la disponibilidad, eficiencia y costo de
los equipos. Los principales componentes insolubles que se consideran en esta
parte son clulas enteras, restos celulares, precipitados y cuerpos de inclusin.
Las operaciones tpicas de remocin de insolubles son: a) la filtracin que es
muy utilizada para la separacin de hongos filamentosos y en la clarificacin
de caldos y b) la centrifugacin que es empleada en la separacin de levaduras,
bacterias y clulas de mamferos. Estas operaciones se tratan en los Captulos 3
y 4, respectivamente.
Cuando el producto de inters es intracelular despus que las clulas han
sido separadas del caldo es necesario romperlas. En el Captulo 5 se presentan
los fundamentos de la ruptura celular, los principales equipos que se emplean
en esta operacin a nivel industrial y las metodologas para su diseo.
Captulo 3
Filtracin
3.1.
Introduccin
La filtracin consiste en la separacin de un slido de un fluido por accin

de un medio filtrante y un gradiente de presin. La filtracin puede ser utilizada para recuperar un slido como en una cosecha celular o remover un slido
como en los procesos de eliminacin de virus. En los procesos biotecnolgicos
se utilizan tres tipos de mecanismos de filtracin (Fig. 3.1): a) filtracin con
formacin de torta o filtracin convencional, b) filtracin de lecho profundo y c)
filtracin con membranas.
En la filtracin con formacin de torta los slidos se depositan sobre el medio
filtrante formando una pasta, mientras que en la filtracin de lecho profundo los
slidos se depositan dentro del medio filtrante. La filtracin por membrana se
realiza utilizando membranas especiales de tamao de poro muy pequeo, que
generalmente operan con flujo paralelo a la membrana (cruzado), de tal manera
que no hay un depsito de slidos sobre la membrana sino una concentracin
del caldo.
El objetivo de este captulo es presentar los aspectos fundamentales de la
filtracin convencional y la filtracin de lecho profundo, as como su aplicacin
en la filtracin de caldos biolgicos. La filtracin por membranas se revisa en el
captulo 10.
La seccin 3.2 de este captulo centra la atencin en los fundamentos de la
filtracin. Los principales equipos de filtracin que se utilizan a nivel proceso
se presentan en la seccin 3.3. La seccin 3.4 se dedica a presentar los aspectos
ms relevantes del diseo de filtros convencionales y de lecho profundo.
3.2.
Fundamentos
La filtracin forma parte de un conjunto de operaciones llamadas Bioseparaciones Slido-Lquido (BSL). Para llevar a cabo un proceso de BSL generalmente
es necesario seleccionar entre una operacin de filtracin y una operacin de sedi-
68
CAPTULO 3. FILTRACIN
Figura 3.1: Mecanismos de filtracin. a) Filtracin con formacin de torta, b)

Filtracin de lecho profundo y c) Filtracin con membrana.
mentacin (como la centrifugacin). Frecuentemente la decisin es instrumentar
una combinacin de estos dos tipos de operaciones.
Debido a la naturaleza de los caldos que se manejan en bioseparaciones,
es comn que stos sean pretratados mediante agentes fsicos o qumicos para
mejorar su comportamiento en las operaciones de separacin slido-lquido a
que van a ser sometidos.
Un aspecto fundamental en el tratamiento de la operacin de filtracin es
la teora bsica existente, la cual contribuye al diseo, seleccin y operacin
racional de los diferentes equipos de filtracin. De particular inters es observar
como esta teora puede ser utilizada en la filtracin de caldos biolgicos.
Con base a lo anterior, esta seccin se centra en cuatro aspectos fundamentales:
La filtracin como parte de los sistemas de BSL.
El pretratamiento de caldos biolgicos.
La teora de la filtracin convencional.
La teora de filtracin de lecho profundo.
3.2.1.
La Filtracin como Parte de los Sistemas de BSL
Un proceso de separacin slido-lquido (Fig. 3.2) consta generalmente de

una o ms etapas (Tiller, 1974 ), entre las que destacan las siguientes: a) pretratamiento, b) concentracin, c) separacin de slidos y d) postratamiento.
El pretratamiento mejora las propiedades del caldo para facilitar la bioseparacin. La concentracin de slidos permite una separacin gruesa de slidos y
3.2. FUNDAMENTOS
69
Figura 3.2: Etapas y mtodos de las BSL. Adaptada de Tiller, 1974.

c
Reproducida con el perm iso de M cGraw-Hill Inc. . Copyright 1974.
disminuir el volumen a manejar, lo que puede reducir los costos del proceso global de separacin slido-lquido. La mayor parte de los slidos es obtenida en la
etapa de separacin. Los slidos recuperados pueden requerir un postratamiento
de lavado o secado de acuerdo con los requerimientos del proceso.
En el diseo y seleccin del bioproceso de BSL es necesario considerar varios
factores de orden tcnico que deben conjuntarse para una adecuada decisin. En
la Tabla 3.1 se presentan algunos de estos factores agrupados de acuerdo a los
requerimientos del proceso, las propiedades del caldo y los equipos disponibles.
Tabla 3.1: Factores para el diseo y seleccin de procesos de BSL.
Requerimientos
del Proceso
Flujo
Intermitente o continuo
% Separacin
Postratamientos
Esterilidad
Propiedades
del Caldo
Tam ao de partcula
Densidad
Viscosidad
Tiemp o sedim entacin
% Slidos
Tip o de torta
Espum eo
Toxicidad
Labilidad
Caractersticas
del Equip o
Capacidad
Interm itente o continuo
Tam ao de partcula
Concentracin m xima
Capacidad de lavado
Esterilidad
Claridad de la descarga
En general, todos los sistemas mecnicos de BSL estn basados en dos principios que dan origen a las operaciones de sedimentacin y filtracin (Svarovsky,
2000). En el proceso de sedimentacin la separacin se basa en una diferencia de
densidad entre la fase slida y la fase lquida. Entre mayor sea esta diferencia la
separacin es ms fcil. Cuando sto no ocurre, la diferencia puede ser aumenta-
70
da aparentemente aplicando una fuerza centrfuga o incrementando la densidad

de la partcula por medio de una coagulacin o una floculacin. Los principales
equipos utilizados en BSL que se basan en el principio de sedimentacin, son
los sedimentadores por gravedad y las centrfugas.
En la filtracin, la separacin se logra utilizando un medio fsico que no
permite el paso de slidos a travs del cual el fluido se hace pasar por medio de
un gradiente de presin.
En general los sistemas de sedimentacin son ms baratos y pueden operar
continuamente, pero no recuperan el 100 % de los slidos. Sin embargo, an
cuando el sedimentador no alcance la separacin deseada, es posible utilizarlo
conjuntamente con un filtro como una operacin de concentracin previa a la
de acabado que se realiza con la filtracin.
En el diseo y seleccin de sistemas para BSL es necesario tambin considerar algunos factores de orden prctico que permiten complementar los anlisis
que se efectan en los captulos correspondientes a esta parte del libro, dentro
de los cuales se pueden destacar los siguientes:
1. Varias combinaciones de equipos pueden ser tcnicamente factibles para
lograr una determinada separacin. Sin embargo, tratndose de materiales
biolgicos el nmero de posibilidades se reduce considerablemente.
2. El anlisis terico que se dispone de las BSL es limitado, as como el
conocimiento de las propiedades bsicas de los medios (tiempo de sedimentacin, porosidad, permeabilidad, etc.), de tal manera que en el diseo y seleccin del equipo las pruebas experimentales directamente con el
material, as como la experiencia, juegan un papel muy importante.
3. Parte considerable de la informacin, la experiencia y los equipos para
pruebas experimentales, est en manos de las compaas fabricantes y/o
distribuidoras del equipo.
4. La escala de experimentacin vara con el tipo de operacin. En el diseo
de filtros puede ser suficiente los datos obtenidos en el laboratorio. En
el caso de centrfugas es generalmente necesario realizar pruebas a nivel
piloto o a escala industrial.
3.2.2.
Pretratamiento de Caldos para BSL
Las propiedades de los caldos sujetos a BSL pueden ser mejoradas por medio
de pretratamientos fsicos, qumicos o biolgicos con el objeto de facilitar estas
operaciones. A continuacin se describen tres tipos de pretratamientos comnmente empleados en caldos biolgicos.
Pretratamiento trmico
El calentamiento de los caldos permite reducir su viscosidad, su volumen y
romper estructuras gelatinosas que dificultan las operaciones posteriores. En el
3.2. FUNDAMENTOS
71
caso de caldos de clulas recombinantes esta operacin es obligada por cuestiones

de seguridad ambiental. Por otro lado, esta operacin es de uso limitado cuando
se manejan productos termolbiles.
Coagulacin y floculacin
Debido a que los caldos biolgicos sujetos a BSL presentan partculas muy
pequeas (0.5 a 100 m), los pretratamientos para incrementar el tamao de
partcula facilitan su manejo.
Las partculas coloidales (tamao en el rango de una micra) no sedimentan
fcilmente debido a que por accin de sus cargas superficiales forman suspensiones muy estables llamadas soles, a diferencia de las suspensiones formadas
por partculas de mayor tamao que sedimentan con relativa facilidad.
Las soles pueden ser alteradas por medio de agentes qumicos. En el proceso
de coagulacin se emplean electrolitos simples que neutralizan las cargas repulsivas superficiales de las clulas o partculas, lo cual genera fuerzas de atraccin
del tipo de London Van Der Waals entre ellas, que permiten formar partculas
ms grandes y densas. Los electrolitos ms empleados son derivados de iones
polivalentes positivos como fierro, aluminio y calcio. La coagulacin tambin
puede ser efectuada empleando sustancias que varen el pH del caldo y por lo
tanto la carga superficial de las partculas.
En el proceso de floculacin se utilizan sustancias qumicas sintticas de alto peso molecular llamadas polielectrolitos. Existen dos mecanismos bsicos de
floculacin: a) floculacin por formacin de puentes y b) floculacin por neutralizacin (Roush y Lu, 2008). En el primero (Fig. 3.3a), los polielectrolitos producen un efecto combinado ya que actan neutralizando las cargas superficiales
de las partculas y provocan su atrapamiento por medio de las redes, aglomerndolas y formando una partcula ms grande. En el segundo (Fig. 3.3b), los
polielectrolitos neutralizan las cargas de las partcula pequeas dejando expuestas las regiones hidrofbicas, lo que provoca la precipitacin isoelctrica de los
aglomerados.
Los polielectrolitos pueden ser aninicos, catinicos o neutros. La mayora
de los utilizados estn cargados positivamente. Los materiales disponibles comercialmente son derivados de la poliacrilamida, polietilenimina, polisacridos
catinicos, quitosn y la poliamina. Es importante sealar que los pretratamientos qumicos son de uso limitado dado que implican la adicin de sustancias al
caldo que pueden agregar toxicidad o impurezas a ste.
Uso de ayudas-filtro
En las operaciones de filtracin convencional y de lecho profundo se emplean
sustancias slidas llamadas Ayudas-Filtro (AF). Estas sustancias se adicionan
al caldo antes de la filtracin y/o se utilizan como precubierta del filtro. Las
AF actan como adsorbentes de las partculas coloidales mejorando el tamao
de partcula, la incompresibilidad y permeabilidad de los slidos, de tal manera
que se facilite su filtracin.
72
Figura 3.3: Mecanismo de floculacin. a) Floculacin por formacin de redes y

b) Floculacin por neutralizacin. Slo se muestra el caso cuando las partculas
estn cargadas negativamente y se tratan con un policatin.
Las AF ms utilizadas son las tierras diatomeas y las perlitas (Rees, 1990).
Las tierras diatomeas son restos de esqueletos de pequeas plantas acuticas
prehistricas que se obtienen de depsitos naturales. Las perlitas se obtienen de
vidrios volcnicos que contienen de 2 a 5 % de agua, que permite romperlos por
accin trmica o de presin, formando un polvo con caractersticas apropiadas
como AF.
Con el uso de las AF la filtracin se convierte en una operacin de tres pasos:
1. Primero se forma una precubierta de AF sobre el medio filtrante haciendo
reciclar sobre ste una lechada de AF.
2. Una vez formada la precubierta se inicia la alimentacin del caldo a filtrar,
al cual se le agrega continuamente una dosis de AF. Esto permite que las
caractersticas de la superficie de filtracin se mantengan uniformes.
3. Al final del ciclo la precubierta de AF debe ser removida.
La precubierta de AF permite retardar el taponamiento del filtro, facilita
su limpieza, disminuye la cada de presin y produce un filtrado de calidad
uniforme. La adicin continua de AF al caldo es uno de los mtodos ms efectivos
para minimizar los costos de filtracin. La dosis de AF que es necesario agregar
continuamente es funcin directa de la concentracin y compresibilidad de los
slidos del caldo. Asimismo, entre ms rpido se desee efectuar la filtracin,
la dosis necesaria es mayor, ya que para aumentar la velocidad de filtracin
se requiere un mayor gradiente de presin, lo que hace necesario aumentar la
incompresibilidad y porosidad del material slido.
3.2. FUNDAMENTOS
73
Existen diversas marcas comerciales de AF que difieren bsicamente en el

tamao de partcula. Las de partculas ms grandes facilitan la filtracin pero
producen filtrados ms turbios. La seleccin implica un compromiso entre el
flujo deseado y la claridad aceptable.
3.2.3.
Teora de la Filtracin Convencional
La filtracin convencional (Fig. 3.1a) puede ser definida como la separacin

de los slidos de un lquido con la formacin de una torta. sta se efecta
haciendo pasar una suspensin a travs de un medio permeable que retiene los
slidos utilizando un gradiente de presin.
La teora de la filtracin convencional se deriva de los estudios de la mecnica
de fluidos en medios porosos. La ecuacin que describe el movimiento de fluidos
newtonianos a travs de medios porosos, fue formulada en 1856 por el gelogo
francs DArcy (Olivier et al., 2007). La aplicacin de esta ecuacin al caso
particular donde se desprecian los efectos gravitacionales (lechos cortos), puede
ser escrita como:
=
kP
"
(3.1)
donde 1 :
: Velocidad superficial de lquido (flujo volumtrico por rea de filtracin).
[L/t].
k: Permeabilidad del lecho.[L2 ].
P : Cada de presin a travs del lecho. [F/L2 ].
": Profundidad del lecho filtrante. [L].
: Viscosidad del fluido. [M/L t].
La velocidad de filtracin puede ser descrita en trminos del volumen de
filtrado y el rea de filtracin (dos parmetros ms fcilmente medibles) como:
1 Las unidades de los miembros de las ecuaciones se presentan en trminos de dimensiones
fundamentales y entre parntesis cuadrados. Las dimensiones fundamentales se representan
como:
F : Fuerza.
M : Masa.
L: Longitud.
t: Tiempo.
o:
Temperatura.
Las unidades bsicas empleadas en la mayor parte del texto corresponden a las del Sistema
Internacional de medidas (SI).
74
1 dV
A dt
(3.2)
Combinando las ecuaciones (3.1) y (3.2) y expresando la relacin "/k como

una resistencia R, se puede obtener la ecuacin diferencial bsica de la filtracin
convencional:
P
1 dV
=
A dt
R
(3.3)
En la ecuacin (3.3) R es la resistencia total a la filtracin. Esta resistencia

puede expresarse como la suma de dos resistencias en serie:
R = Rt + Rm
(3.4)
donde Rt es la resistencia de la torta y Rm es la resistencia del medio filtrante.

Combinando la ecuaciones (3.3) y (3.4) se obtiene:
1 dV
P
=
A dt
(Rt + Rm )
(3.5)
Las ecuaciones (3.3) y (3.5) slo pueden ser aplicadas a soluciones diluidas
en rgimen laminar, cuando el nmero de Reynolds modificado es menor a 5, o:
dp
<5
(1 )
(3.6)
donde dp es el dimetro de partcula o dimetro del poro en la torta, es la

densidad del fluido y es la fraccin de espacio vaco del lecho. En general las
biofiltraciones cumplen con esta condicin.
3.2.4.
Teora de Filtracin de Lecho Profundo
La filtracin de lecho profundo es una separacin slido-lquido en la cual

una suspensin, generalmente diluida, se hace pasar a travs de un lecho empacado. Las partculas slidas de la suspensin se unen a la matriz del lecho o
a otras partculas previamente retenidas, de tal manera que son removidas del
fluido (Fig. 3.1b). Los Filtros de Lecho Profundo (FLP) son muy usados para
la remocin de bacterias, coloides y restos celulares. Son empleados en procesos de clarificacin de caldos de anticuerpos monoclonales, remocin de DNA
y preparacin de soluciones para cromatografa. En algunos casos los FLP son
usados para clarificar caldos de cultivo directamente. Frecuentemente tambin
se utilizan conjuntamente con filtros de esterilizacin, para quitar carga a las
membranas y disminuir costos (Rajniak et al., 2008; van Reis y Zydne, 2007).
La filtracin de lecho profundo ha sido ampliamente investigada mediante
el uso de modelos matemticos (Cushing y Lawler, 1998). La remocin de las
3.3. EQUIPO DE FILTRACIN
75
partculas suspendidas en un FLP pude ser descrita por la siguiente ecuacin

(Martin et al., 1992):

a (1 )
dC
=
C
(3.7)
dz
de
o en forma integrada como:

L
Cs
dC
a (1 )
=
dz
C
de
(3.8)

Cs
a (1 ) L
= exp
Ce
de
(3.9)
Ce
donde:
Ce : Concentracin de partculas a la entrada del filtro
Cs : Concentracin de partculas a la salida del filtro
a : Constante de eficiencia del filtro
: Porosidad
L : Profundidad del lecho
de : Dimetro equivalente del medio
Esta expresin permite calcular la fraccin de partculas que permanece
en suspensin a la salida del filtro. Este valor depende de las caractersticas
geomtricas del lecho, incluyendo el tamao y porosidad, as como de la longitud
del lecho. Tambin depende de la naturaleza del flujo, las propiedades fsicas de
las partculas en suspensin, y de las fuerzas de interaccin entre las partculas
y el medio.
La ecuacin (3.7) en su forma ms sencilla fue formulada por T. Iwasaki
(Cushing y Lawler, 1998) y puede expresarse como:
dC
= C
dz
donde es el coeficiente caracterstico del filtro.
3.3.
(3.10)
Equipo de Filtracin
Existe una gran variedad de filtros cuyo mecanismo de filtracin es la formacin de una torta o la filtracin de lecho profundo (Lutz et al., 2009; Moir,
1982). Estos tipos de filtros se pueden clasificar de la siguiente manera:
1. Filtros convencionales por lotes a presin
a) Marcos y placas
b) Cmara con elementos filtrantes (hojas, charolas o tubos)
2. Filtros convencionales continuos al vaco
76
3. Filtros de lecho profundo
a) Modulares, apilados o lenticulares
1) Discos aplilados
2) Cassettes
b) Cpsulas
3.3.1.
Filtros por Lotes a Presin
En los filtros por lotes a presin la solucin que contiene el slido a separar
es alimentada continuamente al filtro. Una vez que se acumula una determinada
cantidad de slido sobre el medio filtrante, la operacin es interrumpida para
descargar la torta, limpiar el filtro e iniciar un nuevo ciclo. Este tipo de filtros
pueden ser agrupados en dos categoras: a) filtros prensa de marcos y placas y
b) filtros de cmara con elementos filtrantes (hojas, charolas o tubos).
En los filtros por lotes la torta debe ser descargada manualmente, por lo
que este tipo de equipos puede tipificarse como de mano de obra intensiva,
recomendables slo para bajas escalas de produccin.
Filtros de marcos y placas
Los filtros por lotes de ms amplio uso son los filtros de marcos y placas
(Fig. 3.4). La unidad de filtracin est formada por un marco que contiene dos
placas formando una cmara de filtracin. Los filtros constan de varias de estas
unidades que operan en paralelo produciendo un slido bastante seco. Los filtros
de marcos y placas normalmente operan en contacto con el ambiente y no son
recomendables para cuando se trabaja con sustancias txicas.
Filtros de cmara con elementos filtrantes
Los filtros de cmara con elementos filtrantes (Fig. 3.5) toman su nombre
del tipo y orientacin de los elementos filtrantes. Operan en ambientes cerrados,
tienen una relacin de rea/volumen relativamente alta y son utilizados cuando
los volmenes de filtracin son bajos. Los filtros verticales son ms baratos pero
presentan una mayor dificultad para descargar la torta.
3.3.2.
Filtros Continuos al Vaco
Los filtros continuos ms utilizados en las bioseparaciones, principalmente en

la produccin de antibiticos, son los tipo tambor rotatorio al vaco (Fig. 3.6).
Este tipo de filtros se distinguen de los intermitentes por el hecho de que al
girar permiten una descarga continua de la torta, de tal manera que pueden
operar continuamente por periodos largos de tiempo con flujos entre 200 1000
L/m2 h (Petrides et al., 1989). Normalmente utilizan ayudas-filtro en dosis
equivalentes a la concentracin de slidos del caldo, lo que origina un problema
de desecho de slidos.
3.3. EQUIPO DE FILTRACIN
77
Figura 3.4: Filtros intermitentes de marcos y placas. a) Filtro, b) Elementos de

filtracin y c) Esquema del mecanismo de filtracin. Tomada de: Svarouvsky,
1979.
c
Reproducida con el permiso de M cGraw-Hill Inc. Copyright 1979.
3.3.3.
Filtros de Lecho Profundo
Debido a la optimizacin de los bioprocesos, las soluciones a filtrar presentan

cada vez mayores concentraciones celulares, de restos celulares y de coloides.
Por otro lado, las tolerancias necesarias para manejar la variabilidad de los
procesos puede requerir filtros de varios cientos de metros cuadrados adicionales
de rea de filtracin. Por esta razn, el uso de centrfugas para remover clulas
en combinacin con filtros de lecho profundo para remover coloides y restos
celulares es una prctica cada vez ms generalizada, ya que puede ayudar a
extender la capacidad de los filtros para esterilizacin situados corriente abajo
(Anderson, 2009; Lutz et al., 2009).
Los principales materiales que se utilizan en los FLP son las tierras diatomeas, perlitas, fibras de celulosa y resinas cargadas positivamente (para eliminar
DNA, endotoxinas y virus cargados negativamente). La remocin de partculas ocurre por varios mecanismos como atrapamiento fsico, interacciones electrostticas e interacciones hidrofbicas (Roush y Lu, 2008).
Una manera de emplear menos mano de obra es el uso de filtros modulares, apilados o lenticulares con elementos tipo disco o cassete, que se venden
preensamblados y se colocan de acuerdo a las necesidades de filtracin en sus
respectivos recipientes (Fig. 3.7 a y b). Alternativamente se utilizan los filtros
tipo cpsulas que no requieren recipientes especiales (Fig. 3.7c).
Los filtros modulares tipo cassete son capaces de soportar adecuadamente
78
Figura 3.5: Filtros intermitentes de cmara con elementos filtrantes. a) Filtro

horizontal de hojas verticales, b) Filtro tubular vertical y c) Filtro de hojas.
Tomada de: Svarouvsky, 1979.
c
Reproducida con el p erm iso de McGraw-Hill Inc. Copyright 1979.
los cambios de presin y son utilizados para filtrar bacterias y levaduras en el

rango de 10 a 12,000 L (Jornitz y Meltzer, 2008). Los elementos se colocan en
forma vertical y estn diseados con multicapas, de tal manera que la filtracin
se realiza de las capas ms gruesas hacia las ms delgadas (Fig. 3.8).
3.4.
Diseo de Equipo de Filtracin
En esta seccin se centra la atencin en el uso de la teora fundamental de

la filtracin en el diseo de tres tipos de filtros:
Filtros por lotes
Filtros Continuos
Filtros de Lecho Profundo
3.4. DISEO DE EQUIPO DE FILTRACIN
79
Figura 3.6: Vista lateral de filtro continuo tipo tambor.
3.4.1.
Filtracin por Lotes
En la filtracin por lotes con formacin de torta la separacin depende de

varios factores dentro de los que destacan la permeabilidad de la torta que forme
el slido que se desea separar, el tamao del poro de la torta, el tamao de la
partcula del slido y la compresibilidad de la torta.
Desde el punto de vista de los parmetros de operacin dos tipos particulares
de filtracin por lotes son industrialmente importantes (Brown, 1982): a) la
filtracin por lotes con cada de presin constante y b) la filtracin por lotes a
flujo constante.
En la filtracin por lotes con cada de presin constante, se produce una
disminucin gradual del flujo conforme aumenta el espesor de la torta. Este
tipo de filtracin es especialmente til en la adquisicin experimental de datos
para diseo, ya que el seguimiento del volumen del filtrado con el tiempo es
relativamente fcil de medir. La filtracin por lotes a flujo constante se produce
debido a que algunos tipos de bombas producen el mismo flujo a diferentes
cabezales.
Tanto en el caso de la filtracin por lotes a cada de presin constante, como
en la de flujo constante, la resistencia de la torta vara conforme avanza el tiempo
de filtracin al irse acumulando slidos. Sin embargo, la resistencia especfica de
la torta puede ser variable o no. Esta variacin depende de la naturaleza de la
torta.
El anlisis general de la filtracin por lotes que se desarrolla en este captulo,
inicia con el tratamiento de tortas incompresibles cuya resistencia especfica
80
Figura 3.7: Filtros de lecho profundo de uso en bioprocesos. a) Discos apilados,

b) Cassetes y c) Cpsulas.
Figura 3.8: Diagrama de operacin de un elemento tipo cassete de un filtro

modular. En el detalle se presenta el diseo multicapa.
es constante. Posteriormente este tratamiento se aplica al caso particular de
tortas compresibles, las cuales son caractersticas de materiales biolgicos. Este
desarrollo slo ser referido al caso en el cual la cada de presin es constante.
Filtracin por lotes: Tortas incompresibles y P constante
En el caso de tortas incompresibles la resistencia de la torta puede suponerse
directamente proporcional a la cantidad de slidos (peso seco) depositados por
unidad de rea de filtracin. Esto puede expresarse como:
Rt = w
(3.11)
donde w es la cantidad de slidos base seca depositados por unidad de rea y

es la resistencia especfica de la torta. La ecuacin (3.11) puede ser expresada
en trminos de parmetros ms fcilmente medibles:
Rt = o
V
A
81
(3.12)
donde o es la cantidad de masa slida seca por unidad de volumen libre de

slidos (o volumen de filtrado).
Combinando las ecuaciones (3.5) y (3.12) se tiene:
dV
=
dt
A P

V
o
+ Rm
A
(3.13)
La ecuacin (3.13) puede escribirse en su forma recproca, e integrarla con

las siguientes condiciones iniciales:
para
t=0
V =0
y obtener la siguiente ecuacin:

A t o V
Rm
=
+
V
2P A
P
(3.14)
La ecuacin (3.14) puede ser utilizada para la obtencin de parmetros de

filtracin en equipos por lotes a presin constante. Cuando se grfica At/V vs
V/A se produce una lnea recta con:

o
Pendiente =
2P
Rm
Ordenada en el origen =
P
Un caso particular de la ecuacin (3.14) se presenta cuando la resistencia del
medio es despreciable, entonces la ordenada en el origen toma el valor de cero
y la ecuacin se reduce a:
A t o V
=
V
2P A
(3.15)
Otro caso particular de la filtracin por lotes con cada de presin constante
se produce cuando se desea asegurar una formacin uniforme de la torta evitando
flujos altos al inicio de una corrida, que inducen la penetracin de slidos sobre
el medio filtrante. En este caso la cada de presin se incrementa gradualmente
hasta alcanzar una cada de presin constante (Fig. 3.9).
Bajo estas condiciones la integracin de la ecuacin (3.13) se efecta en el
rango de cada de presin constante, con las condiciones iniciales
para t = ts
y se obtiene la ecuacin:
V = Vs
82
Figura 3.9: Cada de presin contra tiempo en una filtracin intermitente.
(t ts ) A
o (V + Vs ) Rm
=
+
(V Vs )
2P
A
P
(3.16)
Esta ecuacin nos permite calcular parmetros experimentales al graficar:

V + Vs
(t ts ) A
vs
(V Vs )
A
Ejemplo 3.1. Filtracin de actinomicetos.
Es bien conocido que los cultivos de actinomicetos como el Streptomyces
griseus presentan una gran resistencia a la filtracin (Aiba et al., 1972). En una
filtracin por lotes a presin constante con un filtro de laboratorio de 110 cm2
de rea y una cada de presin de 70, 000 N/m2 , se procesa un caldo de una
concentracin de 0.015 kg/L peso seco de clulas y una viscosidad de 0.0011
N-s/m2 (el caldo se adicion con 1 % de tierras diatomeas, a un pH de 3.7 y una
temperatura de 10 C), obtenindose los datos que aparecen en la Tabla 3.2.
Se pide: Estimar la resistencia especfica de la torta y la resistencia del
medio Rm .
Solucin:
Del anlisis de los datos se desprende que la resistencia del medio es despreciable, de tal manera que se realiza un ajuste del modelo lineal dado por la
ecuacin (3.14) a los datos, con una restriccin de la ordenada en el origen . El
programa MATLAB para realizar el ajuste se presenta en la Figura 3.10.
En la Figura 3.11 se presenta el resultado del programa, la lnea continua es
una recta ajustada que pasa por el origen.
a) Clculo de la resistencia del medio.
83
Tabla 3.2: Datos de filtracin del Ejemplo 3.1.

Datos
t (s) V (cm3 )
19
100
80
200
210
300
380
400
700
500
978
600
1215
650
De acuerdo a la Figura 3.11 la ordenada en el origen es cero y por lo tanto

la resistencia del medio no tiene un valor significativo:
Rm = 0
b) Clculo de la resistencia especfica de la torta.
De acuerdo al resultado del inciso a) se utiliza la ecuacin (3.14) para calcular
la resistencia especfica de la torta.
o
Pendiente =
2P

Ns
g
0.0011
() 0.015 3
2
s
m
cm
32.52
=
N
cm2
2 70, 000 2
m
s
32.52
140, 000
11 cm
cm2
=
g s = 3.035 10
g
0.0011 0.015
cm3
Ejemplo 3.2. Escalamiento de la filtracin de levaduras.
En la filtracin de un caldo de levaduras a presin constante se obtuvieron
los datos que se presentan en la Tabla 3.3.
El rea del filtro utilizado fue de 0.28 m2 . La suspensin contiene 1.92 kg/m3
de masa seca y una viscosidad de 0.0029 kg/m-s. La resistencia especfica de la
torta formada es de 4.0 1010 m/kg.
Se pide determinar:
a) La cada de presin en el filtro, P .
b) La resistencia del medio filtrante, Rm .
c) El rea de filtracin necesaria para procesar 4, 000 L de caldo en 20 min,
utilizando la misma cada de presin.
84

Solucin:
Del anlisis de los datos se desprende que la resistencia del medio es despreciable, de tal manera que se realiza un ajuste del modelo lineal dado por la
ecuacin (3.14) a los datos. El programa MATLAB para realizar el ajuste se
presenta en la Figura 3.12.
En la Figura 3.13 se presenta el resultado del programa, la lnea continua es
una recta ajustada.
a) Clculo de la cada de presin en el filtro, P .
De la pendiente de la grfica se tiene que:
o
s
= 329.51 2 =
2P
m
0.0029
P =
0.0029
kg
m
kg
4.0 1010
1.92 3
ms
kg
m
2P
m
kg
N
kg
4.0 1010
1.92 3
kg m
ms
kg
m
N
s2
= 3.38 105 2
s
m
2 329.51 2
m
Figura 3.11: Ajuste lineal de los datos de filtracin del Ejemplo 3.1.
Tabla 3.3: Datos del Ejemplo 3.2.
Datos
t (min) V (L)
4
115
20
365
48
680
76
850
120
1130
b) Clculo de la resistencia del medio

Rm
s
= 456.33
=
P
m
Rm
kg
Rm
m-s
m
kg 2
N
s
3. 38 105 2
m
N
0.0029
s
N
456.33
3. 38 105 2
m
m
=
kg
0.0029
ms
kg m
s2
N
= 5.31 1010 m1
c) Clculo del rea a la nueva escala. Utilizando la ecuacin (3.14),
85
86
Figura 3.12: Programa MATLAB para el nalisis por regresin lineal de los
datos del Ejemplo 3.2.

60 s

3
(A) (20 min)

s
s 4000 L
m
min
3 = 329.51 2
+ 456.33
3
m
A
10 L
m
m
(4000 L)
3
10 L
A = 3.0 m2
Optimizacin de la filtracin por lotes En la filtracin por lotes se presenta un problema de optimizacin relacionado con el tiempo de duracin de cada
ciclo o tiempo de procesamiento de un lote de caldo. Si el tiempo de duracin
de cada ciclo de filtracin se acorta, el tiempo total de descarga y limpieza del
filtro se incrementa. Por otro lado, conforme se incrementa el tiempo del ciclo de
87
Figura 3.13: Ajuste lineal de los datos de filtracin del Ejemplo 3.2.
filtracin, la velocidad de filtracin promedio disminuye. En el siguiente ejemplo
se aborda este tipo de problema.
Ejemplo 3.3. Clculo del nmero de ciclos ptimo para una filtracin por lotes.
En el procesamiento de un caldo micelial para la recuperacin de un antibitico en un filtro de laboratorio de 110 cm2 de rea a una presin de
19.6 104 N/m2 , se obtuvieron los datos que aparecen en las columnas 1 y
2 de la Tabla 3.4. La viscosidad del caldo fue de 2 103 Ns/m2 y la masa de
slidos secos por unidad de volumen de filtrado de 40 kg/m3 .
Tabla 3.4: Datos y clculos de Ejemplo 3.3.
t (s)
9
46
126
240
405
610
860
Datos
V 104 m3
1.0
2.0
3.0
4.0
5.0
6.0
7.0
Clculos
At/V (s/m) V /A (m)
990.0
0.009
2530.0
0.018
4620.0
0.027
6600.0
0.036
8910.0
0.045
11183.3
0.055
13514.3
0.064
Se pide estimar:
a) La resistencia especfica del caldo .
88
b) El nmero de ciclos del filtro por da, si cada operacin de descarga y

limpieza del filtro tiene una duracin de 0.5 h y el filtro opera 24 h al da.
Solucin:
a) De acuerdo a la ecuacin (3.14), a partir de los datos es necesario calcular
los grupos At/V y V/A. Estos clculos se presentan en las columnas 3 y 4 de
la Tabla 3.4. Mediante una regresin lineal con restriccin de la ordenada en el
origen, es posible obtener la pendiente de los datos ajustados a dicha ecuacin,
(pendiente)(2)(P )
o

s
N
198, 440 2 (2) 19.6 104 2
m
m
m

= 9. 7 1011
N
s
kg
kg
2 103
40 3
m2
m
b) El nmero de ciclos por da est dado por:

Nmero de ciclos =
24 h
tc + 0.5
donde tc es el tiempo de filtracin por ciclo.

El volumen total de filtrado Vt se relaciona con el volumen de filtrado por
ciclo Vc mediante la siguiente expresin:

24 h
Vc
Vt =
0.5 + tc
la resistencia del medio filtrante puede ser despreciada, entonces puede ser utilizada la ecuacin (3.15) para obtener:
Vc =
de tal manera que:
Vt =
2A2 tc P
o
24
tc + 0.5
12
2A2 tc P
o
12
derivando la expresin anterior con respecto al tiempo del ciclo e igualando

el resultado a cero, se obtiene el tiempo de duracin del ciclo para el cual el
volumen total de filtrado es mximo, es decir:

dVt
d
tc
1
(tc 0.5)
=
=
=0
dt
dtc tc + 0.5
2 tc (tc + 0.5)2
el tiempo ptimo tc es:
tc = 0.5 h
89
el nmero de ciclos por da est dado por:

Nmero de ciclos =
24 h
= 24 ciclos
0.5 h + 0.5 h
Filtracin por lotes en paralelo En el caso de los filtros de marcos y placas,

cada marco consta de dos caras de filtracin. La alimentacin a cada marco se
hace de manera independiente de tal manera que cada superficie de filtracin
acta en paralelo respecto al flujo de alimentacin. Debido a lo anterior los datos
de diseo de este tipo de filtros pueden ser generados en un filtro por lotes de
laboratorio. El siguiente ejemplo se refiere a este procedimiento.
Ejemplo 3.4. Filtracin de cristales de un esteroide.
Con los datos de una filtracin de laboratorio de una suspensin de un esteroide se desea disear un filtro por lotes de marcos y placas.
Las pruebas de laboratorio se realizan en un tubo de vidrio con una malla
en el extremo inferior de resistencia despreciable. Los datos de los resultados del
laboratorio son los siguientes:
Peso seco de los cristales
Volumen de la torta
Profundidad de la torta
Tiempo de filtracin
Gradiente de presin
Torta incompresible
0.063 kg
253 cm3
12.5 cm
9, 780 s
1.01 kg/cm2
s
Se pide:
Estimar el nmero de marcos de 430 430 30 mm y el tiempo de filtracin
para procesar 40 kg/lote de peso seco de producto. Suponer que la bomba de
alimentacin produce una presin a la entrada del filtro de 0.68 kg/cm2 y que
descarga a la atmsfera.
Solucin:
a) Estimacin de parmetros a partir de datos de laboratorio.
De acuerdo con los datos de laboratorio es necesario utilizar la ecuacin
(3.15) arreglada de la siguiente forma:
tP A2
=
2o
W2
donde W = o V es el peso seco de la torta.
Sustituyendo valores en la expresin anterior se obtiene:

2
kg
253
(9, 780 s) 1.01
cm4
s cm2
cm2
12.5
=
= 1.01 109
2
2o
(0.063 kg)
kg
90
b) Clculo del nmero de marcos necesarios para la filtracin de 40 kg peso

seco del esteroide.
El clculo se basa en el hecho que el volumen de todos los marcos del filtro
debe ser lo suficiente grande para alojar el volumen de la torta hmeda, de tal
manera que:
Nmero de marcos =
Nmero de marcos =
volumen torta hmeda

volumen
de un marco

253 cm3
(40 kg)
0.063 kg
= 29
(43 43 3) cm3
c) Clculo del rea de filtracin del filtro prensa.

El rea de filtracin para filtros prensa de marcos se calcula tomando en
cuenta que por cada marco existen dos placas o superficies de filtracin.
rea de filtracin = rea por marco 2 Nmero de marcos
rea de filtracin = (43 43) cm2 2 29 = 107, 242 cm2
d) Clculo del tiempo de filtracin en el filtro prensa.
El tiempo de filtracin puede ser calculado mediante la modificacin de la
ecuacin (3.15),
W2
P A2

2
(40 kg)2
9 s cm

t =
1.01 10

= 206 s
kg
kg
2 )2
0.68
(107,
242
cm
cm2
t =
2o
Filtracin por lotes: Tortas compresibles y P constante

La compresibilidad de una torta se caracteriza por un aumento de su resistencia especfica al aumentar el gradiente de presin que acta sobre la torta.
La mayora de las tortas de material biolgico son compresibles. En estos
casos la resistencia especfica puede ser correlacionada con el gradiente de presin
mediante la siguiente ecuacin emprica (Silverblatt et al., 1974):
= P s
(3.17)
donde es una constante relacionada principalmente con el tamao y forma

de las partculas de la torta y s es el ndice de compresibilidad. ste vara de

91
cero para una torta incompresible, a 0.8 para una torta altamente compresible
(la correlacin es aceptable para s 0.6 y P 0.2 atm).
La determinacin experimental de s y requiere la realizacin de varias
corridas de filtracin a cada de presin constante a varios niveles. Los datos
pueden ser correlacionados en una grfica log() vs log(P ). Entre mayor sea
el valor de s el efecto de la presin sobre la resistencia de la torta es ms severo,
en estos casos es recomendable utilizar ayudas-filtro.
Combinando las ecuaciones (3.14) y (3.17) se puede obtener la ecuacin
para describir la filtracin por lotes de tortas compresibles con cada de presin
constante:

o
V
Rm
At
=
+
(3.18)
V
2P 1s A
P
Ejemplo 3.5. Clculo del ndice de compresibilidad.
Se desea correlacionar la resistencia especfica de la torta que forma una
levadura con la cada de presin, para lo cual se realizan pruebas de filtracin
bajo las siguientes condiciones:
rea de filtracin
Viscosidad
Masa de slido seco
por volumen de filtrado
9.3 cm2
0.001 Ns/m2
10 g/L
Las pruebas se realizan a cuatro diferentes gradientes de presin. Los datos

de cada corrida fueron correlacionados mediante la ecuacin (3.14) obtenindose
los siguientes resultados:
Corrida
Nm.
1
2
3
4
P
atm
0.68
1.36
2.04
3.40
Ordenada
Origen s/cm.
26
12
8
5
Pendiente
s/cm2
3.00
2.00
1.60
1.10
Se pide: Estimar el ndice de compresibilidad s para este material.

Solucin:
El empleo de la ecuacin (3.17) permite calcular el ndice de compresibilidad,
para lo cual es necesario el clculo de para cada corrida mediante la ecuacin
(3.14),
Pendiente =
o
2P
92
Para la primera corrida se tiene:

Ns
kg
1000 g
m3
0.001
1 10 3
6
s
m2
m
kg
10 cm3
=
3
2
N
cm
1.0133 105 2
m
2 0.68 atm
atm
1 = 4.13 1010
cm
g
De igual manera pueden obtenerse los valores de 2 , 3 y 4 que aparecen

en la tabla siguiente:
Corrida
Nmero
1
2
3
4
P
(atm)
0.68
1.36
2.04
3.40
(cm/g)
4.13 1010
5.51 1010
6.61 1010
7.58 1010
Los datos de y P para cada una de las corridas pueden ser correlacionados de acuerdo con la ecuacin (3.17) en una grfica log(P ) vs log(), tal
como aparecen en la Figura 3.14. Con la pendiente de la curva se puede estimar
el valor del ndice de compresibilidad:
s = 0.38
3.4.2.
Filtracin Continua
En esta seccin se aborda el diseo de los filtros continuos con tortas compresibles que es el caso ms comn para las filtraciones de caldos biolgicos a
gran escala. En un filtro continuo (Fig. 3.6) el ciclo de filtracin consta de tres
pasos principales: a) formacin de la torta, b) lavado de la torta y c) descarga
de la torta. Los primeros dos pasos se relacionan con el proceso de filtracin y
el tercero es un aspecto de diseo mecnico. Esta seccin enfatiza lo referente a
los dos primeros pasos.
Formacin de la torta
En los procesos de filtracin por lotes el rea de filtracin es constante y el
espesor de la torta vara con el tiempo de filtrado. En la filtracin continua se
puede suponer que el espesor de la torta es constante y el rea de filtracin vara
con el tiempo.
93
Figura 3.14: Solucin grfica del Ejemplo 3.4. Resistencia especfica contra cada
de presin (log-log).
La ecuacin (3.18) puede ser adaptada a la filtracin continua. Esta ecuacin,
cuando la resistencia del medio es despreciable, puede ser expresada como:

A tf
o
Vf
=
(3.19)
1s
Vf
2P
A
donde tf es el tiempo que dura un paso de la formacin de la torta y Vf es el

volumen de filtrado colectado en ese periodo. A es el rea expuesta de filtracin
por ciclo o por revolucin. Esta ecuacin es til para diseo de filtros continuos
a partir de datos de filtracin por lotes.
La ecuacin (3.19) puede ser expresada en trminos de los parmetros de
diseo siguientes:
Q: Flujo de filtrado. [L3 /t].
: ngulo de formacin de la torta. [rad].
N : Velocidad angular del tambor. [ t1 ].
R: Radio del tambor. [L].
L: Longitud del tambor. [L].
Entonces es posible relacionar el volumen de filtrado de un ciclo por unidad
de rea, con el gasto Q:
Vf
Q
=
A
2RLN
donde
2RL = rea lateral del filtro
(3.20)
94
El tiempo que dura cada etapa de filtracin se puede relacionar con el ngulo
de filtracin y la velocidad de giro del tambor, mediante la ecuacin siguiente:
tf =
2N
(3.21)
Combinando las ecuaciones (3.19), (3.20) y (3.21) se obtiene el flujo de filtracin:

4NP 1s
Q = RL
o
1/2
(3.22)
o en trminos de la velocidad de formacin de la torta Wt = o Q:

Wt = RL
4NP 1s o

1/2
(3.23)
Las ecuaciones (3.22) y (3.23) pueden ser utilizadas para predecir cambios
de la velocidad de filtracin con respecto a cambios de las variables de diseo y
operacin en filtros continuos al vaco.
Lavado de la torta
Una vez que se ha formado la torta sobre la superficie del filtro, mediante
un lavado se remueve del soluto retenido en el lquido y en la masa celular de la
torta. Existen diferentes tcnicas de lavado, siendo la ms utilizada la de lavado
por desplazamiento. En esta tcnica el lquido de lavado se aplica directamente
sobre la superficie de la torta.
Las curvas de lavado, donde se grafica la concentracin adimensional de
soluto a la salida de la torta (C/C0 ) contra los volmenes de lavado (o el tiempo
de lavado), permiten analizar las operaciones de lavado (Fig. 3.15). En el caso
ideal donde slo existe el desplazamiento hidrulico, nicamente se requiere un
volumen de lavado para recuperar todo el soluto. En la prctica, inicialmente
el lquido de lavado produce un desplazamiento hidrulico del filtrado retenido
por la torta. Si el lavado contina parte del soluto contenido en el interior de la
biomasa puede pasar al lquido de lavado mediante mecanismos de transferencia
de masa.
En la etapa de lavado la cantidad de solutos que puede ser recuperada depende del volumen del lquido de lavado que se emplee. Un factor de diseo es
el tiempo requerido para aplicar el lquido de lavado o tiempo de lavado, el cual
depende de la naturaleza de la torta. Debido a lo anterior el anlisis de la etapa
de lavado se efecta en dos pasos: a) clculo del volumen de lavado en funcin
de la recuperacin de soluto que se especifique y b) clculo del tiempo de lavado
necesario en funcin del tipo de torta.
95
Figura 3.15: Curva y mecanismos de lavado.

Clculo del volumen del lquido de lavado Si el desplazamiento por lavado del lquido retenido en la torta extrajera todo el soluto, el volumen necesario
de lquido de lavado sera equivalente al volumen del lquido retenido por la
torta (fraccin vaca del lecho). La operacin de lavado sera 100 % eficiente. Sin
embargo, debido a los fenmenos de difusin y mezclado en el lecho, esto no
ocurre en la prctica.
Conforme la eficiencia de lavado disminuye debido a los mecanismos de difusin y mezclado, para lograr una determinada extraccin del soluto, la razn
del volumen del lquido de lavado al volumen de lquido retenido se incrementa.
Existen varios anlisis tericos para correlacionar los parmetros de lavado,
pero debido a lo complejo del fenmeno frecuentemente se utilizan correlaciones
empricas que ofrecen buenos resultados. Una correlacin emprica que ha sido
utilizada para materiales biolgicos est dada por la siguiente ecuacin (Choudhury y Dahlstrom, 1957):
r = (1 )n
donde:
(3.24)
Masa de soluto retenido en torta

Masa de soluto inicial en la torta
= Eficiencia de lavado.
Volumen de lquido de lavado
n =
Volumen del lquido retenido por la torta
r
La ecuacin (3.24) puede ser utilizada en grficas semilogartmicas para correlacionar datos de lavado (Fig. 3.16). Con estas correlaciones es posible calcular
el lquido de lavado necesario para lograr un determinado por ciento de extraccin.
96
Figura 3.16: Curvas de tasa de lavado en escala semilogartmica.

Clculo del tiempo de lavado Para el clculo del tiempo de lavado se puede
suponer que el gasto durante la fase de lavado es constante dado que el lquido
de lavado no tiene slidos. Este gasto puede igualarse al gasto final de la fase
de filtrado. Con base a lo anterior, la ecuacin (3.13) con Rm = 0 y = P s
se escribe:
AP 1s
dV
=
V
dt
o
A
(3.25)
El gasto cuando V = Vf es constante e igual a:

dV
A2 P 1s
=
dt
o Vf
(3.26)
Integrando la ecuacin (3.26) entre los lmites:

t=0
t = tL
V =0
V = VL
donde VL es el volumen del lquido de lavado y tL es el tiempo de lavado requerido, se obtiene la siguiente ecuacin:
2

A P 1s
VL =
tL
(3.27)
o Vf
97
Combinando las ecuaciones (3.19) y (3.27) se obtiene:

1/2
P 1s
VL
=
tL
A
2 o tf
(3.28)
Los volmenes y tiempos, de filtrado y lavado, se relacionan directamente

mediante las ecuaciones (3.19) y (3.28) obtenindose:
VL
tL
=2
tf
Vf
(3.29)
Es conveniente expresar la ecuacin (3.29) en trminos de parmetros de

diseo, como la relacin de volumen de lavado a volumen retenido n, y la fraccin
del lquido retenido con respecto al volumen del filtrado f , de tal manera que
tL
VL VR
=2
= 2nf
tf
VR Vf
(3.30)
Ejemplo 3.6. Filtracin continua al vaco.

Se dispone de un filtro tipo tambor rotatorio continuo de 3.0 m de dimetro
y 4.3 m de largo, el cual puede ser operado a 1.2 rpm con un ngulo de filtracin
efectiva de 65 . Con este filtro se desea separar un caldo de eritromicina. El caldo
pretratado se puede suponer que forma una torta incompresible. La resistencia
del medio filtrante es muy pequea comparada con la resistencia de la torta. El
filtro opera a 51 cm de mercurio de vaco. Bajo estas condiciones:
s
o
= 29
2P
cm2
En el lavado se desea extraer el 99 % de los solutos retenidos en la torta.
Debido a las caractersticas de la torta se espera un 80 % de eficiencia en el
lavado y que la torta retenga 1 % del volumen de filtrado.
Se pide estimar:
a) El tiempo de filtrado.
b) El gasto que puede manejar el filtro.
c) El tiempo de lavado.
Solucin:
a) Clculo del tiempo de filtrado.
La ecuacin (3.21) permite estimar el tiempo de filtrado con base a los
parmetros del filtro, de tal manera que,
tf =
=
2N
65
2
360

=9s
1.2
min
2
min
60 s
98
(El ciclo del filtro es de 50 segundos)

b) El gasto que puede manejar el filtro puede ser estimado por medio de la
ecuacin (3.22).
Q = RL
4NP 1s
o
1/2
por las caractersticas de la torta s = 0 y = , entonces la ecuacin anterior

se puede expresar como:
2N
Q = RL
o
2P
sustituyendo valores:
Q = 150 cm430 cm
1/2
1/2
65
2 1.2 min1
L
cm3
360
=
4,
520
= 16, 272
s
s
s
h
29
60
cm2
min
c) Clculo del tiempo de lavado.

Mediante la ecuacin (3.24) se calcula n. De acuerdo a los datos del ejemplo:
r = (1 )n
0.01 = (1 0.8)n
entonces,
n = 2.86
Volumen de lavado
Volumen retenido
Aplicando la ecuacin (3.30) conociendo que el volumen retenido es 0.01 del

volumen del filtrado,
tL = (9 s)(2)(2.86)(0.01) = 0.5 s
3.4.3.
Filtracin de Lecho Profundo
Los FLP se alimentan tpicamente por una centrfuga que opera a flujo constante. Conforme el fluido pasa a travs del filtro las partculas son removidas y
el filtro se va agotando, hasta que eventualmente se empieza a detectar y elevar
el nivel de slidos a la salida del filtro. Paralelamente, la cada de presin en
99
el lecho se va incrementando. La operacin se detiene cuando la concentracin

de slidos a la salida del filtro o turbidez alcanza un valor mximo aceptable
o punto de ruptura, antes de alcanzar su cada de presin mxima (operacin
limitada por la ruptura). Alternativamente, la operacin puede ser detenida al
alcanzarse la cada de presin mxima, sin haberse alcanzado el punto de quiebre
(operacin limitada por la cada de presin). En cualquiera de los dos casos, el
volumen filtrado por unidad de rea que se procesa por el filtro es considerado
como su capacidad de diseo (Lutz et al., 2009).
La turbidez se define como una medida de la cantidad de luz que se dispersa
y absorbe en lugar de ser transmitida en lnea recta, cuando un haz de luz incide
sobre una muestra. Un mtodo muy utilizado para medir turbidez (EPA, 2003)
utiliza como estndard formacina y la caracterizacin de la muestra se obtiene
en unidades de turbidez de formacina FNU (o NTU unidades nefelomtricas de
turbidez a 90 ).
Ejemplo 3.7. Capacidad de diseo de filtro de lecho profundo.
La mxima turbidez aceptable en la clarificacin de un caldo de clulas de
mamfero es de 3 FTU. Los datos de filtracin del caldo en los filtros A y B son
los siguientes:
V (L/m2 )
0.0
1.0
3.0
4.5
7.0
8.5
11.0
12.0
14.0
16.0
18.0
22.0
Filtro A
F T U P (psi)
0.0
0.0
1.0
4.8
1.2
5.2
1.4
5.3
1.6
6.0
2.2
7.0
3.3
7.5
3.9
7.6
5.5
8.0
5.9
8.1
7.8
8.2
9.0
8.3
V (L/m2 )
0.0
1.0
3.0
5.5
7.0
9.0
10.5
12.5
14.5
17.5
19.0
Filtro B
F T U P (psi)
0.00
0.0
1.00
4.0
1.20
4.5
1.30
4.9
1.40
5.3
1.45
6.3
1.50
7.5
1.60
10.5
1.80
14.5
1.90
19.5
1.95
25.5
Se pide: Estimar la capacidad de diseo de cada uno de los filtros si la

cada de presin de diseo en ambos casos es de 20 psi. Los datos de filtracin
se presentan en la Figura 3.17.
Solucin:
a) Puede observarse en la Figura 3.17a que la operacin en el filtro A est
limitada por el rompimiento. De tal manera que la capacidad de diseo del filtro
es de aproximadamente de V = 10.3 L/m2 .
b) En la Figura 3.17b se muestra que la operacin en el filtro B est limitada
por la cada de presin. La capacidad de diseo del filtro es de aproximadamente
de V = 17.6 L/m2 .
100
Figura 3.17: Curvas de filtracin del Ejemplo 3.7. a) Operacin limitada por la
ruptura y b) Operacin limitada por la cada de presin.
3.4.4.
Sistemas Expertos en Filtracin
La facilidad actual para almacenar y obtener datos electrnicamente ha estimulado el desarrollo de sistema expertos para la seleccin de equipos de separacin slido-lquido. Recientemente ha sido reportado (Holdich, 2003) un sitio
donde se provee un ejemplo del uso esta metodologa.
3.5.
Sumario
La filtracin es ampliamente utilizada en los procesos biotecnolgicos para

remover slidos de lquidos. La teora bsica conjuntamente con algunos experimentos de laboratorio permiten el diseo y operacin racional de los procesos
de filtracin.
Gran parte de los equipos de filtracin empleados en bioseparaciones operan
mediante la formacin de una torta sobre una superficie filtrante por accin
de un gradiente de presin. El filtro ms empleado en bioseparaciones es el
filtro continuo tipo tambor operado mediante vaco, y en menor proporcin
el filtro por lotes de marcos y placas. Los procedimientos de diseo de filtros
que se presentan, consideran la compresibilidad caracterstica de las tortas que
forman los materiales biolgicos, tanto para la operacin por lotes como para la
continua.
Los FLP tambin son importantes en los bioprocesos y son usados para
clarificar caldos de cultivo directamente. Frecuentemente tambin se utilizan
conjuntamente con filtros de esterilizacin.
3.6. PROBLEMAS
3.6.
101
Problemas
3.1. Escalamiento de filtracin. En la filtracin a nivel laboratorio de un

caldo para la recuperacin de gentamicina, la solucin present una viscosidad
de 1.2 cP y un contenido de slidos de 5 g/L. El rea de filtracin empleada fue
de 100 cm2 y el gradiente de presin de 1.8 m de agua. Los datos de filtracin
son los siguientes:
t (s)
10
20
30
40
V (L)
0.60
0.78
0.95
1.10
Se pide: Estimar el tiempo de filtrado para procesar 5, 000 L de este caldo

en un filtro de 1.5 m2 de rea, si el proceso se realiza con un gradiente de presin
igual al empleado en el laboratorio.
Resp. 12 h
3.2. Filtracin por lotes. Los datos de filtracin de S. griseu a un pH de

3.8 y a 2 atm de presin, se ajustan a una recta que pasa por los puntos (V /A,
At/V ) siguientes: (3, 70) y (6, 180), donde (V/A) est en cm y (At/V ) en s/cm.
Se pide: Calcular el rea de filtracin necesaria para procesar 1000 L de
este caldo en un tiempo de 15 min bajo las mismas condiciones.
Resp. 18 m2
3.3. Filtro de placas y marcos. Se efectuaron pruebas de filtracin con

un filtro prensa de marcos y placas bajo las siguientes condiciones:
o = 10.037 kg/m3
= 0.001 N s/m2
Marcos = 430 430 30 mm
Los datos obtenidos durante el experimento aparecen en las primeras tres
columnas de la tabla siguiente:
102
Datos
t
P
2
N/m
(s)
0.4
0.7
1.1
1.3
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
447
1262
1886
2552
3381
3686
4043
4793
5652
6610
8680
9256
V
3
m
0.04
0.10
0.16
0.22
0.28
0.30
0.32
0.36
0.40
0.44
0.52
0.54
Clculos
(V + Vs )/A (t ts )/(V Vs )

s/m3
(m)
0.9
1.1
1.2
1.4
1.6
4609.3
4484.4
4757.1
5244.8
5642.5
1.7
1.8
1.9
2.0
2.2
2.3
6604.5
6826.5
7274.2
7727.7
8399.0
8587.1
Se pide: Estimar a) y b) Rm
Resp. a) = 1.069 1011 m/kg; b) Rm = 6.61 1010 m1
3.4. Filtracin con AF. Un caldo de actinomicetos adicionado con 5 % de
ayudas-filtro se procesa en un filtro prototipo de 35 cm2 de rea y a una presin
de 99, 990 N/m2 , obtenindose los datos siguientes:
t (s)
20
40
60
120
180
300
420
V 106 (m3 )
9.5
16.5
22.0
35.0
45.0
61.0
74.5
Se pide: Estimar a) o /2P , b) Rm /P , c) Rm y d) .

Resp. a) 674, 356.5 s/m2 y b) 5367.71 s/m
3.5. Escalamiento de filtro de marcos y placas. Considerando los datos
del Ejemplo 3.3.
Se pide estimar: a) Cuntos marcos se requieren si la dimensin de stos
es de 75 75 3 cm y b) El tiempo de filtrado si la descarga del filtro se localiza
a 3 m de altura.
3.6. Modificacin de condiciones de filtracin. Se desea filtrar un caldo
que contiene cristales de un antibitico. Las pruebas de filtracin en el laboratorio presentan los siguientes datos:
3.6. PROBLEMAS
103
rea = 89 cm2
P = 2.6 m de Hg
o = 0.34 g/100 cm3
t (s)
10
20
30
V (L)
0.500
0.707
0.866
Se pide: Estimar el tiempo de filtracin si el volumen que se desea filtrar

es de 7, 300 L en un filtro de 1.3 m2 de rea y la solucin tiene una o = 0.28
g/cm3 . La presin a esta escala es la misma.
Resp. 23 h
3.7. Resistencia especfica variable. Las levaduras forman tortas compresibles (Gerstenberg y Sitting, 1980) cuya resistencia especfica ha sido correlacionada con la expresin emprica,
= 1.25 1011 (P )0.9
donde tiene unidades de cm/g y P de atm.
Se pide: Estimar el tiempo necesario para procesar 3, 000 L de un caldo que
contiene 30 g/L de la levadura y presenta una viscosidad de 1.2 cP, en un filtro
piloto de 5 m2 de rea con una cada de presin de 4 atm.
Resp. 19.6 h
3.8. ndice de compresibilidad. El procesamiento de 30 cm3 de un caldo
de P. chrysogenum (de 86 h de cultivo) en un filtro utilizado para medicin de
biomasa en lnea, produjo los siguientes datos:
P (cm de Hg)
10
20
30
40
Tiempo de filtracin
271
191
163
138
Se pide: Estimar el ndice de compresibilidad de la torta considerando despreciable la resistencia del medio.
Resp. 0.52
3.9. Efecto de las condiciones de operacin en filtracin continua.
Se desea investigar el efecto de las condiciones de operacin sobre el flujo en los
filtros continuos.
Se pide: Calcular el incremento en flujo de un filtro continuo tipo tambor
giratorio al vaco cuando:
104
a) Se incrementa la velocidad del filtro de 0.3 rpm a 0.5 rpm, mantenindose

el resto de los parmetros constantes.
b) Se incrementa de 30 a 40 % el porcentaje de rea sumergida (rea sumergida/rea total de filtracin).
Resp. a) 29 % y b) 15 %.
3.10. Tiempo de filtracin. En un proceso de filtracin se obtienen 100 g
de una torta que forma un lecho de 80 cm3 con una porosidad de 0.2. El tiempo
de filtrado fue de 20 min y el volumen de filtrado colectado en este periodo
de 2 L. La resistencia del medio filtrante se considera despreciable y la torta
incompresible.
Se pide: Estimar el tiempo para formar una torta de 300 g.
Resp. 180 min.
3.11 Escalamiento de un filtro tipo tambor rotatorio. Un filtro tipo
tambor rotatorio opera a 3 rpm y filtra 400 L/min. Se puede considerar la
resistencia del medio filtrante despreciable.
Se pide: Calcular a que velocidad debe girar el filtro para procesar 1600
L/min de filtrado, utilizando el mismo vaco y el mismo volumen sumergido del
tambor.
Resp. 48 rpm
3.12. Filtracin a flujo constante. La mayora de los procesos de filtracin
son operados a presin constante, sin embargo hay casos en donde se desea un
flux constante. Los siguientes datos se colectaron en un filtro con rea de 0.1 ft2
con una cada de presin constante de 1.0 atm a travs del filtro (y torta).
Tiempo
(min)
5
10
20
30
Vol. filtrado
(L)
0.40
0.55
0.76
0.93
La viscosidad de filtrado es de 1.1 cP y la alimentacin contiene 0.15 kg/L

de torta seca.
Se pide: Si se utiliza el mismo filtro y el mismo fluido y si se desea un
flujo de filtrado constante de 0.03 L/min, calcular la cada de presin despus
de colectar 0.8 L del filtrado, suponiendo que la torta es incompresible.
Resp. 1.8 atm. Pista. Partir de la ecuacin 3.13 para obtener la expresin
de flujo constante (dV /dt = Q).
3.13. Curvas de la tasa de lavado. Obtener la grfica de las curvas de
la tasa de lavado (Fig 3.16) utilizando la ecuacin (3.24).
3.6. PROBLEMAS
105
3.14. Simulacin de curvas de lavado. El modelo de dispersin es uno

de los modelos ms utilizados actualmente para predecir curvas de lavado y est
dado por la siguiente expresin (Marecek, 1980):

1
1n
C
2
(P ez )
= 0.5 1 + erf
1
C0
2n 2
En esta expresin P ez es el nmero de Peclet en la torta y es funcin del
coeficiente de dispersin axial DL , estos parmetros estn dados respectivamente
por:
P ez =
L
DL

DL = DAB 0.707 + 55.5 (P ep )0.96
El nmero de Peclet referido a la partcula, P ep , est dado por:
P ep =
dp
DAB
en las expresiones anteriores:

C/C0 :Concentracin adimensional de soluto a la salida de la torta.
erf : Funcin error.
n : Razn de lavado dada por el volumen de lavado/volumen retenido.
L : Profundidad del lecho
: Velocidad intersticial promedio del lquido (flujo sobre rea libre de torta;
(Q/L A)
L : Porosidad del lecho de la torta.
Q : Flujo de lavado.
A : rea de la seccin transversal de la torta.
dp : Tamao promedio de las partculas de la torta (volumen/superficie).
En un filtro por lotes a nivel piloto de 0.5 m2 de rea, se realiza una filtracin
a una presin constante de 5105 N/m2 . La torta es incompresible y la eficiencia
de lavado determinada experimentalmente fue de 77 %. La torta se encuentra
saturada y se requiere reducir el contenido de soluto en un 95 % utilizado agua
como lquido de lavado, para desplazar la solucin salina que contiene la torta.
Las constantes caractersticas del sistema son:
106
Propiedad
Difusividad del soluto
Tamao promedio de partcula
Resistencia especfica de la torta
Porosidad de la torta
Resistencia del medio
Concentracin de slidos secos
Densidad de los slidos secos
Densidad del agua
Viscosidad del agua
Volumen del lquido en la suspensin
filtrada para formar la torta
Valor
DAB = 1.5 109 m2 /s
dp = 5.96 106 m
= 1.07 1011 m/kg
L = 0.24
Rm = 6.5 1010 m1
0 = 105.2 kg/m3
s = 2600 kg/m3
H2 0 = 1000 kg/m3
= 0.001 Ns/m2
Vs = 0.028 m3
Se pide:
a) Estimar la razn de lavado n, utilizando la ecuacin (3.24).
b) Calcular el flujo de lavado, Q, utilizando la ecuacin (3.5) y considerando
que en el lavado el flujo se mantiene constante.
c) Estimar la velocidad intersiticial en el lecho.
d) Estimar la profundidad del lecho, L.
e) Obtener la expresin para la curva de lavado del sistema (C/C0 vs t)
utilizando el modelo de dispersin.
f) Graficar la curva de lavado del sistema.
g) Obtener la expresin de la curva de razn de lavado del sistema (r vs n).
h) Graficar la curva de razn de lavado del sistema.
Resp. a) n = 2; b) Q = 3.60 104 m3 /s; c) = 3 103 m/s; d) L = 2.
98 103 m; e) P ez = 9.94.
f) Pista: Utilizar la instruccin de MATLAB:
csc0 = 0.5 (1 + erf (3.15 (1 n)./(2 n.0.5)));
g) Pista: Por balance de masa,
r =1
n
0

0
C
Co
dn
C
Co
dn
h) Pista: Para obtener una aproximacin de las integrales se puede utilizar

una instruccin como:
int1 = quadl(csc01, 0.000001, n(i));
3.6. PROBLEMAS
107
Figura 3.18: Curvas de Lavado y Razn de Lavado del Problema 3.14.

Resp. Las respuestas a los incisos f) y h), se presentan en la Figura 3.18.
3.15. Cambio de condiciones de operacin de un filtro tipo tambor.
Se requiere aumentar 30 % la capacidad de filtracin de un filtro tipo tambor
rotatorio por un incremento en la produccin de cefalosporina , la cual es producida a partir de un hongo.
Se pide estimar:
a) El incremento de las rpm requeridas, o bien,
b) El incremento del ngulo de formacin de la torta.
Resp. a) 69 %
3.16. Uso de AF en un filtro de marcos y placas. Un lodo es filtrado
en un filtro prensa de marcos de 2.54 cm. En el procesamiento de un lote, en
los primeros 10 min la bomba de alimentacin trabaja a su mxima capacidad.
Durante este periodo la presin se incrementa a 4.0 atm y se obtiene el 25 % del
filtrado total. El resto de la filtracin se realiza en 1.0 h y el tiempo de servicio
del filtro es de 15 min.
Se ha encontrado que si se utilizan ayudas-filtro en capas de 0.16 cm de
espesor, la resistencia de la torta se reduce en un 75 %.
Se pide: Calcular el incremento en la produccin de filtrado (L/min) si
aplicar la ayuda filtro toma 3 min.
Pista: Vf = (8 Rm A) / (o )
Resp. 8 %
108
3.7.
Bibliografa
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297, 1650.
Captulo 4
Centrifugacin
4.1.
Introduccin
La separacin de substancias de diferente densidad mediante movimiento

giratorio se conoce como centrifugacin.
La centrifugacin es una de las principales operaciones utilizada para la separacin de clulas de caldos biolgicos (Roush y Lu, 2008; Wiesmann y Bider,
1982), especialmente cuando los caldos no son fcilmente filtrables, o la adicin de ayudas-filtro no es recomendable por razones de costos o de produccin
excesiva de desechos contaminantes.
La centrifugacin tambin es empleada en la remocin de desechos celulares
de caldos de clulas que han sido sujetas a rompimiento, en la separacin de
precipitados proteicos (Bell et al., 1983) y para la recuperacin de productos
insolubles como los cuerpos de inclusin. Estos ltimos debido a su tamao
(0.3 1 m) y alta densidad (1.3 1.5 g/cm3 ) pueden ser separados de los
restos celulares por centrifugacin en dos o tres pasos, utilizando agua de lavado
y detergentes para facilitar la separacin.
Cuando se utiliza la centrifugacin, la diferencia entre la densidad de los
slidos (clulas o partculas) y el caldo, se incrementa por la accin de las fuerzas
centrfugas que se generan por las altas velocidades de rotacin de los equipos
que se emplean (Bjurstrom, 1985).
En la seccin 4.2 de este captulo se presentan los fundamentos de la centrifugacin que se derivan de la Ley de Stokes, la cual describe los aspectos
bsicos del movimiento de un slido en un lquido cuando existe un gradiente
de densidad.
Existen diferentes tipos de centrfugas que se utilizan tanto a nivel laboratorio como a escala industrial y su aplicacin depende de varios factores anlogos
a los mencionados para la filtracin en la Tabla 3.1. En la seccin 4.3 se hace
una descripcin general de estos equipos. La seccin 4.4 se centra en los aspectos
bsicos del diseo y seleccin de centrfugas.
112
CAPTULO 4. CENTRIFUGACIN
4.2.
Fundamentos de la Centrifugacin
El estudio de las separaciones slido-lquido por centrifugacin est basado

en la teora de la sedimentacin. sta permite desarrollar algunas predicciones
del comportamiento de los equipos centrfugos, no slo para poder especificarlos
y dimensionarlos, sino que tambin ofrece un apoyo adecuado para su correcta
operacin.
La teora de la sedimentacin est basada en la Ley de Stokes que establece
los aspectos bsicos del movimiento de un slido en un lquido cuando existe
un gradiente de densidad. Este movimiento puede ser causado por la fuerza
gravitacional o por una fuerza centrfuga. Con base a lo anterior, esta seccin
se centra en cuatro aspectos fundamentales:
La Ley de Stokes.
La sedimentacin por accin de la gravedad.
La sedimentacin por accin de una fuerza centrfuga.
El factor G.
4.2.1.
Ley de Stokes
La velocidad de sedimentacin de una partcula esfrica en un medio continuo

para Reynolds menores a 1 (regin de resistencia viscosa), est descrita por la
Ley de Stokes (Fig. 4.1). Se puede suponer que esta ley es aplicable para las
suspensiones diluidas caractersticas de los caldos biolgicos .
Figura 4.1: Factor de friccin para esferas. Fuente: Bird et al., 1964.
c
con el p erm iso de Revert S.A. Copyright 1964.
Reproducida
4.2. FUNDAMENTOS DE LA CENTRIFUGACIN
113
La Ley de Stokes establece que cuando se aplica una fuerza a una partcula en
un medio continuo sta se acelera (F = ma), hasta que alcanza una velocidad a
la cual la resistencia a su movimiento iguala a la fuerza aplicada (mp d/dt = 0).
En una sedimentacin libre la fuerza que acta sobre la partcula es la de la
gravedad, mientras que en una sedimentacin centrfuga la fuerza es la del campo
centrfugo.
Las fuerzas que se oponen al movimiento de las partculas pueden agruparse
en la fuerza de flotacin descrita por el principio de Arqumides y la fuerza de
arrastre (resistencia de forma y de friccin) descrita por la Ley de Stokes. De
acuerdo a lo anterior, el balance de fuerzas para una partcula en equilibrio en
un medio continuo se expresa de la siguiente manera (Fig. 4.2):
Fuerza de aceleracin (Fac ) = Fuerza de flotacin (Ff )+Fuerza de arrastre (Fa )
Para el caso de partculas esfricas el balance anterior puede expresarse como:
Figura 4.2: Balance de fuerzas en una partcula esfrica en equilibrio en un

medio continuo.
d3p p a
d3p L a
=
+ 3dp
6
6
donde:
dp : Dimetro de la partcula.[L].
p : Densidad de la partcula.[M/L3 ].
a: Aceleracin. [L/t2 ].
L : Densidad del lquido. [M/L3 ].
: Viscosidad del fluido. [M/L t].
(4.1)
114
: Velocidad terminal de la esfera. [L/t].

Es importante hacer notar que si en el proceso de sedimentacin la partcula
parte del reposo, conforme la velocidad de la partcula se incrementa la fuerza
de arrastre se incrementa. Al alcanzar el equilibrio de fuerzas la partcula se
mueve a la velocidad constante (velocidad terminal).
La ecuacin (4.1) puede ser modificada para presentarse como una expresin
de la Ley de Stokes, de la siguiente manera:

d3p a
p L
(4.2)
6
La velocidad de sedimentacin de una partcula de acuerdo a la ecuacin
(4.2) es la siguiente:
3dp =
d2p a
18
(4.3)
donde: = p L
La Ley de Stokes implica que un proceso de sedimentacin puede ser mejorado incrementando el tamao de partcula o la diferencia de densidades, reduciendo la viscosidad del medio o incrementando la aceleracin de las partculas. Esta
Ley ha sido desarrollada para partculas esfricas, que se mueven uniformemente
en fluidos newtonianos y que no se obstruyen entre s.
Se puede expresar la velocidad de sedimentacin de una partcula, en dos
casos lmites de inters: a) sedimentacin por accin de la gravedad y b) sedimentacin por accin de una fuerza centrfuga.
4.2.2.
Sedimentacin por Accin de la Gravedad
En varios procesos de separacin slido-lquido la fuerza impulsora de la

sedimentacin es slo la de la gravedad. La velocidad de sedimentacin por
gravedad de una sustancia, proporciona informacin bsica necesaria para el
diseo de cualquiera de los procesos de sedimentacin.
De acuerdo con la Ley de Stokes si la aceleracin de la sedimentacin es slo
la de la gravedad, la expresin de la velocidad de sedimentacin de acuerdo con
la ecuacin (4.3) es:
g =
d2p g
18
donde:
a = g: Aceleracin de la gravedad. [L/t2 ].
g : Velocidad terminal en un campo gravitacional. [L/t].
(4.4)
115
Ejemplo 4.1. Velocidad y posicin de una partcula durante su

sedimentacin.
Una partcula de 1.0 m de dimetro y densidad de 1.06 g/cm3 , se sedimenta
en agua cuya densidad es de 1.00 g/cm3 y su viscosidad de 0.01 g/cms.
Se pide: Graficar la velocidad y posicin de la partcula con el tiempo.
Solucin:
El balance de fuerzas sobre la partcula est dado por:

d3p p d
d3p p g d3p L g
=
3dp
6
dt
6
6
Esta ecuacin puede ser integrada para obtener:

18t
= ( ) 1 exp 2
dp p
La integracin de la expresin de la velocidad permite obtener la ecuacin

de la variacin de la posicin de la partcula con el tiempo.
En la Figura 4.3 se presenta el programa MATLAB que se utiliz para obtener la Figura 4.4.
4.2.3.
Sedimentacin Centrfuga
En las separaciones slido-lquido mediante centrfugas la velocidad de sedimentacin es mayor que la sedimentacin libre o gravitacional, debido a que los
equipos al girar producen una mayor aceleracin de las partculas (Brunner y
Hemfort, 1988). Bajo estas condiciones la velocidad de sedimentacin derivada
de la ecuacin (4.3) es:
=
d2p 2 r
18
(4.5)
donde:
a = 2 r: Aceleracin centrfuga. [L/t2 ].
: Velocidad de rotacin en radianes. [t1 ].
r: Distancia radial del eje de rotacin a la partcula. [L].
Varias aplicaciones importantes pueden obtenerse de los principios inherentes
a las ecuaciones (4.4) y (4.5), a continuacin se presentan algunas de ellas:
a) El dimetro aparente de las bacterias es del orden de diez veces menor
que el de las levaduras, por lo que su velocidad de sedimentacin es cien veces
menor, ya que sta es proporcional al cuadrado del dimetro de la partcula.
b) Las clulas contienen ms del 70 % de agua por lo que su densidad es muy
semejante a la de los caldos, por lo tanto el parmetro puede ser muy bajo.
c) Algunos caldos biolgicos son muy viscosos, propiedad que dificulta la
sedimentacin.
116

d) La velocidad de sedimentacin puede ser incrementada en un equipo centrfugo aumentando la velocidad de rotacin o la distancia de sedimentacin
(dimetro de la centrfuga).
Para obtener una expresin para describir la sedimentacin en flujo no laminar la ecuacin (4.2) puede ser expresada como:
d3p a
6
d3p a
6
= AKf
d2p
4

d3p a
6AK
24
1
L 2
dp L
2
117
Figura 4.4: Solucin del Ejemplo 4.1. Grfica de la velocidad y la distancia de

una partcula a diferentes tiempos.
donde:
A: rea caracterstica. [L2 ].
K: Energa por unidad de volumen. [M/Lt2 ].
f : Factor de friccin. [adimensional.]
Particularmente, para flujo reptante alrededor de una esfera (Bird et al.,
2002),
24
Re < 0.1
Re
Para valores mayores del nmero de Reynolds se tiene:
f=
f=

24
+0.5407
Re
f = 0.44
2
Re < 6000
5 102 < Re < 105
Ejemplo 4.2. Separacin centrfuga diferencial.

El principio de separacin por centrifugacin diferencial se basa en las diferentes velocidades de sedimentacin de las partculas. En el caso de homogeneizados biolgicos, las diferentes partculas celulares suelen ser separadas
por centrifugacin diferencial.
118
Se pide: Estimar el tiempo de sedimentacin relativo de una partcula celular de dimetro 5 m (ncleo) con respecto al de una de dimetro de 1 m
(mitocondria), suponiendo que ambas tienen la misma densidad y estn sujetas
al mismo campo centrfugo en una centrfuga de tubos (Fig. 4.5) los cuales giran
perpendicularmente al eje.
Figura 4.5: Centrifugacin diferencial. Adaptada de: Bailey y Ollis, 1986.
Re-
c
producida con el p erm iso de M c Graw Hill Inc. Copyright 1986.
Solucin:
De acuerdo a la ecuacin (4.5) y a la geometra del sistema, la velocidad de
sedimentacin est dada por:
r =
d2p 2 r
dr
=
dt
18
La expresin anterior puede ser utilizada para el clculo del tiempo de sedimentacin integrando entre los lmites:
t=0
r = R1
t=t
r = R2
una vez realizada la integracin se obtiene la expresin siguiente:

18
R2
t= 2
ln
2
dp
R1
Aplicando la expresin anterior a cada partcula, (al ncleo N y a la mitocondia M) se pueden obtener las siguientes proporciones:
119
(d2p )M
(d2p )N
tN
tM
tN
= (tM )
(1 m)2
tM
=
25
(5 m)2
donde tN es el tiempo que tarda la partcula N en avanzar de R1 a R2 . Anlogamente, tM es el tiempo que tarda la partcula M en avanzar de R1 a R2 .
Ejemplo 4.3. Tiempo de sedimentacin.
La centrfuga del ejemplo anterior va a ser utilizada para separar levaduras
con dimetro de Stokes de 10 m y densidad de 1.05 g/cm3 . Las propiedades
del caldo se pueden suponer iguales a las del agua. La distancia del eje de giro
a la superficie del lquido en los tubos es R1 = 3 cm y a la base del tubo es de
10 cm. La centrfuga gira a 400 rpm.
Se pide: Estimar el tiempo para lograr una sedimentacin completa de las
levaduras de la suspensin.
Solucin:
Se debe estimar el tiempo que tardan en sedimentar las levaduras que estn
ms apartadas del fondo del tubo, es decir en la superficie del lquido del tubo.
Aplicando la expresin desarrollada en el ejemplo anterior se tiene:
t =
18
ln
2
dp 2
R2
R1

10
3
t =

2
g
400 2
4
2
2
(10 10 ) cm (1.05 1)
s2
cm3
60
t = 2, 471 s
18 0.01
4.2.4.
g
ln
cm s
Factor G
En la caracterizacin y escalamiento de centrfugas frecuentemente se emplea

el factor G, que es una medida relativa de la velocidad de sedimentacin de una
partcula en un campo centrfugo con respecto a su velocidad de sedimentacin
en el campo gravitacional. De acuerdo a lo anterior mediante las ecuaciones
(4.4) y (4.5) se obtiene:
G=
2r
=
g
g
(4.6)
G puede ser referida a un radio caracterstico el cual generalmente es el radio

exterior del campo centrfugo. Esto permite desarrollar expresiones prcticas
para estimar la G como la siguiente:
120
G = 5.6 107 N 2 D
donde N est en rpm, el dimetro del tazn de la centrfuga (o punto de inters)

D en mm y G es adimensional.
4.3.
Equipo de Centrifugacin
La sedimentacin centrfuga y la filtracin constituyen los principios bsicos

de operacin de los principales equipos de centrifugacin que se emplean para
separar ya sea dos lquidos o los slidos de una suspensin (Svarovsky, 2000).
La principal clasificacin de los equipos de centrifugacin se basa en el diseo
de su tazn o tina, y en la forma como se descargan de los slidos sedimentados.
En esta seccin se presentan los principales equipos de centrifugacin existentes de acuerdo a su clasificacin, en dos grupos:
Equipos de Sedimentacin Centrfuga: Centrfugas tubulares, de cmara
mltiple, de tazn slido, decantadoras y de discos.
Equipos de Centrifugacin-Filtracin.
4.3.1.
Equipos de Sedimentacin Centrfuga
En los equipos de sedimentacin centrfuga tambin llamados de tazn slido o canasta no perforada (para distinguirlos de los de canasta perforada), la
suspensin se alimenta a un tazn que se hace girar provocando que los slidos
se colecten sobre una pared y el sobrenadante se recupere por rebosamiento o
por accin de un colector de lquido.
En relacin a la forma de descargar los slidos, las centrfugas sedimentadoras pueden operar en forma intermitente, semintermitente o continua.
Las centrfugas sedimentadoras se utilizan en operaciones de separacin
slido-lquido, tanto para remocin de biomasa (clarificacin) como para recuperar slidos durante la cosecha celular.
En las operaciones de clarificacin el caldo a procesar generalmente contiene
una baja cantidad de slidos, del orden del 1 %. El objetivo es producir un
lquido claro de tal manera que en las operaciones de separacin posteriores,
la interferencia por slidos sea mnima. En las operaciones de recuperacin de
slidos las corrientes de salida pueden contener hasta un 40 % de slidos en
volumen.
A continuacin se efecta una breve descripcin de los principales tipos de
centrfugas sedimentadoras utilizadas en las bioseparaciones.
Centrfuga tubular
Las Centrfugas Tubulares (CT) consisten bsicamente de un tubo vertical
esbelto que gira a altas velocidades por la accin de un motor elctrico, o una
turbina de aire o vapor (Fig. 4.6a).
4.3. EQUIPO DE CENTRIFUGACIN
121
Figura 4.6: Centfugas sedimentadoras. a) Tubular y b) De tazn slido.

Este tipo de centrfuga es uno de los ms eficientes y sencillos, capaz de
separar partculas hasta de 0.1 m. Las CT pueden contar con un sistema de
enfriamiento por lo que son empleadas en el manejo de caldos con enzimas o
protenas.
Como se observa en la Figura 4.6a, durante una operacin tpica de la CT
la suspensin es alimentada por la parte inferior y los slidos sedimentan en
la pared del tubo. El lquido claro se colecta por rebosamiento en la parte
superior. Conforme se forma la torta, el rea de flujo se reduce y el tiempo
de residencia del lquido disminuye. Esto se traduce en un aumento gradual
del contenido de slidos en el sobrenadante que puede ser determinado por
mediciones de turbidez. La torta tiene que ser descargada manualmente, por lo
que su operacin es por lotes.
Un modelo tpico de laboratorio consta de un tubo de 4.5 cm de dimetro
por 25 cm de longitud, el cual puede girar a una velocidad de hasta 50, 000 rpm,
desarrollando campos hasta de 62, 000 G, con una capacidad de hasta 100 L/h.
Los modelos industriales tpicos cuentan con un tubo de 11.5 cm de dimetro
por 76 cm de longitud, el cual puede girar hasta con 15, 000 rpm desarrollando campos de hasta de 12, 000 G, con capacidad entre 500 y 3, 500 L/h. La
capacidad de slidos es de 2 a 4 kg por lote.
Este tipo de centrfugas presentan algunos modelos completamente sellados
para minimizar problemas de formacin de espuma y aerosoles, lo cual puede
ocasionar fugas del sistema y debe ser evitado cuando se trabaja con sustancias
txicas o clulas recombinantes.
Centrfugas de tazn slido
Las centrfugas de tazn slido (Fig. 4.6b) o centrfugas por lotes son muy
similares a las centrfugas tubulares pero menos esbeltas; su relacin de longitud
a dimetro es de alrededor de 0.6, mientras que el de las tubulares es de 4 8.
122
Las centrfugas de tazn slido normalmente son operadas con su eje en

posicin vertical. La alimentacin de la suspensin se efecta en el fondo del
tazn, el cual al girar permite que los slidos se depositen sobre la superficie
de la pared del tazn y el sobrenadante se obtenga en forma continua por rebosamiento en la parte superior. En algunos modelos el ciclo se controla por
medio de un detector del espesor de la torta. El lquido residual sobre la torta
puede ser removido utilizando un tubo rasador mvil.
La forma de descarga de los slidos depende de su naturaleza. Los slidos muy fluidos pueden descargarse sin parar la centrfuga y los slidos muy
compactos pueden descargarse utilizando una cuchilla interior de la centrfuga
que permite raspar la pared del tazn para desprender la torta. Ambos tipos
de descarga se realizan a travs de la parte inferior de la centrfuga. Un tipo
especial de centrfuga por lotes es la de tazn triple (Fig. 4.7).
Figura 4.7: Centrugas de tazn triple. Fuente: Svarousky, 1979.
Reproducida con
c
el perm iso de M cGraw-Hill Inc. Copyright 1979.
Las centrfugas por lotes en su versin de laboratorio presentan tazones de

15 cm de dimetro y las de planta piloto entre 23 53 cm, con capacidades
volumtricas de 2.7 a 27.0 L. Las industriales tienen tazones entre 95 125 cm
con capacidades volumtricas de 100 a 300 L.
Centrfugas de cmara mltiple
Las centrfugas de cmara mltiple (Fig. 4.8) fueron creadas para incrementar la capacidad de manejo de slidos de las centrfugas tubulares. Estas
centrfugas consisten de una serie de tazones concntricos con deflectores que
provocan un flujo en serie de la suspensin. Su operacin permite la clasificacin
de las partculas conforme pasan de una cmara a otra. El lquido claro se obtiene por rebosamiento en la ltima cmara. Este arreglo permite un mayor
123
tiempo de residencia del lquido y una mayor capacidad de manejo de slidos,

que la centrfuga tubular.
Figura 4.8: Centrfuga de cmara mltiple. Fuente: Axelsson, 1985.
Reproducida
c
con el permiso de Elsevier Science Inc. Copyright 1985.
El dimetro de los equipos de cmara mltiple vara de 335 a 615 mm, con
velocidades de rotacin entre 5, 000 y 8, 400 rpm, produciendo campos entre
5, 000 y 9, 000 G, respectivamente. Los tipos ms comunes constan de 2 a 6
cmaras. La capacidad de manejo de slidos vara entre 2.5 y 60.0 L dependiendo
del material y el nmero de cmaras. La descarga de slidos y mantenimiento
de estos equipos es ms difcil que el de las centrfugas tubulares, ya que la
centrfuga tiene que ser desmantelada para sacar los slidos. Este tipo de equipo
no permite el lavado de la torta.
Centrfugas decantadoras o de tornillo
Las centrfugas decantadoras (Fig. 4.9) se caracterizan por un tazn horizontal con una seccin cilndrica y una seccin cnica, con una relacin de longitud
a dimetro entre 1.5 3.5. El tazn contiene un tornillo transportador que gira
en la misma direccin, pero a una velocidad ligeramente superior o inferior que
el tazn (entre 5 - 100 rpm de diferencia). Las velocidades de rotacin son de
1, 600 a 6, 000 rpm por lo que los campos centrfugos son bajos.
En las centrfugas decantadoras la suspensin es introducida a travs de
perforaciones por un tubo axial concntrico a la flecha del tornillo, al final de
la seccin cnica o de compresin de slidos. Los slidos que se depositan en
la pared son transportados y descargados continuamente por el extremo cnico
de la centrfuga, donde escurren antes de salir. El lquido claro se obtiene por
rebosamiento en el extremo opuesto a travs de orificios de descarga que fijan
el nivel del lquido en la centrfuga.
124
Figura 4.9: Centrfuga decantadora. Fuente: Axelsson, 1985.
Reproducida con el
c
permiso de Elsevier Science Inc. Copyright 1985.
Existen diversos diseos de centrfugas decantadoras. Los dimetros de los

tazones varan de 15 a 140 cm para los modelos piloto e industriales. La descarga de slidos vara de 30 kg/h hasta 60 ton/h, con alimentaciones entre 3.8 y
1890.0 L/min, respectivamente. La longitud de la seccin cilndrica y la seccin
cnica pueden variar de acuerdo a las aplicaciones. Entre ms larga sea la seccin cilndrica mayor es la clarificacin alcanzada. Por otro lado, el aumento de
longitud en la seccin cnica permite la obtencin de tortas con menor contenido
de agua.
Entre mayor sea el nivel de lquido dentro de la centrfuga se obtendr una
mejor clarificacin, pero un menor escurrimiento de la torta en la seccin cnica.
La disminucin de la velocidad de rotacin del tornillo transportador aumenta
la capacidad de desage de la torta pero disminuye la capacidad de manejo de
slidos.
La centrfuga de tornillo es una de las ms utilizadas en bioseparaciones
principalmente para manejo de grandes cantidades de slidos como es el caso
del tratamiento de aguas residuales (Amirante y Catalano, 2000).
Centrfuga de discos
La centrfuga de discos consta de un eje vertical sobre el cual se monta un
conjunto de discos en forma de conos truncados, uno sobre otro. El rotor de la
centrfuga provoca el giro tanto de los discos como del tazn de la centrfuga
(Fig. 4.10).
Las centrfugas de discos son las ms utilizadas en BSL. Los discos constan
de bordos internos que permiten mantener pequeas separaciones entre ellos,
del orden de 0.5 a 2.0 mm. El ngulo que forman los conos con la vertical vara
entre 35 y 50 dependiendo de la aplicacin particular. Entre la pila de discos
y el tazn existe un espacio que permite la acumulacin de los slidos.
125
Figura 4.10: Centrfugas de discos. a) Retencin de slidos. b) Tazn abierto.

Fuente: Jacobs y Penney, 1987. Reproducida con el perm iso de John W iley and Sons.
c
Copyright 1987.
Durante la operacin de la centrfuga de discos, la suspensin es alimentada

continuamente en el fondo del tazn a travs de la parte central de la flecha,
y fluye hacia arriba entre las placas hacia la salida en la parte central superior
del equipo. Debido a la fuerza centrfuga los slidos se depositan en la cara
interna de los discos, resbalando hacia la cmara colectora debido al ngulo de
los discos.
En relacin a la forma de descarga de slidos los principales tipos de centrfugas de discos son de: a) operacin por lotes con respecto a la descarga de
slidos, tambin llamadas de retencin de slidos, b) tazn abierto de descarga intermitente de slidos, c) vlvula tipo boquilla de descarga intermitente de
slidos y d) boquilla para la descarga continua de slidos.
En las centrfugas de retencin de slidos (Fig. 4.10a) stos se acumulan
hasta que la cmara se llena. La centrfuga tiene que ser detenida y descargada
manualmente o con auxilio de un forro que se coloca previamente sobre la pared
del tazn. Debido a la forma de su descarga de slidos, este tipo de centrfuga
es recomendable slo para suspensiones diluidas conteniendo alrededor de 1 %
en volumen de slidos.
El dimetro de los tazones de las centrfugas de retencin de slidos vara
de 24 a 44 cm y las fuerzas centrfugas de 5, 000 a 8, 000 G. La capacidad de
slidos vara de 5 20 L y los flujos de 0.4 a 1, 500 L/min.
Las centrfugas de disco de tazn abierto (Fig. 4.10b) constan de dos piezas
cnicas unidas horizontalmente por sus caras ms grandes. La descarga de slidos se realiza por medio de un sistema hidrulico que permite abrir y cerrar los
orificios de descarga entre las piezas. La duracin y frecuencia de la apertura de
la descarga depende de la cantidad y fluidez de los slidos. Los valores tpicos
son de 0.13 a 0.30 s de apertura por minuto de operacin. Esta frecuencia es
126
controlada con relojes acoplados a medidores de lodo o medidores de turbidez

en el lquido de salida. Este tipo de centrfugas permite manejar caldos con contenido de slidos hasta del 10 %. Las fuerzas centrfugas varan de 5, 000 a 7, 000
G y los gastos de 3.8 a 1, 500 L/min.
En las centrfugas con vlvulas tipo boquilla la descarga de slidos se controla con este tipo de vlvulas situadas en la periferia del tazn. Sus ciclos varan
de 0.07 a 0.10 s de apertura por minuto de operacin. Tal precisin no puede ser
lograda por las centrfugas de tazn abierto. La ventaja de este tipo de centrfugas, debido a que generan campos de hasta 15, 000 G, es que son especialmente
tiles para caldos biolgicos donde el diferencial de densidad suele ser bajo y la
viscosidad alta. Las suspensiones que pueden ser manejadas, alcanzan hasta un
10 % en volumen de slidos.
En las centrfugas de boquillas con descarga continua stas se sitan en la
periferia del tazn. El nmero y el tamao de las boquillas se ajusta de tal
manera que exista un flujo continuo de slidos, sin que stos se acumulen. El
espaciamiento de las boquillas debe prevenir zonas muertas de depsitos de
slidos. La principal ventaja de este tipo de unidades es que pueden manejar
suspensiones ms concentradas.
Las centrfugas de discos en general poseen una gran capacidad de sedimentacin debido principalmente a su gran rea, a sus cortas distancias de
sedimentacin y a los altos campos centrfugos que generan. Por otro lado, requieren de medidas de higiene y seguridad especiales como: a) manejo mecnico
seguro, b) proteccin contra ruido y daos corporales y c) proteccin contra
incendios, explosiones o diseminacin de sustancias txicas o contaminantes.
4.3.2.
Equipos de Filtracin Centrfuga
Los equipos de filtracin centrfuga constan de una tina o canasta perforada

la cual est recubierta con un medio filtrante (una tela o membrana). La suspensin de slidos es alimentada a la tina que al girar a altas velocidades provoca
el depsito de slidos sobre el medio filtrante y la salida de lquido claro. Estos
equipos funcionan como un filtro, slo que la fuerza impulsora del filtrado es la
centrfuga y no una diferencia de presin (Fig. 4.11).
4.4.
Diseo de Equipo de Centrifugacin
El diseo de los equipos de centrifugacin est basado en la teora de sedimentacin, lo cual puede visualizarse ms fcilmente en el caso de las centrfugas
tubulares debido a la sencillez de su geometra. Este anlisis puede ser extendido
al caso de las centrfugas de discos. Por otro lado, los equipos que operan por
filtracin centrfuga presentan variantes de diseo respecto a los dos anteriores.
Con base a lo anterior esta seccin se centra en cuatro aspectos:
Diseo de Centrfugas Tubulares.
Diseo de Centrfugas de Discos.
4.4. DISEO DE EQUIPO DE CENTRIFUGACIN
127
Figura 4.11: Centrfuga de canasta perforada. Fuente: Jacobs y Penney, 1987. a)

c
Carga y b) Descarga. Reproducida con el p erm iso de John W iley and Sons. Copyright 1987.
Escalamiento de Centrfugas.
Diseo de Equipo de Filtracin Centrfuga.
4.4.1.
Diseo de Centrfugas Tubulares
En el diseo de los equipos de centrifugacin se deben considerar los siguientes hechos:

a) De acuerdo con la teora de sedimentacin desarrollada en la seccin 4.2,
las propiedades del caldo (tamao de partcula, diferencia de densidad entre el
slido y el lquido, y la viscosidad del lquido), la velocidad de rotacin y el
radio del giro de la centrfuga, determinan la velocidad de sedimentacin que se
puede lograr en un equipo de sedimentacin centrfugo.
b) La velocidad de sedimentacin conjuntamente con la distancia de sedimentacin, determinan el tiempo de sedimentacin.
c) El gasto o flujo de la alimentacin determina el tiempo de residencia de
las partculas en un equipo dado.
d) El gasto manejable en una sedimentacin centrfuga depende de la geometra especfica del equipo, de su velocidad de giro y de las propiedades del
caldo.
e) Para producir un lquido libre de slidos, el tiempo de sedimentacin en el
equipo debe ser igual o menor al tiempo de residencia de las partculas impuesto
por el flujo o gasto volumtrico. Esto constituye una condicin de diseo para
este tipo de centrfugas.
La Figura 4.12 muestra un esquema de una centrfuga tubular que al girar
forma una capa anular de lquido sobre la pared del tazn. La posicin de las
partculas en esta capa vara tanto por el flujo convectivo axial como por la
sedimentacin radial.
Se puede desarrollar un anlisis sencillo e ilustrativo de la centrfuga tubular
mediante las siguientes suposiciones:
128
Figura 4.12: Esquema de una centrfuga tubular.

a) La alimentacin es una solucin diluida.
b) Las partculas se distribuyen uniformemente en la capa anular.
c) Las partculas sedimentan de acuerdo a la Ley de Stokes.
d) La distancia entre la superficie del lquido y la pared de la centrfuga es
constante.
e) No existe retroflujo (flujo tapn).
En el anlisis, primero se desarrolla una expresin para el tiempo de residencia en la centrfuga, luego una expresin para el tiempo de sedimentacin y
por ltimo se combinan ambas expresiones para relacionar el gasto volumtrico
manejable con las propiedades del caldo y la geomertra de la centrfuga.
Tiempo de residencia
En una centrfuga tubular la velocidad del fluido en el sentido axial est
dada por:
z =
Q
dz
=
dt
A
(4.7)
donde:
Q: Gasto volumtrico. [L3 /t].
A: rea de flujo. [L2 ].
z : Velocidad de la partcula en el sentido axial. [L/t].
De acuerdo a la Figura 4.12, el rea de flujo es igual a la seccin transversal
de la capa anular de fluido y est dada por:
129
A = Ro2 R21 = (Ro2 R12 )
(4.8)
donde:
R1 : Distancia radial del eje de giro a la superficie del lquido. [L].
Ro : Distancia del eje de giro a la pared del tazn. [L].
Con los lmites de integracin apropiados se puede obtener una ecuacin
para el tiempo de residencia de las partculas dentro de la centrfuga empleando
las ecuaciones (4.7) y (4.8), esto es:
L
0
Q
dz =
(R2o R12 )
tr
dt
(4.9)
donde:
L: Longitud de la centrfuga. [L].
tr : Tiempo de residencia de la partcula. [t].
La integracin de la ecuacin anterior permite obtener la expresin para el
tiempo de residencia de la partcula siguiente:
tr =
(R2o R12 )L
Q
(4.10)
Tiempo de sedimentacin y gasto volumtrico

Para desarrollar la expresin del tiempo de sedimentacin de una partcula,
que a su vez permita desarrollar una expresin para el gasto manejable en una
centrfuga tubular, se consideran dos casos de inters:
Caso a) Tiempo para el 100 % de sedimentacin.
Caso b) Tiempo para el 50 % sedimentacin.
Tiempo para el 100 % de sedimentacin y gasto volumtrico El tiempo
de sedimentacin ts de una partcula localizada en la superficie de la capa anular
del fluido en R1 (que es la ms alejada de la pared, o ms dificil de sedimentar),
puede ser obtenido a partir de la Ley de Stokes considerando el movimiento de
la partcula en el sentido radial,
r =
d2p 2 r
dr
=
dt
18
(4.11)
en este caso, inicialmente la partcula se localiza en R1 y en el momento ts

alcanza la pared en Ro , de tal manera que:
130
Ro
d2p 2
dr
=
r
18
ts
dt
(4.12)
R1
y la expresin para el tiempo de sedimentacin de la partcula en este caso es:

ts =
18
ln
d2p 2
Ro
R1
(4.13)
Es ms conveniente expresar la ecuacin (4.13) en trminos de g dada por

la ecuacin (4.4), para obtener:
ts =
g
ln
g 2
Ro
R1
(4.14)
La condicin de diseo donde el tiempo de sedimentacin debe ser menor

o igual al tiempo de residencia, puede alcanzarse mediante la igualacin de las
ecuaciones (4.10) y (4.14). Este resultado permite obtener una expresin para
el gasto manejable en una centrfuga tubular para producir un lquido claro o
lograr un 100 % de sedimentacin. Esta expresin es la siguiente:
2
L Ro2 R21

Q = ( g )
Ro
g
ln
R1
(4.15)
En el resultado anterior es importante hacer notar que el flujo permisible es

funcin de las propiedades del caldo contenidas en g , y de las caractersticas
de la centrfuga contenidas en el parntesis cuadrado de la derecha.
Tiempo para el 50 % de sedimentacin y gasto volumtrico Es una
prctica comn en las bioseparaciones slido-lquido, el que los equipos se especifiquen para la remocin del 50 % de las partculas de una suspensin de un
tamao dado o tamao de corte. Otra interpretacin del tamao de corte, es la
de especificar el tamao de partcula para el cual todas las partculas mayores
sedimentan en mayor proporcin y todas las menores de ese tamao sedimentan
en menor proporcin.
Si se considera que en la capa anular del lquido de una centrfuga tubular
las partculas del slido se distribuyen uniformemente, stas se encontrarn en
cantidades iguales en subcapas anulares de caldo de igual rea transversal. El
radio R50 que divide la capa anular en dos subcapas de igual volumen puede
obtenerse de la igualdad siguiente:
2
(Ro2 R250 )L = (R50
R21 )L
de tal manera que:
(4.16)
R50 =
131
1/2
Ro2 + R12
2
(4.17)
La ecuacin (4.11) debe ser integrada para este caso con lmites nuevos para
expresarla en la forma siguiente:
Ro
50
dr
=
r
d250 2
18
ts
(4.18)
dt
R50
El resultado de la integracin anterior expresado en trminos de g es:

t50
s
g
ln
=
g 2
Ro
R50
(4.19)
50
donde ts es el tiempo para lograr un 50 % de sedimentacin.

Combinando las ecuaciones (4.17) y (4.19) se obtiene la expresin para el
tiempo de sedimentacin en trminos de parmetros medibles.
50
ts =
g
Ro
ln
g 2 R2 + R2 1/2
o
1
2
(4.20)
La igualacin de las ecuaciones (4.10) y (4.20) permite obtener una expresin

para el flujo para este caso:
Q50 = g
2 L
g
Ro2 R12
(4.21)
Ro
ln

R2 + R2 1/2
o
donde Q50 es el flujo para sedimentar el 50 % de las partculas de dimetro d50

en una centrfuga tubular.
La ecuacin (4.21) puede ser expresada de otra forma considerando la siguiente igualdad:
Ro
Ro
2
ln
=
ln

1/2
1/2
2
2
2
2
2
R +R
2
R +R
para obtener:
132
Q50
2
L
= (2 g )
R2 R21

o
2
2Ro
ln
R2o + R12
(4.22)
Definicin de sigma El concepto sigma ha sido muy utilizado en el campo

de la sedimentacin centrfuga desde que ste fue desarrollado (Ambler, 1957;
Boychyn et al., 2000). Sigma es un rea caracterstica de cada tipo de centrfuga
y se utiliza para efectuar comparaciones y escalamiento de equipo.
En el caso de la centrfuga tubular el valor de sigma puede ser definido a
partir de la ecuacin (4.15) como:
Q = g
donde
2 L
g
Ro2 R12

Ro
ln
R1
o bien a partir de la ecuacin (4.22) de la siguiente manera:

(4.23)
Q50 % = 2 g
donde:
2 L
g
R2 R12
o

2
2Ro
ln
Ro2 + R21
(4.24)
La ecuacin (4.24) es la expresin bsica del concepto sigma, el cual es

una constante que contiene slo parmetros relacionados a la geometra de la
centrfuga y su velocidad angular (es independiente del tipo de caldo). Por otro
lado g se relaciona slo con las propiedades del caldo y es independiente del
tipo de centrfuga.
En la subseccin (4.4.2) se presenta para las centrfugas de discos un desarrollo anlogo al efectuado para la centrfuga tubular, obtenindose tambin
una expresin para sigma. La aplicacin de este concepto a problemas de escalamiento se revisa en otra seccin.
Ejemplo 4.4. Separacin Centrfuga.
Al separar clulas de E. coli de un caldo diluido en una centrfuga tubular,
se obtiene un lquido claro bajo las siguientes condiciones:

Propiedades del caldo
0.001 Ns/m2
50 kg/m3
dp
106 m
133
Carac. Centrfuga
N
20, 000 rpm
Ro 0.022 m
R1 0.011 m
L
0.2 m
Se desea utilizar la misma centrfuga para separar restos celulares de dimetro

promedio 0.5 106 m. Se estima que la viscosidad del caldo se incrementa a
= 0.004 Ns/m2 al salir del equipo de rompimiento celular.
Se pide:
a) Calcular el flujo manejado en la separacin de clulas.
b) Calcular la relacin de flujos para claridad completa de sobrenadante con
respecto al flujo para 50 % de corte, en la separacin de clulas.
c) Calcular el flujo para separacin completa de los restos celulares.
Solucin:
a) En el clculo del flujo manejado en la separacin de clulas se supone
que todas las partculas de la suspensin sedimentan, entonces se utilizar la
ecuacin (4.15), para lo cual es necesario calcular primero g .
Sustituyendo datos en la ecuacin (4.4) se tiene:

kg
m
(106 m)2 50 3 9.8 2
m
s
=
kg

Ns ms
18 0.001
Ns
m2
m2
6 cm
8 m
= 2.7 10
= 2.7 10
s
s
Mediante ecuacin (4.15):
Q =

2

cm
2 20, 000
2.7 106
s2 (20 cm)
s
60

cm
980 2
s
(2.2)2 (1.1)2
2

cm
2.2
ln
1.1
cm3
L
Q = 3.97
= 14.31
s
h
b) Para el clculo del flujo a un corte del 50 % se utiliza la ecuacin (4.22),

sustituyendo valores se tiene:
134
Q50
Q50

2

2 20, 000
6 cm
s2 (20 cm)
2 2.7 10
s
60
cm
980 2
s
(2.2)2 (1.1)2 2
2 (2.2)2 cm
ln
2.22 + 1.12
cm3
L
= 11.72
= 42.19
s
h
por lo tanto:
L
42.19
Q50
h = 2.94
=
L
Q
14.31
h
Tambin puede ser demostrado utilizando las ecuaciones (4.15) y (4.22) que:

Ro
2 ln
Q50
R1

=
Q
2R2o
ln
R2o + R12
En la expresin anterior es importante hacer notar que cuando la pelcula
de fluido al interior de la centrfuga es muy delgada, R1 tiende a Ro entonces:
.
Q50 = 2Q
c) Para facilitar los clculos se puede obtener el cociente de los flujos de cada
tipo de caldo empleando la ecuacin (4.15) y obtener:
QR
QC
d2R
= 2R
dC
C
donde el subndice R se refiere a los restos celulares y el C a las clulas enteras
135
de tal manera que:

QC d2R C
d2 R

C

2
g
cm3
0.5 104 cm2 0.01
3.97
s
cm s

QR =
g
2
(1 104 ) cm2 0.04
cm s
3
3.97 cm
L
QR =
= 0.89
16
s
h
La reduccin del tamao de partcula y el aumento de viscosidad reduce
dramticamente la capacidad de la centrfuga.
QR
4.4.2.
Centrfuga de Discos
En esta seccin se desarrolla un anlisis para la centrfuga de discos anlogo

al efectuado para la centrfuga tubular. La geometra del sistema es diferente
(Fig. 4.13), donde x es la distancia a lo largo del canal que forman los discos y y
es la distancia normal a partir del disco inferior. La distancia del eje a la parte
externa de los discos es R0 y a la parte interna R1 . Los discos se sitan con un
ngulo . Entonces se puede intuir que la expresin para el clculo del flujo en
este caso tambin es diferente.
Figura 4.13: Centrfuga de discos. a) Esquema de diseo y b) Pila de discos.

El flujo se alimenta de tal manera que fluye hacia arriba a travs de los
espacios de los discos. En el sentido angular se supone que el lquido gira a la
misma velocidad que los discos.
En el anlisis se supone que el flujo global Q se divide equitativamente entre
los espacios formados por todos los discos, de tal manera que el flujo en cada
espacio es Qn = Q/n, donde n es el nmero de espacios formados entre los
discos.
136
Primero se desarrolla una expresin para el tiempo de residencia en la centrfuga, posteriormente una expresin para el tiempo de sedimentacin, y finalmente se combinan ambas expresiones para relacionar el gasto volumtrico
manejable con las propiedades del caldo y la geometra de la centrfuga.
Tiempo de residencia en una centrfuga de discos
En una centrfuga de discos la partcula que se desea sedimentar se mueve
por conveccin y por sedimentacin. El movimiento convectivo es paralelo a los
discos y el movimiento por sedimentacin es en sentido horizontal.
Si los ejes de referencia se fijan como aparece en la Figura 4.13, el movimiento
producido por sedimentacin tiene componentes tanto en x como en y, de tal
manera que la velocidad neta de la partcula en la direccin x, es la resultante
de la velocidad convectiva del fluido (aqu se supone que la partcula se mueve
a la misma velocidad que el fluido) y la componente en x de la velocidad de
sedimentacin que se opone a este movimiento.
Una condicin necesaria para alcanzar una separacin efectiva, es que la
velocidad convectiva de la partcula sea mucho mayor que el componente de
la velocidad de sedimentacin que acta en sentido opuesto. En el siguiente
desarrollo se parte de este supuesto cuando se analiza la velocidad de la partcula
en el sentido x.
Expresin para x Para obtener una expresin del tiempo de residencia de
una partcula en una centrfuga de discos es necesario primero desarrollar una
expresin para la velocidad de la partcula en el sentido x, x .
En el desarrollo de la expresin para x se supone un arreglo geomtrico
sencillo como se muestra en la Figura 4.14.
Figura 4.14: Perfil de velocidades en una centrfuga de discos.

La velocidad x vara con la distancia x dado que el gasto es constante en
toda la seccin de cada pelcula y debido que la seccin transversal de flujo
disminuye conforme x aumenta (se supone que el lquido es incompresible). La
137
velocidad x tambin vara en el sentido y formando un perfil de velocidades

con x = 0 en las superficies de los discos.
Si se considera una seccin de pelcula de longitud L, donde la velocidad x
slo depende de y pero no de x (o r); cuando se desprecian los efectos inerciales,
se considera que el sistema se encuentra en el estado estacionario y el flujo es
laminar, la ecuacin de movimiento para este sistema puede ser escrita de la
siguiente forma (Bird et al., 2009):
P
d2 x
= 2
L
dy
(4.25)
Esta expresin puede ser integrada dos veces entre los lmites:
Para y =
Para y =
a
, x = 0
2
a
, x = 0
2
y obtener la expresin:

2
2y
P a2
x =
1
8L
a
(4.26)
donde a es el espesor de la pelcula y P la presin.

La ecuacin (4.26) se puede expresar en trminos de Qn si se integra a lo
largo del rea de flujo con los lmites apropiados. Considerando que el rea de
flujo puede ser aproximada por un rectngulo de ancho a y largo 2r entonces:
a
Qn =
2r 2
0
a
2

2
P a2
2y
1
dydz
8L
a
(4.27)
donde Qn es el flujo volumtrico entre dos discos de la centrfuga.

La integracin de la ecuacin (4.27) conduce a:
Qn =
P a3 r
6L
(4.28)
Combinando las ecuaciones (4.26) y (4.28) se tiene que:

x =
3Qn
4ra

2y
a
2
o bien en trminos del flujo volumtrico total:

2

2y
3Q
1
x =
4nra
a
(4.29)
(4.30)
138
La ecuacin (4.30) describe el perfil de la velocidad de la pelcula as como su

comportamiento en diferentes planos (a diferentes r) en funcin de la velocidad
promedio.
De la ecuacin (4.30) se puede obtener una expresin para un diferencial de
tiempo de residencia de la siguiente forma:
dtr =
dx

2
3Q
2y
1
4nra
a
(4.31)
Clculo del tiempo de sedimentacin y el gasto volumtrico

Para desarrollar la expresin del tiempo de sedimentacin de una partcula, que a su vez permita desarrollar una expresin para el gasto manejable en
una centrfuga de discos, (al igual que se hizo para las centrfugas tubulares) se
consideran dos casos de inters:
- Tiempo para el 100 % de sedimentacin
- Tiempo para el 50 % de sedimentacin.
Tiempo para el 100 % de sedimentacin y gasto volumtrico En este
caso la partcula ms difcil de capturar se localiza en la parte inferior derecha
de la pelcula en (x = 0 , y = a/2), y la parte ms lejana en la que puede
sedimentar es en la parte superior izquierda de la pelcula en [x = (Ro R1 )/sen
, y = a/2].
La velocidad de sedimentacin en el sentido radial est dada por la Ley de
Stokes:
dr
2r
= g
dts
g
(4.32)
gdr
g 2 r
(4.33)
por lo tanto:
dts =
La condicin de diseo que establece que el tiempo de sedimentacin debe ser

menor o igual que el tiempo de residencia puede lograrse igualando las ecuaciones
(4.31) y (4.33) para obtener la expresin:
gdr
=
g 2 r
3Q
4nra
dx
2y
a
2
(4.34)
de acuerdo a la geometra del sistema se puede efectuar el siguiente cambio de

variables:
139
dy = cos dr
r = Ro xsen
con estas nuevas variables la ecuacin (4.34) se transforma en:

2

3
2y
2ng 2
1
dy =
(Ro xsen )2 (cos dx)
2a
a
Qg
(4.35)
la ecuacin (4.35) puede ser integrada utilizando el cambio de variable u =

(Ro xsen ) y los lmites siguientes:
Para x = 0 , y =
Para x =
a
2
Ro R1
a
, y=
sen
2
obtenindose:
Q = g
2n 2 3
(Ro R13 ) cot
3g
(4.36)
La ecuacin anterior tambin puede ser expresada en funcin del parmetro

de la siguiente manera:
Q = g
(4.37)
donde para este caso est definida por la expresin dentro del parntesis
cuadrado de la ecuacin (4.36).
Tiempo para el 50 % de sedimentacin y gasto volumtrico Para calcular el gasto que puede manejar la centrfuga para un corte del 50 %, debido a
la separacin tan pequea de los discos una buena aproximacin est dada por:
.
Q50 = 2g
(4.38)
donde est dada por la misma expresin que la de la ecuacin (4.36) (ver
Ejemplo 4.4 inciso b).
Ejemplo 4.5. Separacin de E. coli mediante una centrfuga de
discos.
Estimar el gasto volumtrico para producir un lquido claro de E. coli en
una centrfuga de discos (Brunner, 1983) bajo las siguientes condiciones:
140
Datos Centrfuga
radio externo 8.1 cm
radio interno 3.6 cm
no.discos
72
velocidad
8, 400 rpm
ngulo
38o
Datos caldo
dimetro celular 0.8 m
celular
1.05 g/L
medio
1.02 g/L
viscosidad
1.02 103 kg/ms
Solucin:
El gasto de la centrfuga de discos puede ser calculado mediante la ecuacin
(4.36). Para aplicar esta ecuacin es necesario calcular primero g . De acuerdo
a la ecuacin (4.4),
g
cm
980 2
3
cm
s
=
3
kg
10
g
m
18 1.02 103
2
ms
Kg
10 cm
6 cm
= 1.02 10
s

2
0.8 104 cm (1.05 1.02)
en seguida se calcula de la ecuacin (4.36),

2
2 72 2 8400
s2
=
cm
60
3 980 2
s
(8.13 3.63 ) cm3 cot 38
= 7.39 107 cm2
El gasto volumtrico que puede manejar la centrfuga es:
cm
7.39 107 cm2
s
cm3
L
= 271
Q = 75.35
s
h
Q = 1.02 106
4.4.3.
Escalamiento
En el anlisis de la operacin de la sedimentacin centrfuga se han desarrollado expresiones para el clculo del gasto manejable por una centrfuga de
una geometra particular. Este enfoque es debido a que los equipos disponibles
se construyen en tamaos especficos, de tal manera que gran parte del problema de separacin centrfuga se reduce a una seleccin del equipo ms que a
un diseo especfico para un trabajo particular. Por otro lado, las velocidades
de sedimentacin que se predicen con la Ley de Stokes pueden ser adecuadas
para el caso de las centrfugas tubulares, pero pueden resultar hasta dos veces
141
mayores de las realmente obtenidas en las centrfugas de discos. En la seleccin de equipo de centrifugacin una combinacin adecuada de los principios
tericos con pruebas experimentales directamente con el material, es lo ms
recomendable.
Existen dos enfoques para el escalamiento de datos, uno basado en el tiempo
equivalente de centrifugacin y otro en el rea de centrifugacin.
Tiempo equivalente
Este enfoque consiste en determinar el tiempo equivalente dado por el producto Gt, donde G est dado por la ecuacin (4.6) y t es el tiempo necesario
para producir una centrifugacin aceptable, de tal manera que la igualdad:
(4.39)
G1 t1 = G2 t2
puede ser utilizada como un criterio de escalamiento. Los subndices 1 y 2 se

refieren a las escalas estudiadas.
Las pruebas de sedimentacin de las muestras se pueden realizar en el laboratorio en una centrfuga de tubos o en una centrfuga de tazn. Las muestras
se hacen girar a velocidades especficas a diferentes tiempos hasta producir un
sobrenadante claro. El valor de Gt obtenido se usa para la seleccin de equipos
a escala industrial.
La consistencia de los slidos puede ser estudiada preliminarmente utilizando
una varilla de laboratorio sobre la torta despus de decantar el sobrenadante.
En la Tabla 4.1 se presentan valores de Gt caractersticos de algunas partculas
biolgicas.
Tabla 4.1: Valores de Gt.
Partcula
Ncleo
Mitocondria
Ribosomas
G
600
15,000
100,000
t (min)
5
5
60
Gt (min)
3,000
75,000
6,000,000
Factor sigma
La expresin para calcular el factor Sigma de cada tipo de centrfuga es caracterstica de cada geometra particular (Axelsson, 1985). Esta rea caracterstica
o factor ha sido empleada para escalar equipos con similitud geomtrica. En
la Tabla 4.2 se presentan los rangos de los factores para diferentes tipos de
centrfugas.
El escalamiento utilizando el factor sigma supone que para una misma suspensin, la velocidad de sedimentacin de las partculas es independiente de la
142
Tabla 4.2: Factores Sigma.
Centrfuga
Intermitente
Decantadora
Tubular
Discos
(m2 )
20 - 200
150 - 2,500
2,000 - 3,000
400 - 120,000
Fuente: Moir, 1988

c
Reproducida con el p erm iso de McGraw-Hill Inc. Copyright 1988.
escala. Este supuesto es ms utilizado cuando se escalan centrfugas del mismo

tipo, de tal manera que:
( g )1 = (g )2
y utilizando la ecuacin (4.23) se obtiene:
Q150
Q2
= 50
1
2
(4.40)
Se debe recordar en este punto que la seleccin del equipo de centrifugacin

debe combinar la teora, la experimentacin directa con el material (incluyendo
pruebas a nivel piloto) y la experiencia (Moir, 1988).
En la Tabla 4.3 se presenta una gua general para la seleccin de centrfugas
sedimentadoras.
El tamao de partcula a que se refiere la Tabla 4.3 est basado en la sedimentacin en agua de esferas de cuarzo de densidad relativa 2.65. Para calcular
el dimetro equivalente de las partculas de cuarzo, al de las partculas de inters
en una suspensin dada, se establece que las velocidades de sedimentacin son
iguales en ambos medios, obteniendo la siguiente expresin:
dc =

p L
C A
A d2p
L
1/2
donde:
C : Densidad del cuarzo (2.65). [M/L3 ].
p : Densidad de la partcula en suspensin. [M/L3 ].
L : Densidad del lquido. [M/L3 ].
A : Densidad del agua. [M/L3 ].
(4.41)
143
Tabla 4.3: Gua para la seleccin de centrfugas.

Tip o de
Centrfuga
Tubular
Cmara mltiple
Discos y boquillas
Discos tazn abierto
Discos y boquillas
Discos intermitente
Tazn slido
Decantadora
Tip o de
Centrfuga
Tubular
Cmara mltiple
Discos y boquillas
Discos tazn abierto
Discos y boquillas
Discos intermitente
Tazn slido
Decantadora
Caractersticas m anejables de la alim entacin

Tam ao de
Contenido
Prueba de
Prueba de
Partcula
Slidos
Sedim entacin
Consistencia
micras
%
a 1,000 G (m in)
de los slidos
0.1 - 200
0.5
2 - 20
torta firm e
0.5 - 5,000
1 - 5
2 - 20
torta firm e
0.5 - 200
2 - 20
1 - 10
lodo
0.5 - 200
10
1 - 10
lodo
0.5 - 200
10
1 - 10
lodo
0.25 - 200
1
1 - 10
torta firm e
2 - 5,000
1 - 5
0 - 3
torta firm e
2 - 5,000
2 - 60
0 - 3
lodo - torta
Caractrsticas de procesam iento
M todo de
Capacidad
Flujo de la
Fuerza g
descarga de
lavado de
Alim entacin
Mxim a
slidos
torta
L/min
Interm itente
Ninguna
8 - 120
12,000 - 16,000
Interm itente
Ninguna
1.5 - 335
5,000 - 9,000
Continuo
M oderada
38 - 3,780
5,000 - 8,500
Interm itente
Ninguna
3.8 - 1,500
5,000 - 7,000
Interm itente
Ninguna
3.8 - 570
14,000 - 15,000
Interm itente
Ninguna
0.38 - 1,500
5,000 - 8,000
Interm itente
Ninguna
1.5 - 250
500 - 800
Continuo
M oderada
3.8 - 1,890
2,000 - 3,200
Adaptada de: M oir, 1988
c
Reproducida con el permiso de M cGraw-Hill Inc. Copyright 1988.
A : Viscosidad del agua. [M/L t].

L : Viscosidad del lquido. [M/L t].
dp : Dimetro partcula. [L].
dc : Dimetro equivalente de una esfera de cuarzo. [L].
Ejemplo 4.6. rea de centrifugacin.
Una centrfuga de discos de laboratorio produce un sobrenadante claro con
una alimentacin de 2.1 L/h de una solucin diluida de clulas. El rea caracterstica de la centrfuga es de 233 m2 .
Se pide:
Estimar el rea necesaria para manejar un flujo de 1, 000 L/h en una centrfuga similar.
Solucin:
Para el caso del manejo de un flujo claro a la salida de la centrfuga:
Q2
Q1
=
1
2
144
1 nivel laboratorio, 2 nivel industrial.

Sustituyendo valores,

L
(233 m2 )
1000
Q2 1
h
= 111, 000 m2
=
2 =
L
Q1
2.1
h
4.4.4.
Filtracin Centrfuga
La filtracin centrfuga combina los dos principios de separacin mecnica: filtracin y centrifugacin. La aplicacin de este mtodo ha conducido al
desarrollo de diferentes tipos de equipos de diferentes geometras y formas de
descarga de la torta. En esta seccin el tratamiento se limita al de geometra
cilndrica.
Considrese una tina o canasta de una operacin de filtracin centrfuga
(Fig. 4.15) donde se alimenta la suspensin a tratar, y por accin de la fuerza
centrfuga se forma una torta homognea sobre la pared de la tina.
Figura 4.15: Filtracin centrfuga.

La canasta perforada tiene un radio Ro y est recubierta de un medio filtrante
de resistencia despreciable. En un instante t durante la operacin, la superficie
del lquido est localizada en R1 y la interfase lquido-slido se localiza en RT .
145
Generalmente el inters de diseo es contar con expresiones para el clculo

del gasto volumtrico manejable por la centrfuga y del tiempo de filtrado para
realizar una determinada operacin en un equipo dado.
Gasto volumtrico Q
El gasto volumtrico a travs de la torta en una operacin de filtracin
centrfuga, est relacionado con la ecuacin de Darcy para medios porosos.
Debido a que la torta no es plana, el rea de filtrado vara con r, entonces la
ecuacin de Darcy debe expresarse en forma diferencial como:
dP
= o
dr
(4.42)
donde es la velocidad superficial de filtrado.

En el instante t el flujo volumtrico Q en la direccin radial es constante
a lo largo del espesor de la torta, y se relaciona con la velocidad de filtracin
(variable a lo largo del espesor de la torta) mediante la siguiente expresin:
Q
2r"
donde " es la altura de la canasta de la centrfuga.
=
(4.43)
Q
dP
= o
(4.44)
dr
2r"
la ecuacin (4.44) puede ser integrada entre Ro y RT para encontrar la cada de
presin en la torta:

o Q
Ro
P =
ln
(4.45)
2"
RT
El gradiente de presin generado por el movimiento circular del lquido puede
ser calculado utilizando la expresin:
dP
= L 2 r
(4.46)
dr
donde L es la densidad del lquido.
Integrando la ecuacin (4.46) entre Ro y R1 se puede encontrar una expresin
para el gradiente de presin generado por la fuerza centrfuga. Esta expresin
es:
P =

L 2 2
Ro R12
2
(4.47)
La ecuacin (4.47) puede ser sustituida en la ecuacin (4.45) para obtener

una expresin del gasto volumtrico en cualquier instante t, obtenindose:
146
Q=
2
2
2 L "
1
Ro R
Ro
o
ln
RT
(4.48)
La ecuacin anterior concuerda con el hecho que durante una operacin de

filtracin centrfuga, RT disminuye conforme transcurre el tiempo de filtracin
(al aumentar el espesor de la torta), disminuyendo tambin Q.
Tiempo de Filtracin Centrfuga
La ecuacin (4.48) puede ser utilizada para desarrollar una expresin para
calcular el tiempo necesario para procesar un volumen de caldo dado (o una torta
de un espesor fsicamente alcanzable). Es necesario efectuar primero algunos
cambios de variables.
El gasto volumtrico Q puede ser relacionado con el volumen de filtrado por
la ecuacin:
dV
(4.49)
dt
Por medio de un balance de masa en la pelcula cilndrica que forma la torta
se obtiene que:
Q=

o V = T Ro2 R2T "
(4.50)
donde T es la densidad de la torta en peso seco por unidad de volumen. A

partir de la ecuacin (4.50 ) se puede definir el diferencial de volumen de filtrado
siguiente:

2T "
dV =
RT dRT
(4.51)
o
Combinando las ecuaciones (4.48), (4.49) y (4.51) e integrando la expresin

resultante entre los lmites:
t=0
RT = Ro
t=t
RT = RT
se obtiene la siguiente solucin:

T RT2
t=
2L 2 (Ro2 R12 )

Ro
RT
2
1 2 ln
Ro
RT

(4.52)
donde t es el tiempo necesario para obtener una torta de espesor (Ro RT ) .

De acuerdo a la ecuacin (4.52) el tiempo de filtrado es funcin de la resistencia especfica de la torta entre otros parmetros. Debido a que la torta puede
4.5. SUMARIO
147
sufrir compactacin cuando se expone a un campo centrfugo, las mediciones

de resistencia especfica hechas en equipos de laboratorio de filtracin por lotes
pueden conducir a resultados incorrectos. Entonces, es preferible realizar estas
mediciones en equipo de laboratorio apropiado para la filtracin centrfuga.
Ejemplo 4.7. Tiempo de Filtracin.
Se desea estimar el tiempo de filtracin centrfuga de 1, 600 L de una suspensin que contiene 0.02 g/cm3 de una hormona. Las pruebas de laboratorio
indican que la torta que forma esta suspensin tiene una resistencia especfica de
2.67 1010 cm/g y una densidad de 1.1 g/cm3 de slidos secos de torta hmeda.
Las propiedades del lquido pueden ser consideradas iguales a las del agua.
La centrfuga que se va a utilizar gira a 650 rpm, tiene un radio de 51 cm
y una altura de 45 cm. Una vez llena la centrfuga y girando puede formar una
pelcula de 5.5 cm de lquido y torta.
Solucin: El tiempo para la filtracin puede ser calculado con la ecuacin
(4.52). Para tal efecto es necesario calcular primero la localizacin de la superficie
de la torta RT mediante la ecuacin (4.50) de tal manera que:
RT
RT
1/2

o V
2
Ro
=
T "
1/2
g
3
3
0.02
1600
10
cm
cm3
= 48.9 cm
= 512 cm2
g
1.1
45
cm
cm3
entonces de acuerdo a la ecuacin (4.52) el tiempo de filtracin es:

2

Ro
Ro
T R2T
1 2 ln
t =
2L 2 (Ro2 R21 )
RT
RT
g
g
10 cm
2
2
2.67 10
1.1
48.9 cm
0.01
cm s
g
cm3
t =

2
g
650 2
21 3
s2 (512 45.52 ) cm2
cm
60

2

51
51
1 2 ln
48.9
48.9
t = 8.6 min
4.5.
Sumario
La centrifugacin se emplea para separar diversos tipos de slidos (clulas,

desechos, precipitados y cuerpos de inclusin) de caldos biolgicos. La teora de
148
la sedimentacin combinada con la experimentacin en equipos pilotos, permite

operar y disear racionalmente los equipos de centrifugacin.
Existen varios tipos de equipos para efectuar la operacin de centrifugacin
los cuales pueden operar tanto en forma intermitente como en forma continua.
De acuerdo con la teora de la sedimentacin, el gasto manejable en una
centrfuga depende de la geometra especfica del equipo, de la velocidad de giro
y de las propiedades del caldo que se desea procesar.
4.6. PROBLEMAS
4.6.
149
Problemas
4.1. Velocidad de sedimentacin. Una partcula de 5 m de dimetro

y 1, 100 kg/m3 de densidad, sedimenta en agua a 20 C con una viscosidad de
1.01 103 Ns/m2 y una densidad de 1,000 kg/m3 .
Se pide: Estimar la velocidad de sedimentacin cuando:
a) Sedimenta libremente.
b) Se localiza en un punto r = 0.15 m y gira a 3, 000 rpm.
Resp. a) 1.35 106 m/s y b) 2.04 103 m/s
4.2. Centrfuga tubular. Una centrfuga tubular de 12.4 72.5 cm gira a
una velocidad tal que genera un campo de 15, 600 G. La pelcula que forma el
lquido al girar tiene un espesor de 5 cm.
Se pide: Estimar el gasto volumtrico que puede manejar este equipo en la
separacin de restos celulares de E. coli que presentan un dimetro promedio de
0.25 m y se encuentran en una solucin con 4.0 cP de viscosidad. La diferencia
de densidad entre las partculas y la solucin es de 0.03 g/cm3 .
Resp. 1.18 L/h
4.3. rea caracterstica. Estimar el rea caracterstica de centrifugacin
para procesar 3.34 103 m3 /s de un caldo de cultivo bacteriano. Las clulas
del caldo presentan un dimetro promedio de 1 m y una densidad de 1096.7
kg/m3 . La viscosidad del caldo es de 2.682 103 Ns/m2 y su densidad de
997 kg/m3 .
Resp. 82, 670 m2
4.4. Efecto de las condiciones de centrifugacin. Una centrfuga tubular que gira a 4, 000 rpm cuando se alimenta con un caldo de levaduras a razn
de 12 L/min, logra recuperar el 60 % de slidos.
Se pide estimar:
a) La velocidad a la que debe girar la centrfuga para obtener un 95 % de
recuperacin.
b) El flujo que puede ser alimentado a la centrfuga cuando gira a 4, 000 rpm
y se desea una recuperacin del 95 %.
Resp. a) 4, 845 rpm y b) 8.18 L/min
4.5. Recuperacin primaria. El procesamiento inicial de 30, 000 L de
un caldo celular que contiene 0.15 L/L de clulas (base hmeda de slidos) es
necesario realizarlo de acuerdo a las siguientes tres etapas:
i) Concentracin del caldo hasta 0.8 L/L.
ii) Resuspensin del caldo en una solucin amortiguadora apropiada hasta
0.5 L/L.
iii) Rompimiento de las clulas mediante un homogeneizador. Los restos
celulares obtenidos en este paso tienen la mitad del dimetro de las clulas
originales y el caldo es cuatro veces ms viscoso.
150
iv) Separacin de los restos celulares del homogeneizado. Este paso debe ser
realizado en menos de 15 h para evitar degradacin del producto.
Se pide establecer:
a) El nmero de centrfugas con capacidad de 400 L/h de homogeneizado
para realizar el paso iv).
b) El tiempo necesario para el paso iv).
c) El tiempo necesario para realizar el paso i) con el mismo equipo.
d) De que otra forma se puede realizar este proceso.
Resp. a) 2; b) 11.25 h y c) 2.34 h
4.6. Extraccin en un SDFA. En una operacin para la obtencin de
una enzima se utiliza un sistema de extraccin de dos fases acuosas inmiscibles (SDFA). Una vez realizada la extraccin las fases se separan mediante una
centrfuga tubular. Las propiedades de las fases son las siguientes:
Fase Ligera (B)
Nombre
PEG 4000 9 %
Densidad
1046 kg/m3
Viscosidad
0.008 kg/ms
Temperatura 20 C
Fase
Nombre
Densidad
Viscosidad
Temperatura
Pesada (A)
Dextrano T 5000 2 %
1144 kg/m3
0.008 kg/ms
20 C
La centrfuga gira a 12, 000 rpm, tiene un radio externo Ro = 0.05 m y una
longitud L = 0.9 m.
La salida de la fase pesada en la centrfuga se localiza a una distancia radial
RB = 0.02 m. La salida de la fase ligera se localiza en RA = 0.022 m mediante
un arreglo que la coloca por encima de la fase ligera, de tal manera que la
interfase lquido-lquido se forma a una distancia Ri mayor que RA .
Se pide:
a) Desarrollar una expresin para obtener el gradiente de presin generado
por la fase ligera al girar.
b) Desarrollar una expresin para obtener el gradiente de presin generado
por la fase pesada al girar.
c) Desarrollar una expresin para el clculo de la posicin de la interfase
suponiendo que los gradientes anteriores son iguales.
d) Calcular la posicin de la interfase.
Resp. d) 3.76 102 m
4.7. Extraccion en un SDFA. La centrfuga del problema anterior se
alimenta con un flujo de 1 104 m3 /s de una mezcla de las fases que se
encuentra en una proporcin de 3.5:1 de fase pesada a fase ligera.
Se pide:
a) Calcular el flujo de la fase ligera que se alimenta a la centrfuga.
b) Utilizando la ecuacin (4.15) calcular la velocidad de sedimentacin mnima para la fase pesada en la fase ligera.
c) Calcular el dimetro mnimo de las gotas de fase pesada para obtener un
100 % de separacin de las fases.
Resp. a) 7.78 105 m3 /s y b) 4 m
4.6. PROBLEMAS
151
4.8. Escalamiento de una centrifuga tubular. La extraccin lquidolquido del problema anterior se desea escalar utilizando una centrfuga ms
grande donde: RB = 0.06 m, RA = 0.066 m, L = 1.5 m y N = 8, 000 rpm.
Partiendo de que cuando se maneja el flujo de 1 104 m3 /s en la centrfuga
ms chica se tiene una separacin adecuada de las fases y sea: 1: operacin en
el equipo menor y 2: operacin en el equipo mayor.
Se pide calcular:
a) (B )1
b) (Ri )2
c) (B )2
d) (QB )2
e) El gasto total que puede manejar la nueva centrfuga.
Resp. a) 730 m2 ; c) 4, 782 m2 ; d) 6.56 104 m3 /s.
4.9. Centrfuga de tubos. Se desea procesar una suspensin diluida de
levaduras de 10 m de dimetro y densidad de 1.01 g/cm3 , con una centrfuga
de tubos que opera a 8, 000 rpm. Los tubos se llenan con la suspensin hasta
una altura de 5 cm. Cuando la centrfuga est operando los tubos giran perpendicularmente al eje y el fondo de los tubos se localiza a 9 cm del eje.
Se pide: Estimar el tiempo para sedimentar la mitad de las partculas si
se supone que stas se distribuyen en forma uniforme en la suspensin. Las
propiedades del lquido pueden ser tomadas como las del agua.
4.10. Seleccin de equipo de centrifugacin. Se desea procesar 1, 000
L/min de una suspensin que contiene 20 % de levaduras. En pruebas de laboratorio la suspensin puede clarificarse en 6 min a 1,000 G. Se desea descargar
los slidos continuamente. La torta que forman los slidos es bastante fluida.
Se pide: Con base a los datos anteriores y utilizando la Tabla 4.3 efectuar
la seleccin de una centrfuga.
4.11. Centrfuga de discos. Una centrfuga de discos recupera el 50 % de
clulas a un gasto de 10 L/min.
Se pide: Calcular el gasto que puede manejar la centrfuga para lograr 80 %
de recuperacin.
4.12. Velocidad y tiempo de sedimentacin terminal. Una partcula
de 1.0 m y densidad de 1.06 g/cm3 se sedimenta en agua de densidad 1.00
g/cm3 y viscosidad de 0.01 g/cms.
Se pide:
a) Calcular la velocidad terminal de la partcula .
b) Obtener una expresin para el tiempo que tarda la partcula para alcanzar
el 99 % de su velocidad terminal (t99 ).
c) Calcular el tiempo t99 .
d) Obtener una expresin para el clculo de la distancia recorrida por la
partcula al momento de alcanzar el 99 % de su velocidad terminal (x99 ).
e) Calcular x99
152

Resp. b) t99 = 4.6 d2p p /18 y d) x99 = 0.784 t
Problema 4.13. Separacin de componentes sanguneos. La centrifugacin es un mtodo comnmente empleado para separar clulas sanguneas de
las plaquetas en sangre. Los dimetros de estas partculas son de 10 y 2 m,
respectivamente. La densidad especfica de ambos tipos de partculas es de 1.03.
Se coloca dentro de un tubo una muestra de sangre sobre la superficie de un
lquido cuya viscosidad es de 0.02 g/cms y su densidad especfica de 1.01, a
una distancia de 20 cm del eje de rotacin de una centrfuga. Los tubos giran
perpendicularmente al eje a una velocidad de 500 rpm.
Se pide:
Determinar el tiempo de centrifugacin para lograr una separacin de 1.0
cm entre los dos tipos de partculas.
Resp. 328 s
Problema 4.14. Incremento en la velocidad angular. Se separan clulas de 10 mm de dimetro de un medio de cultivo en una centrfuga de tubos
que opera a 500 rpm por 10 min. La superficie del lquido del tubo se localiza a
5 cm del eje de rotacin y el tramo de sedimentacin en el tubo es de 5 cm.
Se pide:
Calcular las rpm necesarias para reducir el tiempo de centrifugacin 5 min.
Resp. 707 rpm
Problema 4.15. Centrfuga de ngulo fijo. Una centrfuga de mesa
puede manejar 6 microtubos de 0.8 cm de dimetro y 3 cm de altura, colocados
a 45 respecto al eje de rotacin. La parte superior de cada tubo se encuentra
a una distancia de 3.7 cm respecto al eje de rotacin.
Se pide: Estimar el tiempo para clarificar una solucin acuosa diluida que
contiene partculas de 0.2 m de dimetro y una diferencia de densidad de 0.002
g/cm3 , si la centrfuga puede girar a 95, 000 rpm.
Resp. 17 min.
Problema 4.16. Desescalamiento. Una centrfuga industrial de 91.5 cm
de dimetro opera a 1000 rpm.
Se pide: A qu velocidad debe operar una centrfuga de laboratorio de 15
cm de dimetro para duplicar la capacidad de la centrfuga industrial.
Resp. 3493 rpm
Problema 4.17. Escalamiento geomtrico. Una centrfuga de discos se
utiliza en una planta piloto para separar levaduras de un caldo de cultivo, bajo
las siguientes condiciones:
4.6. PROBLEMAS
153
R1
R0
Q
conc. celular
dimetro clulas
densidad clulas
viscosidad
densidad del fluido
5 cm
25 cm
5000 rpm
10 L/min
10 g/L
3 m
1.03 g/cm3
1.1 cP
1.01 g/cm3
A nivel de produccin se requiere procesar 500 L/min del mismo tipo de caldo. La centrfuga que ser utilizada operar a 3500 rpm y tendr una geometra
similar a la centrfuga piloto, es decir el mismo nmero de discos y el mismo
ngulo de rotacin. Los radios de los discos, R0 y R1 , de la centrfuga grande
sern el doble de los utilizados en la centrfuga de nivel piloto.
Se pide:
Calcular el nmero de centrfugas necesarias a nivel de produccin.
Resp. 13
Problema 4.18. En el desarrollo de un proceso para producir una protena recombinante en E. coli se cuenta con una centrfuga de discos a nivel
piloto. Durante la cosecha celular la centrfuga puede manejar hasta 200 L/h,
considerando que el dimetro promedio de las clulas es de 1.0 m.
La centrfuga tambin puede ser empleada para que una vez rotas las clulas,
se puedan separar los cuerpos de inclusin (que forman las protenas) de los
restos celulares presentes en el caldo. Esto es debido a la gran densidad de los
cuerpos de inclusin de 1.3 g/cm3 , no obstante que su dimetro promedio oscila
entre 0.3 y 0.7 m.
Se pide:
a) Calcular el rea efectiva de la centrfuga.
b) Calcular el flujo que puede manejar la centrfuga para separar los cuerpos
de inclusin.
Establecer las suposiciones empleadas en la solucin.
Resp. a) 2041 m2 y b) 54 L/h
154
4.7.
Bibliografa
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Captulo 5
Rompimiento de Clulas
5.1.
Introduccin
El rompimiento celular es una operacin unitaria de gran importancia industrial. Algunos de los productos biotecnolgicos producidos a escala industrial
son extracelulares y no requieren ser extrados de la clula. Cuando el producto
de inters es intracelular (Tabla 5.1), una vez realizada la cosecha de clulas
una operacin necesaria para la liberacin del producto es el rompimiento de la
clula misma (Petrides et al., 1989).
Tabla 5.1: Productos que requieren de una ruptura celular.
Tipo de Producto
Protenas recombinantes
Enzimas
Plsmidos
Vacunas
Otros
Ejemplos
Insulina, HC, Protena A, Protena G.
l-Asparaginasa, Invertasa, Glucocinasa.
Terapia gnica
Ttanos, Meningitis.
Mitocondrias, Esporas, Toxinas.
Adaptada de: Foster, 1992

c
Reproducida con el p erm iso de Nature Publishing Co. Copyright 1992.
Algunas protenas eucariticas recombinantes producidas en microorganismos procariotes, no son secretadas por la clula recombinante y constituyen
productos intracelulares, los cuales pueden estar en forma activa o en forma
desnaturalizada. Las protenas intracelulares desnaturalizadas con frecuencia
forman cuerpos de inclusin insolubles.
Otras protenas de inters permanecen en el espacio periplsmico entre la
membrana y la pared celular. Slo algunas clulas presentan mecanismos de
158
CAPTULO 5. ROMPIMIENTO DE CLULAS
secrecin celular del producto de inters. Esto hace necesario contar con tcnicas de rompimiento celular eficientes y selectivas en la produccin de protena
intracelular.
La tcnica de rompimiento celular seleccionada determina el tamao de los
desechos resultantes y la influencia que stos tendrn en las operaciones que se
utilicen para su separacin. Asimismo, la tcnica es funcin del tipo de microorganismo que contiene al producto de inters, particularmente en relacin a su
estructura externa (Asenjo, 1990).
En este captulo, en la seccin 5.2 se presentan los fundamentos de la operacin de rompimiento. La seccin 5.3 se centra en los equipos de rompimiento
que se utilizan a nivel industrial. El diseo de estos equipos se discute en la
seccin 5.4.
5.2.
Fundamentos
La recuperacin ptima de productos intracelulares requiere del conocimiento de la estructura de las capas externas que protegen a las clulas: la membrana
y la pared celular. Requiere adems del conocimiento de los sistemas que permiten a ciertas clulas secretar los productos de inters en forma activa, evitando
con sto la necesidad de romper la clula para recuperar el producto.
Existen varios mtodos para la recuperacin de productos intracelulares, los
ms drsticos involucran el rompimiento completo de la clula. Los mtodos de
recuperacin menos severos involucran una alteracin qumica de las cubiertas
celulares o permeabilizacin que facilita la salida del producto.
Esta seccin se centra en cuatro aspectos fundamentales para el anlisis de
la operacin de rompimiento:
Estructura de la pared celular.
Sistemas celulares de secrecin.
Mtodos de rompimiento celular.
Mtodos de permeabilizacin celular.
5.2.1.
Estructura de la Pared Celular
En esta seccin se describe brevemente la estructura de la pared celular,

particularmente la estructura de las paredes bacterianas, debido al relevante
papel que tienen las bacterias como la E. coli como organismos husped de
varios productos biotecnolgicos recombinantes (Wang, 1988).
Las paredes celulares de las bacterias son rgidas y porosas, debido a que las
bacterias poseen una elevada presin osmtica interna y frecuentemente pueden
hallarse expuestas a diferentes condiciones ambientales externas.
Las paredes celulares de las bacterias Gram positivas y Gram negativas poseen una caracterstica molecular comn (Fig. 5.1): en ambas existe un rgido
5.2. FUNDAMENTOS
159
esqueleto de peptidoglicano o murena. La unidad bsica que se repite en la

estructura del peptidoglicano es la del disacrido constituido por N-acetil-Dglucosamina y el cido N-acetilmurmico.
Figura 5.1: Esquema de la estructura externa de bacterias. a) Gram positivas y

b) Gram negativas.
En las clulas Gram positivas la capa de peptidoglicano es mucho ms gruesa
que en las clulas Gram negativas. En stas, la capa de peptidoglicano se encuentra localizada en el espacio periplsmico enlazndose covalentemente a las
lipoprotenas de la capa exterior de la pared celular.
El espacio periplsmico est constituido por una sustancia semejante a un
gel, que contiene una alta concentracin de enzimas degradativas y protenas de
transporte.
La estructura del peptidoglicano de la pared celular bacteriana es resistente
a la accin de las enzimas que hidrolizan los pptidos, las cuales no atacan a
los pptidos que contienen D-aminocidos como los que se encuentran en la
estructura de la pared (como D-alanina y D-glutamina).
En las clulas Gram positivas la enzima lisozima se utiliza para el rompimiento celular ya que su mecanismo de accin es el rompimiento de los enlaces glucosdicos del esqueleto polisacrido del peptidoglicano, que en este tipo de clulas
se localizan en la parte externa. Una vez roto el esqueleto de esta manera, la
clula se expande con la consecuente ruptura de la membrana y liberacin del
contenido celular (Lehninger, 1989).
La diferencia en el grosor de la capa de peptidoglicano y su ubicacin, permite
que las clulas Gram positivas sean ms sensibles a la accin de la lisozima que
las Gram negativas. Las paredes celulares de las bacterias Gram negativas que
presentan dificultad al rompimiento por la lisozima, pueden romperse en molinos
de perlas de vidrio.
La pared celular de las levaduras consta de dos capas: una capa externa
formada de un complejo manano-protena y una capa interna de glicano.
Cuando es necesario romper completamente la clula recombinante para
poder liberar el material intracelular, deben considerarse las caractersticas estructurales de la clula para la seleccin adecuada de la tcnica de rompimiento.
160
5.2.2.
Sistemas Celulares de Secrecin
Se llama secrecin al movimiento de un soluto a travs de la membrana

celular hacia el exterior de la clula. Tambin se considera como secrecin cuando, como en el caso de algunas protenas, stas quedan atrapadas en el espacio
periplsmico o entre la membrana y la pared celular.
En la produccin de protenas de inters comercial los mecanismos de secrecin y la modificacin post-traduccional que sufren algunas de estas protenas
en su ruta de secrecin, son de gran importancia en el desarrollo de los procesos
correspondientes.
Cuando se utiliza E. coli para la produccin de protenas recombinantes se
obtienen rendimientos muy altos, sin embargo este tipo de clula presenta dos
problemas caractersticos : a) las protenas no son secretadas por las clulas y b)
las protenas no se producen en forma activa, permaneciendo en el protoplasma
en forma insoluble formando precipitados llamados cuerpos de inclusin.
Cuando se presentan los problemas mencionados anteriormente, el proceso
para la obtencin de la protena de inters debe incluir operaciones de rompimiento celular, reacciones equivalentes a las de modificacin post-traduccional in
vivo, y complejas operaciones de recuperacin y purificacin.
El hecho de que varias de las modificaciones post-traduccionales sean realizadas en las rutas de secrecin de las clulas de mamfero, conjuntamente con
la eliminacin de la necesidad de una operacin de ruptura que sto implica, ha
conducido al empleo de este tipo de clulas recombinantes para la produccin
de protenas. El primer proceso industrial que utiliza clulas recombinantes de
mamfero (clulas de ovario de hmster), se emplea para la obtencin del agente
tromboltico llamado Activador del Plasmingeno Tisular (t-PA de sus siglas
en ingls) (Datar et al., 1993).
La pureza y seguridad de los productos recombinantes es de gran importancia, particularmente en el caso de las protenas de uso clnico. Los productos
de E. coli disminuyen el riesgo de transmisin de protenas carcinognicas, pero
presentan riesgos potenciales de generacin de respuestas inmunolgicas.
5.2.3.
Mtodos de Rompimiento Celular
Una gran variedad de mtodos de rompimiento celular son usados en el laboratorio (Benov y Al-Ibraheem, 2002), pero slo algunos de ellos a escala industrial. Los mtodos de rompimiento celular (Tabla 5.2) pueden ser divididos en
mtodos qumicos y mtodos mecnicos. Dentro de los primeros se encuentran el
choque osmtico, la disolucin lipdica, la digestin enzimtica y el tratamiento
alcalino. Dentro de los segundos se encuentran la agitacin con abrasivos y la
homogeneizacin.
Mtodos qumicos
Choque osmtico El rompimiento de clulas por medio de choque osmtico
se fundamenta en el conocimiento del fenmeno de smosis. Cuando una mem-
5.2. FUNDAMENTOS
161
Tabla 5.2: Mtodos de rompimiento celular.

Mtodo
Qumicos
Tcnica
Choque
osmtico
Disolucin
lipdica
Digestin
enzimtica
Mecnicos
Principio
Ruptura osmtica
de membrana
Desestabilizacin
de la pared celular
por solventes org.
Digestin de la
pared celular
Tratamiento
alcalino
Solubilizacin de
membranas por
saponificacin de
lpidos
Molido en
Molinos de
Perlas
Las clulas son

prensadas entre
perlas de vidrio
Homogeneizacin
Las clulas se
rompen por fuerzas
de corte al pasar
por un orificio
pequeo
Ejemplos
Ruptura de
glbulos rojos
Rompimiento de
levaduras por
tolueno
M. lysodeikticus
tratados con
lisozima
Rompimiento de E. coli
para produccin
de plsmidos
Tratamiento de
suspensiones
celulares a
gran escala
Tratamiento de
suspensiones
celulares a
gran escala
Adaptada de Scopes, 1994

c
Reproducida con el permiso de Springer-Verlag. Copyright 1994.
brana semipermeable separa dos soluciones de diferente concentracin de soluto

(Fig. 5.2), se produce un movimiento neto de agua a travs de la membrana hacia
el compartimento que contiene el soluto ms concentrado. La presin osmtica
es la fuerza que debe aplicarse para contrarrestar la fuerza del flujo osmtico
producido.
La presin osmtica es una de las propiedades coligativas de las soluciones;
depende del nmero de partculas de soluto por unidad de volumen pero es independiente de la naturaleza molecular del soluto y de la forma de sus partculas.
El rompimiento celular por choque osmtico consiste en la carga de un volumen dado de clulas dentro de agua pura (con frecuencia se utiliza el doble
del volumen de las clulas por volumen de agua). La clula se expande debido a
que contiene solutos que ocasionan un flujo osmtico del agua hacia su interior.
Esta expansin puede conducir a su lisis o rompimiento. La factibilidad del uso
de este mtodo depende de la resistencia mecnica de las clulas de inters.
Se puede desarrollar una expresin para el clculo de la presin osmtica
necesaria para romper una clula a partir de la definicin de equilibrio qumico.
En el equilibrio el potencial qumico de las soluciones acuosas es igual en ambos
162
Figura 5.2: smosis y presin osmtica. El fenmeno de smosis genera un

incremento de altura del lquido en la celda.
lados de la membrana celular, de tal manera que:
H 2 O (externo) = H 2 O (interno)
(5.1)
El potencial qumico externo del agua pura debe incluir un valor de referencia
y una correccin en la presin. El potencial qumico interno involucra un valor de
referencia, la correccin en la presin y una correccin para la concentracin de
la solucin; de tal manera que para una solucin ideal incompresible, la ecuacin
(5.1) se expresa como:
donde:
0H 2 O + V H2 O Pe = 0H 2 O + V H 2 O Pi + RT ln(1 x1 )
(5.2)
0H 2 O : Potencial de referencia. [Latm/mol].

V H 2 O : Volumen parcial molar del agua. [L/mol].
x1 : Fraccin molar de soluto dentro de la clula.
R: Constante de los gases ideales. [Latm/mol K]
T : Temperatura absoluta. [ K]
Tomando el contenido celular como una solucin diluida, el volumen parcial
del agua V H2 O es aproximadamente igual al volumen molar del agua VH2 O , y
x1 es pequea. De esta manera se tiene:
Pe Pi =
RT
RT
ln(1 x1 ) =
(x1 ...)
V H2O
V H 2O
5.2. FUNDAMENTOS
163
y finalmente:
Pe Pi = RT c1
(5.3)
Esta relacin es llamada ley de vant Hoff y en ella c1 es la concentracin

del soluto 1.
El rompimiento por smosis es relativamente simple, no requiere un equipo
sofisticado ni de temperaturas elelvadas. Es efectivo para el rompimiento de
clulas animales. Sin embargo, es difcil de aplicar en algunos microorganismos.
Solubilizacin de membranas por saponificacin Este mtodo de lisis
consiste en la solubilizacin de la membrana celular a un pH alto con un agente
alcalino, (v.g. hidrxido de sodio, NaOH) en presencia de un detergente (v.g. dodecil sulfato de sodio, SDS). El papel del detergente es solubilizar la membrana
celular, eliminando las interacciones interfaciales no covalentes entre protenas
y lpidos, lo que provoca la liberacin de todos los componentes intracelulares
y adems promueve la desnaturalizacin de protenas y cidos nucleicos. Este
mtodo ha sido usado recientemente en la produccin a escala de plsmidos
para uso mdico, debido a que los esfuerzos cortantes que se presentan con
otros mtodos de rompimiento daan el plsmido.
Disolucin lipdica La extraccin por solventes ha sido usada para la disolucin selectiva de ciertos componentes celulares. Un gran nmero de solventes
orgnicos han sido investigados en el laboratorio para ser utilizados con este
fin, sin embargo su uso es limitado debido a que pueden inhibir severamente las
actividades biolgicas.
La tcnica de disolucin lipdica es relativamente simple, tpicamente se
aade a la suspensin celular un volumen de tolueno aproximadamente igual
al 10 % de la biomasa. El tolueno es absorbido dentro de los lpidos de la pared
celular, lo que produce la expansin de la pared y la ruptura de sta. El contenido celular es liberado y entonces puede ser separado el producto de inters.
Otros tipos de solventes adems del tolueno tambin son efectivos para este
propsito. El benceno es efectivo pero es carcinognico y altamente voltil. El
tolueno tambin es carcinognico pero es menos voltil. El uso de estos compuestos requiere considerar las normas de las agencias reguladoras.
Para la aplicacin de la tcnica de disolucin lipdica se requiere hacer con
anticipacin un buen nmero de experimentos de laboratorio, para verificar los
parmetros de solubilidad que reflejen las interacciones lpido-solvente. En la
prctica los solventes con similares parmetros de solubilidad atacarn a las
clulas en forma similar.
Idealmente se deben seleccionar solventes cuyos parmetros de solubilidad
sean apropiados para los lpidos de la pared celular pero inadecuados para disolver al producto de inters localizado dentro de la clula. Esto casi nunca se
conoce entonces es necesario realizar experimentos.
164
Digestin enzimtica La digestin enzimtica consiste en el empleo de enzimas que atacan la pared y provocan el rompimiento celular. Una de las enzimas
ms utilizada en la digestin enzimtica de bacterias es la lisozima. Esta enzima
rompe el enlace 1-4 entre el cido N-acetilmurmico y la N-acetil glucosamina
de la capa de peptidoglicano de la pared celular, provocando el rompimiento de
la pared y consecuentemente la ruptura de la clula.
A pHs menores de 5 las clulas no se rompen aun cuando la pared celular haya sido destruida por digestin. Esto se debe a la baja solubilidad del
protoplasma a estos pHs y enfatiza la necesidad tanto de rompimiento de la
pared celular, como de condiciones favorables de solubilidad para una liberacin
eficiente de los materiales intracelulares (Edebo, 1969).
El alto costo de las enzimas no permite que esta tcnica sea usada ampliamente en el rompimiento celular a nivel industrial a pesar de ser altamente
selectiva (Andrews et al., 1990).
Mtodos mecnicos
En el rompimiento de clulas a gran escala se han preferido los mtodos
mecnicos. Las tcnicas empleadas son: la molienda hmeda en molinos de perlas
agitados a alta velocidad (esfuerzo de corte slido) y la homogeneizacin a alta
presin (esfuerzo de corte lquido) (Bjustrom, 1985; Kula y Schtte, 1987).
El equipo que se utiliza en estas tcnicas originalmente fue diseado para
otros usos. El uso del molino de perlas se origin en la industria de la pintura
por la necesidad de obtener mezclas homogneas de los pigmentos constituyentes
de la pintura. El uso del homogeneizador se origin en la industria alimenticia,
particularmente en la homogeneizacin de leche y productos lcteos (obviamente
la ruptura celular no es una homogeneizacin). Estos equipos han sido adaptados
para utilizarse en la desintegracin celular.
La desintegracin celular no es una tarea fcil si se considera la alta resistencia mecnica de las paredes celulares y el tamao tan pequeo de los
microorganismos (1 10 m). Para poder alcanzar rendimientos altos, esto es,
obtener un grado de desintegracin celular mayor que 90 %, con frecuencia se
requieren dos o tres pasos tanto en el homogeneizador como en el molino.
El paso repetido de la suspensin celular a travs de los equipos de rompimiento produce una distribucin amplia del tamao de los residuos de la pared celular, extendindose hasta por abajo de las 0.3 m. En esta operacin es importante controlar el tamao de los desechos celulares debido a que la separacin
slido-lquido posterior depende del tamao de las partculas.
5.2.4.
Mtodos de Permeabilizacin
Los mtodos de permeabilizacin (Fig. 5.3) consisten en alterar la estructura

de la pared y la membrana celular para facilitar la difusin del producto hacia
el exterior de la clula. Debido a los problemas asociados con la purificacin
de productos obtenidos por rompimiento celular, existe un gran inters en el
5.2. FUNDAMENTOS
165
empleo de estos mtodos alternativos a la ruptura mecnica empleada a nivel

industrial (Danilevich et al., 2008).
Figura 5.3: Comparacin conceptual de permeabilizacin (lado derecho) y

rompimiento mecnico (lado izquierdo) Fuente: Naglak et al., 1990. Reproducic
da con el permiso de M arcel Deker Inc. Copyright 1990.
Existen diversos mtodos para realizar la permeabilizacin celular, varios de

los cuales son iguales a los empleados en el rompimiento celular pero se realizan
a condiciones ms leves. Por ejemplo, mediante presin osmtica controlada es
posible liberar protenas localizadas en el espacio periplsmico de clulas Gram
negativas.
Varios de los trabajos sobre permeabilizacin han sido desarrollados en bacterias Gram negativas, principalmente E. coli, usando solventes como tolueno al
5 %, detergentes aninicos y no inicos como el dodecil sulfato de sodio (SDS) y
Tritn X-100, agentes caotrpicos como guanidina y rea, y agentes quelantes
como el EDTA (Naglak et al., 1990).
La base de una solubilizacin efectiva radica en la estructura qumica del
detergente o agente solubilizante (Fig. 5.4). Estas estructuras tienen una porcin hidroflica (generalmente inica) y una parte hidrofbica (generalmente un
radical orgnico). Como resultado de lo anterior, todos los detergentes son anfipticos, capaces de interaccionar tanto con el agua como con un lpido, esto
permite que sean empleados para solubilizar la pared de las bacterias Gram
negativas.
La naturaleza anfiptica se mantiene si los detergentes son aninicos, catinicos o no inicos. Dentro de los materiales aninicos se encuentran los jabones
los cuales son sales de los cidos grasos. Debido a que los jabones presentan un
grupo carboxlico slo son detergentes efectivos a pH altos, donde este grupo
permanece ionizado (los jabones no son efectivos en aguas duras, donde los iones
de calcio pueden reaccionar con ellos para formar precipitados insolubles). La
desventaja de los jabones convencionales como permeabilizantes, puede ser evi-
166
Figura 5.4: Estructuras qumicas de agentes solubilizadores. Fuente: Belter et

c
al., 1988. Reproducida con el permiso de John W iley and Sons. Copyright 1988.
Todos los
derechos reservados.
tada reemplazando el grupo carboxlico con un grupo sulfato. El sulfato puede

estar ligado a un anillo bencnico formando un sulfonato semejante al que se
muestra en la Figura 5.4. Este sulfonato es ms efectivo que los sulfatos alcalinos
en la ruptura de clulas; por esta misma razn los sulfonatos no son fcilmente
degradados microbiolgicamente.
Los detergentes no inicos comerciales como el Tritn X-100 estn menos
definidos qumicamente. Las molculas de este detergente tienen tambin una
porcin hidrofbica y una hidroflica. La parte hidroflica no es un sulfato sino
un alcohol. El aspecto importante de estos detergentes es su habilidad para
solubilizar lpidos de la pared celular y de esta manera modificar la estructura
de la clula.
En soluciones muy diluidas de detergentes, casi no hay disolucin de lpidos. Existe una concentracin a la cual los lpidos repentinamente comienzan
a solubilizarse; arriba de esta concentracin la solubilidad de los lpidos vara
linealmente con la concentracin de detergente como se muestra en la Figura 5.5.
Permeabilizando la clula de E. coli con guanidina y Tritn X-100, en concentraciones de 0.1 M de guanidina y 0.5 % de Tritn, se libera cerca del 50 %
de la protena intracelular (Naglak et al., 1990).
La protena recombinante - lactamasa ha sido recuperada con toda su actividad (de E. coli) utilizando una solucin 0.2 M de guanidina. Se ha encontrado
que con la permeabilizacin con guanidina a concentraciones de 6.0 M, algunas
5.3. EQUIPO DE ROMPIMIENTO CELULAR
167
Figura 5.5: Efecto de la concentracin de detergentes sobre la disolucin de

lpidos. Fuente: Belter et al., 1988. Reproducida con el p erm iso de John W iley and Sons.
c
Copyright 1988.
protenas como las que se encuentran en cuerpos de inclusin, conservan toda o

parte de su actividad biolgica. Por esta razn, este mtodo de permeabilizacin
celular puede ser muy apropiado para algunos productos recombinantes.
Recientemente, los surfactantes anfipticos de origen biolgico conocidos como biosurfactantes, tambin estn siendo utilizados como permeabilizantes, debido a que son ms biodegradables y amigables al ambiente (Zaragoza et al.,
2009).
Debido a que la permeabilizacin puede ser llevada a cabo en un simple
recipiente agitado, sus costos de operacin y de inversin son ms bajos que los
de los mtodos de rompimiento celular mecnicos. La principal desventaja de la
permeabilizacin con respecto a los mtodos mecnicos y a la lisis enzimtica,
es que libera menos protena por unidad de tiempo.
5.3.
Equipo de Rompimiento Celular
La operacin de rompimiento celular a nivel industrial actualmente se realiza

en tres tipos de equipos de rompimiento mecnico:
Molinos de Perlas de Alta Velocidad.
Homogeneizadores de Alta Presin.
Microfluidizadores.
168
5.3.1.
Molino de Perlas de Alta Velocidad
Los molinos de perlas de alta velocidad (Fig. 5.6a) constan fundamentalmente de un cilindro en posicin horizontal (o vertical) llamado cmara de
molienda, un agitador que consiste de una flecha giratoria sobre la que se monta
un sistema de discos, barras o anillos que provoca el movimiento del contenido
del molino (Fig. 5.7), y una gran cantidad de pequeas perlas de vidrio que son
los elementos activos de molienda. Estos molinos son utilizados a nivel industrial para la desintegracin de bacterias, levaduras, algas y hongos microscpicos
(Heim et al., 2007).
Estos molinos alcanzan una alta eficiencia de molienda, trabajan a baja
presin, pueden manejar suspensiones concentradas, operan en forma continua
o por lotes y requieren poco mantenimiento. El eventual rompimiento de las
perlas es un aspecto que debe ser considerado en la seleccin de estos equipos.
Figura 5.6: Molino de perlas. a) Esquema de un arreglo tpico y b) Mecanismos

de ruptura.
La suspensin celular se introduce por uno de los extremos de la cmara de
molienda. El agitador produce el movimiento necesario de la masa celular y las
perlas de vidrio. Los discos presentan perforaciones cubiertas con membranas
que permiten el paso del material celular pero no as el de las perlas. Los discos
o impulsores pueden montarse sobre la flecha ya sea en forma concntrica o
excntrica.
El tipo de agitador est directamente relacionado con el transporte de energa
ptimo de las partes en rotacin a las perlas de vidrio. El tipo de flechas e im-
169
pulsores que se utilicen depende de la aplicacin concreta que se le dar al

molino.
Figura 5.7: Diferentes arreglos de impulsores. a) Concntrico y b) Excntrico.

Fuente: Kula y Schtte, 1987. Reproducida con el p erm iso del Am erican Institute of Chem ical
c
Engineers. Copyright 1987
AIChE. Todos los derechos reservados.
Los molinos de perlas agitados a alta velocidad que se encuentran disponibles

en el mercado, difieren en la relacin de longitud a dimetro de la cmara de
molienda. La relacin ptima se encuentra entre 1 : 2.5 y 1 : 3.5. Los volmenes
varan entre 50 mL y 250 L para equipos de laboratorio, planta piloto y produccin a escala industrial. Estos ltimos permiten manejar flujos de hasta 2, 000
L/h.
Mecanismo de desintegracin celular
El transporte de energa cintica desde el agitador a las perlas de vidrio se
efecta por fuerzas de adherencia en combinacin con fuerzas de desplazamiento. Ambas relacionadas con el diseo geomtrico, y con las propiedades de la
superficie y del impulsor. El volumen de la cmara de molienda se activa a travs
de la aceleracin de las perlas en direccin radial formando capas de corriente de
diferente velocidad. Los perfiles de velocidad diferencial generan considerables
fuerzas de corte dependiendo de la velocidad y el tamao de las perlas de vidrio.
Las fuerzas de corte generadas, conjuntamente con la frecuencia y la fuerza de
las colisiones entre las perlas, son la causa de la desintegracin de las clulas
(Fig. 5.6b).
Parmetros operacionales
El molino de perlas est caracterizado por un gran nmero de parmetros
operacionales (Kula y Schtte, 1987). Los ms importantes para la desinte-
170
gracin celular se muestran en la Tabla 5.3 y algunos de ellos son discutidos a

continuacin.
Tabla 5.3: Principales parmetros operacionales del molino de perlas agitado.
Parmetros Operacionales
Velocidad del agitador
Velocidad de alimentacin de la suspensin celular
Diseo del agitador
Tamao de las perlas de vidrio
Carga de las perlas de vidrio
Concentracin celular
Temperatura
Adaptada de: Kula y Schtte, 1987

c
Reproducida con el permiso del American Institute of Chem ical Engineers. Copyright 1987
Velocidad del agitador El agitador es responsable de la transferencia de

energa y de la activacin de las perlas en la cmara de molienda. La velocidad
perifrica normalizada de los anillos se utiliza para comparar molinos diferentes,
debido a que proporciona mayor informacin tcnica al agrupar varios parmetros relacionados con la velocidad de agitacin.
Para impulsores montados excntricamente, se toma un promedio de velocidades perifricas U (m/s) el cual es calculado de acuerdo a la ecuacin:
U=
con:
Dm N
60 1000

[=]
Dm = 2 e2 +
donde:
m
s
(5.4)
d2
4
Dm : Dimetro promedio de los anillos excntricos. [mm].

e: Dimetro de la flecha del agitador. [mm].
d: Dimetro de los anillos del agitador. [mm].
N : Velocidad angular del agitador. [rpm].
Para el caso de impulsores concntricos, en la ecuacin (5.4) se utiliza directamente el dimetro del impulsor.
Normalmente la velocidad perifrica flucta entre 5 y 15 m/s. Al incrementar la velocidad perifrica la fuerza de corte generada se incrementa, y con sta
171
la frecuencia de colisin. Paralelamente, la temperatura se incrementar dependiendo de la carga de perlas la cmara de molienda. La erosin de las perlas
tambin se incrementar y con esto, la energa necesaria para manejar el agitador.
La Figura 5.8a muestra el efecto de la velocidad del agitador sobre la desintegracin de S. cerevisiae en un molino de perlas agitado de 4.0 L. Se puede
observar que a una velocidad perifrica de 8 m/s (1500 rpm) se obtiene la velocidad ptima para la desintegracin celular (velocidades mayores producen
slo ms calentamiento). En microorganismos pequeos como las bacterias, la
velocidad perifrica ptima para este tipo de molino se encuentra alrededor de
10 m/s (1900 rpm).
Figura 5.8: Molino de perlas. a) Efecto de la velocidad del agitador sobre la

liberacin de enzima y protena intracelular en S. cerevisiae. Netzsch LME4.
b) Efecto del flujo de la alimentacin sobre la liberacin de fumarasa en S.
cerevisiae (o) y B. ammoniagenes (). Fuente: Kula y Schtte, 1987. Reproducida
c
con el permiso del Am erican Institute of Chemical Engineers. Copyright 1987
AIChE. Todos los
Para un flujo de alimentacin constante, no existe una relacin lineal entre el grado de desintegracin celular y la velocidad perifrica, lo cual puede
ser atribuido a los cambios en la distribucin del tiempo de residencia con la
variacin de la velocidad de agitacin.
Flujo de alimentacin de la suspensin celular El flujo permisible en un
molino de perlas es funcin del volumen del molino, de la carga de perlas y de
la velocidad del agitador. El molino Netzsch LME4 (Netzsch-Feinmahltechnik
GmbH, Selb, F.R.G) cuyo volumen es de 4 L, puede ser operado con flujos de
alimentacin mayores de 100 L/h.
El consumo de potencia del molino depende en primer lugar de la velocidad
del agitador y slo ligeramente del flujo de alimentacin. Por lo tanto, los flujos
de alimentacin altos pueden ser ms econmicos.
172
En teora el grado de desintegracin celular alcanzado por paso, es inversamente proporcional al flujo de alimentacin. Para levaduras sin embargo, esto no
se cumple. La Figura 5.8b muestra la poca influencia del flujo de alimentacin
sobre el grado de desintegracin de S. cerevisiae. Un incremento de un orden
de magnitud en el flujo de alimentacin, desde 10 a 100 L/h produce un decremento en el grado de desintegracin del microorganismo de solamente 20 %.
Por otra parte, la liberacin de enzima intracelular a partir de Brevibacterium
ammoniagenes disminuye en forma ms marcada con el incremento en el flujo
de alimentacin (esto se debe principalmente a la diferencia de tamao y a la
mayor resistencia de la pared de las bacterias Gram positivas).
Considerando los tiempos de residencia y la demanda de energa, es aconsejable operar los molinos de perlas a altos flujos de alimentacin y utilizar varios
pasos para alcanzar el rendimiento requerido.
Diseo del agitador y efectos del mezclado El comportamiento de un
molino de perlas depende en gran medida del patrn de flujo y mezclado que
produce el agitador. El patrn se sita entre el flujo ideal tipo tapn (sin mezclado) y el tipo tanque continuo completamente agitado (100 % agitado). El
comportamiento de mezclado en un molino de perlas puede ser determinado
mediante tcnicas con trazadores (tintas, sales, etc.) que permiten establecer la
distribucin de tiempos de residencia de los elementos del fluido en el molino
(Levenspiel, 1972).
El rompimiento celular es funcin de la velocidad del agitador y del flujo
de alimentacin de la suspensin. Esta funcionalidad es lineal slo si los microorganismos son transportados como flujo tapn (sin mezclado axial), lo que
significa idnticas velocidades de transporte axiales a travs de la cmara de
molienda. Sin embargo, en los agitadores de los molinos comerciales se presentan
efectos que provocan el mezclado de todas las partculas introducidas en la
cmara. Ocasionalmente, un microorganismo a la entrada de la cmara que
tiene un tiempo de residencia igual a cero, tendr la misma probabilidad de
dejar la cmara de molienda que un microorganismo que haya entrado en ella
previamente.
Tiempo de residencia La Figura 5.9 muestra la distribucin de tiempos de residencia en un molino Netzsche LME 20 en respuesta a un pulso de
colorante, usando tres tipos diferentes agitadores con la misma cmara. La distribucin de la concentracin de tinta en la corriente de salida puede ser correlacionada directamente con la distribucin normalizada de tiempos de residencia.
En general se requieren cuatro o cinco tiempos de residencia ideales para cambiar completamente el contenido de la cmara de molienda.
Puesto que la clula est presente en la cmara de molienda con una probabilidad y periodos de tiempo diferentes, el tiempo de residencia promedio t, no
es idntico al tiempo de residencia ideal tR .
Con los tres tipos de agitadores a que se refiere la Figura 5.9 se ha observado
que un incremento en la velocidad de rotacin produce una distribucin ms am-
173
Figura 5.9: Efecto de la geometra del tipo de agitador sobre el tiempo de residencia, a un flujo de alimentacin de 180 L/h. (+) de postes, (o) de discos
excntricos y () de discos dobles. Fuente: Kula y Schtte, 1987. Reproducida
c
con el permiso del Am erican Institute of Chemical Engineers. Copyright 1987
AIChE. Todos los
plia de tiempos de residencia. Se ha observado tambin que un incremento en la

velocidad de alimentacin produce una distribucin ms estrecha de tiempos de
residencia con los tres tipos de agitadores. Esto permite incrementar la eficiencia
de los molinos y explica por qu la velocidad de alimentacin aparentemente no
afecta considerablemente el grado de desintegracin alcanzado en un solo paso.
Tamao de las perlas de vidrio En la desintegracin celular se utilizan
perlas de vidrio libres de plomo con un dimetro entre 0.2 y 1.5 mm. En molinos de laboratorio pueden utilizarse perlas hasta de 0.2 mm de dimetro. Sin
embargo, a escala industrial el tamao de las perlas debe ser mayor a 0.4 mm
para facilitar su separacin continua.
Algunas observaciones experimentales indican que el tamao ptimo de las
perlas depende del tipo de clula. Para levaduras se requieren dimetros mayores a 0.5 mm y para bacterias menores que 0.5 mm. Las enzimas localizadas
en el espacio periplsmico son ms fcilmente liberadas utilizando perlas de
vidrio mayores en relacin a las utilizadas para liberar enzimas protoplasmticas (Keshavarz et al., 1987).
Existe un dimetro ptimo para las perlas. Dada una relacin de volumen
del molino a volumen de perlas, el nmero de perlas aumenta al disminuir el
dimetro de stas. Esto aumenta la frecuencia de las colisiones entre las perlas
y por lo tanto la eficiencia de la ruptura. Por otro lado, al disminuir el dimetro
174
de las perlas aumenta su tendencia a flotar produciendo el efecto contrario.

Carga de perlas La cantidad de perlas que debe ser cargada al molino depende del tipo de clulas y del tamao de las perlas. Una carga baja de perlas
produce una eficiencia baja, mientras que una carga alta genera mayor consumo
de potencia y libera ms calor.
Empricamente se ha determinado que la carga ptima de un molino flucta
entre el 80 y 90 %. La carga recomendada para perlas de 0.5 mm y 1.0 mm es
de 85 % y 80 %, respectivamente.
La expresin para calcular la carga de perlas de un molino es la siguiente:
Carga =
Vp
Vc
(5.5)
donde:
Vp : Volumen del lecho de perlas. [L3 ].
Vc = Vt Va : Volumen vaco del molino sin perlas.
Vt : Volumen de la cmara de molienda. [L3 ].
Va : Volumen del agitador (discos o barras y flecha). [L3 ].
Ejemplo 5.1. Carga de un molino de perlas.
El lecho formado por las perlas de un molino tiene una porosidad de 0.375.
Estimar la fraccin de volumen vaco de la cmara del molino (VM ) cuando la
carga es del 80 %.
Solucin:
De acuerdo con la ecuacin (5.5),
0.8 =
Vp
Vc
la fraccin vaca est dada por:

Fraccin =
(Vp )(0.375) + 0.2Vc

Vc
combinando las expresiones anteriores,

Fraccin =
(0.8Vc )(0.375) + 0.2Vc

= 0.5
Vc
Cuando la carga de perlas es del 80 %, el volumen de todas las perlas es igual

al volumen libre total en la cmara VM .
175
Concentracin de la suspensin celular La concentracin de clulas en la

suspensin no afecta considerablemente la efectividad de la desintegracin celular. Se ha reportado un grado de desintegracin idntico para clulas de levadura
en concentraciones de 4 a 20 % de peso seco de clulas, en un molino Dyno KD5.
La generacin de calor disminuye con el decremento de la concentracin celular
mientras que el consumo de energa por unidad de peso se incrementa. El peso
hmedo de clulas ptimo para la desintegracin celular en un molino de perlas
agitado se encuentra entre el 40 y 50 %.
Efecto de la temperatura La temperatura de molienda facilita el rompimiento celular pero puede afectar al producto. En general el rompimiento celular se
realiza a una temperatura de entre 5 y 15 C. Es dificil llevar un control preciso
de la temperatura puesto que una gran parte de la energa introducida por el
agitador dentro de la mezcla es transformada en calor. Por ejemplo, en un molino Netzsch LME20 que consume una potencia de 7.5 Kwh aproximadamente
cerca de 6, 000 kcal/h tienen que ser removidas por el sistema de enfriamiento.
5.3.2.
Homogeneizador de Alta Presin
Los homogeneizadores de alta presin son los equipos ms ampliamente utilizados para el rompimiento celular a gran escala (Keshavarz et al., 1987). El
homogeneizador de ms amplio uso es el Manton-Gaulin, sin embargo existen
otros tipos de homogeneizadores como el Microfluidizador.
Un homogeneizador de alta presin del tipo Manton-Gaulin consta de dos
partes principales: una bomba de pistn de alta presin y una vlvula. El nmero
de pistones de la bomba depende del tamao del homogeneizador, en los equipos
de laboratorio las bombas constan de uno o dos pistones, mientras que las de
los equipos industriales tienen de tres a cinco.
Durante una operacin normal, se utiliza una bomba de alimentacin que
opera a una presin entre 0.1 y 0.5 MPa (millones de Pascales) para transportar
la suspensin celular a la bomba de alta presin, donde la suspensin es comprimida hasta 60 MPa. La vlvula acoplada a la bomba (Fig. 5.10), se abre
cuando la presin excede un valor determinado. La suspensin de clulas es liberada a travs de la vlvula con una velocidad muy alta, y despus de cambiar
de direccin choca contra un anillo de impacto.
Los homogeneizadores de alta presin presentan eficiencias de rompimiento
muy altas, trabajan con suspensiones de concentracin intermedia, son escalables, operan continuamente y permiten manejar altos volmenes de trabajo.
Estos equipos por sus altas presiones de operacin requieren especial atencin
de los sellos de las partes mviles.
Mecanismo de desintegracin celular
La desintegracin celular se inicia cuando la suspensin celular pasa a alta
presin por la vlvula, donde las clulas se someten a turbulencia, cavitacin y
esfuerzos de corte lquido. De acuerdo a los resultados experimentales que han
176
Figura 5.10: Configuracin de las vlvulas usadas en el homogeneizador:

a) Vlvula plana y b) Vlvula de cuchilla. Fuente: Kula y Schtte, 1987.
c
sido reportados, parece razonable suponer que en el homogeneizador de Gaulin,

la fuerza del choque sobre el anillo es directamente proporcional a la presin de
operacin y es la causa principal del rompimiento (Kelly y Muske, 2004; Kula
y Schtte, 1987).
El mtodo de rompimiento por homogeneizacin no es selectivo. No existe
forma de diferenciar entre la liberacin de protenas del espacio periplsmico y
las protoplasmticas, por lo que no es recomendable como rompimiento selectivo.
La homogeneizacin no es efectiva para la desintegracin de algunas bacterias
Gram positivas que presentan una pared celular muy gruesa y aparentemente
no pueden ser desintegradas en el homogeneizador de alta presin, al menos a
presiones hasta de 55 MPa. Sin embargo, se ha realizado con xito el rompimiento de levaduras y de bacterias Gram negativas como la Alcaligenes eutrophus
(Harrison et al., 1990).
En la Tabla 5.4 se presentan los parmetros operacionales que tienen influencia en el rompimiento celular en el homogeneizador de alta presin (Kula y
Schtte, 1987). Como puede observarse el nmero de parmetros es menor que
los correspondientes al molino de perlas lo que facilita la optimizacin de este
tipo de procesos.
Presin de operacin Para lograr un rompimiento eficiente de clulas la presin de operacin del homogeneizador debe ser alta (Ramanan, 2009), superior
a 35 MPa (la industria alimenticia opera sus homogeneizadores a una presin de
35 MPa). En la Figura 5.11a se muestra como vara la liberacin de la enzima
glucosa-6-fosfato-deshidrogenasa de S. cerevisiae, con la presin de operacin
177
Tabla 5.4: Principales parmetros de operacin del homogeneizador de alta presin.
Presin de operacin
Diseo de la vlvula
Concentracin celular
Temperatura

c
Reproducida con el p erm iso del Am erican Institute of Chem ical Engineers. Copyright 1987
en un solo paso. Se puede observar que a 55 MPa hay tres veces ms enzima en
la fraccin libre de clulas, que a 30 MPa. Sin embargo, la enzima liberada en
un solo paso representa solamente cerca del 45 % de la cantidad total presente
en la suspensin.
Figura 5.11: Rompimiento de S. cerevisiae con homogeneizador a alta presin

a) Efecto del tipo de cuchilla utilizado sobre la liberacin de glucosa-6-fosfato
hidrogenasa con diferentes vlvulas. (+) cuchilla y (o) plana. b) Efecto del tiempo de recirculacin sobre la liberacin de enzima. Vlvulas de (o) cuchilla (+)
plana. Presin () 55 MPa, (- - -) 30 MPa y (.....) 15 MPa). Fuente: Kula
y Schtte, 1987. Reproducida con el p erm iso del American Institute of Chemical Engineers.
c
Copyright 1987
La presin de operacin del homogeneizador depende del producto que se

desee liberar. Durante una operacin se empieza a observar liberacin de protena soluble a presiones mayores que 10 MPa, sin embargo para liberar DNA se
requieren presiones por arriba de 25 MPa. En general las presiones de operacin
ms usadas son de 55 MPa.
Diseo de la vlvula En la Figura 5.10 se muestran las configuraciones de
las vlvulas que se usan con ms frecuencia en los homogeneizadores: la unidad
178
plana y la unidad de cuchilla. En la Figura 5.11a se muestra el comportamiento

de los dos tipos de vlvulas en el rompimiento celular como una funcin de la
presin de operacin, se puede observar que por arriba de una presin de 20 MPa
la vlvula de cuchilla libera mayor cantidad de enzima que la vlvula plana, por
abajo de esta presin la cantidad de enzima liberada es aproximadamente igual
para ambos tipos de vlvulas.
En la Figura 5.11b se presenta el comportamiento de la liberacin de una
enzima en funcin del tiempo de recirculacin a tres diferentes presiones y para
dos tipos de vlvula, se puede observar que la cantidad de enzima liberada
aumenta con la presin, y para una presin dada el incremento es mayor si se
utiliza una vlvula de cuchilla.
Concentracin de la suspensin celular y temperatura La desintegracin celular es independiente de la concentracin de clulas de levaduras
en concentraciones entre 100 y 600 gramos de peso seco por litro.
Durante la homogeneizacin la temperatura de la suspensin celular es un
parmetro que no se mantiene constante y por lo tanto es difcil correlacionarlo.
La constante especfica de la velocidad de homogeneizacin vara directamente
con la temperatura hasta un valor de 30 C. Se han observado diferencias de
alrededor de 40 % en este parmetro en el rango de 5 a 30 C. An as, se
requieren tres pasos a una presin mxima de 55 MPa y a 30 C para alcanzar
una desintegracin celular mayor del 90 %.
5.3.3.
Microfluidizador
El microfluidizador es un homogeneizador de alta presin que tiene un mecanismo de rompimiento celular diferente al del homogeneizador Manton-Gaulin.
Su mecanismo de rompimiento utiliza una bomba de alta presin manejada
con aire y una cmara especial de rompimiento conectada a un dispositivo de
contrapresin, como se muestra en la Figura 5.12.
La suspensin celular se divide en dos corrientes hacindola pasar a presin
a travs de dos microcanales de seccin transversal de 2 100 m. Seguidamente las corrientes son impactadas a alta velocidad y mezcladas en una pared
estacionaria de la cmara de rompimiento. Mediante este mecanismo la energa
de entrada se disipa casi instantneamente producindose la ruptura celular.
Los lmites de operacin del microfluidizador estn dados por: la presin de
aire requerida para manejar la bomba, las propiedades fisicoqumicas del lquido
bombeado y la presin mxima de trabajo permitida que es de 140 MPa.
Alguna ventajas que presenta el microfluidizador en comparacin con el homogeneizador Manton-Gaulin (Sauer et al., 1989) son las siguientes:
a) Es muy compacto, se puede montar sobre una charola de acero inoxidable
de 30 35 cm.
b) Permite un mayor enfriamiento del sistema: Adicionalmente a los serpentines de enfriamiento que tambin presenta el Manton-Gaulin, la cmara de
rompimiento puede colocarse en un bao de hielo.
179
Figura 5.12: Diagrama del Microfluidizador. a) Suspensin, b) Tanque receptor, c) Cmara de rompimiento e intercambiador de calor y d) Homogeneizado.
Fuente: Sauer et al., 1989. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. Copyright
c
1989.
c) Puede alcanzarse un rompimiento celular ms eficiente (en el caso de

bacterias).
d) Permite flujos ms bajos (2 23 L/h con presiones de operacin de 10
95 MPa) y maneja volmenes menores (30 mL), lo que lo hace compatible con
operaciones de flujo continuo.
e) Es relativamente fcil de operar.
A continuacin se describe el efecto de la temperatura, del tamao de los
restos celulares y de la concentracin celular en el proceso de ruptura utilizando
un microfluidizador.
Temperatura de operacin Generalmente cuando se trabaja con presiones
altas es necesario enfriar el sistema. Si el homogeneizador no tiene un sistema
de enfriamiento eficiente de la cmara de rompimiento, puede presentarse un
incremento hasta de 80 C en la temperatura de la suspensin celular, lo cual
puede ocasionar la desnaturalizacin de la protena de inters.
El microfluidizador permite mantener incrementos de temperatura menores
a 20 C en la cmara de rompimiento, que es la parte de mayor temperatura. Por
otro lado, el tiempo durante el cual las clulas estn expuestas a temperaturas
elevadas es muy corto, dado que el tiempo de residencia de las clulas en la
180
cmara de rompimiento es de 0.025 a 0.04 segundos. Ambos efectos contribuyen

a incrementar la eficiencia de la operacin.
En estudios sobre el rompimiento de clulas de E. coli (Agerkvist y Enfors
1990), se enfri la cmara de rompimiento por inmersin en un bao de agua
helada para proporcionar enfriamiento adicional al proporcionado por el serpentn del equipo. La suspensin celular se aliment a una presin de 60 MPa y a un
flujo de 18 L/h. La temperatura de la suspensin a la entrada vari entre 8 y 10
C. Despus del primer paso la temperatura a la salida fue aproximadamente

de 23 C, de cerca de 27 C despus del segundo y aproximadamente de 28 C
despus de tres pasos.
Tamao de los restos celulares El microfluidizador produce restos celulares
de mayor tamao que los producidos en el homogeneizador Manton-Gaulin,
generndose suspensiones de menor viscosidad. Ambos efectos facilitan la separacin de los restos celulares durante la centrifugacin. Este efecto disminuye al
aumentar el nmero de pasos (Agerkvist y Enfors, 1990).
Concentracin celular En investigaciones realizadas con E. coli (Sauer et
al., 1989), se encontr que el microfluidizador puede romper clulas que se encuentran en soluciones cuyas concentraciones varan de 5.6 a 174 gramos de peso
seco por litro.
El hecho de que en el microfluidizador puedan manejarse concentraciones
hasta de 5.6 gramos de peso seco por litro tiene implicaciones en el diseo
ptimo del proceso de bioseparacin, dado que es posible pasar el caldo del
fermentador directamente al microfluidizador para efectuar la ruptura celular.
De esta manera puede eliminarse la operacin de cosecha de clulas, o disminuir
el grado de concentracin necesario previo a la ruptura. El costo del proceso
en forma integral puede ser menor an cuando las etapas de concentracin y
purificacin posteriores a la ruptura tambin se vean modificadas.
5.4.
Diseo de Equipo de Rompimiento
En esta seccin se presentan los principios de diseo de los dos tipos de

equipos ms empleados en el rompimiento celular a nivel industrial:
Molino de Perlas de Alta Velocidad.
Homogeneizador de Alta Presin.
5.4.1.
Molino de Perlas de Alta Velocidad
Los molinos de perlas de alta velocidad pueden ser operados en dos formas:
a) por lotes y b) continua.
5.4. DISEO DE EQUIPO DE ROMPIMIENTO
181
Operacin por lotes

Los molinos de perlas pueden ser operados en forma intermitente cuando el
volumen de la suspensin celular a tratar es bajo, o cuando se desea efectuar
experimentos para generar datos de diseo (Mayerhoff et al., 2008).
En una operacin por lotes, inicialmente se carga el molino con las perlas y
la suspensin celular. Durante la operacin se cierra la salida de suspensin y
se agita a la velocidad establecida.
El grado de rompimiento logrado puede ser determinado de dos formas: a)
Directamente: Contando el nmero de clulas intactas por unidad de volumen y
b) Indirectamente: Mediante la medicin de un componente liberado durante el
rompimiento. En el caso de productos de tipo proteico la determinacin de protena total y/o la actividad enzimtica son mediciones comnmente utilizadas
(Ramanan et al., 2008).
El rompimiento celular por lotes en molinos de perlas agitados a altas velocidades sigue una cintica de primer orden (Doucha y Lvansk, 2008). El
balance de masa de protena liberada puede ser expresado mediante la ecuacin
siguiente:
VM
dR
= k(Rm R)VM
dt
(5.6)
La ecuacin anterior establece que la velocidad de liberacin de la masa

de protena (clulas rotas) es proporcional a la masa de protena presente no
liberada donde:
VM : Volumen libre del molino. [L3 ].
Rm : Concentracin mxima de protena obtenible. [M/L3 ].
R: Concentracin de protena liberada en el tiempo t. [M/L3 ].
t: Tiempo de operacin. En el caso de la molienda por lotes el tiempo de
operacin t es igual al tiempo de residencia de las clulas en el molino. [t].
k: Constante de velocidad especfica de primer orden que depende del tipo de
clula, del tipo y velocidad del agitador, de la carga y tamao de las perlas,
de la concentracin celular y de la temperatura. [t1 ].
La ecuacin anterior puede ser integrada arreglndola de la siguiente forma:
R
0
dR
=k
Rm R
t
dt
(5.7)
Para obtener la ecuacin de la operacin por lotes:

Rm
= kt
ln
Rm R
(5.8)
182
De acuerdo a la ecuacin anterior las grficas de

Rm
vs t
ln
Rm R
producirn rectas de pendiente k y ordenada al origen cero.

En la Figura 5.13 se muestra la liberacin de protena a partir de Sacharomyses cerevisiae utilizando un molino Netzsch LME20 con diferentes tipos de
agitadores. El resultado muestra claramente que la desintegracin celular sigue
una cintica de primer orden independiente del tipo de agitador. Observndose
tambin diferentes valores de k para cada tipo de agitador.
Figura 5.13: Liberacin de protena a partir de Sacharomyses cerevisiae en experimentos con recirculacin con diferentes tipos de agitadores. () postes; ()
concntrico; (O) excntrico. Fuente: Kula y Schtte, 1987. Reproducida con el perc
miso del American Institute of Chemical Engineers. Copyright 1987
AIChE. Todos los derechos
reservados.
En el caso que el grado de rompimiento sea seguido mediante la actividad

enzimtica A, la ecuacin (5.8) puede ser expresada como:

Am
ln
= kt
(5.9)
Am A
Ejemplo 5.2. Cintica de rompimiento por lotes.
En el rompimiento por lotes para la obtencin de una enzima de S. cerevisiae,
se utiliz un molino de perlas de alta velocidad de 4 litros obtenindose los
siguientes datos:

Tiempo
(s)
00
15
30
45
60
Max.
R 102
(kg/kg)
0.000
1.025
2.150
2.525
3.425
10.000
183
A 102
(mol/minkg)
0.000
0.625
1.150
1.675
2.150
6.700
Se pide calcular:
a) La constante cintica para la liberacin de protena.
b) La constante cintica para la liberacin de enzima.
Solucin:
Las constantes cinticas pueden ser obtenidas mediante el empleo de las
ecuaciones (5.8) y (5.9). Los clculos necesarios son los siguientes:
Tiempo (s)
00
15
30
45
60
Rm
ln
Rm R
0.0000
0.1081
0.2421
0.2910
0.4193
Am
ln
Am A
0.0000
0.0979
0.1883
0.2877
0.3870
a) Mediante un ajuste de los datos por mnimos cuadrados se puede obtener

para la liberacin de protena la constante,
k = 6.984 103 s1
b) De igual manera, para la liberacin de enzima la constante es:
Operacin continua
k = 6.412 103 s1
Durante la operacin continua del molino de perlas, la suspensin celular a

tratar es alimentada continuamente al molino en uno de sus extremos y retirada
continuamente en el extremo opuesto.
En el diseo de los molinos de perlas es necesario considerar el grado de
dispersin de los tiempos de residencia de las clulas en el molino. A diferencia
de la operacin por lotes, en una operacin continua el tiempo de residencia
vara para las diferentes clulas de la suspensin, generndose una distribucin
de tiempos de residencia de la poblacin celular. El tiempo de residencia medio
t de la distribucin de tiempos de residencia es diferente al tiempo de residencia
ideal tR dado por:
184
tR =
VM
F
donde:
tR : Tiempo de residencia ideal. [t].
VM : Volumen libre del molino. [L3 ].
F : Flujo alimentado al molino. [L3 /t].
Grado de mezclado en un molino de perlas. El grado de desviacin del
flujo tapn ideal en los molinos de perlas comerciales, ha sido simulado utilizando
el modelo de Tanques en serie perfectamente agitados (Fig. 5.14). Mediante
el uso de este modelo los experimentos con pulsos de tinta permiten determinar
el nmero de tanques perfectamente agitados en serie a que equivale el grado
de mezclado que se presenta en el molino (Shtte y Kula, 1990).
Figura 5.14: Representacin conceptual de un molino de perlas continuo con el

modelo de "Tanques en serie perfectamente agitados".
Al aplicar un pulso de tinta en la primera etapa de una serie de tanques
perfectamente agitados de igual volumen, el balance de la masa de tinta para
cualquier etapa N est dado por la expresin:
VM dCN
= F (CN1 CN )
N dt
(5.10)
donde:
N : Nmero de etapas de la serie.
CN : Concentracin de tinta en la etapa N . [M/L3 ].
Utilizando un tiempo adimensional definido por:
=
tF
t
=
VM
tR
la ecuacin (5.10) puede expresarse como:

dCN
= N (CN1 CN )
d
(5.11)
185
con las condiciones:

<0
CN = 0
=0
>0
N = 1, 2, 3, ..N
C1 = N C0
CF = 0
En este anlisis C0 es la concentracin que se obtendra por el mezclado

instantneo del pulso en todo el volumen del molino.
Para la etapa nmero 1 la ecuacin de balance se reduce a:
dC1
= N C1
d
(5.12)
y la forma integrada es:

C1
NCo
dC1
= N
C1
(5.13)
de tal manera que:

C1
= N exp(N )
C0
(5.14)
La ecuacin de balance de la segunda etapa se expresa como:

dC2
+ NC2 = N 2 C0 exp(N)
d
(5.15)
o en forma integrada:
C2
= N 2 exp(N)
C0
Siguiendo este procedimiento es posible demostrar que para la etapa N se
tiene que:
E() =
CN
N N N1
=
exp(N )
C0
(N 1)!
(5.16)
En los estudios de mezclado E() es una medida de la distribucin de tiempos

de residencia del fluido dentro del recipiente (Levenspiel, 1972).
La aplicacin prctica del desarrollo anterior puede visualizarse derivando la
ecuacin (5.16) respecto a e igualando el resultado a cero para obtener:
186
N=
1
(1 max )
(5.17)
donde max es el tiempo adimensional al cual E es mxima. De tal manera que

el nmero de etapas a que equivale el grado de mezclado de un molino, puede
ser determinado a partir de los datos experimentales de concentracin contra
tiempo que resultan al aplicar un pulso de trazador.
Ejemplo 5.3. Respuesta de una serie de tanques agitados a la entrada de un pulso.
Graficar las curvas de respuesta de una serie de tanques agitados a la entrada
de un trazador de pulso, para diferentes nmeros de tanques.
Solucin:
En la Figura 5.15 se presenta un programa MATLAB para obtener la grfica
de las curvas de respuesta que se muestran en la Figura 5.16.
Figura 5.15: Programa para obtener las curvas de respuesta del Ejemplo 5.3.
Puede observarse en la Figura 5.16 que entre mayor sea el nmero de etapas,
el sistema presenta menor dispersin del pulso.
Eficiencia de los molinos de perlas El nmero de etapas de un molino
de perlas obtenido mediante experimentos de pulsos, puede ser empleado para
calcular la eficiencia de rompimiento esperada.
Para relacionar el nmero de etapas con la eficiencia de rompimiento es
necesario realizar un balance de protena liberada (clulas rotas) considerando
que el molino consta de N etapas tipo tanque perfectamente mezclados en serie,
y que el rompimiento sigue una cintica de primer orden.
El balance de protena liberada en la primera etapa de la serie est dado
por:
187
Figura 5.16: Respuesta de una serie de tanques agitados a la entrada de un

pulso.
VM
VM dR1
= F R1 + k(Rm R1 )
N dt
N
(5.18)
donde:
R1 : Concentracin de protena liberada en la etapa 1. [M/L3 ].
t: Tiempo de operacin. [t]
k: Constante de velocidad especfica de primer orden. [t1 ]
La ecuacin anterior puede ser expresada en funcin de un tiempo adimensional dado por:
=
tF
N VM
(5.19)
y obtener,
dR1
kVM
= R1 +
(Rm R1 )
d
NF
La ecuacin anterior puede ser integrada con las condiciones:
=0
R1 = 0
(5.20)
188
=1
R1 = R1
y obtener:
kVM
R1 = Rm N F
kVM
1+
NF
(5.21)
La ecuacin anterior tambin puede ser expresada como:

Rm
kVM
= 1+
Rm R1
NF
(5.22)
Continuando con este procedimiento puede ser demostrado que para la etapa
N se tiene:

N
kVM
Rm
= 1+
Rm RN
NF
(5.23)
Ejemplo 5.4. Determinacin del nmero de etapas equivalentes de

un molino de perlas.
Un molino de perlas tipo piloto con cmara de 4 litros de volumen, se carga
de perlas de tal manera que la fraccin de volumen libre es de 0.48 respecto al
volumen de la cmara.
Para determinar el nmero de etapas del molino de acuerdo al modelo de
tanques en serie, se introduce un pulso de tinta al molino cuando ste opera
en forma estacionaria con un flujo de 50 L/h. Los datos de concentracin a la
salida del molino aparecen en las columnas (1) y (2) de la Tabla siguiente:

(1)
t (s)
0
25
50
75
100
125
150
175
200
225
250
275
300
325
350
375
400
425
(2)
C(U)
0
11.5
52.2
93.0
107.3
101.7
85.3
65.0
47.5
32.8
21.8
14.1
8.8
5.4
3.3
1.9
1.1
0.6
Suma =
(3)
Ct
0.0
143.8
796.3
1815.0
2503.8
2612.5
2337.5
1878.8
1406.3
1003.8
682.5
448.8
286.3
177.5
108.8
65.0
37.5
21.3
16,325
(4)
0
0.18
0.36
0.54
0.72
0.90
1.09
1.27
1.45
1.63
1.81
1.99
2.17
2.35
2.53
2.71
2.89
3.07
189
(5)
E
0.000
0.097
0.442
0.788
0.909
0.861
0.722
0.550
0.402
0.278
0.185
0.119
0.075
0.046
0.028
0.016
0.009
0.005
Se pide:
a) Calcular el tiempo de residencia ideal.
b) Estimar el valor de C0 .
c) Obtener la grfica de E vs .
d) Estimar el nmero de etapas N .
e) Calcular la eficiencia por etapa si k = 1.93 102 s1
f) Calcular la eficiencia global de las N etapas.
Solucin:
a) El tiempo de residencia ideal est dado por:
s
4 L 0.48 3600
VM
h = 138.24 s
tR =
=
L
F
50
h
b) El valor de C0 puede ser estimado mediante la expresin:
!
(F ) ( Ct)
C0 =
VM
Utilizando el mtodo de los trapecios, se obtienen los datos de la columna
(3) de la tabla anterior, de tal manera que:
190
C0 =
16325
= 118.1 Unidades
138.24
c) En las columnas (4) y (5) de la tabla anterior aparecen los clculos del
tiempo adimensional y la concentracin adimensional E. La Figura 5.17 muestra un programa MATLAB para obtener la curva correspondiente.
Figura 5.17: Programa MATLAB para la obtencin del nmero de etapas y la

curva de distribucin de tiempos de residencia del Ejemplo 5.4.
La Figura 5.18 muestra la curva de la distribucin de tiempos de residencia.
Los crculos corresponden a los datos experimentales y la lnea continua es una
curva ajustada.
d) De la Figura 5.18 se puede determinar que cuando E presenta un mximo,
max = 0.72
Utilizando la ecuacin (5.17) se obtiene:
191
Figura 5.18: Distribucin de tiempos de residencia del Ejemplo 5.4.
N
N
N
1
(1 max )
1
=
(1 0.72)
4
=
e) La eficiencia de rompimiento en cada etapa de acuerdo con la ecuacin

(5.21) es:

kVM
NF

Eficiencia =
kVM
1+
NF
el valor del grupo entre parntesis de la expresin anterior es:
kVM
(1.93 102 s1 )(138.24 s)
=
= 0.667
NF
4
de tal manera que:
0.667
Eficiencia =
= 0.4
1 + 0.667
f) La eficiencia global puede ser obtenida a partir de la ecuacin (5.23),
Rm
= (1 + 0.667)4 = 7.716
(Rm RN )
192
de tal manera que:

RN
= 0.87
Rm
La eficiencia global de rompimiento en el molino es del 87 %.
5.4.2.
Homogeneizador de Alta Presin
La desintegracin celular en un homogeneizador de alta presin a una presin

fija dada puede ser descrita mediante una cintica de primer orden respecto al
nmero de pasos, de tal manera que:

dR
= k (Rm R)
dN
(5.24)
donde:
R: Concentracin de protena liberada (clulas rotas) despus de N pasos.
[M/L3 ].
Rm : Concentracin mxima de protena que puede ser liberada. [M/L3 ].
N : Nmero de pasos a travs de la vlvula del homogeneizador.
k : Constante cintica de primer orden. [1/pasos]

La ecuacin anterior puede ser integrada con las condiciones:
N =0
R=0
N =N
R=R
obtenindose la ecuacin:
ln
Rm
Rm R
(5.25)
=k N
Se ha determinado experimentalmente que la constante k tiene una dependencia con la presin dada por:
k = k P a
donde:
P : Presin de operacin. [M/t2 L].
k : Constante dimensional de rompimiento. [M a t2a L2a /pasos].
(5.26)
193
a: Parmetro constante en rangos limitados de presin. Un valor tpico para

levaduras es a = 2.9 y para E. coli a = 2.2.

Rm
= k P a N
ln
Rm R
(5.27)
El proceso de rompimiento celular descrito por la ecuacin (5.27), es independiente de la concentracin celular. Por otra parte, se ha reportado que la
actividad de enzima liberada en relacin a la protena total liberada, es independiente de la presin de operacin, de la temperatura, y de la concentracin
inicial de clulas en el caso de levaduras. Sin embargo, la fraccin de enzima
liberada respecto a la enzima total presente depende de la localizacin de la
enzima particular dentro de la estructura celular (Sauer et al., 1989).
Microfluidizador
En el caso del microfluidizador la cintica de rompimiento presenta una cierta
dependencia no lineal con el nmero de pasos expresada mediante la ecuacin:

Rm
ln
= k P a N b
(5.28)
Rm R
donde b es un exponente que vara con el tipo de clula y toma valores entre
0.28 y 1.00 (Sauer et al., 1989).
Comparacin de los mtodos mecnicos de ruptura celular
La Tabla 5.5 muestra datos de produccin de algunas enzimas utilizando
el molino de perlas y el homogeneizador Manton-Gaulin. La ruptura celular
utilizando el molino de perlas permite la obtencin de un mayor porcentaje
de enzima activa en un nmero menor de pasos en comparacin con el homogeneizador. Sin embargo, la produccin de protena en el molino es en general
menor que la obtenida en el homogeinizador.
La Tabla 5.6 muestra los datos para la liberacin de la enzima galactosidasa
de clulas de E. coli utilizando un molino de perlas tipo Dyno Mill, un homogeneizador tipo Manton-Gaulin y un Microfluidizador. Estos datos muestran
que el Microfluidizador permite manejar mayores concentraciones de biomasa y
produce un rendimiento mayor de enzima activa. Adems, el tamao medio de
los restos celulares que se producen en un paso es mayor que el encontrado en
las mismas condiciones en el homogeneizador Manton-Gaulin.
Ejemplo 5.5. Rompimiento de E. coli en un microfluidizador.
En la recuperacin de galactosidasa de E. coli, se hace pasar por un microfluidizador tipo M-110 una suspensin celular que contiene 47.6 g/L en peso
seco. La presin de operacin utilizada fue de 60 MPa.
La cantidad de protena liberada despus de cada paso se presenta en las
columnas (1) y (2) de la tabla siguiente:
194

Tabla 5.5: Comparacin de mtodos de rompimiento celular.
M icroorganism o
Levaduras
Saccharom yces
carlsbergensis
Saccharom yces
cerevisiae
C andida
boidinii
Bacterias
B . cereus
B revibacterium
am m oniagenes
E . coli
Lactobacil lus
confusus
Molino de Perlas**
Act.
Pasos
Prod.
solub.*
No.
kg/h
Enzim a
lib erada
Homogeneizador***
Act.
Pasos
Prod.
solub.*
No.
kg/h
D-glucosa
6-fosfato
deshidrogenasa
D-glucosa
6-fosfato
deshidrogenasa
Form ato
Deshidrogenasa
86 %
60
91 %
60
98 %
70
95 %
60
95 %
40
88 %
65
Leucina
deshidrogenasa
Fumarasa
84 %
16
82 %
67
85 %
12
10 %
Penicilina
acilasa
D-Lactato
deshidrogenasa
95 %
89 %
67
92 %
20
84 %
65
* Actividad solubilizada
** Netzsch LM E 20
*** Gaulin M3
c
(1)
Paso
1
2
3
5
10
Datos Ejemplo 5.5

(2)
(3)
% Protena
Liberada
ln[Rm /(Rm R)]
63.0
79.0
88.0
96.0
99.9
0.994
1.560
2.120
3.219
6.908
Se pide:
a) Estimar el valor de la constante cintica de rompimiento considerando
que para este caso a = 2.2 y b = 1.
b) Estimar el nmero de pasos para liberar el 93 % de protena en este
proceso.
Solucin:
a) De acuerdo con la ecuacin (5.28) el grado de rompimiento para este caso
puede ser expresado como:
195
Tabla 5.6: Ruptura de clulas de E. coli con diferentes mtodos.

M todo
Peso seco
de
biom asa
(g/L)
Molino de
Perlas*
2 min.
3 min.
4 min.
MantonGaulin**
1 paso
2 pasos
3 pasos
Microflui dizador**
1 paso
1 paso
1 paso
2 pasos
3 pasos
5 pasos
10 pasos
liberacin de
-Galactosidasa
Protena
Actividad
( %)
( %)
Distribucin de
tamao
media
Pico(s)
(nm )
(nm)
Viscosidad
a
10 s1
100 s1
(m Pa-s)
(mPa-s)
49.5
49.5
49.5
62
72
79
62
74
79
612
553
529
461, 806
465, 787
471, 777
63
38
19
28
19
14
48.4
48.4
48.4
66
76
82
58
75
78
501
414
217
457
180, 457
191
113
8
8
30
6
6
101.9
73.2
47.6
47.6
47.6
47.6
47.6
62
65
63
79
88
96
100
62
61
61
76
87
97
100
693
693
673
480
451
-
493, 833
489, 800
486, 800
468
445
-
51
35
28
10
6
-
26
15
10
7
6
-
*Dyno M ill KDL a diferentes tiem pos promedios de residencia

** Hom ogeneizador
Adaptada de: Agerkvist y Enfors, 1990
c
Reproducida con el permiso de John W iley and Sons. Copyright 1990.
ln
Rm
Rm R
= k P 2.2 N
de tal manera que de la pendiente de la grfica de ln[Rm /(Rm R)] contra N

es posible estimar k . Los clculos necesarios se muestran en la columna (3) de
la tabla anterior. Mediante un ajuste por mnimos cuadrados de estos datos se
obtiene:
k P 2.2 = 0.688
y para P = 60 MPa,
k = 8.4 105 MPa2.2
b) El nmero de pasos requeridos para una liberacin del 93 % de protena

es:

1
1.00 0.93
N=
= 3.88 pasos (Se necesitan 4 pasos de molienda.)
0.000084 602.2
ln
196
5.5.
Sumario
El rompimiento celular es una operacin necesaria cuando el producto de

inters se localiza al interior de la clula. Existen varios mtodos para efectuar
esta operacin. A nivel industrial se emplean principalmente los molinos de
perlas agitados y los homogeneizadores de alta presin. El diseo de los molinos
est basado en ecuaciones empricas y en experimentos piloto.
5.6. PROBLEMAS
5.6.
197
Problemas
5.1. Rompimiento celular en molino de perlas. En estudios de liberacin de protena intracelular en funcin de la velocidad del agitador empleando
un molino de perlas tipo Netzsch LME 4, con perlas de dimetro entre 0.55 y 0.85
mm , se utiliz una suspensin celular de concentracin de 50 % (peso/volumen),
un flujo de alimentacin de 50 L/h y una carga de perlas del 85 %. Bajo estas
condiciones se obtuvieron los siguientes datos:
rpm
1200
1500
1750
2000
2250
Protena
liberada
(mg/mL)
15.88
22.35
22.90
22.94
23.00
Se pide:
a) Estimar la velocidad ptima para el agitador.
b) Discutir sobre el consumo de potencia del agitador para velocidades superiores a la ptima.
Resp. a) 1500 rpm
5.2 . Comparacin de agitadores. La desintegracin celular por lotes con
dos tipos de agitadores utilizados en un molino de perlas producen los siguientes
datos:
Agitador 1
Tiempo
log[Rm /(Rm R)]
de residencia
(min)
3
0.037
5
0.090
10
0.160
15
0.225
20
0.300
25
0.365
30
0.437
Agitador 2
Tiempo
log[Rm /(Rm R)]
de residencia
(min)
3
0.060
5
0.150
10
0.225
15
0.325
20
0.425
25
0.525
30
0.650
Se pide:
a) Estimar la constante cintica k para cada tipo de agitador.
b. Calcular el tiempo para el cual se obtiene el 80 % de rompimiento con
cada tipo de agitador.
198
Resp. a) k1 = 0.015 min1 y b) t1 = 53.33 min

5.3. Nmero de pasos en un homogeneizador. Una suspensin celular
que contiene la bacteria Gram negativa Alcaligenes eutrophus, se hace pasar por
un homogeneizador APV Gaulin 15M 8BA con el propsito de estudiar la recuperacin de poli--hidroxibutirato (PHB) un termoplstico potencial (Harrinson
et al.,1990).
Cuando se opera a una presin constante de 15.2 MPa la constante k del
homogeneizador toma un valor 5.05 104 MPa2.2 .
Se pide:
a) Estimar el nmero de pasos necesarios para lograr el 63 % de rompimiento.
b) Si la presin de operacin se duplica, en cuntos pasos se obtendr el
mismo rendimiento?
Resp. a) 5 pasos.
5.4. Calentamiento en un homogeneizador. Ha sido reportado (Bjustrom, 1985) que el calor liberado por compresin adiabtica durante un proceso
de homogeneizacin puede elevar la temperatura de la corriente que entra al
homogeneizador 1.5 C por cada 6.895 MPa de presin de operacin.
Se pide: Calcular cunto representa este valor experimental de la conversin
ideal de trabajo presin-volumen.
Resp. 91 %
5.5. Obtencin de ecuaciones de grado de mezclado. Obtener las
ecuaciones (5.16) y (5.17) mediante el desarrollo descrito en el texto.
5.6. Parmetros de homogeneizador. En un rompimiento celular utilizando un homogeneizador es posible lograr 80 % de rompimiento bajo las dos
diferentes condiciones siguientes:
Condicin
1
2
Presin (MPa)
90
50
Pasos
1
3
Se pide:
a) Estimar los parmetros cinticos del homogeneizador.
b) Comparar la energa por unidad de masa de alimentacin necesaria para
cada condicin.
c) Qu condicin se recomienda para realizar la ruptura.
Resp. a) k = 3.56 104 MPa1.87 y b) 67 % de diferencia.
5.7. Eficiencia global. Obtener la ecuacin (5.23) mediante el procedimiento descrito en el texto.
5.8. Seleccin de homogeneizadores. Se desea recuperar la enzima glucosa 6 fosfato deshidrogenasa de cultivos de Leuconostoc mesenteroides por homogeneizacin a alta presin en una o ms unidades en un tiempo de 6 horas.
5.6. PROBLEMAS
199
El caldo de fermentacin a procesar son 100 m3 con una concentracin celular

de 7.0 g/L. Antes de la ruptura el caldo se concentra en una centrfuga hasta
alcanzar una concentracin de 80.0 g/L.
Las pruebas de molienda indican que el L. mesenteroides es dificil de romper
y requiere 5 pasos de molienda a 8, 000 psi para obtener un 90 % de recuperacin
de la protena intracelular. Asimismo, que la constante de ruptura es dependiente
de la presin y tiene la siguiente proporcionalidad:
k P 1.8
(5.29)
Para realizar el rompimiento se dispone de los equipos cuyas capacidades y

costos aparecen en la siguiente tabla.
Tipo
A
B
C
D
Capacidad (m3 /h)

0.45
1.14
2.27
4.54
Costo ($)
22,000
32,000
45,000
69,000
Se pide:
a) Si se desea minimizar la inversin de capital, establecer el nmero y tipo
de equipo que se requiere si se realizan 1, 2, 3, 4 o 5 pasos de rompimiento
(completar tabla siguiente).
Pasos
1
2
3
4
5
Flujo(m3 /h)
Unidades
1
Tipo
C
Costo ($)
45,000
b) Establecer la presin de operacin necesaria para alcanzar un 90 % de

recuperacin de la protena intracelular si se utilizan 1, 2, 3, 4 o 5 pasos de
ruptura.
c) En funcin de las respuestas de los incisos a) y b), seleccione el equipo a
utilizar.
5.9. Consumo de potencia. La cintica de rompimiento en un homogeneizador a escala piloto se puede representar por la ecuacin (5.27).

Rm
ln
= k N = k P a N
(5.27)
Rm R
En este sistema se han obtenido los siguientes datos experimentales del
rompimiento de levaduras de panificacin en un solo paso, sobre la influencia
de la presin de operacin en la constante cintica de rompimiento de primer
orden:
200

P kgf /cm2
200
270
330
500
k
0.020
0.045
0.070
0.290
La potencia requerida por paso en el molino, vara linealmente con la presin

de operacin con una constante de proporcionalidad de 7.63103 kWcm2 /kgf .
Se pide:
a) Obtener una expresin del porcentaje de protena liberada por kW de
potencia.
b) Calcular la presin ptima en relacin a la potencia necesaria para N = 1.
c) Repetir el clculo para N = 2.
d) Cuntos pasos son recomendables?
Resp. b) 1, 000 kgf /cm2
5.10. Molino de perlas. Se est desarrollando un proceso para producir
una protena teraputica como producto intracelular de una levadura. Los estudios de rompimiento a nivel laboratorio se realizan en un molino de perlas de
alta velocidad que consta de un agitador de 7 discos tipo espiral, operando en
forma continua.
En una prueba por lotes realizada con 100 L de caldo conteniendo 30.0 g/L
de clulas en peso seco, la cantidad de protena intracelular liberada en funcin
del tiempo se muestra en la tabla siguiente:
Tiempo
(min)
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
Protena
(g)
400
990
1,200
1,100
1,410
1,425
1,475
1,473
1,483
1,490
Se pide:
Si la operacin del molino cuyo volumen libre es de 100 L se realiza en forma
continua, alimentando el caldo a un flujo F , cal es la mxima velocidad de
dilucin (D = F/V ) que puede ser utilizada que permita obtener un 95 % de
liberacin de protena?. Se pude suponer que las levaduras contienen el 50 % en
peso seco de protenas y el molino 4 etapas.
Resp. 0.117 min1 .
5.7. BIBLIOGRAFA
5.7.
201
Bibliografa
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25, 78927898.
Parte III
Concentracin del Producto
207
Esta Parte III del libro trata en el Captulo 6 la operacin de extraccin
y en el Captulo 7 la de adsorcin. Estas operaciones que son utilizadas para
concentrar los producto diluidos de los caldos biolgicos que son obtenidos en la
etapa de recuperacin del producto. Tanto la extraccin como la adsorcin son
tcnicas de separacin no muy selectivas. Sin embargo, la adsorcin cuando se
realiza por afinidad es una tcnica de separacin altamente selectiva y necesaria
en la etapa de purificacin de productos en los cuales se requiere de una alta
pureza.
Captulo 6
Extraccin
6.1.
Introduccin
La extraccin lquido-lquido (E L-L) es una operacin que permite la recuperacin de un soluto de una solucin mediante su mezcla con un solvente.
El solvente de extraccin debe ser insoluble o soluble en grado limitado en la
solucin que se va a extraer y el soluto a extraer debe presentar una elevada
afinidad por el solvente de extraccin. La extraccin lquido-lquido se realiza
bsicamente en dos pasos (Fig. 6.1): a) mezcla ntima del solvente de extraccin
con la solucin a procesar y b) separacin de la mezcla en dos fases lquidas
inmiscibles.
Figura 6.1: Esquema de un proceso de extraccin de una etapa. Las fases se

suponen inmiscibles.
Las sustancias que componen la solucin original se distribuyen de diferente
forma entre las dos fases lquidas y se logra un cierto grado de separacin, mismo
que puede incrementarse mediante el contacto en etapas adicionales.
En las operaciones de extraccin la solucin de la que se va a extraer el
soluto se llama alimentacin y el lquido con el cual se pone en contacto la
alimentacin se denomina solvente. El producto de la operacin rico en solvente
210
CAPTULO 6. EXTRACCIN
se llama extracto y el lquido residual de donde se separ el soluto es el refinado.

En muchos procesos tradicionales de la ingeniera qumica la operacin de
separacin ms usada es la destilacin debido a su simplicidad. Sin embargo, en
muchas bioseparaciones la destilacin no puede ser utilizada por la sensibilidad
de los bioproductos a la temperatura, su baja volatilidad y las concentraciones
tan bajas que se manejan.
La extraccin es una tcnica de separacin que posee algunas ventajas que la
hacen atractiva para los procesos de bioseparacin. Entre ellas se encuentra la
vasta experiencia y desarrollo tecnolgico alcanzado en muchos aos, la relativa
facilidad con que se pueden escalar los procesos extractivos y la posibilidad de
operar la extraccin en forma continua.
Existen dos tipos principales de extraccin L-L: a) la extraccin agua-solvente
orgnico que se emplea ampliamente en la industria de los antibiticos y b) la
extraccin que utiliza dos fases acuosas inmiscibles que se utiliza para concentrar protenas y separar componentes biolgicos. La extraccin tambin puede
ser usada para remover impurezas de una corriente.
En este captulo, en la seccin 6.2 se abordan los aspectos fundamentales de
la extraccin. Los equipos ms utilizados para realizar operaciones de extraccin
se presentan en la seccin 6.3, mientras que los aspectos bsicos del diseo de
extractores por lotes y continuos se revisan en la seccin 6.4.
6.2.
Fundamentos de la Extraccin
La operacin de extraccin implica el uso de tres tipos de sustancias cuando

menos: el soluto de inters y los componentes puros de cada una de las dos fases
lquidas. La interaccin de estos componentes y/o la presencia de ms solutos o
solventes genera cierto grado de complejidad de la operacin.
El establecimiento de los aspectos termodinmicos bsicos de la extraccin
permiten visualizar algunos enfoques que contribuyen a realizar esta operacin
en forma ms racional, particularmente contribuyen a una seleccin adecuada
del solvente de extraccin y de las condiciones de operacin. Los principios
bsicos de la extraccin convencional lquido-lquido pueden ser extendidos a
los sistemas de extraccin de dos fases acuosas inmiscibles.
Con base a lo anterior esta seccin se centra en cuatro aspectos:
Tipos de sistemas de extraccin lquido-lquido.
Qumica de la extraccin.
Seleccin del solvente.
Sistemas de dos fases acuosas inmiscibles.
6.2.1.
Tipos de Sistemas de Extraccin Lquido-Lquido
Los sistemas de extraccin existentes presentan diferente grado de complejidad debido principalmente a lo siguiente:
6.2. FUNDAMENTOS DE LA EXTRACCIN
211
a) Las fases pueden ser completamente o parcialmente miscibles. En este

ltimo caso, las relaciones de equilibrio y los balances de masa necesarios para
el diseo de los equipos requieren clculos adicionales.
b) La presencia de otros solutos diferentes al soluto de inters.
c) La naturaleza de las fases. En la extraccin convencional lquido-lquido
generalmente una fase es acuosa y la otra la constituye un solvente orgnico.
Otros sistemas emplean dos fases acuosas inmiscibles.
Recientemente, se han revisado estas tcnicas de extraccin L-L de biomolculas, conjuntamente con otras ms novedosas como los sistemas miscelares
(Mazzola et al., 2008).
En este captulo se analizan bsicamente los aspectos de la extraccin en
sistemas de un soluto diluido en dos fases inmiscibles y la extraccin en dos
fases acuosas.
6.2.2.
Qumica de la Extraccin Lquido-Lquido
La extraccin de un soluto desde una fase acuosa polar a una fase orgnica
no polar, involucra con frecuencia interacciones hidrofbicas. Las interacciones
hidrofbicas son responsables de un gran nmero de fenmenos fsicos en soluciones acuosas. Aun en ausencia de interacciones especficas, la transferencia de
un soluto desde el agua hasta el solvente, es favorecida debido al incremento en
la entropia asociada con el desorden del agua.
Cuando un soluto es repartido entre las fases del extracto y el refinado, E
y R, formando soluciones diluidas, al alcanzarse el equilibrio los potenciales
qumicos del soluto en ambas fases son iguales, es decir:
(E) = (R)
(6.1)
El potencial qumico de las fases est dado por:

0 (E) + RT ln AE = 0 (R) + RT ln AR
(6.2)
donde AE y AR son las actividades del soluto en las fases E y R respectivamente,

R es la constante de los gases ideales y T es la temperatura.
En el caso de soluciones diluidas ideales la concentracin es una medida
apropiada de la actividad, de tal manera que la ecuacin anterior se puede
escribir como:
0 (E) + RT ln x = 0 (R) + RT ln y
(6.3)
En extraccin se define el coeficiente de particin como la relacin de las

concentraciones de soluto en el equilibrio, es decir:
Kp =
x
y
donde:
Kp : Coeficiente de particin.
x: Fraccin mol de soluto en la fase superior E (fase rica en solvente).
(6.4)
212
y: Fraccin mol de soluto en la fase inferior R (fase correspondiente a la

alimentacin).
La ecuacin (6.4) es conocida como Ley de la Distribucin de Nerst y establece que en el equilibrio existe una relacin constante de las actividades del
soluto en las dos fases para una temperatura dada.
La ecuacin (6.3) puede escribirse como:

0
(E) 0 (R)
(6.5)
ln Kp =
RT
o bien como:
G0 = RT ln Kp
(6.6)
donde G0 es el cambio en energa libre en el estado estndar. El logartmo

natural del coeficiente de particin Kp es proporcional a la diferencia de los
potenciales qumicos en los estados estndar de las fases puras.
En la Tabla 6.1 se muestran los valores del coeficiente de particin Kp para
algunos solutos de inters en sistemas especficos.
Tabla 6.1: Coeficientes de particin para algunos solutos de inters.
Com puesto Tip o
Soluto
Solvente
Aminocidos
Glicina
Lisina
Ac. Glutm ico
n-butanol/agua
n-butanol/agua
n-butanol/agua
Antibiticos
Celesticetina
Eritromicina
n-butanol/agua
Amil acetato/agua
Novobiocina
Butil acetato/agua
Penicilina F
Amil acetato/agua
Penicilina K
Amil acetato/agua
Glucosa
isomerasa
Catalasa
PEG 1550/fosfato
de p otasio
PEG/dextrano crudo
Protenas
Kp
0.01
0.20
0.07
110.00
120.00
0.04
100.00
0.01
32.00
0.06
12.00
0.10
Observaciones.
25 C
a
a
a
a
a
a
pH
pH
pH
pH
pH
pH
7.0
10.5
4.0
6.0
4.0
6.0
3.00
3.00
Adaptada de: Belter et al., 1988.

c
Reproducida con el p erm iso de John W iley and Sons. Copyright 1988.
Debido a la importancia del equilibrio termodinmico es conveniente puntualizar algunas de las propiedades del coeficiente de particin en la extraccin:
a) El coeficiente se define slo en un punto de equilibrio. No se aplica a todas
las concentraciones posibles de encontrar en un sistema. En este sentido
no debe confundirse con la constante de equilibrio del sistema.
213
b) El coeficiente de particin vara con el nivel de concentracin de equilibrio.

c) Para sistemas diluidos el coeficiente de particin puede considerarse que es
constante e igual a la constante de equilibrio.
d) La constante Kp a una temperatura dada, es independiente de la concentracin o presin global del sistema.
e) La magnitud de la constante Kp , determina la extensin a la cual proceder
una extraccin particular bajo condiciones establecidas. Un valor alto de
Kp indica que en el equilibrio la concentracin de soluto en el extracto es
mayor que en el refinado.
f) Los valores de Kp deben ser determinados experimentalmente.
Cuando se grfica el potencial qumico contra la concentracin de soluto
en la fase superior x (Fig. 6.2), en condiciones tales que una pequea cantidad
de fase superior E est en equilibrio con un exceso de fase inferior R, se tiene lo
siguiente: debido a que R est presente en exceso, el potencial qumico (R) es
constante, mientras que (E) vara con la concentracin x. En la interseccin
de (E) y (R) se puede localizar la concentracin x, en equilibrio, de soluto
presente en E.
Figura 6.2: Comportamiento del potencial qumico en funcin de la concentracin x de soluto.

Cuando la concentracin x aumenta, (E) aumenta y se aproxima a 0 (E).
Entonces se puede establecer que los cambios en el tipo de solvente cambian la
concentracin x en equilibrio. Por ejemplo, para el solvente 1 la concentracin
de equilibrio es x1 y para el solvente 2 la concentracin de equilibrio es x2 ,
entonces se puede concluir que el solvente 2 favorece esta extraccin.
No slo los cambios en el tipo de solvente pueden mejorar la extraccin, sino
tambin los cambios en el soluto que afecten su potencial qumico 0 (E).
214
Cambios en el solvente
Lo primero que puede hacerse para mejorar un sistema de extraccin es
cambiar el solvente de extraccin, esto es, elegir uno cuyo potencial qumico en el
estado estndar est ms prximo a 0 (R). Desafortunadamente esto no es fcil
de lograr debido a que la teora termodinmica no puede predecir con seguridad
los potenciales qumicos para determinar el mejor solvente. Sin embargo, es
posible utilizar enfoques aproximados para el clculo de coeficientes de particin,
basados en la estimacin de 0 (E) utilizando parmetros de solubilidad. De
acuerdo con este enfoque, el coeficiente de particin Kp dado por la ecuacin
(6.4) puede ser expresado como:
ln Kp =
VR ( A R )2 VE ( A E )2
RT VA
(6.7)
donde V son los volmenes molares parciales del solvente pesado R, el solvente
ligero E y el soluto A, respectivamente. son los parmetros de solubilidad
correspondientes.
El grado de disolucin de slidos en lquidos vara considerablemente con
la naturaleza del slido y del lquido, la temperatura y en grado menor con
la presin. En todos los casos el lmite de solubilidad es la saturacin. En un
sistema de un solvente y un soluto particular, la concentracin de saturacin a
una temperatura y presin dadas es constante y no depende de la manera en
que se prepara la solucin.
La influencia de la temperatura sobre la solubilidad de un soluto en un
solvente particular es generalmente muy pronunciada, debido a que la mayora de
las sustancias absorben calor al disolverse y son ms solubles a una temperatura
elevada.
Para estimar el parmetro de solubilidad del soluto de inters A , es necesario realizar dos extracciones con diferente solvente cada una de ellas y cuyas
solubilidades sean conocidas. Una vez determinado A se pueden estimar los
coeficientes de particin para nuevos solventes a partir de los valores i conocidos. Estas son slo estimaciones que pueden servir de gua para nuevos experimentos. En la Tabla 6.2 se muestran los parmetros de solubilidad para algunos
solventes.
Cambios en el soluto
Cuando no es factible cambiar el solvente para mejorar una extraccin ya
sea por razones econmicas o tcnicas, entonces es necesario ver la posibilidad
de realizar cambios en el soluto. Dado que el soluto es el producto que se desea obtener mediante la extraccin, los posibles cambios deben ser de carcter
reversible.
Cambios en el soluto por pares de iones Los cambios en el soluto dependen del comportamiento inico que ste pueda tener. Si el soluto tiene comportamiento inico y es posible encontrar un material que permita suprimir
215
Tabla 6.2: Parmetros de solubilidad para algunos solventes.

Solvente
Amilacetato
Disulfuro de carbono
Tetracloruro de carbono
Cloroformo
Ciclohexano
Tolueno
Agua
(cal1/2 cm3/2 )
8.0
10.0
8.6
9.2
8.2
8.9
9.4
esta ionicidad sin alterar el soluto, entonces la unin del soluto a este material
permitir aumentar la solubilidad del soluto en el solvente de extraccin.
Los cambios a solutos empleando contraiones se basan en el hecho de que un
soluto que es inico en el agua, formar un par-in sin carga neta en un solvente
orgnico.
Esta formacin de par-in se puede ejemplificar cuando en una solucin
acuosa de cloruro de tetrabutilamonio se extrae el catin utilizando cloroformo:

N(C4 H9 )+
en
cloroformo
4

Kp =
= 1.3
(6.8)
N(C4 H9 )+
4 en agua
Si se agrega acetato de sodio a la solucin acuosa de cloruro de tetrabutilamonio y se realiza nuevamente la extraccin, se encuentra:

N(C4 H9 )+
4 en cloroformo

Kp =
= 132
(6.9)
N(C4 H9 )+
en
agua
4
Puede observarse que en el primer caso se extrae una solucin diluida de
par-in de N(C4 H9 )+
4 Cl y que en el segundo caso, se obtiene una solucin ms
concentrada de par-in de CH3 COO N(C4 H9 )+
4.
El empleo de pares inicos, requiere de la seleccin de contraiones solubles
en la fase no polar. Este tipo de sustancias se conoce como sales grasas y se
listan en la Tabla 6.3
Cambios en el soluto por pH Algunos productos que son de inters biotecnolgico como las protenas o los aminocidos, son sensibles a cambios en el pH
por lo que el conocimiento y comprensin de las propiedades cido-base de los
aminocidos es sumamente importante en las bioseparaciones de protenas. Muchos de los solutos que se desean aislar son cidos o bases dbiles, su extraccin
puede tambin ser fuertemente afectada por cambios en el pH.
216
Tabla 6.3: Contraiones tpicos usados en extraccin por pares de iones.
Ion
Estructura Qumica
Observaciones
Acetato
CH 3 COO
Butirato
CH 3 (CH 2 ) 2 COO
Tetrabutilamonio
Hexadeciltributilam onio
Perfluoroctanato
(C 4 H 9 ) 4 N +
Sim ple, no es muy

soluble en solventes orgnicos.
M s soluble en
solventes orgnicos
que el acetato.
Slido
Dodecanato
CH 3 (CH 2 ) 10 COO
Linolato
CH 3 (CH 2 ) 4 CH=CHCH 2 CH=(CH 2 ) 7 COO
Tetrafenilboruro
B(C 6 H 5 )
4
CH 3 (CH 2 ) 15 (C 4 H 9 ) 3 N +
CF 3 (CF 2 ) 6 COO
Puede formar
micelas.
Puede p erm anecer
inico en solventes
orgnicos.
Puede formar
micelas.
Puede formar
cristales lquidos.
Puede degradarse
en varios
solventes.
Adaptada de: Belter et al., 1988.
c
Un cido dbil puede ionizarse parcialmente en agua y no ionizarse significativamente en un solvente orgnico.
El cido dbil RCOOH, en solucin acuosa, se disocia de la siguiente manera:
RCOOH RCOO + H+
as que su constante de disociacin Ka est dada por:

RCOO R H+
Ka =
[RCOOH]R
(6.10)
Cuando este cido dbil se distribuye entre dos fases, una orgnica E y una
acuosa R, el coeficiente de particin aparente agrupa las concentraciones de
la forma ionizada y no ionizada del cido en la fase acuosa. En este caso el
coeficiente de particin se expresa como:
Kp =
[RCOOH]E
[RCOOH]R + [RCOO ]R
(6.11)
Kp =
Ki
Ka
1 +
[H+ ]R
217
(6.12)
donde Ki es el coeficiente de particin intrnseco de las especies no ionizadas

definido por:
Ki =
[RCOOH]E
[RCOOH]R
(6.13)
se sabe que pKa = log Ka , entonces si se combinan las ecuaciones (6.12) y

(6.13) se obtiene:

Ki
(6.14)
log10
1 = pH pKa
Kp
En la Tabla 6.4 se muestran los valores de pKa para algunos solutos de
inters biolgico.
El desarrollo anterior para el caso de una base dbil es anlogo y conduce a:

Ki
1 = pKb pH
(6.15)
log10
Kp
Las ecuaciones (6.14) y (6.15) muestran que el coeficiente de particin puede
ser alterado cambiando el pH de la solucin acuosa. Los cambios en el coeficiente
de particin pueden ser usados tambin para seleccionar el pH al que debe
extraerse preferentemente un soluto determinado. Para dos soluto A y B la
selectividad de la separacin, , es un indicador del grado de pureza que se
puede lograr en un sistema de extraccin determinado. La selectividad se puede
expresar como:
=
Ki (A)
Ki (B)
Kp (A)
Kp (B)
1 +
1 +
(6.16)
Ka (B)
[H+ ]
Ka (A)
[H+ ]
Ejemplo 6.1. Disociacin de cido propinico.

El pH de una solucin 0.1 M de cido propinico es de 2.935.
Se pide calcular:
a) La constante de disociacin aparente Ka .
b) El pKa del cido.
c) El grado de disociacin del cido.
Solucin:
218
Tabla 6.4: Valores de pKa para algunos solutos biolgicos.
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
Bases y cidos Simples

Compuesto
pKa
Acido actico
4.76
H3 PO4
2.14
CH3 NH+
10.6
3
Aminocidos
Compuesto
pK1
pK2
COOH NH+
3
Leucina
2.36
9.6
Histidina
1.82
9.17
Lisina
2.18
8.95
Pptidos
Compuesto
pK1
pK2
COOH NH+
3
Gly-Gly
3.06
8.13
Ala
2.34
9.69
Gly-Asp
2.81
8.60
Ala-Ala-Lys-Ala
3.58
8.01
Antibiticos
Compuesto
pKa s
Cefalosporina C
3.9
5.3
Lincomicina
7.6
(base libre)
Penicilamina
1.8
(carboxil)
pK3
Grupo R
6.0
10.53
pK3
Grupo R
4.45
10.58
10.5
Adaptada de Belter, P.A. et al, 1988.

c
a) La constante de disociacin de un cido est dada por la ecuacin (6.10),

en este caso se tiene que:
Ka =
[H + ] [CH3 CH2 COO ]

[CH3 CH2 COOH]
dado que la concentracin de la solucin es de 0.1 M ,
[CH3 CH2 COOH] + [H+ ] = 0.1 M

y a un pH de 2.935, la concentracin de H + es
[H + ] =
1
= 1.16 103 M
antilog(2.935)
219
de tal manera que:

[CH3 CH2 COOH] = 9.88 102 M
sustituyendo en (6.10) estos resultados se obtiene:

Ka =
(1.16 103 M) (1.16 103 M)

= 1.36 105 M
9.88 102 M
b) De acuerdo con la definicin de pKa ,

1
1
pKa = log
= log
= 4.87
Ka
1.36 105
c) El grado de disociacin es igual a la concentracin de cido disociado entre
la concentracin inicial de cido, de tal manera que:
GD =
1.16 103 M
100 = 1.16 %
0.1 M
Ejemplo 6.2. Separacin de dos tipos de penicilina.

En el sistema agua-amilacetato la penicilina K y la penicilina F tienen valores
de Ki de 215 y 131, respectivamente. Sus pKa s son de 2.77 y 3.51.
Se pide: Si se desea recuperar penicilina F, determinar como se alcanza
mayor pureza del producto, efectuando la extraccin a pH= 3.0 o a pH=4.0.
Solucin:
La selectividad de la extraccin est dada por la ecuacin (6.16). Para aplicar
esta ecuacin es necesario calcular primero Kp mediante la ecuacin (6.14), para
cada penicilina a cada uno de los pHs de inters.
Para la penicilina K a un pH de 3.0 se tiene:

Ki
log10
1 = pH pKa = 3.0 2.77 = 0.23
Kp (K)
por lo tanto:
Kp (K) = 79.68
Para la penicilina F a un pH de 3.0 se tiene:

Ki
log10
1 = pH pKa = 3.0 3.51 = 0.51
Kp (F )
por lo tanto:
Kp (F ) = 100.0
se tiene entonces que:
220
1 =
Kp (F )
100.0
=
= 1.26
Kp (K)
79.68
a pH = 3
El clculo de Kp para las dos penicilinas a pH=4.0 se realiza de manera

similar, encontrndose para este caso que:
2 = 2.67
Los resultados obtenidos para las dos penicilinas con los pHs respectivos se
muestran en la siguiente tabla:
pH
Kp (K)
Kp (F )
3.0
4.0
79.68
12.00
100.00
32.00
Kp (F )
Kp (K)
1.3
2.7
Estos resultados indican que si la extraccin se realiza a un pH=4 se obtiene

la penicilina F en forma ms pura, aun cuando la extraccin es ms difcil dado
que el Kp (F) = 32 es menor que el correspondiente al pH=3.0.
6.2.3.
Seleccin del Solvente
En la operacin de extraccin generalmente es posible seleccionar el tipo de

solvente que se va emplear para realizar la extraccin (Mattiasson y Ling, 1989).
Para tomar esta decisin es conveniente considerar las siguientes caractersticas
del solvente (Tabla 6.5):
Tabla 6.5: Criterios utilizados en la seleccin de solventes.
Selectividad.
Coeficiente de particin adecuado para el producto.
Grado de solubilidad.
Facilidad de recuperacin.
Densidad.
Tensin superficial.
Estabilidad para el soluto.
Inocuidad.
a) Selectividad. En el caso de que se desee adems de concentrar lograr

un cierto grado de purificacin, el solvente debe ser selectivo para el soluto de
inters.
b) Coeficiente de particin. Entre mayor sea el coeficiente de particin, menor
es la cantidad necesaria de solvente.
221
c) Grado de solubilidad del solvente. Entre ms insoluble sea el solvente en

la alimentacin, la extraccin se realizar ms fcilmente.
d) Facilidad de recuperacin. Por cuestiones econmicas es necesario que el
solvente pueda ser recuperado para su reutilizacin.
e) Densidad. La separacin de las fases una vez que se efecta la extraccin,
es ms rpida entre mayor sea la diferencia de densidad entre las fases.
f) Tensin superficial. Un solvente con una tensin superficial alta, facilita
la coalescencia de las emulsiones en la separacin de las fases.
g) Estabilidad para el soluto. El solvente no debe alterar al producto.
h) Otras. El solvente debe ser inocuo, esterilizable, no inflamable, barato y
disponible en las cantidades deseadas.
6.2.4.
Extraccin en Dos Fases Acuosas Inmiscibles
Cuando se opera con sistemas biolgicos hay un nmero limitado de solventes

que pueden ser usados en los procesos de extraccin, esto es debido a que algunas
de las biomolculas de inters como las protenas, son desnaturalizadas por los
solventes orgnicos (Shibukawa et al., 2008; Mattiasson y Rajni, 1991). Una
tcnica de bioseparacin que preserva la actividad de las biomolculas, en este
caso de las protenas, es la extraccin en sistemas de dos fases acuosas inmiscibles
(SDFA).
En la Tabla 6.6 se listan algunos sistemas que pueden ser usados para formar
sistemas de dos fases acuosas. En general los sistemas de dos fases acuosas
se pueden clasificar en dos tipos: a) sistemas polmero-polmero y b) sistemas
polmero-sal.
Tabla 6.6: Sistemas de dos fases acuosas.
Componente 1
Componente 2
Referencia
PEG
PEG
PEG
PEG
PEG
PEG
Ficoll
Dextrano
Citrato
Hidroxipropil de almidn
Xantana
Fosfato de potasio
Sulfato de potasio
Dextrano
Albertsson (1986)
Porto (2008)
Tjerneld (1986)
Chethana (2007)
Albertsson (1986)
Albertsson (1986)
Albertsson (1986)
Adaptada: Albertsson et al., 1990.

c
Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. Copyright 1990.
Los sistemas de dos fases acuosas inmiscibles polmero-polmero se forman

cuando dos polmeros como el polietilenglicol (PEG) y el dextrano se mezclan
en presencia de agua. Debido al alto costo del dextrano se considera que estos sistemas son poco viables econmicamente, por lo que se han considerado
222
sistemas alternativos como los polmero-sal (Naganagouda y Mulimani, 2008).

Estos se forman por la mezcla en agua de un polmero y una sal como el fosfato
de potasio. El hecho comn de estos sistemas es que ambas fases son acuosas,
el contenido de agua de cada fase vara entre 85 y 99 %.
Los sistemas de dos fases se caracterizan por presentar una baja tensin
interfacial en el rango de 0.0001 a 0.1 dina/cm. El tiempo de sedimentacin
(separacin de las fases) slo por accin de la gravedad vara entre 5 min a varias
horas debido a la pequea diferencia de densidades y a la relativamente alta
viscosidad entre las fases. El tiempo de separacin puede reducirse utilizando
centrifugacin a baja velocidad (Albertsson et al., 1990).
El hecho de que ambas fases sean acuosas y tengan una tensin interfacial tan
pequea, proporciona un medio ambiente tal que permite que las biomolculas
y partculas celulares puedan repartirse entre las fases conservando su actividad
(Diamond y Hsu, 1990). Las clulas y los restos celulares generalmente se parten
hacia la fase inferior o hacia la interfase.
La extraccin en SDFA es un proceso sumamente atractivo para la separacin
de enzimas y protenas de inters biotecnolgico debido principalmente a que:
a) El escalamiento es sencillo y puede realizarse a partir de datos de laboratorio en forma confiable, dado que el coeficiente de particin no vara con la
escala.
b) La transferencia de masa es alta y el equilibrio se alcanza con poca energa
de mezclado.
c) Es una operacin que se puede realizar en forma continua.
d) Los polmeros le confieren estabilidad a las protenas.
e) La separacin puede ser selectiva y rpida.
f) La separacin puede efectuarse a temperatura ambiente debido a su rapidez.
g) Puede resultar ms econmica que otras operaciones.
Diagramas de fases
Los sistemas de dos fases acuosas pueden ser caracterizados mediante diagramas de fases nicos donde se grafican la composicin de las fases en el equilibrio.
Comnmente, los ejes se especifican en unidades de concentracin del polmero o
la sal en porcentaje en peso de mezcla. En la ordenada se grafica la concentracin
del polmero 1 (que origina la fase superior) y en la abscisa la concentracin
del polmero 2 o la sal (que origina la fase inferior).
La Figura 6.3 muestra un diagrama de fases para el sistema PEG 3400/Dextrano T-5000/Agua. La curva binodal caracterstica de estos sistemas pasa por
los puntos CPD.
Caractersticas del diagrama de fases Es importante distinguir algunas
caractersticas del diagrama de fases de los SDFA, como las siguientes:
a) La curva bimodal CPD separa la regin de una fase localizada abajo de la
curva, de la regin de dos fases situada arriba de la curva. El punto A se sita
223
Figura 6.3: Curva binodal para un sistema de dos fases acuosas inmiscibles PEG
3400/Dextrano T-5000/Agua. Adaptada de: Huddleston et al., 1991. Reproducida
c
con el permiso de Elsevier Science Inc. Copyright 1991.
en una regin a la izquierda de la curva binodal donde el sistema consta de una

sola fase.
b) Las lneas de unin como la CBD conectan las composiciones de las fases
C y D en equilibrio.
c) El punto P representa el punto crtico. Es el punto donde tericamente la
composicin y los volmenes de ambas fases son iguales.
d) El punto B se localiza en una regin donde coexisten dos fases, una rica
en PEG y otra rica en dextrano. Este punto representa la fraccin peso de cada
uno de los componentes de una mezcla formada por las fases de composicin C
y D.
e) Si se considera la lnea de unin que pasa por los puntos Q1 , Q2 y Q3 ,
todos los puntos representan la composicin total de tres sistemas con diferente
proporcin de volumen.
Los SDFA que sean preparados con fracciones peso situadas sobre las lneas
de unin, producirn sistemas de igual composicin de las fases pero con diferentes volmenes de cada fase.
Proporcin de los volmenes de las fases La proporcin de volmenes de
las fases conjuntamente con el coeficiente de particin constituyen un factor de
diseo fundamental de la extraccin. La proporcin de volmenes de las fases
puede obtenerse grficamente utilizando balances de masa. Considrese la lnea
CBD de la Figura 6.3 y sea:
M : Masa total del sistema de dos fases. [M].
ME : Masa de la fase rica en PEG. [M ].
224
MR : Masa de la fase rica en dextrano. [M ].

qE : Fraccin masa de PEG en fase superior (rica de PEG). [adim.].
qR : Fraccin masa de PEG en fase inferior (rica de dextrano). [adim.].
qM : Fraccin masa de PEG en la mezcla de las fases [adim.].
entonces el balance de masa total del sistema es:
M = ME + MR
(6.17)
el balance de PEG es:

MqM = ME qE + MR qR
combinando las dos ecuaciones anteriores se obtiene:
ME
qM qR
=
MR
qE qM
(6.18)
La diferencia de fracciones masa de la ecuacin anterior puede encontrarse

grficamente en la Figura 6.3. Asimismo, por tringulos semejantes se puede
demostrar que:
ME
BD
=
MR
BC
(6.19)
donde BD y BC son las longitudes de los segmentos entre los puntos respectivos.
Cuando la densidad de las fases es muy prxima, la relacin de volmenes
de las fases est dada por:
BD
E
(6.20)
=
R
BC
donde E y R son los volmenes de la fase superior e inferior, respectivamente.
Longitud de las lneas de unin La longitud de las lneas de unin es un
factor de diseo y optimizacin importante en los SDFA. Si consideramos la lnea
de unin CBD, su longitud puede calcularse mediante la siguiente expresin:
"
LLU = (qE qR )2 + (pE pR )2
(6.21)
donde:
pE : Fraccin masa de dextrano en fase superior (rica de PEG). [adim.].
pR : Fraccin masa de dextrano en fase inferior (rica de dextrano). [adim.].
Comportamiento de las fases
El comportamiento de un sistema (polmero A)-(polmero B)-(agua), depende de las interacciones entre las moleculas presentes. Estas interacciones
pueden ser mediante puentes de hidrgeno, fuerzas de van der Waals, inicas,
interacciones dipolo-dipolo e interacciones hidrofbicas. En un sistema pueden
225
presentarse simultneamente varios tipos de estas interacciones dependiendo del

tipo de polmeros que formen el sistema.
Los polmeros que se utilizan para los SDFA se caracterizan por su capacidad
para formar puentes de hidrgeno con el agua, de tal manera que las interacciones (polmero A)-(polmero B) estn en competencia con las interacciones
(polmero A)-(agua), (polmero B)-(agua). Si las interacciones polmero-agua
son ms fuertes que las interacciones polmero-polmero, entonces estas ltimas son menos frecuentes. En este caso se forman regiones en cada uno de los
polmeros que estn estadsticamente excluidas de interaccionar.
Este efecto de regiones excluidas de los polmeros produce la separacin de
fases en la mayora de los sistemas de dos fases acuosas polmero-polmero. Los
polmeros que se repelen debido a este efecto se denominan polmeros incompatibles. En el caso de los sistemas polmero-sal-agua la segregacin de las fases
se puede deber al grado de hidratacin del grupo ter del PEG.
Un estado de equilibrio se caracteriza por presentar energa de Gibbs mnima
a una temperatura, presin y composicin dadas. En un sistema de dos fases
acuosas la separacin de fases ocurre en aquellas mezclas cuya energa de Gibbs
es menor cuando el sistema existe como dos fases que cuando permanece como
una. El criterio de equilibrio puede ser expresado tambin en trminos de los
potenciales qumicos i de los componentes como:
i = i
i = 1, 2, ...N
(6.22)
donde la prima () y la doble prima ("), representan la fase superior y la fase

inferior respectivamente, y N es el nmero total de componentes.
Existen varios modelos que tratan de explicar el comportamiento terico de
la particin o distribucin de las protenas en los sistemas de dos fases acuosas
a partir de considerar una serie de factores que afectan la particin de este tipo
de soluto en el equilibrio.
Factores que afectan al coeficiente de particin
Los estudios empricos realizados en sistemas de dos fases acuosas han mostrado que la particin de protenas es una funcin compleja que depende de
factores tales como: hidrofobicidad, tamao molecular, conformacin molecular,
bioespecificidad de la protena, electroqumica, pH, concentracin del buffer,
fuerza inica, temperatura y concentracin de la protena (Baskir et al., 1989).
En general la particin de protenas en sistemas de dos fases est definida
por el coeficiente de particin
Kp =
[P ]1
[P ]2
(6.23)
donde [P ]1 y [P ]2 son las concentraciones de soluto en las fases 1 y 2, respectivamente. Esta ecuacin es equivalente a la ecuacin (6.4).
Debido a la dependencia del coeficiente de particin Kp de los factores arriba
mencionados, ste se puede expresar como el producto de varias contribuciones:
226
Kp = K 0 Kelq Khf Kbioe Ktam Kconf
(6.24)
donde los subndices: elq, hf, bioe, tam y conf, indican las contribuciones sobre el coeficiente de particin de las propiedades electroqumicas, hidrofbicas,
de bioespecificidad, tamao y conformacin, respectivamente, del soluto y los
polmeros que forman las fases. K 0 incluye otros factores tales como la solvatacin del soluto en las fases. En general, es ms ilustrativo expresar el coeficiente
de particin en la forma logartmica de la ecuacin (6.24) misma que se puede
escribir como:
ln Kp = ln K 0 + ln Kelq + ln Khf + ln Kbioe + ln Ktam + ln Kconf
(6.25)
A continuacin se describe el efecto especfico de algunos de estos parmetros

sobre el fenmeno de particin en dos fases acuosas (Fig. 6.4).
Figura 6.4: Factores que afectan al coeficiente de particin. Adaptada de: Hudc
dleston et al., 1991. Reproducida con el p erm iso de Elsevier Science Inc. Copyright 1991.
Tamao de las biomolculas Las molculas pequeas como los aminocidos

se distribuyen uniformemente entre las fases. Cuando se trata de partculas
ms grandes la particin no es tan uniforme, de tal manera que las protenas
grandes tienden a repartirse menos uniformemente que las protenas pequeas
(Fig. 6.5a). Las molculas de peso molecular muy grande como el DNA y los
virus se reparten casi por completo en una sola fase. Sin embargo, las partculas
extremadamente grandes como las clulas, se distribuyen entre la interfase y
una de las fases o pueden agruparse completamente en la interfase (Baskir et
al., 1989).
227
Figura 6.5: Efecto del peso molecular de los componentes sobre el coeficiente
de particin. a) Tamao del soluto en un sistema PEG 6000-dextrano 500 y b)
Tamao de los polmeros sobre la particin de una enzima. Sistema 12 % PEG y
1 % Dextrano. Fuente: Baskir, 1989. Reproducida con el p erm iso de John Wiley and Sons.
c
Copyright 1989.
Peso molecular de los polmeros El peso molecular de los polmeros utilizados en los sistemas de dos fases, tiene influencia sobre el reparto del biomaterial debido a que altera la composicin de las fases y cambia el nmero de
interacciones protena-polmero (Fig. 6.5b).
El coeficiente de particin de una protena en un sistema dextrano/polietilenglicol se incrementar si el peso molecular del polietilenglicol se reduce o
el peso molecular del dextrano se incrementa. Inversamente, la particin de la
protena decrecer si el peso molecular del polietilenglicol se incrementa o el
peso molecular del dextrano se reduce.
Las protenas con peso molecular elevado son ms influenciadas por cambios
en el peso molecular de los polmeros que las de peso molecular bajo. Consecuentemente, pueden utilizarse polmeros de diferente peso molecular para
optimizar la separacin de protenas de diferente tamao (Albertsson et al.,
1990).
Carga de la protena Muchas protenas y enzimas contienen un gran nmero
de grupos cargados o que pueden cargarse en solucin variando el pH. Estos
grupos generalmente tienen diferentes valores de pK. Cuando el pH de la solucin
cambia desde valores cidos a bsicos, la protena incrementa su carga negativa
y/o reduce su carga positiva. Cuando la protena est en su pH isoelctrico, la
suma de todas las cargas es cero. En todos los dems pHs la protena tiene una
carga neta.
Con frecuencia se observa que cuando se agregan sales a un sistema de dos
fases en concentraciones entre 100 y 200 mM, se crea una diferencia de potencial
228
entre las fases. sta resulta de las preferencias de los diferentes iones de la sal
por las diferentes fases lo que puede afectar fuertemente la particin de las
biomolculas cargadas .
El pH de la solucin Adems de los efectos del pH mencionados en el prrafo
anterior, los cambios en el pH pueden inducir tambin cambios conformacionales
en la estructura de la protena que alteran su particin.
Concentracin de la protena Si la concentracin de la protena permanece
baja (un orden de magnitud ms baja que la concentracin del polmero), sta no afecta significativamente al coeficiente de particin. Sin embargo, a altas
concentraciones de protena es posible que la concentracin afecte el coeficiente
de particin ya que pueden alterarse significativamente las propiedades del sistema. Las protenas pueden inclusive formar fases separadas si su concentracin
es suficientemente alta.
Modelos para predecir el coeficiente de particin en sistemas de dos
fases
Existen varios desarrollos para obtener modelos que permitan predecir el
coeficiente de particin en un sistema dado (Baskir et al.,1989; Clark, 1989;
Jiang y Prausnitz, 2000). Los modelos reportados han sido obtenidos utilizando
bsicamente tres enfoques termodinmicos: integral, virial y de red (Shao et al.,
2009). A manera de ejemplo se presentan dos modelos a continuacin.
Modelo emprico de Brnsted Uno de los modelos ms sencillos para describir la particin de biomolculas en sistemas de dos fases acuosas fue propuesto por Brnsted (Baskir et al.,1989). Este modelo describe en forma aproximada el efecto del tamao de la partcula (o biomolcula) sobre el coeficiente
de particin:

M
(6.26)
Kp = exp
T
donde:
M : Peso molecular de la partcula que se particiona. [g/mol].
: Constante de Boltzmann. (1.3806568 1023 J K1 ).
T : Temperatura absoluta. ( K).
: Parmetro agrupado sobre la influencia de las fases y la partcula.
La ecuacin (6.26) muestra la influencia del tamao del soluto y la temperatura sobre el coeficiente de particin, la influencia de los factores restantes los
agrupa en el parmetro .
Modelo termodinmico molecular El modelo termodinmico molecular

(virial) est basado en la teora de soluciones de McMillan-Mayer. En este modelo el agua se considera un medio continuo. Las interacciones entre los solutos
229
y el medio se representan por un potencial de fuerza media (Jiang y Prausnitz,

2000). El modelo ha sido propuesto para la particin de protenas nativas y
desnaturalizadas:
Zp F
ln (Kp ) = ln Kp0 +
RT
(6.27)
donde:
Kp : Coeficiente de particin.
Kp0 : Coeficiente de particin cuando el gradiente de potencial es cero.
Zp : Carga de la protena.
F : Constante de Faraday, 96,487 C/equiv.
: Diferencia de potencial elecrosttico entre la fase inferior y la fase superior.
R: Constante de los gases ideales.
T : Temperatura absoluta.
Estrategias heursticas El desarrollo y optimizacin de procesos de recuperacin que utilizan SDFA requiere realizar un buen nmero de experimentos, para asegurar un buen rendimiento y pureza del producto de inters. La
metodologa de la superficie de respuesta es comnmente empleada en estos
estudios (Azevedo et al., 2007), pero puede requerir recursos significativos. Recientemente, han sido presentadas algunas reglas y estrategias heursticas para
facilitar este tipo de trabajos (Benavides y Rito-Palomares, 2008). Las estrategias se dividen en:
a) Caracterizacin fisicoqumica del caldo a procesar. Los principales parmetros son el peso molecular del soluto, el punto isoelctrico y su hidrofobicidad.
Esta informacin se establece en base a reportes de la literatura y mediante
experimentacin.
b) Seleccin del tipo de SDFA. Los sistemas polimero-sal (particularmente
PEG-fosfato) son altamente recomendados como punto de partida debido a que
son menos costosos, estn bien caracterizados y por su estabilidad.
c) Seleccin de los parmetros del sistema. El pH, el peso molecular del
polmero y el diagrama de fases del sistema requieren ser establecidos. Se recomienda trabajar a un pH ligeramente superior al punto isoelctrico o pK del
soluto. Los sistemas PEG-fosfato son recomendados para trabajar a pH7.0 y
los sistemas PEG-sulfato a pH<6.5.
Una vez seleccionado el SDFA es necesario construir el diagrama de fases del
sistema. Se sugiere investigar la influencia del peso molecular del polmero sobre
la longitud de las lneas de unin, manteniendo el pH constante y la relacin de
volmenes de las fases E/R = 1. Se recomienda usar polmeros de bajo peso
molecular y LLU bajas o medias, para la recuperacin de compuestos hidroflicos
de alto peso molecular (>10, 000 g/mol). Por lo contrario, utilizar polmeros de
alto peso molecular y LLU medias o altas para recuperar solutos hidrofbicos
de bajo peso molecular.
d) Evaluacin de la influencia de los parmetros de proceso sobre el rendimiento y la pureza del producto. Se sugiere evaluar la influencia de la cantidad de
230
caldo a procesar, la adicin de sales neutras o sustancias qumicas, el nmero

de etapas de recuperacin y la geometra del sistema. La cantidad de caldo recomendada es entre 10 y 40 % en peso. Puede investigarse el efecto de la adicin
de sales como NaCl en concentraciones entre 0.25 y 2.0 M sobre el rendimiento
y la pureza. Finalmente, se recomienda hacer un estudio sobre el efecto y costo
del uso de ms de una etapa, as como del efecto de la geometra del sistema
(H/D) sobre la cintica de la separacin de las fases.
6.3.
Equipo de Extraccin
Existen varios tipos de equipos para realizar una operacin de extraccin

(Tabla 6.7). De acuerdo a la forma en que estos equipos pueden ser operados se
dividen en extractores por lotes y extractores continuos. A su vez los equipos de
operacin continua pueden ser de contacto por etapas o de contacto diferencial.
Otra caracterstica de los equipos de extraccin es la forma en que las fases
se separan una vez realizada la extraccin, lo cual puede realizarse slo por
gravedad o por medio de una fuerza centrfuga. En los equipos de extraccin el
control del tamao de las gotas de la fase dispersa puede realizarse por medio
de agitacin mecnica o por pulsaciones. En esta seccin se presentan algunos
equipos de extraccin agrupndolos en: a) extractores por lotes y b) extractores
continuos.
Tabla 6.7: Clasificacin y ejemplos de equipos de extraccin.
Dinmica
Separacin de
Tamao
las fases por:
de gotas p or:
Gravedad
Agitacin
Gravedad
Agitacin
Gravedad
Gravedad
Gravedad
Gravedad
Gravedad
Agitacin
Gravedad
Agitacin
Gravedad
Gravedad
Agitacin
Pulsos
Centrfuga
Deflectores
Interm itente
Equip o
Continuo
Etapas mltiples
Colum nas de
contacto diferencial
M S
M -S
Aspersin
Platos p erforados
Lecho em pacado
Aspersin tipo
Rushton-Oldshue
Discos giratorios
Tipo Karr
platos y em pacadas
Westfalia y
Robatel
Podbielniak y
Alfa Laval
* M -S M ezclador-Sedim entador
6.3.1.
Equipo de Extraccin por Lotes
En la extraccin por lotes o de una etapa, la solucin que contiene el soluto

de inters se mezcla con el solvente y posteriormente las fases se separan. En la
6.3. EQUIPO DE EXTRACCIN
231
Figura 6.6 se muestran algunos de los equipos utilizados para este tipo de extraccin. En la Figura 6.6(a) se muestra un mezclador sedimentador tpico donde
el mezclador o agitador est completamente separado del sedimentador. Las fases se alimentan al mezclador y posteriormente se separan en el sedimentador.
En la Figura 6.6(b) se muestra una combinacin de mezclador-sedimentador.
Los mezcladores sedimentadores pueden combinarse en serie para extraccin en
etapas mltiples o a contracorriente.
Figura 6.6: Esquema de equipos utilizados en la extraccin intermitente: a)

Mezclador-sedimentador separado; b) Mezclador-sedimentador integrado.
Para obtener una transferencia de masa eficiente, con frecuencia se usa un
mezclador mecnico que proporciona un contacto ntimo entre las dos fases
lquidas. En general una de las fases se dispersa en la otra en forma de gotas
pequeas y debe existir un tiempo de contacto suficiente para que se realice
la extraccin. En el diseo del equipo hay un compromiso: si los dos lquidos
son mezclados intensamente formarn gotas pequeas las cuales permitirn una
extraccin rpida pero una separacin lenta; si los lquidos son mezclados ligeramente se formarn gotas grandes, habr menos rea de contacto, la extraccin
es lenta, pero la separacin ms rpida.
6.3.2.
Equipo de Extraccin Continua
Bsicamente existen dos tipos de equipos para realizar extracciones en forma

continua: a) equipos continuos de etapas mltiples y b) equipos continuos de
contacto diferencial.
Equipo de extraccin de etapas mltiples
Los equipos utilizados en operaciones de extraccin de etapas mltiples
vara ampliamente, pero todas las modalidades involucran extracciones por lotes
repetidas. En la Figura 6.7 se muestra un sistema de este tipo donde el flujo
de alimentacin y solvente se suministran a contracorriente en una serie de
mezcladores-sedimentadores.
El tamao del mezclador debe dimensionarse para proporcionar suficiente
agitacin y tiempo de contacto para lograr el equilibrio entre las fases. Este de-
232
Figura 6.7: Mezcladores sedimentadores conectados a contracorriente en etapas

mltiples.
pender del flujo a ser procesado y de las propiedades fsicas de ambos lquidos.
Cuando la extraccin involucra reacciones qumicas el tiempo de contacto puede
ser muy importante. Algunos extractores de etapas mltiples como los Westfalia
y los Robatel emplean fuerzas centrfugas para separar las fases durante la extraccin.
Equipo de extraccin diferencial
Las columnas de extraccin empacadas y las de aspersin, proporcionan
contactos diferenciales donde el mezclado y la sedimentacin se suceden en forma
continua y simultnea.
En la Figura 6.8 se puede observar que en una columna de aspersin el
lquido pesado entra por la parte superior y llena la columna formando la fase
continua y sale por el fondo. El lquido ligero entra a travs de un distribuidor
de tovera en el fondo, mismo que lo dispersa haca arriba en forma de gotas
muy pequeas. El lquido ligero se coliga o junta en la parte superior y sale.
En algunos casos el lquido pesado se dispersa hacia abajo sobre la fase ligera
continua que se va elevando. Tanto el lquido pesado como el lquido ligero se
pueden introducir dentro de la columna como la fase dispersa. Las columnas de
aspersin presentan por regla general bajas eficiencias debido al poco mezclado
y como consecuencia su uso es reducido en la industria.
El contacto entre las fases puede mejorarse proporcionando una superficie
mayor. Esta superficie es proporcionada al rellenar la columna con un empaque
como los anillos de Rasching o las sillas de Berl. Estos empaques promueven la
unin de las gotas y la redispersin de las mismas a intervalos frecuentes a lo
largo de la columna. Evidentemente en este tipo de columnas se pierde capacidad
debido al espacio que ocupa el empaque, sin embargo esto se ve compensado por
la gran mejora que se tiene en la transferencia de masa.
Las columnas empacadas tienen una eficiencia mayor que las de aspersin,
misma que puede incrementarse aplicando una pulsacin oscilante a los fluidos contenidos en la columna. En la Figura 6.9 se presentan esquemas de tres
diferentes tipos de columnas de extraccin.
6.4. DISEO DE EQUIPO DE EXTRACCIN
233
Figura 6.8: Esquema de una columna de extraccin por aspersin.

La columna de platos perforados proporciona un mtodo seguro y eficiente en
los procesos de extraccin lquido-lquido. El esquema de la Figura 6.10 muestra
los platos perforados donde se dispersan las gotas del lquido ligero que tienden
a elevarse. Las gotas dispersadas se juntan debajo de cada plato y vuelven a
formarse por encima de ste al pasar a travs de las perforaciones. El lquido
pesado fluye hacia abajo de los platos donde se pone en contacto con las gotas
y despus pasa hacia el plato inferior.
Al igual que en las columnas empacadas, la eficiencia de separacin en las
columnas con platos perforados puede incrementarse mediante vibraciones o
acciones reciprocantes verticales que promueven la coalicin y dispersin de la
fase dispersa. Las columnas Karr son de las ms utilizadas en biotecnologa y
operan de esta manera. La longitud del movimiento vara entre 3 y 50 mm y
la frecuencia reciprocante puede alcanzar hasta 1000 ciclos/min (Karr, 1980).
Las ventajas de estas columnas incluyen una alta eficiencia de extraccin, bajo
consumo de potencia, dispersin axial baja y un alto flux. (Stella et al., 2008).
Algunos equipos de extraccin diferencial utilizan la fuerza centrfuga para el
manejo de las fases como el extractor Podbielniak y el extractor Alfa Laval. Estos
equipos son muy utilizados en la produccin de antibiticos. Ofrecen tiempos
de contacto cortos para materiales inestables, requieren poco espacio de piso y
pueden manejar emulsiones y sistemas con bajas.
6.4.
Diseo de Equipo de Extraccin
Esta seccin se centra en los aspectos relevantes del diseo de equipo de

extraccin considerando tres modos para realizar la operacin que son de inters
en bioseparaciones:
Extraccin por lotes.
234
Figura 6.9: Columnas de extraccin: a) Lecho empacado b) Aspersin tipo

Rushton-Oldshue y c) Discos giratorios.
Extraccin continua.
Extraccin fraccionaria.
6.4.1.
Extraccin por Lotes
La extraccin por lotes, tambin llamada extraccin de una sola etapa, consiste en poner en contacto ntimo la solucin a tratar con el solvente de extraccin
y formar dos fases. Despus de este contacto y una vez que se ha alcanzado el
equilibrio, las fases deben separarse. En este proceso es conveniente que el contacto se realice con un alto grado de turbulencia para obtener altas velocidades
de transferencia de masa.
El proceso de extraccin en una sola etapa se presenta en la Figura 6.11.
El separador est incluido en la etapa debido a que la extraccin del soluto
persiste en tanto las dos fases se encuentren en contacto y hasta que se alcance
el equilibrio.
Existen dos mtodos para el clculo de extractores por lotes que dependen
de la informacin disponible y de la complejidad de sta: a) el analtico y b) el
grfico.
Mtodo analtico: Extractores por lotes
El rendimiento alcanzado en una operacin de extraccin es un factor de
diseo importante y puede ser obtenido mediante el clculo de la concentracin
final del soluto de inters en las fases. Como generalmente la extraccin se
realiza de tal manera que las fases interactan hasta alcanzar el equilibrio, la
235
Figura 6.10: Esquema de una de una columna de extraccin de platos perforados.
Figura 6.11: Esquema de un proceso de extraccin en una sola etapa.

concentracin final del soluto puede ser obtenida en algunos casos en forma
analtica mediante el empleo de dos ecuaciones.
La primera de ellas es una relacin de equilibrio para las soluciones que
intervienen en el proceso y la segunda es un balance de masa para el soluto.
Cuando la relacin de equilibrio es lineal se tiene:
x = Ky
(6.28)
donde:
x: Concentracin del soluto en la fase ligera E.
y: Concentracin del soluto en la fase pesada R.
K: Constante de equilibrio.
La ecuacin (6.28) es la ecuacin de una recta que pasa por el origen.
La segunda relacin es un balance de masa que establece que en el proceso
de extraccin:
Cantidad de soluto inicial = Cantidad soluto final
236
El balance de masa para el soluto, referido a la Figura 6.11 es:

Ro yA + Eo xo = Ry + Ex
(6.29)
donde:
yA : Concentracin de soluto en la alimentacin o fase pesada.
y: Concentracin de soluto en el refinado, esto es, la concentracin del soluto
que permanece en la alimentacin despus de la extraccin.
xo : Concentracin inicial de soluto en el solvente de extraccin y generalmente es igual cero.
x: Concentracin de soluto en el extracto al final de la operacin.
Las unidades de concentracin pueden estar en % en peso, fraccin mol o
masa/volumen (E y R en unidades consistentes). En este desarrollo se supone
que E y R son constantes.
Para encontrar una expresin para calcular la concentracin al final de la
extraccin o de equilibrio, se sustituye el valor de x dado por la ecuacin (6.28)
en la ecuacin (6.29). El valor para y se obtiene de manera similar. Esta combinacin de ecuaciones conduce a:
x=
KyA
1 +F
yA
1 +F
donde F es el factor de extraccin y est dado por:
y=
KE
R
F =
(6.30)
(6.31)
(6.32)
El factor de extraccin rene dos factores de diseo importantes, la constante

de equilibrio y la relacin de las fases.
Es posible desarrollar una expresin para calcular el rendimiento de la operacin o la fraccin extrada p, definida por:
p=
Ex
RyA
(6.33)
misma que puede ser escrita en trminos del factor de extraccin para dar:
p=
F
1 +F
(6.34)
Consecuentemente la fraccin de producto no recuperado es igual a uno

menos la fraccin extrada. Las expresiones desarrolladas son diferentes en el
caso que la extraccin se realice de la fase ligera a la pesada.
237
Ejemplo 6.3. Clculo de la fraccin extrada de un producto proveniente de un caldo de fermentacin.

En la recuperacin de productos de fermentacin con frecuencia se emplean
extractores agitados. En este caso se ponen en contacto 10.0 L de un caldo de
fermentacin acuoso que contiene 10 g/L del producto que quiere extraerse, con
1.0 L de un solvente orgnico.
Se pide: Si el coeficiente de distribucin es igual a 20 y se alcanza el equilibrio en el extractor, calcular la fraccin extrada de producto.
Solucin:
El esquema que representa el sistema de extraccin es similar al de la Figura
6.11. El balance de masa para el soluto en este sistema es:
como inicialmente en el solvente de extraccin la concentracin del producto es
cero, el balance de masa del soluto queda como:
Ro yA = Ry + Ex
(a)
combinando la ecuacin anterior con la ecuacin de equilibrio x = Ky y suponiendo Ro = R, se obtiene la concentracin del soluto en el solvente de extraccin
en el equilibrio. Esta concentracin est dada por:
KE
KyA
con F =
1 + F
R
sustituyendo los datos del problema se tiene:
x=
F =
20 L
KE
=
=2
R
10 L
la concentracin x es:
g
20 (10 )
KyA
L = 66.6 g
x=
=
1 + F
1 + 2
L
y la fraccin extrada p es:
p=
F
2
=
= 0.666
1 + F
1 + 2
despus de la extraccin el porcentaje del producto en el extracto es de 66.6 %

y en el refinado es de 33.3 %. Si se desea extraer casi todo el producto se debern realizar ms etapas de contacto entre las fases o aumentar el volumen del
solvente de extraccin.
Ejemplo 6.4. Sistema de dos fases acuosas para separar virus.
Se emplea un sistema de extraccin de dos fases acuosas para separar y
concentrar virus de un caldo biolgico. El volumen inicial Vo de la solucin que
contiene los virus es de 3 103 m3 y el volumen inicial V de la solucin de
238
polmeros es de 1 104 m3 . El coeficiente de particin Kp es de 4 104 . Una

vez que se mezclan ambas soluciones el volumen R de la fase pesada formada es
de 5 105 m3 .
Se pide estimar:
a) Las veces que se concentr la solucin o grado de concentracin obtenido.
b) El rendimiento de la operacin.
Solucin:
a) El grado de concentracin GC puede ser expresado como:
y
Co
donde Co es la concentracin de partculas en la solucin original.
Mediante un balance de virus se puede obtener la siguiente expresin:
GC =
Vo Co = xE + yR
combinando ambas expresiones se obtiene:
GC =
Vo y
Vo
=
xE + yR
R(1 + F )
donde:
F =
Kp E
R
Para utilizar la ecuacin anterior es necesario calcular primero el valor de E

mediante un balance,
Vo + V = E + R
entonces,
E
E
= Vo + V R
= (3 103 + 1 104 5 105 ) m3 = 3.05 103 m3
y el grado de concentracin es:
GC =
(5 105
3 103 m3

= 58.57
(4 104 ) (3.05 103 m3 )
m3 ) 1 +
5 105 m3
b) El rendimiento de la operacin puede expresarse como:

yR
Co Vo
combinando la expresin anterior con la del balance de virus se obtiene:
p=
p=
239
yR
xE + yR
y en trminos del grado de concentracin:

p = (GC)
R
Vo
= (58.57)
5 105 m3
3 103 m3
= 0.976
Mtodo grfico: Extractores por lotes

En la solucin de problemas de extraccin por lotes se emplean con mucha
frecuencia mtodos grficos, los cuales son tiles en situaciones en las que el
equilibrio es complejo y no se ajusta a una relacin lineal como la ecuacin
(6.28). Al igual que el mtodo analtico el mtodo grfico tambin depende de
dos ecuaciones bsicas: una relativa al equilibrio y otra al balance de masa del
soluto.
La relacin de equilibrio establece que la concentracin x del soluto en el
solvente de extraccin despus de que las fases se ponen en contacto, es una
funcin que depende de la concentracin y del soluto en el refinado,
x = f(y)
(6.35)
De acuerdo con la Figura 6.11, la ecuacin para el balance de masa del soluto
(solvente libre de soluto) es:
Ro yA = Ry + Ex
consecuentemente:
x=
R
E
(yA y)
(6.36)
La ecuacin anterior es la de una recta llamada lnea de operacin cuya

pendiente es m = R/E y cuya ordenada al origen es b = RyA /E
Si se grafican los datos de equilibrio (ya sea en forma de una ecuacin o de
datos tabulados) y la lnea de operacin como se muestra en la Figura 6.12, en
la interseccin de las curvas se obtienen los valores de equilibrio y y x.
Ejemplo 6.5. Extraccin de un aminocido.
La relacin de equilibrio entre el tolueno y el agua pura en la extraccin de
un aminocido no esencial est dada por:
x2 = (0.001 M ) (y)
240
Figura 6.12: Extraccin intermitente. En la interseccin de la lnea de operacin

con la de equilibrio se obtienen las concentraciones que se alcanzan al final de
la operacin.
Se pide: Estimar la fraccin de aminocido extrada al poner en contacto
4.7 L de solucin de tolueno, con una concentracin 0.006 M del aminocido,
con 1.0 L de agua.
Solucin:
El esquema del proceso se presenta en la Figura 6.13:
Figura 6.13: Esquema de la extraccin de un aminocido en un sistema intermitente tolueno-agua. Ejemplo 6.5.
El balance de masa para el aminocido es:
de tal manera que la expresin de la lnea de operacin est dada por:
y=
241
E
(xo x)
R
sustituyendo valores se obtiene:

y = 4.7(0.006 x)
En la Figura 6.14 se muestra la curva de equilibrio y la lnea de operacin
para este sistema. En la interseccin de estas dos lneas se puede encontrar la
concentracin y de soluto al final de la extraccin. Esta concentracin en el
equilibrio es:
y = 0.012 M
la fraccin extrada p es:
p=
(1.0 L) (0.012 M )
Ry
=
= 0.43
Exo
(4.7 L) (0.006 M )
Figura 6.14: Curva de equilibrio y lnea de operacin para el sistema toluenoagua. Ejemplo 6.5.
6.4.2.
Extraccin Continua
El tratamiento del diseo de extractores continuos puede dividirse en: a)

extraccin en etapas mltiples y b) extraccin diferencial. A continuacin se
revisan cada una de ellas.
242
Extraccin en etapas mltiples

En la extraccin por lotes se usa una sola etapa para transferir el soluto
de la fase acuosa a la fase ligera. Para transferir ms soluto puede repetirse el
contacto mezclando la corriente de salida de refinado con disolvente nuevo. De
esta manera se logra un mayor porcentaje de extraccin del soluto, sin embargo
este procedimiento emplea una mayor cantidad de solvente y da lugar a la
formacin de corrientes muy diluidas. Para emplear menos solvente y obtener
una corriente de extracto de salida ms concentrada, generalmente se usa un
contacto a contracorriente en etapas mltiples como el que se muestra en la
Figura 6.15.
Figura 6.15: Esquema de un proceso de extraccin a contracorriente en etapas

mltiples.
En este esquema cada etapa est identificada por un nmero, iniciando con el
nmero 1 a la derecha. La solucin pesada Ro (alimentacin) entra a la cascada
por la parte inferior izquierda y el solvente puro o fase ligera Eo entra por la
parte superior derecha.
Las concentraciones de las fases a la salida de cada etapa son las correspondientes al equilibrio. Por ejemplo, el lquido ligero que deja la primera etapa
tiene una concentracin de equilibrio x1 con y1 . El lquido pesado que deja la
segunda etapa tiene una concentracin de equilibrio y2 .
Dos mtodos son comnmente utilizados para analizar este tipo de operaciones: a) el analtico y b) el grfico.
Mtodo analtico: Extractores continuos multietapas El rendimiento
alcanzado en una operacin de extraccin es un factor de diseo importante y
puede ser obtenido mediante el clculo de la concentracin final del soluto de
inters en las fases. Debido a que generalmente la extraccin se realiza de tal
manera que las fases interactan hasta alcanzar el equilibrio, la concentracin
final del soluto puede ser obtenida en algunos casos en forma analtica, mediante
el empleo de dos ecuaciones: una relacin de equilibrio y un balance de masa.
Cuando el equilibrio puede ser expresado por una relacin lineal, para la
etapa n se tiene:
xn = Kyn
(6.37)
243
El balance de masa para el soluto en estado estacionario debe realizarse en

cada etapa. De acuerdo a la Figura 6.15 dicho balance para la primera etapa es:
Ry2 + Eo xo = Ry1 + Ex1
(6.38)
Cuando las concentraciones de las corrientes de salida de cada etapa son las
de equilibrio y el solvente est libre de soluto xo = 0, las ecuaciones (6.37) y
(6.38) se combinan para obtener:
y2 = (1 + F ) (y1 )
(6.39)
como se mencion anteriormente F = KE/R es el factor de extraccin.

Para la segunda etapa el balance de masa es:
Ry3 + Ex1 = Ry2 + Ex2
(6.40)
y de acuerdo a la relacin de equilibrio, x1 = Ky1 y x2 = Ky2 de tal manera

que:
y3 = (1 + F ) (y2 ) F y1
combinando la ecuacin anterior con la ecuacin (6.39) se obtiene:

y3 = (1 + F + F 2 ) (y1 )
(6.41)
mediante este procedimiento se puede obtener una expresin para el clculo

de la concentracin de soluto en la fase pesada a la salida en funcin de la
concentracin a la entrada, el factor de extraccin y el nmero de etapas, de la
forma:
yn+1 = (1 + F + F 2 + ... + F n ) (y1 )
que tambin puede escribirse como:
n+1

F
1
yn+1 =
(y1 )
F 1
(6.42)
(6.43)
La ecuacin (6.43) puede ser utilizada de varias formas:

a) Si se conoce la concentracin de la alimentacin yn+1 , el factor de extraccin F y el nmero de etapas n, entonces se puede calcular la concentracin del
soluto a la salida y1 , y por lo tanto la fraccin extrada.
b) Si se conoce la concentracin de soluto a la entrada en la corriente de
alimentacin y la concentracin deseada a la salida y el factor de extraccin F ,
entonces se puede calcular el nmero de etapas necesarias para el proceso de
extraccin.
c) Si se conoce la fraccin que no es extrada y1 /yn+1 y el nmero de etapas, se puede conocer el factor de extraccin F ; esto permite seleccionar flujos
adecuados para E y R.
244
El clculo de las concentraciones de salida permite estimar el rendimiento o

la fraccin extrada p, que en este caso est dado por:
p=
Exn
Ryn+1
combinando la ecuacin anterior con las ecuaciones (6.37) y (6.43) se obtiene,

p=
(F ) (F n 1)
F n+1 1
(6.44)
De la ecuacin (6.44) se desprende que cuando F es muy grande, p se aproxima a 1. Por otro lado, cuando F tiende a cero tambin p tiende a cero.
En el caso particular cuando F es igual a la unidad,
yn+1 = (1 + 1 + 12 + ... + 1n ) (y1 ) = (n + 1)y1
p=
Ryn+1 Ryn
(n + 1)y1 y1
n
=
=
Ryn+1
(n + 1)y1
n+1
Ejemplo 6.6. Clculo de la fraccin extrada de un producto proveniente de un caldo de fermentacin en una extraccin por etapas.
En una operacin de extraccin a contracorriente se ponen en contacto 10.0
L/min de un caldo de fermentacin acuoso que contiene 10 g/L del producto
que se desea extraer, con un flujo de 1.0 L/min de un solvente orgnico.
Se pide: Si la constante de equilibrio es de 20 y se establece el equilibrio en
cada etapa del extractor, calcular la fraccin extrada de producto en un sistema
de extraccin de tres etapas.
Solucin:
De acuerdo a los datos, yn+1 = 10 g/L; K = 20; R = 10.0 L/min; E =
1.0 L/min y n = 3.
La fraccin extrada puede ser obtenida mediante la ecuacin (6.44), para lo
cual es necesario calcular primero el factor de extraccin, entonces:
L
20
1.0
EK
min
F =
=
=2
L
R
10.0
min
la fraccin extrada o recuperada en el solvente de extraccin es:
p=
F (F n 1)
2 (23 1)
=
= 0.93
F n+1 1
24 1
245
Ejemplo 6.7. Extraccin continua de penicilina.

Se extrae penicilina de un caldo de fermentacin utilizando isoamilacetato
como solvente orgnico en un arreglo tipo cascada a contracorriente. Los flujos
de la fase orgnica y de la fase acuosa son E = 10 L/min y R = 100 L/min,
respectivamente. El coeficiente de particin de la penicilina a pH=3 es K = 50.
Se pide: Si la concentracin de penicilina en la alimentacin es de 20 g/L,
calcular el nmero de etapas necesarias para obtener una concentracin de
0.1 g/L de penicilina en la corriente de salida.
Solucin:
El nmero de etapas puede ser calculado mediante la ecuacin (6.43), para
lo cual es necesario calcular primero el factor de extraccin,
L
50 10
KE
min
=5
=
F =
L
R
100
min
el nmero de etapas puede obtenerse mediante la expresin:
n+1

yn+1
F
1
=
y1
F 1
g
20
n+1
1
L = 5
g
5
1
0.1
L
n = 3.15 4
Mtodo Grfico: Extraccin continua de etapas mltiples Al igual que

en la extraccin por lotes, los mtodos grficos son muy usados en ingeniera en
la solucin de problemas de extraccin por etapas (en equilibrio y estado estacionario). Se requieren dos tipos bsicos de relaciones: una relacin de equilibrio
y un balance de masa.
La relacin de equilibrio se expresa como:
xn = f (yn )
(6.45)
El balance de masa global para el soluto, es decir en todo el equipo, es de la

forma:
R
(yn+1 y1 )
(6.46)
E
las ecuaciones (6.45) y (6.46) pueden graficarse sobre el mismo plano coordenado para obtener las lneas de equilibrio y operacin, respectivamente. En la
Figura 6.16 se muestra una grfica de este tipo.
xn =
246
Figura 6.16: Anlisis grfico de una extraccin a contracorriente en etapas mltiples.

Cuando interesa calcular el nmero de etapas n requeridas en una operacin
de extraccin, una vez trazada la curva de equilibrio y la de operacin, el procedimiento es el siguiente (Fig. 6.16).
a) Se calcula la concentracin de soluto en la fase pesada en la parte final
de la cascada y1 , mediante la ecuacin (6.46).
b) Se localiza sobre la grfica el punto (y1 , x = 0). Este punto representa la
interseccin de la lnea de operacin con el eje de las abscisas.
c) Una vez localizado el punto (y1 , x = 0), se traza una lnea vertical en y1 .
d) En la interseccin de la lnea vertical con la curva de equilibrio se localiza
el punto (y1 , x1 ) de la lnea de equilibrio.
e) En x1 se traza una lnea horizontal.
f) En la interseccin de la lnea horizontal con la lnea de operacin se localiza
el punto (y2 , x1 ).
g) Se repite el procedimiento anterior hasta alcanzar el punto (yn+1 , xn ).
En este punto la concentracin del soluto en el refinado iguala o excede la
concentracin en la alimentacin.
h) El nmero de etapas se determina contando el nmero de escalones trazados.
Ejemplo 6.8. Extraccin por etapas de Actinomicina D.
Se desea extraer Actinomicina D de un caldo de fermentacin que contiene
260 mg/L de este antibitico, utilizando butil-acetato como solvente. La constante de equilibrio K de este sistema tiene un valor de 57 al pH=3.5 al que se
realiza la extraccin. El flujo de la fase acuosa R es de 450 L/h y el de la fase
orgnica E es de 37 L/h.
Se pide: Calcular el nmero de etapas necesarias para lograr el 99 % de
recuperacin del antibitico.
Solucin:
247
Solucin grfica. Para calcular grficamente el nmero de etapas es necesario obtener una expresin para la curva de operacin mediante la ecuacin
(6.46), para lo cual es necesario calcular primero la concentracin de soluto a
la salida en el refinado. Dado que se desea recuperar el 99 % del soluto esta
concentracin es:
mg
mg
= 2.6
L
L
la expresin para la curva de operacin es:
y1 = 0.01 260
450
(yn+1 y1 ) = 12.2 yn+1 31.62
37
la relacin de equilibrio para este caso est dada por:
xn =
[mg/L]
xn = 57yn
Para realizar el clculo grfico se traza la curva de equilibrio utilizando el
punto (0, 0) y la pendiente de 57. Seguidamente, se traza la lnea de operacin
a partir del punto (2.6, 0) con pendiente 12.2. Una vez obtenidas las curvas se
puede estimar el nmero de etapas mediante el proceso de trazado de escalones
sobre la curva. En este caso es necesario utilizar dos escalas debido al rango tan
amplio de variacin de las concentraciones. Las curvas resultantes se muestran
en la Figura 6.17. Se puede estimar que el proceso de extraccin se completa en
tres etapas.
Solucin analtica. Dado que la relacin de equilibrio es lineal, el clculo
tambin puede realizarse mediante el mtodo analtico por medio de la ecuacin
(6.43), de tal manera que:

n+1
F
1
0.01 yn+1
yn+1 =
F 1
y en este caso el factor de extraccin es:
(57)(37
F =
450
L
h
L
)
h = 4.69
de tal manera que:

yn+1
(4.69)n+1 1
= 100 =
0.01 yn+1
4.69 1
rearreglando y tomando logaritmos se tiene:
ln (370) = (n + 1) ln (4.69)
por lo tanto
248
Figura 6.17: Etapas requeridas en la extraccin de actinomicina del Ejemplo

6.8.
n = 2.8
se requieren tres etapas para esta extraccin lo que coincide con el resultado
obtenido por el mtodo grfico.
Ejemplo 6.9. Concentraciones en una operacin a contracorriente.
En una operacin de extraccin a contracorriente en cada etapa se alcanza
el equilibrio, el cual est dado por una relacin lineal.
Se pide:
a) Establecer un algoritmo para el clculo de las concentraciones de equilibrio
en cada una de las n etapas de un sistema.
b) Calcular las concentraciones de equilibrio utilizando los siguientes datos:
x0 = 0, yn+1 = 10 g/L; K = 20; R = 10.0 L/min; E = 1.0 L/min y n = 3
c) Calcular la fraccin extrada o rendimiento de la operacin.
Solucin:
a) La relacin de equilibrio est dada por:
xn = Kyn
El balance de soluto en la etapa n puede expresarse como:
249
Ryn+1 + Exn1 = Ryn + Exn

o bien como:
F xn1 (1 + F )xn + xn+1 = 0
donde: F = KE/R.
El conjunto de balances para cada una de las etapas pueden expresarse
matricialmente como:
AX =B
donde:
(1 + F )
1
0
F
(1 + F )
1
0
F
(1 + F )
.
.
..
.
.
A=
.
.
.
.
.
..
..
..
.
0
x1
x2

x3

X = ;

..
.
xn
0
1
..
.
F
..
.
..
..
..
(1 + F )
F
0
0
..
.
..
.
..
.
0
F x0
0
0
Este sistema puede ser resuelto de varias formas. En la Figura 6.18a se

presenta un programa MATLAB para resolver el sistema.
b) Las concentraciones son:
xn
13.3
40.0
93.3
(1 + F )
1
F
(1 + F )
B=
..
.
Kyn+1
n
1
2
3
yn
0.67
2.00
4.67
La concentracin en el extracto se va incrementando de etapa a etapa, mientras que la del refinado va disminuyendo.
c) La recuperacin es:
250
Figura 6.18: Solucin Ejemplo 6.9. a) Programa MATLAB y b) Curva de

rendimiento.
p = 0.93
En la Figura 6.18b se muestra como vara el rendimiento con el nmero
de etapas para este sistema. Los rendimientos marginales son muy pequeos
despus de la etapa 3, para las condiciones estudiadas. El comportamiento depender de todos los parmetros de un sistema particular.
Escalamiento de columnas de platos Un mtodo prctico que ha sido
utilizado para escalar extractores utiliza el concepto de altura equivalente de
una etapa terica (HET S) definido como:
L
(6.47)
n
donde n es el nmero de etapas en el equilibrio y L es la altura del extractor.
El escalamiento se realiza mediante el uso de dos ecuaciones empricas y dos
condiciones de operacin.
Las dos ecuaciones empricas son (Karr, 1980):
HET S =
0.38
(HET S)2
D2
=
(HET S)1
D1
0.14
(V R)2
D1
=
(V R)1
D2
(6.48)
(6.49)
251
donde D es el dimetro de la columna y V R es la velocidad reciprocante. Los

ndices 1 y 2 se refieren a las diferentes escalas.
Una condicin de operacin es mantener constante la razn del flujo de las
fases entre las escalas:
E1
E2
=
(6.50)
R2
R1
y la segunda condicin de operacin es mantener constante el flux entre las
escalas, obtenindose la expresin:
Q2
Q1
= 2
D22
D1
(6.51)
donde Q = E + R.
Ejemplo. 6.10 Escalamiento de una columna de platos tipo Karr.
La operacin de una columna de platos reciprocantes tipo Karr a nivel piloto, para la extraccin de un antibitico a partir de un caldo de fermentacin
utilizando acetato de amilo, se efectu bajo las condiciones siguientes:
Datos planta piloto: Escala 1
Coeficiente particin
K = 7.5
Flujo fase ligera
E1 = 105 mL/min
Flujo del caldo
R1 = 70 mL/min
Conc./conc.
y1 /yn+1 = 0.07
Longitud columna (operacin) L1 = 1.83 cm
Dametro de la columna
D1 = 2.54 cm
Velocidad reciprocante
V R1 = 280 ciclos/min
Se desea escalar esta columna a nivel industrial para manejar 150, 000 L de
caldo de fermentacin en 12 h y lograr una extracin donde la concentraciones
en el refinado sea y1 /yn+1 = 0.03.
Se pide calcular:
a) Las dimensiones de la columna industrial: D2 y L2 .
b) La velocidad reciprocante de la columna industrial: V R2
Solucin: a)
Paso 1. Se calcula las HET S1 , para lo cual es necesario calcular F1 y n1 .
mL
7.5 105
KE1
min
F1 =
=
= 11.25
mL
R1
70
min
Sabemos que:
yn+1 =
entonces se puede despejar n,
F n+1 1
F 1
(y1 )
252

n1

yn+1
[(F 1)] + 1
ln
y1
1
n =
ln (F )

1
(11.25 1) + 1
ln
0.07
=
1 = 1.06
ln (11.25)
A nivel piloto la altura equivalente de una etapa terica es:

(HET S)1 =
L1
1.83 m
=
= 1.73 m
n1
1.06
Paso 2: Se calcula D2 , para lo cual primero se calcula E/R y Q2 .

La relacin de fases es,
mL
105
E2
E1
min = 1.5
=
=
mL
R2
R1
70
min
de tal manera que:
Q2 = E2 + R2 = 1.5R2 + R2 = 2.5R2 = 2.5
150, 000 L
L
= 520.8
60 min
min
12 h
h
Se puede calcular el D2 , mediante la ecuacin del flux,

Q1
Q2
= 2
D22
D1
$
%
% 520.8 L (2.54 cm)2
Q2 D12 %
min
D2 =
=%
= 138.6 cm
&
L
mL
Q1
175
3
min 10 mL
Paso 3. Se calcula L2 , para lo cual es necesario calcular n2 y HT P S2 .

1
ln
[(11.25 1)] + 1
0.03
n2 =
1 = 1.41
ln (11.25)
#
(HET S)2 = (HET S)1
D2
D1
0.38
= 1.73 m
138.6 cm
2.54 cm
0.38
L2 = n2 (HET S)2 = 1.41 7.91 m = 11.15 m
Solucin b)
= 7.91 m
253
La velocidad reciprocante de la columna industrial es:
(V R)2 = (V R)1
6.4.3.
D1
D2
0.14
= 280
ciclos
min
2.54 cm
138.6 cm
0.14
= 160
ciclos
min
Extraccin Diferencial
Cuando el contacto de la fase pesada y la fase ligera se efecta en forma

continua, se dice que la extraccin se realiza en forma diferencial. El soluto se
transfiere de una fase a otra a travs de un contacto ntimo entre stas, pero
no se llega a alcanzar el equilibrio. Sin embargo, el resultado de este proceso es
una extraccin significativa del soluto deseado.
El anlisis de la extraccin diferencial depende de tres relaciones bsicas:
a) La primera de ellas es una relacin de equilibrio similar a las utilizadas
en extraccin por etapas y est dada por:
x = Ky
(6.52)
donde y es la concentracin hipottica de soluto en la fase pesada en equilibrio

con la concentracin de soluto x en la fase ligera, en una altura dada de la
columna.
b) La segunda relacin es un balance de masa tomado en la base de la
columna ( Fig. 6.19). En esta figura se puede observar que la concentracin de
soluto a la entrada en la fase pesada R es yL , y a la salida es yo . La concentracin
de soluto a la entrada en la fase ligera E es xo = 0 y a la salida es xL .
Figura 6.19: Esquema idealizado de una columna de extraccin diferencial.

El balance de masa que resulta para este proceso a cualquier altura de la
columna es:
254
Ry + Exo = Ryo + Ex
(6.53)
que puede ser escrito cuando xo = 0 como:

R
(y yo )
(6.54)
E
donde x y y son las concentraciones de soluto en la posicin z, las cuales no
estn en equilibrio. La lnea de operacin del proceso est dada por la expresin
(6.54).
c) La tercera relacin se deriva de un balance de masa interfacial de soluto,
que describe la velocidad con que ste se transfiere de la fase pesada a la fase
ligera. Este balance se realiza en un diferencial de volumen V = Az. En la
Figura 6.19 se muestra el esquema para el balance de masa en este diferencial
de volumen y que se expresa en palabras como:
x=
Acumulacin de soluto en fase R = Entrada de soluto

Salida de soluto
+Produccin Transferencia
Este balance puede ser simplificado considerando que la acumulacin es nula.

Debido a que no hay produccin de soluto el trmino correspondiente tambin
es nulo. La velocidad de transferencia de soluto de la fase R a la fase E est
dada por rAz, donde r es la velocidad de transferencia de masa volumtrica
del soluto.
El balance de masa en el diferencial de volumen se puede escribir entonces
como:
0 = R(yz+z yz ) rAz
(6.55)
si se divide la ecuacin anterior entre Az y se toma el lmite cuando z 0,

la ecuacin (6.55) se puede escribir como:

R dy
0=
r
(6.56)
A dz
En la extraccin diferencial una fase se dispersa en la otra en forma de gotas
pequeas, y el rea de contacto es un factor muy importante para lograr una
extraccin rpida y eficiente. La velocidad de transferencia r es proporcional
al rea superficial de las gotas por unidad de volumen. La velocidad de transferencia r tambin es proporcional a que tan lejos est la concentracin y del
equilibrio. De acuerdo a lo anterior r se puede escribir como:
r = ka(y y )
(6.57)
donde a es el rea superficial de contacto por unidad de volumen, y es la concentracin hipottica de soluto en la fase pesada en equilibrio con la concentracin
255
de soluto en la fase ligera x. La constante k es el coeficiente de transferencia de

masa. Este depende de las propiedades fsicas de los fluidos en contacto tales
como viscosidad, densidad y flujo. La constante k tiene dimensiones de velocidad.
La tercera relacin requerida para el anlisis de la extraccin diferencial se
obtiene combinando las ecuaciones (6.56) y (6.57),

kaA
dy
=
(y y )
(6.58)
dz
R
Las tres relaciones descritas se relacionan entre s para obtener una ecuacin
de diseo.
La ecuacin (6.58) est en funcin del diferencial dz. Esto permite calcular
la longitud del extractor diferencial utilizando para ello las ecuaciones (6.52) y
(6.54).
De acuerdo a la ecuacin (6.58) la longitud del extractor diferencial puede
ser obtenida mediante la siguiente expresin:
L=
L
R
dz =
kaA
yL
yo
dy
(y y )
combinando con la ecuacin (6.52) se obtiene,

yL
dy

x
y
yo
K
R
L=
kaA
y con ecuacin (6.54),
yL
dy

R
y
(y yo )
yo
EK
R
L=
kaA
dado que F = EK/R, la ecuacin anterior se puede escribir como:

L=
R
kaA
F
(F 1)
yL
dy

yo
y
+
yo
F 1
finalmente integrando se obtiene:
xL

yL
R
F
K
L=
ln
kaA F 1
yo
(6.59)
Al trmino de la ecuacin (6.59) que aparece dentro de los parntesis cuadrados se le llama en ingeniera altura de una unidad de transferencia HT U (de
256
sus siglas en ingls), tiene unidades de longitud y es una medida de la eficiencia

del equipo. El trmino que aparece entre llaves es una cantidad adimensional
llamada nmero de unidades de transferencia N T U ( de sus siglas en ingls)
que permite medir el grado de dificultad de la extraccin. Valores grandes de
N T U significan mayor dificultad en la extraccin que valores pequeos.
La expresin (6.59) se puede escribir como:
L = [HT U ]{NT U }
(6.60)
La ecuacin (6.60) es la base para el diseo de un proceso de extraccin

diferencial lquido-lquido.
Ejemplo 6.11. Separacin de una mezcla racmica de leucina.
Los mdulos de fibras huecas constituyen una alternativa atractiva respecto
al uso de equipos de extraccin convencional debido su alta relacin rea/volumen
(Ding et al., 1992). Se utiliza una unidad de fibras huecas operando a contracorriente para separar l-leucina de d-leucina bajo las siguientes condiciones:
Fase extractora ligera
Fase acuosa
Longitud de las fibras
Dimetro de las fibras
Nmero de fibras
Flujo de la fase acuosa R
Flujo de la fase orgnica E
Coeficiente de particin K
N-n-dodecil-l-hidroxiprolina en octanol
Agua (conteniendo l-leucina y
d-leucina)
64 cm
240 m
96
19.2 cm3 /h
76.8 cm3 /h
0.331
Los microporos de las fibras se rellenaron con gel de polivinil-alcohol de tal

manera que los solutos difunden a travs de los poros sin que las fases se mezclen.
Se pide: Estimar el coeficiente de transferencia de masa volumtrico ka del
sistema, si bajo las condiciones enunciadas la recuperacin de d-leucina en la
fase ligera fue del 99.97 %.
Solucin:
Se requiere utilizar la ecuacin (6.59) para estimar el parmetro ka y expresarla en trminos de la recuperacin p que en este caso est dada por la
expresin:
p=
ExL
RyL
otra expresin necesaria es la del balance global del soluto que es:
ExL = R(yL yo )
257
combinando las dos ecuaciones anteriores,

yo
ExL
=1
RyL
yL
= yL (1 p)
p =
yo
con base a lo anterior la ecuacin (6.59) puede expresarse como:

pRyL

y
R
F
KE
L=
ln
kaA
F 1
yL (1 p)
o bien como:
p

1
R
F
F
L=
ln
kaA F 1
(1 p)
La expresin anterior permite calcular ka , para lo cual es necesario obtener

primero el rea de flujo A, que es la suma del rea transversal de las 96 fibras.

2
(96) 240 106 m
A=
= 4.34 102 cm2
4
tambin es necesario calcular el factor de extraccin F ,
cm3
KE
h = 1.324
=
F =
R
cm3
19.2
h
el coeficiente de transferencia de masa est dado por:
0.331 76.8
cm3
0.9997
h
1.324
h
3600 s
1.324
ka =
ln
(64 cm)(4.43 102 cm2 )

1 0.9997
1.324 1
19.2
ka = 5.15 102 s1
Un mtodo simplificado para el diseo de columnas considera a la columna

formada por un conjunto de platos tericos o etapas ideales. El nmero de platos
tericos N de una columna de contacto diferencial se calcula mediante los mtodos empleados para la extraccin continua de etapas mltiples. Este tratamiento
da origen al concepto de altura equivalente a un plato terico HET P (de sus
siglas en ingls), de tal manera que:
258
(6.61)
L = (HET P )(N )
Ejemplo 6.12. Extraccin diferencial de penicilina.

La extraccin de penicilina presente en fase acuosa utilizando una fase orgnica debe realizarse a pH cido. Es recomendable que esta extraccin se realice en
un tiempo corto debido a que la penicilina es inestable a pH cido. Esto puede
lograrse en un extractor diferencial centrfugo tipo Podbielniak. Este extractor
funciona como una columna de platos perforados enrollada sobre un eje giratorio
que favorece el flujo a contracorriente de las fases.
Se cuenta con los siguientes datos de operacin de un extractor tipo Podbielniak:
Coeficiente de particin
Conc. de penicilina a la entrada
Conc. penicilina en el solvente
Flujo de alimentacin
Flujo de extracto
Prdidas de penicilina
25 (fraccin libre soluto)

mol de penicilina
3.3 104
mol de agua
0
70 mol de agua/min
3.5 mol de solvente/min
10 %
Se pide calcular:
a) La fraccin mol de penicilina en el extracto de salida.
b) El nmero de etapas tericas de la operacin.
Solucin:
a) La fraccin de soluto en el extracto de salida puede ser obtenida mediante
la ecuacin (6.54),
xL
xL
xL

R
=
(yL yo )
E
mol
70

min
=
3.3 104 (0.1)(3.3 104 )
mol
3.5
min
moles de penicilina
= 5.94 103
moles de solvente
mol
mol
b) El nmero de etapas tericas puede ser calculado mediante la ecuacin

(6.43) que en este caso se puede escribir como:
F 1
yo
= n+1
yL
F
1
259
se requiere calcular el factor de extraccin,

mol
25 3.5
KE
min
=
= 1.25
F =
mol
R
70
min
entonces el clculo del nmero de etapas mediante la ecuacin (6.43) modificada
es:
0.1 =
1.25 1
n+1
(1.25)
n = 4.6
6.4.4.
Extraccin por Etapas no en Equilibrio
En la extraccin por etapas no en equilibrio, el tiempo para realizar la extraccin no es suficiente para alcanzar el equilibrio, entonces el anlisis debe
considerar la transferencia de masa interfacial. La descripcin del sistema se
realiza mediante la relacin de equilibrio, la expresin de la velocidad de transferencia interfacial, un balance de soluto en el extracto y otro en el refinado:
xn = Kyn
(6.62)
r = ka(yn yn )
(6.63)
Exn1 + rR = Exn
(6.64)
Ryn+1 = Ryn + Rr
(6.65)
donde: r es la velocidad de transferencia interfacial del soluto, k es el coeficiente

de transferencia de masa, a es el rea superficial de contacto por unidad de volumen, y es la concentracin hipottica de soluto en la fase pesada en equilibrio
con la concentracin de soluto x en la fase ligera.
Combinando la relacin de equilibrio y la de transferencia de masa, con
cada uno de los balances se tiene para el extracto y el refinado las siguientes
expresiones:

Rka
+ E xn + Rkayn = 0
(6.66)
Exn1
K
260
(1 + ka) yn yn+1
ka
K
(6.67)
xn = 0
Ejemplo 6.13. Concentraciones en una operacin a contracorriente

sin equilibrio.
En una operacin de extraccin a contracorriente el tipo de equilibrio es
lineal pero el tiempo de contacto es insuficiente para alcanzar ste.
Se pide:
a) Establecer un algoritmo para el clculo de las concentraciones en cada
una de las n etapas de un sistema.
b) Calcular el rendimiento global y las concentraciones en cada etapa utilizando los siguientes datos: x0 = 0, yn+1 = 10 g/L; K = 20; R = 10.0 L/min;
E = 1.0 L/min, ka = 5 min1 y n = 3
Solucin:
a) El conjunto de balances de soluto en el extracto para cada una de las
etapas pueden expresarse matricialmente como:
(a)
C X + (Rka) Y = D
El conjunto de balances de soluto en el refinado para cada una de las etapas

pueden expresarse matricialmente como:
AY

ka
X =B
K
(b)
donde :
(1 + ka)
1
0
0
0
0
(1 + ka) 1
0
0
.
.
.
.
.
..
..
..
..
..
A=
0
0
0 (1 + ka)
1
0
0
0
0
(1 + ka)

Rka
+
E
0

Rka
+E
0
..
..
C=
.
.
0
.
..
0
0
0
..
.
..
.
0

Rka
+E
K
Rka
+E
K
0
0
0
..
.
B=
;
yn+1
EX0
0
D = 0 ;
..
.
0
261
x1
x2

X = x3 ;
..
.
xn
y1
y2

Y = y3
..
.
yn
Puede ser demostrado que para este sistema se cumple que (Elnashaie y
Uhlig, 2007):
.
ka
K
1
[C] [A] + [Rka] Y =
CX = D RkaY
ka
K
1
CB + D
(c)
(d)
Para el clculo de las composiciones, primero se obtiene Y de la ecuacin (c)

y posteriormente con la ecuacin (d) se obtiene X. En la Figura 6.20 se presenta
un programa MATLAB para el clculo.
Figura 6.20: Programa MATLAB para el clculo de las concentraciones en cada

etapa en una operacin a contracorriente sin equilibrio.
b) El rendimiento alcanzado es:
p = 0.89
Las concentraciones en g/L son:
262
n
1
2
3
6.4.5.
xn
15.74
42.72
88.98
yn
1.10
2.68
5.37
Extraccin Fraccionaria
La extraccin fraccionaria es una tcnica de separacin en la cual una fase

ligera E que contiene varios solutos, se pone en contacto con una serie de tubos
que contienen originalmente, fase pesada R pura. El resultado de este proceso
es la separacin de los distintos solutos contenidos en el solvente E.
Este proceso de extraccin tambin es conocido como extraccin Craig (debido a que fue desarrollado inicialmente por L.C. Craig como extraccin a contracorriente) o como extraccin fraccionaria con una fase estacionaria.
La extraccin fraccionaria se fundamenta en la diferencia del coeficiente de
particin de los solutos. Cuando se tiene un solvente conteniendo varios solutos
que poseen diferentes coeficientes de particin, stos pueden separarse entre s
por medio de la extraccin fraccionaria.
La extraccin fraccionaria consiste de repartos repetidos de una mezcla de
solutos entre dos disolventes inmiscibles. El fundamento se muestra en la Figura 6.21a donde un soluto A es extrado por este proceso. El coeficiente de particin entre los disolventes E y R est dado por:
Kp (A) =
xA
=1
yA
La extraccin se realiza de la siguiente forma:

a) Inicialmente el soluto A (64 unidades) se encuentra disuelto en un volumen
de fase ligera E y se localiza en el tubo 1 junto con un volumen de fase
pesada R.
b) Inicialmente los tubos del 2 al 7 contienen volmenes iguales de disolvente
puro R.
c) El tubo 1 se agita hasta alcanzar el equilibrio; el resultado es una distribucin del soluto A entre las fases E y R en cantidades iguales, es decir 32
unidades en cada una.
d) El solvente E de la capa superior del tubo 1, se transfiere al tubo 2.
e) Se aade al tubo 1 un volumen de solvente fresco E.
f) Se agitan los tubos 1 y 2 hasta alcanzar el equilibrio, donde cada fase
en ambos tubos contiene 16 unidades de soluto A, puesto que el coeficiente de
distribucin Kp (A) = 1.0.
g) Se separa la fase ligera de los tubos y se aade al siguiente de la derecha.
h) Se aade al tubo 1 un volumen de solvente fresco E.
i) Se repite el proceso las veces que sea necesario.
El esquema de la Figura 6.21a muestra los resultados de siete transferencias.
Comnmente, en la prctica real de laboratorio, se emplean 100 o ms etapas de
263
Figura 6.21: Extraccin de Craig: a) Esquema del principio de extraccin fraccionaria con una fase mvil y b) Grfica para cada tubo y varios solutos.
distribucin para separar mezclas de aminocidos o de protenas. La cantidad
total de soluto A, en cada uno de los siete tubos, se presenta en la grfica de la
Figura 6.21b.
Con el fin de comparar la forma en que se distribuyen varios solutos con
diferente coeficiente de particin, tambin se muestra en la Figura 6.21b la
distribucin de los solutos B y C en concentraciones arbitrarias de 64 unidades
cada uno. El soluto B, posee un coeficiente de particin,
Kp (B) =
xB
= 0.33
yB
Kp (C) =
xC
= 3.0
yC
y el soluto C,
La figura indica que a mayor coeficiente de particin Kp , mayor es la cantidad

de soluto desplazada en cada transferencia. Debido a que cada soluto se mueve
independientemente del otro de acuerdo a su coeficiente de particin, la mezcla
de solutos A, B y C se separar por completo en tres picos despus de un nmero
determinado de transferencias.
264
La extraccin fraccionaria con una fase mvil es de aplicacin general y puede

emplearse como tcnica de bioseparacin para diferentes tipos de solutos como:
protenas, cidos nucleicos, lpidos y aminocidos. Este principio tambin sirve
de base para las operaciones cromatogrficas que se revisan posteriormente.
Perfil de concentracin
A diferencia de los procesos de extraccin vistos en las secciones anteriores,
en la extraccin fraccionaria el soluto desarrolla un perfil de concentraciones
distribuido a travs de todos los tubos, lo cual no se presenta en otro tipo de
procesos de extraccin. Otra forma de representar la extraccin fraccionaria es
mediante el esquema que se muestra en la Figura 6.22.
Figura 6.22: Representacin esquemtica de la distribucin de la concentracin

de un soluto en la extracin fraccionaria con una fase mvil.
En la Figura 6.22 se muestra la distribucin de soluto en cada tubo despus
que se realiza la transferencia y se alcanza el equilibrio, cuando la recuperacin
en cada etapa es p. Se muestra que al final de la cuarta transferencia, la distribucin de la concentracin en los tubos sigue una forma binomial.
En la extraccin fraccionaria la fraccin f de soluto original que se encuentra
en el tubo r (en ambas fases), despus de las n transferencias est dada por:
f(r, n) =
donde:
n!
pnr (1 p)r
r!(n r)!
p=
265
(6.68)
F
1+F
F =
EK
R
r = 0, 1, 2, 3.... n
Cuando el nmero de transferencias n es muy grande la ecuacin (6.68) se
aproxima a una distribucin gausiana y se tiene que:

1
(r np)2
f (r, n) =
exp
(6.69)
2np(1 p)
[2np(1 p)]1/2
Este perfil tiene un mximo cuando r = np.
Ejemplo 6.14. Aislamiento de cido quenodeoxicolico.
El cido biliar quenodeoxicolico es aislado mediante una extraccin de Craig
usando 400 transferencias. La fase pesada es agua y la fase ligera es n-butanol;
la proporcin de las fases se ajusta de tal manera que el factor de extraccin F
sea igual a uno.
Se pide: Una vez que se realizan las 400 transferencias, determinar:
a) El nmero de tubo de mxima concentracin.
b) La concentracin de soluto en dicho tubo.
Solucin:
a) De acuerdo a la ecuacin (6.69) la fraccin de soluto f tiene un mximo
cuando r = np, ya que en este punto el valor de la exponencial es mximo e
igual a uno.
El tubo que tiene la concentracin mxima de soluto es:
r = np = 400
1
= 200
1+1
b) La fraccin de soluto en el tubo 200 despus de 400 transferencias est

dada de acuerdo a la ecuacin (6.69) por:
f (r, n) = f (200, 400) =
1
= 0.04
[(2) (400)(0.5)(0.5)]1/2
esto significa que solamente el 4 % de la concentracin de soluto original est

presente en el tubo de mxima concentracin despus de 400 transferencias.
266
6.5.
Sumario
La extraccin es una operacin que se emplea para concentrar solutos de inters a partir de caldos biolgicos diluidos. Se basa en la diferencia de solubilidad
de los solutos entre dos fases: el caldo biolgico y el solvente de extraccin.
En la extraccin se emplean diversos solventes que pueden ser seleccionados
combinando criterios establecidos y la teora que se dispone. En el caso de productos como las protenas se utilizan sistemas de dos fases acuosas inmiscibles
que permiten el manejo de estos productos en forma ms apropiada.
Existe una gran variedad de equipos para realizar la operacin de extraccin
y sta puede realizarse en forma por lotes o continua. Los mtodos de diseo de
los extractores pueden ser grficos o analticos y estn basados en relaciones de
equilibrio y balances de masa.
6.6. PROBLEMAS
6.6.
267
Problemas
6.1. Selectividad de solvente. En la separacin de Ajmalicina de pKa =

6.3 y Serpentina de pKa = 10.8, dos alcaloides vegetales de estructura muy semejante; se dispone de un solvente en el cual el coeficiente de particin intrnseco
es igual para ambas especies.
Se pide:
a) Calcular el valor de Kp /Ki para ambas especies a los pH de 2, 4, 6, 8, 10
y 12.
b) Calcular la selectividad de Ajmalicina a los pH de 2, 4, 6, 8, 10 y 12.
c) Qu sistema recomienda a para realizar la extraccin?
Resp. b)
pH
2
31,621
4
31,465
6
21,065
8
620
10
7.3
12
1.1
6.2. Clculo de pKa . Una solucin de cido actico al 0.01 M presenta una
disociacin del 4 % a 25 o C.
Se pide calcular:
a) La constante de disociacin.
b) El pKa
Resp. b) 4.77
6.3. Grado de concentracin. Un volumen Vo de solucin con una concentracin Co del soluto de inters, se mezcla con un volumen V de una solucin
que contiene dos polmeros dando origen a dos fases acuosas inmiscibles (E + R)
entre las cuales se reparte el soluto. En el caso que el soluto se distribuya preferentemente en la fase superior E, expresar el grado de concentracin (GC) y
el rendimiento (p) en funcin de Vo , E, R y Kp .
6.4. Clculo de relacin de volmenes. Se desea separar una mezcla
que contiene igual cantidad de masa de dos enzimas, en un sistema de dos
fases acuosas inmiscibles en el cual las enzimas C y D presentan coeficientes de
particin de KpC = 0.5 y KpD = 0.011, respectivamente.
Se pide estimar:
a) La proporcin E/R para que la masa de C en la fase ligera E, sea igual
a la masa de D en la fase pesada R.
b) El rendimiento y la pureza de la extraccin de la enzima C, si la relacin
E/R es la determinada en a).
Resp. b) 96.4 % y 87 %
6.5. Extraccin continua de etapas en equilibrio. Una solucin que
contiene 20 g/L de estreptomicina se procesa en un sistema continuo de etapas
mltiples, en el cual el factor de extraccin empleado es igual a 3.
Se pide:
268
a) Calcular la concentracin de estreptomicina en el refinado a la salida en

los casos que el sistema conste de 1, 2, 3 y 10 etapas.
b) Cuntas etapas se recomiendan para realizar esta extraccin?
Resp. a) 1 etapa: 5 g/L.
6.6. Extraccin diferencial. Demostrar que en una extraccin diferencial
con yL = 0 y con extraccin de soluto de la fase E a la fase R, la longitud de la
columna est dada por:

E
1
xL
L=
ln
Ka A F 1
xo Kyo
6.7. Extraccin continua de un antibitico por etapas en equilibrio.
Se extrae estreptomicina de un caldo de cultivo utilizando un solvente orgnico,
en un sistema de extraccin a contracorriente de 5 etapas. El coeficiente de
particin de la estreptomicina en el sistema a un pH de 4 es de 40. El flujo de
la fase pesada R es de 150 L/min.
Se pide: Estimar el flujo de fase ligera E para reducir la concentracin de
estreptomicina en la solucin de 10 a 0.2 g/L.
Resp. 7 L/min
6.8. Eliminacin de metales pesados. En el desarrollo de un proceso
(Wisniak et al., 1990) para la eliminacin de mercurio(II) de corrientes industriales de desecho, se emplea como fase extractiva aceite de jojoba sulfurado
(acomplejante de Hg II) disuelto en queroseno.
El coeficiente de particin del Hg(II) en el sistema agua-aceite de jojoba
(queroseno) vara directamente con la concentracin de jojoba en el queroceno
e inversamente con la concentracin inicial de Hg(II) en la fase acuosa.
Los datos obtenidos en cinco etapas de extraccin intermitente utilizando
extractante fresco (20 g/L de aceite sulfurado de jojoba) en cada una de ellas,
se muestran en la tabla siguiente:
Etapa
1
2
3
4
5
Fase acuosa
ppm de Hg(II)
Inicial
Final
1091.00 146.400
146.40
19.600
19.60
2.000
2.00
0.090
0.09
0.005
Coeficiente
de particin
Kp
6.4
54.6
555.0
12,499.0
100,000.0
Se pide calcular:
a) La eficiencia de recuperacin de cada etapa.
b) La eficiencia de recuperacin global al final de cada etapa.
c) La relacin de fase acuosa a fase orgnica empleada en cada etapa (R/E).
6.6. PROBLEMAS
269
d) La cantidad de fase orgnica por litro de fase acuosa utilizada en cada

etapa y la cantidad total para las cinco etapas.
e) La cantidad de fase orgnica necesaria para procesar un litro de solucin
acuosa en una etapa y obtener la misma eficiencia que la alcanzada en las cinco
etapas.
f) Con base a los resultados anteriores que proceso se recomienda si el lmite
tolerable de Hg(II) es de 0.005 ppm.
Resp. para etapa 3: a) 89.8 % b) 99.82 % y c) 63
6.9. Extraccin diferencial de una enzima. En una columna empacada
con anillos rashing se utiliza un sistema de dos fases inmiscibles PEG 4000 Na2 SO4 para extraer amiloglucosidasa de la fase ligera dispersa (PEG 4000)
hacia la fase continua (Na2 SO4 ). La enzima presenta un coeficiente de particin
en el sistema de 0.0345 (Patil et al., 1991). La viscosidad de la fase dispersa es
de 24 103 kg/ms.
La resistencia a la transferencia de masa se localiza en la fase ligera dispersa
y puede ser caracterizada mediante el coeficiente de transferencia de masa dado
por:
donde:
ka = 6 107 0.49 2.666
: Velocidad superficial de la fase dispersa.[m/s].

: Viscosidad de la fase dispersa. [kg/ms].
ka : Coeficiente de transferencia de masa. [s1 ].
Se pide:
a) Determinar la longitud necesaria de una columna de 56 mm de dimetro
interno, alimentada con un flujo de 985 mm3 /s de fase dispersa y 68 mm3 /s
de fase pesada, para producir una disminucin del 20 % de la concentracin de
enzima de la fase ligera.
b) Obtener una grfica de la longitud necesaria de la columna en funcin de
R para las condiciones de extraccin anteriores.
c) Que flujo R recomienda a para esta operacin?
Resp. a) 1053 mm
6.10. Extraccin fraccionaria. En un sistema de extraccin fraccionaria
tipo Craig los componentes B y C de una mezcla presentan coeficientes de
particin de KpB = 0.33 y KpC = 3.0, respectivamente.
Se pide: Obtener el perfil de concentracin de cada uno de los solutos a lo
largo de los tubos, en los siguientes casos:
a) E/R = 0.2 y nmero de transferencias 30, 60 y 90.
b) E/R = 1 y nmero de transferencias de 30, 60 y 90.
c) E/R = 5 y nmero de transferencias de 30, 60 y 90.
270
d) Cul de los 9 sistemas recomienda?

6.11. Extraccin diferencial. Las protenas pueden ser extradas sin ser
desnaturalizadas con soluciones de iso-octano que contengan el detergente aerosol
OT. Las protenas se solubilizan dentro de las miscelas que forma el detergente.
Debido a que la cantidad de protena solubilizada depende fuertemente del pH,
las protenas pueden ser extradas con el solvente orgnico a un pH dado cercano
al punto isoelctrico, y posteriormente desorberse a un pH diferente.
Se est estudiando una solucin acuosa que contiene 0.2 % de protena, cuya
relacin de equilibrio est dada por:
x = 2.9y
donde x es la concentracin de protena en la fase orgnica y y es la concentracin de equilibrio en la fase acuosa. La relacin volumtrica entre las fases es
de 6.8 L de solucin acuosa por cada 3.8 L de solucin orgnica.
Se pide: Calcular la concentracin del refinado a la salida y la fraccin
extrada cuando se utiliza una columna de extraccin diferencial de 2.0 m. en
la cual el HT U (basado en la concentracin acuosa) es 0.85 m.
Resp. y = 0.04 % y p = 0.8.
6.12. Clculo del nmero de etapas. A partir del programa del Ejemplo
6.9, escribir un programa que calcule las etapas necesarias para alcanzar un
determinado rendimiento en una cascada a contracorriente con equilibrio lineal.
6.13. Clculo de ka. Una operacin a contracorriente de etapas sin equilibrio se espera realizar bajo las siguientes condiciones: x0 = 0, yn+1 = 10 g/L;
K = 20; R = 10.0 L/min; E = 1.0 L/min y n = 3.
Se pide:
a) Calcular el valor del coeficiente de transferencia de masa, ka, para que la
operacin alcance el equilibrio.
b) Calcular las concentraciones de equilibrio.
6.14. Extraccin en un SDFA en cascada. Se va extraer una protena
recombinante a partir de un caldo de fermentacin utilizando un ligando de
afinidad unido a PEG. La constante de particin de la protena conjugada es de
K = 40 y el volumen del caldo es de 1, 000 L. En el proceso se utilizan 5 etapas
de extraccin y el objetivo es reducir la concentracin de protena en el caldo
de 10 g/L a 0.2 g/L.
Se pide calcular:
a) El volumen de necesario de la fase rica en PEG.
b) El nmero de etapas necesarias si se desea obtener un factor de concentracin xn /yn+1 = 30 y la misma recuperacin.
Resp. a) 47.23 L y b) 10 etapas.
6.6. PROBLEMAS
271
6.15. Extraccin de Penicilina G. La extraccin de penicilina G se realiza en dos pasos. En el primer paso se extrae la penicilina G del caldo de
fermentacin hacia la fase orgnica, utilizando un pH cido bajo que favorece la
purificacin. En el segundo paso se transfiere la penicilina G a una fase acuosa
utilizando un pH ligeramente cido. Esto permite la cristalizacin posterior de
la penicilina sin la presencia del solvente.
En un proceso continuo para la extraccin de Penicilina G, para cada uno
de los pasos se utiliza un extractor tipo Podbielniak. Cada equipo opera con dos
etapas de extraccin tericas.
En el primer paso, la alimentacin al extractor es de 3, 000 L/h y se utiliza
una relacin de caldo a solvente de 10. La extraccin se opera a un pH=2.0 de
tal manera que Kp1 =60.
En el segundo paso, se utiliza un volumen de agua de 900 L y se opera a
pH=5.6 de tal manera que Kp2 =2.
Se pide calcular:
a) La recuperacin de penicilina G en el primer paso.
b) La recuperacin de penicilina G en el segundo paso.
c) La recuperacin global de penicilina G.
Resp. a) 98 % y c) 95 %.
272
6.7.
Bibliografa
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Captulo 7
Adsorcin
7.1.
Introduccin
La adsorcin es una de las operaciones ms utilizadas en la etapa de concentracin de caldos acuosos diluidos. Mediante la adsorcin las molculas de
un soluto se concentran en una superficie slida por la accin de fuerzas intermoleculares entre el soluto y el slido. Debido a la naturaleza de estas fuerzas el
fenmeno es fcilmente reversible. La adsorcin es esencialmente un fenmeno
de superficie y debe distinguirse de la absorcin la cual implica la penetracin
de una sustancia en el cuerpo de otra.
La concentracin de uno o varios solutos de un caldo mediante una operacin
de adsorcin requiere cuatro pasos (Fig. 7.1). Primero el adsorbente y la solucin
se ponen en contacto. Al efectuarse la adsorcin el soluto se une preferentemente
a la superficie del adsorbente respecto a otros solutos. Una vez concluida la
adsorcin es necesario lavar la columna con una solucin que no provoque la
desorcin del soluto de inters. Al terminar el lavado se efecta la recuperacin
del soluto utilizando un fluido que favorezca la desorcin, operacin conocida
como elucin. Finalmente, se trata la columna para restablecer su condicin
inicial mediante una regeneracin. Esta operacin puede incluir un tratamiento
de limpieza con una solucin alcalina.
Es importante resaltar que el anlisis ingenieril de las etapas de adsorcin,
lavado y elucin, es anlogo. En este captulo slo se revisa lo referente a la
etapa de adsorcin por considerarse que los principios aqu expuestos pueden
extenderse al anlisis de las otras etapas.
En el anlisis de la operacin de adsorcin, al igual que en otras operaciones
de transferencia de masa, se utilizan modelos para el diseo, anlisis de alternativas (columnas en serie vs. columnas en paralelo), optimizacin, o simplemente
para la obtencin de datos experimentales. La formulacin de algunos de estos
modelos requiere:
a) El establecimiento de las relaciones de equilibrio y de la capacidad de
adsorcin de los sistemas.
276
CAPTULO 7. ADSORCIN
Figura 7.1: Las etapas de la adsorcin como proceso unitario. Adsorcin, Lavado,
Elucin y Regeneracin. Fuente: Clonis,1990. Reproducida con el p erm iso de Marcel
c
Dekker Inc. Copyright 1990.
b) El establecimiento de la rapidez de la adsorcin con respecto a los fenmenos difusivos y cinticos de superficie.
c) Los balances de masa y energa del sistema de adsorcin especfico (por
lotes, continuo, serie, paralelo, etc.).
d) Las condiciones iniciales y de frontera del sistema.
En la seccin 7.2 de este captulo se presentan los fundamentos de la operacin de adsorcin como la qumica de la adsorcin, los tipos de adsorbentes,
las curvas de equilibrio de los sistemas llamadas isotermas de adsorcin y los
aspectos bsicos de la cintica de la adsorcin. En la seccin 7.3 se describen
los principales equipos utilizados en las operaciones de adsorcin y en la seccin
7.4 se presentan los balances y principios para el diseo de tales equipos.
7.2.
Fundamentos
Las operaciones de adsorcin son utilizadas en la obtencin de varios tipos de

productos biotecnolgicos como aminocidos, antibiticos, vitaminas, protenas
y DNA. Tambin son muy empleadas con otros propsitos como la remocin de
partculas virales en procesos de obtencin de farmacuticos como anticuerpos
monoclonales (Strauss et al., 2009). Debido a lo anterior, cada vez existe una
7.2. FUNDAMENTOS
277
mayor necesidad de profundizar en los aspectos fundamentales de la operacin

(principalmente en el contexto del procesamiento de caldos biolgicos), de los
cuales se pueden destacar cuatro:
Tipos de adsorcin segn la interaccin soluto-adsorbente.
Principales tipos de adsorbentes.
Relaciones de equilibrio.
Cintica de la adsorcin.
7.2.1.
Tipos de Adsorcin: Interaccin Soluto-Adsorbente
De acuerdo al tipo de interaccin del soluto con el adsorbente, se pueden

distinguir cuatro tipos de adsorcin bsicos (Fig. 7.2): a) fsica, b) inica, c)
hidrofbica y d) afinidad.
En la adsorcin fsica las fuerzas de atraccin entre el soluto y el adsorbente
son de tipo London-van Der Waals. En la adsorcin inica la diferencia de cargas
entre el adsorbente y el soluto genera atracciones electrostticas ms fuertes y
selectivas. La adsorcin hidrofbica se produce por interacciones entre regiones
hidrofbicas del soluto y el adsorbente. La adsorcin por afinidad est basada
en interacciones altamente especficas entre el adsorbente y el soluto, lo que
caracteriza a este tipo de adsorcin como altamente selectiva.
Figura 7.2: Tipos de adsorcin. a) Fsica, b) Inica, c) Hidrofbica y d) Afinidad.
7.2.2.
Tipos de Adsorbentes
En el establecimiento de un sistema de adsorcin es necesario seleccionar

cuidadosamente el tipo de adsorbente que se va a utilizar. Las principales caractersticas para tomar la decisin son: capacidad, selectividad, regenerabilidad,
278
CAPTULO 7. ADSORCIN
cintica, compresibilidad, compatibildad y costo del adsorbente. Estas caractersticas estn relacionadas con las propiedades fsicas y qumicas del adsorbente, tales como resistencia mecnica, rea por unidad de volumen, porosidad
interna, forma, tamao, composicin, carga e hidrofobicidad.
La capacidad de adsorcin es la propiedad ms importante y es la cantidad
de soluto que el adsorbente puede retener por unidad de volumen o masa. La
seletividad es una medida de la razn de soluto de inters adsorbido respecto a
los contaminantes. Una propiedad importante de los adsorbentes es que puedan
ser reutilizados mediante su regeneracin con sustancias alcalinas o cidas. La
estructura fsica (tamao, forma y tipo de poros) y la composicin qumica de los
adsorbentes est relacionada con la cintica de la adsorcin. La compresibilidad
de los adsorbentes limita la presin de operacin en los lechos. La composicin
qumica del adsorbente y la solucin a manejar deben ser compatibles. El costo
del adsorbente es un factor de escalamiento muy importante.
Adsorbentes fsicos
Actualmente se utilizan diferentes tipos de adsorbentes en la operacin de
adsorcin. En el caso de la adsorcin fsica, el adsorbente ms utilizado en
bioseparaciones es el carbn activado (vegetal) y la slica gel (Fig. 7.3a). Existen
varias formas de slica gel como la de borosilicato poroso y las aereogeles.
Figura 7.3: Estructuras bsicas de adsorbentes. a) Adsorbentes fsicos y b) Zeolitas de intercambio inico
Tambin son utilizadas como adsorbentes fsicos resinas sintticas. Las resinas
no polares derivadas del estireno-divinilbenceno son utilizadas para la adsorcin
de solutos no polares a partir de solventes polares. Las resinas basadas en steres
acrlicos tienden a ser ms efectivas para remover solutos polares de solventes
no polares.
Adsorbentes inicos
Los adsorbentes utilizados en intercambio inico pueden ser inorgnicos, sintticos u orgnicos. Los inorgnicos como las zeolitas son poco utilizados para
aplicaciones biotecnolgicas (Fig. 7.3b). Los adsorbentes inicos sintticos estn
formados por matrices de polmeros unidos lateralmente, como la poliacrilamina,
polimetacrilato y el poliestireno devinilbenceno. A la matriz se le unen grupos
funcionales que le dan la capacidad de intercambio inico.
7.2. FUNDAMENTOS
279
Las resinas de estireno-divinilbenceno catinicas se producen en un paso por

accin de un cido sobre el grupo benceno (Fig. 7.4). Las aninicas se producen
en dos pasos: Primeramente, se produce una cloro-metilacin del benceno. En
el segundo paso, se efecta una aminacin. Las matrices de celulosa activada
tambin son muy utilizadas para adsorcin por intercambio inico. Algunas
matrices se producen por activacin de bases orgnicas como la celulosa.
Figura 7.4: Estructura de adsorbentes de intercambio inico. a) Derivados del

estireno-divinil benceno y b) Derivados de celulosa.
Adsorbentes hidrofbicos
Los adsorbentes hidrofficos se fabrican de carbohidratos como la agarosa
entrecruzada (Sefarosa), dextrano (Sefadex) y celulosa (Celufine). Tambin se
utilizan matrices de slica y polmeros sintticos. Los ligandos pueden ser alcanos
lineales de 1 a 8 carbonos tpicamente, grupos aromticos como el fenilo y ligandos de hidrofobicidad media como el polietilengligol (PEG), polipropilenglicol
(PPG) y politetrametilenglicol (PTMG).
Adsorbentes de afinidad
En la adsorcin por afinidad el adsorbente consta de dos partes, el soporte
o matriz y el ligando. El ligando se une a la matriz por medio de un brazo que
evita impedimentos estricos en un determinado arreglo (Fig. 7.5).
Las matrices utilizadas en la adsorcin por afinidad son fabricadas de polmeros
naturales y sintticos como: Celufine, poliacrilamida (o derivados), Sefadex y Sefarosa (Fig. 7.6).
280
CAPTULO 7. ADSORCIN
Figura 7.5: Adsorcin por afinidad. a) Soporte de slice, b) Ligando fijo, c)

Ligando mvil parte hidrofbica, d) Ligando mvil parte hidroflica, e) Piridina
y f) Protena. Fuente: Torres et al., 1988. Reproducida con el permiso de Academic Press.
c
Copyright 1988.
Propiedades de la matrices En general, es deseable que las matrices sean

estables, que presenten grupos funcionales reactivos para la inmovilizacin de los
ligandos, tengan una adecuada permeabilidad, eviten la unin inespecfica del
soluto, puedan formar densidades adecuadas de ligandos y su costo sea adecuado.
En la Tabla 7.1 se presentan las propiedades particulares de algunas de estas
matrices.
Tabla 7.1: Propiedades de matrices.
Propiedad
Estabilidad
Reactividad
Permeabilidad
Especificidad
No. de ligandos
Costo
Slice
buena
alta
buena
baja
bajo
bajo
Celulosa
buena
alta
baja
baja
bajo
bajo
Material
Poliacrilamida
buena
alta
buena
baja
alto
medio
Agarosa
buena
baja
buena
alta
alto
alto
Inmovilizacin de los ligandos Existen varios procedimientos que se utilizan para inmovilizar el ligando en la matriz, que dependen del tipo de grupo
funcional sobre la matriz, el tipo de ligando y de la estabilidad de stos. Generalmente los grupos funcionales utilizados son hidroxilos, aminos y carbonilos. En
la Figura 7.7 se presenta uno de los procedimientos utilizados para activar una
matriz de agarosa, lo cual se efecta mediante dos pasos qumicos. Inicialmente
7.2. FUNDAMENTOS
281
Figura 7.6: Estructura qumica de algunas matrices comerciales de adsorcin

por afinidad. Fuente: Yarmush y Colton, 1985. Reproducida con el permiso de Elsevier
c
Science Inc. Copyright 1985.
se activa la matriz con bromuro de ciangeno. Posteriormente se puede unir un

radical por medio de un grupo amino para formar un derivado de la isourea.
Tipos de ligandos Los ligandos son molculas de alta afinidad por el soluto
de inters y pueden ser de varios tipos (Fig. 7.8).
a) Bioespecficos estrictos:
Sustratos para adsorcin de enzimas.
Antgenos para adsorcin de anticuerpos.
Sondas para obtencin de cidos nucleicos.
Protenas acarreadoras para obtencin de hormonas.
b) Bioespecficos amplios: Cofactores y lectinas.
c) Pseudoespecficos biolgicos: Aminocidos.
d) Pseudoespecficos no biolgicos: Colorantes y metales.
7.2.3.
Relaciones de Equilibrio
El anlisis de los procesos de adsorcin requiere de datos de equilibrio que

se expresan normalmente como isotermas de adsorcin. Las isotermas son parte
esencial para modelar la adsorcin y por lo tanto para el diseo, clculo de
eficiencias y costos de la adsorcin. Las isotermas nos permiten estimar el grado
de recuperacin que puede ser alcanzado, la cantidad de adsorbente requerido
y la sensibilidad del proceso respecto a la concentracin del producto.
En los procesos de adsorcin que se presentan en las bioseparaciones existen
cuatro tipos bsicos de isotermas (Fig. 7.9): a) irreversible, b) Freundlich, c)
282
CAPTULO 7. ADSORCIN
Figura 7.7: Mtodos de activacin de matrices. a) Activacin de matrices con

bromuro de ciangeno y b) Reaccin del ster de cianato con un derivado amino
para obtener un derivado de isourea. Fuente: Yarmush y Colton, 1985. Reproducida
c
con el p erm iso de Elsevier Science Inc. Copyright 1985.
Langmuir y d) lineal (Hall et al., 1966). Las isotermas irreversibles son caractersticas de sistemas altamente especficos. Las isotermas tipo Freundlich normalmente se presentan en sistemas de adsorcin por intercambio inico. La adsorcin por afinidad generalmente presenta isotermas tipo Langmuir. La isoterma
lineal es menos comn, pero puede ser utilizada para aproximar otras isotermas
en la regin de baja concentracin de soluto.
Ecuaciones de las isotermas
La isoterma de Freundlich se describe por medio de una ecuacin exponencial
emprica de la siguiente forma:
q = Kcn
(7.1)
donde q es la cantidad de soluto adsorbida (incluyendo el soluto en el lquido

de los poros del adsorbente) por cantidad de adsorbente, c es la concentracin
de soluto en la solucin, n es una constante adimensional y K es una constante
cuyas unidades dependen de n. Tanto K como n deben ser obtenidas experimentalmente. En este tipo de experimentos generalmente se pone en contacto
cantidades iguales del adsorbente con soluciones de soluto de diferentes concentraciones y se mide las concentraciones una vez alcanzado el equilibrio.
Las constantes de la isoterma de Freundlich pueden ser obtenidas por medio
de una grfica log-log de los datos experimentales, determinndose K con la
ordenada en el origen y n de la pendiente de la recta que se obtiene.
Cuando las isotermas de adsorcin son cncavas hacia el eje de las abscisas
o sea cuando n < 1, la isoterma se llama favorable, ya que se puede obtener una
7.2. FUNDAMENTOS
283
Figura 7.8: Tipos de ligandos en adsorbentes de afinidad. Adaptada de: Vijac

yalakshmi, 1989. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. Copyright 1989.
Todos
los derechos reservados.
buena adsorcin an a concentraciones bajas de soluto. Las isotermas cncavas

hacia el eje de las ordenadas o sea para n > 1, se llaman desfavorables.
Las isotermas lineales pueden ser descritas por la ecuacin de una recta que
pasa por el origen de la forma:
q = Kc
(7.2)
en este caso los datos experimentales se grafican en coordenadas cartesianas

para determinar K.
Las isotermas tipo Langmuir estn dadas por expresiones de la siguiente
forma:
q=
qm c
Kd + c
(7.3)
donde qm es la capacidad mxima del adsorbente y Kd es la constante de equilibrio de desorcin. Estas constantes deben ser obtenidas experimentalmente.
En este caso es preferible manejar los datos experimentales utilizando la forma
recproca (mtodo del doble recproco) de la ecuacin (7.3):
1
Kd 1
1
=
+
q
qm c qm
(7.4)
de tal manera que en una grfica cartesiana de 1/q vs 1/c, se puede obtener una
recta de pendiente Kd /qm y ordenada en el origen 1/qm . Las unidades de qm y
Kd de esta isoterma son las mismas que las de q y c, respectivamente.
284
CAPTULO 7. ADSORCIN
Figura 7.9: Isotermas de adsorcin ms comunes. Fuente: Belter et al., 1988.

c
Un caso particular de la isoterma de Langmuir se presenta cuando Kd es

muy pequea y la adsorcin es irreversible. En este caso q = qm para cualquier
valor de c.
Mecanismo de la isoterma de Lagmuir
La forma de las isotermas de Langmuir puede explicarse mediante un mecanismo terico bien fundamentado. Se propone que sobre la superficie del adsorbente existen sitios especficos en los que las partculas de soluto se unen
reversiblemente. En un momento dado durante la adsorcin, coexisten sitios
ocupados por soluto y sitios vacos. La adsorcin en el sentido directo es proporcional a la concentracin de soluto y a la concentracin de sitios vacos.
En el sentido inverso la adsorcin es proporcional a la concentracin de sitios
ocupados.
De acuerdo a lo anterior, la adsorcin puede ser expresada en forma de una
ecuacin qumica de la siguiente forma:
soluto + sitios vacos sitios ocupados
(7.5)
En el equilibrio se puede definir una constante de equilibrio de desorcin Kd

de acuerdo con la siguiente expresin:
Kd =
[soluto][sitios vacos]
k1
=
k1
[sitios ocupados]
(7.6)
7.2. FUNDAMENTOS
285
El nmero total de sitios activos para la adsorcin es constante e igual al

nmero de sitios vacos ms los sitios ocupados o sea:
[sitios totales] = [sitios vacos] + [sitios ocupados]
(7.7)
Combinando las ecuaciones (7.6) y (7.7) se puede obtener la expresin:

[sitios ocupados] =
[sitios totales][soluto]
Kd + [soluto]
(7.8)
debido a que q es proporcional a la concentracin de sitios ocupados y qm a la

concentracin de sitios totales, la ecuacin (7.3) puede ser obtenida a partir de la
expresin (7.8), es decir este mecanismo fundamenta la expresin de Langmuir.
Mecanismo de intercambio inico
Las isotermas de intercambio inico pueden ser racionalizadas en forma
anloga. Sin embargo, en este caso los sitios de adsorcin en un momento dado,
o estn ocupados por el in de soluto o estn ocupados por el in que normalmente est unido a la superficie del adsorbente. La expresin final depende del
nmero de iones de soluto que se intercambian por in de adsorbente.
En el caso de un intercambio monovalente caracterstico de las resinas sintticas la adsorcin puede ser expresada como:
Na+ + HR NaR + H+
(7.9)
donde HR representa los sitios de intercambio inico en estado normal del adsorbente, y NaR representa los sitios de intercambio una vez que ha sido intercambiado el in de soluto. En equilibrio la constante de desorcin est dada
por:
Kd =
[Na+ ][HR]
[NaR][H+ ]
(7.10)
La concentracin de radicales R totales en la superficie del adsorbente est

dada por:
[R ] = [NaR] + [HR]
(7.11)
Combinando las ecuaciones (7.10) y (7.11) se puede obtener la ecuacin:

[NaR] =
[R ][Na+ ]
Kd [H+ ] + [Na+ ]
(7.12)
como q es proporcional a [NaR] y qm es proporcional a [R ], la adsorcin inica

monovalente puede ser descrita por medio de una expresin tipo Langmuir,
siempre y cuando la concentracin [H+ ] permanezca constante; como en el caso
de que se utilice una solucin amortiguadora. En el caso de adsorciones inicas
no monovalentes el anlisis anlogo frecuentemente conduce a expresiones tipo
Freundlich.
286
CAPTULO 7. ADSORCIN
Ejemplo 7.1. Adsorcin de Albmina de Suero de Bovino (ASB) a

pH = 7 en un adsorbente aninico Q-Sefarosa.
Los datos de equilibrio de la adsorcin de ASB en Q-Sefarosa se presentan
en la siguiente tabla (Draeger y Chase, 1990.)
c (mg/mL)
0.05
0.10
0.20
1.00
2.00
4.00
q (mg/mL)
30.00
43.70
56.53
73.85
76.81
78.37
Log(c)
-1.30
-1.00
-0.70
0.00
0.30
0.60
Log(q)
1.477
1.640
1.752
1.868
1.885
1.894
1/c
20.00
10.00
5.00
1.00
0.50
0.25
1/q
0.0333
0.0229
0.0177
0.0135
0.0130
0.0128
Se pide: Encontrar la expresin matemtica de la isoterma que mejor ajusta

los datos.
Solucin:
La solucin se presenta en forma grfica en la Figura 7.10. De acuerdo con
la Figura 7.10a, una isoterma lineal no se ajusta a los datos. La grfica log-log
de los datos (Fig. 7.10b) no produce una lnea recta, por lo que la isoterma no
es del tipo Freundlich. Utilizando el mtodo del doble recproco se encuentra
que la isoterma de Langmuir presenta un buen ajuste a los datos (Fig. 7.10c).
La ordenada en el origen es 0.0125, entonces qm = 80 mg/mL. La pendiente de
la recta es igual a 1.0 103 , por lo que Kd = 0.08 mg/mL. En la Figura 7.10d
se presentan los datos experimentales y la lnea continua representa el modelo
de Langmuir ajustado.
7.2.4.
Cintica de la Adsorcin
El estudio de las isotermas de adsorcin nos permite determinar para un

sistema soluto-adsorbente dado, el grado de separacin que puede ser logrado y
la sensibilidad del proceso con respecto a la concentracin del soluto. Sin embargo, para el desarrollo de un modelo de la adsorcin es necesario poder obtener,
mediante el empleo de coeficientes de transferencia de masa, la velocidad de la
adsorcin o el tiempo necesario para alcanzar una cierta separacin. Este tipo
de modelos pueden ser empleados para el diseo y optimizacin de la operacin
de adsorcin (Fig. 7.11).
En el caso que la adsorcin sea bastante rpida, el sistema permanecer
esencialmente en equilibrio y los modelos se simplifican. En la mayora de los
casos las interacciones soluto-adsorbente no ocurren instantneamente.
La velocidad efectiva de la adsorcin depende de las condiciones de operacin
(flujo, temperatura, composicin y presin), de la configuracin del sistema (por
lotes, columna, etc.) y del tamao del equipo donde se realizar la operacin.
El estudio de estos efectos se divide en dos grandes conceptos:
a) Los mecanismos de transporte (fsicos y qumicos).
b) Los efectos de mezclado.
7.2. FUNDAMENTOS
287
Figura 7.10: Solucin grfica del Ejemplo 7.1. a) Datos experimentales, b) Isoterma de Freundlich, c) Isoterma de Langmuir y d) Datos y modelo ajustado de
Lagmuir.
Mecanismos de transporte
El estudio de los mecanismos de transporte consiste en establecer las expresiones de la rapidez de la adsorcin a nivel local, es decir considerando el
comportamiento de una partcula de adsorbente o un elemento de volumen de
un sistema.
En los procesos de adsorcin se utilizan materiales porosos que ofrecen una
gran rea por unidad de volumen con el propsito de recuperar la mayor cantidad
de soluto posible en un volumen dado. Para que una partcula de soluto pueda
ser adsorbida en la superficie de un poro del adsorbente, el soluto tiene que
pasar del seno de la fase lquida a la superficie del adsorbente (Fig. 7.12).
Varias resistencias al movimiento del soluto existen en este proceso que
pueden visualizarse principalmente como:
a) Resistencia de la pelcula del lquido que rodea el adsorbente. Primero el
soluto difunde desde el seno del lquido a travs de la pelcula de lquido que
rodea a la partcula de adsorbente.
b) Resistencia a la difusin en el seno del adsorbente. En algunos tipos de
adsorbentes el soluto difunde a travs del seno del adsorbente. A este fenmeno
se le conoce como difusin en la fase del adsorbente.
c) Resistencia a la difusin dentro del poro. Debido a que el rea de la super-
288
CAPTULO 7. ADSORCIN
Figura 7.11: Diseo de adsorbedores. Adaptada de: Wang, 1990.
Reproducida con
c
el perm iso de M arcel Dekker Inc. Copyright 1990.
ficie interior del poro es mucho mayor que la superficie exterior, generalmente
la adsorcin se efecta principalmente dentro del poro, por lo que el soluto debe
difundir a travs del lquido al interior de los poros.
d) Resistencia a la reaccin en la superficie. El soluto una vez situado en el
sitio de adsorcin se une a ste por medio de una reaccin de superficie, la cual
es un proceso finito pero generalmente ms rpido que los procesos anteriores.
Control de la resistencia en la pelcula Las resistencias anteriores actan
combinadas en serie y en paralelo como puede apreciarse en la Figura 7.12.
Particularmente, la resistencia de la difusin en el poro puede relacionarse directamente con las otras dos. Generalmente la resistencia de la pelcula o la del
poro o una combinacin de ambas, controla la velocidad de adsorcin local.
Cuando la resistencia de la pelcula es mucho mayor que la del poro o la de
la reaccin de superficie, la velocidad de adsorcin est controlada a nivel local
por el flujo del soluto a travs de la pelcula que rodea al adsorbente. En este
caso la velocidad de adsorcin puede expresarse como:
q
= kL a(c c )
t
(7.13)
donde:
kL : Coeficiente de transferencia de masa. [M/(T L2 M/L3 lquido)].
a: rea especfica del adsorbente. [L2 /L3 ].
c: Concentracin de soluto en el seno de la fase lquida. [M/L3 ].
c : Concentracin hipottica de soluto en el lquido, en equilibrio con la concentracin de soluto en el adsorbente. [M/L3 ].
7.2. FUNDAMENTOS
289
Figura 7.12: Resistencias en la adsorcin. a) Partcula adsorbente, b) Poro de

adsorbente, c) Perfil de concentracin del soluto en la partcula y d) Analoga
de resistencias. Adaptada de: Levenspiel, 1962. Reproducida con el p erm iso de John
c
Wiley and Sons. Copyright 1962.
El parmetro a puede ser correlacionado con el dimetro de la partcula de

adsorbente dp de acuerdo a la expresin:
a=
6
dp
(7.14)
La resistencia de la pelcula por s misma rara vez controla la rapidez de la

transferencia de masa, excepto en los casos en que la partcula de adsorbente es
pequea y la difusividad en el poro grande.
Estimacin del coeficiente de transferencia de masa en la pelcula
Para sistemas de adsorcin en columnas, el coeficiente de transferencia de masa
kL generalmente se puede correlacionar con una expresin de la forma:
Sh = C1 + C2 (Re)a (Sc)b
(7.15)
290
CAPTULO 7. ADSORCIN
donde C1 , C2 , a y b son constantes. Sh, Re y Sc, son los nmeros adimensionales

de Sherwood, Reynolds y Schmidt dados por las siguientes relaciones:
Sh =
kL dp
DAB
(7.16)
Rep =
dp L
L
(7.17)
L
L DAB
(7.18)
Sc =
En el caso de adsorcin de biomolculas se han utilizado las siguientes correlaciones para estimar kL :
En tanques agitados (Geankoplis, 1983):
2DAB
kL =
+ 0.31
dp
L
L DAB
2/3
g
2L
1/3
(7.19)
En columnas (Foo y Rice, 1975):

1/3
Sh = 2 + 1.45Re1/2
p Sc
(7.20)
Estimacin de la difusividad Tambin existen correlaciones para estimar difusividades de biomolculas, como la utilizada para protenas (Polson
1950),
DAB = 9.4 1015
T
L (MA )1/3
(7.21)
T
L (pb)2/3
(7.22)
y para pDNA (Prazeres, 2008):

DAB = 3.31 1015
donde:
DAB : Difusividad. [m2 /s].
: Velocidad superficial del lquido (Flujo/rea). [m/s]
: Viscosidad. [kg/ms].
T : Temperatura. [ K].
MA : Peso molecular soluto.
bp: Nmero de pares de bases del plsmido.
7.2. FUNDAMENTOS
291
Control de la difusin del soluto en el seno del adsorbente La difusin

en la fase slida del soluto una vez que ha pasado del seno del lquido a la fase
slida, se presenta en algunos slidos homogneos permeables como las resinas
que se utilizan en intercambio inico o en adsorbentes con porosos cubiertos con
pelculas mviles, o en lquidos utilizados para impregnar la partcula porosa.
Considerando una geometra esfrica uniforme el balance de soluto en la partcula est dado por:
2

q 2 q
q
= Ds
+
(7.23)
t
r2
r r
donde:
Ds : Difusividad efectiva del soluto en la fase slida. [(L2 /t)].

r: Coordenada radial al interior de la partcula. [L].
q: Concentracin de soluto en la fase slida. [M/L3 ].
Fuerza impulsora lineal en la superficie (LDF) La ecuacin (7.23)
suele ser aproximada utilizando una fuerza impulsora lineal expresndose de la
siguiente forma:
q
= ks a(q q)
(7.24)
t
donde q es una concentracin hipottica de equilibrio con la concentracin de
soluto en el seno de la fase lquida, y el parmetro ks es el coeficiente de transferencia de masa que se correlaciona con la difusividad mediante la ecuacin:
ks a =
60Ds
d2p
(7.25)
Control de la difusin del soluto en la fase lquida al interior de los

poros Cuando la velocidad de adsorcin est controlada por la difusin del
soluto al interior de los poros de la partcula de adsorbente, hasta el sitio de
adsorcin, el balance de soluto al interior de la partcula est dado por la expresin:
2

ci
ci 2 ci
qi
i
= i Di
+
(1 i )
(7.26)
t
r2
r r
t
ci : Concentracin de soluto en la fase lquida al interior del poro. [M/L3 ].
qi : Concentracin de soluto en la fase slida. [M/L3 ].
Di : Difusividad del soluto al interior del poro. [L2 /t].
i : Porosidad de la partcula al soluto de inters. [L3 /L3 ].
292
CAPTULO 7. ADSORCIN
En el caso en que la acumulacin del soluto al interior del poro sea mucho
menor que la velocidad de la adsorcin, la ecuacin (7.26) puede ser escrita
como:

2

i
ci 2 ci
qi
=
Di
+
(7.27)
t
1 i
r2
r r
para lquidos la difusividad Di puede ser expresada como:

Di =
DAB
o
(7.28)
donde o es la tortuosidad del adsorbente (una medida de la estructura de

los poros) y DAB es la difusin molecular del soluto en un lquido libre de
adsorbente.
Fuerza impulsora lineal en el poro ( LDF) La ecuacin (7.27) puede
aproximarse utilizando una fuerza impulsora lineal para obtener la ecuacin
siguiente:
qi
= kp a(q q)
(7.29)
t
donde q es una concentracin hipottica de equilibrio con la concentracin de
soluto en el seno de lquido , q es la concentracin promedio de soluto en el
adsorbente. El coeficiente kp a puede correlacionarse con la difusividad efectiva
del poro mediante la siguiente expresin:
kp a =
60i Di
d2p
(7.30)
Control de la reaccin de superficie Generalmente la reaccin de adsorcin en la superficie del adsorbente es mucho ms rpida que los otros mecanismos y rara vez es el mecanismo controlante. En las expresiones cinticas
ms utilizadas la reaccin de superficie es tratada como una reaccin qumica,
reversible o irreversible, de un cierto orden.
Dos expresiones comnmente utilizadas principalmente para sistemas de intercambio inico, son:
Cintica reversible de primer orden:
q
= k1 c k1 q
t
Cintica reversible de segundo orden:
(7.31)
q
= k1 c(qm q) k1 q
(7.32)
t
donde k1 y k1 son las constantes cinticas de adsorcin y desorcin, respectivamente. El parmetro qm es la capacidad mxima de adsorcin del adsorbente.
7.2. FUNDAMENTOS
293
Efectos de mezclado
La velocidad de adsorcin efectiva tambin puede disminuir por efectos de un
mezclado imperfecto. Esta situacin es caracterstica de columnas largas donde
se presentan irregularidades en el flujo (canalamiento) o en el mezclado (espacios
muertos, difusin molecular o dispersin axial).
En la construccin de algunos modelos de adsorcin no se consideran los
efectos de mezclado y de flujo no ideal. Sin embargo, debido a que en el proceso de escalamiento de columnas este efecto puede ser importante, es necesario
considerar algunos aspectos fundamentales de este fenmeno.
Uno de los modelos ms utilizados para describir la desviacin del comportamiento ideal del flujo al interior de columnas, es el modelo de flujo tapn con
dispersin (Fig. 7.13), donde los efectos de la dispersin axial debida a remolinos
y de la difusin molecular, se agrupan en el concepto del coeficiente efectivo de
dispersin axial, en funcin del cual se puede definir un coeficiente aparente de
transferencia de masa dado por:
Figura 7.13: Modelo de flujo tapn con dispersin. Adaptada de: Levenspiel,
c
1962. Reproducida con el perm iso de John Wiley and Sons. Copyright 1962.
Todos los derechos
reservados.
kd a =
2
Dax
(7.33)
donde:
Dax : Coeficiente de dispersin axial. [L2 /t].
: Velocidad superficial de flujo. [L/t].
Es conocido que para flujo laminar de lquidos en lechos empacados (caso
ms comn) el nmero de Reynolds basado en el dimetro de las partculas del
lecho es menor a 10. Bajo esta consideracin el nmero de Peclet (el cual es una
medida del grado de dispersin en la columna) toma un valor constante de 2
(Fig. 7.14) entonces,
dp
= 0.5
(7.34)
Dax
donde P e es el nmero de Peclet (adimensional). Las ecuaciones (7.33) y (7.34)
permiten obtener una expresin para el coeficiente aparente de transferencia de
Pe =
294
CAPTULO 7. ADSORCIN
Figura 7.14: Dispersin en lechos empacados. Adaptada de: Levenspiel, 1962.

c
masa por dispersin, de tal manera que la expresin de la velocidad de adsorcin

se puede aproximar a:
q
= kd a(c c )
t
7.3.
(7.35)
Equipos de Adsorcin
Las operaciones de adsorcin pueden llevarse a cabo en tanques agitados,

por lotes o continuos (Fig. 7.15). Este tipo de sistemas son poco usados a nivel
industrial por incosteables, pero resultan muy tiles en la experimentacin de
laboratorio para la obtencin de datos de diseo.
Figura 7.15: Sistemas de adsorcin tipo tanque agitado. a) Por lotes y b) Continuo.
7.4. DISEO DE ADSORBEDORES
295
Los equipos industriales de adsorcin ms empleados son los tipo columna de

lecho fijo. Estas columnas pueden ser operadas simulando un sistema a contracorriente mediante el sistema de carrusel (Fig. 7.16). En este tipo de arreglo se
cuenta con varias columnas operando en serie. Cuando se agota la columna que
est siendo alimentada, se avanza la posicin de la alimentacin a la siguiente
columna, simulndose una operacin a contracorriente. La columna agotada se
descarga y posteriormente se convierte en la columna final de la serie.
En los equipos de lecho fluidizado las partculas de adsorbente se suspenden
mediante un flujo ascendente de la solucin de inters. Este tipo de arreglo se
considera til para el tratamiento directo de caldos con slidos en suspensin,
suprimiendo la operacin slido-lquido previa a la adsorcin. Con esta misma
intencin existen desarrollos donde se emplea una combinacin de un tanque
adsorbedor y uno desorbedor operando en forma continua (Fig. 7.17).
7.4.
Diseo de Adsorbedores
El diseo de adsorbedores mediante modelos (Fig. 7.11) permite estimar

algunos parmetros importantes como: a) concentracin de soluto al final de
la adsorcin (eficiencia y prdidas), b) tiempo necesario para llevar a cabo el
proceso, c) cantidad de adsorbente necesario y d) etapas necesarias o longitud
de una columna.
Como se estableci en la introduccin de este captulo la formulacin del
modelo requiere de los datos de equilibrio del sistema, las expresiones de la velocidad de adsorcin, los balances y las condiciones de frontera. En las secciones
7.2 y 7.3 se han revisado los primeros dos aspectos. En esta seccin se revisa
la integracin de estos cuatro aspectos en el diseo de arreglos especficos de
sistemas de adsorcin, debido a que los balances y condiciones de frontera son
caractersticos de cada tipo de arreglo. En general los arreglos ms comnmente
empleados son:
El tanque agitado por lotes.
El tanque agitado con alimentacin continua.
Las columnas empacadas de lecho fijo.
7.4.1.
Adsorbedores Tipo Tanque Agitado por Lotes
En una operacin de adsorcin tipo tanque agitado intermitente el adsorbente se agrega a la solucin dentro de un tanque, se agita la suspensin y
posteriormente se separa la fase lquida y slida. Las operaciones de este tipo
son utilizadas para el procesamiento integral de caldos, operaciones lote especficas o cuando la capacidad del adsorbente es muy alta.
Gran parte de los datos de equilibrio o las cinticas de adsorcin para otro
tipo de diseos son obtenidos en sistemas por lotes. Es importante mencionar
que en algunos casos, las operaciones de lavado y elucin se realizan en tanques
agitados en forma intermitente.
296
CAPTULO 7. ADSORCIN
Figura 7.16: Adsorcin en columnas, a) Columna de lecho fijo y b) Sistema de

Carrusel.
297
Figura 7.17: Adsorcin en caldos completos. a) Lecho fluidizado. 1) adsorbente

sedimentado, 2) equilibrio, 3) alimentacin, 4) lavado, 5) elucin y 6) regeneracin. b) Adsorcin continua con recirculacin de adsorbente. Adaptada de:
Gailliot et al., 1990 y Pungor et al., 1987. Reproducida con el perm iso de la American
c
c
y con el p erm iso de Nature Publishing Co. Copyright 1987.
Chem ical Society. Copyright 1990
Mtodos de anlisis de sistemas de adsorcin por lotes

Actualmente existe una gran diversidad de modelos para describir la adsorcin en sistemas por lotes debido a los diferentes mecanismos que pueden
controlar la velocidad de transferencia de masa entre las fases (pelcula, poro,
resistencias combinadas, etc.) y a la forma de la curva de equilibrio (lineal, Langmuir, etc.) que tambin introduce variabilidad al modelo. Entre los principales
mtodos para el anlisis del sistema de adsorcin en esta seccin se describen
los siguientes:
a) Mtodos grficos.
b) Mtodos basados en la teora cintica.
i) Modelo de tres resistencias.
ii) Modelo de parmetros agrupados.
iii) Modelo de control en la pelcula y relacin de equilibrio tipo Langmuir.
298
CAPTULO 7. ADSORCIN
Anlisis grfico de la adsorcin por lotes en equilibrio

Considrese una operacin tipo tanque agitado por lotes como se muestra
en la Figura 7.18. Si se proporciona un tiempo de contacto adecuado se alcanza
el equilibrio entre las fases. Por otro lado, si el tiempo de contacto es menor
que el necesario para alcanzar el equilibrio la operacin no ser 100 % eficiente.
En el caso de adsorciones lentas, una alternativa de diseo es utilizar curvas
de equilibrio prcticas que tomen en cuenta directamente la eficiencia de etapa,
considerando tiempos de contacto menores a los del equilibrio real.
Figura 7.18: Adsorcin por lotes. a) Proceso y b) Curvas de equilibrio y operacin.

En el anlisis que sigue se considera que cada etapa es una etapa ideal, por lo
tanto el adsorbente y la solucin estn en equilibrio al trmino de la operacin
(o bien una etapa real si se utilizan curvas de equilibrio modificadas). Bajo esta
consideracin el anlisis de este tipo de operacin se simplifica, y slo requiere
de la combinacin de las expresiones de equilibrio y los balances de masa, ya
sea en forma grfica o en forma analtica.
La expresin de equilibrio es la isoterma que depende de cada tipo de adsorcin, por ejemplo:
q = Kcn
(7.36)
El balance de masa del soluto de acuerdo a la Figura 7.18 puede ser expresado
como:
F c0 + Sq0 = F c2 + Sq2
(7.37)
299
donde F es la cantidad de la fase lquida y S la cantidad de adsorbente (se

suponen constantes como es el caso para soluciones diluidas de caldos biolgicos), c0 y c2 son las concentraciones de soluto en el lquido al inicio y final del
proceso, respectivamente. Asimismo, q0 y q2 son las concentraciones de soluto
en el adsorbente al inicio y final del proceso.
La ecuacin (7.37) puede expresarse como la ecuacin de una lnea recta,
llamada lnea de operacin,
q2 = q0 +
F
(c0 c2 )
S
(7.38)
La solucin grfica de las ecuaciones (7.36) y (7.38) se representa en la Figura

7.18b, donde la curva de equilibrio utilizada refleja una adsorcin favorable
(n < 1). La interseccin de la curva de equilibrio con la lnea de operacin
permite calcular las concentraciones de equilibrio (c2 , q2 ) al final del proceso.
Ejemplo 7.2. Adsorcin de estreptomicina.
La estreptomicina se recupera utilizando adsorcin por intercambio catinico. Se ha observado que 1.56 g de este antibitico pueden ser adsorbidos por
cada gramo de resina. Debido a que la curva de equilibrio es muy favorable
para este proceso; slo cuando la concentracin en la solucin es muy baja, la
concentracin del soluto en el adsorbente es menor de este valor (q < qm ).
Se pide:
Estimar la cantidad de resina necesaria para procesar 100, 000 L de un caldo
de fermentacin que contiene 6 g/L de estreptomicina en una operacin por
lotes.
Solucin:
El balance de masa para esta operacin es:
S(q2 q0 ) = F (c0 c2 )
con los valores: q0 = 0; q2 = 1.56 g/g; c2 = 0, se puede calcular S:

g
100, 000 L 6
F c0
L
=
= 384, 615 g de adsorbente
S=
g
q2
1.56
g
Como puede observarse se requiere una gran cantidad de adsorbente. Esto
implica que sera adecuada una operacin continua, sin embargo el problema
que significa el movimiento continuo de los slidos, conlleva a utilizar con ms
frecuencia operaciones semi-continuas.
Ejemplo 7.3. Adsorcin de fenilalanina.
La adsorcin de fenilalanina en un adsorbente de poliestireno (amberlita
XAD-2) puede ser descrita por la siguiente isoterma:
q = 6.1 103 c0.9
300
CAPTULO 7. ADSORCIN
donde q tiene unidades de g/g y c de g/L. En una operacin por lotes se ponen
en contacto 300 g de adsorbente con 2.0 L de solucin que contiene 15 g/L de
fenilalanina.
Se pide estimar:
a) Las composiciones en el equilibrio.
b) El porcentaje de recuperacin.
Solucin:
Utilizando el mtodo grfico el balance de masa para esta operacin (ecuacin
7.38), permite encontrar la ecuacin de la lnea de operacin.
2
(15 c2 )
300
a) La curva de operacin y de equilibrio se grafican en la Figura 7.19, el
punto donde intersectan representa las condiciones al final de la operacin, por
lo tanto:
q2 = 0 +
Figura 7.19: Solucin grfica del Ejemplo 7.3.
q2
c2
= 0.042 g/g
= 8.6 g/L
b) El porcentaje de recuperacin puede ser expresado como:

RE =
c0 c2
15 8.6
F c0 F c2
100 =
100 =
100 = 43 %
F c0
c0
15
301
Ejemplo 7.4. Adsorcin de Desacetilcefalosporina C (DAC-C) utilizando amberlita XAD-2 modificada.

La principal impureza en el proceso de obtencin de cefalosporina C es la
DAC-C. La isoterma de adsorcin de esta impureza en amberlita XAD2CH2 CH2 Br, a un pH de 2.8, est dada por la siguiente expresin:
q = 0.087c
donde q est en g/g y c en g/L.
Se pide:
Si se utiliza un proceso por lotes en equilibrio, qu cantidad de adsorbente
es necesario agregar a 2.0 L de una solucin de DAC-C con una concentracin
de 2 g/L, para recuperar el 90 % de la impureza?
Solucin:
Debido a que la isoterma es lineal se facilita una solucin analtica al problema. Del balance de masa se obtiene:
q2 =
2
(2 c2 )
S
en el equilibrio:
q2 = 0.087 c2
y de acuerdo con la recuperacin deseada, c2 = 0.1c0 .
Combinando las dos expresiones anteriores se puede encontrar la interseccin
de la curva de operacin con la de equilibrio,
q2 = 0.0174 g de soluto/g de adsorbente
c2 = 0.2 g de soluto/L
del balance de masa,
S = 206.9 g
Teora cintica
Gran parte de la informacin necesaria para evaluar el comportamiento de los
procesos adsorcin est contenida en las curvas de los perfiles de concentracin
(c vs t). Estas curvas pueden ser utilizadas para determinar: a) la capacidad
del adsorbente que ha sido utilizada, b) la cantidad de soluto que no se adsorbe
al final de la operacin y c) el tiempo de proceso. Asimismo, para estudiar
el efecto de las variables de operacin sobre el comportamiento del sistema.
Un modelo matemtico que pueda usarse para predecir apropiadamente este
comportamiento dinmico, proporciona una forma prctica de obviar muchos
experimentos, adems de ayudar en el diseo y escalamiento de los procesos de
adsorcin.
302
CAPTULO 7. ADSORCIN
Los modelos para predecir perfiles de concentracin en sistemas de adsorcin

en lotes que se enmarcan dentro de la teora cintica, se desarrollan mediante la
combinacin de balances de masa, relaciones de equilibrio, relaciones de transferencia de masa entre las fases y las condiciones iniciales y de frontera del
sistema.
El modelo fsico consiste en la adsorcin isotrmica de un soluto sobre
partculas esfricas de adsorbente de radio promedio, rm , y porosidad, i (Fig.
7.20). La operacin se supone se conduce en un tanque bien agitado con un
volumen de sistema V . El volumen de lquido externo a la matriz de adsorbente
es b V y el volumen de adsorbente es (1 b )V . Las concentraciones inicial y
transiente de soluto en el seno del lquido son co y c(t), respectivamente. La concentracin de soluto en el lquido de los poros y en la superficie del adsorbente
son ci y qi .
Figura 7.20: Sistema de adsorcin por lote.

El balance de masa del soluto en la fase lquida se puede expresar en palabras
como:
Velocidad de acumulacin = Velocidad de entrada Velocidad de
salida Velocidad de adsorcin
y est dado por:
dc
= V R
dt
el balance de soluto en el adsorbente:
(7.39)
b V
V (1 b )
dq
=VR
dt
(7.40)
y las condiciones iniciales

en t = 0
c = co ;
q=0
(7.41)
303
donde q es la concentracin promedio de soluto en el adsorbente y R es la

velocidad de adsorcin.
Como se present en la seccin 7.2, la velocidad de adsorcin depende de
los mecanismos controlantes de la transferencia de masa. Un rango distintivo
de los modelos es la forma que adopta la expresin de R, que depende del o los
mecanismos controlantes de la adsorcin que sean significativos (pelcula, poro,
cintica), del tipo de equilibrio en el sistema y las condiciones de frontera. En
los siguientes prrafos se presentan algunos modelos particulares de la teora
cintica para sistema por lotes.
Modelo cintico de tres resistencias En el modelo de tres resistencias,
para desarrollar una descripcin matemtica del proceso de adsorcin por lotes,
se incorporan tres resistencias a la separacin de equilibrio ideal: a) resistencia
en la pelcula, b) difusin intrapartcula y c) interaccin cintica soluto-ligando.
Se considera que el movimiento de soluto involucra varios pasos: a) su transporte interfacial desde el seno del lquido hasta la superficie del adsorbente a
travs de una pelcula estancada que rodea al adsorbente caracterizada por un
coeficiente de transferencia de masa, kL , b) la difusin dentro del lquido del
poro del adsorbente descrita por un coeficiente, Di y c) el paso de adsorcin del
soluto en los sitios activos sobre la superficie del adsorbente. La velocidad de
adsorcin intrnseca puede ser descrita por diferentes tipos de modelos. En esta
seccin se utiliza un modelo de adsorcin-desorcin tipo Langmuir.
Para describir el cambio de concentracin de soluto con el tiempo, se puede
derivar mediante un balance de soluto en el seno del lquido la ecuacin siguiente:
3 (1 b )
dc
=
kL (c ci )|r=rm
dt
rm
b
(7.42)
La ecuacin para describir el cambio de concentracin de soluto en el fluido

de los poros del adsorbente puede ser obtenida mediante un balance de soluto
en la partcula,
i
ci
qi
+ (1 i )
= i Di
t
t
2 ci 2 ci
+
r2
r r
(7.43)
donde i simboliza el interior del poro del adsorbente.

Generalmente se utilizan modelos simplificados para describir las complejas
interacciones entre el soluto y el adsorbente. En estos modelos se utiliza una
expresin cintica reversible de segundo orden, donde se supone que el soluto
interacciona en forma monovalente con el adsorbente,
P + S PS
donde P es el soluto en la solucin, S es el sitio de adsorcin y P S es el complejo
soluto-ligando.
La velocidad de adsorcin de este tipo de interaccin se representa frecuentemente por la expresin de Langmuir,
304
CAPTULO 7. ADSORCIN
qi
= k1 ci (qmi qi ) k1 qi
(7.44)
t
donde: qmi es la capacidad mxima de adsorcin del adsorbente por volumen
slido; k1 y k1 son las constantes cinticas de adsorcin y desorcin, respectivamente.
Al inicio de la operacin la concentracin de soluto en el seno del lquido es
co y el sistema se encuentra libre de soluto, por tanto se utilizan las condiciones
iniciales siguientes:
en t = 0
(7.45)
c = co
en t = 0
ci = 0,
0 r rm
(7.46)
en t = 0
qi = 0,
0 r rm
(7.47)
Debido a la simetra de la partcula, se considera la condicin de frontera

siguiente:
0
ci 00
en r = 0
=0,
t>0
(7.48)
r 0r=0
Mediante un balance de soluto en la boca de un poro de la partcula, se
obtiene una segunda condicin de frontera,
en r = rm
kL (c ci )|r=rm = i Di
0
ci 00
,
r 0r=rm
t>0
(7.49)
Este modelo de tres resistencias en serie no tiene una solucin analtica, debe
ser resuelto por mtodos aproximados.
Modelo de parmetros agrupados El modelo de parmetros agrupados
(Chase, 1984) utiliza un enfoque emprico sencillo para describir el proceso de
adsorcin, donde se supone que todos los procesos que limitan la velocidad de
adsorcin del soluto pueden ser representados por las constantes cinticas. Este
modelo ha sido utilizado para simular la adsorcin de protenas en adsorbentes
porosos (Aboudzadeh, et al., 2006; Horstmann,y Chase, 1989). Se supone que
las constantes agrupan todas las resistencias del proceso.
En este enfoque la velocidad de transferencia de masa de soluto al adsorbente
se describe por una cintica de segundo orden:
dq
= k1 c (qm q) k1 q
(7.50)
dt
Mediante el balance de soluto se obtiene la lnea de operacin del sistema:
305
b V
(c0 c)
(7.51)
(1 b )V
Sustituyendo la ecuacin anterior y su derivada en la ecuacin (7.50) se
obtiene:
q=

(1 b )
b (c0 c)
b k1 (c0 c)
dc
=
k1 c qm
dt
b
(1 b )
(1 b )
(7.52)
La solucin analtica de la ecuacin anterior est dada por:

2a (1 b ) (k1 t)

(b + a) 1 exp
c
(1 b )
b

=1
b+a
2a (1 b ) (k1 t)
co
b co
exp
ba
b
(7.53)
donde:

co b
a =b
qm
(1 b )

1
co b
Kd b
b=
+ qm +
2 (1 b )
(1 b )
2
(7.54)
(7.55)
Ejemplo 7.5. Adsorcin de Inmunoglobulina G (ImG) en protena

A inmovilizada en una matriz de agarosa en un sistema por lotes.
Modelo de parmetros agrupados.
El estudio de la cintica de adsorcin de ImG en un adsorbente de afinidad
con protena A inmovilizada en una matriz de Sefarosa B, se realiz en una
solucin amortiguadora al 0.1 M de Tris - HCl a pH = 7 y a 25 C, en un
arreglo experimental como el que se muestra en la Figura 7.21.
Los experimentos de equilibrio mostraron que la isoterma de adsorcin del
sistema es de tipo Langmuir y est dada por la ecuacin:
q=
40 c
0.019 + c
donde q y c estn en mg/mL.

El estudio cintico se realiz colocando en el reactor 25 mL de una solucin
conteniendo 0.5 mg/L de ImG en buffer de adsorcin y agregando en el tiempo
cero 0.5 mL de una suspensin 1:1 de adsorbente en buffer. El avance de la
adsorcin se detect recirculando rpidamente la solucin a travs un medidor
de UV. Los datos cinticos obtenidos son los siguientes:
t (min)
c (mg/mL)
t (min)
c (mg/mL)
0.00
0.500
40.24
0.272
1.95
0.443
80.49
0.223
4.88
0.416
120.00
0.199
6.10
0.396
159.76
0.181
9.76
0.368
200.00
0.171
19.51
0.324
240.24
0.165
306
CAPTULO 7. ADSORCIN
Figura 7.21: Sistema experimental de adsorcin intermitente de inmunoglobulina

G con agitacin.
Se pide: Analizar el ajuste del modelo de parmetros agrupados a los datos
experimentales.
Solucin:
De acuerdo al arreglo experimental los datos del sistema son los siguientes:
c0 =
b =
Kd =
qm =
0.5 mg/mL
25.25/25.50 = 0.9902
0.019 mg/mL
40 mg/mL
Para utilizar el modelo de parmetros agrupados dado por la ecuacin (7.53)

calculamos:

1 0.5 0.9902
0.019 0.9902
b=
+ 40 +
= 46.21
2 (1 0.9902)
(1 0.9902)

0.5 0.9902
a2 = (46.21)2
40
(1 0.9902)
a = 10.74
de tal manera que:

c
= 1 1. 979 4 102
co
(56. 95) [1 exp (0.213k1 t)]

(1. 605 6) exp (0.213k1 t)
La expresin anterior puede ser evaluada en el intervalo de 0 t 240 min

utilizando como parmetro de ajuste k1 (parmetro agrupado). Los resultados
se muestran en forma grfica en la Figura 7.22 con k1 = 0.001 mL/mgs.
307
Figura 7.22: Perfil de concentracin de ImG del ejemplo 7.5. (o) datos experimentales. () ajuste del modelo de parmetros agrupados con k1 = 0.001
mL/mgs.
Modelo cintico con control de la resistencia en la pelcula: relacin
de equilibrio tipo Langmuir Cuando la pelcula es la nica resistencia a la
transferencia de masa en un proceso de adsorcin (e.g. partculas no porosas) y
la relacin de equilibrio en el sistema es de tipo Langmuir, el modelo del proceso
queda integrado de la siguiente forma:
La transferencia de soluto desde la fase slida:
dc
=
dt
1 b
b
kL a(c c )
(A)
(c0 c)
(B)
El balance de soluto entre las fases:

q=
b
1 b
La expresin de equilibrio:
q=
qm c
Kd + c
(C)

en t = 0
c = c0 ;
q=0
(D)
donde c es una concentracin hipottica de soluto en el lquido, en equilibrio

con la concentracin de soluto en el adsorbente.
Las ecuaciones (A-D), pueden ser resueltas utilizando un mtodo de integracin numrico, para obtener la variacin de la concentracin con el tiempo.
308
CAPTULO 7. ADSORCIN

Modelo de control en la pelcula.
Para analizar el procesos de adsorcin de ImG descrito en el Ejemplo 7.5
utilizando el modelo de la resitencia en la pelcula se tienen los siguientes datos
adicionales.
Adsorbente
Protena
Solucin
dp
p
MA
L
L
90 106 m
1028 kg/m3
150, 000 Da
1000 kg/m3
9.5 104 kg/ms
Se pide: Analizar el ajuste del modelo de resistencia en la pelcula a los

datos experimentales.
Solucin:
Para calcular el coeficiente de transferencia de masa en el sistema se calcula
primero el coeficiente de difusin por medio de la siguiente correlacin emprica:
DAB = 9.4 1015
T
L (MA )1/3
donde: DAB es la difusividad molecular [m2 /s], L es la viscosidad de la solucin

[kg/m s], T es la temperatura absoluta [ K] y MA es el peso molecular de la
protena [Da]. De tal manera que:
DAB = 9.4 1015
2
298
m2
11 m
=
5.5
10
s
(9.5 104 ) (150, 000)1/3 s
El coeficiente de transferencia de masa de la pelcula puede ser estimado en

este sistema por lotes utilizando la siguiente correlacin:
2DAB
kL =
+ 0.31
dp
L
p DAB
2/3
L g
2p
1/3
donde p es la densidad del adsorbente, es la diferencia de densidad entre el

adsorbente y el lquido y L es la viscosidad del lquido. Entonces,
kL
kL
309

m2
2 5.5 1011
s
+
=
90 106 m
2/3
kg
4
9.5 10

ms

+ 0.31
2
kg
m
1028 3 5.5 1011
m
s
1/3

kg
m
kg
4
9.8 2
28 m3 9.5 10
ms
s

2
kg
1028 3
m
m
= 4 106
s
El rea especfica de la partcula es:

a=
6
6
=
= 6.67 104 m1
dp
90 106 m
En la Figura 7.23 se presenta un programa MATLAB para la solucin de las

ecuaciones (A-D). Utilizando el valor calculado de kL = 4106 m/s, se obtuvo
un perfil muy alejado de los datos experimentales, que sugiere que el fenmeno
es ms lento que lo que pronostica el modelo (Fig. 7.24a). Utilizando un valor
10 veces menor de kL = 4 107 m/s se logr un mejor ajuste, sin embargo la
cintica experimental presenta un comportamiento diferente a la pronosticada
por el modelo (Fig.7.24b).
Modelo de tres resistencias.
Para analizar el procesos de adsorcin de ImG descrito en el Ejemplo 7.5
utilizando el modelo de 3 resistencias se tienen los siguientes datos adicionales.
Adsorbente
i =
s =
0.96
0.4
donde s es la porosidad de los 0.25 mL de adsorbente utilizado.

En la Figura 7.25 se presenta un programa principal MATLAB para la solucin del modelo de tres resistencias, utilizando como parmetro de ajuste Di .
En la Figura 7.26 se presenta la funcin de integracin empleada. La solucin
requiere adems el uso de las funciones dss004.m y dss044.m que pueden ser
obtenidas directamente en http://www.scholarpedia.org.
Los resultados se muestran en forma grfica en la Figura 7.27 El ajuste
del modelo se realiz utilizando Di = 6.0 1012 m2 /s, el valor calculado de
310
CAPTULO 7. ADSORCIN
Figura 7.23: Programa principal y funcin para la solucin del Ejemplo 7.6
kL = 4 106 m/s y k1 = 1.0 mL/mg s. El valor de Di es tpico de la
difusin de protenas en medios cromatogrficos (Schroder et al., 2006). El valor
de k1 implica que la velocidad de adsorcin intrseca (sobre la superficie del
adsorbente) es alta (esta constante no debe ser confundida con la que se utiliza
en el modelo de parmetros agrupados). Los resultados del estudio sugieren que
las resistencias controlantes en el sistema son dos: la pelcula y la difusin en el
poro.
7.4.2.
Adsorbedores Tipo Tanque Agitado Continuo
Otro tipo de arreglo utilizado en procesos de adsorcin industriales es el

adsorbedor tipo tanque agitado con alimentacin continua.
Una aplicacin particular de este arreglo es en el procesamiento de caldos de
fermentacin completos (con una filtracin gruesa previa en cribas vibradoras),
ya que no presenta los problemas de taponamiento con la biomasa como cuando
se trata de procesar estos caldos directamente en columnas de lecho fijo.
La operacin se efecta (Fig. 7.28) alimentando al tanque adsorbedor, donde
inicialmente se coloca el adsorbente en solvente puro, un flujo F de solucin con
una concentracin de soluto c0 . Durante la operacin el adsorbente se mantiene
en el interior del tanque y la corriente agotada se retira continuamente del
tanque. Una vez que se alcanza cierta concentracin de soluto en la corriente
311
Figura 7.24: Perfil de concentracin de ImG del Ejemplo 7.6. (o) datos experimentales. () ajuste del modelo de resistencia en la pelcula con: a) kL = 4106
m/s y b) kL = 4 107 m/s.
de salida, se interrumpe la operacin y se recupera el soluto concentrado en el
adsorbente.
En una primera aproximacin para obtener el modelo del proceso, se puede
considerar que el tanque est perfectamente agitado, de tal manera que la concentracin de soluto a la salida es igual a la concentracin de ste en la solucin
dentro del tanque.
En este sistema la cantidad de soluto adsorbido sobre la superficie del adsorbente vara con el tiempo, lo que se traduce en una operacin en estado no
estacionario. Por lo tanto, la concentracin de soluto en la superficie del adsorbente q y la concentracin de soluto en la solucin de salida c, son ambas
funciones del tiempo de operacin. El comportamiento cualitativo del sistema
se presenta en la Figura 7.29.
De acuerdo con la figura an en ausencia de adsorcin, la concentracin de
soluto en la corriente de salida vara con el tiempo. Por otro lado, si la adsorcin
es muy rpida, la concentracin de soluto en la solucin ser baja por un cierto
tiempo, hasta que se alcance la saturacin del adsorbente; una vez ocurrido
lo anterior la concentracin aumentar siguiendo un patrn muy semejante al
caso en que no existe adsorcin. En el caso general la velocidad de adsorcin es
intermedia entre los dos casos descritos anteriormente.
Modelos de teora cintica
Para un adsorbedor continuo tipo tanque agitado el modelo que describe
la adsorcin, debe integrar la isoterma de adsorcin, el balance de masa, la
312
CAPTULO 7. ADSORCIN

expresin de la rapidez de la adsorcin y las condiciones iniciales.
El balance de masa del soluto en la fase lquida se puede expresar en palabras
como:
de tal manera que:
dc
= F (c0 c) V R
dt
b V
V (1 b )
dq
=VR
dt
(7.56)
(7.57)

en t = 0
c = 0;
q=0
(7.58)
donde q es la concentracin promedio de soluto en el adsorbente, V representa

el volumen de la mezcla (solucin y adsorbente) en el adsorbedor, c0 y c son las
concentraciones de soluto a la entrada y la salida, respectivamente. La fraccin
de volumen de lquido ( sin incluir el lquido en los poros) al volumen total de la
mezcla es b . El flujo de alimentacin es F . La velocidad de adsorcin de soluto
por unidad de volumen de la mezcla de adsorcin es R.
313
Figura 7.26: Funcin MATLAB para la solucin del Ejemplo 7.7.

Como se present en la seccin 7.2, la velocidad de adsorcin depende de
los mecanismos controlantes de la transferencia de masa. De tal manera que la
expresin para R depende del sistema particular y debe ser determinada experimentalmente. En este apartado se presentan dos modelos cinticos utilizados
en la adsorcin continua en tanque.
de equilibrio lineal El caso ms sencillo que permite obtener un modelo
mediante integracin analtica, es el caso donde la velocidad de adsorcin puede
ser aproximada mediante un modelo lineal y la isoterma de adsorcin es lineal.
En este caso la velocidad de transferencia de masa est dada por:
R = (1 b )kL a(c c )
(7.59)
donde kL es nuevamente el coeficiente de transferencia de masa, a es el rea de

adsorbente por unidad de volumen de mezcla, c es la concentracin de soluto en
el seno del lquido, y c la concentracin hipottica de lquido en equilibrio con
la concentracin de soluto en el adsorbente.
La isoterma de adsorcin lineal se puede expresar como:
q = Kc
El modelo se integra con las ecuaciones (7.56-7.60) y su solucin es:
(7.60)
314
CAPTULO 7. ADSORCIN
Figura 7.27: Perfil de concentracin de ImG del Ejemplo 7.7. (o) datos experimentales. () ajuste del modelo de tres resistencias con kL = 4 106 m/s,
k1 = 1.0 mL/mgs y Di = 6.0 1012 m2 /s.
Figura 7.28: Sistema de adsorcin tipo tanque agitado continuo.
c0 c
r2 er1 t
r1 er2 t
=
c0
(r2 r1 ) (r2 r1 )
(7.61)
que es la expresin de la variacin de la concentracin de soluto en la fase lquida

con el tiempo de adsorcin.
En la expresin anterior:
315
Figura 7.29: Concentracin en el lquido de salida de un adsorbedor continuo

tipo tanque agitado. Fuente: Belter et al, 1988. Reproducida con el permiso de John
c
Wiley and Sons. Copyright 1988.
Todos los derechos reservados. .
r1
r2
A =
B
B 2 4AC
2A
B B 2 4AC
2A
1

kL a(1 b )
b
F
+
1+
b V
b
(1 b )K
F kL a
b KV
B +
Ejemplo 7.8. Recuperacin de antibiticos por adsorcin.

Como alternativa a los procesos tradicionales de recuperacin de antibiticos,
donde el primer paso consiste en una filtracin para la eliminacin de micelio y
esporas, se desea analizar la posibilidad de una recuperacin directa del producto
por medio de adsorcin inica en un arreglo tipo tanque agitado continuo.
En un estudio piloto el adsorbente empleado est inicialmente libre de soluto
y su constante de equilibrio lineal es 110. La relacin de volumen de lquido a
volumen total que va a ser empleada es de 0.8. El volumen de reaccin es de un
litro.
Como primera aproximacin se puede considerar que la resistencia controlante es la de la pelcula con un kL a = 312 h1 .
Se pide estimar:
a) El tiempo para lograr el 90 % de recuperacin del antibitico de la corriente de alimentacin que fluye a razn de 3 L/h con una concentracin de
1.0 mg/L de antibitico.
b) El tiempo para alcanzar un valor de c/c0 = 0.1
316
CAPTULO 7. ADSORCIN
Solucin:
a) Las constantes A, B y C estn dadas por:
A = 1.0
L

312 h1 0.2
0.8
h
+
1+
= 84.59 h1
0.8 1.0 L
0.8
0.2 110
L
312 h1 3
h = 10.63 h2
0.8 110 1.0 L
3
Las constantes r1 y r2 estn dadas por:
ri
r1
r2
(84.59 h1 )
"
(84.59 h1 )2 4(1.0)(10.63 h2 )
2
= 0.126 h
= 84.46 h1
Se puede definir el grado de recuperacin mediante la siguiente expresin:
Recuperacin =
t
0
t
F c0 dt
t
F cdt V c
=
t
0
dt
F c0 dt
t
0
V c
c
dt
c0
F c0
t
dt
combinando la expresin anterior con la ecuacin (7.61),
Recuperacin =
t
0

t
r2 er1 t
r1 er2 t
dt
1
+
dt
r2 r1 r2 r1
0
t
0
V
F

r2 er1 t
r1 er2 t
1
+
r2 r1 r2 r1
t
dt
0
efectuando la integracin,
dt
317

r2
r1
(er1 t 1) +
(er2 t 1)
r1 (r2 r1 )
r2 (r2 r1 )
Recuperacin =
t

V
r2 er1 t
r1 er2 t
1
+
F
r2 r1 r2 r1
t

t t
sustituyendo valores,
0.9 =
7.95(1 e0.126t ) + 1.8 105 (1 e8.440t )

t

0.8
1 + 1. 494 1 103 e84. 46t 1. 001 5e0.126 t
3
de donde:
t = 1.2 h
b) La expresin de la concentracin adimensional a la salida del tanque es:
c
84.46e0.126t
0.126e84.46t
= 0.1 = 1
+
c0
84.46 + 0.126 84.46 + 0.126
de tal manera que
t = 0.85 h
La recuperacin en este tiempo es del 0.92. Existe un tiempo ptimo para
realizar este tipo de operaciones.
de equilibrio tipo Langmuir Cuando la velocidad de adsorcin puede ser
aproximada mediante un modelo lineal y la isoterma de adsorcin es de tipo
Langmuir, el modelo de adsorcin por lotes continuo se integra por las siguientes
expresiones:
El balance de soluto en la fase lquida
b V
dc
= F (c0 c) V R
dt
(7.62)

V (1 b )
las condiciones iniciales,
dq
= VR
dt
(7.63)
318
CAPTULO 7. ADSORCIN
en t = 0
c = 0;
q=0
(7.64)
Utilizando la expresin de Langmuir se pueden obtener las siguientes ecuaciones diferenciales ordinarias acopladas del modelo:

F (c0 c) (1 b )
Kd q
dc
=
kL a c
(7.65)
dt
b V
b
(qm q)

dq
Kd q
= kL a c
(7.66)
dt
(qm q)
Estas ecuaciones pueden ser resueltas utilizando un integrador ODE de

MATLAB.
La Figura 7.30 fue obtenida mediante la solucin del modelo anterior fijando
una concentracin a la salida del tanque de c/c0 = 0.1. Puede observarse en esta
figura que conforme aumenta el flujo de la alimentacin, la recuperacin obtenida (mg adsorbidos/mg alimentados) y el grado de utilizacin del adsorbente
(q/qm ) disminuyen. La produccin obtenida en el proceso (mg/min) aumenta
con el flujo hasta que ste alcanza un valor aproximado de 0.4 mL/min.
Figura 7.30: Efecto del flujo sobre el comportamiento de un sistema de adsorcin

tipo tanque continuo con control de la resistencia en la pelcula y relacin de
equilibrio tipo Langmuir. a) Recuperacin de soluto, b) Utilizacin del adsorbente y c) Produccin (masa/tiempo).
7.4.3.
Adsorcin en Lecho Fijo
La adsorcin en lecho fijo es la operacin ms empleada a escala industrial

para la concentracin de caldos biolgicos. Este tipo de operacin se efecta en
columnas empacadas con adsorbentes. Por la parte superior de la columna se
alimenta la solucin que contiene el soluto de inters. Durante su paso por la
columna el soluto es adsorbido en el lecho y la solucin agotada es obtenida
319
a la salida de la columna. Una vez que la concentracin de soluto a la salida

alcanza una cierta concentracin, se interrumpe la operacin y se recupera el
soluto concentrado. A esta tcnica tambin se le conoce como Cromatografa
Frontal.
Curva de ruptura
En la descripcin de la adsorcin en columna se utilizan grficas de la
variacin de la concentracin de soluto a la salida de la columna con el tiempo,
llamadas curvas de ruptura. La prediccin del comportamiento real de la curva
de ruptura (anlisis frontal), permite disear columnas para lograr cierto grado
de recuperacin, estimar las prdidas y determinar el tiempo tR de cada ciclo,
as como para estimar dimensiones y arreglos de los equipos para la fase de adsorcin. Esta es la informacin requerida para optimizar la separacin (Arnold
et al., 1985; Yang y Tsao, 1982). En la Figura 7.31 se presenta un esquema de
adsorcin en una columna de longitud L (la columna se presenta acostada slo
para efectos explicativos).
Figura 7.31: Adsorcin de soluto y curva de ruptura en columnas.
320
CAPTULO 7. ADSORCIN
La parte de la figura llamada Lecho de Adsorbente muestra como se va

cargando de soluto el adsorbente del lecho conforme transcurre el tiempo. En
un tiempo intermedio (t + dt) cuando an no se agota la columna, se pueden
distinguir tres zonas en el lecho de adsorcin:
a) La Zona de Equilibrio (ZE) donde el adsorbente se encuentra en equilibrio
con la concentracin de soluto c0 de la solucin de entrada. En esta zona la
concentracin de soluto en el adsorbente es constante e igual a q = f (c0 ), donde
la funcionalidad f depende del tipo de equilibrio.
b) La Zona de Transferencia de Masa (ZTM) donde la concentracin de
soluto en el adsorbente vara a lo largo de la zona.
c) La Zona No Utilizada (ZNU) donde no se ha presentado adsorcin, de tal
manera que la concentracin de soluto en el adsorbente es igual a la que tena
inicialmente qx .
Conforme transcurre la adsorcin la ZE va ocupando toda la columna, la
ZTM se acerca a la salida de la columna y la ZNU tiende a desaparecer.
En la misma Figura 7.31 la parte Solucin de Salida muestra como vara la
concentracin de soluto en la solucin a la salida de la columna c(L, t) conforme
transcurre el tiempo de adsorcin. Se pueden distinguir tres eventos importantes
en esta parte de la figura:
a) Para tiempos menores a tR cuando la Zona de Transferencia de Masa an
no llega a la salida de la columna, la concentracin de soluto en la solucin a
la salida de la columna c(L, t), es muy baja e igual a la mnima detectada por
el adsorbente cx (para fines prcticos esta concentracin puede tomarse como
cero).
b) En el tiempo de ruptura tR la Zona de Transferencia de Masa ha alcanzado
la salida de la columna, de tal manera que se ha incrementado la concentracin
de soluto en la solucin de salida alcanzando el valor de diseo cR . Este valor es la
mxima concentracin de soluto permitida en la solucin de salida y representa
las prdidas de soluto tolerables en el proceso. El tiempo tR marca la terminacin
del ciclo de adsorcin.
c) En caso de continuar la operacin la concentracin de soluto en la solucin
de salida seguir incrementndose hasta igualar la concentracin de soluto c0
de la entrada.
La curva que describe la concentracin de soluto en la solucin de salida
en el tiempo, c(L, t) vs t, se llama Curva de Ruptura. La forma particular que
toma la curva de ruptura depende tanto del tipo de equilibrio del sistema que
se trate, como de los mecanismos de transporte involucrados.
Ejemplo 7.9. Adsorcin en una columna ideal.
Una columna se alimenta con un flujo de 10 L/min de una solucin que
contiene 6.0 g/L de estreptomicina. La columna est empacada con 10, 000 g de
una resina catinica cuya adsorcin mxima es de qm = 1.56 g/g (Payne, 1989).
Se pide: Calcular la duracin del ciclo de adsorcin, suponiendo que en
el rompimiento toda la columna est en equilibrio con la solucin de entrada
alcanzando su capacidad de adsorcin mxima qm .
Solucin:
321
El balance de masa global en la columna es:

F c0 t = qm S
despejando t y sustituyendo valores se tiene:
g
10, 000 g
g
= 4.3 h
L
g
60 min
10
6.0
min
L
h
En la Figura 7.32 se presenta un esquema de la columna y de la curva de
ruptura para este ejemplo.
qm S
=
t =
F c0
1.56
Figura 7.32: Ejemplo 7.9. a) Columna y b) Curva de ruptura.

Ejemplo 7.10. Adsorcin de lisina.
Se desea producir 8, 000 ton/ao de lisina a partir de un caldo que contiene
20 g/L de este aminocido, utilizando una operacin de adsorcin por intercambio inico en columna. Los datos de equilibrio muestran que qm = 110 g/L.
Se pide:
Estimar las dimensiones volumtricas de un sistema de 3 adsorbedores en
carrusel, en el cual cada lecho es lavado y eludo una vez que est completamente
agotado. Se estima que el ciclo tiene una duracin de 4.0 h (adsorcin, lavado y
elucin).
Solucin:
a) Clculo del flujo total a procesar (3 turnos 310 das laborables).
F
Produccin
c0
g
ao
da
8 109
ao 310 da 24 h = 5.37 104 L

g
h
20
L
322
CAPTULO 7. ADSORCIN
b) Clculo de la cantidad de resina necesaria en proceso.

L
g
5.37 104 20
L de resina
F c0
h
L
=
= 9, 763
S=
g
qm
h
110
L
c) Clculo del volumen del adsorbedor.
L
4 h = 39, 000 L
h
Se requieren 3 adsorbedores de 39 m3 cada uno.
V = St = 9, 763
Mtodos de anlisis de columnas de adsorcin

Actualmente existe una gran diversidad de modelos para describir la adsorcin en columnas empacadas debido a los diferentes mecanismos que pueden
controlar la velocidad de transferencia de masa entre las fases (pelcula, poro,
resistencias combinadas, etc.) y a la forma de la curva de equilibrio (lineal, Langmuir, etc.) que tambin introduce variabilidad al modelo. Adems, el modelo
puede o no considerar los efectos de flujo no ideal contemplados en la dispersin
axial (Tabla 7.2).
Tabla 7.2: Algunos factores a considerar en un modelo cintico de adsorcin.
Tipo de
Equilibrio
Lineal
Favorable
Desfavorable
Irreversible
Resistencia
Controlante
Poro
Superficie
Pelcula
Combinadas
Efecto
Mezclado
Flujo ideal tipo tapn
Flujo tapn con dispersin axial
Entre los principales mtodos para predecir la forma de la curva de ruptura

de un sistema de adsorcin se encuentran:
a) Los mtodos aproximados.
b) La teora de platos.
c) La teora cintica.
i) Modelo de equilibrio
ii) Modelo de tres resistencias
iii) Anlisis adimensional: prmetros agrupados y patrn constante.
iv) Modelo de fuerza impulsora y equilibrio lineal
v) Modelo a contracorriente.
d) Teora platos-cintica
Los dos primeros mtodos no estn basados en la obtencin de modelos a
partir de relaciones de equilibrio y balances de masa. Esta variedad de mtodos se debe principalmente a que las expresiones matemticas de las curvas de
ruptura son difciles de manejar en algunos casos.
323
Anlisis aproximado
El mtodo de anlisis aproximado es especialmente til cuando las isotermas
del sistema son favorables. Bajo estas condiciones, se supone que la adsorcin se
desarrolla formndose una zona de transferencia de masa dentro de la columna
con un perfil de concentracin constante que viaja a lo largo de la columna
(Fig. 7.33).
Figura 7.33: Adsorcin con patrn constante.

Para caracterizar la curva de ruptura se seleccionan dos concentraciones.
La concentracin cR de ruptura que es la mxima concentracin que se puede
tolerar a la salida de la columna y la concentracin cS que corresponde a la
concentracin a la salida cuando el lecho se considera agotado. Una gua general
es considerar:
cR = 0.1c0 y cS = 0.9c0
donde c0 es la concentracin de soluto en la solucin a la entrada.
Si se supone que la zona de transferencia de masa (ZTM) se mueve a lo largo
del lecho con una velocidad constante , en el tiempo tR existe una zona en la
324
CAPTULO 7. ADSORCIN
parte superior de la columna donde el adsorbente est en equilibrio y una en el

fondo donde se localiza la ZTM.
El tiempo que tarda en salir la ZTM de la columna es t = tS tR . Por lo
tanto se puede establecer que la longitud de la columna que est en equilibrio
Ze en el tiempo tR es:
donde
Ze = tR t
(7.67)
L
tR
y L la longitud de la columna.
Combinando las expresiones anteriores se obtiene:

t
Ze = L 1
tR
(7.68)
La longitud de la ZTM, ZA , est dada por:
t
(7.69)
tR
Se pueden utilizar estas relaciones para estimar la fraccin de lecho que
est utilizado cuando termina la operacin o sea en el tiempo tR , considerando
simtrica la curva de ruptura, de tal manera que:
En la zona de saturacin:
ZA = L
q = f(c0 )
y en la ZTM:
1
q = f (c0 )
2
donde la funcionalidad depender del tipo de isoterma.
Con base a lo anterior la fraccin de lecho utilizado est dada por:

t
1
t
f(c0 ) L 1
+ f(c0 ) L
tR
2
tR
=
f (c0 ) L

t
=1
(7.70)
2 tR
La fraccin de lecho utilizado dada por la ecuacin (7.70) debe ser obtenida
experimentalmente y puede ser utilizada para escalamiento. En este proceso, la
longitud de la columna y la velocidad de alimentacin deben permanecer iguales
en ambas escalas para mantener el mismo patrn de adsorcin. Esto conduce al
diseo de columnas poco esbeltas con poca cada de presin en las cuales debe
asegurarse una distribucin uniforme del lquido.
325
Teora de platos
Cuando se utiliza la teora de platos el modelo conceptual de la columna consiste en una serie de etapas en equilibrio (Fig. 7.34). En cada etapa la cantidad
de adsorbente est fija y el lquido fluye a travs de todas las etapas transportando al soluto. El empleo de esta teora permite disear columnas en forma muy
sencilla.
Una limitacin del empleo de la teora de platos es que slo puede ser utilizada para sistemas con isotermas lineales. Adems, en su forma original esta
teora es de uso limitado por su incapacidad de predecir el nmero de etapas o la
altura real de cada etapa y el efecto del cambio de las condiciones de operacin
sobre el comportamiento de la columna.
Considerando el arreglo que se muestra en la Figura 7.34, el balance de masa
de soluto en la fase lquida en la etapa n, puede expresarse en palabras como:
Figura 7.34: Representacin de una columna de adsorcin acuerdo a la teora

de platos.
La ecuacin del modelo es:
V
donde:
n: Nmero de etapa.
dcn
dqn
= F cn1 F cn (1 )V
dt
dt
(7.71)
326
CAPTULO 7. ADSORCIN
V : Volumen de la etapa (vol. del lquido + vol. adsorbente).

: Volumen de lquido por volumen de etapa.
F : Flujo de alimentacin (constante entre etapas para soluciones diluidas).
cn : Concentracin de soluto en la solucin en la etapa n (masa de soluto por
volumen de solvente).
qn : Concentracin de soluto en el adsorbente en la etapa n (masa de soluto por
volumen de adsorbente).
El modelo supone que cada etapa est en equilibrio de tal manera que para
isotermas lineales:
(7.72)
qn = Kcn
combinando las ecuaciones (7.71) y (7.72) se obtiene:
dcn
= F (cn1 cn )
(7.73)
dt
donde el trmino entre corchetes de la izquierda de la expresin anterior representa un volumen hipottico.
{[ + (1 )K] V }
V = [ + (1 )K]V
La ecuacin (7.73) puede ser resuelta con las siguientes condiciones:

Para
t = 0,
Para todo
cn = 0
t = t,
para
n = 1, 2, 3, 4, ... N
c(alimentacin) = c0
(7.74)
La solucin del anterior sistema de ecuaciones se facilita definiendo un tiempo

adimensional mediante la siguiente expresin:
=
Ft
[ + (1 )K] V
o bien en trminos del volumen de lecho Vc = NV ,

=
NFt
[ + (1 )K]Vc
donde N es el nmero de etapas.

La ecuacin (7.73) queda expresada como:
dcn
= cn1 cn
d
(7.75)
327
La solucin de la ecuacin (7.75) est dada por:

n1
1 k
cn = c0 1 e
k!
(7.76)
k=0
La ecuacin anterior puede ser expresada de forma ms compacta manejando

su forma diferencial:
dcn
c0 n1 e
=
d
(n 1)!
(7.77)
que representa una distribucin de Poisson. Puede observarse en la Figura 7.35a

que conforme se incrementa el nmero de etapas, la distribucin de Poisson
se aproxima a una distribucin normal, entonces se puede efectuar la siguiente
aproximacin:
Figura 7.35: Teora de platos. a) Aproximacin de la distribucin de Poisson a

la distribucin Normal y b) Curva de ruptura por teora de platos con N = 100.

2
dcn .
c0
1 o
=
exp
1
d
2
A
(2) 2 A
(7.78)
De acuerdo a la definicin de media y desviacin estndar, con ayuda de

la ecuacin (7.77) se puede encontrar quela ecuacin (7.78) tiene una media
o = N y una desviacin estndar A = N cuando n = N (a la salida de la
columna).
La forma integrada de la ecuacin (7.78) para el caso de n = N , conduce a
una expresin de la siguiente forma:
c(L, )
1
= [1 + Erf()]
c0
2
donde:
=
o
1
2 2 A
(7.79)
328
CAPTULO 7. ADSORCIN
y Erf es la funcin error dada por:

2
Erf (x) =
x
e d
En la Figura 7.35b se presenta la curva de c(L, ) vs para el caso de

N = 100. En la misma figura se presenta la curva para la derivada de la funcin:
1 dc(L, )
c0
d
La ecuacin (7.79) puede ser expresada en funcin del tiempo real utilizando
la definicin de para obtener:
t t
c(L, t)
1
o
= 1 + Erf 1
c0
2
2 2 to
(7.80)
La ecuacin (7.80) describe la curva de ruptura que predice la teora de

platos. Esta permite caracterizar columnas mediante el ajuste de datos experimentales y la determinacin de los parmetros hipotticos N y HET P dados
por la ecuacin:
L
(7.81)
N
donde HET P es la altura equivalente de un plato terico (de sus siglas en
ingls).
La teora de platos no permite predecir la forma de la curva de ruptura
cuando cambian las condiciones de operacin. Sin embargo, con este propsito
suelen combinarse frecuentemente los resultados de la teora de platos con los
de la teora cintica que se presenta en la siguiente seccin.
HET P =
Teora cintica
Los modelos de columnas de adsorcin que se enmarcan dentro de la teora
cintica se desarrollan mediante la combinacin de balances de masa, relaciones
de equilibrio, relaciones de transferencia de masa entre las fases y las condiciones
iniciales y de frontera del sistema.
El modelo fsico de la teora cintica consiste en la adsorcin isotrmica de
un soluto que fluye a travs de un lecho fijo empacado con partculas difusivas
de radio promedio, rm , y porosidad, i (Fig. 7.36a). La concentracin de soluto
en la solucin a la entrada de la columna es, co , la concentracin transiente de
soluto en el sistema es, c(z, t), y fluye con una velocidad intersticial, , a travs
de la columna de altura, L, y una porosidad de lecho, . Las concentraciones
329
de soluto en las fases lquida y slida del adsorbente son, ci (r, z, t) y qi (r, z, t),
respectivamente. La dispersin del flujo en la columna se caracteriza por el
coeficiente de dispersin axial, Dax .
Figura 7.36: Adsorcin de lecho fijo. a) Diagrama conceptual de la columna y b)

Componentes del balance de soluto en un elemento de volumen de la columna.
Considerando una seccin de una columna como la que se muestra en la
Figura 7.36b, el balance de soluto en la fase lquida en un elemento de volumen
puede ser expresado en palabras como:
Acumulacin = Entrada por conveccin Salida por conveccin
+Entrada por dispersin Salida por dispersin
Velocidad de adsorcin
En un sistema isotrmico y despreciando los efectos radiales este balance
puede ser escrito como:
V c |t+t V c |t
t
F c |z F c |z+z

c
c
+ Dax
A |z Dax A |z+z
z
z
RV
dividiendo entre V = Az y tomando lmites, se obtiene la ecuacin diferencial que describe el balance de soluto en una columna:
c
2c
c
R
Dax 2 +
=
(7.82)
t
z
z
donde R es la velocidad de transferencia de masa entre las fases por unidad de

volumen de lecho (adsorbente y lquido).
330
CAPTULO 7. ADSORCIN
La diversidad de modelos de la teora cintica se derivan de la forma particular que adopta la ecuacin anterior. Algunos modelos no consideran la acumulacin en el lquido o la dispersin en la columna (modelos no dispersivos).
Un rango distintivo de los modelos es la forma particular del lado derecho de
la ecuacin, que depende del o los mecanismos controlantes de la adsorcin que
sean significativos (pelcula, poro, cintica), del tipo de equilibrio en el sistema
y las condiciones de frontera. En los siguientes prrafos se presentan algunos
modelos particulares de la teora cintica.
Modelo de equilibrio La forma cualitativa de la respuesta dinmica de una
columna est determinada completamente por las relaciones de equilibrio. La
forma de los perfiles de concentracin y por lo tanto de las curvas de ruptura
puede ser modificada considerablemente por efectos cinticos, pero stos siempre
son secundarios, en el sentido que no introducen nuevos patrones de comportamiento, sino que slo modifican el comportamiento pronosticado a partir de
consideraciones de equilibrio.
En los modelos de equilibrio todos los efectos cinticos se desprecian y la
forma de la zona de transferencia de masa slo depende del tipo de equilibrio.
Este enfoque ha sido til para el anlisis preliminar de columnas, as como para
el anlisis del comportamiento de sistemas complejos.
La utilidad del enfoque de los modelos de equilibrio puede ser ilustrada
considerando el caso simple de un sistema en el cual el flujo es ideal y se alcanza
el equilibrio local. Bajo estas condiciones la ecuacin (7.82) se reduce a:
con,
c
c
=
R
t
z
R = (1 )
q
t
(7.83)
(7.84)
Por regla de la cadena:

q
dq c
=
t
dc t
combinando las ecuaciones anteriores se obtiene:
c
dq c
c
=
(1 )
t
z
dc t

dq c
c
+ (1 )
=
dc t
z
rearreglando,
c
+
t
c
=0
dq z
+ (1 )
dc
(7.85)
331
A partir de la ecuacin anterior se puede definir W (c) como la velocidad del

frente de concentracin de una onda.
c
z
= t =
(7.86)
W (c) =
c
dq
t
+ (1 )
z
dc
Cuando la isoterma es lineal el trmino dq/dc es constante y W (c) es constante. El perfil de concentracin es simtrico.
Cuando la isoterma es desfavorable el trmino dq/dc de la ecuacin anterior
aumenta al aumentar la concentracin y la velocidad de onda disminuye. La
zona de transferencia de masa (ZTM) se ensancha conforme avanza la onda a
travs de la columna, formando el llamado patrn proporcional.
Cuando la isoterma es favorable dq/dc disminuye al aumentar la concentracin y la velocidad de onda aumenta. La zona de transferencia de masa
tiende a desaparecer debido a que se forman perfiles invertidos ilgicos. En tales
situaciones la onda debe ser sustituida por el frente de choque.
En el comportamiento llamado de patrn constante el efecto de compactacin
de la onda cuando el equilibrio es favorable, se compensa con los efectos dispersivos y la onda no se altera a lo largo de la columna (Ruthven, 1987).
Modelo de tres resistencias En el modelo cintico de tres resistencias, el
transporte del soluto involucra: a) la transferencia interfacial desde el seno del
lquido a travs de la pelcula estancada que rodea el adsorbente que se caracteriza por el coeficiente de transferencia de masa en la pelcula, kL , b) la difusin
del soluto en el lquido del poro del adsorbente que se describe utilizando el
coeficiente de difusin efectiva, Di , y c) el paso de adsorcin del soluto en los
sitios activos de la superficie del adsorbente. La velocidad intrnseca de adsorcin
puede ser descrita por diferentes modelos cinticos. En esta seccin se utiliza un
modelo de adsorcin desorcin tipo Langmuir.
De acuerdo a la teora cintica el modelo se integra por la combinacin de
balances de masa, relaciones de equilibrio, relaciones de transferencia de masa
entre las fases y las condiciones iniciales y de frontera del sistema.
En este caso el balance de soluto en la columna puede expresarse como:
c
2c
c
3 (1 )
Dax 2 +
=
kL (c ci )|r=rm
t
z
z
rm
(7.87)
La ecuacin para describir el cambio de concentracin del soluto en los poros

del adsorbente puede ser obtenida mediante un balance de soluto en la partcula,
2

ci
qi
ci 2 ci
i
+ (1 i )
= i Di
+
(7.88)
t
t
r2
r r
Generalmente se utilizan modelos sencillos para describir las complejas interacciones entre el soluto y el adsorbente. En este caso se utiliza el modelo de
Langmuir donde la velocidad de adsorcin se representa como:
332
CAPTULO 7. ADSORCIN
qi
= k1 ci (qm qi ) k1 qi
(7.89)
t
donde qm es la capacidad de adsorcin mxima.
Las ecuaciones del modelo pueden ser resueltas utilizando las siguientes
condiciones iniciales y de frontera:
Al inicio de la operacin no hay soluto presente en el sistema, de tal manera
que las condiciones iniciales del sistema son,
en t = 0
c = 0,
0zL
(7.90)
en t = 0
ci = 0,
0 r rm
(7.91)
en t = 0
qi = 0,
0 r rm
(7.92)
Las condiciones frontera que se utilizan para la columna son las de Danckwerts (Danckwerts, 1953) que consideran dispersin a la entrada de la columna
y mezclado perfecto a la salida,
0
c 00
en z = 0 c|z=0 Dax
= co
t>0
(7.93)
z 0z=0
0
c 00
en z = L
= 0,
t>0
(7.94)
t 0z=L
Debido a la simetra de la partcula,
0
ci 00
= 0,
en r = 0
r 0r=0
t>0
(7.95)
En la boca del poro de las partculas se cumple que,
en r = rm
kL (c ci )|r=rm = i Di
0
ci 00
, t>0
r 0r=rm
(7.96)
El modelo de tres resistencias no tiene solucin analtica y tiene que ser

resuelto por mtodos aproximados (Montesinos et al., 2005).
Anlisis adimensional Los modelos matemticos de los procesos de adsorcin frecuentemente no tienen solucin analtica. El enfoque de anlisis adimensional ha sido utilizado para encontrar soluciones analticas para los casos
donde una sola resistencia controla el proceso de adsorcin o bajo la suposicin
de patrn constante.
En el anlisis se utiliza el modelo no dispersivo que considera que la dispersin axial en el sistema es baja comparada con los efectos cinticos, de tal
manera que el balance de soluto en la columna se expresa como:
333
c
c
q
+
= (1 )
t
z
t
donde q es la concentracin promedio de soluto en el adsorbente.
La forma general de la cintica controlante es:
q
= f(c, q)
t
Las condiciones iniciales y de frontera son:
(7.97)
(7.98)
en t = 0
q=0
(7.99)
en z = 0
c = co
(7.100)
Efectuando el cambio de variable t = t z/, el balance en la columna se

expresa como (Arnold et al., 1985):
c
q
= (1 )
(7.101)
z
t
Las soluciones particulares de este sistema de ecuaciones se obtienen adimensionalizando el modelo anterior utilizando los siguientes grupos adimensionales
de las concentraciones:
X=
c
;
co
Y =
q
qo
(7.102)
donde qo es la concentracin correspondiente al equilibrio con co . En el caso de

equilibrio tipo Langmuir qo = (qm co ) /(Kd + co ).
Otro grupo adimensional es el volumen procesado adimensional, T ,
T =
Kd ( 1)
(1 )qm
(7.103)
donde es el factor de separacin y es el tiempo adimensional dados por:

=1+
co
;
Kd
t
L
(7.104)
En el anlisis se define un nmero de unidades de transferencia N (tambin

conocido como N T U ), como el cociente del coeficiente de transferencia de masa
y el tiempo de residencia. Este nmero que caracteriza la forma y empinacin
de la zona de transferencia de masa y est dado por:
L
(7.105)
donde es un coeficiente de transferencia de masa, una constante de adsorcin

o simplemente una constante cintica agrupada.
La expresin especfica de N cuando controla la cintica, la pelcula o el poro
es:
N=
334
CAPTULO 7. ADSORCIN
Nk =
(1 )qm k1 L
(7.106)
NL =
(1 )kL aL
(7.107)
15(1 )i Di L
2
rm
(7.108)
Np =
Conforme se aumenta la longitud de la columna o se disminuye la velocidad

aumenta el nmero de unidades de transferencia N , producindose una curva
de ruptura ms empinada y una mayor capacidad de operacin de la columna.
El efecto es ms pronunciado con isotermas favorables. En la prctica, se tiene
que buscar un ptimo entre la capacidad dinmica alcanzada en una operacin
y el rendimiento espacio-tiempo del proceso (Gebauer et al., 1997).
No existe una solucin analtica general del modelo no dispersivo. Las soluciones particulares que han sido obtenidas describen la concentracin de salida
de la columna en funcin de los nmeros adimensionales en la forma:
X = f (T, N, )
(7.109)
Cuando la expresin del mecanismo limitante adopta la forma de una fuerza

impulsora lineal para la difusin en el poro, la cintica de Langmuir o la resistencia en la pelcula, el modelo adimensional toma la siguiente forma (Vermeulen
et al., 2007):

X
Y
=
(7.110)
NT N
N NT
Modelo cintico de parmetro agrupados La relacin ms general
que ha sido desarrollada para describir la curva de ruptura considera como
el mecanismo limitante de la adsorcin una cintica de Langmuir y se conoce
como modelo de Thomas (Thomas, 1944). Se supone que todos los procesos que
limitan la velocidad de adsorcin del soluto pueden ser representados por las
constantes cinticas. En el modelo la expresin cintica est dada por:
q
= k1 c (qm q) k1 q
t
(7.111)
En este caso particular, se tiene una solucin analtica del modelo no dispersivo que se expresa de la siguiente forma:

N
J
, NT

(T, N ) =
N
NT
1
J
, N T + 1 J N,
exp (1 )(N N T )
(7.112)
335
donde J es una funcin de los parmetros y dada por:

2
J(, ) = 1 e
e Io (2 )d
(7.113)
donde Io es la funcin Bessel modificada de primer tipo y orden cero (Hiester y

Vermeulen, 1952).
Ejemplo 7.11. Adsorcin de lisozima en una matriz de Cibacron
Blue Sefarosa CL-6B. Modelo de Thomas.
Se realizaron estudios sobre la cintica de adsorcin de lisozima en un adsorbente Cibacron Blue Sefarosa CL-6B, en una solucin amortiguadora al 0.05M
de Tris - HCl a pH = 7.2 y a 25 C, en un arreglo experimental tipo columna
de lecho fijo. (Chase, 1984). Los datos colectados de concentracin de soluto a
la salida de la columna a diferentes tiempos fueron los siguientes:
t (min)
c (mg/mL)
t (min)
c (mg/mL)
0.00
0.000
100.43
0.500
50.43
0.041
107.57
0.598
71.86
0.095
114.71
0.696
75.43
0.187
118.28
0.810
86.14
0.288
125.43
0.899
93.28
0.383
161.14
0.975
Los valores de las variables de operacin y del sistema utilizado se muestran

a continuacin:
Variable
Conc. de lisozima a la entrada
Flujo
Longitud de la columna
Dimetro de la columna
Porosidad del lecho
Radio de las partculas
Constante de equilibrio
Capacidad de adsorcin mxima
Valor
co = 7.14 103 mol/m3
F = 1.67 108 m3 /s
L = 0.014 m
CD = 0.01 m
= 0.39
rm = 5 105 m
Kd = 1.748 103 mol/m3
qm = 1.333 mol/m3
Se pide: Obtener la curva de ruptura del sistema utilizando el modelo de

parmetros agrupados.
Solucin:
En la Figura 7.37 se presenta un programa MATLAB para la obtencin de
la curva de ruptura del sistema experimental utilizando el modelo de Thomas.
La Figura 7.38 muestra la curva obtenida empleando k1 = 0.286 m3 /mols.
Patrn constante Cuando se alcanza el patrn constante en una columna
la concentracin de soluto en la fase lquida y en la fase slida varan proporcionalmente, el balance de masa en la columna se reduce a:

qo
qm
q
=
=
(7.114)
c
co
Kd + co
336
CAPTULO 7. ADSORCIN
Figura 7.37: Programa MATLAB para obtener la curva de ruptura del Ejemplo
7.11.
o en forma adimensional,
X=Y
(7.115)
de esta manera se reduce considerablemente la complejidad del modelo (Helfferich y Carr, 1993). Matemticamente, la operacin de patrn constante asemeja una operacin a contracorriente con una lnea de operacin con pendiente
de 45 (Vermeulen et al., 2007).
Cuando una isoterma es favorable, slo en la regin inicial de la columna la
ZTM se ensancha conforme avanza, pero a cierta distancia alcanza una forma
asinttica como ZTM estable sin cambios adicionales. La forma de la curva de
ruptura depende slo del paso limitante de la adsorcin.
Tericamente es posible alcanzar un patrn constante slo cuando el equilibrio es favorable, dado que es el nico tipo de equilibrio que tiende a compactar
la ZTM y compensar los efectos dispersivos de la resistencia a la transferencia de
masa. En la prctica, la suposicin de patrn constante es generalmente vlida
para sistemas de equilibrio muy favorables o irreversibles (Yang yTsao, 1982).
Cuando el equilibrio es de tipo Langmuir c > Kd y el factor de separacin > 1.
En equilibrios irreversibles c >> Kd y . En este caso la concentracin
adimensional a la salida de la columna se reduce a:
X = f (T, N )
(7.116)
Hall et al., 1996 resolvieron el modelo no dispersivo bajo la suposicin de
337
Figura 7.38: Curva de ruptura del Ejemplo 7.11. (o) datos experimentales. ()
ajuste del modelo de Thomas con k1 = 0.286 m3 /mols.
equilibrio irreversible, reaccin muy rpida (equilibrio) y patrn constante. En
su modelo se incluyeron las resistencias en la pelcula y el poro. La ecuacin de
la curva de ruptura obtenida es:
Np (T 1) =
1
Np
(ln X + 1) + 2.44 3.66 (1 X) 2
NL
(7.117)
Cuando slo controla la difusin en el poro (Np 0), la ecuacin anterior

se simplifica a:
X =1
2 Np (T 1)
3
3.66
2
(7.118)
Cuando la resistencia en la pelcula es la limitante (Np ), (dividiendo

la expresin entre Np ) entonces,
X = exp [NL (T 1) 1]
(7.119)
Modelo cintico: Equilibrio lineal y fuerza impulsora lineal en el lquido Este modelo puede ser aplicado cuando se utilizan razonablemente las siguientes suposiciones: a) el proceso es isotrmico, b) la relacin de equilibrio es
lineal, c) la fuerza impulsora de la adsorcin es lineal, d) no existe dispersin en
la columna, e) la acumulacin de soluto en la fase lquida es despreciable y f) la
distribucin y el tamao de las partculas del adsorbente son uniformes.
Con las consideraciones anteriores el sistema de ecuaciones que describe el
comportamiento de la columna, en el caso de que el control de la transferencia
de masa est dado por una resistencia lineal, por ejemplo por la pelcula, son
las siguientes:
Relacin de equilibrio.
338
CAPTULO 7. ADSORCIN
q = Kc
(7.120)
Balance de soluto en fase lquida.

0 =
c
R
z
(7.121)
Velocidad de transferencia de masa.

R = (1 )kL a(c c )
(7.122)
Balance de soluto en el adsorbente.

(1 )
q
=R
t
(7.123)
Condiciones iniciales y de frontera.

t = 0, z, q = 0
t > 0, z = 0,
c = c0
La combinacin de las ecuaciones (7.120)-(7.123) conduce a las siguientes

dos expresiones:

c
q
= (1 )kL a c
z
K
(1 )

q
q
= (1 )kL a c
t
K
(7.124)
(7.125)
Estas dos ecuaciones conjuntamente con las condiciones iniciales y de frontera, pueden adimensionalizarse con las siguientes variables:
NT
(1 )kL aL
z
kL a t
K
c
c0
q
Kc0
339
obtenindose el siguiente sistema de ecuaciones:

X
= (X Y )
N
(7.126)
Y
= (X Y )
N T
(7.127)
Y
X
=
N T
N
(7.128)
o bien
con las condiciones:

N T = 0, Y = 0, N
N = 0, X = 0, N T
Las ecuaciones (7.126) y (7.127) han sido resueltas utilizando transformadas
de Laplace (Bird et al., 2002), obtenindose la siguiente expresin para la curva
de ruptura:
X =1
N
0

2
e(NT +N) Jo 2i (N ) (N T ) dN
(7.129)
donde i = 1, y Jo es una funcin Bessel de primer tipo y orden 0.

En la Figura 7.39 se presenta una solucin grfica de la ecuacin (7.129).
Esta grfica puede ser usada para evaluar kL a a partir de datos de laboratorio o
predecir curvas de rompimiento utilizando correlaciones para kL a. Sin embargo,
es importante recordar que las consideraciones del modelo deben ser aplicables
al caso particular.
Cuando el equilibrio es lineal estos resultados son anlogos para cada uno
de los casos donde un mecanismo es el controlante, de tal manera que N o el
nmero de unidades de transferencia que se puede utilizar en la ecuacin (7.129)
es cualquiera de los establecidos en las ecuaciones (7.106)-(7.108), debido a que
para un equilibrio lineal (Y Y ) = (X X ). La curva de ruptura tiene igual
forma independientemente del mecanismo controlante (Hall et al., 1966).
Este modelo puede ser utilizado para predecir curvas de ruptura a partir
de correlaciones para kL a y para obtener valores de este coeficiente a partir de
datos experimentales de curvas de ruptura utilizando la Figura 7.39.
340
CAPTULO 7. ADSORCIN
Figura 7.39: Solucin grfica de la ecuacin de la curva de ruptura. Modelo

cintico: equilibrio lineal, resistencia lineal. Fuente: Vermeulen et al., 1973. Rec
producida con el p erm iso de M cGraw-Hill Inc. Copyright 1973.
Modelo de adsorcin de lecho a contracorriente En una adsorcin de

lecho fijo la zona de adsorcin se mueve hacia abajo de la columna. En el modelo
de adsorcin de lecho a contracorriente, se supone que el adsorbente se mueve
hacia arriba a contracorriente del fluido, de tal manera que la zona de adsorcin
en la columna permanece estacionaria (Fig. 7.40).
Figura 7.40: Modelo de adsorcin de lecho a contracorriente.

El modelo supone que la longitud de la columna es infinita (en lugar de
suponer equilibrio lineal), de tal manera que en la parte superior de la columna
el adsorbente est en equilibrio con la solucin de entrada y en la parte inferior la
341
solucin est libre de soluto. El modelo supone adems: a) adsorcin isotrmica,

b) dispersin despreciable c) volumen lquido en la columna mucho menor que
el volumen procesado y d) mecanismo de transferencia de masa lineal.
El balance de soluto entre la salida de la columna y un punto z est dado
por:
F (c 0) = S(q 0)
(7.130)
dc
= (1 ) kL a(c c )
dz
(7.131)
que es la curva de operacin del sistema. S es un flujo hipottico de adsorbente.

De acuerdo a la ecuacin (7.82) y las suposiciones del modelo, el balance de
soluto es un balance de estado estacionario y est dado por:
La ecuacin anterior puede integrarse para encontrar la longitud necesaria

de la columna para lograr un determinado grado de separacin, de tal manera
que:
(1 ) kL a
L
c
dz =
0
c0
dc
(c c )
integrando se obtiene:
c0
dc
L=
(1 ) kL a
(c c )
o bien,
(7.132)
L = [HT U][N T U ]
donde HT U es la altura de una unidad de transferencia y N T U es el nmero
de unidades de transferencia.
La aplicacin de este mtodo requiere una integracin numrica de datos
de laboratorio para evaluar kL a, con el cual se pueden efectuar estudios de
escalamiento.
Combinacin teora de platos - teora cintica (equilibrio lineal)
La combinacin de modelos obtenidos por medio de la teora de platos con
modelos obtenidos por medio de la teora cintica, permite mantener la estructura sencilla de la teora de platos y poder correlacionar el efecto de los cambios
en las variables de operacin sobre la forma de la curva de ruptura, lo cual
es til para establecer las relaciones necesarias para mantener los mismos perfiles de concentracin (prdidas, tiempo de operacin, etc.) entre dos escalas de
operacin de inters.
342
CAPTULO 7. ADSORCIN
Una primera aproximacin a este enfoque es la combinacin de los resultados

de la teora de platos resumidos en la ecuacin (7.80), con los resultados de la
teora cintica con un mecanismo lineal controlante y equilibrio lineal, resumidos
en la ecuacin (7.129), de tal manera que:
.
N = NTU
Esta aproximacin permite correlacionar la pendiente de la curva de rompimiento con variables de operacin, de tal manera que para cada uno de los casos
estudiados se tiene lo siguiente:
t
1
1
c
(7.133)
= 1 + Erf o 1
c0
2
2 2
Cuando el mecanismo controlante de la adsorcin est localizado en la pelcula de lquido que rodea a la partcula de adsorbente, de acuerdo a la ecuacin
(7.107),
N
kL aL
por ecuacin (7.20),

kL
dp
1/2
por ecuacin (7.14),

a
1
dp
entonces,
N
L
3/2
1/2 dp
Anlogamente, cuando el mecanismo controlante es la difusin del soluto en

el seno del adsorbente,
N
L
d2p
si el mecanismo de control es la difusin del soluto al interior del poro,
343
L
d2p
en el caso que el mecanismo controlante sea la dispersin,

N
L
dp
De tal manera que para el modelo combinado lineal se puede generalizar que:
N
L
n dn+1
p
(7.134)
Con:
n = 1/2 para control de la pelcula.
n = 1 para control de la difusin en el slido.
n = 1 para control de la difusin al interior del poro.
n = 0 para control de la dispersin.
Ejemplo 7.12. Adsorcin de Inmunoglobulina G en protena A

inmovilizada en una matriz de agarosa en una columna empacada.
Se utiliza una columna de 1.0 cm de dimetro empacada con agarosa con protena A inmovilizada, para adsorber ImG a partir de una solucin que contiene
1.71 mg/mL de esta protena a pH=7.5. El volumen del lecho es de 2.1 mL con
una porosidad de 0.35. El equilibrio es tipo Langmuir. Los datos experimentales
son los siguientes:
Datos del adsorbente:
Datos de la solucin:
dp = 90 106 m
= 0.35
p = 1028 kg/m3
qm = 43 mg/mL
Kd = 0.019 mg/mL
i = 0.96
L = 1000 kg/m3
L = 9.5 104 kg/ms
F = 0.4 cm3 /min
DAB = 5.5 1011 m2 /s
El coeficiente de transferencia de masa puede ser estimado utilizando la

siguiente correlacin:
kL dp
= 2 + 1.45
DAB
dp L
L
1/2
L
L DAB
1/3
La curva de ruptura experimental se muestra en la Figura 7.41.
344
CAPTULO 7. ADSORCIN
Figura 7.41: Curva de ruptura experimental ImG-Protena A. Datos de: Hortsman y Chase, 1989.
Se pide:
a) Estimar grficamente el porcentaje de prdidas si se deja correr la adsorcin hasta que c/c0 = 0.1.
b) Estimar a partir de la curva de ruptura la fraccin de lecho ocupado
cuando c/c0 = 0.1, suponiendo que el lecho se agota a los 200 min.
c) Comparar los datos experimentales con la prediccin del modelo de platos.
d) Comparar los resultados experimentales con la prediccin del modelo
cintico: equilibrio lineal-resistencia lineal.
e) Comparar los resultados experimentales con los del modelo de lecho continuo.
Solucin:
a) Las prdidas se pueden calcular mediante la siguiente expresin:
Prdidas =
t
0
t
cdt
c0 dt
En forma aproximada la expresin anterior equivale a el rea del tringulo

bajo la curva de ruptura en el punto de ruptura, la cual de acuerdo a la curva
de ruptura experimental es:
Prdidas =
(0.1 0)(110 90)

100 = 0.9 %
(2)(110)
b) La fraccin de lecho ocupado de acuerdo a la ecuacin (7.70):
=1
t
2tR
345

(tS tR )
(200 110)
=1
= 1
= 0.60
2tR
2 110
c) El Modelo de Platos est dado por la ecuacin (7.80):

t to
c0
1 + Erf
c(L, t) =
1
2
2 2 A
De la Figura 7.41 se pueden obtener dos pares de datos para calcular A .
Para
Para
c
c0
c
c0
= 0.5
to = 140 min
= 0.1
tR = 110 min
Con estos dos puntos sobre la curva de ruptura se puede estimar

1
110 140
0.1 =
1 + Erf
1
2
22
de tal manera que:
A = 23.33 min
En la Figura 7.42 se muestra la curva de ruptura de acuerdo a este modelo.
Figura 7.42: Curva de ruptura. Modelo de platos. Ejemplo 7.12 c.

d) Modelo Cintico. La curva de ruptura en este caso est dada por la
ecuacin (7.129) que puede aproximarse a (Vermeulen et al., 1973):

1
1 + Erf
NT N
X=
2
346
CAPTULO 7. ADSORCIN
Clculos:
rea de la seccin transversal de la columna:
A=
1.0 cm2
Dc
=
= 0.785 cm2
4
4
Velocidad superficial:
cm3
F
min = 8.3 105 m
=
=
A
0.785 cm2
s
0.4
Coeficiente de Transferencia de Masa:

Utilizando la correlacin proporcionada se puede calcular kL .
(kL )(90 106 m)
=
m2
11
5.5 10
s
= 2 + 1.45
kL
90 10
9.5 104
kg 1/2
m
1000 3
m 8.3 10
s
m
kg
9.5 104
ms
1/3
kg
5
ms
2
kg
m
1000 3 5.5 1011
m
s
6 m
= 3 10
s
rea por volumen de lecho:

a=
6
6
=
= 66, 666 m1
dp
90 106 m
Coeficiente de transferencia de masa volumtrico:

kL a = 3 106
Variables adimensionales:
m
66, 666 m1 = 0.2 s1
s
NT
NT
347
(1 0.35)(0.2 s1 )(2.67 cm)

(1 )kL aL

= 41.8
=
m 100 cm
8.3 105
s
m

2.67 cm 0.35

0.2 s1 t
L
m
100
cm
5
(kL a) t
8.3
10
s
m
=
=
K
(25)
= 8 103 (t 112.6)
=
donde t est dado en segundos.

En la Figura 7.43 se muestran los resultados en forma grfica. En la Figura
7.43a se observa que el ajuste del modelo a la curva real es muy pobre. Utilizando
el mismo modelo con K = 33 y kL = 1.5 105 m/s, se produce un ajuste ms
adecuado (Fig. 7.43b).
Figura 7.43: Curvas de ruptura. a) Modelo cintico lineal. Ejemplo 7.12d. K =

25 y kL = 3 106 m/s y b) Modelo cintico lineal. Ejemplo 7.12d. K = 33 y
kL = 1.5 105 m/s.
e) Modelo Contracorriente. De acuerdo a la ecuacin (7.32) el empleo de este
modelo implica una integracin como la que se muestra en la Figura 7.44.
La curva de operacin que se muestra en la Figura 7.44a est comprendida
entre los puntos (0, 0) y [c0 , q(c0 )]. La curva de equilibrio se obtiene dando
valores a c, en el rango de 0 a c0 , en la ecuacin de equilibrio. Los valores de
c se obtienen con valores de q tomados de la curva de operacin y sustituidos
la ecuacin de equilibrio. La tabla siguiente muestra algunos valores de estos
clculos.
348
CAPTULO 7. ADSORCIN
Figura 7.44: Ejemplo 7.12e. Modelo lecho a contracorriente. a) curvas de equilibrio y operacin y b) Integracin grfica.
c
1.7099
1.7095
1.7090
1.7050
0.5000
0.2000
0.1000
0.0500
0.0300
0.0100
0.0050
q
42.5250
42.5150
42.5026
42.4031
12.4349
04.9740
02.4870
01.2435
00.7461
00.2487
00.1243
c
1.7009
1.6657
1.6236
1.3498
0.0077
0.0025
0.0012
0.0006
0.0003
0.0001
0.0001
q
42.5274
42.5273
42.5272
42.5261
41.4258
39.2694
36.1345
31.1594
26.3265
14.8276
08.9583
1/(c c)
111.7
022.8
011.7
002.8
002.0
005.1
010.1
020.2
033.7
101.1
202.2
El rea bajo la curva de la Figura 7.44b es de 1.346 y de acuerdo a la ecuacin

(7.132),

c0
dc
L=
(1 ) kL a
(c c )
c
(1.346)
(1 ) L
m 100 cm
8.3 105
s
m
kL a =
(1.346) = 0.0064 s1
(1 0.35) 2.675 cm
kL a =
7.5. SUMARIO
7.5.
349
Sumario
La operacin de adsorcin permite procesar soluciones diluidas para concentrar solutos mediante su inmovilizacin reversible en slidos especializados
llamados adsorbentes. En el estudio de la adsorcin son de fundamental importancia cuatro aspectos: los tipos de adsorbentes disponibles, los mecanismos de
adsorcin de acuerdo al tipo de interaccin soluto-adsorbente, las relaciones de
equilibrio de los sistemas y la cintica de la adsorcin.
La operacin de adsorcin puede realizarse en forma por lotes o continua
en tanques agitados, pero se realiza ms frecuentemente en columnas de lecho
fijo. La descripcin de la dinmica de la adsorcin es relativamente compleja y
puede ser abordada mediante diferentes enfoques que conducen a diseos que
varan desde los puramente empricos hasta los muy sofisticados.
350
7.6.
CAPTULO 7. ADSORCIN
Problemas
7.1. Parmetros de equilibrio. La Figura 7.45 muestra los datos de equilibrio del sistema para el sistema albmina-S Sefarosa FF a pH = 5 y T = 25
C.
Se pide: Calcular las constantes kd y qm del sistema.
Figura 7.45: Curva de equilibrio para albmina. Fuente: Skidmore et al., 1990.
c
Todos los derechos reservaReproducida con el p erm iso de Elsevier Science Inc. Copyright 1990.
dos.
7.2. Adsorcin por lotes. Un volumen de 2 litros de una solucin proteica con una concentracin de soluto de 0.5 mg/mL, se mezcla con 50 mL de
adsorbente en una operacin por lotes y se obtiene un 90 % de recuperacin.
Se pide: Estimar la concentracin final de soluto en el adsorbente.
7.3. Clculo de recuperacin. Estimar el porcentaje de recuperacin del
Ejemplo 7.8 si la adsorcin se deja a correr 2.0 h.
7.4. Ecuacin de diseo. Encontrar la expresin matemtica para q(t) en
el caso del adsorbedor tipo tanque agitado continuo.
7.5. Curvas de ruptura. Simular el perfil adimensional de un adsorbedor
de columna utilizando el modelo de la teora de platos con to = 30 min, para
los siguientes tres casos: a) N = 50, b) N = 100 y c) N = 300.
7.6. Anlisis paramtrico. La curva de ruptura de una columna puede
simularse adecuadamente mediante un modelo cintico lineal con K = 150,
= 0.35, kL = 104 m/s, F = 50 cm3 /min, A = 0.785 cm2 y L = 10 cm.
Se pide: Analizar el efecto sobre la curva de ruptura de 20 % de variacin
en kL a, K y F , considerando los parmetros restantes constantes.
7.6. PROBLEMAS
351
7.7. Equilibrio lineal y fuerza impulsora lineal en el lquido. Obtener

la ecuacin (7.129). Pista: Ver Problema 23D1 de Bird et al., 2002).
7.8. Procesamiento integral en tanques. El procesamiento directo de
caldos completos para la recuperacin de productos extracelulares, se ha estudiado como una alternativa para disminuir las prdidas asociadas a varios
pasos de recuperacin, y por lo tanto incrementar la recuperacin. Sin embargo,
el procesamiento de caldos completos en columnas puede originar problemas
de taponamiento de stas, entonces una alternativa es el uso de adsorbedores
continuos tipo tanque. Este sistema ha sido utilizado en la recuperacin de
novobiocina (Payne, 1989).
Considere un tanque perfectamente agitado en el cual la solucin y el adsorbente siempre estn en equilibrio lineal con una constante K = 0.015 L/g
adsorbente. El tiempo de residencia en el tanque VL /F = 0.33 h, la relacin de
adsorbente a flujo es S/F = 98 gh/L y la concentracin de la solucin a la
entrada c0 = 2 g/L.
Se pide: Obtener la variacin de la concentracin de novobiocina en la salida
del tanque.
7.9. Lecho mvil. Se utiliza una columna de intercambio inico de lecho
mvil para separar cefalosporina de un caldo de fermentacin que contiene 5 g/L
del antibitico, utilizando una relacin de flujos de 10 a 1. La velocidad de flujo
de lquido permisible es de 1.5 m/h y el coeficiente volumtrico de transferencia
de masa toma un valor de 12.0 h1 . La relacin de equilibrio del sistema es:
q = 25c1/2
donde q est en g/L de resina mientras que c en g/L de solucin.
Se pide: Determinar la altura necesaria de la columna si el objetivo es
recuperar el 96 % de cefalosporina.
Resp. L = 0.6 m
7.10. Adsorcin en columna. Un nuevo antibitico se va a separar de
un caldo de fermentacin mediante una operacin de adsorcin en lecho fijo,
utilizando una columna de 5 cm de dimetro y 50 cm de longitud. En esta
columna el coeficiente de transferencia de masa volumtrico [kL a(1)] esperado
es de 9 h1 . La alimentacin a la columna tiene una concentracin de 4.0 g/L
y se desea que la corriente de salida contenga solamente 0.1 g/L.
La relacin de equilibrio del sistema es:
q = 20c1/2
y la lnea de operacin est dada por:
q = 5(c 0.1)
Se pide: Estimar el flujo manejable por la columna.
352
CAPTULO 7. ADSORCIN
Resp. 150 L/h

7.11. Adsorcin en lotes. En la adsorcin intermitente de -galactosidasa
la relacin de la actividad inicial de la enzima en la solucin a la actividad de la
enzima en solucin a los 10 min es de 2.86; y a los 30 min de 5.755. Para tiempos
muy grandes el valor es de 7.39 (Pungor et al., 1987). Considerando el modelo
de adsorcin por lotes (equilibrio lineal y control de la pelcula) siguiente:
c
= P + (1 P ) exp(Bt)
c0
Se pide: Estimar los parmetros P y B.
Resp. P = 0.135 y B = 0.103
7.12. Simulacin de curva de adsorcin. En la adsorcin por lotes de
albmina en un adsorbente de Sefarosa la curva de equilibrio se puede aproximar
en forma lineal a:
q = 65c
Los parmetros de la adsorcin son:
kL = 5 106 m/s
= 0.99
dp = 105 106 m
c0 = 2 mg/mL
Se pide: Representar grficamente la variacin de la concentracin de soluto
en la fase lquida con el tiempo de adsorcin, suponiendo una sola resistencia
controlante y equilibrio lineal.
7.13. Modelo cintico: En una columna de lecho fijo empacada con S
Sefarosa se realiza la adsorcin de albmina bajo las siguientes condiciones:
q = 130c (aprox.)
kL = 5.6 106 m/s
= 0.35
dp = 105 106 m
c0 = 1 mg/mL
Dc = 1 cm
L = 2.3 cm
F = 1 cm3 /min
Se pide: Mediante el modelo cintico de resistencia en la pelcula y equilibrio lineal, obtener una representacin grfica de la curva de rompimiento del
sistema.
7.14. Patrn constante. En condiciones de adsorcin muy favorables (irreversible), la forma de la zona de transferencia de masa de la columna es
7.6. PROBLEMAS
353
independiente del tiempo (patrn constante). Bajo estas condiciones y con el

control de la resistencia a la transferencia de masa al interior del poro (modelo
adecuado para algunos procesos de afinidad), la curva de ruptura adimensional
es nica, permite representar varias condiciones de operacin, y est dada por
(Arnold et al., 1985):
X = 1
2
2
0.273Np (T 1)
3
Cuando se emplea una columna de Sefarosa 4B-cido-Arsanlico para adsorber anticuerpos monoclonales bajo las siguientes condiciones:
dp = 0.01 cm
= 0.011 cm/s
L = 16.5 cm
= 0.6
qR /c0 = 18.1
el modelo se ajusta a los datos experimentales con Np = 8.
Se pide:
a) Graficar la curva de ruptura para el escalamiento del sistema con qR /c0 =
18.1 y una columna de 15 60 cm , en los siguientes tres casos:
a1) = 0.020 cm/s, a2) = 0.015 cm/s y a3) = 0.010 cm/s.
b) Graficar X vs volumen alimentado (F t V ) en el rango de 70 a 86
litros, para cada uno de los tres casos anteriores.
c) Que significa el punto de interseccin de las tres curvas?
7.15. Obtencin de solucin modelo columna. Desarrollar un programa
para la obtencin de la solucin grfica del modelo Equilibrio lineal y fuerza
impulsora lineal en el lquido. Pista: Se puede utilizar la funcin besselj de
MATLAB.
7.16 Clculo del coeficiente de transferencia de masa a partir de la
curva de ruptura. Durante la adsorcin de una protena en un lecho fijo de 10
cm de longitud y 0.34 de porosidad, se alcanza el punto de ruptura c/c0 = 0.1
a las 9.5 horas de operacin de la columna a una velocidad superficial de 20
cm/h. La concentracin de la solucin de entrada es lo suficientemente diluida
para suponer un equilibrio lineal dado por la siguiente expresin:
q = 40c
donde c y q tienen unidades de mg/mL.
Se pide: Calcular el coeficiente de transferencia de masa kL a utilizando
el modelo cintico de equilibrio lineal y fuerza impulsora lineal en el lquido.
Pista: Obtener expresiones de N y NT en funcin de kL a y resolver por prueba
y error en la solucin grfica del modelo en el punto (9.5, 0.1) o bien utilizar la
ecuacin aproximada del Ejemplo 7.12.
354
CAPTULO 7. ADSORCIN
Resp. kL a = 100 h1
7.17 Seleccin entre dos tipos de adsorbentes. Se desea seleccionar un
adsorbente entre los tipos A y B, para la purificacin de ImG que se encuentra a
una concentracin de 5.0 g/L en un volumen de de 500 L de caldo. La adsorcin
y elucin de la ImG se realiza a diferentes pHs de tal manera que las isotermas
de cada una de estas etapas son diferentes. Los datos de los adsorbentes son los
siguientes:
Etapa
Adsorcin
Elucin
Adsorbente
Tipo A
Tipo B
qm = 0.7 g/L
qm = 0.4 g/L
Kd = 0.001 g/L Kd = 0.0001 g/L
qm = 0.005 g/L
qm = 0.001 g/L
Kd = 0.001 g/L
Kd = 0.05 g/L
Se pide: Seleccionar un adsorbente y explicar las bases de la seleccin.

7.18. Compresin de lechos. Se empaca una columna de 6.0 cm de
dimetro y 30 cm de altura de lecho con partculas de Sefadex de 80 m de
dimetro. La alimentacin que contiene eritropoyetina (EPO) en una solucin
0.05M de NaCl se alimenta a la columna a un flujo de 10 mL/min. La columna puede considerarse empacada en forma compacta (close packed) con una
porosidad de 0.27.
Despus de la etapa de adsorcin la columna se lava con buffer 0.05 M de
NaCl y se eluye con una solucin 1.0 M de NaCl. Durante la elucin las partculas
de adsorbente se contraen hasta alcanzar un dimetro de 40 m y se rearreglan
nuevamente en una forma compacta. Las viscosidades de los buffers de adsorcin
y elucin se pueden considerar iguales.
Se pide: Calcular el flujo durante la elucin despus que las partculas
alcanzan una altura de lecho estable, si la cada de presin a travs del lecho se
mantiene constante.
Resp. 20 mL/min
7.19. Purificacin por afinidad. Una columna de afinidad empacada con
Sefarosa-Gelatina se utiliza para purificar fibronectina (F) a partir de plasma
sanguneo de perro. El plasma contiene 400 mg/L de F. La isoterma de adsorcin
del sistema es:
q=
c
0.01 + c
(7.135)
donde c tiene unidades de mg/L de solucin y q tiene unidades de mg/mL de

adsorbente (sin lquido de poro).
El lecho tiene 20 cm de longitud, 3.0 cm de dimetro y una porosidad de 0.2.
Las partculas tienen una porosidad de 0.9. El plasma de perro es relativamente
barato comparado con el precio de la F y el costo del adsorbente. Debido a esto
7.6. PROBLEMAS
355
en cada corrida se utiliza al mximo la capacidad del lecho. Las resistencias a

la transferencia de masa pueden ser despreciadas en el sistema.
Se pide:
a) Establecer el volumen de plasma se puede procesar en la columna.
b) Calcular el porcentaje de F que se retiene en la columna despus de lavar
con buffer, suponiendo que no se pierde F del adsorbente durante esta etapa.
Resp. b) 17.9 %
7.20. Ajuste de datos de equilibrio al modelo de Langmuir. En un
estudio sobre la adsorcin del plsmido pDNA-CI sobre membranas de intercambio inico, en un buffer 10 mM tris/1.0 mM de EDTA a pH 8.0 y temperatura
ambiente, se obtuvieron los datos de equilibrio siguientes:
c
q
c
q
(mg/mL)
(mg/mL)
(mg/mL)
(mg/mL)
0.000
0.000
0.155
9.729
0.019
2.709
0.204
11.023
0.045
3.922
0.338
14.326
0.070
4.402
0.455
14.491
0.107
6.998
Se pide:
a) Estimar los parmetros de equilibrio qm y Kd ajustando el modelo de
Langmuir a los datos experimentales, por regresin lineal utilizando el mtodo
del doble recproco.
b) Estimar los parmetros de equilibrio qm y Kd ajustando el modelo de
Langmuir a los datos experimentales, utilizando una regresin no lineal.
c) Graficar los datos experimentales, la curva ajustada mediante regresin
lineal y la curva ajustada mediante regresin no lineal, en un sistema coordenado
q vs c. Pista: Se puede utilizar el programa MATLAB de la Figura 7.46.
7.21 Tiempo medio. Demostrar que en el punto medio de la curva de
ruptura de acuerdo al modelo de platos se cumple que:

1
L
1+
K
t0 =
356
CAPTULO 7. ADSORCIN
Figura 7.46: Programa MATLAB para regresin no lineal.
7.7.
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Vijayalakshmi, M.A. 1989. Pseudobioespecific ligan affinity chromatography.
TibTech. 7, 71-76.
Wang, N.L. 1990. Ion exchange in purification. En: Separations Processes in
Biotechnology. Asenjo, J.A. (Ed.). Marcel, Dekker. New York. 12, 359-400.
Yang, C.; Tsao, G.T. 1982. Packed-bed adsorption theories and their applications to affinity chromatography. En: Advances of Biochemical Engennering. Flechter, A. (Ed.). Springer-Verlag. New York. 25, 1-18
Yarmush, M.L.; Cotton, C.K. 1985. Affinity chromatography. En: Comprehensive Biotechnology. Murray, M.Y. (Ed.). Permagon Press. New York.
32, 507-521.
Parte IV
Purificacin del Producto
361
Una vez que los caldos biolgicos han sido concentrados el paso siguiente
dentro de un esquema general de separacin, es la purificacin del producto de
inters. En esta Parte IV del libro se presentan los principios generales de las
operaciones ms utilizadas para efectuar esta purificacin: la cromatografa por
elucin, la precipitacin, la ultrafiltracin y la electroforesis.
En el Captulo 8 se presenta la operacin de cromatografa por elucin que
puede analizarse empleando gran parte de los conceptos utilizados para describir
la adsorcin en lecho fijo revisada en el captulo anterior. En el Captulo 9 se
presenta la operacin de precipitacin, que requiere un enfoque fuertemente fisicoqumico muy caracterstico de esta operacin. En los Captulos 10 y 11, se
presentan las operaciones de ultrafiltracin y electroforesis dado que sus principios permiten un enfoque unificado.
Captulo 8
Cromatografa por Elucin

8.1.
Introduccin
La mayora de los bioprocesos involucran al menos una operacin cromatogrfica que frecuentemente es la clave para la factibilidad tcnica del proceso de
separacin. Aunado a que es una operacin relativamente cara, se debe tener
un especial cuidado en su escalamiento.
La cromatografa por elucin es un mtodo para separar en sus componentes
(resolver) una mezcla de solutos y es empleada con el propsito de purificar
productos de inters (Asenjo y Andrews, 2009). sta se efecta en columnas
empacadas con adsorbentes que pueden ser slidos, slidos porosos o geles. El
adsorbente constituye la fase estacionaria de la columna.
En la operacin de una columna cromatogrfica se aplica una pequea cantidad de muestra en la parte superior de la columna. Una vez colocada la mezcla se
hace pasar un lquido que favorezca la desorcin llamado eluyente (fase mvil).
Conforme avanzan los solutos sobre la columna stos se separan permitiendo su
purificacin.
En la cromatografa por elucin isocrtica la composicin del eluyente se
mantiene constante durante el proceso. En la elucin por gradiente la composicin del eluyente se vara gradualmente.
La operacin de una columna cromatogrfica es similar a la de una columna
de adsorcin. Sin embargo, en la cromatografa por elucin la columna no se
satura completamente con soluto, sino que slo se carga en forma controlada
una porcin de sta.
La decisin entre emplear adsorcin frontal o cromatografa por elucin en
una separacin, radica principalmente en la dilucin del soluto. Por ejemplo, si
se desea remover de una solucin acuosa diluida dos compuestos orgnicos A
y B muy similares, la operacin apropiada es una adsorcin frontal. Por otro
lado, si estos mismos compuestos se desean separar entre s con una alta pureza
a partir de una muestra concentrada, la seleccin apropiada es la cromatografa
por elucin. Entre estos dos casos extremos de separaciones en columna, se han
364
CAPTULO 8. CROMATOGRAFA POR ELUCIN
desarrollado otros modos intermedios como la cromatografa por desplazamiento

y la de recirculacin.
En la Figura 8.1 se representa la separacin cromatogrfica de una mezcla
de tres solutos. Cada soluto tiene diferente grado de retencin en la columna de
tal manera que la velocidad de avance de cada uno es diferente, siendo el soluto
A (crculo) el ms lento y el soluto C (tringulo) el ms rpido.
Figura 8.1: Esquema de una columna cromatogrfca. Adaptada de: Belter et

c
al., 1988. Reproducida con el permiso de John W iley and Sons. Copyright 1988.
Todos los
Un detector de solutos a la salida de la columna obtendra una grfica como

la de la Figura 8.2, llamada cromatograma.
En la cromatografa por elucin el soluto se purifica a expensas de cierto
grado de dilucin, mientras que en la adsorcin frontal el soluto se retiene en la
columna y posteriormente se eluye concentrado.
Para abordar el tema de cromatografa por elucin en la seccin 8.2 de
este captulo se presentan los fundamentos de la cromatografa, describiendo
las principales tcnicas cromatogrficas, tipos de adsorbentes, las relaciones de
equilibrio y cinticas que son utilizadas en esta operacin. En la seccin 8.3 se
revisan los principales equipos utilizados en las operaciones cromatogrficas. En
la seccin 8.4 se presentan algunos de los modelos para el diseo de equipos cromatogrficos que nos permiten predecir y analizar los perfiles de concentracin
o cromatogramas.
8.2. FUNDAMENTOS
Figura 8.2: Cromatograma tpico. Adaptada de: Belter et al., 1988.
365
Reproducida
c
con el permiso de John W iley and Sons. Copyright 1988.
8.2.
Fundamentos
Existen varias tcnicas cromatogrficas basadas en la interaccin de una fase

mvil lquida y una fase estacionaria. Cinco aspectos fundamentales permiten
distinguir las semejanzas y diferencias entre ellas:
El principio de separacin que emplea cada una de ellas.
Las caractersticas de las matrices que utilizan.
La presin a la que se operan.
La relacin de equilibrio del sistema cromatogrfico.
La cintica de la adsorcin.
8.2.1.
Tipos de Cromatografa Lquida: Principio de Separacin
De acuerdo al principio utilizado para la separacin se pueden distinguir tres

tipos bsicos de cromatografa por elucin: la cromatografa lquido-lquido, la
cromatografa de filtracin en gel o cromatografa por exclusin por tamao
(SEC) y la cromatografa por adsorcin.
Cromatografa lquido-lquido
En la cromatografa lquido-lquido se utiliza un adsorbente slido impregnado con un lquido que funciona como fase estacionaria. La separacin de los
solutos es resultado de las diferencias en los coeficientes de particin de cada
uno de los solutos de la mezcla entre las fases lquidas (estacionaria y mvil).
Cromatografa por filtracin en gel
La cromatografa por filtracin en gel utiliza partculas fabricadas de geles
porosas que actan como mallas moleculares que permiten separar molculas en
366
funcin de su tamao. Este tipo de cromatografa es comnmente empleada en

las ltimas etapas de los procesos de obtencin de productos biotecnolgicos.
Cromatografa por adsorcin
La cromatografa por adsorcin emplea adsorbentes en los que los solutos
a separar presentan diferentes grados de retencin. Existen varias modalidades
caracterizadas bsicamente por el tipo de adsorbente que emplean, llamadas cromatografa de adsorcin: fsica, de intercambio inico, de interaccin hidrofbica,
de fase reversa y de afinidad.
Cromatografa de adsorcin simple La cromatografa por adsorcin simple se caracteriza por la unin del soluto al adsorbente por fuerzas dbiles del
tipo de van Der Waals. Este tipo de cromatografa es poco selectiva entonces
se utiliza poco a nivel analtico, pero por su bajo costo es utilizada a nivel
industrial.
Cromatografa por intercambio inico La cromatografa por intercambio
inico se basa en la interaccin electrosttica entre los grupos cargados del soluto
y los grupos de carga contraria de los adsorbentes.
Cromatografa de interaccin hidrofbica y cromatografa de fase reversa Tanto la cromatografa de interaccin hidrofbica como la de fase reversa, se basan en la interaccin entre las regiones hidrofbicas de las biomolculas
y los grupos hidrofbicos de los adsorbentes empleados.
Cromatografa por afinidad La cromatografa por afinidad est basada en
interacciones altamente especficas entre el soluto de inters y el adsorbente.
Este tipo de cromatografa es muy empleada en la purificacin de protenas.
Los adsorbentes utilizados en esta cromatografa presentan grupos qumicos
llamados ligandos que son altamente especficos para la unin con los solutos.
8.2.2.
Matrices
Actualmente diversos tipos de materiales o matrices son utilizados para fabricar los soportes (empaques) de las columnas cromatogrficas. En algunos casos
estos materiales se modifican qumicamente para incrementar su especificidad.
Alrededor del 90 % de las matrices que se emplean actualmente estn hechas de
materiales que forman geles de alto poder hidratante, los cuales se comercializan
en forma de pequeas esferas cuyo dimetro vara entre 10 y 100 m.
La Figura 8.3 muestra la estructura qumica de algunas de las matrices
empleadas en cromatografa. En general los materiales de las matrices pueden
ser de cuatro tipos:
1. Materiales inorgnicos: slica porosa, vidrio de poro controlado (marca
Spherosil) e hidroxiapatita.
8.2. FUNDAMENTOS
367
Figura 8.3: Estructuras de matrices. a) Celulosa ( 1-4), b) Dextrano ( 1-6),

c) Agarosa y d) Poliacrilamida entrecruzada. Fuente: Janson, 1989. Reproducida
c
con el permiso de VCH Publishers. Copyright 1995.
2. Polmeros orgnicos sintticos: poliacrilamida (marca Biogel P), polimetacrilato (marca Spheron) y poliestireno.
3. Polisacridos: celulosa (marcas Whatman, Cellulofine y Sephacel), dextrano (marca Sephadex) y agarosa (marcas Sepharosa, Superosa, Ultrogel A y
BioGel).

4. Compuestos polmeros orgnicos con polisacridos: poli-N, N -bisacrilamida
con dextrano (marca Sephacryl), agarosa con dextrano (marca Superdex) y
agarosa con poliacrilamida (marca Ultrogel AcA).
Desde el punto de vista funcional se pueden distinguir dos tipos de geles:
microporosos y macroporosos (Fig. 8.4).
Los geles microporosos se obtienen por entrecruzamiento puntual de polmeros
lineales como celulosa, dextrano y la poliacrilamida. Este tipo de geles son utilizados en cromatografa de filtracin en gel y tienen baja resistencia mecnica. Los geles macroporosos se obtienen por entrecruzamiento y agregacin de
polmeros, como la agarosa y la poliacrilamida macroreticular. Este tipo de
geles son empleados en cromatografa de intercambio inico y de afinidad donde
368
Figura 8.4: Matrices microporosas y macroporosas. a) Celulosa, b) Polmeros

entrecruzados como poliacrilamida y dextrano y c) Agarosa. Fuente: Janson,
c
1989. Reproducida con el permiso de VCH Publishers. Copyright 1995.
Todos los derechos
reservados.
se requieren poros ms grandes. Los geles compuestos se forman al introducir

geles de microporos en los poros de los geles de macroporos, para combinar las
ventajas de ambos tipos de materiales.
De acuerdo a su comportamiento con relacin al solvente, se pueden distinguir dos tipos de geles: xerogeles y aerogeles. Los xerogeles se caracterizan por
arrugarse e hincharse en la ausencia y presencia del solvente, respectivamente.
Por otro lado, el volumen de los aerogeles es independiente del solvente. Los
geles de dextrano entrecruzado (Sephadex) y los de poliacrilamida, pertenecen
a los xerogeles; mientras que los geles de vidrio poroso, slica, poliestireno y
polimetacrilato son aerogeles.
Tipo de cromatografa y tipo de matriz
Existe una relacin directa entre el tipo de cromatografa y el tipo de matriz
empleada, a continuacin se presentan algunos ejemplos particulares.
Cromatografa lquido-lquido En la cromatografa lquido-lquido se emplean partculas de tierras diatomeas impregnadas con propilenglicol. Esta tcnica es poco selectiva por lo que no es muy utilizada en el laboratorio, pero
debido a su bajo costo es utilizada a escala industrial.
Cromatografa de filtracin en gel En la cromatografa de filtracin en
gel se emplean bsicamente geles de microporos de dextrano o poliacrilamida.
Cromatografa por adsorcin Los procesos cromatogrficos basados en la
adsorcin simple de solutos en un adsorbente slido poroso, utilizan adsorbentes
como almina y slica-gel. Como ya se ha mencionado este tipo de adsorbentes
son poco selectivos, pero debido a su bajo costo este tipo de cromatografa
tambin se aplica slo en separaciones en procesos industriales.
8.2. FUNDAMENTOS
369
La cromatografa por intercambio inico es una de las ms utilizadas a nivel

industrial para la purificacin de diferentes tipos de compuestos. Las resinas
utilizadas son de dos tipos: catinicas y aninicas, dependiendo del grupo inico
(Fig. 8.5).
Figura 8.5: Grupos funcionales de adsorbentes inicos. a) Catinico dbil, b)

Catinico fuerte, c) Aninico dbil y d) Aninico fuerte.
En las tcnicas cromatogrficas de interaccin hidrofbica y fase reversa, la
fase estacionaria consiste de una matriz con ligandos no polares (Fig. 8.6). La
separacin se basa en el hecho de que algunas biomolculas como las protenas
presentan residuos externos no polares, de tal manera que en soluciones no
acuosas estos tienden a interaccionar con los ligandos no polares de los soportes.
Figura 8.6: Grupos funcionales tpicos de la cromatografa de interaccion

hidrofbica y de fase reversa.
Las interacciones hidrofbicas entre la biomolcula y el ligando del soporte,
se fortalecen utilizando medios con altas concentraciones salinas, por ejemplo:
sulfato de amonio a una concentracin cercana a la de precipitacin de la de
la biomolcula. Para eluir las biomolculas se utiliza una solucin con concentracin salina baja o un solvente de baja polaridad.
En la cromatografa de fase reversa no se utilizan solventes de baja polaridad
para eluir, para evitar la desnaturalizacin de las protenas, y ese es su rasgo
distintivo respecto a la cromatografa de interaccin hidrofbica.
370
En la cromatografa con iones metlicos, el adsorbente presenta iones metlicos inmovilizados sobre el soporte por medio de grupos quelantes como el cido
iminodiactico. El tipo de iones ms utilizados son el Cu+2 y el Zn+2 . Estos
iones interactan con los grupos cargados de las protenas como es el caso de
los residuos de histidina.
La cromatografa que utiliza colorantes como ligandos, se basa en el hecho que cierto tipo de estos colorantes interactan fuertemente con los grupos
aninicos de las protenas. Los colorantes asemejan estructuras biolgicas como
los cofactores NAD y ATP y permiten la interaccin con ciertas protenas. La
ventaja es que son ms baratos que dichos cofactores, ms fciles de unir a las
matrices y ms estables (Fig. 8.7).
Figura 8.7: Colorantes utilizados como ligandos. a) Azul A, b) Rojo A y c)

Naranja A.
Otro tipo de cromatografa utiliza ligandos biolgicos altamente especficos
para ciertos sustratos. Las diferentes modalidades de la adsorcin por afinidad
se presentan en la Figura 7.8.
8.2.3.
Tipo de Cromatografa por Presin de Operacin
De acuerdo al tamao de partcula y a la presin de operacin que emplea,

la cromatografa lquida se puede clasificar en cromatografa de presin baja,
presin moderada y presin alta (la cromatografa lquida a presin alta es
caracterstica de la tcnica llamada cromatografa lquida de alta resolucin,
HPLC de sus siglas en ingls). En la Tabla 8.1 se presentan las presiones y el
tamao de partcula caractersticas de cada una de ellas.
8.3. EQUIPOS CROMATOGRFICOS
371
Tabla 8.1: Tipos de cromatografas de acuerdo a su presin de operacin.

Tipo
Baja
Moderada
Alta
8.2.4.
Presin (atm)
1
2-50
51-350
Dimetro (m)
90-100
30-50
5-10
Relaciones de Equilibrio
En el anlisis de columnas cromatogrficas, las relaciones de equilibrio se

expresan por medio de isotermas de adsorcin o curvas que relacionan la concentracin en el equilibrio del soluto en la fase estacionaria y del soluto en la fase
mvil. Dichas isotermas son generalmente no lineales mostrando comportamientos tipo Langmuir o Freundlich. Estas isotermas son iguales a las descritas en
el captulo anterior.
8.2.5.
Cintica de la Adsorcin
Algunos modelos utilizados para describir una operacin cromatogrfica toman

en cuenta las resistencias a la transferencia de masa involucradas en el proceso,
las cuales pueden ser descritas mediante un mecanismo de cinco pasos:
1. Difusin del soluto del seno del lquido a travs de una pelcula de lquido
que rodea al adsorbente.
2. Difusin del soluto dentro del poro del adsorbente.
3. Reaccin reversible del soluto con el adsorbente (la reaccin puede involucrar adsorcin, reaccin y desorcin de superficie).
4. Contradifusin del soluto en el poro hacia la superficie del adsorbente.
5. Contradifusin del soluto de la superficie del adsorbente hacia el seno del
lquido, a travs de la pelcula de lquido.
Generalmente uno o dos de los pasos descritos anteriormente son los ms
lentos, de tal manera que son los que controlan la velocidad global de transporte
del soluto.
8.3.
Equipos Cromatogrficos
Los principales equipos cromatogrficos son columnas fabricadas en plstico, vidrio o acero inoxidable. Las columnas para cromatografa en gel tienen
relaciones L/D muy bajas, en el rango de 0.3 a 3.0; con dimetros mximos de
1.5 m. En el caso de geles blandos la longitud necesaria de la columna se alcanza
por medio de sistemas de varias de columnas cortas (Curling, 2007).
372
Las columnas empleadas en cromatografa HPLC tienen dimetros de hasta

80 cm y altura de lecho de 120 cm (Fig. 8.8). Este tipo de columnas deben ser
empacadas utilizando sistemas hidrulicos que permitan el manejo adecuado del
empaque.
Figura 8.8: Columna cromatogrfica. Adaptada de: Nicoud y Perrut, 1991.
Re-
c
producida con el p erm iso de Kluwer Academic Publishers. Copyright 1991.
Todos los derechos
reservados.
8.4.
Diseo de Columnas Cromatogrficas
La obtencin de productos biotecnolgicos con grados de pureza y mercados

cada vez mayores, ha creado la necesidad de llevar a escala de proceso las tcnicas
que tradicionalmente se utilizan slo a nivel laboratorio. Es en esta transicin
donde los conocimientos ingenieriles juegan un papel muy importante.
Una de las tcnicas que ha recibido ms atencin en este sentido es la cromatografa, particularmente en el arreglo tipo columna de lecho fijo. Tres conceptos se combinan para lograr un diseo apropiado de estas columnas cromatogrficas:
El modelo de la columna.
Los criterios para la evaluacin tcnica del comportamiento de la columna:
Resolucin, Pureza y Rendimiento.
Los procedimientos de escalamiento y optimizacin de la columna.
8.4. DISEO DE COLUMNAS CROMATOGRFICAS
8.4.1.
373
Teora de Cromatografa Lineal
Los enfoques utilizados para describir los procesos cromatogrficos estn

basados principalmente en dos aspectos: a) tipo de isoterma: lineal o no lineal
y b) presencia o ausencia de efectos cinticos (dispersin, resistencia a la transferencia de masa o cintica finita). Estos efectos cinticos son responsables de
la eficiencia finita de las columnas reales. Cuando estos efectos se desprecian
y se supone que las columnas presentan una eficiencia infinita los modelos se
conocen como ideales. Estas consideraciones conducen a 4 tipos de modelos cromatogrficos frecuentemente encontrados en la literatura: a) lineales ideales, b)
lineales no ideales, c) no lineales ideales y d) no lineales no ideales.
Varios modelos empleados para el anlisis y diseo de columnas cromatogrficas que operan bajo condiciones isocrticas, utilizan isotermas lineales para
describir las relaciones de equilibrio que se presentan en stas, debido a que
por su simplicidad dichos modelos pueden ser resueltos analticamente para
obtener los perfiles de concentracin tipo campana de Gauss, que se observan
experimentalmente en algunos cromatogramas.
La suposicin de una isoterma lineal se puede justificar en funcin de que un
gran nmero de sistemas cromatogrficos se trabajan con muestras pequeas,
de tal manera que el rango de concentraciones en la columna es bajo, y puede
ser situado en el rango lineal de cualquier tipo de isoterma (en la regin de
baja concentracin). El trabajar con muestras pequeas permite tener una buena separacin de los solutos de la mezcla (resolucin) a expensas de un bajo
rendimiento o cantidad de muestra que puede ser procesada. Sin embargo, es
conveniente establecer que este enfoque tiene sus limitaciones, principalmente
para los sistemas cromatogrficos muy selectivos como los de afinidad.
Cuando la elucin es por gradiente, las relaciones de equilibrio varan conforme cambia la composicin de los eluyentes y los modelos basados en isotermas
lineales no son aplicables directamente. Actualmente se cuenta con algunas tcnicas cromatogrficas que emplean otros principios como es la cromatografa por
desplazamiento y la de cambio cclico de la zona de adsorcin, donde tampoco
son aplicables los modelos basados en isotermas lineales. A nivel preparativo
la cromatografa por elucin se utiliza bajo condiciones de sobrecarga con el
propsito de incrementar la productividad de la columna; esto puede lograrse
incrementando el volumen o la concentracin de la muestra (Fig. 8.9). Bajo
estas condiciones la aplicacin de los modelos lineales tambin es limitada.
8.4.2.
Modelos lineales
Esta seccin slo se refiere a los principios bsicos de la cromatografa por

elucin isocrtica en columna y principalmente a los modelos basados en isotermas lineales. Existen tres enfoques bsicos para la obtencin de estos modelos
cromatogrficos de columnas:
a) La teora de platos.
b) La teora cintica.
i) Modelo cintico lineal.
374
Figura 8.9: Cromatografa analtica y preparativa. a) Analtica, b) Sobrecarga

de volumen y c) Sobrecarga de concentracin. Fuente: Knox y Pyper, 1986. Rec
producida con el p erm iso de Elsevier Science Inc. Copyright 1986.
ii) Modelo cintico de tres resistencias: teora de momentos.

c) Teora de platos-cintica.
i) Modelo lineal.
ii) Modelo de van Deemter.
Teora de platos tericos o etapas
Los modelos de platos tericos son de los ms utilizados en el anlisis de la
cromatografa por elucin. Sin embargo, estos modelos tienen sus limitaciones
en lo que se refiere al diseo y escalamiento de columnas, por lo que su uso es
cada vez ms limitado. Esto es debido a que estos modelos son esencialmente
empricos y no pueden relacionarse con principios fundamentales.
En los modelos de platos se supone que la columna se comporta como una
serie de etapas en equilibrio. Se han derivado dos tipos de estos modelos: el de
Craig (Captulo 6) el cual supone operacin por lotes y el de Martin-Synge que
supone una operacin continua.
En el desarrollo del modelo de platos tericos de Martin-Synge, cada etapa
puede visualizarse como un adsorbedor tipo tanque de volumen constante. El
solvente fluye de un tanque hacia el otro, mientras que el adsorbente permanece
fijo en su tanque respectivo (Fig. 8.10).
El balance de masa del soluto para la etapa n puede ser escrito como:
Acumulacin en el lquido = Entrada Salida Adsorcin
lo cual pude ser expresado mediante la siguiente ecuacin:
375
Figura 8.10: Representacin de una columna cromatogrfica con el modelo de

platos.
VE
dcn
dqn
= F cn1 F cn (1 )VE
dt
dt
(8.1)
donde:
VE : Volumen de la etapa (lquido ms adsorbente).
: Volumen del lquido por volumen de etapa.
F : Flujo de alimentacin.
cn : Concentracin de soluto en la solucin en la etapa n.
qn : Concentracin de soluto en el adsorbente en la etapa n.
El modelo supone que cada etapa est en equilibrio y que la relacin de
equilibrio est dada por una isoterma lineal, de tal manera que en cada etapa
la relacin de concentraciones puede ser expresada como:
qn = Kcn
(8.2)

{[ + (1 )K] VE }
dcn
= F (cn1 cn )
dt
(8.3)
donde la cantidad entre corchetes es un volumen hipottico de lquido V =
376
[ + (1 )K]VE que contiene al soluto de las fases lquida y slida (de tal
manera que la expresin (8.3) es equivalente a un balance de masa de un tanque
de volumen V con entrada y salida).
La ecuacin (8.3) puede ser resuelta con las siguientes condiciones:
1. Inicialmente ninguna etapa contiene soluto.
para t < 0,
cn = 0
para n = 1, 2, ... N
donde N es el nmero total de etapas en la columna.

2. Al inicio de la operacin de la columna se inyecta un pulso muy corto de
tal manera que:
para t = 0,
c1 = cA
(lo anterior corresponde a considerar que la masa de soluto que se alimenta

a la primera etapa en el tiempo cero es M = V cA ).
La forma integrada es:
(8.4)
Ft
[ + (1 )K]VE
(8.5)
cn = cA
N1 e
(N 1)!
donde el tiempo adimensional est dado por:

=
o bien
Ft
V
como el volumen total del lecho Vc se puede expresar como: Vc = N VE , entonces
la ecuacin (8.5) tambin puede ser expresada de la siguiente forma:
=
NFt
[ + (1 )K]Vc
(8.6)
La ecuacin (8.4) es la expresin de una distribucin de Poisson. Para N

grandes (mayores a 30) sta se aproxima a una distribucin de Gauss (Fig. 8.11),
caracterstica de los cromatogramas que se observan experimentalmente en comatografas de laboratorio donde la cantidad de muestra es pequea.
En el modelo de platos tericos la variacin de la concentracin de soluto
a la salida de la columna con el tiempo, puede aproximarse con la ecuacin de
una distribucin de Gauss, de tal manera que:

( o )2
c = co exp
(8.7)
22A
donde:
377
Figura 8.11: Aproximacin de la distribucin de Poisson a la de Gauss.

co : Concentracin mxima de soluto a la salida de la columna.
A : Desviacin estndar del perfil de concentracin de soluto.
o : Tiempo adimensional para el cual la concentracin de salida es mxima
(tiempo adimensional de retencin).
Parmetros del modelo de platos La ecuacin (8.7) relaciona la concentracin c con los parmetros co , A y o ; y con la variable . Para poder utilizar
dicha ecuacin es necesario relacionar estos parmetros con el sistema fsico
particular.
El parmetro co puede ser relacionado con el sistema mediante un balance
de masa en toda la columna. De este balance se obtiene la expresin de la masa
M de soluto alimentada al sistema,

M = F cdt
(8.8)
(8.9)
la cual puede ser aproximada a

.
M=
F cdt
la ecuacin anterior se integra combinndola con la ecuacin (8.7), sustituyendo

1
dt por V d /F , y multiplicando y dividiendo por (2) 2 A , de tal manera que:
378
M = (2) 2 A (V co )
1
(2) 12 A

2
( o )
exp
d
2 2A
(8.10)
puede encontrarse en cualquier texto de probabilidad y estadstica que la expresin entre corchetes de la ecuacin anterior vale uno, de tal manera que:
1
.
M = (2) 2 A V co
(8.11)
como M = V cA , entonces,
.
co =
cA
1
(2) 2 A
(8.12)
que es la expresin que se busca para el primer parmetro.

Mediante las definiciones de media y desviacin estndar, y utilizando la
ecuacin (8.4), es posible relacionar A y o con el nmero de etapas de la
columna, de tal manera que:
o = N
(8.13)
2A = N
(8.14)
Mediante la ecuacin (8.5) se puede definir un o , dado por:

o =
N F to
[ + (1 )K]Vc
(8.15)
to =
[ + (1 )K]Vc
F
(8.16)
como o = N , entonces:
El tiempo real de retencin de un soluto en la columna, es funcin del tiempo

de residencia del fluido en la columna (Vc /F ), la porosidad del lecho y la
constante K.
Finalmente, la ecuacin (8.7) puede ser escrita en trminos de las caractersticas y condiciones de la columna como:

2
t
1
to
c = co exp
(8.17)
379
La ecuacin (8.17) es una distribucin normal que tiene un mximo en t = to

igual a:
co =
cA
1
(2N ) 2
y una desviacin estndar:

to
=
N
La ecuacin (8.17) tambin puede expresarse en trminos del volumen V de
solvente aadido a la columna, considerando un flujo constante, de tal manera
que:
t=
V
F
(8.18)
to =
Vo
F
(8.19)
y entonces,
2
V
1
Vo
c = co exp
N

(8.20)
Aplicacin del modelo de platos Las ecuaciones (8.17) y (8.20) pueden

ser utilizadas para estimar el nmero de etapas de una columna a partir de
datos experimentales de concentracin contra tiempo. Una vez calculada N y
contando con la longitud de la columna L, se puede obtener la altura equivalente
de un plato terico (HET P de sus siglas en ingls) de la columna, la cual es
una medida de la eficiencia de sta, mediante la siguiente ecuacin:
HET P =
L
N
(8.21)
Asimismo, dichas ecuaciones han demostrado ser tiles en el anlisis de la

dispersin y la resolucin de los picos de un cromatograma. Sin embargo, no
pueden ser utilizadas para predecir el nmero de etapas o la altura equivalente
de un plato terico, ni para predecir en que forma el cambio de las condiciones
de operacin de la columna afecta su comportamiento.
Ejemplo 8.1. Clculo del nmero de etapas en la cromatografa de
Inmunoglobulina G.
La cromatografa de perfusin-afinidad de alta resolucin de Inmunoglobulina G (Fulton et al., 1991) produce un cromatograma con un pico cuyo tiempo
380
medio de retencin es de 32.5 s. El ancho del pico cuando la concentracin es la

mitad de la mxima es de 1.60 s.
Se pide: Estimar el nmero de etapas tericas de esta columna.
Solucin:
Se puede utilizar la ecuacin (8.17) para determinar el nmero de etapas
tericas de la columna. Sustituyendo valores,
2
1.6
32.5 + 2

1
32.5
0.5 = exp
aplicando logaritmos en ambos lados de la expresin anterior se obtiene,

N = 2, 287
Es importante hacer notar que entre ms ancho sea el pico del cromatograma, N ser ms pequea y por lo tanto HET P ms grande, y viceversa. Consecuentemente, la HET P es una medida de la amplitud de un pico cromatogrfico (eficiencia de la columna). Entre menor sea HET P , mayor eficiencia de la
columna.
Mtodos grficos para determinar N Existen varias formas para calcular
N a partir de un cromatograma gaussiano. Una de las ms utilizadas emplea la
siguiente expresin:
N=
16 t2o
W2
(8.22)
donde W es el ancho de la base del cromatograma medido entre las rectas

tangentes que pasan por los puntos de inflexin del cromatograma. La teora de
platos es muy utilizada debido a que permite una rpida caracterizacin y una
comparacin sencilla entre columnas.
Ejemplo 8.2. Clculo grfico del nmero de etapas tericas. En la
Figura 8.12 se presenta un pico de un cromatograma de transferrina.
Se pide: Estimar el nmero de etapas tericas obtenidas en la cromatografa
de transferrina.
Solucin:
Utilizando la ecuacin (8.22) se puede calcular N . Para realizar el clculo es
necesario determinar el ancho del cromatograma,
W = 49 min 33 min = 16 min
381
Figura 8.12: Clculo del nmero de unidades de transferencia de una columna

cromatogrfica en forma grfica.
y el tiempo de retencin,
to = 41 min
N=
(16) (41 min)2

= 105
(16 min)2
Ejemplo 8.3. Elucin con gradiente.

En una columna cromatogrfica se aplica un volumen de muestra de tal
manera que:
para < 0,
para n = 1, 2, ... N
cn = 0
para 0 p ,
para > p ,
c0 = c0
c0 = 0
donde p es la duracin del pulso referido a un tiempo adimensional dado por:

=
Ft
Vc
Una vez aplicada la muestra sta se eluye mediante un gradiente salino que
puede expresarse como:

(1 )
n
i = ie para
( p ) 1 +
K
N

(1 )
n
i
( p ) 1 +
K
i = ie +
382
para

(1 )
n
K
( p ) > 1 +
donde i es la fuerza inica y Kes una constante de equilibrio de referencia.

Bajo esta condiciones la relacin de equilibrio es funcin de la fuerza inica
y la concentracin de tal manera que:
q = K(c, i)c
Se pide:
a) Utilizando el modelo de platos obtener la expresin de la variacin de la
concentracin de soluto con el tiempo adimensional.
b) Obtener los perfiles de concentracin en la columna utilizando los datos
siguientes:
K= 0.9
N = 20
C0 = 0.8
= 0.4
ie = 0.7
i/ = 0.001
p = 0.5
y la siguiente expresin para la constante de equilibrio:

K(c, i) = 0.44 + 2.247 103 i3.1667
Solucin:
a) El balance de soluto en la etapa n es:
dqn
dcn
= F cn1 F cn (1 )VE
dt
dt
que puede expresarse como:
VE
(cn1 cn ) =
1 dcn H dqn
+
N d
N d
donde:
(1 )
utilizando la regla de la cadena para desarrollar el trmino dqn /d de la ecuacin

anterior se obtiene:

(1 )
dK(c, i)
di
N (Cn1 Cn )
Cn
dCn
di
d

=
(1 )
dK(C, i)
d
1+
K(C, i) + Cn
dCn
H=
donde:
C=
c
c0
383
b) En este caso particular dK(C, i)/dCn = 0. En la Figura 8.13 se presenta

un programa MATLAB para obtener los perfiles de concentracin en cada una
de las etapas, los cuales se muestran en la Figura 8.14.
Figura 8.13: Programa MATLAB del Ejemplo 8.3.
Teora cintica
Los modelos basados en la teora cintica describen el comportamiento de
una cromatografa mediante los perfiles de concentracin de los solutos obtenidos
mediante balances de masa, relaciones de equilibrio y expresiones cinticas. Este
enfoque resulta ms complejo que el de la teora de platos pero permite mejorar
la descripcin y comprensin de estos sistemas.
Para iniciar la revisin de algunos modelos cinticos es conveniente describir
cuatro comportamientos generales de una columna cromatogrfica operando en
modo elucin isocrtica, descritos en la Figura 8.15.
Caso 1 Un pulso inyectado a una columna no sufrir ningn cambio a la
salida de la columna, slo si: a) el flujo en la columna es ideal o tipo tapn, b)
los solutos no penetran al interior del adsorbente y c) los solutos no reaccionan
(no se adsorben) con el adsorbente.
Caso 2 Un pulso inyectado a una columna donde exista un cierto grado de
flujo no ideal debido a un empaque deficiente o a fenmenos de difusin axial,
pero no exista adsorcin, presentar un tiempo de retencin promedio igual al
del pulso del caso 1, pero con cierto grado de dispersin.
384
Figura 8.14: Perfiles de concentracin de soluto del Ejemplo 8.3.

Caso 3 Un pulso que contenga un soluto que pueda ser adsorbido, sufrir un
retardo y un cierto grado de dispersin al pasar por la columna. La dimensin de
estos efectos depender de la naturaleza de la adsorcin. La tcnica cromatogrfica se basa en el hecho de que diferentes solutos pueden sufrir diferentes retardos
en un mismo adsorbente.
Caso 4 Un pulso inyectado a una columna donde exista adsorcin y efectos
de flujo no ideal simultneamente, tendr un tiempo de retencin igual al del
caso 3, pero una mayor dispersin.
Se han desarrollado varios modelos para predecir los perfiles de concentracin
de las columnas cromatogrficas desde el punto cintico, los cuales presentan
diferentes grados de complejidad y difieren entre s en: a) el tipo de equilibrio
que consideran, b) el nmero y tipo de resistencias a la transferencia de masa
que toman en cuenta, c) la cintica en la superficie del adsorbente y d) los efectos
de mezclado que incorporan.
Balances de masa en la columna La integracin del modelo de la columna
se inicia con el balance de masa de soluto en la fase lquida en una seccin de
la misma.
2c
c
R
c
Dax 2 +
=
t
z
z
donde:
: Fraccin vaca del lecho. [L3 /L3 ].
c: Concentracin de soluto en el lquido. [M/L3 ].
t: Tiempo. [t].
(8.23)
385
Figura 8.15: Descripcin cualitativa del comportamiento de una columna.

Dax : Coeficiente de dispersin axial. [L2 /t].
z: Distancia axial. [L].
: Velocidad intersticial. [L/t].
R: Velocidad de adsorcin de soluto en el adsorbente. [M/L3 t].
El balance de soluto sobre el adsorbente complementa al balance anterior y
puede ser expresado como:
q
(8.24)
t
A continuacin se revisan dos modelos cinticos de diferente grado de complejidad, el modelo cintico lineal y el modelo cintico de tres resistencias; ambos
consideran relaciones de equilibrio lineales.
En este punto es importante recordar que los balances de masa y las relaciones de equilibrio para columnas cromatogrficas son iguales que los de adsorcin en columna, mientras que las condiciones iniciales son diferentes.
R = (1 )
Modelo cintico lineal Este modelo supone que slo una resistencias controla la transferencia de masa. En el caso que la resistencia en la pelcula sea
la controlante, la velocidad de transferencia de masa del lquido al adsorbente
puede ser expresada como:
R = (1 )kL a(c c )
(8.25)
386
donde c es una concentracin hipottica en el lquido en equilibrio con la concentracin de soluto en el adsorbente (en algunos casos la kL a se toma como
un coeficiente que agrupa todas las resistencias, debido a la dificultad experimental de mediciones que puedan distinguir entre los diferentes mecanismos de
control).
El modelo supone adems que la dispersin axial y la acumulacin en la fase
lquida son despreciables, entonces la ecuacin (8.23) se transforma en:
R =
dc
dz
(8.26)

dc
(8.27)
dz
Esta ecuacin puede ser integrada para obtener la longitud de la columna,

cA
L
dc
L = dz =
(8.28)
(1 )kL a (c c )
(1 )kL a(c c ) =
al trmino entre parntesis cuadrados de la ecuacin anterior se le llama altura

de una unidad de transferencia HT U (de sus siglas en ingls), y al trmino entre
corchetes se le llama nmero de unidades de transferencia N T U (de sus siglas
en ingls); de tal manera que la ecuacin anterior puede ser expresada como:
L = HT U NT U
(8.29)
Los modelos cuando la resistencia controlante es otra son anlogos.

Modelo de tres resistencias: Teora de momentos El modelo cintico
general para describir una columna cromatogrfica es ms complejo e incluye los
efectos de: a) resistencia a la transferencia de masa en la pelcula, b) resistencia
a la difusin al interior de la partcula, c) adsorcin reversible de primer orden
sobre la superficie de los poros (isoterma lineal) y d) dispersin axial.
Estos efectos se integran mediante un modelo pseudocontinuo descrito por
el sistema de ecuaciones que se lista a continuacin.
1. Balance de soluto en el seno del lquido de la columna:
2c
c
R
c
Dax 2 +
=
(8.30)
t
z
z
En la expresin anterior, R es la velocidad de transferencia de masa de soluto

entre el lquido y el adsorbente por unidad de volumen de lecho, dada por:
R=
donde:
3(1 )
ci
i Di
|r=rm
rm
r
(8.31)
387
: Porosidad del lecho.

Di : Difusividad del soluto al interior del poro del adsorbente.
r: Distancia radial del centro de la partcula a un punto dado en la partcula
de adsorbente.
rm : Radio de la partcula.
ci : Concentracin de soluto en la fase lquida al interior del poro.
2. Balance de soluto al interior del poro:
ci
qi
i
+ (1 i )
= i Di
t
t
2 ci 2 ci
+
r2
r r
(8.32)
donde qi es la concentracin de soluto en el adsorbente y i es la porosidad

de la partcula de adsorbente al soluto de inters.
3. Balance de soluto interfacial en la superficie del adsorbente:
ci
|r=rm = kL (c ci )|r=rm
(8.33)
r
4. Adsorcin reversible de primer orden en la superficie del adsorbente:
i Di

qi
qi
= k1 ci
(8.34)
t
K
donde k1 es la constante cintica de la reaccin de superficie en el sentido directo
y K es la constante de equilibrio de la reaccin de superficie.
Las condiciones iniciales y de frontera del sistema de ecuaciones anterior son:
en:
r=0
z0
r0
z=0
z=0
para:
t0
t=0
t=0
0 t tp
t > tp
se tiene:
ci /r = 0
c=0
ci = 0
c = cA
c=0
donde tp = Vp /F es la duracin de un pulso rectangular de volumen Vp

inyectado a la columna.
El sistema de ecuaciones (8.30)-(8.34) fue resuelto en el dominio de las Transformadas de Laplace (Furusawa et al., 1976), pero la solucin no pudo ser invertida para obtener la expresin de la concentracin a la salida como una funcin
del tiempo. La solucin en el dominio de Laplace fue utilizada para calcular
los momentos del perfil de concentracin del soluto dados por las expresiones
siguientes:
La ecuacin para el momento n del perfil de concentracin del soluto en un
lecho de longitud L es,
388

mn = c(t, L)tn dt
(8.35)
de tal manera que el momento absoluto n es,
n =

c(t, L)tn dt
mn
= 0
mo
c(t, L)dt
(8.36)
y el momento central n,
n =

c(t, L)(t 1 )n dt
0

c(t, L)dt
(8.37)
Momentos de cromatogramas Dos momentos tienen un significado fsico y son de particular inters en cromatografa:
1. El primer momento absoluto o tiempo de retencin promedio dado por:

c(t, L)tdt
1 = 0
c(t, L)dt
(8.38)
y de acuerdo al modelo est dado por,

L
K
tp
1 =
+ (1 )i (1 + ) +
i
2
(8.39)
De acuerdo a la ecuacin anterior, el tiempo de retencin de un soluto en la

columna depende del tiempo de residencia del eluyente, el tipo de empaque y
de la constante de equilibrio.
Se puede utilizar la expresin del primer momento absoluto para estimar
la porosidad de lechos cuando el soluto es tan grande que i = 0 y no existe
adsorcin, de tal manera que la ecuacin (8.39) se reduce a:
1
L
tp
=
2
389
2. El segundo momento central es una medida de la dispersin del pico y

est dado por:
2 =

c(t, L)(t 1 )2 dt
0

c(t, L)dt
(8.40)
y de acuerdo al modelo general,

2L

+

2
Dax
K
+ (1 )
2 + (1 ) (i ) 1 +
()
i
2 2
2
/
dp i
K2
K
1
10
+
1+
+
k1
60
i
i Di kL dp
(8.41)
t2p
12
La ecuacin anterior muestra que la dispersin del pico respecto al tiempo

de elucin o segundo momento central, es funcin de varios parmetros como
el coeficiente de transferencia de masa en la pelcula, el coeficiente de difusin
efectiva al interior del poro, la constante cintica de adsorcin, la constante de
equilibrio, el coeficiente de dispersin y los parmetros del empaque.
El mtodo de momentos elimina la necesidad de una solucin numrica del
sistema de ecuaciones de conservacin de la columna. Sin embargo, su uso est
restringido a sistemas que presenten isotermas y expresiones de transferencia de
masa lineales.
Una de las principales aplicaciones del modelo es en la estimacin de parmetros para diseo, pero slo de aquellos que no varan con la escala, como la difusividad efectiva de partcula, las constantes cinticas de adsorcin y la porosidad
de la partcula. Sin embargo, los coeficientes de dispersin que se determinen
en una columna de laboratorio pueden ser muy diferentes a los de una columna
industrial.
Ejemplo 8.4. Estimacin de la porosidad de un adsorbente. Se midieron (Arnold et al., 1985) los tiempos de retencin promedio de mioglobulina y
albmina de suero de bovino (ASB), utilizando pulsos de 1.0 mL en una columna de 1.6 cm de dimetro, variando su longitud entre 26 y 31 cm. Los estudios se
realizaron bajo condiciones de no-adsorcin (columna equilibrada con solucin
amortiguadora de elucin K = 0), utilizando Sefarosa CL-4B (100 m).
Los resultados se correlacionaron con L/ y se ajustaron a las rectas:
Para Mioglobulina:
1
L
tp
= 0.87
2
390
Para Albmina:
1
L
tp
= 0.69
2
La porosidad de la columna se estim utilizando datos de tiempo de residencia de azul de dextrano (molcula que no penetra en los poros del adsorbente
ni se adsorbe) y fue de = 0.35.
Se pide: A partir de estos resultados estimar la porosidad del empaque i .
Solucin:
En el caso que no existe adsorcin (K = 0), la ecuacin (8.39) se puede
expresar como:
1 =
L
tp
[ + (1 )i ] +
tp
L
=
[ + (1 )i ]
2
entonces,
sustituyendo valores en la expresin anterior para el caso de la mioglobulina se

tiene:
0.87 = 0.35 + (1 0.35)i

i = 0.8
sustituyendo valores para el caso de la albmina se tiene:
0.69 = 0.35 + (1 0.35)i

i = 0.52
El adsorbente presenta diferente porosidad dependiendo del tamao del soluto: ASB (PM = 67,000) y Mioglobulina (PM = 17,500).
Teora de platos y teora cintica
La teora de platos es sencilla en su desarrollo matemtico, pero no puede
ser usada para predecir el comportamiento de columnas a partir de datos fundamentales. Se han efectuado diferentes intentos para superar esta limitacin de
la teora de platos, todos los desarrollos efectuados han producido expresiones
en las que la HET P (medida del grado de dispersin del pico) se relaciona con
parmetros que permiten predecir el comportamiento de la columna. Sobre este
tipo de enfoque dos tipos de modelos resultan de particular inters: el modelo
lineal y el modelo de van Deemter.
391
Modelo lineal Una primera aproximacin para la obtencin de expresiones

de HET P en funcin de variables de operacin de la columna, es igualar el
nmero de platos tericos de la teora de platos (N ) con el nmero de unidades
de transferencia (NT U ) del modelo cintico lineal, considerando que ambos
modelos describen un comportamiento gaussiano similar, de tal manera que de
acuerdo a las ecuaciones (8.28) y (8.29):
(1 )kL aL
(8.42)
y combinando esta ecuacin con la ecuacin (8.17) se puede obtener el perfil de

concentracin en funcin de las variables de operacin,

2
(1 )kL aL t
c = co exp
1
(8.43)
2
to
N = NTU =
En la ecuacin (8.43) la desviacin estndar del pico est dada por:

= to
por otro lado se sabe que:
(1 )kL aL
12
(8.44)
L
(8.45)
N
y se puede expresar la HET P no slo en trminos de un parmetro hipottico
N, sino en funcin de caractersticas fsicas del sistema,
HET P =
HET P =
2L
= 2
(1 )kL a
to
(8.46)
Ejemplo 8.5. Cromatografa de aspartamo. La cromatografa del aminocido d-aspartamo (Belter et al., 1988) en slica gel modificada, con silanos como
brazos espaciadores y l-prolina como ligando, produce un cromatograma en el
cual el tiempo de elucin del d-aspartamo es to = 62 min y la desviacin estndar = 3 min, cuando se utiliza una columna de 25 cm de longitud y 0.41 cm de
dimetro, rellena de partculas esfricas de 0.0045 cm de dimetro. La fraccin
vaca de la columna se estim en = 0.38 y el flujo utilizado fue de 2.0 cm3 /min.
La cintica de adsorcin puede suponerse que es controlada por el coeficiente
de transferencia de masa de la pelcula, el cual puede ser estimado por medio
de la siguiente correlacin:
kL = 1.17
dp L
L
0.42
L
L DAB
0.67
La difusividad del d-aspartamo en estas condiciones es DAB = 0.7 105

cm /s. La viscosidad y densidad pueden ser tomadas como las del agua.
Se pide calcular:
2
392
a) La constante de equilibrio del sistema, K.

b) N y HET P de acuerdo al modelo de platos.
c) N , 2 y HET P de acuerdo al modelo lineal combinado.
d) El efecto de variaciones de 20 % de la longitud de la columna, sobre N
y to .
Solucin:
a) Clculo de la constante de equilibrio.
Se puede utilizar la ecuacin (8.16) para obtener K, para lo cual es necesario
calcular primero el volumen del lecho Vc :
Vc =
(0.41 cm)2
25 cm = 3.30 cm3
4
rearreglando la ecuacin (8.16) y sustituyendo valores se tiene:
K=
1
(1 )
cm3

62
min
2
to F
1
min 0.38
=
= 60
Vc
(1 0.38)
3.30 cm3
b) Clculo de N y HET P con el modelo de platos.

De acuerdo con las ecuaciones (8.45) y (8.46),
N=
622 min2
t2o
= 2
= 427
2
3 min2
por la definicin de HET P dada en la ecuacin (8.45),
HET P =
L
25 cm
=
= 0.0585 cm
N
427
c) Clculo N , 2 y HET P con el modelo combinado lineal.

Para calcular N se utiliza la ecuacin (8.42). Para tal efecto primero se
calcula la velocidad superficial ,
2
=
cm3
min
min 60 s = 0.25 cm
0.132 cm2
s
El coeficiente de transferencia de masa se calcula utilizando la correlacin

dada de tal manera que:
kL
cm
= 1.17 0.25
0.01
0.42
cm
g
1.0
s
cm3
g
0.01
cm s
0.67
0.0045 cm 0.25
g
cm s
g
cm2
5
1.0
0.7
10
cm3
s
3 cm
= 5.67 10
s
kL
393
El clculo del rea interfacial es:

6
6
=
= 1333.33 cm1
dp
0.0045 cm
a=
entonces,
cm
5.67 103
826.67 cm1 25 cm
(1 )kL aL
s
N=
=
= 468
cm
0.25
s
De acuerdo a la ecuacin (8.46),
= to
(1 )kL aL
De la ecuacin (8.46),
HET P =
12
62 min
= 2.86 min
=
468
2L
(2.86 min)2 25 cm
=
= 0.052 cm
t2o
(63 min)2
d) Para resolver este inciso necesariamente se tiene que hacer uso del modelo
combinado lineal. Esta es la ventaja de este tipo de modelo; es decir, nos permite
hacer predicciones con la variacin de ciertos parmetros.
Una columna de 20 cm representa la reduccin de un 20 % en longitud de
tal manera que:
N=
5.67 103
cm
826.67 cm1 20 cm
s
= 374
cm
0.25
s
por otra parte:

0.132 cm2 20 cm
= 49.6 min
cm3
2
min
De la misma manera se pueden efectuar los clculos para L = 30 cm (+20 %).
to = [0.38 + (1 0.38) 60]
394
Modelo de van Deemter El modelo de van Deemter (van Deemter et al.,

1956) es uno de los ms conocidos para cromatografa por elucin. Estos autores
combinaron los resultados de la teora de platos con los del modelo cintico de
Lapidus y Amundson (Lapidus y Amundson, 1952). Este ltimo fue utilizado en
forma simplificada para el caso de un sistema con isoterma de adsorcin lineal
y una columna larga, de tal manera que el perfil de concentracin del soluto a
la salida de la columna tambin sea gaussiano como el de la teora de platos. El
resultado fue obtener una expresin para HET P en funcin de los parmetros
considerados por Lapidus y Amundson para su modelo cintico. Dado que el
modelo de Lapidus y Amundson incluye los efectos de dispersin axial (difusin
molecular y mezclado), resistencia a la transferencia de masa en la pelcula y al
interior del poro, la expresin de van Deemter considera todos estos efectos en
tiempo real.
Una forma (Arnold et al., 1985) de la expresin de van Deemter es:
HET P
donde:

2
K
2DAB
+ 2 (1 )(i ) 1 +
= 2" +
i

d2p
1
10
60(1 )
i Di kL dp
()

2
+ (1 )(i ) 1 +
(8.47)
": Longitud de mezclado. [L].

DAB : Coeficiente de difusin del soluto. [L2 /t].
: Tortuosidad del lecho.
En la expresin anterior el coeficiente de dispersin axial Dax se considera
que est conformado por dos contribuciones: la difusin molecular en la direccin
axial y un trmino de mezclado que es proporcional a la velocidad, esto es,
Dax = DAB + "
(8.48)
En el caso de cromatografa lquida de molculas de tamao grande (por

ejemplo protenas), el segundo trmino del lado derecho de la ecuacin (8.47)
puede ser despreciado.
Ejemplo 8.6. Comparacin de los resultados de la teora de momentos con el modelo de van Deemter. En un determinado proceso cromatogrfico se puede suponer que existe equilibrio sobre la superficie del adsorbente (slo existen las resistencias de la pelcula y del poro) y que el pulso
alimentado es de duracin corta.
395
Se pide: Demostrar que para el caso de perfiles de concentracin gaussianos

la teora de momentos y la de van Deemter producen resultados idnticos.
Solucin:
En el caso de perfiles gaussianos se cumple que:
1 = to
y
2 = 2
de tal manera que:
L
HET P = 22
1
La expresin anterior conjuntamente con las ecuaciones (8.39), (8.41), (8.48)
y las condiciones particulares:
tp
K2
k1
= 0
= 0
conducen a:
(HET P )m omentos = (HET P )van
Deemter
Ecuacin de van Deemter simplificada La ecuacin de van Deemter

(8.47) en su versin ms popular y simplificada se escribe como:
HET P = A +
B
+ C ()
()
(8.49)
donde:
El trmino A es funcin del tamao y uniformidad del adsorbente de la columna, ya que esto determina la longitud y uniformidad del mezclado. Las
partculas de dimetro pequeo, producen valores bajos de A.
El trmino B se relaciona con la difusin molecular axial. Este trmino puede
ser despreciado en el caso de cromatografa lquida y particularmente cuando el soluto es una molcula grande como una protena.
Si la velocidad superficial en una columna disminuye, el trmino B/ ()
aumenta, esto significa que al ser mayor el tiempo de retencin hay ms
tiempo para que el pulso se disperse por difusin molecular. Consecuentemente la contribucin de este trmino tiende a disminuir la eficiencia de
la columna; es decir, a incrementar el HET P .
396
El trmino C representa la dispersin del pulso debida a la resistencia a la

transferencia de masa. Este trmino es funcin de la geometra de la fase
estacionaria, del coeficiente de distribucin del soluto y de las velocidades
de transferencia. Si la velocidad superficial se incrementa, el trmino C
se incrementa. Esto significa que a mayor velocidad superficial en la columna, el tiempo para lograr el equilibrio es menor. Consecuentemente la contribucin de este trmino tiende a disminuir la eficiencia de la columna.
En la Figura 8.16 se muestra el efecto de la velocidad superficial en la columna sobre el HET P , de acuerdo al modelo de van Deemter. Se observa que existe
una velocidad ptima debido a los efectos opuestos de los trminos B/ () y
C ().
Figura 8.16: Efecto de la velocidad superficial sobre HETP. Fuente: Janson y

c
Hedman, 1982. Reproducida con el permiso de Springer-Verlag. Copyright 1982.
Todos los
Para una columna particular es posible determinar las constantes de la

ecuacin de van Deemter efectuando mediciones de HET P a tres velocidades
diferentes.
8.4.3.
Evaluacin del Comportamiento de las Columnas:

Resolucin, Pureza y Rendimiento
Los objetivos de un proceso cromatogrfico a escala pueden ser una alta purificacin de un componente o una alta productividad. Cuando el rendimiento
de una operacin disminuye conforme la pureza deseada aumenta, estos objetivos no pueden lograrse simultneamente. La teora cromatogrfica permite
evaluar el comportamiento de una operacin mediante el uso de tres criterios:
a) resolucin, b) pureza y c) rendimiento.
397
Resolucin
En la cromatografa por elucin un objetivo puede ser el separar los componentes de una muestra en forma satisfactoria. La medida del grado de separacin
de dos componentes en una operacin cromatogrfica se conoce como resolucin
o eficiencia de separacin.
La resolucin de una columna depende de dos factores: a) la selectividad de
la columna que es una medida de la afinidad de los solutos por el adsorbente
dada por el factor de separacin o selectividad = K2 /K1 y b) la eficiencia de la
columna que est relacionada con el grado de dispersin de los picos (HET P ).
La separacin de dos solutos (Fig. 8.17a ) puede aumentarse mejorando el factor
de separacin (Fig. 8.17b ), aumentando el nmero de platos (Fig. 8.17c ) o
combinando ambos efectos.
Figura 8.17: Efecto de la selectividad y la eficiencia sobre la resolucin. a) Factor

de separacin pobre y nmero de platos bajo, b) Factor de separacin bueno
y nmero de platos bajo y c) Factor de separacin pobre y nmero de platos
grande.
Si se considera la Figura 8.18 una separacin completa de dos picos puede
lograrse cuando las rectas que definen la amplitud de la base de los picos W , se
intersectan abajo del eje t. Puede ser demostrado que cuando esto sucede:
Rs =
y
2(to2 to1 )
2
W1 + W2
W = 4
(8.50)
(8.51)
donde Rs es la resolucin. Generalmente cuando Rs 1.5 la separacin es

satisfactoria.
398
Figura 8.18: Esquema para el clculo de la resolucin en una columna cromatogrfica.

Una resolucin adecuada puede ser difcil de obtener cuando se trata de
resolver una mezcla de componentes con propiedades similares, como en la separacin de mezclas de protenas. En este caso la mejor forma para mejorar
la resolucin depende del tipo de cromatografa, pero existen algunas lneas
generales como las siguientes:
1. Para incrementar t = (to2 to1 ).
a) Incrementar la longitud de la columna L.
b) Aumentar la cantidad de la fase estacionaria.
c) Mejorar la selectividad, seleccionando otra fase estacionaria u otra
fase mvil.
2. Para disminuir el ancho de los picos.
a) Empacar ms uniformemente la columna y/o disminuir el tamao de
las partculas del empaque.
b) Optimizar el flujo.
c) Reducir el tamao de la muestra.
La ecuacin (8.50) puede ser utilizada conjuntamente con los modelos cromatogrficos apropiados para analizar este tipo de acciones y generar las decisiones correspondientes. Por ejemplo, se puede estimar la longitud necesaria de
una columna para alcanzar una determinada resolucin.
Ejemplo 8.7. Clculo de la resolucin de una columna. En una columna de filtracin en gel en la que se separa un anticuerpo de una impureza se
determinan los siguientes parmetros:
to (h)
(h)
co
Anticuerpo
6.42
0.80
82
399
Impureza
7.600
0.175
43
Se pide: Calcular la resolucin lograda.

Solucin:
Se puede calcular el ancho de las bases de los picos W utilizando la ecuacin
(8.51),
W1 = 4 1 = (4)(0.80 h) = 3.2 h
W2 = 4 2 = (4)(0.175 h) = 0.7 h
la resolucin se calcula con la ecuacin (8.50),
Rs =
(7.60 6.42)
= 0.3
3.2 + 0.70
esta resolucin es muy baja.

Pureza
Cuando se tiene una resolucin muy baja debido a propiedades muy semejantes entre los solutos de una mezcla o por cuestiones de productividad, existe
un compromiso entre el rendimiento alcanzable y la pureza deseada. Entre mayor
sea la pureza requerida, menor rendimiento puede ser obtenido.
Es posible efectuar un anlisis de pureza y rendimiento de columnas empleando los modelos revisados (Azevedo et al., 2009). Considerando que en una
operacin cromatogrfica la masa eluida del soluto j de una mezcla, en el inter
valo de t a t est dada por:
SEj =
t
F cj dt
(8.52)
t
donde:
SEj : Masa del soluto j eluida en el intervalo de tiempo.
F : Flujo de solvente en la columna.
cj : Concentracin del soluto j a la salida de la columna.
La pureza del soluto j, P Rj , se define como la razn de la masa de soluto

j obtenida en el intervalo de t a t, entre la masa total obtenida en ese mismo
intervalo, es decir:
400
t
F cj dt
P Rj =
n
1
(8.53)
F ci dt
i=1 t
donde n es el nmero de solutos presentes.

Rendimiento
El rendimiento de una operacin cromatogrfica puede ser definido como
la cantidad de soluto recuperado en un cierto intervalo, respecto a la cantidad
aplicada en la muestra original.
La masa total de soluto j inyectada a la columna est dada por:
STj =

F cj dt
(8.54)
La proporcin de soluto j recuperada en el intervalo de t a t o rendimiento REj

puede entonces expresarse como:
t
F cj dt

SEj
= t
REj =
STj
F cj dt
(8.55)
Las ecuaciones (8.53) y (8.55) combinadas con los modelos que describen los
perfiles de concentracin en las columnas, nos permiten calcular y/o predecir
(segn el tipo de modelo) rendimientos y pureza en columnas.
Ejemplo 8.8. Pureza y Rendimiento. La Figura 8.19 muestra los perfiles
de concentracin del anticuerpo y la impureza del Ejemplo 8.7. Puede observarse
un traslape de los picos de estas sustancias debido a la baja resolucin de la
operacin.
Se pide: Describir la variacin de la pureza y el rendimiento del anticuerpo
con el tiempo de operacin, si la masa de anticuerpo y la masa de impureza
alimentadas a la columna son de 1.63 g y 0.45 g, respectivamente (se usa el
subndice 1 para el anticuerpo y el subndice 2 para la impureza).
Solucin:
Combinando las ecuaciones (8.17) y (8.55) se obtiene una expresin para el
rendimiento en funcin del tiempo,
401
Figura 8.19: Perfiles de concentracin del Ejemplo 8.8.
RE1 =
t

(t t01 )2
F co1 exp
dt
2 21

SE1
= t

ST1
(t to1 )2
F co1 exp
dt
2 21
La expresin anterior puede integrarse expresando la integral del numerador

como una diferencia de integrales y utilizando la definicin de la funcin error,
obtenindose:

t to1
t to1
1
Erf
Erf
RE1 =
2
21
2 1
cuando t = 0 la expresin anterior puede aproximarse a:

1
t to1
RE1 =
1 + Erf
2
2 1
La variacin de la pureza con el tiempo de operacin se obtiene combinando
las ecuaciones (8.17) y (8.53),
P R1
t
t
t
t

(t to1 )2
F co1 exp
dt
2 21

t
(t to1 )2
(t to2 )2
F co1 exp
F
c
exp
dt
+
dt
o2
221
2 22
t
402
utilizando la definicin de funcin error la expresin anterior puede expresarse

como:
P R1 =
(co1 ) RE1
(co1 ) RE1 + (co2 ) RE2
sustituyendo valores en las expresiones desarrolladas se tiene:
RE1
RE2
P R1

1
t 6.42
1 + Erf
2
2(0.8)

t 7.60
1
1 + Erf
2
2(0.175)
82 RE1
82 RE1 + 43 RE2
Los resultados sobre los clculos de los rendimientos y la pureza de anticuerpo se muestran en forma grfica en la Figura 8.20. Se puede constatar en la
figura el hecho de que en una operacin de separacin generalmente se pueden
obtener altas purezas o altos rendimientos, pero no ambos.
Figura 8.20: Perfiles de pureza y rendimiento del Ejemplo 8.8.
8.4.4.
Escalamiento y Optimizacin
El mercado del producto o el inters social del mismo son los elementos principales a considerar en el escalamiento de un proceso. En el caso de productos
novedosos de alto precio o alto inters social y de bajo volumen de produccin, el
escalamiento del proceso se hace de manera expedita, tanto tcnicamente como
desde el punto de vista regulatorio (oferta al mercado y el tiempo controlan).
403
Por otro lado, para productos de alto volumen o que van a competir con productos existentes, el diseo del proceso debe ser ms cuidadoso (la oferta excede
la demanda y el costo controla).
El escalamiento de una columna cromatogrfica consiste generalmente en
determinar el diseo de la columna que permita cumplir con una productividad mayor a la de la columna empleada en la obtencin de los datos para el
diseo. En general las tcnicas de escalamiento surgen del reconocimiento de la
imposibilidad del diseo de este tipo de equipo mediante modelos estrictamente
tericos (Gibbs y Lighfoot, 1986).
Factores de escalamiento
Son varios los factores a considerar en el escalamiento de columnas cromatogrficas dentro de los cuales se pueden destacar los siguientes.
1. Objetivo del escalamiento. Generalmente el objetivo de un escalamiento es incrementar la productividad. En algunos casos slo se busca incrementar
la produccin.
2. Criterio de escalamiento. Existen varias alternativas no excluyentes
que pueden servir de base para realizar el estudio de escalamiento como incrementar: a) el flujo volumtrico a procesar, b) la concentracin de la muestra y
c) el volumen de la muestra.
El incrementar slo el flujo volumtrico, manteniendo la concentracin y el
tamao relativo de la muestra, permite conservar la linearidad del proceso.
Cuando se incrementa la concentracin y/o el volumen de la muestra se
produce una condicin de sobrecarga, que produce un perfil de concentracin
no gaussiano a la salida de la columna (Fig. 8.9). En el caso de muestras ms
concentradas generalmente se producen isotermas no lineales y efectos de interferencia de los solutos en la adsorcin, que se traducen en una disminucin del
grado de purificacin obtenible. En estos casos no puede ser aplicado el concepto
de HET P desarrollado para sistemas lineales.
3. Restricciones. El escalamiento adems de cumplir con el objetivo fundamental de incrementar la productividad (o al menos la produccin), debe tambin cumplir con las restricciones del proceso en cuanto a pureza, rendimiento,
concentracin del producto y duracin de cada ciclo.
4. Caractersticas de flujo. El escalamiento de columnas presenta varios
problemas asociados al flujo dentro del lecho.
a) El incremento de la longitud de la columna es imposible sin reducir la
velocidad de percolacin debido a que generalmente las cadas de presin de
las columnas de laboratorio estn en el lmite del colapso de los adsorbentes
empleados.
b) El incremento del dimetro produce problemas de distribucin del flujo y
de incremento del gradiante de presin por disminucin de soporte por la pared.
La cada de presin en una columna empacada en rgimen laminar est dada
404
por la ecuacin de Blake-Kozeny (Bird et al., 1960),

P =
150(1 )L
2 d2p
(8.56)
donde es la velocidad intersticial y est dada por la relacin:

=
4F
Dc2
(8.57)
donde Dc es el dimetro de la columna.

5. Geometra. Los parmetros bsicos que define la geometra de una
columna y que pueden ser modificados son: dp , Dc y L.
6. Dinmica de la columna. En el proceso de escalamiento es fundamental tomar en cuenta los grupos adimensionales que se derivan de la expresiones
diferenciales que describen los perfiles de concentracin en la columna; de particular importancia son el tiempo t/to y el nmero de unidades de transferencia
N T U o de etapas tericas N.
7. Optimizacin. En el proceso de escalamiento generalmente tambin se
busca optimizar la columna fijando criterios de mxima productividad o mnimo
costo.
Mtodos de escalamiento de columnas cromatogrficas
Es importante distinguir dos mtodos de escalamiento comnmente empleados en cromatografa: a) escalamiento directo y b) escalamiento utilizando modelos.
Escalamiento Directo La mayora de los procesos cromatogrficos han sido
escalados directamente de los sistemas analticos de laboratorio (Wang, 1990).
En el mtodo de escalamiento directo se parte de un diseo ptimo desarrollado
generalmente a nivel laboratorio y se supone que los fenmenos difusionales no
varan dentro del rango de escalas que se estudia. Este mtodo permite determinar el tamao y las condiciones de operacin de la escala nueva en forma
rpida. Una limitacin de este mtodo es la escasa informacin que genera sobre los mecanismos cinticos controlantes. A continuacin se presenta un caso
particular de escalamiento directo con el propsito de ejemplificar este mtodo.
Caso de escalamiento directo de un sistema lineal Uno de los enfoques ms utilizados en el escalamiento de columnas cromatogrficas, consiste
en seleccionar como parmetro de escalamiento un incremento del flujo de la
columna, lo que permite mantener la linearidad del proceso. Generalmente las
restricciones son de igual pureza y rendimiento en ambas escalas (Cowan et al.,
1987).
Estas restricciones requieren que la dinmica de la columna no cambie. El
perfil de concentracin de los solutos a la salida de la columna debe mantenerse
405
igual en ambas escalas. En este caso lineal los perfiles gaussianos estn dados
por la relacin ya conocida,
2
t
1
c = co exp o
N

mantener los perfiles iguales durante el escalamiento, requiere mantener iguales

co , N y t/to , para cada uno de los solutos en ambas escalas (escalas I y II).
Si el escalamiento es slo a travs del incremento de flujo, la concentracin
mxima de soluto, la cual es funcin de la concentracin de entrada principalmente, puede considerarse igual en ambas escalas, o sea coI = coII , donde los
subndices I y II se refieren a cada una de las escalas.
El nmero de etapas cuando slo un mecanismo controla la rapidez de la
adsorcin puede ser expresado como:
N=
L
k ()n dn+1
p
(8.58)
Asimismo, el tiempo de retencin est dado por:

to = [ + (1 )K]
(8.59)
Como primer alternativa se puede considerar incrementar Dc , dp y L; sin

embargo, no es posible hacer este cambio sin alterar el perfil de concentracin
dado que el valor de N cambia con todos estos parmetros, independientemente
del valor que tome n en la ecuacin (8.58) o mecanismo controlante de la cintica.
Tambin se puede considerar incrementar Dc y dp , de tal manera que su
razn se mantenga constante; sin embargo esto tambin conduce a un cambio
en el valor de N .
Como tercera alternativa se puede considerar mantener dp igual para ambas
escalas e incrementar y L, de tal manera que la relacin L/ sea igual en
ambas escalas, lo que permite mantener to y N constantes entre las escalas, en
casi todos los casos de un slo mecanismo controlante. Sin embargo, incrementar
simultneamente L y produce un efecto dramtico sobre la cada de presin,
de acuerdo a lo que establece la ecuacin (8.56).
La solucin comnmente empleada consiste en usar columnas poco esbeltas
con dp , L y iguales a las de la columna de escala laboratorio. Esto permite
aumentar la produccin (no la productividad), al aumentar el rea de flujo o
dimetro de columna.
En el caso de que en el proceso de escalamiento pudiera disminuirse el
dimetro del empaque utilizado a nivel laboratorio dp , es posible realizar el escalamiento y obtener una mejor resolucin, con una columna de menor volumen
y conservando la misma cada de presin (Wankat y Koo, 1988).
406
Para reducir los costos asociados a la inversin inicial en las columnas, es

preferible utilizar cada columna en varios ciclos procesando alcuotas del material inicial, entonces el problema de optimizacin de la columna escalada se
traduce en encontrar el dimetro de columna que produce el menor costo del
producto. De tal manera que el proceso de escalamiento y el de optimizacin,
se desarrollan simultneamente (Janson y Hedman, 1987).
Ejemplo 8.9. Optimizacin de una columna. Con el propsito de separar una protena de sus sales acompaantes, se utiliza una columna cromatogrfica de 5 cm de dimetro y 15 cm de longitud, empacada con sefacril S-200
superfino (dextrano). La alimentacin consiste en una solucin diluida que contiene una mezcla de solutos, 80 % de la cual es transferrina y 20 % sales (como
NaCl). Cuando la columna se opera a = 10 cm/h se produce una separacin
caracterizada de la siguiente manera (Janson y Hedman, 1982):
to (min)
(min)
Transferrina
41
4
Sales
88
4
Se pide:
a) Calcular el tiempo necesario para obtener el 90 % de rendimiento de transferrina.
b) Si se desea incrementar la productividad de la columna manteniendo la
misma geometra y suponiendo que la etapa controlante es tal que la desviacin
1
estndar es proporcional a () 2 , calcular la velocidad de alimentacin mxima y el tiempo del ciclo necesario para obtener un rendimiento de 99 % de
transferrina con 98 % de pureza (transferrina = 1 y sales = 2; escalas I y II).
Solucin:
a) De acuerdo a la ecuacin desarrollada en el Ejemplo 8.8,
RE1 =

1
t to1
1 + Erf
2
21
0.90 =

1
t 41
1 + Erf
2
24
de tal manera que,
t90 % = 46.1 min

b) De acuerdo a las expresiones tambin desarrolladas en el Ejemplo 8.8, la
pureza de la transferrina en la masa total colectada en un intervalo de tiempo
est dada por:
P R1
P R1
407
masa de transferrina
masa total
(masa de transferrina)(RE1 )
(masa de transferrina)(RE1 ) + (masa de sal)(RE2 )
12
Por otro lado, como ()

ciones:
II
I
II
I
, se pueden desarrollar la siguientes rela-
I
II
12
I
II
12
utilizando la ecuacin (8.59), se obtiene:

toII
=
toI 1

toII
=
toI 2
I
II
I
II
Sustituyendo valores se puede establecer el siguiente sistema de ecuaciones:
0.98 =
0.99 =
(REII )2
(II )1
(II )2
(toII )1
(toII )2
(0.8) (REII )1
(0.8) (REII )1 + (0.2) (REII )2

1
t toII
1 + Erf
2
2 II 1

1
t toII
1 + Erf
2
2 II 2
12.65
1
( II ) 2
12.65
1
( II ) 2
410
II
880
II
El sistema anterior de ecuaciones puede ser resuelto mediante el siguiente

mtodo de clculo:
1. Suponer una II .
408
2. Calcular II y toII para ambos solutos.

3. Calcular t de la ecuacin de rendimiento de transferrina.
4. Calcular el rendimiento de sal.
5. Con los datos anteriores calcular la pureza de la transferrina.
6. La suposicin de II ser correcta cuando la pureza de transferrina sea
del 98 %.
De acuerdo a lo anterior el resultados es:
cm
h
t = 7.4 min
II
= 93
Esto representa aumentar 9.3 veces la velocidad en la columna. La Figura 8.21 muestra los perfiles de los solutos para el caso base y la situacin nueva.
Los resultados sugieren que a nivel laboratorio la optimizacin consiste en incrementar la velocidad manteniendo una resolucin o pureza adecuada.
Figura 8.21: Perfiles de concentracin del Ejemplo 8.9.

El anlisis anterior es vlido, siempre y cuando el mecanismo controlante se
mantenga en ambas situaciones. Tambin es importante hacer notar que para
otro tipo de cromatografa la expresin de la desviacin estndar utilizada en
este ejemplo, puede ser diferente.
Los casos de escalamiento directo no lineal escapan al alcance de este trabajo pero existen varias publicaciones especializadas que pueden ser consultadas
(Wankat y Koo, 1988).
409
Escalamiento mediante modelos El enfoque de escalamiento directo conduce a utilizar partculas muy pequeas (5 100 m) que incrementan el costo
del proceso; aun cuando producen buena resolucin, poca dispersin y tiempos
cortos de ciclo. Esto se debe a que las resistencias por difusin dentro de la
partcula y los fenmenos de dispersin son menores con partculas pequeas.
Estas partculas pequeas no siempre son las ms adecuadas en un proceso
industrial, dado que el objetivo en stos es incrementar la productividad y no
la resolucin de todos los componentes. Por otro lado, el escalamiento directo
conduce a la utilizacin de una fraccin muy pequea del lecho cromatogrfico,
aspecto que tambin impacta el costo. Las limitaciones del escalamiento directo
han conducido a tratar de incorporar metodologas ingenieriles al diseo de las
columnas. En la Figura 8.22 se presenta la metodologa para el escalamiento
mediante el uso de modelos de columnas.
Figura 8.22: Metodologa para escalamiento y optimizacin de columnas. Adapc

tada de: Wang, 1990. Reproducida con el permiso de M arcel Dekker Inc. Copyright 1990.
Cuando se utiliza el escalamiento mediante modelos, los experimentos que

se realizan, ms que tener como objetivo desarrollar una optimizacin de la
columna, estn orientados a la validacin del modelo y a la obtencin de los
parmetros del mismo.
Los modelos desarrollados son utilizados para predecir los perfiles de concentracin a la salida de la columna, por medio de una simulacin por computadora,
as como el impacto que sobre los perfiles producen los cambios en:
a) La geometra del sistema: Dc , L y dp .
b) La operacin del sistema: flujo, concentracin, volumen y tamao de muestra.
c) Qumica del sistema: tipo de eluyente, tipo de adsorbente y tipo de isoterma.
d) Modo de operacin.
410
El enfoque se orienta a obtener un diseo ptimo bajo restricciones de costos, tiempo de ciclo, productividad, pureza y concentracin. Los modelos cromatogrficos presentados en este captulo son particularmente tiles cuando se
trata de seguir este enfoque de escalamiento.
Posiblemente, el mejor enfoque que puede adoptarse es desarrollar un diseo
por escalamiento directo y afinar este diseo mediante el empleo de modelos,
para analizar aspectos cruciales de la separacin.
Diseo del sistema cromatogrfico
En un esquema de purificacin donde participa una operacin cromatogrfica, el problema de diseo es determinar el nmero y tamao de las columnas
necesarias para cumplir econmicamente con la produccin con la pureza requerida del producto de inters (Simpson, 1994). El nmero de columnas est
dado por:

kg
Pt
da

(8.60)
[]
NC =
kg
ciclos
Pcc n
ciclo columna
da
donde: Pt es la produccin del producto de inters (demanda), Pcc es la produccin especfica de cada columna y n es la cantidad de ciclos de operacin que
pueden ser realizados en cada columna al da.
La produccin especfica de la columna puede ser relacionada con las caractersticas de la columna,
L
kg
(8.61)
L ciclo columna
donde: qm es la capacidad mxima de la columna, Vc es el volumen de la columna
y U es la fraccin de la capacidad mxima de la columna utilizada en cada ciclo.
La duracin de cada ciclo de operacin est dada por:

BV
BV
BV
BV
tc = L
+
+
+
+ ts
(8.62)
a
l
e
r
donde: BV son los volmenes de columna y la velocidad superficial en la
columna, para aplicar la muestra a, lavar l, eluir e y regenerar r la columna. El
tiempo de sanitacin de la columna es ts .
Es obvio que:
Pcc = qm Vc U []
qm U
co
Para el caso particular que ts es despreciable,
(BV )a =
NC =
Pt L
BV

BV
BV
BV
+
+
+
l
e
r
a
qm Vc U
(8.63)
(8.64)
8.5. SUMARIO
411
De acuerdo al resultado anterior, el nmero de columnas es independiente

de la longitud de la columna (L/Vc = 1/Ac ). Se producen resultados equivalentes con columnas cortas operadas frecuentemente que con columnas largas
operadas con frecuencias menores. Los factores que determinan realmente la
altura de lecho son la resolucin, el tiempo de ciclo y la cada de presin. Es
frecuente utilizar columnas cortas, donde la resolucin se mejora mediante el
uso de gradientes de pH o de fuerza inica, en lugar de incrementar la longitud
de la columna como sugiere la teora cromatogrfica clsica.
En el caso de muestras muy diluidas el volumen aplicado puede ser mucho
mayor que los otros volmenes de proceso, de tal manera que:
NC =
Pt L
co Vc
(8.65)
En este caso, el nmero de columnas es independiente de la longitud y capacidad de la columna.
8.5.
Sumario
La cromatografa por elucin se utiliza para obtener productos biotecnolgicos con un alto grado de pureza. Existen varias formas para llevar a cabo una
operacin cromatogrfica que dependen del tipo de adsorbente empleado y las
condiciones en las que se realiza.
Las operaciones cromatogrficas se desarrollan generalmente en columnas
empacadas fabricadas en diversos tipos de materiales y operadas tanto a presiones moderadas como a altas presiones.
Las columnas cromatogrficas han sido escaladas principalmente a partir de
columnas de laboratorio, pero existe una creciente necesidad de apoyar el diseo de las columnas mediante el empleo de modelos. Hoy los bioprocesos bien
establecidos utilizan modelos matemticos en la optimizacin y simplificacin de
la validacin de las operaciones de cromatografa. La modelacin y simulacin
de esta operacin puede ayudar a reducir tiempos y costos, en el desarrollo y
operacin de los bioprocesos.
412
8.6.
Problemas
8.1. Nmero de platos tericos. El ancho W de un pico es de 50 s y el

tiempo de retencin es de 50 min.
Se pide: Calcular el nmero de platos tericos de la columna bajo estas
condiciones.
Resp: 57,600.
8.2. Resolucin. Los tiempos de retencin de los compuestos A y B, son
de 800 s y 815 s, respectivamente. La columna se puede considerar que tiene
8, 100 platos tericos para ambos compuestos.
Se pide:
a) Calcular la resolucin para estos compuestos en la columna.
b) Estimar el nmero de etapas para obtener una resolucin de 1, suponiendo
que los tiempos de retencin son iguales.
Resp: a) 0.42 y b) 45,500.
8.3. Velocidad ptima. La ecuacin (8.49) describe la variacin de HET P
con la velocidad en una columna cromatogrfica.
Se pide: Obtener una expresin matemtica para la ptima y la altura
equivalente de un plato terico (HET P ) mnima, a partir de esta ecuacin.
8.4. Expresin de la resolucin. Utilizando el modelo de platos tericos y
considerando iguales las HET P de dos solutos que se desea separar, demostrar
que:

k
1
( 1)
N2
Rs =
2( + 1) 1 + k
esta ecuacin se conoce como la ecuacin fundamental de la cromatografa lineal,
donde:
k1 + k2
2
K2
=
K
1

1

k1 =
K1

1
k2 =
K2
k =
: selectividad; k1 : factor de capacidad del soluto 1; k2 : factor de capacidad

del soluto 2; k : factor de capacidad promedio; K1 : constante de equilibrio del
soluto 1; K2 : constante de equilibrio del soluto 2; : porosidad del lecho.
8.5. Ecuacin de la resolucin HPLC. En el caso de la cromatografa
lquida de alta resolucin puede considerarse que el ancho de los picos de los
solutos 1 y 2 son iguales, entonces: W1 = W2 .
8.6. PROBLEMAS
413
Se pide: Demostrar que bajo estas condiciones,

k2
1 1
1/2
N2
Rs =

4
1 + k2
donde el subndice 2 corresponde al soluto ms lento.
8.6. Clculo de resolucin HPLC. En la separacin de albmina de suero
de bovino (ASB) y mioglobulina (Mg), mediante una columna de laboratorio de
cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC), se determin que los factores

de capacidad de los solutos son: kASB = 0.8 y kMg = 1.1.
La altura equivalente de un plato terico para la mioglobulina est dada por:
HET P = 6.2 105 + 1.13
donde HET P est en m y en m/s.
Se pide: Estimar la resolucin esperada si la columna tiene un dimetro de
7.5 103 m y una longitud de 0.6 m. El volumen de la muestra es de 107 m3
y la velocidad superficial en la columna es de 2.17 104 m/s.
Resp. Rs = 1.58
8.7. Escala y resolucin. Utilizando la ecuacin del Problema 8.4, estimar
la resolucin que se obtiene en una columna de 50 cm, si en una columna de
20 cm la resolucin obtenida es de 0.8 (considere como nica variable la longitud
de la columna).
Resp: 1.27
8.8. Obtencin de cromatogramas. Una mezcla contiene 70 % de una
droga y 30 % de una impureza. Cuando esta mezcla se corre en una columna
de laboratorio, los tiempos de retencin son de 9.7 h y 8.7 h y la desviacin
estndar de 0.5 h y 0.2 h, respectivamente.
Se pide:
a) Calcular el rendimiento de la droga si desea obtener una pureza del 99 %.
b) Simular utilizando la computadora los perfiles de concentracin, pureza
y rendimiento de acuerdo a las condiciones del problema.
c) Simular el efecto de variar la proporcin de soluto a 50:50 % sobre los
perfiles de concentracin, rendimiento y pureza.
d) Repitir la simulacin para una proporcin 90:10 %.
Resp: a) 66.3 %.
8.9. Volumen de proceso. Cuando se procesa una mezcla de lincomicinas
A y B en una columna de partculas de celulosa, se colecta el 2.2 %, 15.8 % y
50 % de lincomicina A a 600, 650 y 700 litros de elucin, respectivamente.
Se pide: Calcular el volumen para obtener un rendimiento del 95 % de
lincomicina A.
Resp: 780 L.
414
8.10. Cromatografa de exclusin por tamao (SEC). Una columna

de laboratorio ( Ghose, 1990) de 0.02 m de dimetro, se empaca con 0.065 kg
de Sephadex G-100 cuyo poder hidratante es de 0.003 m3 /kg de gel seca, producindose un lecho empacado de 100 cm de altura.
La columna se utiliza para separar una mezcla de albmina de suero de
bovino (ASB) y glucosa. El volumen utilizado de muestra es de 2 106 m3 ,
el cual tiene una concentracin de ASB de 5 kg/m3 y 10 kg/m3 de glucosa.
La cromatografa se desarrolla utilizando agua como eluyente. El volumen de
elucin (Vo ) de la ASB es de 1.05 104 m3 y el de glucosa de 2.95 104 m3 .
El volumen vaco de la columna (V ) se midi utilizando el dextrano de
alto peso molecular y fue de 1.05 104 m3 (en cromatografa en gel donde la
cantidad de lquido en los poros de la matriz es considerable, esta medicin con
dextrano no incluye el volumen de dicho lquido Vi ).
El coeficiente de particin de los solutos A (ASB) y B (glucosa) est dado
por:
(Vo )A = Vc + KpA Vi
(Vo )B = Vc + KpB Vi
donde Vc es el volumen total del lecho de la columna y KpA y KpB son los
coeficientes de particin.
El volumen de los poros Vi puede ser calculado con la expresin:
Vi = aWr
donde a es la masa seca de gel y Wr la capacidad hidratante del gel.
Se desea escalar la operacin de esta columna a una columna de 0.06 m de
dimetro y 3 m de lecho manteniendo la relacin de volumen vaco a volumen
total constante (Vc /Vc ) = Cte., y la relacin de volumen de los poros a volumen
total constante.
Se pide:
a) Determinar los volmenes de elucin de la ASB y de la glucosa en la nueva
columna.
b) La masa del adsorbente a emplear en la segunda columna.
c) Demostrar que en cromatografa en gel el modelo de van Deemter conduce
a:
Vc (1 )p
Kp =
Vi
d) Cul es el significado fsico de Kp ?
e) Comparar la ecuacin (8.16) con la (8.39) para su uso en cromatografa
en gel.
Resp. a) (Vo )A = 2.834 103 m3 y b) 1.76 kg.
8.11. Anlisis econmico del costo del adsorbente. Se desea efectuar
un anlisis econmico de una operacin cromatogrfica, considerando los siguientes parmetros:
8.6. PROBLEMAS
415
S: Costo del adsorbente. [$/kg de adsorbente].

P : Poductividad promedio. [kg de producto/kg de adsorbente-ciclo].
n: Duracin del ciclo. [ciclo/h].
t: Tiempo de vida del adsorbente. [h].
CA : Costo del adsorbente por kg de producto.[$/kg de producto].
Se pide:
a) Obtener una expresin del impacto del costo del adsorbente sobre el costo
del producto.
b) Graficar CA vs P para valores de S/nt de 0.1, 0.5 y 1.0, en el rango de
0 P 0.05
c) En una operacin cromatogrfica el adsorbente tiene un costo de $10.00/kg
y tiene una vida de 2, 000 h. La operacin se efecta de tal forma que se inyecta
una muestra cada 2.5 h y la productividad promedio P es de 0.02 kg de producto/kg de adsorbente-ciclo. Estimar el impacto del costo del adsorbente sobre el
producto.
Resp. c) CA = $0.625/kg de producto.
8.12. Anlisis econmico. Se desea efectuar un anlisis econmico de una
operacin cromatogrfica considerando los siguientes parmetros:
S: Costo del adsorbente. [$/kg de adsorbente].
P : Productividad promedio. [kg de producto/kg de adsorbente-ciclo].
n: Duracin del ciclo. [ciclo/h].
t: Tiempo de vida del adsorbente. [h].
L = nt: Nmero de ciclos en la vida del adsorbente.
CT : Costo del adsorbente, regenerante y eluyente por kg de producto. [$/kg].
M : Costo de eluyente. [$/kg de adsorbente-ciclo].
R: Costo del regenerante. [$/kg de adsorbenteciclo de regeneracin].
LR : Ciclos/ciclo de regeneracin.
Se pide demostrar que:
CT =

1
RL2
S+
+ ML
PL
LR
416
8.13. Parmetros de la ecuacin de van Deemter. En la cromatografa

de ASB se obtienen los siguientes datos experimentales:
(cm/s)
0.005
0.010
0.015
HET P (cm)
0.12
0.19
0.26
Se pide: Estimar los parmetros A, B, y C de la ecuacin de van Deemter

para la columna empleada.
Resp. A = 0.05 cm, B = 0, C = 14 s.
8.14. Prametros de columna. En una separacin cromatogrfica se obtiene un pico de hemoglobina con una concentracin mxima de 0.22 g/L a los
820 s y una concentracin de 0.10 g/L a los 670 s.
Se pide: Estimar el nmero de etapas tericas y la altura equivalente de
una etapa terica, si la columna utilizada tiene una longitud de 16.5 cm.
Resp. N = 47 y HET P = 0.35 cm
8.15. Rendimiento y pureza. En una separacin cromatogrfica de albmina y hemoglobina se aplica una muestra que contiene un gramo de cada
una de estas protenas, la cual se eluye a un flujo de 5 cm3 /min, obtenindose
dos picos con las siguientes caractersticas:
Conc. mxima
Tiempo de elucin
Conc. en un tiempo t
Tiempo t
Albmina
0.25 g/L
680 s
0.11 g/L
600 s
Hemoglobina
0.22 g/L
820 s
0.10 g/L
670 s
Se pide: Calcular el rendimiento y la pureza de la albmina a los:

a) 500 s
b) 600 s
c) 1, 200 s
Resp. b) Para albmina RE = 0.1 y P R = 0.775
8.16. Estimacin de porosidad de partcula. La porosidad de un lecho medida con azul de dextrano es de 0.4. Cuando se corre albmina en una
columna de 16.5 cm de altura y 2.5 cm de dimetro con un flujo de 5 cm3 /min
su tiempo de retencin es de 680 s.
Se pide: Calcular la porosidad interna del empaque de la columna para esta
protena.
Resp. i = 0.5
8.17. Clculo de difusividad. El valor experimental para la difusin en el
poro en una matriz de agarosa es de i Di = 3.9 107 cm2 /s.
8.6. PROBLEMAS
417
Se pide: Comparar este valor con el que se obtiene mediante la correlacin

para este tipo de geles (Boyer y Hsu, 1992):

T
1/2
10
1/3
exp
i Di = 8.34 10
0.1307
M
+
1245
C
f
M 1/3
donde:
M : Peso molecular de la mioglobina =16, 890 Da.
T : Temperatura = 293 K.
: Viscosidad del solvente = 0.01 g/cms.
Cf : Concentracin de polmero en la partcula de adsorbente = 0.04 g/cm3 .
8.18. Anlisis de la operacin de una columna En una operacin cromatogrfica se producen dos picos. El pico A con un tiempo medio de retencin
de 15 min y con un ancho 2.60 min cuando la concentracin es la mitad de la
mxima. El pico B con un tiempo medio de retencin de 10 min y con un ancho
de 1.0 min cuando la concentracin es la mitad de la mxima.
Se pide:
a) Estimar el nmero de etapas tericas de esta columna para cada soluto.
b) Si se aumenta 3 veces la longitud de la columna manteniendo todas las
otras condiciones iguales, cual ser la separacin de los picos en minutos.
Resp. b) 15 min
8.19. Efecto de la longitud de la columna. Se desea predecir el comportamiento del pico de un soluto cuando se dobla la longitud de una columna,
utilizando la teora de platos.
Se pide:estimar el efecto sobre:
a) El tiempo de elucin.
b) La altura del pico.
c) El ancho del pico.
Resp. c) La anchura aumenta en 2

Problema 8.20. Rendimiento: proceso vs operacin. Se requiere purificar lotes de 20, 000 L de un caldo que contiene de MaBs a una concentracin
de 2.5 g/L. De acuerdo a la forma del pico de elucin del soluto, la columna
cromatogrfica disponible puede operarse de las dos formas siguientes:
Ciclos/lote
Volumen colectado (L/ciclo)
Conc. promedio (g/L)
Ciclos /ao
I
5
1350 1800
21.3
18
II
5
1350 1600
36.8
20
418
Se pide calcular para cada alternativa:

a) El rendimiento por lote.
b) Masa purificada anual.
Resp. b) mII = 920 kg.
8.7. BIBLIOGRAFA
8.7.
419
Bibliografa
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Captulo 9
Precipitacin
9.1.
Introduccin
Precipitacin es el proceso en el que un soluto soluble se separa en forma de

slido insoluble de una solucin mediante la accin de un agente precipitante.
Algunos productos biotecnolgicos presentan solubilidades que varan con la
temperatura, el pH, la fuerza inica y con la constante dielctrica del medio.
Esta propiedad puede ser utilizada para concentrar y purificar estos productos
mediante la operacin de precipitacin. A nivel industrial puede ser utilizada
para la obtencin de productos proteicos y nucleicos.
Tericamente la precipitacin debe producir un soluto concentrado y relativamente puro, por lo que es una operacin que se usa con frecuencia al inicio de
un proceso de bioseparacin. Los agentes precipitantes seleccionados no deben
producir desnaturalizacin del soluto y deben proveer una mayor estabilidad del
soluto en el precipitado que en la solucin.
La precipitacin de protenas y la subsecuente recuperacin del precipitado,
son de las operaciones ms importantes para la recuperacin y purificacin de
protenas tanto a nivel laboratorio como a escala industrial.
Las ventajas de usar la precipitacin para la concentracin y purificacin de
solutos son, entre otras, las siguientes:
1. Es relativamente barata.
2. Es una operacin que se adapta fcilmente a gran escala.
3. Puede realizarse en forma continua.
4. El equipo que se utiliza es sencillo.
5. Se dispone de diversos agentes precipitantes y en muchos casos stos son
baratos.
Este captulo se enfoca a la precipitacin de protenas debido a su gran inters
biotecnolgico. En la seccin 9.2 se revisan los fundamentos de la precipitacin
422
CAPTULO 9. PRECIPITACIN
incluyendo algunos mtodos para la precipitacin de protenas. En la Seccin

9.3 se hace mencin de los equipos utilizados en esta operacin y en la Seccin
9.4 se presentan algunos aspectos del diseo de dichos equipos.
9.2.
Fundamentos
La precipitacin de protenas puede realizarse empleando diferentes principios (Tabla 9.1).

Tabla 9.1: Principios de la precipitacin de protenas.
Principio
Agente Precipitante
Disminucin de la solubilidad
Sales (Sulfato de Amonio)

pH (Precipitacin isoelctrica)
Solventes (etanol)
Polmeros no inicos
Desnaturalizacin selectiva.
Temperatura
pH
Solventes
Afinidad
Ligandos
La precipitacin por disminucin de la solubilidad de la protena de inters

se efecta por medio de un agente precipitante. Este puede ser una sal neutra
como el sulfato de amonio; un agente que altere el pH de la solucin; un solvente
orgnico como etanol, acetona o ter; o algn polmero como el polietilenglicol.
En la desnaturalizacin selectiva se producen cambios en la conformacin de
las protenas contaminantes con el propsito de aislar en la solucin la protena
de inters, utilizando como agentes precipitantes temperatura, pH y algunos
solventes orgnicos.
Un tipo reciente de precipitacin lo conforman los mtodos que se basan en la
capacidad que tienen las protenas de formar complejos mediante la interaccin
de los sitios activos de stas con ligandos especficos.
En esta seccin se revisan los tres mtodos bsicos de precipitacin:
Precipitacin por disminucin de la solubilidad.
Precipitacin por desnaturalizacin selectiva.
Precipitacin por afinidad.
9.2. FUNDAMENTOS
9.2.1.
423
Precipitacin por Disminucin de la Solubilidad
El hecho de que las protenas sean molculas anfotricas se debe a que sus
superficies (Fig. 9.1) presentan regiones hidrofbicas, y regiones hidroflicas cargadas ya sea positiva o negativamente.
Figura 9.1: Esquema de la distribucin de carga y de zonas hidrofbicas en una

molcula de protena tpica.
Debido a su naturaleza anfotrica cuando una protena se encuentra en solucin acuosa produce complejas interacciones con la solucin que la rodea. Particularmente, cuando se agrega un agente precipitante a la solucin, las protenas
que presentan mayor hidrofobocidad (por contar con mayor cantidad de aminocidos hidrofbicos en su superficie) precipitan ms fcilmente que las de menor
hidrofobicidad. En el primer caso las protenas tienen una baja solubilidad y
en el segundo caso una alta solubilidad. De lo anterior se desprende que la
estructura de la protena determina su solubilidad.
La protena permanece en solucin cuando termodinmicamente es ms favorable estar rodeada por el solvente que estar en un agregado con otra protena
formando una fase slida. La protena puede insolubilizarse ya sea cambiando
las caractersticas de su superficie, o cambiando el solvente que la rodea. Como el cambiar las caractersticas de la superficie de la molcula puede implicar
cambiar la protena misma, generalmente se opta hacer cambios en el solvente
que alteren la solubilidad de la protena.
Los mtodos utilizados para la precipitacin de protenas que se revisan
en esta seccin y que estn basados en la disminucin de la solubilidad por alteracin del solvente son: a) precipitacin con sales, b) precipitacin isoelctrica,
c) precipitacin con solventes y d) precipitacin con polmeros no inicos.
Precipitacin con sales
Una de las tcnicas ms ampliamente utilizadas para la purificacin de enzimas es la llamada precipitacin por insolubilizacin por salado o salting out
(Cheng et al., 2006), que se realiza agregando altas concentraciones de sal a la
solucin en la que se encuentra la protena para producir su precipitacin.
424
La Figura 9.2 muestra una curva caracterstica de la solubilidad de una

protena como una funcin de la concentracin de la sal en el medio. En esta
figura se pueden apreciar dos regiones, la primera del lado izquierdo de la figura,
donde la solubilidad de la protena se incrementa con la concentracin de la
sal, llamada regin de solubilizacin por salado o salting-in, y la otra donde
la solubilidad de la protena disminuye a medida que la concentracin de sal
aumenta llamada regin de insolubilizacin por salado o salting out. El punto
mximo de esta curva es caracterstico de cada tipo de protena.
Figura 9.2: Efecto de la concentracin de sal en la solubilidad de protenas:

regiones de solubilizacin e insolubilizacin por salado.
Mecanismo La descripcin simplificada del mecanismo de insolubilizacin

por salado est basada en el hecho de que la adicin de las sales elimina el agua
de la protena hidratada, dejando las regiones hidrofbicas en libertad de combinarse intermolecularmente (Glatz, 1990). Aquellas protenas que presentan
mayor nmero de regiones hidrofbicas sobre su superficie, forman agregados y
precipitan ms rpidamente que aquellas que presenten pocas regiones hidrofbicas. Debido a esta propiedad hay protenas que pueden permanecer en solucin
a altas concentraciones de sal.
Una descripcin ms detallada de la precipitacin con sales es la siguiente
(Scopes, 1994): cuando las molculas de protena estn en solucin generalmente
presentan una carga neta negativa sobre su superficie y atraen los tomos de
hidrgeno del agua formando una primera capa ordenada de molculas de agua
como el que se muestra en la Figura 9.3, llamada capa de Stern. A su vez esta
capa est rodeada por una capa conocida como de Guoy-Chapman donde ms
del 70 % de las molculas de agua no presentan una orientacin particular. Este
ordenamiento evita la formacin de agregados proteicos. Cuando se agrega sal
al medio se reduce el espesor de la doble capa y se disminuye la solubilidad de
la protena.
La precipitacin de protenas utilizando sales se puede representar como una
9.2. FUNDAMENTOS
425
Figura 9.3: Ordenamiento de las molculas de agua frente a las regiones

hidrofbicas de la molcula de protena.
serie de tres pasos. En el primer paso se considera la disolucin de la protena
en agua y se representa por la ecuacin siguiente:
P + nH2 O (P nH2 O)
(9.1)
donde nH2 O simboliza el agua ordenada alrededor de los residuos hidrofbicos de la protena P . Debido a este ordenamiento la entropa del proceso S1o
es grande y negativa. Es conocido que este proceso es espontneo y entonces
la energa libre Go1 es negativa. Consecuentemente la entalpa H1o es muy
negativa (H o = Go + T S o ).
En el segundo paso que es hipottico, se considera a dos molculas de protena en solucin que podran unirse al interactuar a travs de sus residuos
hidrofbicos, liberando agua de acuerdo a la reaccin siguiente:

(P n1 H2 O) + P n2 H2 O (P P ) + (n1 + n2 )H2 O
(9.2)
donde (P P ) representa el agregado de protena que puede ser formado. En

este segundo paso S2o >> 0 y H2o H1o . De tal manera que Go2 puede
ser pequeo y su signo depende de la magnitudes de S2o y H2o . La Go2 a
bajas concentraciones de sal ser positiva para una protena soluble en agua.
Puesto que la protena es soluble no ocurre la agregacin dada por la ecuacin
(9.2).
En el tercer paso se agrega una sal a la solucin, las molculas de agua
liberadas de acuerdo al proceso hipottico de la ecuacin (9.2) son atrapadas
por la sal, se producen agregados de protena y stos precipitan. Esto es:

(AB)sal + (n1 +n2 )H2 O A+ n1 H2 O + B n2 H2 O
(9.3)
para esta reaccin H3o es positiva. El proceso completo puede describirse de

la siguiente manera:
426

(P n1 H2 O) + P n2 H2 O + (AB)sal
(9.4)

P P + A+ n1 H2 O + B n2 H2 O
La Figura 9.4 muestra un esquema del efecto de una sal en la precipitacin de protenas (insolubilizacin por salado) basado en el proceso descrito
anteriormente.
Figura 9.4: Esquema de la precipitacin de protenas por insolubilizacin por

salado.
Ecuacin de la precipitacin con sales El mecanismo descrito anteriormente proporciona una explicacin para la precipitacin de protenas por insolubilizacin por salado, sin embargo la teora de este fenmeno an est en
desarrollo. Debido a lo anterior los modelos de precipitacin ms utilizados son
de carcter emprico, como el de Cohn que se expresa como:
log
S
= k[I]
S0
(9.5)
donde:
S: Solubilidad de la protena a una fuerza inica dada.
S0 : Solubilidad a fuerza inica cero.
I: Fuerza inica.
: Constante caracterstica.
k: Pendiente de la curva de insolubilizacin por salado.
La fuerza inica de una solucin est dada por:
I=
11
Ci Zi2
2
(9.6)
9.2. FUNDAMENTOS
427
donde:
Ci : Concentracin del in.
Zi : Carga del in.
La ecuacin de Cohn se puede escribir en forma simplificada como:
log S = A m[conc. de sal]
(9.7)
la ecuacin (9.7) es la ecuacin de una recta con pendiente m y ordenada al

origen A. En esta ecuacin:
S: Solubilidad de la protena a un valor dado de concentracin salina.
S0 : Solubilidad a fuerza inica cero.
A: Constante que depende fuertemente del pH y la temperatura. Esta constante
usualmente toma un valor mnimo en el punto isoelctrico, es caracterstica
de cada protena e independiente del tipo de sal.
m: Pendiente de la curva de insolubilizacin por salado. Esta es independiente
del pH y de la temperatura, pero vara con el tipo de sal y de protena.
Las sales que contienen aniones polivalentes tales como sulfatos y fosfatos
tienen valores de m mayores que las sales univalentes. Los cationes polivalentes como el calcio o el magnesio disminuyen los valores de m.
Los datos experimentales que se presentan en la Figura 9.5a permiten apreciar el grado de ajuste del modelo dado por la ecuacin (9.7) para dos casos: el
de una enzima pura y el de una mezcla de enzimas. Se observa para este ltimo
caso una ligera desviacin respecto al comportamiento terico. En la Figura 9.5b
se muestra otro ejemplo experimental de precipitacin de protena que obedece
la ecuacin (9.7) (la escala de las ordenadas es logartmica). En esta figura se
observa que el comportamiento lineal depende de la concentracin inicial de la
enzima.
Naturaleza de la sal La naturaleza de la sal utilizada en el proceso descrito
por la ecuacin (9.3) es un aspecto muy importante a considerar. Las sales
que producen enlaces e interactan directamente con la protena tienen efectos
desestabilizadores. Las sales que producen mejores resultados, esto es, una mayor
precipitacin de la protena, son aquellas que producen deshidratacin de las
regiones hidrofbicas y fomentan la hidratacin de las regiones polares de la
protena, sin interaccionar directamente con sta. Existen reglas heursticas para
seleccionar la sal ms adecuada para un proceso de precipitacin, algunas de ellas
son las siguientes:
1. Los aniones son ms efectivos en el siguiente orden (Series de Hofmeister):
citrato3 > tartato2 > SO2

4 > F > IO3 > H2 PO4 >
CH3 COO -> Cl > ClO

3 > Br > NO3 > ClO4 > I
428
Figura 9.5: a) Solubilidad de aldolasa de msculo de conejo a pH 7.0 en solucin

de sulfato de amonio: (o) solubilidad de la enzima pura; (+) solubilidad en una
mezcla de enzimas de msculo de conejo: aldolasa, piruvato kinasa, gliceraldehido fosfatasa deshidrogenasa y lactato deshidogenasa en proporciones 3:3:3:1.
c
Fuente: Scopes, 1994. Reproducida con el permiso de Springer-Verlag. Copyright 1994.
Todos
los derechos reservados. b) Efecto de la concentracin de fumarasa sobre la insolubilizacin por salado con sulfato de amonio a 6 C. Concentracin inicial de
enzima. () 5.4, (o) 15.2 y (+) 25.2. Adaptada de Bell et al., 1983. Reproducida
c
con el p erm iso de Springer-Verlag. Copyright 1983.
2. Los cationes son efectivos en el siguiente orden:

+
+
NH+
4 > K > Na
3. Seleccionar una sal que sea barata debido a las altas concentraciones que
requiere el mtodo.
4. Seleccionar una sal que produzca un precipitado cuya densidad sea diferente a la de la solucin para facilitar su separacin.
5. Aadir la sal en forma slida y no como solucin, para minimizar la dilucin.
Ejemplo 9.1. Determinacin de la solubilidad de piruvato quinasa

de msculo de conejo.
En un experimento de precipitacin de la enzima piruvato quinasa con sulfato
de amonio a pH 7.0, se obtuvieron los siguientes resultados (Scopes, 1994):
9.2. FUNDAMENTOS
429
S
(mg/mL)
0.0064
0.0140
0.0700
0.0300
0.3700
0.8000
1.1000
Concentracin
sulfato de amonio (M)
2.85
2.80
2.60
2.50
2.45
2.38
2.34
Se pide:
a) Determinar los parmetros de la ecuacin de solubilidad A y m.
b) Calcular la solubilidad de la enzima predicha por el modelo a una concentracin 2.34 M de sulfato de amonio.
Solucin:
a) Parmetros de solubilidad. De acuerdo a la ecuacin (9.7) la solubilidad
de la enzima est dada por:
log S = A m[conc. sal]
donde A es la ordenada al origen y m es la pendiente de la curva.
Para determinar los valores de los parmetros de la ecuacin anterior, los
valores experimentales se ajustan por mnimos cuadrados y se obtiene que A =
10.2 y m = 4.34. La Figura 9.6 muestra la grfica correspondiente.
Figura 9.6: Variacin de la solubilidad de la enzima piruvato quinasa en funcin

de la concentracin de sulfato de amonio. Fuente: Scopes, 1994. Reproducida con el
c
perm iso de Springer-Verlag. Copyright 1994.
La ecuacin de solubilidad para la enzima piruvato quinasa est dada por:

log S = 10.2 4.34 [conc. sal]
430
b) Solubilidad. Sustituyendo el valor de la concentracin salina en la expresin anterior, se tiene que la solubilidad de la enzima a una concentracin 2.34
M de sulfato de amonio es:
S = 1.2 mg/mL
Precipitacin isoelctrica
Otra tcnica muy utilizada para precipitar protenas se basa en la disminucin de su solubilidad en el punto isoelctrico.
Mecanismo Las protenas por su naturaleza anfotrica presentan una carga
neta negativa a pH altos y una carga neta positiva a pH bajos. Existe un pH
llamado pH isoelctrico al cual la carga neta de la protena es cero. A este pH
la molcula es incapaz de desplazarse en un campo elctrico.
Figura 9.7: Representacin esquemtica del efecto de las fuerzas electrosttica

sobre la protena: a) Repulsin a pH bajos, b) Baja interaccin a pH isoelctrico
y c) Repulsin a pH altos.
En la Figura 9.7 se muestran los tipos de interaccin que se presentan entre
molculas cargadas a diferentes pHs.
- Cuando la protena se encuentra a un pH diferente de su pH isoelctrico,
las molculas proteicas poseen una carga elctrica neta del mismo signo. Debido
a esto existe una repulsin electrosttica entre las molculas ocasionando que
su solubilidad se incremente.
- En el punto isoelctrico el efecto de las fuerzas electrostticas entre las protenas es casi nulo. En estas condiciones la solubilidad de la protena es mnima,
y en consecuencia las molculas de protena tienden a unirse y a precipitarse. A
este tipo de precipitacin se le llama precipitacin isoelctrica.
La Figura 9.8 muestra una curva tpica de la variacin de la cantidad de
protena no precipitada con respecto al pH. En esta figura puede observarse que
existe un pH al cual la fraccin de protena no precipitada es mnima, ste es el
pH isoelctrico.
Cada protena tiene un pH isoelctrico caracterstico por lo que la precipitacin isoelctrica puede utilizarse como una operacin de purificacin de protenas. Sin embargo, cabe hacer notar que hay algunas protenas como las globulinas, que presentan una solubilidad considerable an cuando se encuentren
9.2. FUNDAMENTOS
431
Figura 9.8: Efecto del pH sobre la concentracin de protena de soya que permanece en solucin, expresada como una fraccin de la concentracin inicial del
extracto acuoso. Fuente: Bell et al., 1983. Reproducida con el p erm iso de Springer-Verlag.
c
Copyright 1983.
en su pH isoelctrico. En la Tabla 9.2 se muestran pHs isoelctricos de algunas

protenas.
Seleccin del agente precipitante. La precipitacin isoelctrica comnmente se realiza a pHs cidos, debido a que los cidos son baratos y varios de
ellos como el fosfrico, clorhdrico y sulfrico son aceptables en productos alimenticios (Salcedo-Chvez et al., 2002). La principal desventaja de usar cidos
es su potencial de producir daos irreversibles a la protena.
Precipitacin con solventes
La precipitacin de las protenas de una solucin tambin puede realizarse
mediante la adicin de un solvente orgnico ligeramente polar.
Mecanismo El agua se caracteriza por su alta constante dielctrica (Tabla 9.3),
esto significa que los iones en solucin acuosa presentan interacciones ms dbiles que en otros medios.
Cuando se agrega un solvente orgnico como etanol o acetona, a una solucin
acuosa de protenas (a un pH y temperatura dados), se producen agregados de
molculas proteicas que tienden a precipitar. Este efecto se debe principalmente
a que el solvente presenta una constante dielctrica menor que la del agua, lo
cual produce un incremento en las fuerzas de atraccin entre cargas opuestas y
una disminucin en el grado de ionizacin de los radicales de la protena, y en
consecuencia una disminucin de la solubilidad de sta.
432
Tabla 9.2: pH isoelctrico de algunas protenas.
Protena
Pepsina
Ovoalbmina
Seroalbmina
Ureasa
-Lactoglobulina
1 - Globulina
Hemoglobina
Mioglobina
Ribonucleasa
Lisozima
pH
1.0
4.6
4.0
5.0
5.2
6.6
6.8
7.0
9.6
11.0
Tabla 9.3: Constante dielctrica de algunos lquidos a 20 C.

Lquido
Agua
Metanol
Etanol
Acetona
Benceno
Hexano
D
80.0
33.0
24.0
21.4
2.3
1.9
Otra forma de explicar la precipitacin por solventes (Fig. 9.9) consiste en

considerar un desplazamiento global del agua por el solvente, conjuntamente
con una inmovilizacin parcial de las molculas de agua por la hidratacin del
solvente. El solvente puede desplazar las molculas ordenadas de agua de las
regiones hidrofbicas estimulando la precipitacin de la protena.
Debido a que la influencia de la constante dielctrica es muy sensible a la
temperatura, este tipo de precipitacin debe trabajarse a temperaturas bajas.
Por ejemplo, la precipitacin de protenas de plasma humano utilizando etanol,
se lleva a cabo a temperaturas tan bajas como 10 C. Trabajar con temperaturas por arriba de 10 C provoca desnaturalizacin de la protena.
Ecuacin de la precipitacin con solventes La expresin que relaciona el

cambio en la solubilidad de una protena en su punto isoelctrico con un cambio
en la constante dielctrica del medio es una expresin emprica (Bell et al., 1983)
que est dada por:
9.2. FUNDAMENTOS
433
Figura 9.9: Representacin esquemtica de las interacciones electrostticas de

agregacin entre las protenas en presencia de un solvente orgnico. Fuente:
c
Scopes, 1994. Reproducida con el permiso de Springer-Verlag. Copyright 1994.
Todos los
log S = log So +
K
Ds2
(9.8)
donde:
Ds : Constante dielctrica de la mezcla solvente-agua, misma que vara dependiendo de la cantidad de solvente agregada.
K : Constante que toma en cuenta la constante dielctrica original del medio
acuoso.
So : Solubilidad extrapolada.
Seleccin del solvente La mayor desventaja de la precipitacin con solventes
es la desnaturalizacin que puede sufrir la protena por accin del solvente, de
tal manera que es importante seleccionar adecuadamente ste. En el caso del uso
de monoalcoholes como solventes, la desnaturalizacin se incrementa conforme
la cadena alquilo se incrementa.
Tambin debe tenerse muy en cuenta la flamabilidad del solvente principalmente cuando se trabaja a gran escala, ya que algunos de ellos como los alcoholes
son altamente inflamables y el uso seguro de los mismos ocasiona incrementos
en los costos.
Algunos criterios que es necesario considerar en la seleccin del solvente es
que ste debe ser: a) completamente miscible en agua, b) no reactivo con las
protenas, c) un buen agente precipitante y d) seguro.
Precipitacin con polmeros no inicos
La precipitacin de protenas tambin puede realizarse utilizando polmeros neutros como el polietilenglicol (PEG) en lugar de sales o solventes. Dichos
polmeros de elevado peso molecular son solubles en agua y sus soluciones presentan viscosidades moderadas (Guo et al., 1996).
434
Mecanismo El mecanismo por el cual ocurre la precipitacin cuando se utilizan estos polmeros no est claramente establecido, sin embargo existen dos
modelos que permiten una buena comprensin de este fenmeno. Los modelos
desarrollados por Ogston y Laurent (Clark, 1989) conducen a una ecuacin de
solubilidad de la misma forma que la ecuacin (9.7), y sugieren que los polmeros
excluyen a las protenas de parte de la solucin y reducen la cantidad efectiva
de agua disponible para su solvatacin.
El modelo de Ogston se basa en la teora termodinmica y concluye que
los sistemas (protena en solucin acuosa-polmero) pueden ser explicados en
trminos de los coeficientes de interaccin protena-polmero, y protena-protena
de las especies presentes.
El modelo propuesto por Laurent se basa en un mecanismo de exclusin
geomtrica de regiones hidratadas de la protena por el polmero. El modelo de
Laurent (Juckes, 1971) considera a la protena como una esfera y al polmero
como un cilindro, supone que la protena es incapaz de distribuirse dentro del
polmero y, por lo tanto, que la solubilidad (S) de la protena es proporcional
slo al volumen disponible (Vd ) dado por:
donde:

Vd = exp l(rs + rp )2
(9.9)
rs : Radio de la molcula de protena. [L].

rp : Radio del cilindro del polmero. [L].
l: Longitud total de la molcula de polmero por unidad de volumen. [L].
Considerando que el volumen total (Vt ) es igual al volumen disponible (Vd )
ms el volumen excluido (Ve ), el volumen excluido por peso del polmero (W )
est dado por:
Ve
1
= (1 10KC )
W
C
donde: C es la concentracin del polmero y
v
K=
2.303
rs + rp
rp
(9.10)
3
donde v es el volumen parcial especfico del polmero.

La fraccin de volumen excluido Ve y la fraccin de volumen disponible Vd
estn dadas por las siguientes expresiones:
Ve
Vd
= 1 10KC
= 10KC
como la solubilidad de la protena es proporcional a la fraccin de volumen

disponible:
9.2. FUNDAMENTOS
435
S = k 10KC
donde k es una constante de proporcionalidad. La ecuacin anterior puede ser

escrita en forma ms conveniente como:
o bien como:
log S = log k KC
log S = X KC
(9.11)
i = oi + RT (ln mi + cii mi + cij mj )
(9.12)
que es la ecuacin de una recta con pendiente K y ordenada en el origen X.

El uso de la ecuacin (9.11) proporciona un resultado similar (Juckes, 1971)
al que se obtiene utilizando el volumen disponible expresado en la ecuacin (9.9).
La ecuacin (9.11) es equivalente a la ecuacin correspondiente a la precipitacin
por insolubilizacin por salado.
El modelo de Ogston que se deriva de una simplificacin termodinmica, establece que la protena permanece en solucin siempre que su potencial qumico
en solucin sea menor que su potencial en la fase precipitada. Considera que el
potencial qumico de la protena i en presencia de un polmero, est dado por:
donde:
i: Protena.
j: Polmero.
oi : Potencial qumico de la protena en el estado estndar.
R: Constante de los gases ideales.
T : Temperatura absoluta.
mi : Molalidad de la protena.
mj : Molalidad del polmero.
cii : Coeficiente de interaccin protena-protena.
cij : Coeficiente de interaccin protena-polmero.
Cuando la molalidad del polmero mj se incrementa, el potencial qumico se
eleva y el sistema reacciona insolubilizando protena (inicindose la precipitacin). Despus de sto el potencial permanece constante.
En un sistema polietilenglicol-protena en solucin acuosa, en el que solamente las interacciones polietilenglicol-protena y protena -protena son significativas, la ecuacin (9.12) puede ser escrita como (Foster et al., 1973):
(i oi )
= ln S + f S + aC
RT
donde:
S: Solubilidad de la protena.
C: Concentracin de polietilenglicol.
f : Coeficiente de interaccin protena-protena.
a: Coeficiente de interaccin protena-polietilenglicol.
(9.13)
436
La ecuacin (9.13) puede ser rearreglada en forma ms conveniente como:

ln S + f S = X aC
donde:
X=
(9.14)
i o
RT
En este sistema puede suponerse que el trmino f S es mucho ms pequeo

que ln S entonces la ecuacin (9.14) puede ser escrita como:
ln S = X aC
(9.15)
que resulta ser anloga a la ecuacin de insolubilizacin por salado. La ecuacin

(9.15) puede ser utilizada para calcular la solubilidad de la protena a diferentes
concentraciones del polmero.
La Figura 9.10 muestra el comportamiento de la solubilidad de la alcohol
deshidrogenasa en funcin de la concentracin de PEG, a dos niveles de concentracin de la enzima. Se puede apreciar que la concentracin de PEG requerido
para reducir la solubilidad depende de la concentracin de enzima. El grado de
ajuste del modelo dado por la ecuacin (9.15) depende de la concentracin de
la enzima (Fig. 9.10a), de tal manera que cuando la concentracin de la enzima
es alta es necesario considerar la ecuacin 9.14 con el el trmino de interaccin
protena-protena f S para un mejor ajuste (Fig. 9.10b).
Figura 9.10: Relacin entre la solubilidad S de la alcohol deshidrogenasa y la

concentracin C de PEG a dos concentraciones de la enzima: () 8 mg/mL;
(o) 75 mg/mL. a) log S vs C y b) (log S + f S) vs C. Fuente: Foster, et al.,
c
1973. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. Copyright 1973.
Todos los derechos
reservados.
9.2. FUNDAMENTOS
437
Seleccin del polmero Es importante seleccionar adecuadamente el polmero

que se utilice como agente precipitante. Varios tipos de polmeros pueden ser
efectivos en la precipitacin de las protenas, el inconveniente es que algunos
pueden generar una alta viscosidad que dificulta su manejo.
El polietilenglicol es un polmero disponible en varios grados de polimerizacin y presenta una viscosidad moderada. El polietilenglicol de peso molecular
4,000 o mayor es ms efectivo en la precipitacin de protenas que el de bajo
peso molecular. Se ha observado tambin (Bell et al., 1983) que se requieren
bajas concentraciones de polietilenglicol para precipitar protenas de alto peso
molecular, mientras que para precipitar protenas de bajo peso molecular las
concentraciones deben ser mayores.
Una ventaja adicional de la precipitacin con polmeros no inicos es que
stos estabilizan la protena y permiten realizar la precipitacin a temperatura
ambiente. Adems, a diferencia de la precipitacin por salado en la cual debe
eliminarse la sal antes de seguir con cualquier operacin de fraccionamiento por
intercambio inico, los polmeros no inicos generalmente pueden ser eluidos
durante el paso de la protena por un intercambiador inico.
Precipitacin con polmeros inicos
Recientemente, se han utilizado polielectrolitos aninicos en la precipitacin
de anticuerpos monoclonales, sin afectar la actividad biolgica de stos. Los
mejores resultados implican un compromiso entre el pH de trabajo y el peso
molecular del polmero (McDonald et al., 2009).
9.2.2.
Precipitacin de Protenas por Desnaturalizacin

Selectiva
Los mtodos de precipitacin por disminucin de la solubilidad son efectuados a condiciones moderadas de tal manera que la protena de inters no se
desnaturalice. Si la protena que se desea purificar presenta estabilidad en condiciones extremas de temperatura, pH, o en solventes orgnicos, puede utilizarse
esta propiedad en las primeras etapas del proceso de purificacin sujetando a la
solucin de protenas a estas condiciones extremas, de tal manera que se eliminen por desnaturalizacin las protenas contaminantes y se obtenga una buena
recuperacin de la protena deseada.
El objetivo de la desnaturalizacin selectiva es crear las condiciones en las
cuales la protena de inters no se desnaturaliza o su desnaturalizacin es mnima.
Desnaturalizacin por temperatura
En general las protenas son muy sensibles a la temperatura. Sin embargo,
hay protenas que se mantienen estables a temperaturas altas. Cuando esto
sucede, puede usarse la temperatura para desnaturalizar y precipitar protenas
contaminantes y aislar la protena de inters.
438
El proceso de desnaturalizacin de la protena por efecto de la temperatura

puede ser descrito como un proceso de primer orden de acuerdo a la siguiente
expresin:
d[P ]
= k[P ]
dt
(9.16)
donde:
[P ]: Concentracin de protena disuelta. [M/L3 ].
t: Tiempo. [t].
k: Velocidad especfica de desnaturalizacin. [t1 ].
La dependencia del proceso de desnaturalizacin con la temperatura est
dada por:

E
k = ko exp
(9.17)
RT
de tal manera que la influencia de la concentracin de protena y la temperatura

sobre el cambio en la concentracin est dado por:

d[P ]
E
= ko exp
[P ]
(9.18)
dt
RT
donde:
ko : Constante caracterstica. [t1 ].

E: Energa de activacin de la desnaturalizacin. [kJ/mol].
R: Constante de los gases ideales. [kJ/mol K].
Las protenas tienen energas de activacin relativamente altas de tal manera
que presentan una variacin muy significativa de la velocidad de desnaturalizacin con la temperatura. El mecanismo de desnaturalizacin puede involucrar
varios pasos, lo importante es determinar cual es la energa de activacin del
paso ms lento o controlante. Por regla general el primer paso es el ms lento e
involucra el rompimiento de los enlaces que le dan la conformacin a la protena.
La Figura 9.11a muestra un diagrama terico del porcentaje de protena que
permanece estable despus de 10 minutos de incubacin, cuando la energa de
activacin es de E = 400 kJ mol1 .
La Figura 9.11b muestra un esquema terico de las posibles curvas de desnaturalizacin para diferentes enzimas. Cuando la enzima de inters es la P5 , que
es estable a temperaturas de hasta 58 C, si la solucin se calienta a 57 C, se
desnaturalizan completamente las enzimas P1 y P2 y en grado substancial la P3
y la P4 . Esto significa que es posible seleccionar una temperatura que produzca
9.2. FUNDAMENTOS
439
Figura 9.11: a) Diagrama terico de protena que permanece estable despus de

10 min de incubacin, con E = 400 kJ mol1 . Fuente: Scopes, 1994. Reproducida
c
Todos los derechos reservados. b) Esquema
terico de las posibles curvas de desnaturalizacin por temperatura de diferentes
protenas. Fuente: Scopes, 1994. Reproducida con el p erm iso de Springer-Verlag. Copyright
c
1994.
por un lado la desnaturalizacin completa de una enzima y por otro permita

que otra permanezca estable.
La precipitacin con temperatura puede ser riesgosa debido a que los daos
que se ocasionen a la enzima de inters son irreversibles. La solucin se calienta
hasta una temperatura dada, se mantiene por un periodo de tiempo a dicha
temperatura y enseguida se enfra rpidamente. Por lo tanto, se requiere contar
con sistemas de enfriamiento adecuados, sobre todo en tanques agitados, para
lograr bajar adecuadamente la temperatura y evitar as que sta pueda daar
a la protena de inters. Es conveniente realizar el calentamiento en presencia
de sulfato de amonio en la solucin, debido a que ste estabiliza las protenas
e inhibe la actividad de las proteasas, que como es sabido se incrementa con la
temperatura.
Ejemplo 9.2. Cintica de desnaturalizacin.
La desnaturalizacin de una protena tiene una energa de activacin de
400, 000 J/mol. Cuando esta protena se mantiene a 50 C por un lapso de 10
min se desnaturaliza en un 50 %.
Se pide:
a) Calcular la constante de la velocidad especfica de desnaturalizacin.
b) Calcular la temperatura a la cual la protena slo se desnaturaliza el 10 %
en 10 min.
Solucin:
a) Constante de velocidad. La forma integrada de la ecuacin (9.16) es:
P
= exp(kt)
Po
440
cuando la desnaturalizacin es del 50 % la constante k est dada por:

k=
ln(0.5)
= 0.0693 min1 = 1.155 103 s1
10 min
b) Temperatura de desnaturalizacin en 10 %. De acuerdo a la forma integrada de la ecuacin (9.16),

(k)323 o K
ln(0.5)
=
= 6.58
(k)T10 %
ln(0.9)
combinando el resultado anterior con la ecuacin (9.17) se obtiene:

E
323 T
= exp
R
323 T
J

400, 000
323 T
mol
6.58 = exp
J
323 T
8.31
mol K
(k)323 o K
(k)T10 %
la temperatura es:
T10 % = 46 C
Desnaturalizacin por pH
Debido a que ciertas protenas de inters son estables a pHs extremos, se ha
utilizado esta propiedad para purificarlas mediante la precipitacin por desnaturalizacin selectiva de sus protenas contaminantes.
La desnaturalizacin por pH ocurre tanto por la formacin en la molcula
de protena de regiones con cargas iguales que tienden a repelerse, como por el
rompimiento de las fuerzas de atraccin que le dan su conformacin (Fig. 9.12).
La velocidad de desnaturalizacin a pHs extremos ya sean cidos o bsicos
depende del tiempo que tarde la protena en abrirse y perder su conformacin.
Este proceso es esencialmente similar al que ocurre en la desnaturalizacin por
temperatura.
Desnaturalizacin por solventes orgnicos
La estabilidad que presentan algunas protenas en una solucin con solventes
orgnicos, es una propiedad que ha sido utilizada en procesos de purificacin
mediante la precipitacin de protenas contaminantes con estos solventes.
Cuando se utilizan solventes orgnicos como etanol, acetona o cloroformo
para desnaturalizar protenas, la temperatura de la solucin se mantiene entre
20 y 30 C con el fin de acelerar el proceso. Despus de un tiempo de incubacin
9.2. FUNDAMENTOS
441
Figura 9.12: Esquema de la desnaturalizacin de una protena por efecto del

c
pH. Fuente: Scopes, 1994. Reproducida con el p erm iso de Springer-Verlag. Copyright 1994.
a esta temperatura la solucin se enfra. El aumento de temperatura permite que

la cantidad de solvente utilizada sea menor que la empleada en la precipitacin
convencional de protenas.
El pH y la temperatura de la solucin deben definirse y manejarse cuidadosamente (pues tambin actan sobre la protena de inters) con el fin de
maximizar el rendimiento y la pureza de la protena de inters, y de lograr la
mxima precipitacin de las protenas contaminantes.
Una protena estable en solventes orgnicos es la alcohol deshidrogenasa de
levadura. Esta enzima puede ser purificada mediante un tratamiento con 33 %
vol/vol de etanol a 25 C. Este tratamiento permite desnaturalizar las protenas
contaminantes y obtener la deshidrogenasa. En la Figura 9.13 se muestra la
desnaturalizacin de la enzima gliceraldehido fosfato deshidrogenasa con varios
alcoholes a una temperatura de 30 C y un tiempo de incubacin de 30 minutos
(Scopes, 1994). Puede observarse que la enzima es muy estable en metanol.
9.2.3.
Precipitacin por Afinidad
La precipitacin de protenas por afinidad es un mtodo de precipitacin

selectivo que se basa en la capacidad que tienen las protenas para unirse con
ligandos por medio de sus sitios activos (Hilbrig y Freitag, 2003; Mondal et al.,
2006). En el caso de la afinidad bioespecfica el ligando puede ser un sustrato, un
inhibidor o un anticuerpo. En el caso de pseudoafinidad los ligandos utilizados
son colorantes o metales.
La simple adicin de ligandos a una solucin proteica generalmente no es
suficiente para que ocurra la precipitacin. Es necesario que el ligando propicie
442
Figura 9.13: Desnaturalizacin de gliceraldehido fosfato deshidrogenasa: (o)

metanol; () etanol; (+) 2-propanol; () 1-propanol; () 1-butanol; () 1pentanol; . Fuente: Scopes, 1994. Reproducida con el permiso de Springer-Verlag. Copyright
c
1994.
un estado de agregacin de los complejos ligando-protena.

La precipitacin por afinidad bioespecfica ocurre slo cuando el ligando se
une con las protenas o enzimas y forma agregados. El tipo de agregados que
se forman depende del tipo de ligando y de la protena. En la Figura 9.14 se
presentan dos sistemas de precipitacin por afinidad.
Figura 9.14: Representacin esquemtica de la formacin de agregados por inmunoafinidad y por afinidad. a) Agregado en forma de cadena constituido por
un anticuerpo policlonal y una protena monomrica y b) Agregado en forma
de red producido por un anticuerpo policlonal y una protena tetramrica o por
ligandos bis-NAD y una protena tetramrica. Fuente: Scopes, 1994. Reproducida
c
La Figura 9.14a presenta un agregado producido por la unin de un anticuerpo policlonal y una protena monomrica, llamado inmunoprecipitado. Este tipo
de agregados se producen en forma natural en el caso de los sistemas antgenoanticuerpo. En el caso de que las protenas sean oligomricas se originan redes
como la que se muestra en la Figura 9.14b.
9.3. EQUIPO DE PRECIPITACIN
443
El principio de precipitacin por inmunoafinidad se ha generalizado para el

uso de otro tipo de ligandos que no son anticuerpos y que se producen de manera
artificial, dando origen a un nuevo enfoque en la precipitacin por afinidad al utilizar ligandos bifuncionales Bis-NAD. Estos ligandos se enlazan covalentemente
a los sitios activos de las protenas oligomricas y forman redes semejantes a la
que se muestra en la Figura 9.14b. Esta tcnica de precipitacin por afinidad ha
tenido gran xito en la precipitacin de deshidrogenasas utilizando como precipitante el ligando Bis-NAD. Se ha reportado un rendimiento hasta del 85 %
en la recuperacin de la enzima lactato deshidrogenasa (Luong et al., 1987). La
limitacin de este enfoque de la precipitacin radica en que se aplica nicamente
a protenas oligomricas y es necesario llevar a cabo varias pruebas experimentales para determinar cul es la concentracin ptima de bis-ligando a la que
ocurre la precipitacin de la totalidad de la protena.
En la Figura 9.15 se muestra un esquema de otro enfoque de la precipitacin
por afinidad, el cual ya ha sido aplicado a escala industrial. Consiste en sujetar
el ligando a un polmero obtenindose as agentes multifuncionales (macroligandos) que se unen con la protena de inters y forman agregados. Posteriormente
se produce la precipitacin del complejo ligando-protena al agregar sal a la
solucin o al cambiar el pH de la misma (Janson, 1984).
Figura 9.15: Esquema de precipitacin por afinidad. a) Adicin del macroligando a la solucin proteica, b) Formacin del complejo ligando-protena, c)
Sobrenadante y d) Recuperacin de la protena purificada.
9.3.
Equipo de Precipitacin
La operacin de precipitacin puede realizarse en reactores con las configuraciones ya conocidas: por lotes, tubulares, continuos tipo tanque agitado y
continuos compartimentalizados (Fig. 9.16).
444
Figura 9.16: Tipos de reactores utilizados en la precipitacin de protenas. a)

Intermitente, b) Tubular, c) Continuo tipo tanque agitado y d) Continuo compartimentalizado.
9.4.
Diseo de Precipitadores
En el diseo de un proceso de precipitacin debe tomarse como base el

comportamiento cintico de las partculas en solucin. El conocimiento de este
comportamiento permite hacer la seleccin adecuada de la geometra en que se
realizar el proceso. Con base a lo anterior, esta seccin se enfoca a dos aspectos:
Cintica de la Precipitacin.
Diseo del Precipitador.
9.4.1.
Cintica de la Precipitacin
La precipitacin de protenas puede efectuarse ya sea desnaturalizando o

sin desnaturalizar stas. En este apartado se revisan los aspectos cinticos relacionados con la precipitacin sin que ocurra desnaturalizacin de la protena.
En una solucin proteica las molculas presentan por efecto de su energa
cintica un movimiento al azar que produce choques entre s. Para que las
molculas de protena queden asociadas al chocar se requiere eliminar tanto
las barreras producidas por las molculas de agua que las rodean, como las que
originan sus cargas elctricas.
Para facilitar su estudio la cintica de la precipitacin se divide en las seis
fases siguientes:
1. Mezclado inicial: la solucin proteica se mezcla con el agente precipitante
para eliminar las barreras.
9.4. DISEO DE PRECIPITADORES
445
2. Nucleacin: al disminuir la solubilidad de la protena se inicia la precipitacin al formarse en el seno de la solucin pequeas partculas (ncleos).
3. Crecimiento limitado por difusin (crecimiento percintico): en esta fase
los ncleos van creciendo conforme la protena difunde del seno de la solucin hasta los ncleos. La frecuencia de las colisiones est limitada por la
velocidad de difusin de las molculas y no por el mezclado. Se forman las
partculas primarias de tamao entre 0.1 y 10 m.
4. Crecimiento inducido por el esfuerzo de corte (crecimiento ortocintico):
el mezclado favorece el crecimiento del agregado formndose partculas en
el rango de 1 a 100 m.
5. Floculacin: los agregados se juntan formando los grandes flculos.
6. Separacin: los flculos se remueven de las solucin mediante un mtodo
de separacin slido-lquido como la centrifugacin.
Mezclado inicial
Una vez que se agrega el agente precipitante (sal, solvente o polmero no
inico) a la solucin de protenas, se requiere que ste se difunda rpidamente
para obtener una mezcla homognea. Es importante promover los choques entre
el producto y el agente precipitante lo ms rpido posible.
El tiempo requerido para obtener una mezcla homognea en un tanque bien
agitado esta dado por:
t=
donde:
l2
4D
(9.19)
D: Coeficiente de difusin. [cm2 /s].

l: Dimetro promedio de los remolinos ocasionados por la agitacin. [cm].
De acuerdo a la teora de difusin de remolinos de Kolmogoroff el dimetro
de stos est dado por:
l=
donde:
3
P/V
1/4
(9.20)
: Densidad de la solucin. [g/cm3 ].

: Viscosidad cinemtica. [cm2 /s].
P/V : razn de potencia por unidad de volumen del sistema de agitacin.
[HP/cm3 ].
Combinando las ecuaciones (9.19) y (9.20) se pueden estimar tiempos de mezclado mediante parmetros del sistema. Este tiempo es una medida del tiempo
necesario para obtener una mezcla homognea y de inicio de la precipitacin.
446
Nucleacin
Durante la nucleacin se producen partculas de tamao ultramicroscpico
una vez que la mezcla se sobresatura. En esta fase del proceso se inicia la formacin de las pequeas partculas de precipitado (ncleos) que aparecen despus de
agregar el agente precipitante. En algunos casos como en los sistemas coloidales
esta etapa es instantnea, por lo que el tiempo en que esto ocurre puede despreciarse. En esta etapa las partculas de precipitado se encuentran dispersas en el
lquido.
Crecimiento limitado por difusin o crecimiento pericintico.
El crecimiento de las partculas formadas durante la nucleacin est limitado
por la difusin mientras las partculas no alcanzan un tamao caracterstico
definido por el movimiento del fluido. Este tamao vara entre 0.1 y 10.0 m
para esfuerzos de corte altos y bajos, respectivamente.
En esta fase la velocidad inicial con que disminuye la concentracin de partculas de soluto (de igual tamao) suspendidas en el seno del lquido, puede ser
descrita de acuerdo a la teora de Smoluchowski por una ecuacin de segundo
orden:
dyi
= kyi2
dt
(9.21)
donde:
yi : Concentracin de partculas de soluto i en el tiempo t. [mol/L].
t: Tiempo. [s]
k: Constante del proceso. [L/mols].
Considerando un tiempo de nucleacin instantneo la integracin de la ecuacin
(9.21) conduce a:
1
1
= kt
yi yio
(9.22)
donde yio es la concentracin inicial de partculas de soluto i.

La ecuacin (9.22) describe una recta con ordenada al origen 1/yio y pendiente k.
Debido a que es difcil medir la concentracin yi la ecuacin (9.22) puede
escribirse en trminos del peso molecular promedio del precipitado utilizando
un balance de masa. Esto es:
= yio M
o
yi M
(9.23)
combinando las ecuaciones (9.22) y (9.23), se puede obtener la siguiente expresin:
=M
o (1 + yio kt)
M
447
(9.24)
donde:
o : Peso molecular inicial de las partculas de precipitado.
M
: Peso molecular promedio de las partculas de precipitado.
M
La ecuacin (9.24) se representa grficamente en la Figura
9.17.

La ordenada
o y el valor de la pendiente est dada por M
o yio k . Si se conocen
al origen es M
o puede estimarse k.
yio y M
vs t para determinar experimenFigura 9.17: Representacin esquemtica de M

talmente el valor de la constante k.
La constante k del crecimiento pericintico, de acuerdo con la teora de
Smoluchowski, slo depende de la difusividad y el dimetro de la molcula de
soluto que se adhiere a las partculas. De aqu que esta etapa est limitada por
la velocidad de difusin. De acuerdo a esta teora k est dada por:
k = 8DdN
(9.25)
donde:
d es el dimetro de la molecula de soluto; D, es el coeficiente de difusin; y
N, es el nmero de Avogadro.
El valor del coeficiente de difusin de la ecuacin anterior es un valor promedio de todas las partculas en el sistema, de tal forma que a medida que la
partcula crece, el valor del coeficiente de difusin disminuye. De acuerdo a la
ecuacin (9.25) an cuando esto suceda, el valor de la constante no se altera pues
la disminucin en D tiene como causa un incremento en la misma proporcin
del dimetro de la partcula d, de tal manera que el producto Dd permanece
constante, y en consecuencia k permanece constante. Es decir, la determinacin
experimental de k puede ser aplicada a diversos sistemas.
Generalmente el tiempo de formacin de las partculas primarias es mucho
menor que el tiempo global del proceso de precipitacin.
448
Crecimiento inducido por esfuerzo de corte o agregacin ortocintica

La difusin puede limitar el crecimiento de partculas pequeas, pero es
menos importante en el crecimiento de partculas grandes. En el proceso de
precipitacin cuando se agita una suspensin de partculas cuyo dimetro es
mayor que 1.0 m aproximadamente, el movimiento del fluido provocar que las
partculas choquen y formen agregados. Estos choques tambin pueden ocasionar
rompimiento de los agregados. El crecimiento de las partculas estar limitado
tanto por el movimiento del fluido como por la concentracin de partculas.
En una suspensin agitada de partculas esfricas de tamao uniforme dp , la
velocidad inicial con que disminuye la concentracin de esas partculas debido
a los choques que forman agregados, est dada por:

dyi
(9.26)
= k yi2
dt
Idealmente la ecuacin anterior debera incluir un trmino para tomar en cuenta
el crecimiento pericintico. Sin embargo, dicho trmino se hace menos importante conforme aumenta el tamao de las partculas.

La constante k de la ecuacin (9.26) est dada por:

1/2

P/V
2
k = N d3p
3
(9.27)
en esta ecuacin representa un coeficiente que indica la eficiencia del choque,

es decir, indica la frecuencia con que un choque da lugar a un agregado. Este
coeficiente puede ser estimado estudiando la velocidad con que decrece el nmero
de partculas durante el crecimiento ortocintico. El trmino entre parntesis
cuadrados es una medida del esfuerzo de corte promedio para flujos isoentrpicos
turbulentos.

Si se sustituye la expresin de k en la ecuacin (9.26) se obtiene:

1/2

dyi
2
P/V
3
=
N dp
yi2
(9.28)
dt
3
En la ecuacin (9.28) el dimetro dp de las partculas depende del tiempo,

por lo que para su integracin se considera una fraccin constante de volumen
de partculas del soluto a volumen de la solucin. Esta fraccin esta dada por:

d3p
=
yi N
(9.29)
6
Despejando d3p de la ecuacin anterior y sustituyendo en la ecuacin (9.28), se
obtiene una ecuacin en la cual no est involucrado el dimetro de las partculas
y es:

1/2
4 P/V
dyi
=
yi
(9.30)
dt

finalmente, integrando la ecuacin (9.30) se tiene:
.

1/2 /
4 P/V
yi
= exp
t
yio
449
(9.31)
donde yio es la concentracin inicial de partculas bajo las consideraciones del

modelo.
En un proceso de precipitacin en el cual el crecimiento de las partculas est
limitado por el flujo, el cambio en la concentracin de stas tiene un decaimiento
exponencial.
Para determinar el coeficiente de eficiencia de colisin , debe considerarse
que ste depende no slo del tamao de las partculas sino tambin de la velocidad de corte del fluido. Lo anterior se debe a que dos partculas que aparentemente pueden ir directo a una colisin, tienden a seguir las lneas de corriente
del fluido con lo que disminuye la probabilidad de la colisin.
Floculacin
La aglomeracin o floculacin de las partculas de precipitado es la ltima
fase del proceso de precipitacin.
Durante la agregacin ortocintica el crecimiento es funcin directa del mezclado. Sin embargo, este mismo mezclado puede causar el rompimiento de los
flculos formados. Debido a lo anterior la fase de floculacin generalmente se
realiza a bajas velocidades de agitacin y en ocasiones sin agitacin, proceso
conocido como envejecimiento del precipitado.
La floculacin espontnea de la suspensin puede ser estimulada por la adicin de agentes floculantes, en este caso la velocidad de floculacin depender
del mezclado del agente con la solucin de protenas, de la velocidad de difusin
y de la unin del agente floculante a la superficie de la molcula de protena.
Todas estas etapas determinan el tiempo de espera antes de que la floculacin
comience. Estos aspectos deben tomarse en consideracin en el diseo del precipitador.
Separacin
Una vez que los flculos alcanzan un dimetro apropiado se remueven de
la solucin mediante un mtodo de separacin slido-lquido como la centrifugacin. El uso de esta operacin requiere que los flculos sean de tamao adecuado y estables.
9.4.2.
Mtodos de Diseo
El proceso de crecimiento de las partculas en la precipitacin puede estar

limitado por varios mecanismos. Aun cuando hay pocos datos para definir la
relacin que existe entre las condiciones de mezclado inicial y el tamao de
partcula, puede suponerse que para protenas que precipitan rpidamente, la
velocidad de mezclado de los reactantes afectar el tamao inicial de la partcula
450
y las caractersticas de su crecimiento posterior. De tal manera que en el diseo

del precipitador deben tenerse muy en cuenta las condiciones de mezclado en las
que se realizar la precipitacin, existiendo dos arreglos bsicos: a) precipitador
por lotes y b) precipitador continuo.
Precipitador por lotes
En un precipitador por lotes la protena est expuesta a un rango de condiciones creadas por el agente precipitante durante el tiempo en que ste se agrega
a la solucin, entonces las condiciones iniciales de precipitacin del material son
diferentes a las condiciones finales. Para disminuir este efecto el agente precipitante debe agregarse lentamente y bien dispersado.
En un precipitador por lotes todas las partculas son sometidas a fuerzas de
corte similares, y cuando stas son controladas, se producen partculas primarias
ms grandes que las obtenidas en los precipitadores tubulares.
A nivel laboratorio es muy usado el precipitador por lotes que consiste en
un tubo de ensayo que se agita en vortex por un corto tiempo inmediatamente
despus de agregar el agente precipitante. Posteriormente se deja en reposo toda
la noche. Otro arreglo bsico es el vaso de precipitados agitado magnticamente
(Chan et al., 1986).
En el escalamiento de un proceso de precipitacin lo que interesa es que la
cintica que se observa a nivel laboratorio sea la misma que la que se presente a
gran escala. Cuando la velocidad de crecimiento pericintico es alta con respecto
a la velocidad del proceso global de precipitacin, como generalmente es el caso
de la precipitacin de protenas, las ecuaciones (9.20) y (9.31) establecen que
la cintica de precipitacin a nivel laboratorio y a gran escala ser la misma
siempre que la razn P/V permanezca constante entre ambas escalas, dado que
la densidad de la solucin , la viscosidad cinemtica , y no cambian con
la escala.
Ejemplo 9.3. Precipitacin de Casena.
La casena- de bovino es una protena que precipita en presencia de cloruro
de calcio a concentraciones 0.008 M. Se va a precipitar casena a partir de
una solucin que presenta una densidad s de 1.032 g/cm3 y una viscosidad
cinemtica de 0.01 cm2 /s. El proceso se va a realizar en un tanque agitado
con una potencia P de 1.0 HP y un volumen V de 1, 000 L.
La concentracin de la casena en la solucin alimentada yio es de 0.1 g/L.
El peso molecular de la casena- es de 27, 000 Da, la densidad del precipitado
p medida a nivel laboratorio es de 1.367 g/cm3 , el dimetro, d, es de 0.002
104 cm y el coeficiente de difusin, D, es de 8.5 107 cm2 /s. Se estima que
el coeficiente de aglomeracin tiene un valor de 0.08 y que el tiempo en que
se realiza la nucleacin es instantneo.
Se pide estimar:
a) El tiempo en que el crecimiento est limitado por la difusin y la concentracin de partculas al final de este tiempo.
b) El tiempo para alcanzar un tamao de partcula de 50 m.
451
Solucin:
Se tienen los siguientes datos:
s = 1.032 g/cm3
p = 1.367 g/cm3
= 0.01 cm2 /s
P = 1.0 HP= 746 107 gcm2 /s3
V = 1000 L
yio = 0.1 g/L
M = 27, 000 Da
d = 0.002 104 cm
D = 8.5 107 cm2 /s
= 0.08
a) El tiempo requerido para un mezclado homogneo est dado por la ecuacin
(9.19). El tiempo t corresponde al tiempo en el cual el crecimiento est limitado por la difusin. Combinando las ecuaciones (9.19) y (9.20) y
sustituyendo valores se tiene:
t =
1
4D
3
P/V
1/2
1
t =

4 8.5 107
t = 3.46 s
1/2
3

cm2
1.032 g
0.01
cm3
s
cm2
g
cm
7
746
10
3

s
s

106 cm3
La concentracin de partculas yi al final de este tiempo se determina combinando las ecuaciones (9.22) y (9.25) para obtener:
1
1
=
+ (8DdN)t
yi
yio
de tal manera que:
452
g

2
mol + 8 8.5 107 cm
=
g
s
0.1 3
10 cm3

23 1
4
(0.002 10 cm) 6.02 10
(3.46 s)
mol
3
1
12 cm
=
+
8.9
10
mol
cm3
3.7 109
mol
1
yi
1
yi
27, 000
entonces,
yi = 1.12 1013
mol
cm3
La concentracin final es mucho menor que la inicial.

b) El tiempo necesario para obtener partculas de 50 m de dimetro est
dado por la ecuacin (9.31):

yi
ln
yio
t=
(A)

1/2
4
P/V
de acuerdo al balance expresado en la ecuacin (9.23),

o
M
yi
=
yio
M
de las partculas de 50 m es:

y el peso molecular promedio M
= N
d3
6
3

50 104
g
cm3
23 partculas
10
6.023
cm3
mol
6
partcula
g
= 5.39 1016
mol

=
1.367
entonces,
g
27, 000
yi
mol = 5 1013
=
g
yio
16
5.39 10
mol
la fraccin de volumen de soluto en la solucin es:
453
1 cm3
1.367 g
= 7.31 105
=
103 cm3
0.1 g
sustituyendo estos valores en la ecuacin (A) anterior se tiene:
ln(5 1013 )
1/2
2
7 g cm

746
10
5
4 0.08 7.31 10
s3
g
cm
106 cm3 1.032
0.01
cm3
s
t = 4, 474 s
t =
el paso controlante en esta precipitacin es el crecimiento ortocintico.

Precipitadores continuos
En un reactor tubular cuando se tiene un buen mezclado en el punto donde
se agrega el agente precipitante, la protena se ubica rpidamente a las condiciones finales en que ocurre la precipitacin. Las fuerzas de corte a las que estn
sujetas las partculas pueden ser las que produce el flujo laminar, aun cuando
la velocidad media de corte puede exceder a la de un tanque agitado.
En un reactor continuo tipo tanque agitado la protena es puesta en contacto
instantneamente con el agente precipitante, alcanzndose al mismo tiempo las
condiciones finales de precipitacin. Las condiciones de corte son muy parecidas
a las de un precipitador por lotes, y las partculas estarn sujetas a las fuerzas
de corte durante el tiempo de residencia en el reactor (Glatz, 1990).
La Figura 9.18 muestra la influencia del tipo de reactor sobre la curva de
insolubilizacin por salado de la fumarasa (Bell et al., 1983). Puede observarse
que existe un desplazamiento en la curvas, que puede ser debido a diferencias
locales en el pH, provocadas por la forma como se agrega el sulfato de amonio.
El mismo corrimiento se observa cuando hay variacin en el grado de mezclado
en un tanque agitado.
Los resultados anteriores sugieren que un factor importante a considerar en
el diseo del reactor, es la agitacin que se proporciona a la solucin en la que se
encuentra la protena de inters. Esto es particularmente importante cuando se
desea escalar el proceso debido a la relacin que hay entre potencia y agitacin.
Para visualizar el diseo de precipitadores continuos, se puede partir de un
sistema sencillo donde se cuenta con una suspensin diluida (< 20 g/L) y velocidades de agitacin moderadas, de tal manera que el rompimiento de los
agregados pueda ser despreciado (Rohani y Chen, 1993). Bajo estas condiciones
es posible utilizar balances poblacionales para derivar expresiones de las velocidades de nucleacin, crecimiento y agregacin a partir de datos experimentales.
Las correlaciones empricas que se obtienen son de la siguiente forma:
454
Figura 9.18: Influencia del tipo de contacto sobre la curva de insolubilizacin por
salado de fumarasa. () contacto intermitente con sulfato de amonio slido; ()
contacto intermitente con solucin saturada de sulfato de amonio; () contacto
continuo = 96 s , V = 0.38 L y solucin saturada de sulfato de amonio; ()
contacto continuo = 918 s, V = 1.87 L y solucin saturada de sulfato de
c
amonio. Bell et al, 1983. Reproducida con el p erm iso de Springer-Verlag. Copyright 1983.
B o = kB exp
G = kG exp
Iagg = kA exp
donde:
Eb
RT
EG
RT
EA
RT
a I b c d
(9.32)
e I f g h
(9.33)
p I q r s
B o : Velocidad de nucleacin. [nmero de ncleos/Lh].

G: Velocidad de crecimiento pericintico. [m/h].
Iagg : ndice de agregacin. Medida del crecimiento ortocintico.
[adim.].
kB , kG y kA : Constantes cinticas. [unidades consistentes].
EB , EG y EA : Energas de activacin. [kJ/mol].
: Sobresaturacin aparente.
(9.34)
455
I: Fuerza inica. [mol/L].

: Velocidad de agitacin. [rpm].
: Tiempo de residencia promedio. [h].
a, b, c, d, e, f, g, h, p, q, r, s: constantes empricas.
A su vez el ndice de agregacin est dado por:
Iagg = 1
Np
Nu
(9.35)
donde:
Np : nmero de partculas por unidad de volumen en el precipitado. [nm/L3 ].
Nu : nmero de partculas formadas por nucleacin en un tiempo de residencia.
[nm/L3 ].
Cuando la agregacin es total el ndice toma el valor de uno, cuando no
existe agregacin el ndice toma el valor de cero.
La definicin de sobresaturacin en un proceso de precipitacin es compleja.
En el caso de una precipitacin continua la sobresaturacin puede definirse como:
=
Ce Cs
Ce
(9.36)
donde Ce y Cs son las concentraciones proteicas a la entrada y salida del precipitador.

Ejemplo 9.4. Precipitacin isoelctrica de protenas de una oleaginosa.
En el estudio cintico de la precipitacin de protena a partir de una solucin
obtenida de una pasta de una semilla oleaginosa, se obtuvieron las correlaciones
empricas siguientes:

16540
B = 4.8 10
exp
5.723 I 0.1 0.905 0.215
RT

2860
G = 0.7 exp
0.67 I 0.091 0.625 0.833
RT

470
Iagg = 1.2 exp
0.007 I 0.003 0.004 0.008
RT
o
16
Se pide estimar:
a) La velocidad de nucleacin, la velocidad de crecimiento y el ndice de
agregacin cuando la precipitacin se efecta a las condiciones siguientes: =
0.6246, = 0.048 h, = 270 rpm, I = 0.027 mol/L y T = 295 K.
456
b) El nmero de partculas por unidad de volumen en el precipitado.

Solucin:
a) Aplicando las correlaciones correspondientes se tiene:
Bo
Bo
16540
kJ
mol
kJ
K
295
8.314
mol o K

0.1
5.723
(0.6246)
(270)0.905 (0.048)0.215
(0.027)
num
= 1.67 1015
Lh
= 4.8 1016 exp
G = 0.7 exp
2860
kJ
mol
kJ
8.314
295 K
mol K

(0.6246)0.67 (0.027)0.091 (270)0.625 (0.048)0.833
m
G = 93.3
h
Iagg
Iagg
470
kJ
mol
kJ
K
8.314
295
mol K

0.007
(0.6746)
(0.027)0.003 (270)0.004 (0.048)0.008
= 0.99
= 1.2 exp
b) De acuerdo a la ecuacin que define al ndice de agregacin,

Np
Np
Np
9.5.
= B o (1 Iagg )

nm
=
1.67 1015
(0.048 h) (1 0.99)
Lh
nm
= 8.016 1011
L
Sumario
La precipitacin es una operacin empleada tanto para la concentracin como

para la purificacin de soluciones de biomolculas.
9.5. SUMARIO
457
Existen varias formas de realizar una operacin de precipitacin, dependiendo del tipo de agente precipitante que se utilice y el principio que se emplee.
La precipitacin puede realizarse por disminucin de la solubilidad, por desnaturalizacin selectiva y por afinidad. Los equipos empleados en la precipitacin
pueden ser intermitentes o continuos en diseos convencionales. El diseo de
estos equipos se realiza mediante una combinacin de experimentos y modelos
cinticos.
458
9.6.
Problemas
9.1. Parmetros de precipitacin. En la precipitacin de alcohol deshidrogenasa con sulfato de amonio utilizando un volumen de 30 mL, en determinaciones realizadas en el sobrenadante se obtuvieron los resultados siguientes:
% de Saturacin
(NH4 )2 SO4
50
45
40
35
25
Actividad
Especfica
180,000
200,000
650,000
440,000
430,000
Protena
total (mg)
29.80
21.28
17.87
8.65
23.87
Se pide: Obtener los parmetros A y m de la curva de precipitacin para

la actividad de la enzima en U/mL.
Resp. A = 5.7 y m = 0.244
9.2. Cintica de desnaturalizacin proteica. Una protena se desnaturaliza el 50 % cuando se calienta a 50 C por 10 min.
Se pide: Estimar el tiempo de calentamiento para que la desnaturalizacin
sea slo del 10 %.
Resp. 1.51 min.
9.3 Purificacin proteica. Una solucin de 80 L contiene 12.8 g/L de
una protena de inters (IN ) y 1.8 g/L de una protena contaminante (CO).
Las constantes de precipitacin son IN = 6.32, kIN = 1.1, CO = 6.64 y
kCO = 0.95. Se desea recuperar el 98 % de protena por precipitacin con sulfato
de amonio.
Se pide calcular:
a) La masa inicial de protena de inters en la solucin.
b) Masa de protena que permanece en solucin despus de recuperar el 98 %.
c) La fuerza inica necesaria del sulfato de amonio.
d) La molaridad del sulfato de amonio.
e) La cantidad de protena contaminate precipitada.
f) La pureza del precipitado
Resp. a) 1024 g, b) 20.48 g, c) 7.29 y d) 2.43 M.
9.7. BIBLIOGRAFA
9.7.
459
Bibliografa
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Scopes, R. 1994. Protein Purification: Principles and Practice. Springer-Verlag.
New York. 3, 41-71.
Captulo 10
Ultrafiltracin
10.1.
Introduccin
La ultrafiltracin (UF) es una operacin que emplea membranas especiales

en diferentes tipos de arreglos para separar macromolculas en solucin de contaminantes ms pequeos, por medio de un gradiente de presin.
La ultrafiltracin es utilizada en la etapa de purificacin de caldos biolgicos.
En esta etapa los caldos sujetos a purificacin contienen al soluto de inters en
forma ms concentrada y pura que el caldo original, debido a sto los volmenes
a tratar son menores que los correspondientes a las primeras etapas del proceso.
Para describir un proceso de membrana es necesario poder establecer el
movimiento relativo de los componentes de la mezcla a travs de la membrana,
causado por la fuerza originada por el gradiente de presin. Generalmente se
realiza una descripcin fenomenolgica donde la membrana se considera como
una caja negra, es decir, el mecanismo microscpico de flujo (y rechazo) no es
explicado en este enfoque. Este tratamiento es caracterstico del enfoque de los
fenmenos de transporte.
La ultrafiltracin forma parte de un conjunto de operaciones con membranas
que son empleadas en diferentes etapas de los procesos de bioseparacin. Es importante hacer notar que los principios bsicos de estas operaciones son comunes.
En la seccin 10.2 de este captulo se efecta una descripcin general de los
diferentes procesos con membranas existentes con el propsito de establecer las
principales similitudes y diferencias de stos con respecto a la ultrafiltracin. Se
resalta la importancia que tiene la operacin en flujo tangencial para este tipo de
sistemas. Se presenta tambin en esta seccin la teora de la ultrafiltracin que
permite analizar el efecto de los diversos parmetros sobre el comportamiento
de esta operacin. En la seccin 10.3 se describen las caractersticas ms importantes de los principales equipos utilizados en los procesos con membranas.
La seccin 10.4 presenta los fundamentos del diseo de equipos de UF haciendo
nfasis en el clculo de reas y tiempo de UF de dichos sistemas. Se presenta
una discusin sobre las condiciones ptimas de operacin de un sistema en el
462
CAPTULO 10. ULTRAFILTRACIN
marco de la mecnica de fluidos y los esquemas de operacin ms frecuentes en

los sistemas de UF.
10.2.
Fundamentos
Para el tratamiento de la operacin de UF es conveniente establecer primero

el marco donde se desarrolla. Asimismo, es conveniente revisar los fundamentos tericos de la operacin que facilitan su uso y correcta aplicacin. En este
sentido, esta seccin hace nfasis en tres aspectos:
Los procesos con membranas.
Flujo cruzado o tangencial.
La teora de UF.
10.2.1.
Procesos con Membranas
Actualmente existen varios procesos que emplean una membrana para lograr
una separacin dada (Mc Gregor, 1986). Estos procesos se pueden caracterizar
en forma general con base: a) la fuerza impulsora del proceso, b) el tipo de
membrana que emplean y c) el rango de tamao de partcula que retienen sus
membranas.
De acuerdo al tipo de fuerza impulsora los principales procesos con membranas (Tabla 10.1) se pueden clasificar de la siguiente forma:
Gradiente de presin
Ultrafiltracin (UF).
Microfiltracin (MF).
smosis Inversa (OI).
Gradiente de concentracin
Dilisis (D).
Gradiente de Voltaje
Electrodilisis (ED).
El tipo de membrana puede ser microporosa convencional o anisotrpica
(Fig. 10.1). Estas son las ms utilizadas en UF debido a que las membranas
microporosas convencionales poseen una estructura tortuosa que provoca retencin irreversible de partculas dentro de la matriz, lo que dificulta su limpieza y
reuso. Las membranas anisotrpicas tiene dos capas caractersticas: una pelcula
delgada y densa de 0.1 1.5 m de espesor y bajo la pelcula una subestructura
microporosa de 0.1 1.0 mm que presenta aberturas progresivamente mayores
(en forma de v), que facilitan el paso del solvente y los solutos que logran pasar
la pelcula. En el caso de las membranas tipo composite se utilizan dos tipos de
materiales para formar la membrana anisotrpica.
10.2. FUNDAMENTOS
463
Tabla 10.1: Principales caractersticas de los procesos con membranas.

MF
P
100-500
M icroporosa
Simtrica
50-1000
Fuerza impulsora
Presin de op eracin (kPa)
Tipo de m embrana
Flux L/m 2 h
Rango de retencin
Esp ecie
Hongos
Levaduras
Bacterias
Coloides
Virus
Protenas
Polisacrido
Enzimas
Antibiticos
Azcar
c. Orgnico
In inorgnico
Peso
molecular
Da
104 106
104 106
104 106
300 103
200 - 400
100- 500
10 - 100
UF
P
100-500
Microp orosa
Asimtrica
10-200
OI
P
700-20,000
Semip erm eable
Asimtrica
1-20
D
C
Dilisis
Sim trica
-
Tamao
nm
103 104
103 104
300 104
300 103
30 - 300
2-10
2-10
2-5
0.6 - 1.2
0.8 - 1
0.4 - 0.8
0.2 - 0.4
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
Adaptada de: Fane y Radovich, 1990.

c
Ultrafiltracin
La ultrafiltracin utiliza membranas generalmente asimtricas o anisotrpicas para separar macromolculas y partculas, de molculas pequeas y solventes
(Fig. 10.2a). El dimetro de los poros de este tipo de membranas vara entre
0.001 0.1 m.
Tamao de corte Las membranas utilizadas en UF se caracterizan por su
Peso Molecular de Corte (PMC), el cual es el peso molecular del soluto globular que es retenido en un 90 % por la membrana. El PMC vara entre 500
y 1, 000, 000 Da para la mayora de las membranas de UF, lo cual representa
la retencin de partculas de 1 a 10, 000 nanmetros de tamao. Las presiones
caractersticas de la ultrafiltracin son moderadas en el rango de 100-500 kPa.
Las capacidades caractersticas son del orden de 10 200 L/m2 h (al flujo
volumtrico por unidad de rea de membrana se le conoce como flux y se utiliza
para especificar equipos de UF).
Microfiltracin
La microfiltracin (MF) emplea membranas con poros ms grandes que los
utilizados en UF ( 0.1 10 m), ya sean de tipo convencional o asimtricas.
464
Figura 10.1: Comparacin de membranas convencionales con anisotrpicas.

Fuente: Santos, et al, 1991. Reproducida con el permiso de Kluwer Academ ic Publishers.
c
Copyright 1991.
La microfiltracin (Fig. 10.2b) se emplea generalmente para separar de caldos

biolgicos partculas mayores de 1.0 m como coloides y clulas. Actualmente
la MF tiende a desplazar a la filtracin convencional y a la centrifugacin como
tcnica de recuperacin celular. El rango de presin de operacin tambin es
restringido debido a las caractersticas de los equipos que se emplean, y es del
orden de 160 500 kPa. Un rasgo caracterstico de la MF es que puede manejar
flujos mucho mayores que la UF del orden de 50 1000 L/m2 h.
smosis inversa
La smosis inversa (Fig. 10.2c) es una operacin que utiliza membranas
semipermeables que permiten el paso slo del solvente (generalmente agua), para
separar ste de solutos de bajo peso molecular. La fuerza impulsora es un gradiente de presin que debe vencer la presin osmtica normal de las soluciones,
es decir, invertir el flujo espontneo. Las presiones utilizadas en esta operacin son relativamente altas del orden de 700 20, 000 kPa. Las membranas
utilizadas en OI son pelculas que permiten el paso del solvente a travs de
espacios entre los polmeros que conforman la membrana. Los iones no pueden
estar solvatados en estos pequeos espacios y por lo tanto no son transportados.
Los flujos caractersticos en la OI son del orden de 1 20 L/m2 h.
Dilisis
La dilisis (Fig. 10.2d) emplea membranas de poro muy pequeo (menor
que las membranas de UF). Esta operacin se utiliza para separar solutos de
sus soluciones, con base a su peso molecular y posiblemente a su conformacin
y carga. El o los solutos a separar de la solucin de alimentacin fluyen hacia la
solucin de lavado o dializado a travs de la membrana, slo por la accin de un
gradiente de concentracin. El papel fundamental de la membrana es impedir el
10.2. FUNDAMENTOS
465
Figura 10.2: Esquemas de las operaciones con membranas. a) Ultrafiltracin, b)

Microfiltracin, c) smosis inversa y d) Dilisis.
paso de macromolculas o partculas de la alimentacin al dializado permitiendo
el paso del solvente y de solutos ms pequeos.
En los procesos de electrodilisis la operacin de dilisis se efecta bajo la
accin de un campo elctrico.
10.2.2.
Flujo Cruzado o Tangencial
En los procesos de separacin por membrana se producen gradientes de concentracin de los solutos en la proximidad de la membrana, causados por las
diferentes velocidades de transporte de cada uno de ellos. Este efecto es conocido
como Polarizacin de la concentracin.
Esta polarizacin acta de dos formas:
a) En los procesos de dilisis disminuye el gradiente de concentracin efectivo, disminuyendo por lo tanto el flux de impurezas.
b) En los procesos de MF, UF y OI, produce un incremento de la concentracin de solutos en la proximidad de la membrana (Fig. 10.3), lo cual por un
lado puede incrementar el flux de soluto, y por otro disminuir el flux del solvente debido a un aumento de la resistencia al flujo producida por esta barrera
de concentracin. Asimismo, puede ocasionar una resistencia adicional debido a
que puede estimular la interaccin del soluto con la membrana ocasionando que
sta se incruste con soluto.
El flux de solvente a travs de la membrana puede ser incrementado significativamente utilizando flujo cruzado o tangencial en lugar del flujo de extremocerrado convencional (Fig. 10.4). En los sistemas de flujo cruzado la alimentacin
fluye en forma paralela a la membrana minimizando el efecto de la polarizacin
466
Figura 10.3: Gradiente de concentracin durante la UF. Fenmeno de polarizacin. Fuente: Tutunjian, 1985b. Reproducida con el perm iso de Elsevier Science Inc.
c
Copyright 1985.
de la concentracin, ya que el esfuerzo cortante del fluido estimula el desplazamiento de las partculas de la superficie de la membrana.
10.2.3.
Teora de la Ultrafiltracin
La teora de la ultrafiltracin est orientada a tratar de predecir el flux en

un sistema dado en funcin de los parmetros de operacin como son: presin,
temperatura, concentracin de la solucin y velocidad tangencial. Es importante
sealar que la teora de la ultrafiltracin es de aplicacin limitada, pero es til
en la interpretacin y extrapolacin de los datos experimentales, as como de
gua para la operacin de los equipos (Kovcsa et al., 2009).
El principal parmetro de diseo de un sistema de UF para concentrar una
solucin es el rea necesaria para lograr una concentracin determinada en un
tiempo dado, bajo limitaciones de rangos de presin y temperatura tolerados por
los equipos. La prediccin del flux o la interpretacin y extrapolacin correcta
de las mediciones experimentales de ste, se enfocan a resolver este problema
de diseo.
Flux
En UF se utiliza la variable J para describir el flux de permeado o velocidad
del permeado a travs del lecho filtrante, mientras que en la filtracin convencional se utiliza la variable para el mismo efecto, es decir,
J = =
Gasto volumtrico
Q
=
A
rea
10.2. FUNDAMENTOS
467
Figura 10.4: Formas de de alimentacin en UF. a) Convencional y b) Flujo

cruzado.
Gradiente de presin transmembrana

La fuerza impulsora de un proceso de UF es el gradiente de presin transmembrana (P T M), el cual puede ser definido en referencia a la Figura 10.5a
como:
P T M =
(Pi + Po )
Pf
2
P T M =
P
+ Po Pf
2
o bien,
donde:
P T M : Gradiente de presin transmembrana.
Pi : Presin de entrada de la alimentacin.
Po : Presin de salida del retenido.
Pf : Presin de salida del permeado o filtrado.
P = Pi Po : Gradiente de presin del flujo tangencial.
(10.1)
468
Figura 10.5: Relacin de presiones en UF. a) Flujo y b) Vlvulas. Fuente: Tuc

tunjian, 1985b. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. Copyright 1985.
Todos
En este arreglo la bomba debe ser dimensionada para proveer la velocidad

de flujo cruzado necesaria as como la P T M . Esta ltima es controlada restringiendo la vlvula de contrapresin a la salida de la unidad de UF. La Figura
10.5b muestra el hecho de que las presiones de entrada y salida a la unidad,
pueden ser monitoreadas con el empleo de manmetros.
Ejemplo 10.1. Clculo de P T M
La presin de alimentacin a una unidad de UF es de 1.70 kg/cm2 . La vlvula
de salida de la unidad se ajusta de tal manera que la cada de presin del flujo
tangencial es de 0.68 kg/cm2 y la presin del permeado despreciable.
Se pide: Estimar P T M .
Solucin:
Se puede utilizar la ecuacin (10.1) para calcular P T M . Primero es necesario calcular Po . Conociendo que
P = Pi Po
entonces
Po = (1.70 0.68)
P T M =
kg
kg
= 1.02
2
cm
cm2
(1.7 + 1.02) kg
kg
= 1.36
2
cm2
cm2
Efecto de la concentracin y del flujo cruzado sobre la UF

La Figura 10.6a muestra el comportamiento tpico de un proceso de ultrafiltracin de una macromolcula en celdas de ultrafiltracin agitadas (sin flujo
cruzado). Este comportamiento se describe en funcin de la variacin de flux
del permeado J (cm3 /cm2 min) con el gradiente de presin transmembrana
(P T M ) para soluciones de concentracin en el rango de 0 a 65 %.
10.2. FUNDAMENTOS
469
Figura 10.6: a) UF de albmina en una celda. Fuente: Belfort, 1987. Reproducida

b)
Efecto de la presin, velocidad de recirculacin y concentracin sobre el flux.
Fuente Le y Howell, 1985. Reproducida con el p erm iso de Elsevier Science Inc. Copyright
c
con el p erm iso de John W iley and Sons. Copyright 1987.
c
1985.
Se obtienen resultados anlogos a los anteriores cuando se utilizan equipos

operando con flujo cruzado constante (Fig. 10.6b). Sin embargo, al aumentar la velocidad de flujo cruzado U se produce un incremento en el flux J
(cm3 /cm2 h).
Modelo general del flux
La prediccin del flux a que hace referencia el ttulo de esta seccin consiste
en encontrar relaciones que permitan describir y predecir el comportamiento
experimental descrito anteriormente. La descripcin fenomenolgica del flux en
un proceso de ultrafiltracin, se ha efectuado por varios caminos con resultados
anlogos, algunos de los cuales se describen a continuacin.
Modelo termodinmico Por medio de la termodinmica de los procesos
irreversibles, la ecuacin del flux de solvente que se obtiene en un sistema de
UF es:
J = Lp (P T M )
donde:
Lp : Coeficiente de permeabilidad.
: Coeficiente de retencin del soluto por la membrana.
: Contrapresin osmtica.
J: Flux de permeado.
(10.2)
470
Modelo basado en la ley de Darcy Por otro lado, cuando se utiliza la ley
de Darcy como se hizo en el caso de la filtracin convencional (Captulo 3) se
obtiene la siguiente expresin:
J=
P T M
(Rm + Rs )
(10.3)
donde:
Rm : Resistencia de la membrana.
Rs : Resistencia de la capa de soluto de polarizacin.
El coeficiente de retencin en un instante dado durante el proceso de UF
est definido de la manera siguiente:
=1
CP
CB
(10.4)
donde:
CP : Concentracin de soluto en el permeado.
CB : Concentracin de soluto en el seno de la solucin.
: Coeficiente de retencin del soluto por la membrana.
= 1: Retencin completa del soluto por la membrana.
= 0: Retencin nula del soluto por la membrana.
Modelo de resistencias De acuerdo a las ecuaciones (10.2) y (10.3), el coeficiente de permeabilidad se puede expresar como:
Lp =
1
(Rm + Rs )
(10.5)
Dado que la presin osmtica para macromolculas en solucin y para dispersiones coloidales es muy baja, en dicho caso el modelo general de flux en la
forma de la ecuacin (10.3) se transforma en:
J=
P T M
(Rm + Rs )
(10.6)
10.2. FUNDAMENTOS
471
Anlisis del comportamiento experimental de la UF

Para analizar los resultados experimentales de la UF de una solucin de
una concentracin dada (Fig. 10.6b), es conveniente dividirlos en dos regiones
separadas por un gradiente de referencia P T M ++ :
a) Regin I. Localizada a la izquierda de P T M ++ , donde J es funcin de
P T M y de la velocidad de recirculacin U .
b) Regin II. Localizada a la derecha de P T M ++ , donde J slo es funcin
de U (independiente de P T M ).
Adems, se puede utilizar la ecuacin (10.6) para realizar el anlisis correspondiente:
1. En soluciones diluidas la resistencia Rs puede considerarse nula. Si adems
se considera Rm constante, entonces J vara linealmente con P T M (lnea A).
2. En la Regin I donde P T M < P T M ++ , se puede considerar que
Rm > Rs , es decir la resistencia de la membrana es controlante. Es una zona
donde J depende de P T M ; los incrementos en P T M producen un aumento
en Rs , de tal manera que J tiende a un valor mximo conforme aumenta
P T M.
3. En la Regin II donde P T M > P T M ++ , se puede considerar que
Rs > Rm . Los slidos retenidos representan la resistencia controlante, de tal
manera que J es independiente de P T M . Los incrementos en P T M producen incrementos en Rs tales, que no se produce un incremento en J. Esta
regin es ms sensible a la velocidad del flujo cruzado por actuar sta directamente sobre Rs .
El uso del modelo general para la prediccin del flux requiere poder expresar
Rs en trminos de parmetros medibles como se hizo en el caso de la resistencia
de la torta Rt , en el captulo de filtracin convencional. Los intentos que se han
efectuado en este sentido son de uso limitado para el caso de UF de protenas y
coloides.
Modelo de polarizacin con pelcula estancada (Regin I)
Otro enfoque para obtener el modelo del flux propone que el fenmeno de
polarizacin de la concentracin slo se presenta en una pelcula delgada del
fluido en la proximidad de la membrana (Teora de la capa lmite). En esta
pelcula el perfil de concentracin es funcin de P T M. Considerando como
nica variable la P T M , los perfiles de concentracin en estado estacionario se
irn incrementando conforme se incremente P T M (Fig. 10.7).
Un balance de soluto en estado estacionario en una pelcula diferencial en la
interfase fluido-membrana puede ser expresado como:
Movimiento
convectivo de
soluto hacia la
interfase
Movimiento
difusivo del
soluto de la
interfase al
seno del fluido
Movimiento
convectivo de
soluto fuera
de la interfase
472
Figura 10.7: Variacin del perfil de concentracin en estado estacionario con

el gradiente de presin transmembrana. CB : concentracin de soluto en la
alimentacin. CW : concentracin de soluto en la pared de la membrana. CP :
concentracin de soluto en el permeado. : espesor de la capa lmite de concentracin.
J C = DAB
dC
+ J CP
dx
donde:
* : Constantes en estado estacionario.
P T M : Constante.
DAB : Difusividad del soluto en la solucin.
x: Coordenada espacial.
Separando variables e integrando a lo largo de la capa lmite con:
x = 0;
x = ;
C = CB
C = CW
La ecuacin (10.7) se transforma en:
(10.7)
10.2. FUNDAMENTOS
473
DAB
ln
J =
CW
CP
CB CP
(10.8)
Si la membrana presenta un coeficiente de retencin total CP = 0, entonces

la ecuacin (10.8) se simplifica a:

DAB
CW
J =
ln
(10.9)
CB
dado que el espesor de la pelcula generalmente es desconocido, el coeficiente
DAB / se sustituye por un coeficiente de transferencia de masa ks , de tal manera
que:

CW
J = ks ln
(10.10)
CB
Coeficientes de transferencia de masa El modelo de pelcula permite
analizar la dependencia del flux J con los parmetros fsicos y geomtricos
que afectan . El coeficiente de transferencia de masa ks puede ser estimado por
medio de correlaciones experimentales de la literatura, donde los parmetros
que afectan el espesor de la capa lmite de la transferencia de masa, se agrupan
en grupos adimensionales como el Reynolds, el Schmidt y el Sherwood.
Flujo en tubos circulares rectos Para flujo laminar en tubos circulares
rectos para calcular el coeficiente de transferencia de masa se pueden utilizar
las correlaciones siguientes:
ks dt
= 1.295
DAB
dt
2L
1/3
dt U
1/3
DAB
1/3
o bien en trminos de nmeros adimensionales,

Sh = 1.295
1/3
dt
ReSc
2L
(10.11)
En el caso de flujo turbulento:

Sh = 0.023Re0.83 Sc0.33
donde:
dt : Dimetro del tubo. [L].
DAB : Difusividad del soluto. [L/t2 ].
L: Longitud del tubo. [L].
(10.12)
474
U : Velocidad promedio del fluido en el tubo. [L/t].

: Viscosidad. [M/L t].
: Densidad. [M/L3 ].
Re: Nmero de Reynolds.
Sc: Nmero de Schmidt.
Sh: Nmero de Sherwood.
Es importante hacer notar que de acuerdo a las ecuaciones (10.11) y (10.12):
1. Para flujo laminar:
J
U
L
1/3
(10.13)
o bien cuando se usa el esfuerzo cortante definido como:

dt
2
(10.14)
1/3
(10.15)
U=
entonces,
J
donde es el esfuerzo cortante del fluido sobre la membrana.

2. Para flujo turbulento:
J U 0.83
(10.16)
Anlisis del comportamiento experimental mediante el modelo de polarizacin con pelcula estancada (Regin I). El modelo de polarizacin
de pelcula conjuntamente con las ecuaciones (10.11) y (10.12) permiten interpretar los resultados experimentales de los procesos de UF en la Regin I:
1. El flux J considerando U constante, es proporcional a ln (1/CB ).
2. El flux J aumenta al aumentar U .
1
3. El flux J vara con U 3 en flujo laminar y con U 0.83 en flujo turbulento.
4. El flux J aumenta al aumentar CW

la cual a su vez aumenta con P T M.
Estos resultados se muestran en forma grfica en la Figura 10.8.
10.2. FUNDAMENTOS
475
Figura 10.8: Efecto de parmetros de operacin sobre el flux. a) Concentracin,

b) Velocidad de recirculacin y c) Reynolds. Fuente: Belfort, 1987. Reproducida
c
con el permiso de John W iley and Sons. Copyright 1987.
Modelo de polarizacin en pelcula y capa de gel (Regin II)

De acuerdo con el modelo de polarizacin en pelcula (ecuacin 10.10) el
flux J puede ser incrementado aumentando la concentracin de soluto en la
membrana CW (aumentando P T M ). Sin embargo, se observa que en la Regin
II (Fig. 10.6b), existe un lmite para este tipo de correlacin.
Uno de los modelos ms empleados para la Regin II propone que en las
soluciones macromoleculares, el aumento de CW con P T M tiene un lmite CG ,
donde la solucin forma una capa de gel (Fig. 10.9). Este gel acta en serie
con las otras resistencias. Este modelo llamado Modelo de capa de gel, implica
que en la Regin II de la UF los incrementos en P T M se contrarrestan con
incrementos en la resistencia de la capa de gel, de tal manera que J se mantiene
constante. De acuerdo a lo anterior, la ecuacin (10.10) se transforma en:
Figura 10.9: Gradiente de concentracin durante la polarizacin con gel. Fuente:

c
Tutunjian, 1985a. Reproducida con el perm iso de Nature Publishing Co. Copyright 1985.
476
J = ks ln
CG
CB
(10.17)
donde CG es la concentracin lmite que es una constante para un sistema

dado. ks es el coeficiente de transferencia de masa dado por las correlaciones ya
presentadas [ecuaciones (10.11) y (10.12)].
Anlisis del comportamiento experimental mediante el modelo de polarizacin con pelcula y capa de gel (Regin II). El modelo de polarizacin de pelcula y capa de gel, conjuntamente con las ecuaciones (10.11) y
(10.12), permiten interpretar los resultados experimentales de los procesos de
UF en la Regin II:
1. J es proporcional a ln (1/CB ) cuando la velocidad de recirculacin constante.
1
2. J aumenta al aumentar U . Vara con U 3 en flujo laminar y con U 0.83 en
flujo turbulento.
Ejemplo 10.2. Clculo de CG y ks .
Los datos de flux en L/m2 h de la UF de una solucin proteica se muestran
en la Tabla 10.2.
Tabla 10.2: Datos de UF para Ejemplo 10.2.
P T M (kg/cm2 )
0.00
0.33
0.66
1.00
1.33
1.66
2.00
Concentracin % peso
1
5
10
20
00.00 00.00 00.00 0.00
18.00 17.50 17.00 7.00
33.00 30.00 21.80 7.33
47.00 36.00 22.20 7.66
50.00 36.50 22.60 8.00
52.00 37.00 23.00 8.33
54.00 37.50 23.40 8.66
Se pide: Estimar ks y CG para esta operacin.

Solucin:
En la Figura 10.10 se presentan los datos graficados en la forma de la ecuacin
10.17 (grfica semilogartmica). Se puede observar que conforme se incrementa
la concentracin CB y la P T M, se llega a una regin donde la variacin del
flux se comporta de acuerdo al modelo de pelcula de gel, en la cual el flux J
vara slo con CB y es independiente de P T M.
a) Clculo de CG . Este parmetro puede ser obtenido grficamente de la
interseccin de las curvas de la Figura 10.10 con el eje de las abscisas de tal
manera que,
10.2. FUNDAMENTOS
477
Figura 10.10: Flux vs ln CB . Datos Ejemplo 10.2. Presin transmembrana. (1)

0.33, (2) 0.66, (3) 1.00, (4) 1.33, (5) 1.66 y (7) 2.00 kg/cm2 .
CG = 30 %
b) Clculo de ks . El coeficiente est dado por la pendiente de las curvas en
la zona de formacin del gel y puede ser estimada con dos puntos sobre la recta.

L
L
28 8
= 20 2
ks =
2
32
m h
m h
La expresin del flux en la Regin II es por lo tanto:
J = 20 ln
30
CB
Se puede resumir con base a la discusin de los dos modelos anteriores, que
en la ultrafiltracin el flux J se puede controlar por medio de la P T M y la
velocidad de flujo cruzado. El flux aumenta linealmente con P T M en su fase
inicial, posteriormente empieza a disminuir la rapidez de aumento, y finalmente
cuando ocurre la polarizacin J se hace independiente de P T M y permanece
constante.
El flux puede mejorarse incrementado la velocidad del flujo cruzado, lo cual
implica un incremento en el esfuerzo cortante sobre la superficie de la membrana.
Incrustacin de la membrana
Uno de los problemas que se observa durante la operacin de un sistema
de UF es la reduccin progresiva en el flux manejable conforme aumenta el
478
tiempo de uso de las membranas. Este fenmeno llamado Incrustacin de la

Membrana debe distinguirse del fenmeno de polarizacin de la membrana.
El fenmeno de incrustacin se refiere a la interaccin de algunos solutos con
la membrana que afectan la porosidad de la misma. Los sistemas de membrana
utilizan generalmente procesos de sanitacin y limpieza con soluciones de NaOH.
La efectividad de estos procesos se mide mediante la permeabilidad con agua
normalizada (NWP de sus siglas en ingls). Tpicamente, cuando este valor
disminuye a un 60 % de su valor inicial las membranas son removidas.
Ejemplo 10.3. Concentracin por MF por lotes con flujo cruzado:
remocin de torta e incrustacin.
En un sistema de MF por lotes con flujo cruzado, conforme se obtiene el
permeado, disminuye el volumen y aumenta la concentracin de solucin en el
tanque.
El balance de soluto cuando se utiliza flujo cruzado en el sistema con CP = 0
se puede escribir como:
d
dm
(V CB ) = A
dt
dt
donde m es la masa de soluto retenida por la membrana.
Este balance est sujeto a las siguientes condiciones:
Para
J J
dm
= CB J km
dt
dm
= CB J
dt
donde k es una constante que depende del tamao y distribucin de las partculas
y el potencial de su adhesin a la membrana. El trmino km es la velocidad de
desprendimiento de la torta. El parmetro J es un flux crtico. La remocin
del gel por flujo cruzado slo es efectiva si el flux J es menor que J .
Tambin se cumple que:
Para
J > J
dV
= JA
dt
Combinando las ecuaciones anteriores se obtiene:
Para
Para
J J
J > J
dCB
Akm
=
dt
V
dCB
=0
dt
El flux se puede expresar como:

J=
P T M
P T M
P T M
=
=
(Rm + Rs )
(Rm + m)
(bRm0 + m)
10.3. EQUIPOS DE ULTRAFILTRACIN
479
donde Rm0 es la resistencia de la membrana limpia y b es un coeficiente de

incrustacin de la membrana.
En un estudio experimental de MF por lotes con flujo cruzado de levaduras
y bentonita se obtuvieron los siguientes datos (Mhurcha y Foley, 2006):
k = 4.25 103 s1
Rm0 = 7.43 1011 m1
b = 5.12
= 10.9 1014 m/kg
= 1 103 kg/ms
= 2.3 m/s
* valor sobreestimado
P T M = 105 kg/ms2
c0 = 0.5 kg/m3
A = 7.53 103 m2
V0 = 2 103 m3
J = 6 106 m/s
Se pide:
Obtener la variacin del flux de permeado y del volumen de permeado con
el tiempo de filtracin.
Solucin:
En la Figura 10.11 se presenta un programa MATLAB para la solucin del
ejemplo y en la Figura 10.12 los resultados grficos.
Figura 10.11: Programa MATLAB para la solucin del Ejemplo 10.3. a) programa principal y b) funcin.
10.3.
Equipos de Ultrafiltracin
Los equipos utilizados en los procesos con membranas generalmente operan con flujo cruzado o tangencial y presentan dos caractersticas distintivas:
480
Figura 10.12: Resultados del Ejemplo 10.3. a) Variacin del flux con el tiempo
y b) Acumulacin de volumen de permeado.
a) utilizan una membrana apropiada para el tipo de proceso y b) presentan
diferentes geometras en arreglos tipo modular (van Reis y Zydney, 2007).
El equipo modular conjuntamente con el equipo perifrico constituye la
unidad de filtracin. Parte importante del equipo perifrico es la bomba de
alimentacin y el tanque de almacenamiento. Un arreglo tpico de un sistema
de UF se muestra en la Figura 10.13.
Figura 10.13: Sistema tpico de UF por lotes. Fuente: Belter et al., 1988.
Repro-
c
ducida con el permiso de John W iley and Sons. Copyright 1988.
10.3.1.
Membranas
La parte central de los procesos con membranas es la membrana misma.

En general la membrana debe reunir algunas caractersticas importantes: a)
una alta permeabilidad hidrulica, es decir, permitir altos flujos de permeado
bajo gradientes de presin razonables, b) un peso molecular de corte preciso, es
decir, retener especies de determinado peso molecular, pero permitir el paso de
las de menor peso molecular, c) buena resistencia mecnica, qumica y trmica,
d) baja tendencia a incrustamiento, e) facilidad de limpieza, f) capacidad de
esterilizacin y g) larga vida activa.
481
Los materiales que se utilizan en la fabricacin de membranas generalmente

son derivados de polmeros naturales como la celulosa o de polmeros sintticos.
Recientemente se han desarrollado varios tipos de membranas de materiales
cermicos y metlicos.
En la Tabla 10.3 se presenta una lista de algunos materiales y caractersticas
de las membranas.
Tabla 10.3: Caractersticas tpicas de las membranas.
M ateriales:
Acetato de celulosa
Poliam ida
Polisulfona
Politetrafluro
Etileno
Polipropileno
Cermica
Polister
Estructura:
% de Porosidad
Superficial:
Tam ao de poro:
MF
UF
OI
pH
Tm
ax
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
3-10
2-12
1-14
1-14
75
130
140
1-14
1-13
-
130
140
150
X
X
X
Asimtrica
Sim trica
Asim trica
Asim trica
Sim trica
30-70
0.1 1 m
1-10
1 20 nm
10-20
0.3 3 nm
Adaptada de: Brocklebank, 1990.
c
10.3.2.
Mdulos
La filtracin en membranas en flujo cruzado se puede desarrollar en varios

tipos de configuraciones mediante mdulos que contienen las membranas. Estos
mdulos estn diseados para satisfacer las especificaciones: a) mecnicas necesarias para asegurar la separacin de las corrientes, soportar las membranas,
permitir el retrolavado y una presin de operacin razonable, b) hidrodinmicas para minimizar la cada de presin, la polarizacin, el taponamiento y la
incrustacin en la membrana y c) econmicas para proveer una alta densidad
de empaque (rea/volumen) y reducir los costos de operacin.
Los mdulos utilizados en los equipos de separacin con membrana presentan
diferentes geometras que se pueden dividir en tres tipos bsicos:
1) Mdulos de hojas: a) hoja plana, b) hoja plegada y c) hoja enrollada en
espiral.
2) Mdulos de tubos y carcaza: a) tubos normales y b) fibras huecas.
3) Mdulos dinmicos: a) cilindros giratorios, b) discos giratorios y c) sistemas vibratorios.
482
Mdulos de hoja plana

Los mdulos de hoja plana (Fig. 10.14a) son muy similares a los filtros convencionales de marcos y placas. Su principal ventaja es su versatilidad. Este
tipo de mdulos pueden trabajar a presiones mayores que los otros tipos, por lo
que son empleados para manejar soluciones viscosas. Los mdulos de hoja plana
pueden ser utilizados tanto en MF como en UF. Adems, pueden ser desmontados para su limpieza y permiten restituir hojas defectuosas. Una desventaja
es que su rea por unidad de volumen es menor en relacin a los otros tipos de
mdulos y producen un flux moderado.
Figura 10.14: a) Mdulo de UF de hoja plana. Fuente: Tutunjian, 1985b.
Repro-
c
ducida con el p erm iso de Elsevier Science Inc. Copyright 1985.
Mdulo de UF de hoja plegada. Fuente: Dziezak, 1990.
b)
Reproducida con el perm iso
c
del Institute of Food Technologiests. Copyright 1990.
Mdulos de hoja plegada

Los mdulos con membranas en forma de hoja plegada (Fig. 10.14b) permiten un arreglo tubular con rea ampliada, por lo que presentan propiedades
similares a los de hoja enrollada en espiral.
Mdulos de hoja enrollada en espiral
Los mdulos de hojas enrolladas en espiral (Fig. 10.15) utilizan un diseo
de membranas con espaciadores tipo malla separando la membrana. Este tipo
de arreglos producen un flux mayor que los de hoja plana debido a que presentan una mayor rea por unidad de volumen. Son ms difciles de limpiar y
frecuentemente debe descartarse toda la unidad aun cuando slo parte del mdulo est daado. Como consecuencia este tipo de mdulo se recomienda para
caldos relativamente limpios o en combinacin con un prefiltro.
Mdulos de tubos y carcaza
Los mdulos de tubos y carcaza presentan una geometra similar a los intercambiadores de calor de tubos, con varios tubos unidos en sus extremos a
483
Figura 10.15: Mdulo de UF de hoja enrollada en espiral. a) Cartucho y b)

Esquema de flujo. Fuente: Hanisch, 1986. Reproducida con el p erm iso de M arcel Dekker
c
Inc. Copyright 1986.
un cabezal comn (Fig. 10.16a). Normalmente la alimentacin fluye a presin

a travs del cabezal de entrada por el interior de los tubos, de tal manera que
el permeado se colecta en la parte externa de los tubos a travs de la carcaza
y el retenido sale por el extremo opuesto de los tubos a travs del cabezal de
salida. El dimetro de los tubos vara entre 0.6 y 2.5 cm. Los tubos son fabricados
utilizando polmeros o cermica, lo que les confiere una alta resistencia mecnica
y trmica. Han sido recomendados para procesar materiales viscosos y para la
obtencin de concentraciones celulares elevadas.
Mdulos de tubos de fibra hueca
Los mdulos de tubos de fibra hueca (Fig. 10.16b) son muy parecidos a los de
tubos y carcaza convencionales, sin embargo los dimetros de los tubos son muy
pequeos: de 0.02 a 0.11 cm. Entre ms pequeo sea el dimetro interno, menor
es su capacidad de manejo de slidos. Las fibras grandes (0.11 cm de dimetro)
son especialmente tiles para separar clulas y para el manejo de materiales
viscosos. Este tipo de mdulos es probablemente el ms empleado tanto en MF
como en UF, sin embargo presentan algunas limitaciones en cuanto a su rango
de operacin (presin y temperatura), as como en su facilidad de esterilizacin.
En la Figura 10.16c se presenta un esquema de flujo tpico de los mdulos de
tubos y de fibras huecas.
Mdulos dinmicos
Los mdulos dinmicos o de esfuerzo de corte aumentado, utilizan para incrementar el esfuerzo de corte una parte mvil como una membrana cilndrica
giratoria, un disco girando en las proximidades de una membrana circular fija
o la vibracin de la membrana (Fig. 10.17). Este modo de filtracin permite
484
Figura 10.16: Mdulos de membranas. a) Mdulo de tubo y carcaza, b) Mdulo

de UF de fibra hueca, cortes y fibra individual y c) Esquema de flujo. Fuente:
Dziezak, 1990. Reproducida con el p erm iso del Institute of Food Technologiests. Copyright
c
1990.
incrementar los fluxes y la selectividad de las membranas. Tambin permite

desacoplar la velocidad de alimentacin del esfuerzo cortante (Jaffrin, 2008).
En la UF clsica se utiliza un flujo tangencial y dimetros o espesores pequeos de flujo para incrementar el esfuerzo de corte y disminuir la polarizacin
en la membrana. Esta operacin requiere ms potencia de bombeo y provoca
una distribucin no uniforme de la presin transmembrana, que afecta el comportamiento ptimo del sistema.
Membranas cilndricas giratorias Los primeros sistemas de filtracin
dinmicos comerciales se basan en el uso de una membrana cilndrica girando
dentro de un cilindro concntrico fijo (Fig. 10.17a). Estos sistemas incrementan
el esfuerzo de corte sobre la membrana mediante los vrtices de Taylor que se
forman cuando la membrana sobrepasa la velocidad angular crtica (Bird et al.,
2002). La mxima rea de estos sistemas comerciales es de 2.0 m2 .
Sistemas de discos giratorios Los sistemas de discos giratorios (Fig. 10.17b)
proveen una mayor rea de filtracin y consisten en un conjunto de discos montados sobre una o varias flechas que giran entre membranas circulares de hasta
85 cm de dimetro y reas hasta de 100 m2 . Estos sistemas toleran hasta 600
kPa de presin y estn disponibles con membranas polimricas o de cermica
(Serra y Wiesner, 2000).
10.4. DISEO DE EQUIPOS DE UF
485
Figura 10.17: Mdulos dinmicos. a) Membrana cilndrica giratoria, b) Discos

giratorios y c) Sistemas vibratorios.
Sistemas vibratorios Los sistemas de procesamiento de esfuerzo de corte
aumentado por medio de vibracin (VSEP) consisten en una pila de membranas
circulares separadas por placas y mallas colectoras, que se montan sobre flechas
de torsin verticales (Fig. 10.17c) que se hacen oscilar a velocidades de 60 Hz.
El esfuerzo de corte sobre la membrana se produce por la inercia del retenido
y alcanza valores de hasta 150, 000 s1 (equivalentes a 200 G), que equivale a
10 veces del esfuerzo de corte de los sistemas convencionales. Estos sistemas se
disponen con reas hasta de 32 m2 para aplicaciones biotecnolgicas.
En la Tabla 10.4 se presenta un resumen de las principales caractersticas de
algunos de los mdulos empleados en las operaciones con membranas.
10.4.
Diseo de Equipos de UF
En el diseo de un proceso de UF se deben considerar cuatro aspectos principales:
486

Tabla 10.4: Caractersticas de los mdulos de UF.
Caracterstica
Densidad de em paque
rea (m 2 /m 3 )
Tolerancia a slidos
suspendidos
Facilidad de limpieza
Reemplazo
Ho ja
plana
M oderada
200-400
Tipo de m dulo
Ho ja
Tubo y
enrollada
carcaza
M oderada
Ba ja
300-900
150-300
Fibra
hueca
Alta
9000-30,000
M oderada
Regular
Ho jas o mdulo
Ba ja
Regular
M dulo
Ba ja
Retrolavado
M dulo
Buena
Buena
Tubos
Adaptada de: Fane y Radovich, 1990.

c
Reproducida con el p erm iso de M arcel Dekker Inc. Copyright 1990.
El objetivo de la UF.
La mecnica de fluidos del sistema.
El mtodo de operacin apropiado.
El diseo de la unidad de UF.
10.4.1.
Objetivo de la UF
Un sistema de UF puede ser empleado con distintos propsitos entre los

cuales se pueden mencionar los siguientes: a) concentracin de una solucin
diluida, b) diafiltracin de una solucin con solutos indeseables pequeos y c)
purificacin de una solucin que contiene solutos indeseables grandes.
Concentracin por lotes
En la UF donde el objetivo es la concentracin por lotes de una solucin,
la solucin retenida es el producto deseado (Fig. 10.18a). Obviamente que el
tamao de corte de la membrana debe ser seleccionado apropiadamente para
lograr este propsito.
Diafiltracin
En la diafiltracin se separan macromolculas de una solucin, de molculas
pequeas como sales, azcares o alcoholes por medio de un equipo de UF. El
permeado que sale del sistema es reemplazado con agua desionizada o buffer
(Fig. 10.18b).
Purificacin
La UF donde el objetivo es recuperar el permeado que contiene un solvente
de inters o una solucin con solutos de bajo peso molecular se conoce como
purificacin (Fig. 10.18c).
487
Figura 10.18: Esquemas de las formas de conducir una operacin de UF. a)

Concentracin por lote, b) Diafiltracin y c) Purificacin. Fuente: Tutunjian,
c
1985b. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. Copyright 1985.
Todos los derechos
reservados.
Algunos procesos combinan las operaciones descritas anteriormente, como es

el caso de la operacin de concentracin con diafiltracin.
10.4.2.
Mecnica de Fluidos
En un sistema de UF el flux es funcin de la presin transmembrana P T M

y de la velocidad del flujo cruzado. Tericamente el flux puede incrementarse
tanto como sean incrementados estos parmetros. Sin embargo, existen limitantes en cuanto a la operacin de los equipos. La mayora de los equipos de
UF deben operar abajo de 7.0 kg/cm2 de presin, mientras que los equipos de
fibras huecas slo toleran presiones de hasta 2.7 kg/cm2 .
De acuerdo a la ecuacin (10.1),
P T M =
(Pi + Po )
Pf
2
Si se supone que la presin de salida del permeado es Pf = 0, entonces la

ecuacin anterior puede rearreglarse de la siguiente forma:
P T M = Pi
P
2
(10.18)
donde: P = (Pi Po )
La ecuacin (10.18) permite optimizar la relacin de P T M con P , cuando la Pi se fija como la presin mxima de operacin del equipo. Bajo esta
condicin, al aumentar P T M, la P disminuye y por lo tanto la velocidad
del flujo cruzado del fluido. Por el contrario, al disminuir P T M , la P aumenta y por lo tanto aumenta la velocidad del flujo cruzado U. El flux ser
ptimo para una cierta combinacin de P y P T M ; visto de otra manera,
para una combinacin de Pi y Po . Esto ocurre generalmente donde se inicia la
formacin de la pelcula de gel.
488
Ejemplo 10.4. Mecnica de fluidos en UF.

Se desea optimizar el flux de un sistema de UF a partir de los datos de la
Figura 10.19a. La presin de entrada al sistema es fija e igual a 1.7 kg/cm2 .
El flujo cruzado se correlaciona con la cada presin de acuerdo a la siguiente
expresin:
Figura 10.19: Variacin del flux con P T M . a) Datos Ejemplo 10.4 con presin
de entrada fija y la velocidad de recirculacin variable y, b) Regin de operacin
factible. Adaptada de: Tutunjian, 1985b. Reproducida con el p erm iso de Elsevier Science
c
Q = 29.41 P
donde P tiene unidades de kg/cm2 y Q de L/min (rea fija).
Se pide:
a) Encontrar la regin de operacin factible.
b) La combinacin P T M y P que permita el mximo flux.
Solucin:
a) Regin de operacin factible. Al fijar la presin de entrada Pi a un valor
mximo de 1.7 kg/cm2 , tanto la P como la P T M se restringen a un rango
posible de valores, en funcin de la presin de salida Po la cual puede ser regulada
mediante la vlvula de salida.
En la Tabla 10.5 se presentan algunos valores de este rango. La Figura 10.19b
muestra la regin de operacin factible con base a estos datos.
b) Flux mximo. En la Figura 10.19a se puede observar que para cada combinacin de Pi con Po o P con P T M , existe un flux factible alcanzndose
un mximo cuando:
P = 1.02 kg/cm2 ;
489
P T M = 1.19 kg/cm2 ; mximo JA = 2.9 L/min
Tabla 10.5: Clculo de la regin de operacin factible. Datos del Ejemplo 10.4.
Pi
1.70
1.70
1.70
1.70
1.70
1.70
kg/cm2
Po
P
0.00 1.70
0.34 1.37
0.68 1.02
1.02 0.68
1.36 0.34
1.70 0.00
P T M
0.85
1.02
1.19
1.36
1.53
1.70
L/min
Q JA
50 2.30
40 2.80
30 2.90
20 2.40
10 1.70
00 0.00
En un sistema de UF tanto la regin factible de operacin como la combinacin Pi y Po que optimiza el flux, son funciones de la concentracin de la
solucin de alimentacin.
10.4.3.
Mtodos de Operacin
Los sistemas de UF pueden ser diseados para operar por lotes (con o sin
recirculacin interna) o en forma continua.
Operacin por lotes
En una operacin por lotes sin recirculacin (Fig. 10.20a), la solucin que
inicialmente est contenida en un tanque de proceso, es bombeada a la unidad de
UF y regresada al tanque. Conforme transcurre la operacin el volumen procesado disminuye hasta alcanzar la concentracin final deseada. De esta manera
la concentracin del producto en el tanque aumenta gradualmente durante el
proceso, a la vez que el flux decrece proporcionalmente a sta.
La operacin por lotes con recirculacin interna (Fig. 10.20b) emplea dos
bombas. Una de recirculacin para proveer la velocidad de flujo cruzado ptima
y la bomba de alimentacin. La velocidad de alimentacin debe mantenerse alta,
de tal manera que la concentracin en el circuito de recirculacin sea cercana a la
concentracin del tanque alimentador. Esto generalmente se logra manteniendo
una relacin de 20 veces la velocidad de alimentacin a la de permeacin.
Cuando al tanque de proceso se le alimenta lquido para lavar la solucin
la operacin por lotes respectiva, se convierte en una operacin por lotes de
diafiltracin. La desventaja principal de los sistemas por lotes es que generalmente requieren ms tiempo de residencia (lo cual puede afectar al producto) y
tanques de proceso ms grandes. Este tipo de operaciones tambin pueden ser
tiles en el fraccionamiento de caldos (Lightfoot et al., 2008).
490
Figura 10.20: Esquemas de UF. a) UF intermitente sin recirculacin. Fuente:

c
Tutunjian, 1985b. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. Copyright 1985.
Todos
los derechos reservados. b) UF intermitente con recirculacin. Fuente: Gravatt y
c
Molnar, 1986. Reproducida con el p erm iso de M arcel Dekker Inc. Copyright 1986.
Todos los
Operacin continua
La diferencia entre una operacin por lotes y una continua es que en esta
ltima, el retenido es retirado continuamente del sistema a la concentracin final
deseada (Fig. 10.21a). En estado estacionario el flux es constante y mnimo. Para
contrarrestar esta limitacin de la operacin continua, los sistemas utilizados son
generalmente de etapas mltiples (Fig. 10.21b).
Figura 10.21: UF continua. a) Una etapa y b) Etapas mltiples. Adaptada de:

c
Tutunjian, 1985b. Reproducida con el p erm iso de Elsevier Science Inc. Copyright 1985.
10.4.4.
Diseo de la Unidad de UF
El problema del diseo de la unidad de UF consiste en determinar el rea

de UF necesaria para procesar una cantidad de una solucin de concentracin
491
conocida en un tiempo dado, hasta obtener una concentracin final determinada.

Generalmente para situaciones de inters prctico, la prediccin de coeficientes
de transferencia de masa y del flux es limitada, por lo que el diseo requiere de
datos experimentales especficos del sistema.
En el caso de los sistemas de diafiltracin otro parmetro importante es la
cantidad de solvente de lavado que es necesario agregar.
A continuacin se presentan las ecuaciones de diseo de algunos arreglos
tpicos de los sistemas de UF.
Concentracin por lotes
En un sistema de concentracin por lotes el volumen inicial de solucin Vo
con una concentracin inicial CBo , se procesa hasta alcanzar un volumen final
Vf con una concentracin final CBf , obtenindose un volumen de permeado VP .
Un balance de soluto en el sistema, considerando la concentracin de soluto
en el permeado CP constante, se puede expresar como:
d
dV
(V CB ) = CP
dt
dt
(10.19)
La ecuacin anterior integrada entre los lmites

V = Vo
CB = CBo
V =V
CB = CB
conduce a:
V = Vo exp
CB
CBo
dCB
(CB CP )
(10.20)
La ecuacin (10.19) combinada con la expresin del flux dada por:

1 dV
(10.21)
A dt
donde A es el rea de UF, puede ser integrada entre 0 y t, y expresada con
ayuda de la ecuacin (10.20) de la siguiente forma:
C
B
dC
B
dCB
exp
C
(CB CP )
Bf
At
CBo
=
(10.22)
Vo
J(CB CP )
J=
CBo
492
Cuando la retencin es total CP = 0, entonces la ecuacin (10.22) se simplifica a:

At
= CBo
Vo
1
CBo
1
CBf
1
d
J
1
CB
(10.23)
La ecuacin (10.23) puede ser utilizada para calcular el rea necesaria para
realizar una concentracin de CBo a CBf en un tiempo t o para calcular dicho
tiempo dada el rea de UF disponible. Este clculo requiere la evaluacin de la
parte derecha de la ecuacin (10.23), lo cual puede realizarse utilizando un programa adecuado o calculando el rea bajo la curva de los datos experimentales
graficados como:

1
1
vs
J
CB
Para realizar estudios de escalamiento tambin puede utilizarse la expresin
experimental de la variacin del flux con CB obtenida en equipos de laboratorio,
conjuntamente con la ecuacin 10.23.
Ejemplo 10.5. UF por lotes.
Se desea concentrar de 2 a 10 % en peso 10 m3 /dia de una solucin de un
polisacrido. Como el tiempo muerto (descarga, limpieza, etc.) de la unidad es
de 4 h, el tiempo de operacin es de 20 h.
Se realizan pruebas de laboratorio utilizando una unidad tubular de 0.012
1.2 m, por considerarse ms conveniente este tipo de arreglo para el flux proyectado, y por las ventajas que ofrece para su limpieza por retrolavado.
Los datos de laboratorio muestran que para una P = 1.5 kg/cm2 el gasto
volumtrico en la recirculacin es de 8 L/min y el flux en L/m2 h est dado
por la expresin:

15
J = 8 ln
CB
Se pide calcular:
a) El rea de UF necesaria.
b) El nmero de tubos necesarios (diseo modular).
c) El flux promedio.
Solucin:
a) Clculo de rea. Con los datos y la ecuacin (10.23) se obtiene la expresin:
1
1

2
2
1
dx
1

d
= 1000
A = 1000
15
CB
8 ln (15x)
8 ln
1
1
10
10
CB
493
En la Figura 10.22 se muestra la curva que se obtiene al graficar 1/J vs 1/CB .

La integral de la expresin anterior es igual al rea bajo esa curva dentro de los
lmites, de tal manera que:
Figura 10.22: Curva de (1/J) vs (1/CB ). Datos de Ejemplo 10.5.

A = 1000 0.04 m2 = 40 m2
b) Clculo del nmero de tubos N:
N=
40 m2
rea total
= 884 tubos
=
0.012 m 1.2 m
rea por tubo
c) Clculo del flux promedio. Mediante un balance de soluto se obtiene

primero el volumen final de la solucin:
Vo Co = Vf Cf
de tal manera que,
10, 000 2 L
= 2000 L
10
con estos datos se puede calcular el flux promedio:
Vf =
Jprom =
(10, 000 2000) L

L
= 10
40 m2 20 h
m2 h
Concentracin continua
Los sistemas de UF continuos se utilizan para procesar volmenes considerables o cuando se tiene una alimentacin continua.
494
Debido a que un sistema continuo opera todo el tiempo a la concentracin

de salida deseada, si el sistema consta de una sola etapa, el rea de UF necesaria
es mucho mayor que si se opera en varias etapas en cascada. Debido a esto los
sistemas de multietapas continuas son los ms utilizados.
Si un sistema de UF consta de varias etapas de igual rea, conforme la
concentracin de soluto aumenta en cada etapa el flux de permeado disminuye.
Entre ms etapas presenta la cascada mayor es el flux promedio en sta. Sin
embargo, el incremento en el flux promedio disminuye conforme aumenta el
nmero de etapas, tendiendo a alcanzar el flux promedio de un sistema por
lotes. Generalmente es ms econmico utilizar de tres a cinco etapas (Tutunjian,
1985b).
Algunas cascadas de UF operan con reas diferentes en arreglos tipo pirmide,
donde el rea por etapa disminuye conforme la concentracin de soluto aumenta,
es decir el volumen de solucin disminuye.
En el sistema de UF continua que se muestra en la Figura 10.23, cada etapa
est constituida por una o varias unidades de UF en serie o paralelo. El problema de diseo consiste en determinar el rea de UF de cada etapa, para un
flujo de entrada Fo , con una concentracin de la solucin de entrada Co y una
concentracin de salida deseada Cn .
Figura 10.23: UF continua de etapas mltiples.

Si se supone un coeficiente de retencin = 1 para todas las etapas, el rea
de cada etapa puede calcularse utilizando balances de masa solamente.
El flujo Fn puede calcularse efectuando un balance de masa de soluto en
toda la cascada, de tal manera que,
Fn =
Fo Co
Cn
El flux en la etapa n est dado por una expresin de la forma:

CG
Jn = ks ln
Cn
(10.24)
(10.25)
El flujo de permeado Pn en la etapa n se puede calcular para un rea A de

diseo con,
Pn = AJn
(10.26)
495
Efectuando un balance global en la etapa n se puede calcular el flujo de la

etapa previa,
(10.27)
Fn1 = Pn + Fn
Por medio de un balance de soluto en la etapa n se calcula la concentracin

de soluto en la etapa previa,
Cn1 =
Fn Cn
Fn1
(10.28)
Con el sistema de ecuaciones (10.24)-(10.28), en forma iterativa descendente

se calcula el nmero de etapas necesarias hasta alcanzar el valor de la concentracin de soluto de la solucin de entrada, cuando se conoce el rea de cada
etapa; o bien el rea necesaria para un nmero de etapas prefijado.
Ejemplo 10.6. Comparacin de UF por lotes y continua.
Se desea procesar 5000 L/h de una solucin proteica para concentrarla de 2 a
20 % en peso. Las pruebas experimentales muestran que el flux puede estimarse
con la expresin

30
J = 20 ln
CB
Se pide calcular:
a) El rea necesaria para un procesamiento por lotes y el flux promedio.
b) El rea necesaria para un procesamiento continuo de 5 etapas y el flux
promedio.
c) La variacin del rea total de la UF con el nmero de etapas.
Solucin:
a) rea UF por lotes. Utilizando la ecuacin (10.23) se puede llegar a la
siguiente expresin:
1
2
Ap or lotes
Ap or lotes
= 10, 000
1
20
20 ln
1

d
30
CB
1
CB
= 10, 000 0.0134 m2 = 134 m2
El flux promedio est dado por:

5000 2 L
5000
L
20
h
= 33.58 2
Jprom =
134 m2
m h
496
b) El rea/etapa para 5 etapas y el flux promedio. En la Tabla 10.6 se

presentan los clculos utilizando las ecuaciones (10.24)-(10.28), donde la relacin
rea/etapa = 32.875 m2 satisface la condicin de diseo.
Tabla 10.6: rea para procesamiento continuo en 5 etapas. Datos del Ejemplo
10.6.
n
5
4
3
2
1
0
Fn
(L/h)
500.00
766.59
1314.17
2216.14
3461.69
5000.00
Cn
( % en peso)
20.00
13.04
7.61
4.51
2.89
2.00
Jn
(L/m2 h)
8.11
16.66
27.44
37.89
46.81
Pn
(L/h)
266.59
547.57
901.97
1245.55
1538.79
Total
4,500.00
El rea total es:

Acont = (5)(32.875) m2 = 164.375 m2
El flux promedio es:
L
L
h = 27.38
=
164.375 m2
m2 h
4500
Jprom
c) Variacin del rea total. Utilizando el procedimiento del inciso b) se realizan los clculos para obtener la Tabla 10.7.
Tabla 10.7: Clculos para diferentes nmero de etapas. Datos Ejemplo 10.6.
Nmero de
etapas totales
1
2
3
5
10
rea por
etapa (m2 )
555.00
119.22
63.98
32.88
14.77
rea
total (m2 )
555.00
238.44
191.94
164.37
147.74
Flux promedio
(L/m2 h)
8.11
18.87
23.44
27.38
30.45
La Figura 10.24 muestra estos resultados en forma grfica.
497
Figura 10.24: Variacin del rea total de UF con el nmero de etapas. Datos del
Ejemplo 10.6.
Diafiltracin por lotes: a volumen constante
En la diafiltracin por lotes a volumen constante (Fig. 10.18b) se alimenta
continuamente solucin de lavado al tanque de alimentacin y se mantiene el
volumen del retenido constante, de tal manera que el flujo de alimentacin es
igual al flujo de permeado.
Considerando que el soluto de inters es totalmente rechazado por la membrana y la impureza totalmente permeable, el balance del soluto que se desea
eliminar en el sistema, est dado por:
VR
dCI
= P CI
dt
(10.29)
donde:
VR : Volumen retenido en el tanque. [L3 ].
CI : Concentracin de impureza en el tanque. [M/L3 ].
P : Flujo de permeado. [L3 /t].
Dado que en la operacin VR es constante, el flujo de permeado puede
igualarse al flujo de solucin de lavado, entonces:
dCI
dVD
= CI
dt
dt
donde VD es el volumen de solucin de lavado de diafiltracin.
La ecuacin 10.30 puede integrarse con los lmites,
VR
CI
CI
= CIo
= CI
obtenindose la expresin siguiente:
VD = 0
VD = VD
(10.30)
498

VD
CI = CIo exp
VR
(10.31)
La ecuacin anterior puede ser rearreglada expresando el flux de permeado

como:
J=
VD
At
(10.32)
de tal manera que,

JAt
CI = CIo exp
VR
(10.33)
dado que el flux de permeado tambin puede expresarse de la siguiente forma:

CG
J = ks ln
(10.34)
CB
al combinar las ecuaciones (10.33) y (10.34) se obtiene:

CG
ks At ln CB
CI = CIo exp
VR
(10.35)
La ecuacin (10.35) puede ser utilizada para calcular el rea de diafiltracin

necesaria para lograr un determinado grado de eliminacin de impurezas.
Ejemplo 10.7. Diafiltracin por lotes a volumen constante.

Se desea purificar por diafiltracin por lotes a volumen constante 5000 L de
una solucin que contiene 15 % en peso de protenas y 3 % de sal (OSullivan et
al., 1984). El flux del sistema est dado por:

L
30
J = 20 ln
CB
m2 h
Se pide:
a) Calcular el efecto sobre la pureza de la solucin, de la razn del volumen
de diafiltracin a volumen de retenido o ndice de lavado.
b) Calcular el rea de diafiltracin necesaria para lograr una pureza del 99 %
en un tiempo de 10 h.
c) El volumen de solucin de lavado de diafiltracin para el inciso b).
Solucin:
a) Variacin de la pureza con el ndice de lavado. Utilizando la ecuacin
(10.31) se pueden obtener los resultados que se presentan en la Tabla 10.8.
b) rea de diafiltracin. Utilizando la ecuacin (10.35) y los datos se tiene
que:
499
Tabla 10.8: Efecto del volumen de diafiltracin sobre la concentracin de impurezas. Datos del Ejemplo 10.7.
VD /VR
CI
CB
CI + CB
0
1
2
3
4
3.00
1.10
0.41
0.15
0.05
15
15
15
15
15
18.00
16.10
15.41
15.15
15.05
CB
CI + CB
0.833
0.932
0.973
0.990
0.996
Pureza =
30
20(A)(10 h) ln 15
0.05 = exp
5000 L
de donde se obtiene:
L
m2 h
A = 108 m2
c) Volumen de diafiltracin. La ecuacin (10.32) puede ser usada para calcular VD , de tal manera que:

L
30
108 m2 (10 h) = 15, 000 L
VD = JAt = 20 ln
2
15 m h
Diafiltracin por lotes repetida
Una forma alternativa de diafiltracin por lotes consiste en adicionar un
volumen de lquido de lavado al tanque de proceso que contiene un volumen VR
de solucin, y lavar hasta alcanzar nuevamente el volumen VR . Esta operacin
se repite hasta alcanzar la pureza deseada.
El balance de masa para esta operacin cuando la impureza es totalmente
permeable se puede expresar como:
donde:
CIn
1
n
=
CIo
VL
1+
VR
CIn : Concentracin de impurezas despus de n lavados.
(10.36)
500
CIo : Concentracin inicial de impurezas.

VL : Volumen de lquido de lavado empleado.
n: Nmero de lavados.
VR : Volumen de retenido.
Diafiltracin continua en cascada
En la diafiltracin continua en cascada el lquido de lavado se adiciona continuamente en cada etapa (Fig. 10.25). Este tipo de arreglo es til para procesar
volmenes considerables o cuando por inestabilidad del producto se requieren
tiempos de operacin cortos.
Figura 10.25: Diafiltracin continua en cascada.

Cuando la concentracin de la especie retenida es constante, existe un flux
constante en cada etapa (flujo de lquido de lavado igual al flujo de permeado).
Adems, si la membrana no retiene la impureza, la concentracin de sta a la
salida de cada etapa y en el permeado es la misma, de tal manera que el balance
de masa para la primera etapa puede ser expresado (con Q = P ) como:
F CIo = F CI1 + QCI1
(10.37)
o bien como:
CIo

CI1 =
Q
1+
F
La concentracin de soluto a la salida de la etapa n puede ser expresada

como:
donde:
CIo
n
CIn =
Q
1+
F
(10.38)
501
CIn : Concentracin de impureza en la etapa n.

Q: Flujo de lquido de lavado.
F : Flujo de alimentacin (retenido).
P : Flujo de permeado.
La ecuacin (10.38) tambin puede expresarse como:
CIo
n
CIn =
VD
1+
VR
(10.39)
donde VD es el volumen de lavado alimentado a una etapa y VR el volumen de

retenido alimentado al sistema en un tiempo dado.
Como el flux de permeado en cada etapa est dado por:
VD
At
la ecuacin (10.39) se puede rearreglar de la siguiente forma:

1/n
CIo
1 VR
CIn
(10.40)
At =
J
donde A es el rea de UF por etapa.
El producto At es mnimo cuando el lado derecho de la ecuacin (10.40) es
mnimo.
De acuerdo a la ecuacin (10.39) al aumentar el ndice de lavado VD /VR se
incrementa la purificacin. De acuerdo a la ecuacin (10.40) el rea necesaria
para efectuar una determinada purificacin disminuye al incrementar el nmero
de etapas, o bien el incremento del nmero de etapas reduce la cantidad de
lquido de lavado y el rea necesaria por etapa.
J=
Ejemplo 10.8. Comparacin entre la diafiltracin por lotes y la

continua.
Se desea efectuar un anlisis comparativo entre la diafiltracin por lotes y la
continua.
Se pide: Determinar que operacin requiere menor volumen de lavado (menor
rea) para alcanzar un mismo porcentaje de eliminacin de impurezas.
Solucin:
Se pueden utilizar las ecuaciones (10.31) y (10.39) para efectuar este anlisis,
definiendo las expresiones del grado de eliminacin de impurezas siguientes:
Para la operacin por lotes:

CI
VD
CIo CI
=1
= 1 exp
CIo
CIo
VR
502
Para la operacin continua:

CIn
CIo CIn
=1
= 1
CIo
CIo
es:
1
n
VD
1+
VR
De acuerdo a lo anterior si VDT /VR = 2 el % de eliminacin de impurezas

Operacin por lotes:

1 e2 100 = 86.5 %
Operacin continua 1 etapa:

1
1
100 = 66.7 %
(1 + 2)1
Operacin continua 2 etapas:
Operacin continua 3 etapas:
1
2 100 = 75.0 %
2
1+
2
1
3 100 = 78.4 %
2
1+
3
En la Tabla 10.9 se presentan los clculos para otras relaciones de VDT /VR
los cuales se muestran en forma grfica en la Figura 10.26.
Es necesario hacer notar que VDT es el volumen total de lquido de lavado,
por lo que en el caso de la operacin continua dicho volumen se reparte equitativamente entre las etapas. La operacin por lotes es la que requiere menor
volumen de lavado (rea), entonces cuando sto sea el objetivo de la operacin
debe seleccionarse este tipo de operacin.
Diafiltracin a contracorriente
En la diafiltracin a contracorriente (Fig. 10.27) es posible lograr una mayor purificacin con menos lquido de lavado, sin embargo, esto depende de la
concentracin alcanzable de la especie no permeable (Fane y Radovich, 1990).
503
Figura 10.26: Comparacin de diafiltracin intermitente y continua. Datos del

Ejemplo 10.8. (L) intermitente, (1) continua 1 etapa, (2) continua 2 etapas y
(3) continua 3 etapas.
Operaciones combinadas: concentracin-diafiltracin
Algunos caldos requieren tanto ser concentrados como lavados, en estos casos
se requiere decidir cuando efectuar la diafiltracin. Si sta se inicia con el caldo
inicial, el flux se maximiza, sin embargo la cantidad de lquido de lavado tambin
es la mxima bajo estas condiciones (ecuaciones 10.31 o 10.39). Por otro lado,
si el caldo se concentra al valor deseado y posteriormente se lava, la cantidad de
lquido de lavado disminuye, sin embargo el flux tambin disminuir dado que
ste vara inversamente a la concentracin del soluto impermeable CB (ecuacin
10.34). Este comportamiento origina un problema de optimizacin, donde la
diafiltracin deber efectuarse en un punto intermedio entre la concentracin
inicial y final de retenido.
Ejemplo 10.9. Operaciones combinadas de UF.
Se desea concentrar 10 veces un volumen de 1000 L de un caldo que contiene
2 % en peso de protena y 5 % en peso de sales, de tal manera que se obtenga
una concentracin final de 20 % en peso de protena. Se desea tambin reducir la
concentracin de sales al 0.05 %. El flux para el sistema est dado por la relacin
experimental.

27
L
JA = 500 ln
CB
h
Se pide: Encontrar el tiempo de diafiltracin ptimo.
Solucin:
Empleando la ecuacin (10.31) se puede calcular la relacin del volumen de
lquido de diafiltracin a volumen del caldo.
504
Tabla 10.9: Comparacin de diafiltracin intermitente y continua. Datos del

Ejemplo 10.8.
VDT /VR
0
2
4
6
8
10
% de eliminacin de impurezas
Intermitente
Continua
1
2
3
0.0
0.0
0.0
0.0
86.5
66.7 75.0 78.4
98.2
80.0 88.9 92.1
99.8
85.7 93.8 96.3
100.0
88.9 96.0 98.0
100.0
90.9 97.2 98.8
Figura 10.27: Diafiltracin a contracorriente. Fuente: Fane y Radovich, 1990.

c
Reproducida con el p erm iso de M arcel Dekker Inc. Copyright 1990.
VD
= ln
VR
CIo
CI
= ln
5
0.05
= 4.6
Esta relacin debe ser utilizada independientemente del volumen de caldo

VR . Por otro lado, VR depende del grado de concentracin previa a la diafiltracin. Utilizando la expresin de flux se puede calcular el tiempo de diafiltracin de acuerdo a la siguiente expresin:
t=
VD
=
JA
4.6VR

27
500 ln
CB
La ecuacin anterior puede expresarse en trminos de X veces que se concentra la solucin original de 1000 L y 2 % de protena.
505

1000
4.6
X

t=
27
500 ln
2X
En la Tabla 10.10 se muestra el efecto del factor de concentracin sobre los
diferentes parmetros.
Tabla 10.10: Operaciones combinadas. Datos del Ejemplo 10.9.
X
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
VR (L)
1000.00
500.00
333.33
250.00
200.00
166.67
142.86
125.00
111.11
100.00
90.91
VD (L)
4600.00
2300.00
1533.33
1150.00
920.00
766.67
657.14
575.00
511.11
460.00
418.18
CB ( %)
2.00
4.00
6.00
8.00
10.00
12.00
14.00
16.00
18.00
20.00
22.00
JA (L/h)
1301.34
954.77
752.04
608.20
496.63
405.47
328.39
261.62
202.73
150.05
102.40
t (h)
3.53
2.41
2.04
1.89
1.85
1.89
2.00
2.20
2.52
3.07
4.08
La Figura 10.28 muestra la variacin del tiempo de filtracin con el factor

de concentracin, observndose un mnimo en X = 5 con t = 1.85 h.
Figura 10.28: Operacin de UF combinada. Datos del Ejemplo 10.9.

Los resultados anteriores conducen a proponer el siguiente esquema de concentracin - diafiltracin:
506
1. Concentrar 5 veces hasta 10 % de protena y 5 % de sales.

2. Diafiltrar hasta 0.05 % de sales.
3. Concentrar 2 veces hasta 20 % de protena.
Se supone que el tiempo total de concentracin no se afecta por el esquema
de diafiltracin que se adopte.
10.5.
Sumario
La ultrafiltracin se utiliza para concentrar y purificar caldos biolgicos mediante el uso de membranas especializadas para lograr la separacin deseada.
Los equipos de ultrafiltracin presentan caractersticas distintivas en arreglos
modulares de varios tipos que operan bajo la modalidad de flujo cruzado de la
alimentacin. Las operaciones pueden ser efectuadas en forma intermitente o
continua ya sea para concentrar, purificar o diafiltrar una solucin.
El diseo de los equipos de ultrafiltracin est basado en una combinacin
de la teora y la experimentacin, para estimar reas de los equipos, las etapas
necesarias o el tiempo requerido de un proceso.
10.6. PROBLEMAS
10.6.
507
Problemas
10.1. UF con polarizacin y gel. En la concentracin de una solucin

de Factor VIII antihemoflico utilizando mdulos de fibra hueca (Mitra y Ng,
1986), se obtuvieron los siguientes datos:
CB (mg/mL)
5
10
20
30
40
50
J (mL/cm2 s) 105
15.1
12.0
11.0
8.5
7.0
6.5
Se pide: Estimar ks y CG .
10.2. Diafiltracin ptima. Demostrar que la concentracin de un soluto
impermeable para la cual el tiempo de diafiltracin es mnimo en un proceso
combinado, est dada por:
CG
e
donde e es la base de los logaritmos naturales.
C=
10.3. Concentracin y diafiltracin.

una solucin proteica del 2 al 15 % en peso
veces. El tiempo de proceso es de 12 horas y
es:

40
J = 12 ln
CB
Se desea concentrar 75, 000 L de

y reducir su contenido de sales 5
la expresin experimental del flux
L
m2 h
Se pide:
a) Calcular el rea mnima para una operacin por lotes a volumen constante.
b) Calcular el rea total para una operacin continua en cascada con 3 etapas
de igual rea.
Resp. a) 321 m2 y b) 410 m2 .
10.4. UF en fibras huecas. Al procesar un lote de 2.9 L de un caldo
que contiene 23.77 g/L de B. megatherium en una unidad de fibra hueca de
0.0316 m2 de rea, la solucin se concentra 5.3 veces en 14 min.
Se pide:
a) Calcular la concentracin final del caldo.
b) Calcular el flux promedio de la operacin.
Resp. a) 0.547 L y b) 319 L/m2 h.
508
10.5. UF en paralelo. Una planta produce Cefamicina C mediante una

fermentacin a un ritmo de 28 lotes de 57, 000 L cada semana. El caldo con
slidos en suspensin se procesa en un sistema que consta de cuatro unidades
de UF de 268 m2 cada una. El flujo de permeado promedio que produce cada
unidad es de 76 L/min. El coeficiente de retencin de la Cefamicina C en la
unidad puede considerarse igual a cero.
Para obtener una recuperacin del 98 % de Cefamicina la operacin se efecta
en dos pasos: i) primero se reduce el volumen del caldo a la tercera parte y ii)
posteriormente se diafiltra a la velocidad final de permeacin del primer paso.
Se pide:
a) El tiempo requerido para procesar cada lote considerando un tiempo muerto de cuatro horas por da.
b) El flujo que es procesado por unidad.
c) El tiempo necesario para el primer paso del proceso.
d) El porcentaje de recuperacin de Cefamicina C en el primer paso.
e) El volumen de diafiltracin.
f) El flujo de permeado por unidad en la diafiltracin.
Resp. a) 5 h/lote, b) 47.5 L/min, c) 125 min, d) 66 %, e) VD = 53, 455 L y
f) JA = 74.24 L/min.
10.6. UF tubular. En una unidad tubular de UF donde se concentra a
razn de 2 L/min una solucin que contiene 30 mg/L de una protena de peso
molecular de 300,000 Da, el flux est dado por:

cm3
100
J = 5 104 ln
CB
cm2 s
La presin de entrada a la unidad es de 2 atm. El tubo presenta un dimetro
interno de 2 cm y una longitud de 50 cm. La cada de presin a lo largo del tubo
est dada por:
P =
0.001 LQ2
d5
donde:
P : cada de presin en atmsferas; L: longitud del tubo en cm; Q: flujo
cruzado en cm3 /s; d: dimetro del tubo en cm.
Se pide calcular:
a) La presin a la salida del tubo.
b) La cada de presin transmembrana.
c) El flux de permeado.
Resp. a) 0.264 atm, b) 1.132 atm y c) 146 L/m2 h.
10.7. Estudio comparativo. Se desea comparar dos tipos de membranas
para desalar y concentrar una solucin de proteasas (Ghose, 1990). Los coeficientes de retencin de las membranas son los siguientes:
10.6. PROBLEMAS
509
Membrana
PM-10
PM-30
Soluto
Proteasas
Sales
Proteasa
Sales
Coeficiente
0.99
0.00
0.80
0.00
El volumen a procesar es de 102 m3 con una concentracin de 0.1 kg/m3

de proteasas y 4 102 mol/m3 de NaCO3 .
Se pide determinar para cada tipo de membrana:
a) El volumen necesario de agua destilada para eliminar el 99 % de sales por
diafiltracin a volumen constante.
b) Las prdidas de proteasas durante la diafiltracin.
c) La concentracin de proteasas al final de la diafiltracin.
d) Las prdidas de proteasas al concentrar 10 veces la solucin diafiltrada.
e) El porcentaje de prdidas totales de proteasas.
Respuestas para la membrana PM-10.
Resp. a) 4.6 102 m3 , b) 4.5 105 m3 , c) 0.0955 kg/m3 y e) 6.69 %.
10.8. UF de suero. Se utiliza una unidad tubular de UF para concentrar
suero de leche. En ausencia de protena se puede obtener un flux en la membrana
de 100 L/m2 h, cuando la presin transmembrana es de 0.4 atm. Las protenas
del suero tienen una difusividad promedio de 4 107 cm2 /s y producen una
presin osmtica en atm que se correlaciona con la ecuacin de Jonsson,
= 4.4 103 C 1.7 106 C 2 + 7.9 108 C 3
donde C es la concentracin de protena en g/L. El coeficiente de transferencia

de masa en el sistema se ha estimado en 7.8 104 cm/s.
Se pide:
a) Calcular el coeficiente de permeabilidad Lp para el transporte de agua a
travs de la membrana.
b) Calcular el efecto de la presin transmembrana sobre el flux si la concentracin de protena es de 10 g/L y la protena es rechazada totalmente por la
membrana.
Resp. a) 250 L/m2 hatm y b) pista: graficar J en el intervalo de 10 a 100
L/m2 h vs P T M (atm).
10.9. Concentracin de leche. Una aplicacin industrial de la ultrafiltracin es la concentracin de leche para la fabricacin de quesos tipo mozzarella,
feta, brie, cottage, entre otros.
Se ha encontrado que toma 24.7 min procesar 1, 000 L de leche utilizando
100 m2 de membrana a una velocidad promedio del fluido de 100 cm/s, cuando
el flux es independiente de la presin transmembrana.
Se pide: Calcular la velocidad necesaria del fluido si se reprograma la operacin para procesar los 1, 000 L de leche en 60 min.
Resp. 6.97 cm/s.
510
10.10 Escalamiento de UF. Durante la elucin de una columna de intercambio inico se obtiene una solucin que contiene 1.5 g/L de la protena
recombinante RP-I. Se desea concentrar esta solucin hasta 20.0 g/L, en una
operacin de UF por lotes con flujo tangencial en una membrana de polisulfona
de tamao de corte de 30, 000 Da.
A nivel laboratorio en una membrana de 100 cm2 se produce un flux de 100
L/m2 h a la concentracin inicial de la solucin. Este flujo no se increment
cuando se elev la presin transmembrana a ms de 5 atm, cuando la velocidad
del fluido era 1.0 m/s. La literatura sugiere que al incrementarse la concentracin
en la solucin a las mismas condiciones de operacin el flux se hace cero cuando
la RP-I alcanza 200 g/L.
Para el desarrollo del proceso se cuenta con un equipo piloto de UF de 1.0
m2 de rea, que puede ser operado a la mismas condiciones que el equipo de
laboratorio.
Se pide:
a) Calcular el promedio del flux inicial y final, durante la concentracin de
RP-I de 1.5 a 20.0 g/L en el equipo piloto.
b) Estimar el tiempo necesario para concentrar 100 L de solucin en el equipo
piloto.
Resp. a) 61.5 L/m2 h y b). 1.2 h.
10.7. BIBLIOGRAFA
10.7.
511
Bibliografa
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Captulo 11
Electroforesis
11.1.
Introduccin
Electroforesis es el movimiento de las partculas cargadas contenidas en un

medio debido a la influencia de un campo elctrico. La electroforesis constituye
una de las tcnicas ms poderosas para la purificacin de molculas biolgicas.
Gran parte de la teora y de los equipos de electroforesis han sido desarrollados para ser utilizados en la separacin de protenas globulares, sin embargo
pueden ser aplicados igualmente a otro tipo de protenas, as como a cidos
nucleicos, clulas o partculas coloidales.
En la separacin de protenas por medio de un campo elctrico, la carga
y la naturaleza anfotrica de stas juega un papel fundamental. Sin embargo,
existen otros factores tanto microscpicos como macroscpicos que afectan el
movimiento de una partcula en un campo elctrico, que han conducido al desarrollo de diferentes formas y tcnicas para el desarrollo de las separaciones
electroforticas. Estos aspectos fundamentales de la electroforesis se revisan en
la seccin 11.2 de este captulo.
La electroforesis no est limitada a la escala analtica. Actualmente existen
varios tipos de equipo en diversos arreglos que permiten el uso de esta tcnica
a escala preparativa. En la seccin 11.3 se presenta una descripcin general de
este tipo de equipos.
La seccin 11.4 presenta una discusin sobre los principios bsicos del diseo
de equipos de electroforesis.
11.2.
Fundamentos
La forma ms sencilla de realizar una operacin de electroforesis es el mtodo de electroforesis de zona (Fig. 11.1). En este mtodo se coloca una pequea
banda de muestra de la solucin que contiene el soluto de inters, sobre una
matriz generalmente rectangular, de celulosa, almidn, agar o poliacrilamida, la
514
CAPTULO 11. ELECTROFORESIS
cual se encuentra inmersa en un electrolito que sirve como buffer. Dichas matrices tienen la propiedad de constituir medios porosos altamente hidratados, que
proporcionan resistencia mecnica y disminuyen los efectos del calor generado
por el paso de corriente al aplicar el gradiente de potencial a la celda.
En la electroforesis de zona cada componente de la mezcla se mueve a diferente velocidad, separndose los componentes de la mezcla sobre la matriz. Cuando
esta tcnica se utiliza con fines cualitativos, despus de un tiempo apropiado para desarrollar la electroforesis, las matrices son teidas para observar los
componentes de la muestra.
Figura 11.1: Electroforesis de zona en un gel anticonvectivo. Fuente: Ivory, 1990.

c
Reproducida con el permiso de M arcel Dekker Inc. Copyright 1990.
En la discusin de la operacin de electroforesis es importante considerar

cuatro aspectos fundamentales:
La naturaleza de la carga de la partcula que se mueve en el campo elctrico.
La velocidad de migracin de la partcula que es el campo de estudio de
la teora electrocintica.
Los fenmenos de dispersin de la muestra que se observan en las operaciones electroforticas.
Las tcnicas y diversas formas en que es posible realizar una operacin
electrofortica.
11.2.1.
Carga y Punto Isoelctrico de las Protenas
En las protenas su carga se origina principalmente de la ionizacin de sus

numerosos grupos amino y carboxilo. Los grupos amino N H2 en medio ambientes cidos son protonados produciendo grupos amonio NH+
3 . Los grupos
carboxlicos COOH en medios ambientales bsicos son ionizados para formar
grupos carboxilatos COO .
11.2. FUNDAMENTOS
515
Tal como se muestra en la Figura 11.2, la carga neta de una protena depende
entre otros factores del pH al que sta se encuentre. A un pH relativamente
bajo existen ms grupos NH+
3 y COOH y la protena tiene una carga neta
positiva; a un pH relativamente alto la protena tiene ms grupos NH2 y
COO y se encuentra cargada negativamente. Existe un pH particular para
cada protena donde la carga neta de sta es cero, a este pH se le conoce como
punto isoelctrico.
La carga que adquiere una protena en determinado pH, as como el punto
isoelctrico de sta, son dos propiedades que se utilizan para la correcta separacin electrofortica de protenas.
Figura 11.2: Cambio de la carga neta de un protena con el pH. El punto isoelctrico en este caso se alcanza a pH = 4.0.
11.2.2.
Teora Electrocintica
La velocidad de migracin de un soluto a travs de un lquido conductor por

la accin de un campo elctrico, despreciando efectos gravitacionales y difusivos,
est influenciada por algunos fenmenos fsicos microscpicos como: la carga de
la partcula, la fuerza de arrastre que se opone al movimiento de la partcula,
y las fuerzas de relajacin y de retardamiento que se producen en el ambiente
inico que rodea al soluto. La teora electrocintica que ha sido desarrollada
para el tratamiento de estos aspectos ha conducido a la elaboracin de varios
modelos, los cuales varan en su grado de complejidad. Dos modelos bsicos de
gran utilidad son: a) el modelo de una esfera cargada sumergida en un medio
continuo y el modelo de la doble capa.
Modelo de una esfera cargada sumergida en un medio continuo
Un modelo sencillo para el tratamiento de la electroforesis consiste en considerar a la partcula de soluto, como si se tratara de una esfera cargada sumergida
en un medio continuo de solvente.
516
Un balance de las fuerzas que actan sobre la partcula cuando sta se mueve
a una velocidad constante (en equilibrio), despreciando los efectos difusivos y
gravitacionales, establece que la fuerza que acta sobre la partcula debida al
campo elctrico, es igual a la fuerza debida al arrastre de la partcula, es decir:
FK = FE
(11.1)
FK = 3d
(11.2)
La expresin de la fuerza cintica FK en el caso de un flujo viscoso lento

alrededor de una esfera (flujo reptante) se conoce como Ley de Stokes y est
dada por (Bird et al., 2002):
donde:
: Velocidad terminal de la partcula. [L/t].
: Viscosidad lquido. [M/L t].
d: Dimetro de la esfera. [L].
La fuerza elctrica FE es proporcional tanto al campo que acta sobre la
partcula como a su carga, de tal manera que:
FE =
z1 FE
No
(11.3)
donde:
z1 : Valencia de la partcula o carga puntual.
F: Constante de Faraday. [96,500 C/molequiv].
N o : Nmero de Avogadro. [z1 iones/molequiv].
E: Campo elctrico. [V/cm].
Si la partcula est en equilibrio es posible combinar las ecuaciones (11.1),
(11.2) y (11.3) para obtener:

1
z1 FE
=
(11.4)
3d
No
En la expresin anterior N o puede ser expresada en funcin de la constante
de Boltzman kB y la constante de los gases ideales R para obtener:

1
z1 kB FE
=
(11.5)
3d
R
De acuerdo a la ecuacin de Stokes-Eistein para un flujo reptante alrededor

de una esfera, la difusividad DAB est dada por:
11.2. FUNDAMENTOS
517
DAB =
kB T
3d
(11.6)
Combinando las ecuaciones (11.5) y (11.6) se tiene:

=
DAB z1 FE
RT
(11.7)
La movilidad m de una partcula en un campo elctrico se define como la

velocidad de la partcula por unidad de campo elctrico,
m=
(11.8)
En este caso particular del modelo de esfera, la movilidad est dada por:
m=
DAB z1 F
RT
(11.9)
Se ha observado experimentalmente que la movilidad de una partcula no

depende slo de su carga intrnseca, como predice modelo de esfera en la forma
de la ecuacin (11.9). El ambiente inico que se forma alrededor de la partcula
en solucin tiene una influencia importante sobre la movilidad y las propiedades
electrostticas de la partcula. El modelo de la doble capa para interfases slidolquido electrolito, ha sido empleado para explicar estos efectos.
Modelo de la doble capa
El modelo de la capa doble desarrollado con base a la teora de los electrolitos
fuertes de Debye y Hckel, permite visualizar las interacciones de una partcula
slida cargada, con su microambiente inico.
Las partculas como las protenas cuando se encuentran presentes en soluciones de electrolitos desarrollan cargas. Estos grupos cargados atraen especies
de la solucin que presenten cargas contrarias (coiones, contraiones, molculas
polares o molculas con dipolos inducidos, coiones solvatados o contraiones solvatados). El modelo de la doble capa propone que este conjunto de cargas genera
dos regiones o capas con diferente grado de movilidad (Fig. 11.3).
Primera capa: superficie de corte En la primera regin (capa de Sterm) la
atraccin que ejerce la partcula sobre las especies es ms fuerte, formando una
capa altamente hidratada, relativamente fija, de un espesor aproximado de 10
Esta capa que envuelve a la partcula misma, constituye la superficie de corte
A.
del complejo formado. Se considera a esta capa la responsable de la disminucin
del campo elctrico intrnseco de la partcula.
518
Segunda capa Dependiendo de la carga neta que se genere dentro de la superficie de corte por accin del rearreglo de cargas, en las proximidades de la
superficie de corte se genera una segunda capa de carga contraria (cuya naturaleza no es rgida), constituida por molculas del solvente ligeramente ligadas y
iones totalmente hidratados. A esta segunda capa se le conoce como capa difusa
o capa de Gody-Chapman.
Figura 11.3: Esquema de la doble capa cerca de una superficie cargada. Adapc
tada de: Ivory, 1990. Reproducida con el p erm iso de Marcel Dekker Inc. Copyright 1990.
Potencial Z El modelo de la doble capa permite interpretar el hecho que

la velocidad de migracin de una partcula cargada en un campo elctrico, es
proporcional al potencial Z de la partcula () y no a su carga intrnseca. El potencial Z es el potencial elctrico medido en la superficie de corte de la partcula.
El potencial disminuye exponencialmente dentro de la capa difusa. Actualmente no existen suficientes bases tericas que permitan calcular el potencial Z
11.2. FUNDAMENTOS
519
en funcin de la carga de la partcula y su determinacin es de carcter emprico.

Radio medio de la capa difusa El radio de la capa difusa tambin tiene una
influencia importante sobre la movilidad de la partcula. Utilizando la teora de
Debye-Hckel ha sido calculado el radio medio de la capa difusa o la longitud de
Debye D . Esta longitud vara inversamente con la raz cuadrada de la fuerza
inica I (Castellan, 1971), es decir,
1
D
I
donde la fuerza inica es una medida de la concentracin y valencia de los iones
que rodean la partcula, y est dada por:
n
I=
donde:
11
Ci zi2
2 i=1
(11.10)
Ci : Concentracin de la especie i.
zi : Valencia de la especie i.
En la mayora de los casos prcticos D es menor a 1000 A.

En el caso de electrolitos simtricos y monovalentes,
C + = C = Co ;
z + = z = zo
se tiene:
D =
RT
2zo2 F 2 Co
12
(11.11)
donde:
: Constante dielctrica del medio. [C2 /Nm2 =F/m].
Efecto del espesor de la capa difusa sobre la movilidad Para analizar
los efectos del espesor de la capa difusa sobre la movilidad de la partcula,
es conveniente considerar tres casos particulares: a) con fuerzas inicas bajas,
es decir a concentraciones salinas bajas, la capa difusa es grande pero muy
diluida en contra iones, de tal manera que su presencia puede ser ignorada, b)
en ambientes de fuerzas inicas altas, como los caractersticos de los lquidos
y su
fisiolgicos (0.15 M), el espesor de la capa difusa es muy bajo ( 2 A)
presencia tambin puede ser ignorada y c) entre los dos extremos anteriores, se
puede considerar la situacin en la cual el espesor de la capa difusa es intermedio.
520
Modelo de la doble capa: movilidad en soluciones diluidas En soluciones diluidas la movilidad en funcin del potencial Z puede calcularse por
medio de un balance de fuerzas sencillo, tal como el desarrollado para obtener
la ecuacin (11.9), de tal manera que en equilibrio
FK = FE
(11.12)
FK = 3dc
(11.13)
siendo FK la fuerza de arrastre sobre la partcula esfrica formada por la superficie de corte, de tal manera que:
La fuerza elctrica FE que acta sobre la partcula es proporcional al campo

que acta sobre sta y al potencial Z (que es una medida de la carga aparente
de la misma).
De acuerdo con la Ley de Coulomb la fuerza entre dos cargas est dada por:
FE =
1 q1 q2
r2
(11.14)
en este caso:
q1 : Carga aparente de la partcula. [C].
q2 : Carga correspondiente al campo. [C].
r: Distancia entre las cargas. [m].
: Constante dielctrica del medio. [C2 /Nm2 = F/m].
El potencial Z est dado por:
=
1 q1
rc
(11.15)
donde rc es el radio de corte de la partcula y q1 es la carga neta de la partcula

en la superficie de corte.
El campo aplicado a la partcula puede ser expresado como:
1 q2
r2
combinando las ecuaciones (11.14), (11.15) y (11.16) se obtiene:
E=
FE = rc E
(11.16)
(11.17)
y las ecuaciones (11.12), (11.13) y (11.17) conducen a:

6 = E
(11.18)
de tal manera que la movilidad m = /E est dada por la ecuacin conocida

como de Hckel,
11.2. FUNDAMENTOS
521
m=
(11.19)
Esta movilidad es menor a la esperada si slo se considera la carga real de

la partcula y es aplicable cuando la relacin de radio de corte a longitud Debye
es muy pequea (rc /D << 1).
Ejemplo 11.1. Clculo del campo que genera un protn. La carga,
radio y constante dielctrica del medio para un protn son las siguientes:
q
r
1
= 1.6 1019 C
= 31 1010 m
1
N m2
=
= 9 109
4o
C2
Se Pide: Estimar el campo sobre la superficie de un protn:

Solucin:
El campo est dado por la ecuacin siguiente:
E=
1 q
4o r2
sustituyendo los datos se tiene:
E
E
E

2
1.6 1019 C
9 Nm
=
9 10
(31 1010 )2 m2
C2
V
= 1.5 108
m
V
= 1.5 106
cm
El campo que produce el protn debido a la relacin de la carga con la

distancia es muy grande. Una batera de 100 V produce un campo de slo
10 V/cm.
Modelo de doble capa: movilidad en soluciones de concentracin
intermedia y alta Cuando la capa difusa presenta una longitud intermedia
en el rango,
0.01 <
rc
< 1000
D
se observa experimentalmente una variacin en la movilidad predicha por la

ecuacin (11.19), tal y como se representa en la Figura 11.4.
Esta variacin ha sido correlacionada utilizando modelos basados en la ecuacin de Henry, la cual establece que la movilidad de la partcula adems de ser
522
Figura 11.4: Variacin de la movilidad con el radio de la capa difusa.

funcin del potencial Z y de la fuerza de arrastre, tambin es funcin de la
relacin del radio de corte a la longitud de Debye. Es decir,

rc
m=
(m ) =
f
(11.20)
6
6
D
Algunos modelos predicen reducciones en la movilidad de Hckel de hasta

60 % en el rango aproximado de
0.6 <
rc
<6
D
Para relaciones de rc /D >> 1, los modelos predicen una solucin asinttica

donde:

rc
3
f
=
D
2
de tal manera que:
m=

3
=
2
4
(11.21)
que es una movilidad 50 % mayor que la predicha por la ecuacin de Hckel.

Fuerzas de relajacin y retardamiento A nivel microscpico la variacin de la movilidad ha sido explicada utilizando el modelo de doble capa y
proponiendo los efectos conocidos como: a) fuerza de relajacin y b) fuerza de
retardamiento.
Cuando la partcula emigra en direccin opuesta a su carga neta, se presenta una distorsin de la capa difusa (Fig. 11.5). Los contraiones de la capa
difusa tienden a emigrar en direccin opuesta creando un campo que se opone
11.2. FUNDAMENTOS
523
Figura 11.5: Representacin esquemtica del efecto de relajacin. a) Partcula

en medio y b) Partcula en campo elctrico. Adaptada de: Rudge y Ladisch,
c
1986. Reproducida con el p erm iso de la Am erican Chemical Society. Copyright 1986.
Todos los
al movimiento de la partcula. La fuerza opuesta al movimiento de la partcula

que se genera, se conoce como fuerza de relajacin.
La fuerza de retardamiento se origina por el movimiento de solvente provocado por el movimiento de contraiones de la capa difusa, generndose un esfuerzo
viscoso adicional sobre la superficie de corte de la partcula.
Los modelos electrocinticos en general han presentado dificultades para
predecir con exactitud los resultados de las separaciones electroforticas. Sin
embargo, han servido de base para generar diversos modelos empricos de amplio
uso.
11.2.3.
Fenmenos de Dispersin
Cuando se realiza una operacin de electroforesis se requiere que los solutos

presentes en la solucin de inters se separen formando bandas bien definidas,
es decir se obtenga una resolucin apropiada. Sin embargo, existen varios fenmenos que provocan la dispersin de la muestra, trmino que engloba tanto los
efectos de difusin molecular, como los efectos microscpicos de mezclado que
se agrupan en la llamada difusividad de remolino. Algunos de estos efectos se
describen a continuacin.
Difusin
En una electroforesis generalmente existe algo de dispersin de la mezcla
debida a la difusin molecular, sin embargo este fenmeno normalmente no es
la causa principal de la dispersin. De acuerdo a Jorgenson y Lukacs (Rudge
y Ladisch, 1986), la desviacin estndar de una muestra dispersada slo por
difusin est dada por:
=
2
2DAB t
(11.22)
En el caso de protenas la difusin puede ser estimada empleando la ecuacin

de Polson (Horstmann y Chase, 1989).
524
DAB = 9.4 1011
T
(MA )1/3
(11.23)
donde:
MA : Peso molecular del soluto. [Da]
: Viscosidad de la solucin. [kg/ms].
Ejemplo 11.2. Dispersin de protenas. Se desarrolla una electroforesis
a 25 C de muestras de ovalbmina (PM = 45,000 Da), ImG (PM = 150,000 Da)
y colgeno (PM = 345,000 Da), en un medio cuya viscosidad es de 0.001 kg/ms.
Se pide estimar:
a) La variacin de la dispersin por difusin con el tiempo de cada banda.
b) El tiempo de doblado del ancho original de la banda de muestra que es
de 0.08 cm.
Solucin:
a) Mediante las ecuaciones (11.22) y (11.23) se puede calcular la dispersin.
En la Tabla 11.1 se presentan los resultados de los clculos de difusividades de
acuerdo a la ecuacin (11.23).
Tabla 11.1: Clculo de difusividades de protenas. Ejemplo 11.2.
Protena
Ovalbmina
ImG
Colgeno
PM
45,000
150,000
345,000
Difusividad (cm2 /s)

7.88 107
5.27 107
3.99 107
En la Figura 11.6 se presentan los resultados de los clculos de la dispersin

en funcin del tiempo. Se puede puntualizar que conforme aumenta el tamao
de la protena, el coeficiente de dispersin disminuye y la dispersin es menor.
b) De acuerdo a los resultados anteriores la banda de ImG tardar alrededor
de 1.8 h para doblar el ancho inicial. Mientras que la banda de ovalbmina tarda
1.0 h aproximadamente.
Una forma de disminuir el grado de dispersin en una operacin por lotes
consiste en disminuir el tiempo de operacin.
Electrosmosis
Otra causa de dispersin en una operacin electrofortica es la electrosmosis
(Ahmadzadeh et al., 2008). sta es el resultado del movimiento convectivo de
iones de la capa difusa que se forma cuando una superficie slida con carga
11.2. FUNDAMENTOS
525
Figura 11.6: Dispersin de protenas por difusin en electroforesis del Ejemplo

11.2. a) Ovalbmina, b) ImG y c) Colgeno.
fija se somete a un campo elctrico. Conforme los iones se mueven, imparten
momentum al solvente y aceleran el fluido adyacente a la capa de Stern. sto
se traduce en el desplazamiento neto de solvente hacia uno de los polos llamado
flujo electroosmtico. Dado que la doble capa tiene una carga neta igual y de
signo opuesto a la de la partcula slida, el flujo electroosmtico se presenta en
direccin opuesta al movimiento electrofortico. Este efecto microscpico puede
alterar el patrn de flujo macroscpico dependiendo de la configuracin de la
celda electrofortica, alterando el desplazamiento de la muestra.
Ejemplo 11.3. Electrosmosis en un tubo capilar. El estudio de la dispersin por electrosmosis en microcanales es de gran importancia en el anlisis
de fluidos a microescala o en tecnologas de laboratorios en un chip (lab on a
chip).
En el anlisis, se considera una solucin salina que fluye dentro de un capilar
de longitud infinita, de tal manera que se desprecian los efectos a la entrada y
salida del capilar. La pared interna del capilar est cargada negativamente y el
capilar se somete a un campo elctrico paralelo al eje de simetra del tubo. En
estado estacionario la variacin del potencial con el radio del capilar est dado
por:
1 d
1
d2
+
= 2 Senh ()
dr2 r dr
(A)
con la condicin de frontera de simetra,

en r = 0
y de la superficie del tubo,
d
=0
dr
(B)
526
en r = 1 =
(C)
donde r = r/Rt ; = D /Rt ; = zF/RT ; = zF/RT son las variables adimensionales correspondientes al radio del tubo, la longitud de Debye, el
potencial y el potencial Z.
Se pide: Graficar la variacin del potencial con el radio del capilar para
valores de de [0.01, 0.1, 0.2, 0.4, 1, 2 y 10] utilizando un potencial Z de =
2.79.
Solucin: En la Figura 11.7 (a-c) se presenta el programa MATLAB para la
solucin de la ecuacin (A). Los perfiles de potencial se muestran en la Figura
11.7d. Puede apreciarse en la figura que conforme disminuye la longitud de
Debye el gradiente de potencial se hace ms pronunciado. Consecuentemente, la
influencia del potencial Z sobre los iones de la solucin comprende una distancia
menor o menor longitud de apantallamiento.
Figura 11.7: Ejemplo 11.3. a) Programa principal, b) Funcin de condiciones

frontera, c) Funcin de la ecuacin diferencial ordinaria y d) Perfil del potencial.
Efectos inicos regulatorios

La diferencia de movilidad entre el soluto de inters y los iones del buffer
donde se efecta la electroforesis, puede generar dispersin durante la electroforesis. Para atenuar este efecto en la interfase delantera la muestra debe
presentar una menor movilidad que el buffer, mientras que en la posterior es
conveniente que la movilidad de la muestra sea mayor.
11.2. FUNDAMENTOS
527
Gradientes de conductividad
Si la conductividad de la muestra es mayor que la del buffer, cuando el
campo se incrementa arriba de un valor crtico, puede provocarse una distorsin
en forma de puntas de la interfase. El buffer puede presentar una menor
conductividad que la muestra por efecto de los iones que contiene.
Sobrecalentamiento: Efectos trmicos
Cuando una corriente elctrica se hace pasar a travs de un medio con una
determinada resistencia parte de la energa se convierte en calor, fenmeno conocido como Efecto de Joule. En una operacin electrofortica el calor generado
es proporcional al cuadrado del campo aplicado y al cuadrado del espesor del
gel, de tal manera que la cantidad de muestra est limitada por este espesor.
La existencia de gradientes trmicos puede desnaturalizar solutos lbiles,
daar el gel o estimular la evaporacin de solvente.
Sobrecalentamiento: Efecto de conveccin libre
Si la electroforesis se desarrolla en un medio lquido en ausencia del gel de
soporte, los gradientes de temperatura pueden originar movimientos convectivos
libres debido a la accin de la gravedad sobre los gradientes de densidad que se
originan. Esta es la principal causa de mezclado en electroforesis. El grado de
conveccin se caracteriza por el nmero adimensional de Rayleigh, Ra, el cual
est dado por:

l4 g
(11.24)
Ra =
z
donde:
l: Longitud caracterstica de la geometra del aparato de electroforesis (en una

celda es el espesor del gel). [L].
g: Aceleracin de la gravedad. [L/t2 ].
: Viscosidad del medio. [M/L t].
: Difusividad trmica del medio. [L2 /t].
/z: Gradiente de densidad en la direccin z. [M/L4 ].
Entre menor sea el valor del Ra, menor es el efecto de la conveccin natural.
De acuerdo con la ecuacin (11.24) sto se puede lograr de varias formas. La
ms empleada a nivel laboratorio es incrementar de la viscosidad mediante el
uso de geles de soporte.
En equipos industriales que operan en forma continua se utilizan membranas
porosas para separar regiones de electroforesis de diferente pH. Esto tiende a
disminuir la conveccin al disminuir la longitud caracterstica l.
528
11.2.4.
Medios y Modos de la Electroforesis
La electroforesis ha evolucionado en forma considerable a partir de los trabajos pioneros de Arne Tiselius en 1937 y el desarrollo de la teora de los electrolitos fuertes de Debye y Hckel en 1923. Actualmente existen diferentes medios
y formas para efectuar una separacin electrofortica (Ivory, 1990).
Medios anticonvectivos
Se han utilizado diferentes medios para realizar las operaciones electroforticas (Lehninger, 2005). Inicialmente se realizaban en medio lquido en celdas
especiales . En 1939 fueron introducidos los primeros materiales anticonvectivos
como papel filtro, fibra de vidrio y almidn granulado.
A mediados de los cuarenta se inici el uso de geles cuyo comportamiento
es superior a los materiales anteriores por su menor tamao de poro y menor
carga superficial. A partir de 1959 fueron introducidos los geles de poliacrilamida
(PAG de sus siglas en ingls) y de agarosa.
Los geles de agarosa tienen una estructura porosa altamente hidratada con
poca carga que asemeja un medio lquido. Este tipo de gel es muy utilizado
en anlisis de cidos nuclicos. Los geles de poliacrilamida estn formados de
polmeros ms entrecruzados que producen poros ms pequeos. Este gel es
muy empleado en el anlisis electrofortico de protenas, tcnica conocida como
PAGE (de las siglas en ingls de electroforesis en gel de poliacrilamida).
Una variante de la tcnica PAGE es la PAGE-SDS. En sta se agrega dodecil
sulfato de sodio a la solucin amortiguadora que provoca la desnaturalizacin de
las protenas. Las cadenas desnaturalizadas migran a una velocidad proporcional
al logaritmo de su peso molecular P M ,
log(P M ) = A B m
donde A y B son constantes y m es la movilidad.
Modos de la electroforesis
En un proceso electrofortico la velocidad de migracin de las especies, depende tanto de su carga, tamao y forma, como de las propiedades del medio.
La resolucin que se puede lograr considerando slo estos parmetros ha sido
mejorada imponiendo a los sistemas restricciones adicionales como el uso de
geles porosos que incrementan la separacin por filtracin o la utilizacin de
gradientes de pH que orientan a las especies de acuerdo a su punto isoelctrico.
Este tipo de modificaciones ha dado origen a una amplia gama de tcnicas electroforticas analticas y preparativas, cuya clasificacin es difcil, pero que en
trminos generales se pueden dividir en (Bier et al., 1983; Varennea y Descroixb,
2008 ): a) electroforesis de interfase mvil (MBE), b) electroforesis de zona (ZE),
c) electroforesis capilar, d) isotacoforesis (ITP) y e) enfoque isoelctrico (IEF).
11.2. FUNDAMENTOS
529
Electroforesis de interfase mvil La electroforesis de interfase mvil o

electroforesis libre fue desarrollada por Arne Tiselius en 1937, logrando por
primera vez resolver las globulinas sanguneas en los tipos , y . Esta tcnica
utiliza una celda en forma de tubo en U (Fig. 11.8). Inicialmente se coloca dentro
de la celda la solucin que contiene la mezcla proteica en el buffer adecuado,
posteriormente se aade una columna de solucin con buffer. Al aplicarse el
campo elctrico cada protena migra, de la muestra a la zona de buffer, formando
una interfase. Cada banda se detecta en funcin de la velocidad de migracin de
la protena particular, utilizando el ndice de refraccin. La protena ms rpida
se coloca al inicio del patrn de migracin en el brazo ascendente y la ms lenta
al final del brazo descendente de la celda.
Figura 11.8: Representacin esquemtica de la celda de Tieselius. Electroforesis

de interfase mvil.
La separacin completa de los componentes de la mezcla no puede ser alcanzada mediante este tipo de electroforesis, slo el soluto ms rpido puede
obtenerse en forma pura.
En los desarrollos recientes la electroforesis de interfase mvil acta como
una celda donde la banda de muestra aplicada es seminfinita, de tal manera
que slo pueden separarse solutos de igual carga. La colocacin de la muestra
depende del polo hacia el que va a migrar. Para solutos con carga positiva deber
colocarse en el nodo. El resto de la celda se carga con electrolito rpido que
permanezca siempre al frente de la migracin y permita disminuir la dispersin
de la muestra (Fig. 11.9).
Electroforesis de zona: de campo unidireccional y de campo pulsante
En la electroforesis de zona descrita al inicio de la seccin 11.2, la muestra es
pequea y diluida, entonces es posible lograr su resolucin completa mediante
530
Figura 11.9: Electroforesis de interfase mvil de cinco componentes inicos.

(antes y despus). Tomada de: Ivory, 1990. Reproducida con el permiso de M arcel Dekker
c
la aplicacin de un campo unidireccional. Este tipo de electroforesis puede ser

empleada para resolver mezclas de cargas diferentes.
Una variante de la electroforesis de zona consiste en utilizar geles de agarosa
y un campo que cambia de direccin peridicamente (tpicamente 90 120 ),
llamado campo pulsante. Esta operacin es muy utilizada para la separacin
de DNA de alto peso molecular, entre 20 kb y 12 Mbp (Maule, 1998). En forma simplificada, se puede establecer que las molculas de DNA de gran tamao
pueden migrar a travs de los poros de agarosa zigzagueando (evitando los poros
chicos) por la accin de los pulsos de campo. Si los pulsos son de corta duracin,
los cambios de la direccin del campo son rpidos y permiten que las molculas ms pequeas migren, mientras que las ms grandes no pueden responder
rpidamente y permanecen atrapadas en la matriz. Conforme la duracin de
los pulsos aumenta, las molculas grandes son ms capaces de migrar, pero la
resolucin de las ms pequeas es menor. La separacin est influenciada por la
duracin de los pulsos.
Electroforesis capilar La electroforesis capilar (CE) es un mtodo atractivo
desde el punto de vista analtico debido a que se requieren muestras muy pequeas, se consume poco buffer, el tiempo de anlisis es corto y es ms fcil de
operar y automatizar que la electroforesis clsica en gel. Esta tcnica tambin es
muy verstil y puede ser aplicada a la separacin de diferentes tipos de solutos
debido a los diferentes modos en que puede ser operada (como los descritos en
las otras secciones).
Mientras que en la electroforesis clsica se utilizan geles para evitar la conveccin y perturbaciones mecnicas, en la CE no se requiere necesariamente el
uso de tales geles. La separacin se lleva a cabo en un tubo hueco (existen arreglos de varios tubos o fibras) de dimetro muy pequeo tpicamente 100 m,
de ah que reciba el nombre de capilar. Dentro de este capilar se encuentran la
11.2. FUNDAMENTOS
531
disolucin que contiene los analitos o las molculas a separar y el buffer o medio
electroltico que es el encargado de conducir la corriente. El electrolito controla
el pH y la fuerza inica del medio donde se realiza la separacin. La separacin
se basa en el tamao, la forma y la carga de los solutos a separar. Debido a su
alta relacin de rea a volumen la disipacin de calor es ms fcil.
Bajo la accin del campo elctrico, los iones migran a travs del tubo con
diferentes velocidades y alcanzan el punto de deteccin en diferentes tiempos.
De esta manera, los perfiles de concentracin pueden ser detectados y graficados
en forma de electroferogramas de los picos de los solutos.
Isotacoforesis En una separacin por isotacoforesis la muestra se inserta entre un electrolito rpido y uno lento (Fig. 11.10), formando una banda finita.
En estado estacionario todos los constituyentes se mueven a la misma velocidad,
en un orden impuesto por sus movilidades, con la ventaja de que cada banda
contiene slo un tipo de electrolito (el ancho de la banda es una medida de la
concentracin de la especie en la muestra original).
Figura 11.10: Isotacoforesis de cinco especies inicas (antes y despus). Tomada

c
de: Ivory, 1990. Reproducida con el permiso de M arcel Dekker Inc. Copyright 1990.
Todos los
Enfoque isoelctrico Cuando la separacin electrofortica es por medio de

enfoque isoelctrico (IEF) se requiere un gradiente de pH en el medio donde se
realiza la electroforesis (Fig. 11.11). En el medio continuo de pH las molculas
como las protenas se ordenan conforme a su punto isoelctrico, es decir al migrar
llegan a un punto donde su carga neta es cero y por lo tanto su movilidad es
nula (la figura slo muestra la carga neta de la partcula).
El enfoque isoelctrico es una operacin gobernada por el equilibrio, mientras
que las otras operaciones son controladas por la velocidad de transporte.
532
Figura 11.11: Enfoque isoelctrico de solutos polianfolticos (antes y despus).

c
Tomada de: Ivory, 1990. Reproducida con el p erm iso de M arcel Dekker Inc. Copyright 1990.
11.3.
Equipos de Electroforesis
Actualmente existe un buen nmero de equipos de electroforesis a escala

preparativa, en la Tabla 11.2 se presentan las principales caractersticas de algunos de ellos.
A nivel laboratorio y en algunos equipos a escala preparativa, la forma que
se ha empleado para minimizar el problema de la dispersin de la muestra por
conveccin, ha sido el uso de geles como medios de soporte. Estas tcnicas han
sido caracterizadas como tediosas y costosas, debido que al finalizar la operacin
se requiere recortar las regiones de gel donde se localizan las bandas y extraer
por electroelucin o algn otro mtodo los solutos de inters.
Para evitar el uso de geles se han diseado equipos donde la electroforesis
se realiza en medios lquidos, y donde la longitud caracterstica l del nmero
de Rayleigh se reduce empleando pelculas delgadas o mediante el uso de membranas. Otro tipo de equipos combina la electroforesis con la cromatografa para
eficientar las separaciones.
De manera general los diversos equipos de electroforesis existentes se pueden
dividir en tres tipos:
Equipos de flujo libre.
Equipos de flujo libre con recirculacin.
Equipos electrocromatogrficos.
11.3.1.
Equipos de Flujo Libre
En los equipos de flujo libre a diferencia de los equipos que presentan recirculacin, el medio no se recircula. La estabilizacin de los flujos se logra empleando
distancias pequeas de migracin o estabilizacin rotacional. Los principios de
los diferentes modos de electroforesis de flujo libre tambin han sido aplicados
11.3. EQUIPOS DE ELECTROFORESIS
533
Tabla 11.2: Caractersticas de algunos equipos de electroforesis.

T ip o
1 .C o m p a a
2 .N o m b re
3 .In t r o d u c c i n
4 .P recio d ls.
5 .T cn ica s
E lec tro e n fo q u e
S D S -PA G E
PA G E
A garosa
G eles
Is o t a c o fo r e s is
Zona
E s c a l n d e c a m p o
6 .O p era ci n
7 .E s t a b iliz a c i n
d e l fl u j o
R o t a c i n
M e m b ra n as
P elcu la
G el
8 .D im en si n d e
la c e ld a
G eo m etra
S ec ci n
tran sve rsal
L o n g itu d d e
s e p a r a c i n
9 .C a m p o T p ico
1 0 .T ie m p o d e
o p e ra c i n t p ic o
1 1 .Ta m a o t p ic o
d e la m u e stra
1 2 . P ro d u c ci n tp ica
1 3 . E n fr ia m ie n t o
14. D etecto r
1 5 . C o le c t o r d e fr a c c io n e s
N m ero d e fra ccio n e s
P ro ce so d e c o lec ci n
P e lc u la c o n
fl u j o l i b r e
P e lc u la
c o n fl u j o l i b r e
T ip o
tam b or
P elcu la
c o n re c ir c .
B e n d er y H o b ein
E lp h o r Va P 2 2
1987
8 0 ,0 0 0
H irsch m a n n
ACE 710
1986
1 4 0 ,0 0 0
B io -R a d
R o to fo r P r e p IE F
1987
7 ,0 0 0
P ro t e in Te ch s
RF3
1990
3 0 ,0 0 0
S
No
No
No
No
S
S
S
C o n t in u a
S
No
No
No
No
No
S
No
C o n t in u a
No
No
No
No
S
No
No
Interm ite nte
No
No
Si
No
No
No
Si
No
S
S
No
No
No
S
S
No
R e c t a n g u la r
R e c t a n g u la r
A n u la r
R e cta n g u la r
250 m m 2
60 m m 2
627 m m 2
150 m m 2
10 cm
1 00-300 V /cm
4 cm
1 00-150 V /cm
1 2 .5 c m
5 0 -1 0 0 V / cm
4 cm
25 0-375 V /cm
C o n t in u o
C o n t in u o
3-5 h
2 h
25 106 c e l / m l
500 106 c e l / h
S
U V / V is , Va r ia b le
S
90
L ento
5 106 c e l / m l
100 106 c e l / h
S
U V / V is Va r .
S
35
R p id o
100 g 1 g
0 .2 -5 0 0 m g / d a
Si
No
Si
20
R p id o
m g -g p ro ten a
5-50 0 m g/c orr.
S
No
S
30
R p id o
S
No
No
No
No
No
No
Interm ite nte
A d a p t a d a d e : E b y, 1 9 9 1 .
c
Reproducida con el p erm iso de Nature Publishing Co. Copyright 1991.
en la construccin de dispositivos de microflujo que pueden ser utilizados en

separaciones y monitoreo en tiempo real (Kohlheyer et al., 2008).
Existen dos arreglos bsicos de los equipos de flujo libre: a) tipo pelcula
delgada y b) tipo anular.
Pelcula delgada
Los equipos de electroforesis de pelcula delgada han sido estudiados desde los aos cincuenta (Hamel y Hunter, 1990). En tales sistemas se inyecta
una corriente continua y puntual de muestra sobre una pelcula de buffer que se
mueve verticalmente en flujo laminar entre dos placas (Fig. 11.12). En las partes
laterales de este arreglo se sitan los electrodos en forma de placas. La muestra emigra horizontalmente conforme pasa por la cmara. Los solutos forman
bandas discretas de acuerdo a sus movilidades electroforticas, y son eluidos
continuamente por el fondo de la cmara y colectados por medio de una bomba
de canal mltiple. El calor generado es removido por medio de refrigerantes que
enfran las paredes laterales.
534
Uno de los usos principales de este tipo de equipos es en la separacin de

clulas, virus, partculas subcelulares y componentes de membrana.
Figura 11.12: Esquema de un equipo de electroforesis de flujo continuo en una

celda de electroforesis. Tomada de: Gobie y Ivory, 1986. Reproducida con el perm iso
c
de la American Chemical Society. Copyright 1986.
Electroforesis anular
La electroforesis de flujo libre tambin se ha conducido en arreglos anulares basados en el diseo de Philpot-Harwell (Fig. 11.13). En estos sistemas el
cilindro interno es fijo y funciona como ctodo, mientras que el exterior gira a
velocidades hasta de 150 rpm. Este movimiento permite neutralizar los efectos
convectivos radiales. La muestra y el buffer son inyectados en la base del anillo
y se mueven axialmente hacia el colector mltiple situado en la parte superior.
11.3.2.
Equipos de Flujo Libre con Recirculacin
En los equipos de flujo libre con recirculacin el medio lquido donde se

efecta la electroforesis se recircula continuamente. Existen diferentes tipos de
arreglos para estos equipos como: a) celda tipo tambor, b) pelcula delgada con
recirculacin y c) pelcula delgada con recirculacin desplazada.
Celda tipo tambor
La celda tipo tambor (Fig. 11.14) consta de una cmara cilndrica que gira a
1.0 rpm, dividida en 20 compartimientos por medio de 19 discos de membranas
de polister con poros de 10 m.
Este tipo de equipo es operado con gradientes de pH, de tal manera que la
operacin es conocida como enfoque isoelctrico con recirculacin (RIEF de sus
siglas en ingls). La rotacin de la cmara y las membranas permiten enfocar
11.3. EQUIPOS DE ELECTROFORESIS
535
Figura 11.13: Esquema de un equipo de flujo libre en un arreglo anular. Tomada

de: Hamel y Hunter, 1990. Reproducida con el p erm iso de la Am erican Chemical Society.
c
Copyright 1990.
apropiadamente las zonas. Cada cmara posee una posicin para alimentar la
muestra y una para descargarla, lo cual se efecta por medio de vaco.
El campo elctrico se provee por medio de dos electrodos situados en los
extremos de la cmara. El enfriamiento se realiza por medio de un tubo de
cermica por el cual fluye el lquido de enfriamiento por el interior del tambor.
Pelcula delgada con recirculacin
Una variante de los equipos de enfoque isoelctrico con recirculacin (RIEF),
es la celda de pelcula delgada con recirculacin que separa fsicamente las funciones de enfriamiento y estabilizacin del fluido (Fig. 11.15). En este arreglo
la solucin que va a fraccionarse es recirculada continuamente entre la celda de
canales mltiples donde se realiza la electroforesis y un intercambiador de calor
de canales mltiples. El flujo en la celda es laminar ya que est dividida por
membranas formando canales de flujo muy delgados. La operacin se efecta
utilizando un gradiente de pH sobre la cmara y slo el 6 % de la muestra permanece en la cmara en un tiempo dado. Tpicamente una separacin se realiza
despus de cientos de ciclos en aproximadamente dos horas.
Pelcula delgada con recirculacin desplazada
Una variante del arreglo fsico anterior empleado en electroforesis de zona
(Fig. 11.16), es la electroforesis en pelcula delgada con recirculacin desplazada. En este sistema la muestra es inyectada continuamente en un canal de la
celda y reinyectada en forma desplazada, de tal manera que su migracin neta
es alterada. Los solutos ms lentos tendern a migrar en el sentido del desplazamiento de la alimentacin, cuando este desplazamiento sea lo suficientemente
536
Figura 11.14: Celda de electroforesis tipo tambor rotatorio. A) Entrada y salida

de refrigerante, B) nodo, C) Cmara de electroenfoque, D) Ctodo, E) Brazo
de enfriamiento, F) Venteo y G) Cubierta. BioRad.
grande; y en direccin contraria cuando el soluto tenga una movilidad tal que
logre tener un desplazamiento mayor que el provocado por el movimiento de la
recirculacin.
11.3.3.
Equipos Electrocromatogrficos
Otra alternativa para disminuir los problemas convectivos en la electroforesis son los sistemas que utilizan medios con partculas como las usadas en cromatografa y se pueden mencionar dos tipos: a) equipos de electrocromatografa
anular rotativa continua y b) equipos de electrocromatografa de efectos opuestos.
Electrocromatografa anular rotativa continua
En los equipos de electrocromatografa anular rotativa continua (CRAE de
sus siglas en ingls) (Fig. 11.17), la muestra se alimenta en forma continua en un
punto de un lecho anular y se eluye mientras el lecho rota. El campo es aplicado
axialmente.
Electrocromatografa de efectos opuestos
En la electroforesis cromatogrfica de efectos opuestos (CACE de sus siglas
en ingls), el campo elctrico es antiparalelo al movimiento convectivo forzado,
y se desarrolla en una columna empacada de cromatografa por exclusin, que
presenta dos secciones de diferente resolucin (Fig. 11.18). La parte superior
de la columna se empaca con gel excluyente del soluto de inters y la parte
inferior con gel incluyente, de tal manera que ste se mueva ms rpidamente
en la parte superior. Con un manejo adecuado de la intensidad del campo, el
soluto de inters puede tener un movimiento neto siempre hacia el centro de
la columna y acumularse en esa regin, mientras que los contaminantes salen
por alguno de los extremos. Este arreglo produce separaciones de alta pureza
11.4. DISEO DE EQUIPO DE ELECTROFORESIS
537
Figura 11.15: Esquema de un equipo electrofortico con recirculacin. 1) Bomba,

2) Celda de enfoque, 3) Intercambiador, 4) Monitor de pH, 5) Monitor UV, 6)
Control de la bomba, 7) Interfase de datos, 8) Centro de carga y 9) Control UV.
Adaptado de: Bier, 1986. Reproducida con el permiso de la Am erican Chemical Society.
c
Copyright 1986.
y concentracin, pero su productividad est limitada por el calentamiento y la

cada de presin.
11.4.
Diseo de Equipo de Electroforesis
El tratamiento de la electroforesis al igual que las columnas cromatogrficas

puede ser abordado empleando:
La teora de platos.
La teora cintica.
11.4.1.
Teora de Platos
La teora de platos es til para comparar el comportamiento de un mismo

equipo con diferentes aplicaciones, as como comparar la misma aplicacin con
equipos diferentes. Como se estableci anteriormente la desviacin estndar en
equipos electroforticos cuya principal causa de dispersin es la difusin molecular est dada por:
1
= (2Dt) 2
(11.25)
538
Figura 11.16: Esquema de un equipo electrofortico de pelcula delgada con

recirculacin desplazada. Tomada de: Ivory, 1990. Reproducida con el p erm iso de Marcel
c
Dekker Inc. Copyright 1990.
donde:
D: Dispersin axial. [L2 /t].
t: Tiempo. [t].
: Desviacin estndar. [L].
La ecuacin (11.25) se puede expresar en trminos de parmetros electroforticos introduciendo la expresin:

V
(11.26)
= mE = m
L
donde:
: Velocidad del soluto. [L/t].

m: Movilidad. [L2 /Vt].
E: Campo. [V/L].
V : Voltaje. [V].
L: Longitud de la celda. [L]
El tiempo puede expresarse como:
L
(11.27)
entonces se combinan las ecuaciones (11.25), (11.26) y (11.27) para obtener:

t=
539
Figura 11.17: Esquema de un equipo de electrocromatografa anular rotativa

continua. Tomada de: Hamel y Hunter, 1990. Reproducida con el permiso de la American
c
Chem ical Society. Copyright 1990.
2DL2
mV
12
(11.28)
De acuerdo a la teora de platos, la eficiencia de la separacin puede definirse

como la dispersin por unidad de longitud,
HET P =
2
L
(11.29)
Las ecuaciones (11.28) y (11.29) conducen a:

HET P =
como:
2DL
mV
L = (HET P )(N )
(11.30)
(11.31)
entonces
N=
mV
2D
(11.32)
De estos resultados es importante notar que N es independiente de L. Asimismo, N puede incrementarse aumentando V . Por otro lado, HET P aumenta con
L. Esto implica que las distancias cortas de migracin son las ms eficientes para
la separacin.
La resolucin de dos componentes del sistema cuando su coeficiente de dispersin es el mismo est dado por (Rudge y Ladisch, 1986):
540
Figura 11.18: Electrocromatografa de efectos opuestos. Tomada de: Hamel y

c
Hunter, 1990. Reproducida con el permiso de la Am erican Chem ical Society. Copyright 1990.
RS =
1
4
mV
2D
12
m1 m2
m
(11.33)
donde m1 y m2 son las movilidades del soluto 1 y 2, respectivamente y:

m=
m1 + m2
2
De acuerdo a la expresin (11.33) el voltaje incrementa la resolucin.

Ejemplo 11.4. Resolucin de una mezcla de protenas. Se desea separar dos enzimas mediante una electroforesis en gel a 4 C. El coeficiente de dispersin axial es de 2107 cm2 /s. La movilidad es de m1 = 3.38105 cm2 /Vs
y m2 = 1.33 105 cm2 /Vs, respectivamente. Para realizar la separacin se
utiliza una celda de 2.0 cm donde se aplica un campo de 1.8 V/cm por un lapso
de 7.5 h.
Se pide estimar:
a) La distancia que viaja cada soluto.
b) La eficiencia de la separacin de cada soluto.
541
c) La resolucin de la separacin.
Solucin:
a) La distancia puede ser calculada mediante la expresin
L = t = mEt
de tal manera que:
L1 = 3.38 105
y,
L2 = 1.33 105
cm2
V
3600 s
1.8
7.5 h
= 1.64 cm
Vs
cm
h
cm2
V
3600 s
1.8
7.5 h
= 0.64 cm
V cm
cm
h
La separacin entre los solutos es:

L1 L2 = 1.0 cm
b) De acuerdo a la ecuacin (11.30),
HET P
(HET P )1
(HET P )2
2D
mE

2
7 cm
2 2 10
s
2
cm
3.38 105
1.8
Vs

2
7 cm
2 2 10
s
2
cm
1.33 105
1.8
Vs
V
cm
V
cm
= 6.57 103 cm
= 1.67 102 cm
c) Utilizando la ecuacin (11.33) se puede calcular la resolucin. Primero es

necesario calcular la movilidad promedio,
2
5 cm
(3.38
+
1.33)
10
2
m1 + m2
Vs
= 2.334 105 cm
m=
=
2
2
Vs
de tal manera que,
542
RS
RS
11.4.2.
12
cm2
V
1.8
2 cm
2.334 10
1
Vs
cm
=
2
4
cm
2 2 107
s
2
cm
5
(3.38 1.33) 10
Vs
cm
2.334 105
Vs
= 3.18
Teora Cintica
En un proceso electrofortico la velocidad de migracin depende de la carga, tamao y forma de la partcula de inters, as como de las propiedades
del medio. La resolucin puede ser incrementada mediante gradientes de pH,
filtracin molecular o modificaciones del flujo. Esto ha dado origen a una diversidad de procedimientos para optimizar las separaciones electroforticas.
Actualmente se cuenta con un teora unificada para tratar los diversos modos
electroforticos (ZE, MB, ITF e IEF) (Bier et al., 1983), lo cual demuestra que
las ecuaciones que rigen estos procesos son idnticas. Las diferencias aparentes
surgen de las diferentes condiciones iniciales y de frontera de cada caso. A continuacin se presentan algunos modelos particulares.
Pelcula delgada con alimentacin continua
En el caso de la electroforesis en pelcula delgada con alimentacin continua,
el soluto est sujeto a fuerzas difusivas, convectivas y electroosmticas, que
determinan su patrn de elucin. En estado estacionario y para un campo E
constante, el balance de masa de soluto en este tipo de arreglos esta dado por:
c
c
2c
c
+ mE
+ z (y)
= D 2 + So (x)
(11.34)
x
z
z
z
donde x es la velocidad parablica axial y z es la velocidad osmtica lateral.
So (x) es un trmino que describe la distribucin del flujo de soluto inyectado.
La ecuacin (11.34) es una ecuacin difusiva, convectiva tridimensional, cuya
forma ms sencilla es su solucin asinttica (Gobie y Ivory, 1986).
x (y)
Electrocromatografa
En el caso de electrocromatografa en columna si se supone que mE es independiente de la concentracin, en ausencia de electrosmosis el modelo empleado
es:
11.5. SUMARIO
543
c
c
c
2c
= x
+ mE
D 2 +R
t
x
x
x
(11.35)
rearreglando,
c
2c
c
= ( x + mE)
D 2 +R
(11.36)
t
x
x
donde R es la acumulacin de soluto en la fase slida y x es la velocidad del
flujo convectivo. Este resultado indica que las soluciones a la ecuacin de diseo
de las columnas cromatogrficas, pueden ser aplicadas a la electrocromatografa,
sustituyendo x por ( x + mE).
11.5.
Sumario
La electroforesis es una operacin que permite la purificacin de solutos por

la accin de un campo elctrico.
Uno de los problemas que se presenta normalmente en las operaciones electroforticas es la dispersin que sufre la muestra conforme la operacin se desarrolla. Para abordar esta dificultad se han desarrollado diversas formas y medios
para efectuar la operacin, lo cual se ha traducido en una variedad de equipos
disponibles a escala preparativa.
El diseo de los equipos de electroforesis se realiza mediante enfoques similares a los utilizados en cromatografa de columna, y actualmente su desarrollo
es incipiente y basado fuertemente en las pruebas de laboratorio.
544
11.6.
Problemas
11.1. Carga y pH. Se realiza una separacin electrofortica de zona con

campo unidireccional a un de pH = 7.1, de una mezcla que contiene cido
glutmico (pI = 3.2), arginina (pI = 10.8) y valina (pI = 6.0).
Se pide definir el (o los) aminocido que:
a) Migra hacia el ctodo.
b) Migra hacia el nodo
c) Migra ms rpido hacia el nodo.
11.2. Movilidad relativa. La movilidad relativa de -galactosidasa respecto a la de citocromo c en un gel de PAGE-SDS es de 0.2, mientras que la de
actina es de 0.6. Los pesos moleculares de estas protenas son de 130,000 para
la -galactosidasa y de 45,000 Da para la actina (Condeelis, 1977).
Se pide: Estimar la movilidad relativa de ASB (albmina de suero de bovino) en el mismo gel si su peso molecular es de 68,000 Da.
Resp. 0.42.
11.3. Longitud de Debye. Calcular la longitud de Debye para una solucin
acuosa 0.1 M de NaCl a 37 C. La constante dielctrica del agua es = 80 o ,
donde o = 8.85 1012 F/m es la constante dielctrica del vaco.
Resp. D = 9.9 1010 m = 9.9 A.

11.4. Nmero de platos. La electroforesis capilar de alta resolucin
(HPCE) es una poderosa tcnica analtica que maneja muestras menores de
1 g (Frenz y Hancok, 1991).
Se pide: Estimar el nmero de platos de una columna de HPCE donde la
movilidad del soluto es de 108 m2 /Vs, el voltaje aplicado es de 30 KV y el
coeficiente de dispersin de 1010 m2 /s.
Resp. 1.5 106 platos.
11.5. Tiempo de separacin. Se desea separar dos protenas en una celda electrofortica aplicando un gradiente de potencial de 1.2 V/cm. Bajo las
condiciones de la electroforesis la movilidad de las protenas es de 1.2 104
y 2.1 104 cm2 /Vs, respectivamente.
Se pide: Estimar el tiempo de separacin de estas protenas si inicialmente
se colocan formando una banda de 0.4 cm de espesor.
Resp. 0.51 h.
11.6. Movilidad de globulos rojos. La movilidad electrofortica de las
clulas de glbulos rojos humanos es independiente de las razas, edad, sexo y
varios otros factores. Esta propiedad permite tomar a este tipo de clulas como
un patrn electrofortico (Brinton y Lauffer, 1959).
Se pide: Estimar la movilidad de glbulos rojos en un medio M/15 de
fosfatos a pH = 7.4, si la viscosidad del medio puede tomarse como la del agua, el
potencial Z es de 0.0168 V y la constante dielctrica es de 9.8 109 C2 /Nm2 .
Resp. 1.31 mcm/Vs.
11.7. BIBLIOGRAFA
11.7.
545
Bibliografa
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Parte V
Operaciones de Acabado
549
Las operaciones finales de un proceso de bioseparacin son las de acabado
del producto. Estas operaciones permiten incrementar la pureza del producto,
facilitar su manejo y mejorar su apariencia. En esta Parte V del libro se revisan
dos de las operaciones de acabado ms utilizadas en los procesos biotecnolgicos.
En el Captulo 12, se trata la operacin de cristalizacin que es muy empleada tanto en la obtencin de productos biotecnolgicos tradicionales como los
antibiticos, como en la obtencin de productos provenientes de la tecnologa
del r-DNA como las protenas teraputicas.
En el Captulo 13 se presenta la operacin de secado, la cual se utiliza como
fase terminal de los procesos de cristalizacin, o bien para el secado de caldos
en la produccin masiva de algunos productos.
Captulo 12
Cristalizacin
12.1.
Introduccin
La operacin de cristalizacin consiste en separar un soluto de una solucin

mediante la formacin de cristales. Una vez formados, los cristales se separan
de la solucin obtenindose el soluto con un alto grado de pureza.
Durante el proceso de cristalizacin los cristales deben formarse primero
y luego crecer. Al fenmeno de formacin de pequeos cristales se le llama
nucleacin y a la formacin capa por capa del cristal se le llama crecimiento.
La sobresaturacin es la fuerza impulsora tanto de la nucleacin como del
crecimiento de los cristales. Si la solucin slo est saturada, los cristales no se
transforman ni crecen, mientras que si est subsaturada stos tienden a disolverse.
La cristalizacin es muy utilizada a nivel industrial para recuperar sales como
cloruro de sodio y sulfato de amonio a partir de soluciones acuosas. Algunas sustancias orgnicas como la sacarosa y la glucosa tambin son obtenidas mediante
procesos que involucran una operacin de cristalizacin.
Varios productos biotecnolgicos de uso masivo como algunos antibiticos y
cidos orgnicos, as como algunos productos teraputicos, son comercializados
en forma de cristales. Esta diversidad de procesos se traduce en una gran variabilidad en la capacidad de los cristalizadores industriales que oscila de gramos
a cientos de toneladas por da.
La cristalizacin es una operacin ampliamente utilizada en los procesos
biotecnolgicos debido a que ofrece entre otras, las siguientes ventajas: a) se
puede obtener en una sola etapa un producto de una pureza de hasta un 99 %,
b) se puede controlar la operacin de tal manera que se produzcan cristales
uniformes que faciliten su manejo, empaque, almacenamiento, c) mejora la presentacin o apariencia del producto para su comercializacin y d) es una operacin que puede llevarse a cabo a temperaturas moderadas. En el caso de
protenas teraputicas, su forma cristalizada puede ofrecer ventajas en su administracin (Hekmat et al., 2008).
552
CAPTULO 12. CRISTALIZACIN
Frecuentemente la operacin de cristalizacin va acompaada de un lavado

de los cristales en un equipo de separacin slido-lquido y de un secado final,
en un sistema como el mostrado en la Figura 12.1.
Figura 12.1: Esquema de un sistema de cristalizacin. Adaptada de: Moyers y

c
Rousseau, 1987. Reproducida con el p erm iso de John Wiley and Sons. Copyright 1987.
Todos
El diseo apropiado del cristalizador es esencial en el funcionamiento de

todo el arreglo anterior debido a que el tamao y concentracin de los cristales
en la solucin de salida, son determinados en gran medida en la operacin de
cristalizacin; a su vez estos parmetros determinan el diseo del separador
slido-lquido y del secador (Bakar et al., 2009).
La cristalizacin es en gran medida un arte ms que una ciencia; sin embargo,
el conocimiento actual de los mecanismos de formacin y crecimiento de los
cristales, y de la fuerza impulsora de stos, la sobresaturacin, permite abordar
el crecimiento de cristales de una manera ms cientfica.
La estrategia para el diseo de cristalizadores comprende el establecimiento
de las relaciones de equilibrio, la forma de operar del cristalizador (el mtodo
para generar la sobresaturacin) y el tipo de cristalizador que se va a emplear.
Una vez obtenido el diseo conceptual del cristalizador, el problema de diseo
restante consiste en determinar el diseo funcional que permita satisfacer los
requerimientos de tamao de cristal mediante el estudio cintico del sistema
(Fig. 12.2).
Para abordar los aspectos relacionados con la cristalizacin, en la seccin
12.2 de este captulo se revisan los fundamentos de la operacin: el equilibrio,
12.2. FUNDAMENTOS
553
Figura 12.2: Estrategia de diseo de un cristalizador. Adaptada de: Moyers y

c
Rousseau, 1987. Reproducida con el p erm iso de John W iley and Sons. Copyright 1987.
Todos
los modos como se puede efectuar la operacin y la cintica de la cristalizacin.

En la seccin 12.3 se describen los equipos de cristalizacin ms empleados. El
diseo de cristalizadores se presenta en la seccin 12.4.
12.2.
Fundamentos
Para evaluar el uso de la operacin de cristalizacin como alternativa para la

purificacin de un producto, es necesario contar con determinada informacin
bsica relacionada con el producto y sus soluciones como:
Tipo de cristales que forma el producto.
Pureza de los cristales en el producto.
Equilibrio: Solubilidad y sobresaturacin de soluciones del soluto en agua
u otro solvente.
Modos de operacin posibles para generar la sobresaturacin de la solucin
del soluto.
Cintica: Velocidad con que se originan (nucleacin) y aumentan de tamao
los cristales en la solucin (crecimiento).
Distribucin de tamaos en poblaciones de los cristales.
12.2.1.
Tipos de Cristales
Un cristal es un slido compuesto por tomos, iones o molculas dispuestos

en un arreglo tridimensional ordenado y peridico (retcula espacial). La distancia entre los tomos del cristal de cualquier material es constante y caracterstica
de dicho material. Los ngulos entre las caras de los cristales tambin son caractersticos y dan origen a cinco tipos bsicos de cristales y a siete sistemas cristalogrficos. En el sistema ms sencillo, el sistema cristalogrfico cbico, tanto
554
las distancias caractersticas (largo, ancho y alto) como los tres ngulos caractersticos son iguales. Otros tipos de sistemas difieren de este comportamiento
originando los sistemas tetragonal, ortorrmbico, hexagonal, monoclnico, triclnico y trigonal.
Desde el punto de vista industrial el trmino hbitat del cristal se refiere a
los tamaos relativos de las caras del cristal. El hbitat de un cristal es de gran
importancia: los cristales largos como agujas se rompen muy fcilmente durante
su centrifugacin y secado; los cristales en forma de disco son difciles de lavar
durante su centrifugacin y difciles de filtrar. Los cristales esfricos son los ms
fciles de manejar.
12.2.2.
Pureza de los Cristales
La mayora de las soluciones cuando forman cristales a velocidades de crecimiento moderadas y a condiciones constantes, los cristales formados slo contienen un componente alcanzado purezas hasta de 99.8 %.
Las impurezas de los cristales generalmente se deben al atrapamiento de
lquido en el cristal en pequeas bolsas u oclusiones. Adems de este tipo de
impureza, normalmente despus de la separacin de los cristales de la solucin,
parte de la solucin queda adherida a la superficie del cristal, lo que hace necesario lavar los cristales.
La separacin alcanzada en una cristalizacin puede ser caracterizada mediante el factor de separacin , que es una medida de la distribucin del soluto
y las impurezas entre las fases, de acuerdo a la siguiente ecuacin:
=
EA
EB
(12.1)
donde:
masa de soluto A en la fase cristalina
masa de soluto A en la fase lquida
de manera similar para la impureza B,
EA =
(12.2)
masa de impureza B en la fase cristalina

(12.3)
masa de impureza B en la fase lquida
El grado de separacin o selectividad del proceso es mayor conforme aumenta. El factor de cristalizacin E (anlogo al factor de extraccin) depende de
la naturaleza del sistema solvente-soluto-impurezas, de las condiciones de temperatura y presin a las que se realice la cristalizacin, y del grado de saturacin
(sobresaturacin) empleado en la operacin.
EB =
12.2.3.
Equilibrio: Solubilidad y Sobresaturacin
Solubilidad
Las relaciones de equilibrio para los sistemas de cristalizacin se presentan
en forma de curvas de solubilidad (Fig. 12.3). En estas curvas la solubilidad se
12.2. FUNDAMENTOS
555
expresa comnmente en porciento de peso de soluto a peso de solvente.
Figura 12.3: Curva de solubilidad. Tomada de: Belter et al., 1988. Reproducida con
c
el p erm iso de John W iley and Sons. Copyright 1988.
Las curvas de solubilidad representan la solubilidad de soluciones saturadas

a diferentes temperaturas. Esta solubilidad es la mxima que puede alcanzar la
solucin en forma termodinmicamente estable. La saturacin es resultado del
equilibrio entre la fase slida y la fase lquida, y consecuencia de la igualacin
de sus potenciales qumicos.
Los datos experimentales de equilibrio sirven de base para la evaluacin de
las diversas opciones que existen para llevar a cabo un proceso de cristalizacin
ya que permiten, entre otras cosas: a) determinar si el slido que se cristaliza
slo contiene el soluto de inters, b) seleccionar el solvente, c) establecer el rango
de temperatura y presin de operacin, d) conocer la concentracin del lquido
a la salida del cristalizador y e) determinar la recuperacin mxima posible de
la operacin.
Con ayuda de la Figura 12.3 se pueden describir algunos comportamientos
generales de la solubilidad de las sustancias en funcin de la temperatura:
a) Existen sustancias como la hexametilentetramina cuya solubilidad no
vara apreciablemente con la temperatura.
b) Otras sustancias como el cido fumrico muestran un incremento moderado en solubilidad con respecto a la temperatura.
c) Algunas sustancias como el cido adpico y el glutamato monosdico muestran una gran dependencia de su solubilidad con la temperatura.
El conocimiento del comportamiento de la solubilidad de una sustancia es
556
bsico en la seleccin del modo para realizar su cristalizacin: Es factible obtener

cristales de cido adpico por enfriamiento de una solucin de ste, pero no es
factible obtener cristales de hexametilentetramina por este mismo mtodo.
Ejemplo 12.1. Solubilidad de l-serina. Se determin la solubilidad de
l-serina en agua en el rango de 35 - 50 C (Charmolue y Rousseau, 1991). Los
datos experimentales se ajustaron a la recta dada por:
S = 146.13 + 8.083 TC
donde TC es la temperatura en grados centgrados y S es la solubilidad de la
l-serina en g/1000 g de agua.
La solubilidad de l-serina tambin fue obtenida a partir de la teora de las
soluciones ideales que es aplicable a sistemas donde existe similitud qumica
entre el soluto y el solvente, y se expresa como:

f
Hm
Tm
1
ln
=
1
X2
RTm
T
donde:
X2 : Fraccin mol en la saturacin.

f
Hm
: Entalpia de fusin en el punto de fusin.
Tm : Temperatura de fusin en grados Kelvin.

T : Temperatura en grados Kelvin.
Para l-serina la temperatura de fusin Tm es de 501 K y la entalpia de
f
fusin Hm
se ha estimado en 4, 230.82 cal/mol.
Se pide: A partir de la informacin anterior comparar los resultados experimentales con los derivados de la teora de las soluciones ideales para l-serina.
Solucin:
Sustituyendo valores en la ecuacin de las soluciones ideales se tiene:
cal

4,
230.82
1
501
mol
ln
=
1
cal
X2
T
K
1.987
501
mol K
de tal manera que:

501
X2 = exp 4.25
1
T
La solubilidad S en g/1000 g de agua puede obtenerse mediante la expresin:

X2
1000
S = (M2 )
M1
1 X2
12.2. FUNDAMENTOS
557
donde M1 =18 y M2 =105.1 en g/mol, son los pesos moleculares del agua y la lserina , respectivamente; con estos valores la expresin anterior puede ser escrita
como:
S = 5, 838.89
X2
1 X2
combinando ambas expresiones, la solubilidad terica de la l-serina es:

S=
5, 838.89

501
exp 4.25
1 1
T
En la Figura 12.4 se muestra una comparacin de los datos experimentales

de solubilidad de l-serina con los que predice la teora de las soluciones ideales.
Figura 12.4: Solubilidad de l-serina. () datos experimentales, () recta ajustada

y (- - -) solucin ideal. Fuente: Charmolue y Rousseau, 1991. Reproducida con el
c
perm iso del Am erican Institute of Chem ical Engineers. Copyright AIChE
1991. Todos los derechos
reservados.
Sobresaturacin
Pudiera pensarse que una solucin con una concentracin de soluto mayor a
la de saturacin forma inmediatamente cristales pequeos o ncleos. Sin embargo, actualmente es bien conocido que bajo diferentes condiciones una solucin
puede contener ms soluto que el correspondiente a la saturacin, formando lo
que se conoce como solucin sobresaturada. El estudio del fenmeno de sobresaturacin es fundamental en el diseo de cristalizadores.
La curva de solubilidad (Fig. 12.5) separa dos regiones: a) la regin de subsaturacin donde una solucin es capaz de disolver ms soluto a las condiciones
dadas y b) la regin de sobresaturacin.
558
Figura 12.5: Zonas de sobresaturacin. (a) metaestable, (b) intermedia y (c)

lbil.
El comportamiento de las soluciones en la regin de sobresaturacin fue
descrito por H.A. Miers (Martino et al., 2007) a fines de los aos veinte. Estos
estudios han conducido a dividir la regin de sobresaturacin en tres zonas
cuya delimitacin no es muy precisa: a) la regin metaestable, donde el soluto
en exceso a la concentracin de equilibrio se deposita en cristales ya existentes
(sembrados o formados por nucleacin) pero no forma cristales nuevos o ncleos,
b) la regin intermedia, donde el soluto en exceso a la concentracin de equilibrio
se deposita en cristales existentes y forma nuevos cristales o ncleos y c) la regin
lbil, donde la formacin de cristales nuevos o ncleo ocurre en forma espontnea
a partir de una solucin que no contiene cristales o semillas.
A diferencia de la solubilidad de equilibrio, los lmites de estas tres zonas se
controlan no slo por el equilibrio, sino tambin por los parmetros del proceso
como el grado de agitacin.
El conocimiento de la regin de sobresaturacin permite determinar regiones
de operacin. En el caso de una operacin por lotes, con el propsito de lograr
un tamao de cristal lo ms uniforme posible, el grado de sobresaturacin se
mantiene en la regin metaestable, de tal manera que la sobresaturacin generada sirva para el crecimiento de los cristales ya existentes (sembrados) y no
exista formacin de cristales nuevos.
En una cristalizacin continua la sobresaturacin debe ser mantenida en el
lmite inferior de la regin intermedia, de tal manera que el nmero de cristales
que se retiran en la corriente de salida sea igual al nmero de cristales generados
por nucleacin. Adems, es necesario proveer un mecanismo de clasificacin
de cristales, de tal manera que slo se retiren cristales de un mismo tamao.
Esto se logra utilizando un lecho fluidizado de cristales, el cual proporciona una
rea adecuada para remover la sobresaturacin mediante el crecimiento de los
cristales.
12.2. FUNDAMENTOS
12.2.4.
559
Seleccin del Modo de Operacin
El modo de operacin en una cristalizacin es la tcnica empleada para

generar la sobresaturacin de la solucin. La seleccin del modo de operacin
est fuertemente influenciada por las caractersticas de la solubilidad en equilibrio del sistema. Una vez que se ha seleccionado el modo de operacin del
cristalizador es posible desarrollar los balances de masa y energa del sistema.
Los principales modos para generar la sobresaturacin (Fig. 12.6) son por:
a) enfriamiento, b) enfriamiento evaporativo, c) evaporacin trmica y d) evaporacin trmica al vaco.
Figura 12.6: Modos para generar sobresaturacin. a) Enfriamiento, b) Enfriamiento evaporativo, c) Evaporacin trmica y d) Evaporacin trmica al vaco.
Adaptada de: Moyers y Rousseau, 1987. Reproducida con el p erm iso de John W iley and
c
Sons. Copyright 1987.
560
Sobresaturacin por enfriamiento

Cuando la solubilidad del soluto vara sensiblemente con la temperatura, el
enfriamiento de la solucin a tratar permite la formacin de cristales con altos
rendimientos y bajo consumo energtico. Este enfriamiento puede realizarse en
forma externa mediante un intercambiador, o directamente utilizando un lquido
refrigerante inmiscible con la solucin y con propiedades termodinmicas que
minimicen el trabajo de compresin necesario. En este tipo de operacin la
evaporacin de solvente es mnima.
Recientemente, se ha combinado la tcnica de enfriamiento con el uso de
antisolventes, que son sustancias que se aaden al medio para mejorar la cristalizacin, ya sea por disminuir la solubildad o cambiar una propiedad qumica
como el pH (Lindenberg et al., 2009).
Sobresaturacin por enfriamiento evaporativo
En este modo el enfriamiento se produce con auxilio de un sistema de vaco.
La alimentacin entra a una temperatura mayor que la mantenida dentro del
cristalizador enfrindose adiabticamente dentro de ste. Este modo tambin es
aplicable cuando la solubilidad del soluto es muy sensible a la temperatura.
Sobresaturacin por evaporacin trmica
En este modo se transfiere calor al sistema para evaporar solvente y generar
la formacin de cristales por salting out. Este modo se emplea slo cuando la
solubilidad del soluto es insensible a la temperatura.
Sobresaturacin por evaporacin trmica al vaco
En este modo la alimentacin tiene una temperatura mayor que la mantenida en el cristalizador y al entrar se enfra adiabticamente. Paralelamente se
transfiere calor al sistema para evaporar solvente con auxilio de un sistema de
vaco. Este modo es empleado para la cristalizacin de solutos cuya solubilidad
tiene una dependencia intermedia respecto a la temperatura.
12.2.5.
Cintica de la Cristalizacin
Los fenmenos cinticos asociados a la cristalizacin son la nucleacin o

formacin de cristales nuevos, y el crecimiento de stos. La fuerza impulsora de
ambos fenmenos es la sobresaturacin. A niveles elevados de sobresaturacin
ambos fenmenos compiten por el soluto disponible.
Nucleacin
La velocidad de nucleacin afecta el tamao que los cristales pueden alcanzar
en un cristalizador por lotes. Conforme mayor sea la velocidad de nucleacin
menor es el tamao de los cristales obtenidos. En el caso de una cristalizacin
12.2. FUNDAMENTOS
561
continua el aumento de la velocidad de nucleacin se traduce en un mayor tiempo

de residencia de los cristales.
Existen dos mecanismos de formacin de cristales: a) nucleacin primaria y
b) nucleacin secundaria.
Nucleacin primaria En la nucleacin primaria el cristal nuevo se origina
espontneamente a partir de la solucin sobresaturada (nucleacin homognea)
o bien se origina a partir de un material insoluble, ya sean impurezas o cristales
del mismo material previamente sembrados (nucleacin heterognea).
Nucleacin secundaria Es la formacin de cristales nuevos como resultado
de la presencia de cristales ya crecidos de soluto. Puede originarse por medio de
varios mecanismos como:
a) Sembrado. Al colocarse cristales del material en una solucin sobresaturada, se piensa que el cristal libera pequeos cristales que se formaron durante
el proceso de secado y que dan origen a nuevos cristales.
b) Contacto. Consiste en la produccin de cristales nuevos mediante el
rompimiento de los cristales por choques entre s o con las diferentes partes
del equipo: tanque, bombas y agitadores.
c) Esfuerzo cortante. Cuando la solucin sobresaturada fluye sobre la superficie de los cristales se considera que puede despegar segmentos de cristal, que
pueden a su vez originar nuevos cristales.
Velocidad de nucleacin La velocidad de nucleacin es funcin de la sobresaturacin y del mecanismo que la origina. En general se observa que la
dependencia de la velocidad de nucleacin primaria con la sobresaturacin es de
mayor orden que la de la velocidad de nucleacin secundaria. Esto se muestra
en la Figura 12.7 en forma cualitativa.
La mayora de los cristalizadores operan en la regin de baja sobresaturacin
para que el crecimiento del cristal sea regular y el producto puro. Por tal motivo
la nucleacin secundaria es la ms empleada a nivel industrial. Por otro lado,
los mecanismos para controlar la nucleacin secundaria pueden establecerse con
relativa facilidad a ese nivel.
Ante la carencia de una descripcin matemtica detallada que englobe los
diferentes mecanismos de nucleacin posibles, la velocidad de nucleacin generalmente se expresa por medio de una correlacin emprica de la siguiente
forma:
B=
dN
= kn (c c )i
dt
donde:
B: Velocidad de nucleacin. [ncleos/t-L3 ].
kn : Parmetro emprico.
(12.4)
562
Figura 12.7: Influencia de la sobresaturacin sobre la velocidad de nucleacin.

Adaptada de: Moyers y Rousseau, 1987. Reproducida con el permiso de John W iley and
c
i: Parmetro emprico.
(c c ): Sobresaturacin. [M/L3 ].
c: Concentracin de soluto en la solucin. [M/L3 ].
c : Concentracin de saturacin del soluto. [M/L3 ].
N : Nmero de ncleos por unidad de volumen de solvente. [M/L3 ].
Crecimiento
El crecimiento de cristales es un fenmeno cuya fuerza impulsora tambin es
la sobresaturacin. El crecimiento de un cristal es un proceso de adicin capa
por capa. En la Figura 12.8 se muestra el proceso donde un cristal cbico ideal
crece por adicin de pequeos cubos sobre su superficie.
Velocidad de crecimiento El crecimiento slo puede ocurrir en la superficie
del cristal y las resistencias involucradas en el crecimiento son la de la difusin
del soluto hasta la superficie del cristal y la resistencia a la integracin del soluto
a la superficie del cristal; dado que estas resistencias actan en serie, la velocidad
de crecimiento de un cristal se puede expresar en forma emprica como:
dMc
= Kc A(c c )g
dt
en la ecuacin anterior Kc est dada por:
(12.5)
12.2. FUNDAMENTOS
563
Figura 12.8: Crecimiento de un cristal. Tomada de: Bennett, 1973.
Reproducida
c
con el permiso de M cGraw-Hill Inc. Copyright 1973.
donde:
Kc =
1
1
1
+
kL kS
(12.6)
Mc : Masa del cristal. [M ].

t: Tiempo. [t].
g: Parmetro emprico.
Kc : Coeficiente global de transferencia de masa. [L/t].
kL : Coeficiente transferencia de masa en la pelcula. [L/t].
kS : Velocidad especfica de integracin del soluto a la superficie del cristal.
[L/t].
(c c ): Sobresaturacin. [M/L3 ].
A: rea del cristal. [L2 ].
En sistemas no agitados la velocidad de crecimiento est controlada por la
difusin y el trmino 1/kS se cancela de la ecuacin (12.6). Cuando la velocidad
de agitacin es alta el trmino 1/kL es el que puede ser despreciado.
El coeficiente kL es funcin de algunos parmetros como la agitacin y la viscosidad del medio, mientras que kS no lo es. Por otro lado, kL vara ligeramente
con la temperatura, mientras que kS generalmente es una funcin exponencial
de sta y puede cambiar dramticamente durante un proceso de enfriamiento.
564
Longitud caracterstica Uno de los objetivos de la cristalizacin es producir

cristales de tamao uniforme, por tal motivo la velocidad de crecimiento de
un cristal generalmente se asocia a una longitud caracterstica medible. Esta
longitud puede ser determinada por varios mtodos, siendo el ms utilizado el
del tamizado de los cristales bajo estudio.
Se puede asociar la velocidad de crecimiento de un cristal expresada en
unidades de masa por unidad de tiempo, con una velocidad expresada en longitud por unidad de tiempo, partiendo de la siguiente relacin conocida:
Mc = c Vc
(12.7)
donde c y Vc son la densidad y el volumen de un cristal, respectivamente.
Si se supone que el cristal mantiene una similitud geomtrica durante su
crecimiento, una longitud caracterstica del cristal que sea seleccionada mantendr una proporcin constante con las otras dimensiones. Con base a lo anterior,
la ecuacin (12.7) puede ser expresada en funcin de esta longitud caracterstica
Mc = c (V l3 )
(12.8)
donde V es un factor geomtrico que relaciona la longitud caracterstica l del

cristal, con su volumen Vc = V l3 .
De igual manera el rea del cristal puede relacionarse con la longitud caracterstica mediante:
A = A l2
donde A es un factor geomtrico de rea.
(12.9)
Ejemplo 12.2. Longitud caracterstica y factores geomtricos.

Se pide: Determinar la longitud caracterstica y los factores geomtricos de
rea y volumen para:
a) Una esfera.
b) Un cubo.
Solucin:
a) El rea y volumen de una esfera de dimetro d son:
A = d2 ; V =
de tal manera que:
3
d
6
l = d; A = ; V =
b) En el caso de un cubo de lado L,

A = 6L2 ; V = L3
de tal manera que:
l = L; A = 6; V = 1
12.2. FUNDAMENTOS
565
Velocidad de crecimiento y longitud caracterstica Se puede combinar

la ecuacin (12.5) con las ecuaciones (12.8) y (12.9) para obtener una expresin de la velocidad del crecimiento de un cristal en funcin de una longitud
caracterstica,
d(c V l3 )
= (Kc )(A l2 )(c c )g
dt
(12.10)
o bien,
dl
=
dt
Kc
c
A
3V
(c c )g
(12.11)
La ecuacin (12.11) puede escribirse en forma simplificada de la siguiente

manera:
dl
= kg (c c )g
dt
(12.12)
donde kg es la constante cintica de crecimiento de un cristal.

La velocidad de crecimiento expresada en funcin de una longitud caracterstica se simboliza como G, de tal manera que:
G = kg (c c )g
(12.13)
Las ecuaciones (12.4) y (12.13) describen la velocidad de formacin y crecimiento de cristales, respectivamente. Ambos fenmenos dependen de la sobresaturacin pero son independiente del tamao de los cristales ya formados.
Ley delta L: L
Se ha demostrado experimentalmente que todos los cristales de un material
que son geomtricamente similares, cuando crecen en una misma solucin crecen
a una velocidad constante e igual para todos los tamaos de cristal, cuando la
velocidad es medida en funcin de una longitud caracterstica. Es decir este tipo
de cristales cumplen con la ecuacin (12.13).
12.2.6.
Distribucin de Tamao en Poblaciones de Cristales
Para caracterizar una operacin de cristalizacin tambin es necesario describir la distribucin del tamao de los cristales en una suspensin o magma.
Este tipo de distribucin es necesaria para realizar los balances de masa y energa en los cristalizadores.
La distribucin de tamaos de una poblacin de cristales, generalmente se
describe por medio de una curva de densidad poblacional como la que se muestra
en la Figura 12.9. Un punto sobre la curva relaciona a li con Ni , donde li es una
longitud dada de cristal y Ni es el nmero de cristales por unidad de volumen
de solvente, con una longitud entre 0 y li .
566
Figura 12.9: Curva de densidad poblacional. Adaptada de: Belter et al., 1988.
c
La pendiente de la curva permite obtener la densidad poblacional n que

es una medida del nmero de cristales por unidad de volumen en un intervalo
diferencial de longitud; es decir,

N
dN
lim
=
(12.14)
n=
l 0 l
dl
El uso apropiado de la variable densidad de poblacin n permite estimar importantes caractersticas de una poblacin de cristales, mediante los momentos
fraccionarios de esta distribucin.
Anlisis de momentos de la distribucin de tamao
De acuerdo a la definicin de momentos de una distribucin, el momento
fraccionario k de la distribucin de tamaos de cristales est dado por:
l
lk [n(l)] dl
k = o
lk [n(l)] dl
(12.15)
donde n(l) es la densidad poblacional para el tamao l. Existen cuatro casos

particulares de inters:
a) Para k = 0, el momento fraccionario 0 representa la fraccin del nmero
de cristales de una poblacin que tiene un tamao entre 0 y l,
12.2. FUNDAMENTOS
567
l
0 = o
[n(l)] dl
(12.16)
[n(l)] dl
b) Para k = 1, el momento fraccionario 1 es la fraccin que representa la

suma de las longitudes de los cristales de tamao entre 0 y l, de la longitud total
de los cristales de una poblacin.
l
l [n(l)] dl
1 = o
l [n(l)] dl
(12.17)
c) Para k = 2, el momento fraccionario 2 es la fraccin que representa

la suma del rea de los cristales de tamao entre 0 y l, del rea total de una
poblacin de cristales.
A
2 =
l
l2 [n(l)] dl

A l2 [n(l)] dl
(12.18)
d) Para k = 3, el momento fraccionario 3 es la fraccin que representa la

masa de los cristales de tamao entre 0 y l, de la masa total de una poblacin
de cristales.
c V
3 =
l
l3 [n(l)] dl

c V l3 [n(l)] dl
o
(12.19)
568
12.3.
Equipos de Cristalizacin
La seleccin del tipo de cristalizador est influenciada tanto por el volumen de produccin como por el modo de operacin seleccionado. En general los
equipos de cristalizacin pueden operar en dos formas:
Por lotes.
Continua.
12.3.1.
Cristalizadores por Lotes
Los cristalizadores por lotes son tanques agitados con sistemas de vaco y
enfriamiento (Fig. 12.10). El ciclo de la cristalizacin dura entre 2 y 8 horas. Al
final del ciclo, el material cristalizado se retira del cristalizador para lavarse y
secarse. La mayora de los productos biotecnolgicos que involucran una cristalizacin se obtienen en operaciones por lotes.
Figura 12.10: Cristalizador por lotes. Adaptada de: Bennett, 1988.
Reproducida
c
con el p erm iso de McGraw-Hill Inc. Copyright 1988.
12.3.2.
Cristalizadores Continuos
Existen tres tipos bsicos de cristalizadores continuos: a) Cristalizador-Evaporador con circulacin de lquido (tambin llamado cristalizador con clasificacin de la suspensin o tipo Oslo), b) Cristalizador al vaco y con circulacin
forzada de magma y c) Cristalizador con tubo de tiro y mampara.
12.3. EQUIPOS DE CRISTALIZACIN
569
Cristalizador-Evaporador con circulacin de lquido

En el Cristalizador-Evaporador con circulacin de lquido (Fig. 12.11) la
sobresaturacin se produce por evaporacin. La alimentacin concentrada y
caliente se mezcla con la corriente de recirculacin y se bombea a la cmara
de evaporacin donde el solvente se evapora adiabticamente con ayuda de un
sistema de vaco. El lquido sobresaturado fluye hacia la parte inferior del cristalizador a travs de un tubo de bajada y despus hacia arriba a travs de un
lecho fluidizado de cristales que permite una liberacin efectiva de la sobresaturacin. Los cristales ms grandes sedimentan y son retirados por el fondo del
cristalizador. Los cristales ms finos pueden ser retirados por la parte superior
para incrementar el tamao de los cristales.
Figura 12.11: Cristalizador-Evaporador con circulacin de lquido. Adaptada de:

c
Bennett, 1988. Reproducida con el p erm iso de M cGraw-Hill Inc. Copyright 1988.
Todos los
Cristalizador al vaco y circulacin forzada de magma

El cristalizador al vaco y circulacin forzada de magma (Fig. 12.12), tambin
conocido como cristalizador con Remocin de Producto Mezclado y Suspensin
Mezclada (RPMSM) consta de un cuerpo principal dimensionado para la liberacin del vapor con un nivel de lquido apropiado para retener los cristales en
crecimiento.
La alimentacin se mezcla con la corriente de salida del cuerpo principal y
se hace pasar por un intercambiador donde se eleva su temperatura entre 2 y
6 C. La suspensin en la superficie del cristalizador libera parte del solvente
570
Figura 12.12: Cristalizador al vaco y circulacin forzada de magma . Adaptada

c
de: Bennett, 1988. Reproducida con el p erm iso de M cGraw-Hill Inc. Copyright 1988.
Todos
producindose la sobresaturacin.
Cristalizador con tubo de tiro y mampara
En el cristalizador con tubo de tiro y mampara (Fig. 12.13), los cristales de
mayor tamao que sedimentan en el fondo del cristalizador son impulsados hacia
la regin superior donde se efecta la evaporacin y se origina la sobresaturacin,
mediante un impulsor grande que se mueve a bajas velocidades. Una mampara
externa al tubo de tiro permite formar una zona de sedimentacin externa, a
partir de la cual los cristales finos pueden ser retirados para incrementar el
tamao del cristal. La alimentacin mezclada con la corriente de finos se hace
pasar por un intercambiador de calor y se introduce por la parte inferior del
cristalizador.
12.4.
Diseo de Cristalizadores
Actualmente se han logrado avances importantes en la modelacin de cristalizadores para su anlisis, diseo y optimizacin, en aplicaciones a situaciones de
importancia industrial. Sin embargo, existen an varias limitaciones debido a lo
complejo que resulta describir de manera racional la forma como se relacionan
los fenmenos de nucleacin y crecimiento de cristales, con las variables de
operacin y la configuracin de los cristalizadores.
12.4. DISEO DE CRISTALIZADORES
571
Figura 12.13: Cristalizador con tubo de tiro y mampara. Adaptada de: Bennett,
c
1988. Reproducida con el permiso de M cGraw-Hill Inc. Copyright 1988.
Todos los derechos
reservados.
En esta seccin se describe cmo se combinan los balances poblacionales de

cristales, los balances de masa y los balances de energa en el diseo de tres
sistemas de inters en cristalizacin:
Cristalizador por lotes.
Cristalizador continuo.
Cristalizador continuo con remocin selectiva.
12.4.1.
Cristalizadores por Lotes
La cristalizacin por lotes es muy utilizada en la fase de acabado de la produccin de antibiticos, cido ctrico y varios otros productos de peso molecular
intermedio, cuyos volmenes de produccin son bajos (menores a 50 ton/da) y
la alimentacin disponible es intermitente.
La forma de generar la sobresaturacin o modo de operacin determina en
gran medida el rendimiento y la distribucin del tamao de cristales en la operacin por lotes. Sin embargo, la operacin por lotes tiene una mayor dependencia de la forma como se genera la sobresaturacin. Cuando sta se genera por
enfriamiento existen varias formas de realizarla:
a) Enfriamiento con una fuente externa de temperatura constante.
b) Enfriamiento a velocidad de transferencia de calor constante.
572
c) Enfriamiento a sobresaturacin constante.

d) Enfriamiento a velocidad controlada para optimizar el tamao de cristal
y la pureza.
El desarrollo de modelos y el anlisis de los cristalizadores por lotes est
limitado por la disponibilidad de datos cinticos de velocidad de crecimiento
de cristales y de nucleacin. En trminos generales los mtodos de diseo y
anlisis de cristalizadores por lotes estn menos desarrollados que los de los
cristalizadores continuos (Abbas y Romagnoli, 2007). Por otro lado, existe un
creciente inters en los experimentos por lotes dado que se puede obtener ms
informacin en un solo experimento y de cierta forma son ms fciles que los
experimentos continuos.
Uno de los principales problemas de los cristalizadores por lotes es mantener
la distribucin de tamao de cristales entre una corrida y otra. Esto se evita
mediante el sembrado de cristales, y mediante el control de las condiciones de
mezclado y enfriamiento.
Los experimentos con cristalizadores por lotes sembrados permiten generar expresiones cinticas de crecimiento cuando se suprime la nucleacin. Para
obtener la informacin relativa a la nucleacin, se requiere efectuar mediciones de
distribucin de tamao mediante experimentos donde se vara: la concentracin
inicial de soluto, la temperatura final o el tiempo de operacin. Debido a lo anterior, el diseo de operaciones de cristalizacin por lotes requiere la generacin
de informacin experimental para determinar aspectos como: a) rendimiento
potencial de la operacin, b) pureza de los cristales, c) permeabilidad del lecho
de cristales, d) curva de solubilidad-temperatura y e) distribucin de tamao de
cristales.
Una de las desventajas de la cristalizacin por lotes sin control de la velocidad
de enfriamiento, consiste en que este modo de operacin produce generalmente
un producto de baja pureza y baja uniformidad. Esto se debe a que las velocidades de enfriamiento son ms altas al inicio del proceso, generando un exceso
de nucleacin con la consecuente disminucin de tamao de cristal dominante,
as como efectos de incrustamiento sobre las paredes de enfriamiento que reducen la transferencia de calor. Esto puede ser minimizado mediante un control
de temperatura que permita una velocidad de enfriamiento variable.
Balance poblacional
La descripcin de la cristalizacin se realiza mediante balances poblacionales
de cristales. Estos balances consideran que el nmero de cristales es una cantidad
balanceable. Se supone que los cristales son lo suficientemente numerosos y
pequeos, de tal manera que su distribucin de tamao puede considerarse una
funcin continua de la longitud caracterstica o tamao del cristal. Se supone
adems en el siguiente caso que no ocurre rompimiento ni aglomeracin de
cristales.
El balance poblacional de cristales en un cristalizador considerando slo los
cristales en un rango de tamao dl = l2 l1 , puede expresarse en palabras como:
573
[La variacin con el tiempo, al interior del cristalizador, del nmero de

cristales de tamao en el rango dl] =
[La velocidad de entrada en la alimentacin de cristales de tamao en el
rango dl]
[La velocidad de salida del cristalizador de cristales de tamao en el rango
dl] +
[El nmero de cristales por unidad de tiempo que al crecer en el cristalizador
entran al rango de tamao dl]
[El nmero de cristales por unidad de tiempo que al crecer en el cristalizador
salen del rango de tamao dl]
El balance se expresa matemticamente como:
(nG)
(V n) = FA nA F n V
(12.20)
t
l
Si consideramos un cristalizador por lotes donde:
a) No hay entrada ni salida de cristales.
b) El volumen es constante.
c) El cristalizador est perfectamente agitado y no existen prdidas de solvente.
d) No existe variacin del nmero de cristales por aglomeracin o rompimiento.
e) Todos los cristales crecen a la misma velocidad.
El balance poblacional en el cristalizador por lotes es:
n
n
+G
=0
(12.21)
t
l
El balance de masa de soluto en el cristalizador se puede expresar como:
dC
=
dt
p
Mp
A G
nl2 dl
(12.22)
Las ecuaciones anteriores estn acopladas y tienen que ser resueltas simultneamente mediante mtodos numricos apropiados (Kumar et al., 2009;
Qamara et al., 2006). Los mtodos utilizados se pueden dividir en seis tipos:
a) momentos, b) caractersticas, c) colocacin ortogonal, d) simulacin Monte
Carlo, e) diferencias finitas y f) volumen finito.
Ejemplo 12.3 Cristalizacin por enfriamiento en lotes de paracetamol.
Se realiza la cristalizacin de paracetamol a partir de una solucin de etanol
en un cristalizador por lotes enchaquetado de 500 mL, que se puede considerar
574
perfectamente mezclado, mediante un agitador de 4 paletas que gira a 400 rpm

con un Re = 9000 (Barthe y Rousseau, 2006). El fenmeno de cristalizacin se
cuantifica mediante la tcnica de medidor de la reflectancia del haz focalizado
(FBRM) que forma parte de las tecnologas analticas de proceso (PAT) con
mayor potencial para monitoriar las operaciones de cristalizacin (Yu et al.,
2004).
La solucin se aade al cristalizador y se acondiciona a 70 C por 20 min.
Posteriormente se enfra a una velocidad de V e = 0.2 C/min hasta alcanzar
una temperatura de 10 C. Despus de este periodo se mantiene la temperatura
constante.
La solubilidad del paracetamol en la solucin est dada por la siguiente
correlacin:

2.955 104 exp(2.179 102 T )

C =

2.955 104 exp(2.179 102 T )
1
Mp
+
p
s
La velocidad de nucleacin homognea puede expresarse como (Omar et al.,

2006):

2
Mp
16
p NA
B = kb exp
2
3 T 3 ln
3kB
C
En la expresin anterior, la energa interfacial slido-lquido est dada por

la siguiente expresin:
= 0.414kB T
p NA
Mp
23
ln
Cs
C
La cintica de crecimiento de cristales determinada experimentalmente y

la variacin de la constante especfica de crecimiento con la temperatura se
expresan mediante el siguiente modelo:

Ea
g
g
Gm = kg (Cm Cm
) = kg,0 exp
(Cm Cm
)
RT
o bien como:
G = Gm
A
3V p
En el cambio de unidades de las concentraciones se puede utilizar la ecuacin

siguiente:
Cm
575
Mp C
s

=
Mp C
1
p
Los valores de las variables y parmetros del sistema son las siguientes:
Parmetro o variable
B
C (conc. fase lquida)
C (solubilidad)
Cs (conc. fase slida)
Cm
Cm
Cm,0 = Mo soluto /Mo solvente
Ea (energa de activacin)
Gm
G
g
kb
kB constante de Boltzmann
kg,0
Mp soluto
n
NA
R
T
Ve
p soluto
s solvente
A octaedros
V octaedros
Valor
y/o unidades
1/ m3 s
mol soluto/L solucin
masa soluto/masa solvente
masa soluto/masa solvente
(0.125 kg) / (0.263 kg) = 0.475 kg/kg
41.6 kJ/mol
kg/ m2 s
m/s
2
3.96 1024 1/m3 s
1.38 1023 J/ K

2.68 104 kg/ m2 s (kg/kg solvente)g
151.16
g/mol

1/ m m3
6.02 1023 / mol
8.314 J/( K mol)
K
0.10 o C/min.
J/m2
1293 kg/m3
789 kg/m3

2
3
3 ( ) = 3. 715 3
3/2
Se pide:
a) Establecer el balance de la densidad poblacional en el cristalizador.
b) Desarrollar el balance de masa de soluto en el cristalizador.
c) Discretizar la ecuacin del balance de la densidad poblacional empleando
el mtodo de diferencias finitas de Runge-Kutta de primer orden.
d) Discretizar la ecuacin del balance de soluto empleando el mtodo de
diferencias finitas de Runge-Kutta de primer orden.
e) Desarrollar un programa MATLAB para resolver el sistema de ecuaciones
acopladas y graficar la curva de densidad poblacional a intervalos de 15 min
cuando la cristalizacin se opera por espacio de 10 h.
Solucin:
576
a) El balance de cristales en ausencia de rompimiento y aglomeracin de

cristales puede ser expresado como:
n
n
+G
=0
t
l
En ausencia de cristales sembrados, la condicin inicial de la ecuacin anterior es:
t=0
n=0
La condicin de frontera se expresa como:

n0 =
l=0
B
G
b) El balance de masa de soluto es el siguiente:

p
dC
=
A G nl2 dl
dt
Mp
0
La condicin inicial de la ecuacin anterior es:

t=0
C = C0
c) El balance poblacional en forma discreta es:

n (lj , ti ) n (lj1 , ti )
n (lj , ti+1 ) n (lj , ti )
+ G(ti )
t
lj
de tal manera que:

n (lj , ti ) n (lj1 , ti )
n (lj , ti+1 ) = n (lj , ti ) [G(ti )]
t
lj
d) El balance de soluto en forma discretizada se expresa como:

C (ti+1 ) C (ti )
p
=
A G(ti )
n (lj , ti ) lj2 l
t
Mp
j=1
o bien,
C (ti+1 ) = C (ti )
p
Mp
1
G(ti )A
n (lj , ti ) lj2 l t
j=1
e) En la Fig.12.14 se presenta un programa MATLAB para la solucin del

modelo del cristalizador.
Las curvas de densidad poblacional se muestran en la Fig. 12.15
577
Figura 12.14: Programa MATLAB para la obtencin de las curvas de densidad

poblacional del Ejemplo 12.3.
578
Figura 12.15: Curvas de distribucin poblacional del Eejemplo 12.3.

Cristalizacin por lotes: enfriamiento controlado y con la nucleacin
suprimida
Los balances poblacionales para cristalizadores por lotes son ms complejos
debido a que tanto la velocidad de crecimiento de los cristales G, como la velocidad de nucleacin B o , son funcin de la sobresaturacin que es variable en
el proceso por lotes, disminuyendo continuamente desde su valor inicial hasta
su valor al final del proceso. Por esta razn el enfoque de diseo utilizado en los
cristalizadores continuos es poco til para los cristalizadores por lotes.
En la cristalizacin por lotes con enfriamiento controlado, inicialmente la
generacin de sobresaturacin por enfriamiento es lenta debido a que los cristales
son an pequeos. Conforme aumenta el rea de los cristales la velocidad de
generacin de sobresaturacin por enfriamiento tambin se aumenta.
En los cristalizadores con control de temperatura se ha utilizado un enfoque
emprico para determinar la curva de enfriamiento del sistema (la variacin
de la temperatura con el tiempo dentro del cristalizador) debido a que es dificil
establecer la cintica del sistema. Esta curva es empleada para disear el sistema
de control.
En el enfoque emprico se supone que al inicio de la cristalizacin todos los
cristales tienen el mismo tamao y se busca determinar la dinmica que debe
seguir la temperatura para mantener una velocidad de crecimiento constante.
Con este propsito es necesario realizar un balance de la cantidad de soluto de
sobresaturacin dentro del cristalizador, el cual puede ser descrito en palabras
como:
[La variacin de la masa de soluto de sobresaturacin] =
579
[La variacin de la masa de soluto de sobresaturacin por efecto de la temperatura] +

[La velocidad de consumo de soluto por crecimiento del cristal] +
[La velocidad de consumo de soluto por nucleacin]
Las cristalizaciones por lotes generalmente se desarrollan en la regin metaestable para controlar el tamao del cristal minimizando la nucleacin. Esto
requiere que los cristales sean sembrados para iniciar el crecimiento. En este
caso la variacin de la masa de soluto de sobresaturacin y el consumo de masa
por nucleacin pueden ser despreciados, simplificndose el balance anterior a los
dos primeros trminos del lado derecho. Este balance puede ser expresado con
ayuda de las ecuaciones (12.5) y (12.6) de la siguiente forma:
0=V
AT
dc
(c c )
+
1
1
dt
+
kL kS
(12.23)
donde AT es el rea de todos los cristales, variable que depende de la velocidad

de crecimiento, por lo tanto,
AT
AT
donde:

rea
= (nmero de cristales)
cristal

MS
A (ls + Gt)2
=
c V ls3
(12.24)
(12.25)
MS : Masa total de los cristales sembrados.

ls : Longitud de los cristales sembrados.
En la ecuacin (12.25) G es la velocidad lineal de crecimiento del cristal dada
por la ecuacin (12.11), es decir;

A
dl
1

G=
=
(c c )
(12.26)
1
1 3V
dt
+
kL kS
sustituyendo las ecuaciones (12.25) y (12.26) en la ecuacin (12.23 ):

dc
Ms
3G
=
(ls + Gt)2
dt
V
ls3
Dado que c es funcin de la temperatura,
(12.27)
580
dc
=
dt
combinando (12.27) y (12.28),
dc
dT
dT
dt
(12.28)
Ms
dT
3G
= V
(ls + Gt)2
dc
dt
ls3
dT
(12.29)
lf = ls + Gtf
(12.31)
La ecuacin anterior permite obtener la variacin de temperatura para mantener una velocidad de crecimiento de cristales constante. Esta expresin puede
simplificarse si se considera un intervalo corto de temperatura donde la variacin
de la solubilidad sea constante; en este caso la ecuacin (12.29) puede ser integrada para obtener:
Ms

2
Gt 1 Gt
V 3Gt
T = To
1+
+
(12.30)
dc
ls
ls
3 ls
dT
donde To es la temperatura a la cual los cristales inician su crecimiento.
La ecuacin anterior puede expresarse adimensionalmente utilizando la expresin de la longitud final del cristal,
donde tf es el tiempo necesario para alcanzar lf . A partir de la ecuacin (12.31)

se define un tiempo adimensional dado por:
=
Gt
(lf ls )
(12.32)
(lf ls )
ls
(12.33)
y se define una longitud adimensional que caracteriza las veces que se incrementa la longitud del cristal respecto a su tamao inicial dada por:
=
sustituyendo (12.32) y (12.33) en (12.30) se obtiene:
Ms

1
V
2
T = To (3) 1 + + ( )
dc
3
dT
(12.34)
De acuerdo a la ecuacin (12.34) la masa final de los cristales menos la masa

sembrada de los cristales est dada por:

dc
(To Tf )
(12.35)
Mf = V
dT
581
combinando las expresiones (12.34) y (12.35) se obtiene la expresin adimensional:

Ms
T To
1
2
=
(3) 1 + + ( )
(12.36)
Tf To
Mf
3
Suponiendo que la densidad de cristales c permanece constante se puede derivar

la siguiente expresin:
Ms
=
Mf
3
ls
lf
(12.37)
la cual puede ser simplificada para ls bajos, de acuerdo a la ecuacin (12.33)

como:
Ms
1
3
Mf
(12.38)
y la ecuacin (12.36) se puede aproximar a:

To T
=
3
To Tf
(12.39)
que es la expresin de la curva de enfriamiento que permite mantener un crecimiento constante y evitar la nucleacin inicial excesiva.
Ejemplo 12.4. Cristalizacin por lotes de cido succnico.
Se pide: Obtener la curva de enfriamiento para cido succnico en el intervalo de enfriamiento de 30 a 20 C y un tiempo de operacin de 120 min.
Solucin:
Utilizando la ecuacin (12.39),
(30 T )
(30 20)
T
t
120
= 30
3
10 t3
(120)3
En la Figura 12.16 se presenta la curva de enfriamiento que genera la expresin anterior. Inicialmente la temperatura permanece constante luego baja
abruptamente. Este comportamiento es caracterstico de la cristalizacin por
lotes con control de temperatura (Qiu y Rasmuson, 1991).
Escalamiento de cristalizadores por lotes
Para realizar el escalamiento de cristalizadores por lotes se requiere desarrollar una expresin de la velocidad de nucleacin como funcin de la velocidad
de enfriamiento, de la agitacin y de la geometra del cristalizador.
582
Figura 12.16: Curva de enfriamiento del Ejemplo 12.4.

Dado que generalmente el mecanismo de nucleacin controlante a escala
industrial es la nucleacin secundaria, varios criterios de escalamiento se fundamentan en los aspectos de mezclado. Estos criterios plantean mantener constante
entre las escalas algunos parmetros como: a) la potencia por unidad de volumen, b) la agitacin, c) la velocidad de punta del agitador y d) la velocidad
mnima del agitador que permita mantener la suspensin.
12.4.2.
Cristalizador Continuo
La descripcin de la cristalizacin continua tambin se realiza mediante balances poblacionales de cristales. La Figura 12.17 muestra el esquema de un
cristalizador continuo perfectamente agitado operando en modo cristalizacin
por enfriamiento.
Figura 12.17: Esquema de un cristalizador continuo.

El cristalizador es alimentado continuamente con un flujo volumtrico de
583
solvente FA que presenta una concentracin yA de soluto disuelto por volumen

de solvente. La distribucin del tamao de los cristales a la entrada est dada
por nA .
El cristalizador contiene un volumen V de solvente, con una concentracin
de soluto disuelto por volumen de solvente y y una distribucin de tamao de
cristales caracterizada como n. Como el cristalizador est perfectamente agitado
el flujo volumtrico de solvente a la salida F tambin est caracterizado por y
y n. El balance poblacional del cristalizador continuo est dado por la ecuacin
(12.20).
Cristalizador continuo con remocin de producto mezclado - Suspensin mezclada. (RPMSM)
La ecuacin (12.20) ha sido resuelta para un caso particular de cristalizador
continuo bien agitado llamado: Remocin de Producto Mezclado - Suspensin
Mezclada (RPMSM), que est sujeto a las siguientes restricciones (Wierzbowska
et al., 2008):
a) El volumen es constante.
b) El cristalizador est perfectamente agitado y no existen prdidas de solvente.
c) No existe variacin del nmero de cristales por aglomeracin o rompimiento.
d) El cristalizador opera en estado estacionario, por lo que:
(V n) = 0
t
(12.40)
e) La alimentacin no contiene cristales,

nA = 0
(12.41)
f) El crecimiento de cristales al interior del cristalizador sigue la ley de l,

es decir,
G
=0
(12.42)
l
con base a lo anterior, el ltimo trmino de la ecuacin (12.20) puede expresarse
(nG)
G
n
n
=n
+G
=G
l
l
l
l
(12.43)
Considerando las ecuaciones (12.40) - (12.43), la ecuacin (12.20) se simplifica a la forma siguiente:
dn nF
+
=0
(12.44)
dl
V
como el tiempo de residencia promedio en el cristalizador est dado por:
G
584
V
F
entonces la ecuacin (12.44) puede ser expresada como:
=
(12.45)
dn n
+ =0
(12.46)
dl
Cuando l es muy pequea (tiende a cero) la densidad poblacional n(0) se

deriva preferentemente de la nucleacin de nuevos cristales, entonces,
G
dN
Bo
n(0) = no = dt =
(12.47)
dl
G
dt
La ecuacin (12.47) puede utilizarse como condicin de frontera para la integracin de la ecuacin (12.46), obtenindose la ecuacin:

l
o
n = n exp
(12.48)
G
o bien,
n=
Bo
exp
G
l
G
(12.49)
La ecuacin (12.49) puede ser utilizada para: a) estimacin de parmetros

en un cristalizador RPMSM y b) diseo de cristalizadores RPMSM.
Estimacin de parmetros en un cristalizador RPMSM
La ecuacin (12.49) puede ser utilizada para obtener velocidades de nucleacin y crecimiento de cristales, mediante datos de densidad poblacional
obtenidos en un cristalizador RPMSM. Para tal efecto, la ecuacin (12.49) puede
rearreglarse para ser expresarse en forma logartmica como:
o
l
B
(12.50)
ln (n) = ln
G
G
De acuerdo con la ecuacin anterior los datos experimentales de ln (n) vs

l ajustados a una lnea recta, presentarn una pendiente m = (1/G) y una
ordenada en el origen igual a ln(B o /G).
El tiempo de residencia en el cristalizador y la pendiente permiten determinar G. La ordenada en el origen conjuntamente con el valor de G permiten
determinar B o .
Existen varias tcnicas para obtener la distribucin de tamao de partculas
de una poblacin. Los procedimientos para determinar n a partir de los datos
que se generan con las tcnicas, varan con cada una de ellas. Dos tcnicas son
de particular inters: a) el analizador electrnico de partculas y b) el analizador
de malla.
585
Analizadores electrnicos de partculas Los analizadores electrnicos de

partculas miden el cambio de alguna propiedad como difraccin de la luz, dispersin de la luz, bloqueo de luz, conductividad elctrica o reflectancia, conforme la
poblacin de partculas fluye por un sensor (Barthe y Rousseau, 2006). El cambio de tales propiedades es funcin del volumen de la partcula, de tal manera
que ste es el parmetro que se correlaciona con las mediciones del instrumento.
Mediante estas determinaciones es posible obtener densidades poblacionales en
forma directa o indirecta, dependiendo del equipo.
Analizador de mallas Los analizadores de mallas consisten en un conjunto
de cilindros cortos sin tapa superior y con una malla en el fondo, arreglados
verticalmente de mayor a menor tamao de malla. Una vez que se coloca la
muestra en el cilindro superior, el sistema se somete a movimiento mecnico,
de tal manera que se genere un fenmeno de cribado. Funcionan en seco o en
hmedo y proporcionan una distribucin acumulativa de peso. Los cristales del
magma bajo estudio requieren cierto tratamiento previo: deben ser filtrados,
lavados, secados y durante su manejo debe evitarse su rompimiento.
Una vez que se ha cribado la muestra es necesario determinar n a partir
de los datos de la masa de cristales acumulada en cada malla, lo cual puede
realizarse de acuerdo a la ecuacin (12.14) mediante la siguiente expresin:
n=
MT W
lc V l3
(12.51)
donde:
MT : Densidad de cristales en el magma (masa de cristales por unidad de volumen de solvente en la suspensin).
W : Fraccin de la masa total de cristales retenida en una malla.
l: Longitud de la abertura de la malla.
l: Intervalo de abertura de malla donde se retienen los cristales.
c : Densidad de los cristales.
V : Factor geomtrico de volumen.
El numerador de la ecuacin (12.51) representa la masa de cristales de
tamao promedio l. El denominador contempla la masa de un cristal de tamao
promedio l y el intervalo l.
Ejemplo 12.5. Anlisis de la cristalizacin de urea. Se obtiene una
muestra de cristales de urea en un cristalizador RPMSM. La masa de cristales
en la suspensin es de 450 g/L, la densidad de la urea es de 1.335 g/cm3 y
el tiempo de residencia de 3.38 h. El factor geomtrico de volumen V puede
considerarse igual a la unidad.
586
En la Tabla 12.1 se presentan los datos del anlisis de mallas practicado a

la muestra. En la columna (1) el tamao nominal de la malla, en la columna
(2) el porcentaje de masa acumulada en la malla respectiva, en la columna (3)
la fraccin masa acumulada entre mallas y en la columna (4) la abertura de la
malla en mm.
Tabla 12.1: Datos y clculos del Ejemplo 12.5.

(1)
M alla
(2)
% de
m asa
acumulada
(3)
Frac.
masa
W
14
20
4.4
28
14.4
35
24.2
48
31.6
65
15.5
100
7.4
Fondo
2.5
0.044
0.144
0.242
0.316
0.155
0.074
0.025
(4)
Tamao
abertura
malla
(m m)
1.190
0.841
0.595
0.420
0.297
0.210
0.149
(5)
Longitud
prom edio
(6)
Increm ento
l (m m)
l (mm )
1.016
(7)
(8)
ln(n)
0.349
40,581
10.61
0.718
0.246
533,070
13.19
0.508
0.175
3,566,200
15.09
0.359
0.123
18,795,000
16.75
0.254
0.087
36,865,000
17.42
0.180
0.061
70,703,000
18.07
Fuente: Bennett, 1973.
c
Reproducida con el p erm iso de M cGraw-Hill Inc. Copyright 1973.
Se pide: Calcular la velocidad de nucleacin y crecimiento de los cristales

de urea.
Solucin:
De acuerdo con la ecuacin (12.50) es necesario generar una grfica de ln (n)
vs l, para lo cual es necesario utilizar la ecuacin (12.51).
Entre la malla 14 y la malla 20 los clculos a realizar son:
l
l
= 1.190 mm 0.841 mm = 0.349 mm

(1.190 + 0.841) mm
=
= 1.016 mm
2
de tal manera que mediante la ecuacin (12.51) se obtiene:
450
n20
587
g
0.044
L
g
cm3
1 1.016 mm3 3
3
cm
10 mm3
nmero de cristales
n20 = 40, 521
mm L
ln (n20 ) = 10.61
0.349 mm 1.335
Los clculos para las otras mallas aparecen en la Tabla 12.1 en las columnas
(5), (6), (7) y (8).
Los datos de ln (n) vs l se presentan en la forma grfica en la Figura 12.18.
Los parmetros de la recta ajustada son:
Figura 12.18: Curva de cristalizacin de urea del Ejemplo 12.5.
Pendiente = 9.05 mm1

Ordenada en el origen = 19.765
Con estos datos es posible calcular la velocidad de crecimiento y nucleacin
de los cristales.
a) Velocidad de crecimiento. De acuerdo a la ecuacin (12.50),
m=
1
G
de tal manera que:

G=
mm
1
= 0.0327
9.05
h
3.38 h
mm
588
b) Velocidad de nucleacin. De acuerdo a la ecuacin (12.47),

B o = no G
como:
ln (no ) = 19.765
entonces,
no = 3.838 108
y la velocidad de nucleacin es:
nmero de cristales
mm L

mm
nmero
8 nmero
B = 3.838 10
0.0327
= 1.255 107
mm L
h
Lh
o
Ejemplo 12.6. Orden de nucleacin. Combinando estudios de laboratorio y estudios piloto, se obtuvieron valores de la velocidad de crecimiento y
nucleacin mediante anlisis con mallas a diferentes tiempos de residencia, manteniendo la masa total de cristales por unidad de volumen constante e igual a
0.84 g/cm3 . La densidad de los cristales es de 1.23 g/cm3 y el factor geomtrico de volumen V = 1. La cintica de crecimiento de los cristales se puede
considerar de primer orden (g = 1).
Los datos obtenidos se presentan en la Tabla 12.2.
Tabla 12.2: Datos del Ejemplo 12.6.

.
Corrida (min) G mm
B o cmnm
3 min
in
1
2
3
315
0.092
13,993
630
0.042
9,960
1,260
0.019
6,729
Fuente: Moyers y Rousseau, 1987.
c
Se pide: Derivar una expresin de la variacin de la velocidad de nucleacin

con la velocidad de crecimiento.
Solucin:
De acuerdo con las ecuaciones (12.4) y (12.13),
589
B o = kn (c c )i
G = kg (c c )
combinando estas expresiones se obtiene
i
B o = kN (G)
(12.52)
donde:
kN =
kn
(kg )
La expresin obtenida en forma logartmica se expresa como:

ln (B o ) = ln (kN ) + i ln (G)
de tal manera que los datos de ln (B o ) vs ln (G) se pueden ajustar a una recta
de pendiente i y ordenada en el origen ln (kN ).
En la Figura 12.19 se presenta la grfica correspondiente a los datos de la
Tabla 12.2, de la cual se obtiene:
Figura 12.19: Determinacin del orden de nucleacin del Ejemplo 12.6.
i = 0.46 ; ln (kN ) = 10.66

de tal manera que,
o
B = 42, 699(G)
0.46
nmero
cm3 min
590
El valor de 0.46 indica una dependencia moderada de la velocidad de nucleacin respecto a G (o a la sobresaturacin). Esto es caracterstico de molculas grandes e indica que el mecanismo de nucleacin no es muy sensible a la
sobresaturacin y que la nucleacin secundaria es la dominante.
Dado que i es especfico del sistema, se supone que este valor no cambia con la
escala y puede determinarse mediante experimentos de laboratorio (cristalizador
de 4 a 8 L).
El parmetro kN es necesario determinarlo en una corrida a nivel piloto o
a escala real, ya que es dependiente de la escala. Esto se realiza efectuando un
anlisis de mallas a la escala de inters para obtener G y B o . Con estos valores
y la i determinada en el laboratorio se obtiene kN mediante la ecuacin (12.52).
Diseo de cristalizadores RPMSM
En un RPMSM el tiempo de residencia es constante y la relacin B o /G
tambin es constante, de tal manera que la densidad poblacional dada por la
ecuacin (12.48) est completamente determinada cuando se fijan las condiciones de operacin.
Varias caractersticas de diseo de un cristalizador se derivan del uso de la
distribucin poblacional dada por la ecuacin (12.48) y de los parmetros G y
B o que se obtienen mediante experimentacin, entre las que se encuentran: a)
los momentos, b) el tamao de cristal dominante, c) el coeficiente de variacin
y d) la densidad del magma.
Momentos Contando con la expresin de la densidad poblacional y utilizando
las expresiones de momentos, se pueden determinan los momentos 0, 1, 2 y 3 de
la poblacin de cristales. A continuacin se ejemplifica lo anterior mediante el
clculo del momento 0.
Momento Cero: Fraccin del nmero total de cristales de tamao
entre 0 y l. De acuerdo a la ecuacin (12.16) y la ecuacin (12.48) el nmero
total de cristales por unidad de volumen est dado por la expresin:

l
dl
NT = no exp
G
o
la cual puede resolverse para obtener,
NT = no G
(12.53)
El nmero de cristales por unidad de volumen de tamao entre 0 y l es:
Nl
l
n exp
Nl
591
l
G
dl

l
= no G 1 exp
G
de tal manera que la fraccin del total de la poblacin es:

l
o
n G 1 exp
G
= 1 exp(X)
fraccin =
o
n G
donde X es una longitud adimensional dada por:
X=
(12.54)
(12.55)
l
G
Empleando un procedimiento similar al anterior se pueden obtener los otros momentos. En la Tabla 12.3 se presentan las expresiones de los momentos
restantes.
Tabla 12.3: Momentos de un cristalizador RPMSM (X = l/G ).
Momento
Significado
Total
Fraccin
nmero de
cristales
longitud de
los cristales
no G
1 eX
no (G )2

1 (1 + X) eX
1
2
rea de los
2A no (G )3
cristales
3
masa de los
cristales
6V c no (G )4

X 2 X
1+X +
e
2

X2
X 3 X
1+X +
+
e
2
6
Tamao de cristal dominante La longitud de cristal a la cual la densidad

de la masa de cristales es mxima se llama tamao de cristal dominante lD .
La masa de cristales por unidad de volumen de solvente en un rango de
tamao de los cristales est dada por:
dM = c V l3 ndl
(12.56)
de la Tabla 12.3 la masa total de cristales por unidad de volumen es:

MT = 6V c no (G)4
combinando las dos expresiones anteriores se tiene:
(12.57)
592
dW
l3
n
=
dl
6(G )4 no
(12.58)
donde W es la fraccin masa de cristales. Las ecuaciones (12.48) y la (12.58)

conducen a:

l3
l
dW
=
exp
(12.59)
dl
6(G )4
G
La densidad de la masa de cristales mxima se obtiene derivando con respecto
a l la ecuacin (12.59) e igualando a 0, entonces se tiene:
lD = 3G
(12.60)
Este tamao caracterstico de los cristales lD , frecuentemente es utilizado

como base para el diseo de cristalizadores.
Coeficiente de variacin. El coeficiente de variacin es una medida de la
dispersin de la densidad de masa alrededor del valor lD y est dado por:
CV =
(l16 l84 )
2lD
(12.61)
En el caso de la distribucin para el RPMSM este valor es aproximadamente del 50 %. Tal dispersin es muy amplia para ser aceptable para algunos
productos cristalinos como el azcar comn.
Densidad del magma La masa de cristales por unidad de volumen de solvente MT es funcin de los parmetros cinticos no y G (Tabla 12.3). Esta
propiedad puede ser medida independientemente de la distribucin de tamao
de cristales. Debido a lo anterior MT puede ser utilizada para corroborar velocidades de nucleacin y crecimiento estimadas mediante anlisis de mallas. Este
procedimiento se muestra en el siguiente ejemplo.
Ejemplo 12.7. Evaluacin de G y B o . En un cristalizador experimental
la densidad medida de cristales en el magma es de 450 g/L. Los resultados de los
anlisis de mallas generan los valores de G = 0.0327 mm/h y B o = 1.255 107
nmero/Lh. (datos del Ejemplo 12.5). La densidad de los cristales es de c =
1.335 g/cm3 y el tiempo de residencia es de 3.38 h.
Se pide: Comparar la densidad experimental del magma con la estimada a
partir del anlisis de mallas.
Solucin:
De acuerdo a la Tabla 12.3,
MT = 6V c no (G )4
593
o bien,
MT = 6V c
Bo
(G )4
G
MT
MT
7 nm

1.255
10

3
g
cm
Lh
mm
cm3
103 mm3
0.0327
h

4
mm
0.0327
3.38 h
(12.62)
h
g
= 458
L

= 6 1 1.335
.
El valor experimental de MT = 450 g/L y el calculado de MT = 458 g/L
sugieren consistencia de los datos.
El siguiente ejemplo muestra como una vez obtenidos los parmetros cinticos, stos pueden ser utilizados para caracterizar una cristalizacin.
Ejemplo 12.8. Cristalizacin de sulfato de amonio. Un cristalizador RPMSM de 100 L es alimentado a 50 L/h con una solucin sobresaturada de sulfato de amonio. La suspensin de cristales es retirada a un flujo de 50 L/h. Los estudios cinticos indican que la velocidad de nucleacin
B o = 1.88 107 nm/Lh y la velocidad de crecimiento G = 0.056 mm/h. Los
cristales presentan una densidad c = 1.769 g/cm3 y de acuerdo a su forma
V = 1.
Se pide calcular:
a) El tamao de cristal dominante.
b) El nmero de cristales con un tamao menor o igual al tamao dominante.
c) La fraccin del nmero de cristales totales con un tamao igual o menor que
el tamao dominante.
d) La densidad de la suspensin.
e) Predecir la fraccin masa de cristales por tamao (utilizar tamaos de mallas
estndares).
Solucin:
a) De acuerdo a la ecuacin (12.60) el tamao de cristal dominante es:

mm 100 L
= 0.336 mm
lD = 3G = (3) 0.056
L
h
50
h
594
b) El nmero de cristales N de tamao igual o menor a lD es:

lD
N = ndl
o
o bien
N = (total de cristales)(fraccin en el rango)
de acuerdo a la Tabla 12.3,
N
con
no
N

= (no G ) 1 eX
Bo
lD
=
y X=
=3
G
G

= (B o ) 1 eX

nm
100 L
nm
N = 1.88 107
1 e3 = 3.57 107
L
Lh
L
50
h
c) De acuerdo a la Tabla 12.3 la fraccin de cristales de tamao en el rango
0 l lD es:
(1 e3 ) = 0.95
d) De la Tabla 12.3 la densidad de la suspensin est dada por:
MT = 6V c no (G )4
sustituyendo valores con no = B o /G,
MT

= (6) (1) 1.769
MT
7 nm

1.88
10

3
g
cm
Lh
mm
cm3
1000 mm3
0.056
h
4
mm 100 L
0.056
L
h
50
h
g
= 560
L
595
e) De acuerdo a la Tabla 12.3, la fraccin masa de cristales con tamao

menor o igual a l es:

X 2 X 3 X
+
e
Fraccin masa = 1 1 + X +
2
6
de tal manera que la fraccin de masa retenida en la malla de tamao l es

X 2 X 3 X
Fraccin masa retenida = 1 + X +
+
e
2
6
En la Tabla 12.4 se presentan los resultados obtenidos al utilizar la expresin
anterior.
Tabla 12.4: Resultados Ejemplo 12.8 inciso e).
Malla
20
28
35
48
100
12.4.3.
Tamao
( mm)
0.841
0.595
0.420
0.297
0.149
X=
l
G
7.51
5.31
3.75
2.65
1.33
Masa
retenida. %
5.4
22.3
48.3
72.6
95.4
Cristalizadores Continuos con Remocin Selectiva
En un cristalizador RPMSM el control de la distribucin de tamao de los

cristales es muy limitada. Las velocidades de crecimiento y nucleacin, estn
determinadas por las variables de operacin y la geometra del cristalizador.
Los cristalizadores continuos pueden hacerse ms flexibles mediante el uso
de dispositivos para la remocin selectiva de cristales, lo cual altera el tiempo
de residencia de los materiales que salen del cristalizador. La funcin de estos
dispositivos puede visualizarse ms fcilmente en trminos de los modelos idealizados: a) de extraccin de lquido, b) de remocin de finos y c) de remocin
de gruesos.
Modelo de extraccin de lquido
La extraccin de lquido consiste en la remocin de lquido libre de cristales
del cristalizador. Esto provoca un aumento de la densidad de cristales al interior
del cristalizador y un aumento en el tiempo de residencia de stos.
596
Modelo de remocin de finos

El objetivo principal en la remocin de finos es la remocin continua de
cristales cuyo tamao sea menor al especificado. Despus de ser retirados los
cristales se redisuelven y alimentan nuevamente al cristalizador. Esto permite
obtener cristales de mayor tamao.
Modelo de remocin de gruesos
La remocin de gruesos consiste en remover los cristales cuyo tamao sea
mayor al especificado.
Los efectos de cada dispositivo de remocin pueden ser descritos en trminos
de la funcin de densidad poblacional n.
Modelo combinado
En el caso de un modelo combinado de remocin ideal de finos y gruesos
llamado modelo RZ , los balances poblacionales conducen (Moyers y Rousseau,
1987) a las tres expresiones de intervalo siguientes:
1. Para l lf :

Rl
o
(12.63)
n = n exp
G
2. Para lf l lc

l
(R 1)lf
exp
n = no exp
G
G
(12.64)
3. Para l lc

(R 1)lf
(Z 1)lc
Zl
exp
exp
n = no exp
G
G
G
(12.65)
donde:
lf : Tamao mnimo aceptable de los cristales.
lc : Tamao mximo aceptable de los cristales.
R: ndice de remocin de finos.
Z: ndices de remocin de gruesos.
Cuando R = 1 no existe remocin de finos, cuando Z = 1 no existe remocin de gruesos. Un cristalizador con remocin tanto de finos como de gruesos,
produce una distribucin de cristales con tamao de cristal dominante alto y
bajo coeficiente de variacin.
12.4.4.
597
Balances de Masa y Energa en Cristalizadores

Continuos
En la optimizacin de un proceso de separacin es necesario calcular la eficiencia en la recuperacin de producto como funcin de las variables de diseo.
De acuerdo con la Figura 12.20 en un proceso de cristalizacin el rendimiento
est dado por:
Figura 12.20: Esquema general de un cristalizador continuo.
Rendimiento =
Fs Ra SRc
Fs Ra
(12.66)
donde:
Fs : Flujo msico de solvente en la alimentacin. [M/t].
Ra : Masa de soluto por masa de solvente en la alimentacin. [M/M ].
S: Flujo msico de solvente en la suspensin de salida. [M/t].
Rc : Masa de soluto disuelto por masa de solvente en la solucin de salida.
[M/M ].
Rse : Masa de solvente evaporada por masa de solvente alimentada. [M/M ].
C: Flujo msico de cristales en la suspensin de salida. [M/t].
Modos de operacin y control del rendimiento
El flujo de solvente Fs y la fraccin masa libre de soluto Ra , generalmente
se fijan por las operaciones previas a la cristalizacin. La fraccin masa (libre
de soluto) del soluto disuelto Rc , es la solubilidad del soluto en el solvente a
la temperatura de operacin. Por lo tanto, el rendimiento de una operacin
de cristalizacin puede ser controlado en cierto grado, mediante un control de
598
la temperatura o cambiando el tipo de solvente. Otra variable que puede ser

controlada en una cristalizacin es el flujo msico de solvente a la salida S,
mediante los diferentes modos de operacin de los cristalizadores:
a) En los sistemas con evaporacin, S disminuye debido a la corriente de
vapor producido y el rendimiento se incrementa.
b) En el modo de enfriamiento adiabtico la cantidad de vapor liberada est
fijada por los balances de energa.
c) En los sistemas con evaporacin o en los sistemas combinados de enfriamiento adiabtico con evaporacin, el diseador puede controlar la presin
para fijar la temperatura y por lo tanto Rc , as como administrar calor externo
para controlar S, de tal manera que ambos efectos contribuyen a incrementar
el rendimiento de la operacin.
d) Cuando la cristalizacin es slo por enfriamiento, el nico control sobre
el rendimiento es la temperatura.
La conclusin de la discusin anterior es que para una Fs y Ra dados, y
una relacin de solubilidad dada, el modo de la cristalizacin determina la recuperacin mxima de soluto alcanzable.
Balances de masa
Para sistemas binarios es posible desarrollar expresiones para el rendimiento
y las composiciones de las corrientes en funcin de: a) las condiciones de entrada,
b) la cantidad de solvente evaporado y c) las condiciones dentro del cristalizador.
A continuacin se presenta este procedimiento.
De acuerdo a la Figura 12.20 el balance de masa total en el sistema est
dado por:
Fs + Fs Ra = Fs Rse + S + C + SRc
(12.67)
El balance de soluto est dado por:

Fs Ra = C + SRc
(12.68)
Fs = Fs Rse + S
(12.69)
y el balance de solvente por:
Combinando las ecuaciones (12.67), (12.68) y (12.69) se obtiene la ecuacin

para el flujo de salida de solvente,
S=
Fs (1 Rse ) + Fs (1 Rse )Rc

1 + Rc
(12.70)
Combinando las ecuaciones (12.68) y (12.69) se genera una ecuacin para el

flujo msico de cristales,
599
C = Fs [Ra (1 Rse )Rc ]
(12.71)
El rendimiento dado por la ecuacin (12.66) puede tambin ser expresado

como:
Rendimiento =
C
Fs Ra
(12.72)
sustituyendo la ecuacin (12.71) en la (12.72),

Rendimiento =
Ra Rc (1 Rse )
Ra
(12.73)
La ecuacin (12.73) permite calcular el rendimiento mediante los datos de

diseo Ra , de equilibrio Rc y de operacin Rse .
La fraccin masa de cristales en la suspensin de salida ST es:
ST =
C
Fs + Fs Ra Fs Rse
(12.74)
Ra (1 Rse )Rc
1 + Ra Rse
(12.75)
combinando (12.71) y (12.74) se obtiene:

ST =
Balances de masa y modos de operacin

Las ecuaciones (12.73) y (12.75) se simplifican para los modos de operacin
particulares que se describen a continuacin.
Cristalizacin por enfriamiento indirecto En este caso no existe evaporacin de solvente por lo que:
Rse = 0
(12.76)
y las ecuaciones (12.73) y (12.75) se expresan como:
Rendimiento =
ST =
Ra Rc
Ra
Ra Rc
1 + Ra
(12.77)
(12.78)
600
Cristalizacin slo por evaporacin En este caso la fraccin masa de soluto en la alimentacin es igual a la fraccin masa en la solucin de salida,
Ra = Rc
(12.79)
y las ecuaciones (12.73) y (12.75) se expresan como:

Rendimiento = Rse
(12.80)
Ra Rse
1 + Ra Rse
(12.81)
ST =
Cristalizacin por evaporacin adiabtica sin reflujo En este caso a

diferencia de los dos casos anteriores, adems de los balances de masa se requiere efectuar un balance de energa para determinar la cantidad de solvente
evaporado en el cristalizador.
Balance de energa Este balance puede ser expresado en palabras como:
[La velocidad de salida de calor por evaporacin del solvente] =
[El calor liberado por la cristalizacin de enfriamiento] +
[Entrada convectiva de calor] +
[Calor liberado por cristalizacin por salting out]
La ecuacin de balance de energa es la siguiente:
Fs Rse v
= Fs (Ra Rc )f + Fs (1 + Ra )Cp T
+Fs Rc Rse f
(12.82)
donde:
T : Temperatura de alimentacin menos temperatura del cristalizador. [ ].
Cp : Capacidad calorfica de la alimentacin. [cal/M ].
v : Calor de evaporacin del solvente. [cal/M].
f : Calor de cristalizacin del soluto. [cal/M].
601
Con base a lo anterior las ecuaciones de diseo para cristalizacin con enfriamiento adiabtico son:
Rse =
f (Ra Rc ) + Cp T (1 + Ra )
v f Rc
Rendimiento =
ST =
Ra (1 Rse )Rc
Ra
Ra (1 Rse )Rc
1 + Rc Rse
(12.83)
(12.84)
(12.85)
Las ecuaciones anteriores pueden ser resueltas si se conoce la concentracin

de soluto disuelto en la suspensin de salida Rc . Generalmente es aceptable
suponer que esta concentracin corresponde a la de saturacin. Los sistemas
en los cuales sto ocurre se llaman sistema tipo II o de rpido crecimiento, en
oposicin a los sistemas tipo I donde la concentracin de salida Rc es mayor que
la de saturacin debido al lento crecimiento en estos sistemas.
Ejemplo 12.9. Balances de masa y energa en un cristalizador adiabtico.
Se desea analizar la variacin del rendimiento y la concentracin de slidos
en la corriente de salida, con la presin de operacin de un cristalizador. En las
columnas (1), (2) y (3) de la Tabla 12.5 se muestran los datos de equilibrio para
el sistema a cuatro presiones absolutas diferentes.
La solucin alimentada al cristalizador tiene una concentracin Ra = 0.379 g
de soluto/ g de solvente y se alimenta a una temperatura de 100 C. El calor de
vaporizacin del solvente es de v = 100 cal/g, el calor de fusin del cristal es de
f = 33.3 cal/g y la capacidad calorfica de la solucin de Cp = 0.556 cal/g .
Se pide: Calcular la fraccin masa de cristales a la salida del cristalizador
y el rendimiento a cada una de las presiones de operacin.
Solucin:
Considerando un sistema de cristalizacin tipo II, el flujo msico de evaporacin adiabtica de solvente puede calcularse utilizando la ecuacin (12.83) y
aparece en la columna (4) de la Tabla 12.5. El rendimiento y la fraccin masa
se calculan utilizando las ecuaciones (12.84) y (12.85), respectivamente. Estos
valores aparecen en las columnas (5) y (6) de la Tabla 12.5.
Tanto la fraccin masa de cristales como el rendimiento aumentan al disminuir la presin de operacin.
Balances y cintica
En el diseo de un cristalizador es necesario combinar las expresiones de
la cintica de la cristalizacin con los balances de masa y energa. El uso de la
cintica de la cristalizacin para el anlisis y diseo provee una nueva dimensin
602

Tabla 12.5: Datos y solucin del Ejemplo 12.9.
(1)
Presin
mm de Hg
(2)
T
(3)
Rc
(4)
Rse
(5)
Rend.
(6)
ST
g soluto
g solvente
g solv. evap.
g solv. alim.
g cristales
g soluto alim.
g cristales
g totales
160
135
90
60
65
60
50
40
0.100
0.072
0.043
0.028
0.374
0.419
0.502
0.582
0.835
0.890
0.944
0.969
0.316
0.347
0.400
0.453

c
a las tcnicas de diseo disponible. Contando con la cintica de la cristalizacin

es posible evaluar la sensibilidad de la distribucin de tamao de cristales a los
diferentes parmetros de operacin como: a) tiempo de residencia, b) remocin
de finos, c) remocin de gruesos, d) densidad de la suspensin, e) temperatura,
f) sembrado y g) operacin en serie.
Ejemplo 12.10. Diseo de un cristalizador continuo. Se desea disear un cristalizador para producir 455 kg/h de cristales de un compuesto. Los
criterios de diseo son los siguientes:
a) 75 % de la masa de los cristales debe tener un tamao mayor a 100 m.
b) La fraccin de masa de cristales ST a la salida debe ser de 0.5.
c) El rendimiento debe ser mayor a 0.95.
Los datos y condiciones de operacin se presentan en la Tabla 12.6 y los
datos de equilibrio se presentan en la Tabla 12.7.
Los estudios realizados a nivel laboratorio y a nivel piloto en un cristalizador
RPMSM, manteniendo constante MT en 0.84 g/cm3 generaron la expresin
cintica siguiente:
B o = 42, 699(G)0.46
donde las unidades son:
Bo
nm
;
min
cm3
m
min
kN
nm
cm3 min
m 0.46
min
Se pide: Disear el cristalizador.

Solucin:
El diseo del cristalizador se efecta mediante los siguientes pasos:
a) Elaboracin de los balances de masa y energa.
603
Tabla 12.6: Datos y condiciones de operacin del Ejemplo 12.10.

Composicin alimentacin
Temperatura alimentacin
Calor especfico de la suspensin y solucin
Calor de evaporacin del solvente
Calor de cristalizacin
Gravedad especfica de los cristales
Gravedad especfica del lquido
Factor volumtrico del cristal
soluto
0.379 gg solvente
100 C
0.556 cal/g
100 cal/g
33.3 cal/g
1.23
0.84
1

c
Tabla 12.7: Datos de equilibrio del Ejemplo 12.10.

Presin
mm Hg
160
135
90
60
40
T Cristalizador
C
65
60
50
40
30
Rc
m asa soluto
masa solvente
0.100
0.072
0.043
0.028
0.018

c
b) Estudio cintico: efecto del tiempo de residencia, punto de corte de finos lf

y proporcin de remocin de finos, sobre la distribucin de tamao de cristales.
c) Dimensionamiento y especificacin de equipo.
Solucin a) Balances de masa y energa.
Los datos de equilibrio de la Tabla 12.7 sugieren una alta sensibilidad de
la solubilidad del soluto a la temperatura, de tal manera que es factible la
cristalizacin por enfriamiento.
Considerando un sistema de cristalizacin tipo II y dos modos de cristalizacin: a) enfriamiento indirecto y b) enfriamiento adiabtico, los clculos de
rendimiento y fraccin masa de los cristales a la salida del cristalizador, se
pueden realizar mediante las ecuaciones (12.77) y (12.78) para enfriamiento
indirecto, y mediante las ecuaciones (12.83), (12.84) y (12.85) para enfriamiento
adiabtico. Los resultados correspondientes se presentan en la Tabla 12.8.
De acuerdo a los balances de la Tabla 12.8 el modo de cristalizacin por
604

Tabla 12.8: Balances de masa y energa para Ejemplo 12.10.
T C
65
60
50
40
30
Enfriamiento Indirecto
Rend.
ST
0.74
0.20
0.81
0.22
0.89
0.24
0.93
0.25
0.95
0.26
Enfriamiento
Rend.
0.83
0.89
0.94
0.97
0.98
Adiabtico
ST
0.32
0.35
0.40
0.45
0.51
enfriamiento indirecto, no permite cumplir con la especificacin de diseo que

establece una fraccin masa de cristales a la salida ST = 0.5, an cuando se
alcanza el rendimiento deseado.
El modo de operacin de enfriamiento adiabtico tambin alcanza el rendimiento deseado, pero ni an a 40 C (60 mm de Hg) satisface la condicin de
ST = 0.5.
Decisin 1. En base a lo anterior se selecciona el modo de operacin adiabtico al vaco con adicin de calor externo para producir una solucin ms
concentrada. Considerando la conveniencia de una temperatura de operacin
intermedia que permita operar el condesador sin el uso de un agente condensante
refrigerado, se sugiere emplear una temperatura de operacin de 50 C, en un
cristalizador con calentamiento externo. La presin de operacin ser entonces
de 90 mm de Hg (Tabla 12.7).
Una vez tomada la decisin anterior se puede calcular Rse mediante la
ecuacin general (12.75),
ST =
Ra (1 Rse )Rc
1 + Ra Rse
0.5 =
0.379 (1 Rse ) 0.043

1 + 0.379 Rse
se obtiene:
Rse = 0.65
Este resultado indica que es necesario remover el 65 % del solvente que entra
para cumplir con ST = 0.5.
El balance de masa del sistema de acuerdo a la Figura 12.21 puede desarrollarse de la siguiente manera:
605
Figura 12.21: Diagrama de flujo Ejemplo 12.10.

En la corriente de salida,
masa de cristales
0.5 =
=
masa total
455
kg
h
(S + SRc ) + 455
como Rc = 0.043 (Tabla 12.7, T = 50 C) entonces ,

S
SRc
kg de solvente
h
kg de soluto disuelto
= 18.76
h
= 436.24
El balance global de soluto es:

Fs Ra = C + SRc
de tal manera que:
kg
h = 1250 kg
=
kg
h
0.379
kg
kg
= 473.76
h
(455 + 18.76)
Fs
Fs Ra
El flujo de solvente evaporado es:
kg
h
606
Fs Rse = 812.5
kg
h
El rendimiento de acuerdo a la ecuacin general (12.73) es:
Rendimiento =
0.379 (1 0.65) 0.043

Ra (1 Rse )Rc
=
= 0.96
Ra
0.379
El balance de energa permite calcular el calor adicional necesario y se puede

expresar en palabras como:
Salida de calor por
evaporacin del solvente
Calor liberado durante la cristalizacin

+ Entrada de calor por conveccin
+ Calor liberado por Salting-Out
+ Calor suministrado
y en forma de ecuacin como:

Fs Rse v
= Fs (Ra Rc )f + Fs (1 + Ra )Cp T
+ Fs Rc Rse f + Q
de tal manera que:

kg
cal 1000 g
kg
0.65
100
Q = 1250
h
kg
g
kg

cal 1000 g
kg
(0.379 0.043)
33.3
kg
g
kg

kg
cal
1000 g
1 + 0.379
0.556
(100
50)
C
kg
g
kg

kg
kg
cal 1000 g
0.043
0.65
33.3
kg
kg
g
kg
cal
Q = 1.818 107
h
Los balances de masa y energa permiten determinar los requerimientos para
cumplir con los dos criterios de diseo:
1) Rend. > 0.95 y 2) ST = 0.5
El problema de diseo restante consiste en determinar como cumplir con la
distribucin de tamao de cristales.
Solucin inciso b) Estudio Cintico.
607
El tamao de cristal vara con tiempo de residencia y con el sistema de

remocin de gruesos y finos. Para explorar la influencia del tiempo de residencia
en el tamao de cristal deseado, que de acuerdo al criterio de diseo al menos el
75 % de la masa de cristales debe tener un tamao mayor a 100 m, se pueden
combinar las expresiones siguientes:
Bo
no
MT
= kN (G)i
Bo
=
G
= 6V c no (G)4
para obtener la siguiente ecuacin que permite relacionar con G,
G=
MT
6V c kN 4
1
(i + 3)
De acuerdo a los balances de masa, la masa de cristales por unidad de volumen de solvente en la suspensin est dada por:
MT
MT
C
(Fs Fs Rse )
s
kg
455
h
kg
[1250 (1250 0.65)]
h
g
0.84
cm3
= 0.87
g
cm3
La fraccin masa de cristales menores a l = 100 m (Tabla 12.3) est dada

por:

1
1
Frac. masa = 1 1 + X + X 2 + X 3 eX
2
6
Para = 107 min,
1

12
3
10 m
3.46
0.87
cm3
G =

0.46
nm
min
(107
min)
6 1.23 42, 699
cm3 min
m
m
G = 0.328
min
608
la longitud adimensional es:

100 m
= 2.85
X=
m
107 min
0.328
min
La fraccin de masa menor a 100 m es:

(2.85)2 (2.85)3 2.85
Frac. masa = 1 1 + 2.85 +
+
e
= 0.32
2
6
En la Tabla 12.9 se muestran los resultados del resto de los clculos del efecto
de la variacin del tiempo de residencia sobre la velocidad de crecimiento, el
parmetro X y la fraccin masa de cristales de longitud menor a 100 m.
Tabla 12.9: Efecto del tiempo de residencia sobre la fraccin masa de cristales
menor a 100 m.
min
107
315
630
1260
2520
G
m/min
0.328
0.094
0.042
0.019
0.009
X
Adim
2.8
3.4
3.8
4.2
4.7
F rac. masa
< 100 m
0.32
0.44
0.52
0.60
0.68
De acuerdo a estos resultados el tamao de los cristales disminuye al aumentar el tiempo de residencia. Esto se debe al mayor impacto de la sobresaturacin
sobre la velocidad de nucleacin que sobre la velocidad de crecimiento.
Decisin 2. Se selecciona el tiempo de residencia de 315 min para continuar el diseo. Una disminucin mayor del tiempo de residencia podra evitar
el consumo de la sobresaturacin, provocando que este sistema de tipo II se
convirtiera en uno de tipo I.
Una vez analizado el impacto del tiempo de residencia sobre el tamao de
los cristales, se debe analizar el impacto del sistema de remocin de finos sobre
ese parmetro de diseo.
Existen varias opciones para remocin de finos que se derivan de las posibles combinaciones entre el tamao de corte lf y el ndice de remocin R. Es
obvio que conforme lf aumenta a R constante, la fraccin de cristales menor a
100 m disminuye. As mismo, conforme R aumenta a lf constante, la fraccin
de cristales menor a 100 m tambin disminuye. Este comportamiento se muestra en la Figura 12.22. La figura tambin muestra tres combinaciones de lf y
R que permiten cumplir con la tercer condicin de diseo que establece que el
75 % de la fraccin masa de cristales tenga una longitud mayor a 100 m.
609
Figura 12.22: Sensibilidad del tamao del producto al tamao de corte de finos.
Tomada de: Moyers y Rousseau, 1987. Reproducida con el permiso de John W iley and
c
Decisin 3. Una R = 1.8 y una lf = 60 m son seleccionadas para el diseo

final.
Solucin inciso c) Dimensionamiento
La masa de cristales en el interior del cristalizador se puede obtener a partir
del flujo y el tiempo de residencia en el cristalizador, de tal manera que:
Masa de cristales = (315 min)
h
60 min

kg
455
= 2, 388.75 kg
h
La masa de la suspensin en el interior del cristalizador es:
Masa de suspensin =
El volumen de la suspensin es:
2388.75 kg
= 4, 777.5 kg
kg
0.5
kg
610
2388.75 kg
g
1000 cm3
kg
1.23
3
cm
L
1000 g
2388.75 kg
+
g
1000 cm3
kg
0.84
3
cm
L
1000 g
Vsusp. = 4, 786 L
kg
455
h = 0.095 kg
Productividad =
4, 786 L
Lh
Vsusp.
El rea de la seccin transversal del cristalizador deber considerar el tamao

de corte de finos que se desea separar. La Figura 12.23 muestra el diseo conceptual del cristalizador.
Figura 12.23: Diseo conceptual que satisface las condiciones de diseo del Ejemplo 12.10. Tomada de: Moyers y Rousseau, 1987. Reproducida con el p erm iso de John
c
W iley and Sons. Copyright 1987.
12.5. SUMARIO
12.5.
611
Sumario
La cristalizacin es una operacin de acabado ampliamente utilizada a nivel

industrial que permite purificar un soluto mediante la formacin de cristales. La
fuerza impulsora de la cristalizacin es la sobresaturacin de la solucin. Existen
varias formas para generar la sobresaturacin en la solucin de inters, las cuales
se basan ya sea en el enfriamiento de la solucin o en su calentamiento al vaco.
La sobresaturacin que se logra en el cristalizador es la fuerza impulsora
tanto de la nucleacin (origen de los cristales) como de su crecimiento. Ambos
fenmenos se asocian con la cintica de la cristalizacin.
Actualmente se han logrado avances importantes en la modelacin de cristalizadores para su anlisis, diseo y optimizacin, en aplicaciones a situaciones
de importancia industrial.
612
12.6.
Problemas
12.1. Cristalizador RPMSM. En el estudio cintico de la cristalizacin

2 O (Graber y Taboada, 1991) en un cristalipor enfriamiento de Na2 SO4 5H
zador RPMSM de forma cilndrica de 15.2 cm de dimetro y 39 cm de altura,
cuando el cristalizador operaba en estado estacionario, se obtuvo una muestra
de cristales contenidos en 2.04 L de solvente, con las siguientes caractersticas:
Malla No.
16
18
20
30
40
50
70
100
140
Fondo
Tamao de
abertura de
malla
(mm)
1.180
1.000
0.850
0.600
0.425
0.300
0.212
0.150
0.106
Masa en la
malla
(g)
9.12
32.12
39.82
235.42
89.14
54.42
22.02
7.22
1.22
0.50
Los cristales tienen una densidad de 1.464 g/cm3 y un factor geomtrico de

volumen de 0.553. El tiempo de residencia fue de 0.622 h.
Se pide calcular:
a) La masa total de cristales en la muestra.
b) La variacin del nmero de cristales con el tamao de cristal.
c) La velocidad de crecimiento de cristales.
d) La velocidad de nucleacin de cristales.
e)La densidad experimental de cristales.
f) La densidad estimada de cristales.
Resp. a) 491 g, c) 0.322 mm/h , d) 1.045 107 num/Lh , e) 240.68 g/L y
f) 253.8 g/L.
12.2. Cristalizacin por lotes. Se realiza una cristalizacin por lotes enfriando una solucin de cido ctrico de 60 a 40 C. En esta regin, la variacin
de la solubilidad de equilibrio del cido ctrico es de 0.006 g/cm3 C (Bohlin
y Rasmuson, 1992).
Los cristales al sembrarse tienen una longitud caracterstica inicial de 90 m,
con factores geomtricos de rea y volumen de 3.1 y 0.52, respectivamente.
La densidad de los cristales es de 1.54 g/cm3 , la concentracin de cristales
sembrados de 7.7 105 g/cm3 y el tamao final del cristal fue de 1, 000 m.
La sobresaturacin esperada durante la cristalizacin es de 0.2 g/cm3 . El crecimiento de los cristales est controlado por la difusin con un coeficiente de
transferencia de masa de 4.5 105 cm/s.
12.6. PROBLEMAS
613
Se pide calcular:
a) El incremento adimensional del tamao de cristal .
b) La velocidad de crecimiento de los cristales.
c) El tiempo necesario del proceso.
d) La expresin de la curva de enfriamiento de acuerdo a la ecuacin (12.34).
e) La expresin de la curva de enfriamiento de acuerdo a la ecuacin (12.39).
Resp. a) 10.11, b) 0.042 cm/h y c) 2.18 h.
12.3. Rendimiento de cristalizacin. Una solucin salina que pesa 104 kg
y contiene 30 % en peso de Na2 CO3 , se cristaliza en forma por lotes por enfriamiento hasta una temperatura de 20 C. La sal cristaliza como decahidrato y
presenta una solubilidad a la temperatura final de 21.5 kg de Na2 CO3 anhidro
por 100 kg de agua.
Se pide calcular:
a) El rendimiento de la operacin cuando no existe evaporacin de agua.
b) El rendimiento de la operacin cuando se evapora el 3 % del peso total de
la solucin.
Resp. a) 78.5 % y b) 81.9 %.
12.4. Calor de cristalizacin. En una cristalizacin por lotes se procesan 4, 546 kg de una solucin acuosa que contiene 47 kg de FeSO4 por cada
100 kg de agua, enfrindose de 54.4 C hasta 26.6 C para obtener cristales de
FeSO4 7H2 O. La solubilidad del sulfato a la temperatura final es de 30.5 kg de
FeSO4 anhidro por cada 100 kg de agua. La capacidad calorfica promedio de
la alimentacin es de 0.7 cal/g C. El calor de cristalizacin de los cristales
hidratados puede considerarse igual a 4.4 kcal/gmol.
Se pide calcular:
a) La masa anhidra de cristales.
b) El rendimiento de la operacin.
c) El calor removido cuando no hay evaporacin de agua.
Resp. a) 683.2 kg, b) 47 % y c) 108, 258 kcal.
12.5. Densidad de siembra. En un cristalizador por lotes se requiere
alcanzar una densidad de cristales de 250 g/L e incrementar la longitud caracterstica del cristal de 100 a 1000 m.
Se pide: Estimar la masa de cristales que se requiere sembrar, suponiendo
que no existe nucleacin y que la densidad del cristal permanece constante..
Resp. 0.25 g/L
12.6. Distribucin de cristales. Considerando los datos de la corrida 2
del Ejemplo 12.6.
Se pide: Obtener la distribucin terica de cristales para las mallas 20, 28,
35, 48, 65, 100, 115, 150 y 200.
Resp. 4.42 % de masa es retenida en la malla 65.
614
12.7. Masa de agua a evaporar. Una solucin que contiene 200 g de

cido ctrico por cada 100 g de agua, se somete a un proceso de cristalizacin
por lotes al vaco, a una temperatura de 20 C. A esta temperatura la solubilidad
del cido es de 0.59 g/g de agua.
Se pide: Estimar la cantidad de agua que es necesario evaporar para obtener
una recuperacin del 90 % en esta operacin.
Resp. 33.89 %
12.8. Cristalizacin por lotes. En relacin al Ejemplo 12.3 del texto.
Se pide:
a) Graficar el perfil de la temperatura de la operacin.
b) Graficar la variacin con el tiempo de la solubilidad y la concentracin de
paracetamol en el cristalizador.
c) Obtener la grfica de la variacin con el tiempo de la velocidad de crecimiento de cristales y de la velocidad de nucleacin.
d) Establecer un perfil de temperatura para disminuir la desviacin estndar
de las curvas de densidad poblacional obtenidas.
d) Explicar el efecto del incremento en tiempo (t) y en el tamao de cristal
(l) sobre los resultados de la simulacin.
12.7. BIBLIOGRAFA
12.7.
615
Bibliografa
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Captulo 13
Secado
13.1.
Introduccin
El secado es el ltimo paso en la recuperacin de ciertos productos biotecnolgicos. Consiste bsicamente en la reduccin del contenido de solvente en el
producto por medio de una evaporacin o una sublimacin. Tiene como propsito estabilizar el producto, preservar su actividad, reducir su volumen o recuperar
el solvente.
Existen varias formas de secar un material. En el caso de productos biolgicos una limitante en la seleccin del mtodo de secado, es la temperatura que
puede soportar el material de inters sin perder actividad, de tal manera que
las alternativas para estos materiales son ms limitadas.
En la prctica de secado el solvente generalmente es agua y el medio hacia
donde sta se elimina es aire. Por esta razn, el anlisis del secado se basa
fundamentalmente en los sistemas aire-agua, sin embargo los resultados que se
logran pueden ser generalizados a otros sistemas.
Siendo el secado una operacin limitada por el equilibrio en la seccin 13.2
sobre fundamentos del secado, se revisan los conceptos bsicos del equilibrio
de los sistemas agua-aire y las formas de efectuar una operacin de secado.
Asimismo, se revisan las expresiones bsicas para el clculo de la velocidad de
secado y de la velocidad de desactivacin de compuestos trmicamente lbiles.
En la seccin 13.3 sobre equipo de secado, se presentan los principales tipos de
secadores utilizados en los procesos biotecnolgicos. Los principios de diseo de
algunos tipos de secadores se presentan en la seccin 13.4.
13.2.
Fundamentos
El anlisis de la operacin de secado requiere conocer las relaciones de equilibrio que implica la distribucin de agua entre dos fases: a) la slida del material a secar y b) la gaseosa del aire seco que sirve como medio para tal efecto.
Adems, es necesario conocer las diferentes formas en que puede ser conducida
618
CAPTULO 13. SECADO
una operacin de secado. Asimismo, se requiere el conocimiento de la cintica de

secado que depende de la velocidad de transferencia de calor y de la velocidad
de evaporacin (Tsotsas et al., 2003). Una cintica necesaria de considerar en
esta operacin que no tiene paralelo con otras operaciones, es la velocidad de
desactivacin del material de inters por efectos trmicos.
De acuerdo a lo anterior en esta seccin se revisan los siguientes aspectos de
la operacin de secado:
Las relaciones de equilibrio que limitan la operacin de secado.
Los mtodos diponibles para realizar la operacin de secado.
La velocidad de secado que determina el tiempo para llevar a cabo la
operacin.
Los efectos colaterales del secado.
13.2.1.
Equilibrio y Propiedades Trmicas
Si un slido hmedo se expone a una corriente continua de aire, puede ganar

o perder humedad dependiendo de la presin de vapor que ejerza el agua del
slido y de la presin de vapor de la corriente del aire. Si la presin de vapor
del agua del slido es mayor que la presin de vapor del aire, entonces el slido
pierde humedad, en el caso contrario su humedad aumenta. Cuando la presin
de vapor del agua del slido iguala la presin de vapor de la corriente de aire,
entonces el sistema est en equilibrio.
La presin de vapor que ejerce la humedad contenida en un slido depende
de la forma de la humedad, el tipo de slido y la temperatura.
En la mayora de los materiales biolgicos se pueden distinguir dos formas
del agua contenida en el slido: agua libre y agua ligada.
El agua libre se caracteriza por ejercer una presin de vapor igual a la del
agua pura. Este tipo de agua se localiza en los espacios entre las clulas de los
materiales o en los capilares de precipitados porosos.
El agua ligada se caracteriza por ejercer una presin de vapor menor a la
del agua pura. Este comportamiento lo presenta el agua cuando est contenida
en el interior de clulas. Tambin en el caso de algunos caldos donde los solutos
alteran las propiedades del agua o sta forma enlaces con sustancias orgnicas.
Curva de secado: humedad relativa vs humedad de slido
En la Figura 13.1 se presenta una curva de equilibrio tpica entre un material
biolgico y un gas como el aire a una temperatura dada.
En el eje de las ordenadas de la Figura 13.1 se grafica la humedad relativa
del aire definida como:
Hr =
Presin parcial del agua en el aire

Presin de vapor del agua pura
(13.1)
13.2. FUNDAMENTOS
619
Figura 13.1: Curva de equilibrio para secado de un slido.

y en el eje de las abscisas la humedad del slido definida como:
Masa agua
(13.2)
Masa seca de slido
esta definicin es til cuando la masa de slido es constante.
En la Figura 13.1 se distinguen dos zonas caractersticas: a) la zona de
humedad no ligada y b) la zona de humedad ligada. La zona de humedad ligada
comprende desde una humedad W = 0 hasta una humedad tal que la presin de
vapor del slido es igual a la del agua pura. Un slido con tal humedad estar en
equilibrio con aire cuya presin parcial de vapor sea igual a la del agua pura, es
decir, cuya humedad relativa sea igual a la unidad. En la zona de humedad no
ligada, la humedad del slido puede ser mayor pero su presin de vapor es constante e igual a la del agua pura. De tal manera que la Hr permanece constante
e igual a la unidad.
W =
Ejemplo 13.1. Agua no-ligada y ligada. La humedad de una masa de

cristales de un antibitico es de W = 0.28 g de agua/g de antibitico seco. En
el equilibrio con aire al 100 % de humedad relativa el contenido de humedad del
antibitico es de W = 0.20 g de agua/g de antibitico seco.
Se pide calcular:
a) El porcentaje de agua ligada.
b) El porcentaje de agua no-ligada.
Solucin:
% Humedad ligada = 0.20
g agua
100 = 20 %
g peso seco
% Humedad no ligada = (0.28 0.20)
g agua
100 = 8 %
g peso seco
620
CAPTULO 13. SECADO
Carta psicomtrica
En la operacin de secado se requiere conocer, a diferentes temperaturas y
presiones, las propiedades trmicas y las relaciones de equilibrio entre el solvente
en el slido y el aire que se utilice para secar. Debido a que el agua no ligada se
comporta como agua pura, las relaciones de equilibrio de los sistemas aire-agua
pueden ser utilizadas para tal efecto. Asimismo, estas relaciones de equilibrio
agua-aire son requeridas para describir el comportamiento del aire que se utiliza
en la operacin de secado, dado que ste generalmente es calentado antes de
usarse.
Las relaciones de equilibrio vapor de agua-aire se presentan en forma de una
carta psicomtrica como la Figura 13.2, la cual ha sido desarrollada a la presin
de una atmsfera.
Figura 13.2: Carta psicomtrica agua-aire. Presin de una atmsfera.

Para utilizar adecuadamente la carta psicomtrica es necesario manejar varios trminos, algunos de ellos referidos a la masa de aire seco, ya que en un
proceso de secado esta cantidad puede considerarse constante. A continuacin
se describen diez de estos trminos.
1. Humedad La humedad H de una mezcla aire-agua (humedad especfica
o humedad absoluta) se define como la masa de vapor de agua por unidad de
masa de aire seco.
13.2. FUNDAMENTOS
621
masa agua
(13.3)
masa aire seco
Utilizando la ecuacin general de los gases ideales se puede expresar la
ecuacin (13.3) como:

MA
PA
(13.4)
H=
PT PA
MB
H=
donde:
PA : Presin parcial del agua en el aire.

PT : Presin total de la mezcla aire-agua.
MA : Peso molecular del agua (18 g/mol).
MB : Peso molecular del aire (29 g/mol).
Se puede deducir de la ecuacin anterior que la humedad slo depende de la
presin parcial del agua y de la presin total del sistema.
2. Humedad de saturacin Una mezcla aire-agua est saturada a cierta
temperatura y presin, cuando la presin parcial del agua en la mezcla es igual
a la presin de vapor del agua pura, de tal manera que:

MA
PAS
(13.5)
HS =
PT PAS
MB
donde PAS es la presin de vapor del agua pura a la temperatura y presin
dadas y HS es la humedad de saturacin.
3. Porcentaje de humedad El porcentaje de humedad se define como la

relacin porcentual de la humedad con respecto a la humedad de saturacin, es
decir

H
%H=
100
(13.6)
Hs
4. Relacin entre % H y Hr Es necesario advertir que el porcentaje de
humedad no es igual al porcentaje de humedad relativa. Esto puede ser demostrado combinando las ecuaciones (13.4), (13.5) y (13.6),

PT PAS
PA
%H=
100
PAS
PT PA
y comparar este resultado con la ecuacin (13.1).
622
CAPTULO 13. SECADO
Ejemplo 13.2. Clculo de humedad a partir de datos de presin de

vapor.
El aire de una habitacin tiene una temperatura de 20 C y la presin es de
una atmsfera. La presin parcial del agua en el aire es de 12 mm de Hg.
Se pide calcular:
a) La humedad, H.
b) La humedad de saturacin, HS .
c) El porcentaje de humedad, % H.
d) El porcentaje de humedad relativa, % Hr .
Solucin:
a) La humedad H puede calcularse aplicando la ecuacin (13.4),
kg
12 mm de Hg
kmol
=
kg
(760 12) mm de Hg
29
kmol
kg de agua
= 0.01
kg de aire seco
18
b) En tablas de vapor puede encontrarse que a 20 C la presin de vapor de

agua es de 17.5 mm de Hg. Aplicando la ecuacin (13.5),
kg
kg agua
17.5 mm de Hg
kmol
= 0.0146
HS =
kg
(760 17.5) mm de Hg
kg aire seco
29
kmol
18
c) El porcentaje de humedad se pude calcular utilizando la ecuacin (13.6)

y los resultados anteriores,
%H=
0.01
100 = 68.4 %
0.0146
d) La humedad relativa se calcula con la ecuacin (13.1),

12 mm de Hg
% Hr =
100 = 68.57 %
17.5 mm de Hg
Ejemplo 13.3. Curva de 100 % de humedad.
En el clculo de la humedad de una mezcla aire-agua a una presin total de
una atmsfera, se puede considerar que la presin parcial del agua en la mezcla,
es igual a la presin del agua pura a la temperatura dada.
Se pide: Construir una grfica de la humedad de una mezcla aire-agua en
el rango de 0 a 100 C.
Solucin:
13.2. FUNDAMENTOS
623
Tabla 13.1: Datos y solucin del Ejemplo 13.3.

T ( C) PAS (kPa) HS kgkgaireagua
seco
3
18
33
60
75
90
95
0.7577
2.0640
5.0340
19.9400
38.5800
70.1400
84.5500
0.0047
0.0129
0.0324
0.1521
0.3816
1.3958
3.1275
En las columnas (1) y (2) de la Tabla 13.1 se presenta la presin de vapor

para el agua pura a varias temperaturas en el rango considerado. Estos valores
son obtenidos de tablas de vapor.
En la columna (3) de la Tabla 13.1 se encuentran los datos de HS calculados
mediante la ecuacin (13.5) a una presin total de una atmsfera (101.33 kPa).
El valor de HS tiende a infinito conforme la presin de vapor se aproxima a la
de la temperatura de ebullicin del agua.
La curva de 100 % de humedad de la carta psicomtrica (Fig. 13.2) representa
la solucin grfica de este ejemplo. La curva de 50 % de humedad de la carta
psicomtrica puede trazarse tomando la mitad de la distancia vertical entre la
curva de saturacin y el eje de la temperatura, a cada temperatura.
5. Punto de roco El punto de roco de una mezcla aire-agua es la temperatura a la cual dicha mezcla (sin estar en contacto con agua) se satura al ser
enfriada a presin total constante. Cuando una mezcla en su punto de roco se
enfra ms all de este punto, el vapor de agua condensa formando una neblina o
roco. En este proceso la humedad de la mezcla no cambia, de tal manera que se
puede calcular el punto de roco de una mezcla utilizando la carta psicomtrica.
Ejemplo 13.4. Clculo del punto de roco de una mezcla aire-agua.
Se pide: Estimar el punto de roco de una mezcla aire-agua con 20 % de
humedad que se encuentra a 55 C y a una atmsfera de presin.
Solucin:
Sobre la carta psicomtrica (Fig. 13.2) se localiza el punto 55 C y 20 %
humedad, horizontalmente se avanza hacia la curva de 100 % humedad y se lee
la temperatura de roco de 26.5 C en el eje T . Todas las mezclas con humedad
de 0.023 tendrn el mismo punto de roco.
6. Calor hmedo de una mezcla aire-vapor de agua El calor hmedo
es la capacidad calorfica de la mezcla aire-vapor de agua. Es el calor necesario
para incrementar un grado centgrado la temperatura de una mezcla aire-vapor
de agua, por kg de aire seco de la mezcla, o
624
CAPTULO 13. SECADO
(13.7)
CS = CB + HCA
donde:
CS : Calor hmedo de la mezcla en kJ/(kg aire seco K).
CB : Capacidad calorfica del aire seco. 1.005 kJ/ (kg aire seco K).
CA : Capacidad calorfica del vapor de agua. 1.884 kJ/(kg vapor K).
kJ: Kilojoules, unidad de energa.
Dado que las capacidades calorficas pueden considerarse constantes en el

intervalo normal de temperaturas, la ecuacin (13.7) puede expresarse como:
CS = 1.005 + 1.884H
kJ
kg aire seco K
(13.8)
Cuando no existe cambio de estado (evaporacin o condesacin) el calor

necesario para incrementar la temperatura T grados de una masa mB de aire
y su vapor acompaante, puede ser calculada con la siguiente expresin:
Q = mB CS T
(13.9)
Ejemplo 13.5. Clculo del calor hmedo de una mezcla aire-agua.

Se pide:
a) Calcular el calor hmedo de una mezcla aire-vapor de agua que se encuentra a 55 C y presenta una humedad H = 0.08 kg de agua/kg de aire
seco.
b) Estimar el calor necesario para incrementar 15 grados la temperatura a
5.0 kg de aire seco y su vapor acompaante de la mezcla anterior.
Solucin:
a) El calor hmedo puede calcularse utilizando la ecuacin (13.8),
CS = 1.005 + (1.884)(0.08)

kJ
kJ
= 1.156
kg aire seco K
kg aire seco K
b) El calor necesario puede calcularse utilizando la ecuacin (13.9),
Q = 5 kg aire seco 1.156
kJ
15 K = 86.7 kJ = 363 kcal
kg aire seco K
13.2. FUNDAMENTOS
625
7. Volumen hmedo El volumen hmedo es el volumen total que ocupa una

mezcla aire-vapor de agua por kg de aire seco a la presin de una atmsfera.
De acuerdo a la ley de los gases ideales el volumen hmedo puede calcularse
mediante la siguiente ecuacin:
3

m mezcla
(13.10)
VH = (0.00283 + 0.00456H) (T + 273)
kg aire seco
8. Entalpia total La entalpia total de un kg de aire seco y su vapor acompaante referida a una temperatura To , est dada por el calor sensible de la
mezcla aire-vapor de agua ms el calor latente del vapor de agua a la temperatura To , esto puede expresarse como:
Ent = CS (T To ) + Ho
(13.11)
Cuando To = 0 C el calor latente o = 2, 502 kJ/kg y la ecuacin (13.11)

se expresa como:

kJ
Ent = (1.005 + 1.884H)T + 2502H
(13.12)
kg aire seco
en la ecuacin anterior T est en C.
9. Curvas de saturacin adiabtica Considrese un proceso como el que

se muestra en la Figura 13.3. En ste, una mezcla aire-vapor de agua a una
temperatura T y una humedad H (no saturada) se pone en contacto con gotas
de agua a una temperatura inicial Ti . Si el tiempo de contacto es el suficiente
el sistema alcanza el equilibrio, de tal manera que la mezcla aire-vapor sale con
una humedad saturada HS a una temperatura TS (el aire cede calor sensible
para evaporar el lquido). La temperatura del agua de recirculacin se estabiliza
en TS . No fluye calor hacia dentro o hacia fuera del sistema y al fenmeno se le
denomina proceso adiabtico.
Figura 13.3: Proceso de enfriamiento adiabtico de aire con agua.

Efectuando un balance de energa en la mezcla aire-vapor se obtiene,
626
CAPTULO 13. SECADO
Entalpia a la entrada = Entalpia a la salida

Si se toma como temperatura de referencia TS este balance se expresa como:
CS (T TS ) + HS = CS (TS TS ) + HS S
(13.13)
(H HS )
CS
(1.005 + 1.884H)
=
=
(T TS )
S
S
(13.14)
combinado las ecuaciones (13.8) y (13.13) se tiene:
Las curvas de saturacin adiabtica de la carta psicomtrica (Fig. 13.2) han

sido construidas utilizando la ecuacin (13.14).
En el caso que el contacto no sea suficiente para alcanzar HS y TS a la salida,
la mezcla presentar una temperatura y una humedad menor, localizadas sobre
la misma lnea de saturacin adiabtica.
Ejemplo 13.6. Saturacin adiabtica.
Se tiene una mezcla aire-vapor a 80 C con una humedad de 0.032 kg de
agua/kg aire seco. Este aire se enfra y humidifica adiabticamente.
Se pide estimar:
a) La temperatura y humedad final si la mezcla alcanza un 90 % de humedad.
b) La temperatura y humedad final si la mezcla se satura de humedad.
Solucin:
a) Sobre la carta psicometrica se localiza la temperatura y humedad que
representa a la mezcla original (80 C y humedad de 0.032 kg de agua/kg aire
seco). Entonces esta mezcla se humidifica y enfra adiabticamente, siguiendo
una curva de saturacin adiabtica, hasta el cruce con la curva de 90 % de
humedad donde se lee:
T = 43 C;
H = 0.049
kg agua
kg aire seco
b) Continuando sobre la misma lnea de saturacin adiabtica hasta la interseccin con la curva del 100 %, se puede leer:
TS = 40 C;
HS = 0.05
kg agua
kg aire seco
10. Temperatura de bulbo hmedo La temperatura de bulbo hmedo es

la temperatura de estado estable que alcanza una pequea masa de agua cuando
se pone en contacto con una corriente de aire en condiciones adiabticas.
Para determinar temperaturas de bulbo hmedo se puede utilizar un termmetro cuyo bulbo se recubre con una tela impregnada de agua. El termmetro
se sujeta mediante una cuerda y se hace girar en el aire. Si el aire no est saturado se produce un descenso en la lectura del termmetro debido a la evaporacin
de agua de la tela. La lectura final de estado estacionario es la temperatura
13.2. FUNDAMENTOS
627
de bulbo hmedo (en contraposicin, a la lectura normal del termmetro se le

llama temperatura de bulbo seco).
Para sistemas aire-agua (nicamente) la descripcin del proceso adiabtico
del bulbo hmedo puede realizarse en forma satisfactoria mediante la ecuacin
de saturacin adiabtica.
La importancia prctica del anlisis anterior, es que mediante mediciones
de temperaturas de bulbo hmedo y bulbo seco, y con auxilio de la carta psicomtrica, es posible determinar con relativa facilidad la humedad de mezclas
aire-vapor de agua.
Ejemplo 13.7. Determinacin de humedad.
Una mezcla de aire-vapor de agua tiene una temperatura de 70 C. La temperatura de bulbo hmedo de esta mezcla es de 30 C.
Se pide: Calcular la humedad de la mezcla.
Solucin:
Se puede suponer que la temperatura de bulbo hmedo es igual a la temperatura de saturacin adiabtica. Recorriendo la curva de saturacin adiabtica
de 30 C hasta la temperatura de bulbo seco de 70 C, se puede leer la humedad
de 0.01 kg agua/kg aire seco.
13.2.2.
Mtodos de Secado
El mtodo de secado que debe ser utilizado en un bioproceso depende del

tipo de producto, sus propiedades fsicas, su tolerancia a la temperatura y los
requerimientos de proceso en cuanto a la forma de operacin ya sea intermintente
o continua.
Los mtodos de secado se pueden clasificar de acuerdo a la forma de transferir
calor y eliminar el solvente en dos tipos: a) adiabticos y b) no adiabticos.
Mtodos adiabticos
Estos mtodos consisten en el secado por medio de adicin de calor con aire
caliente. Los secadores por aspersin y los secadores de tipo instantneo operan
de acuerdo a este mtodo. Son utilizados para secar partculas que no toleran
altas temperaturas como protenas unicelulares y enzimas.
Mtodos no adiabticos o por conduccin
En el secado no adiabtico el calor se proporciona en forma indirecta por
conduccin a travs de una pared metlica. Generalmente los secadores no adiabticos operan a presin reducida y se emplean para el secado de cristales y
precipitados, donde las temperaturas de secado deben ser menores a 60 C.
El secado por congelamiento, un caso de secado no adiabtico, se efecta
por sublimacin de agua congelada empleando bajas presiones y temperaturas.
Se emplea para secar protenas teraputicas que no toleran temperaturas arriba
de las ambientales.
628
13.2.3.
CAPTULO 13. SECADO
Velocidad de Secado: transferencia de calor y masa
En el diseo de secadores, adems de las relaciones de equilibrio, es necesario

establecer relaciones que permitan determinar la velocidad del secado o el tiempo
de secado. Debido a que el conocimiento de los mecanismos bsicos del secado
no es completo, frecuentemente es necesario efectuar mediciones experimentales
de la velocidad de secado.
Cuando se seca un slido ocurren dos procesos fundamentales y en forma
simultnea: a) se transfiere calor para evaporar un lquido y b) se transfiere
masa: como lquido o vapor al interior de slido, y como vapor del slido al aire.
Los factores que controlan la velocidad de estos procesos determinan la velocidad del secado. Los mecanismos de transferencia de masa estn ntimamente
relacionados con el tipo de slido a secar (homogneo, granular, etc), mientras
que la forma de transferir calor depende del mtodo de secado (adiabtico o no
adiabtico).
Existen dos enfoques fundamentales para modelar los procesos de secado: a)
modelos de parmetros agrupados y b) modelos de parmetros distribuidos. El
primero supone que las propiedades fsicas y los componentes de los materiales
a secar permanecen uniformes a travs del lecho del material. Los modelos de
parmetros distribuidos permiten una diferente composicin del material en
determinadas regiones (Katekawa y Silva, 2006; Wang y Langrish, 2009).
13.2.4.
Efectos Colaterales del Secado
Cuando el secado de un material no se realiza apropiadamente, se presentan

daos que afectan la calidad del producto. En el caso de productos biotecnolgicos los daos tpicos que se presentan en el secado son: endurecimiento,
deshidratacin qumica y desnaturalizacin.
El fenmeno de endurecimiento se presenta cuando la velocidad de secado es
muy alta y el slido forma una capa interior hmeda y una capa exterior seca e
impermeable, que impide la evaporacin y el secado apropiado. Este fenmeno
puede evitarse disminuyendo la velocidad de secado.
La deshidratacin qumica consiste en la eliminacin de agua de la estructura
molecular del producto y tambin se origina por una velocidad de secado alta.
El tercer tipo de dao es la desnaturalizacin que sufren las protenas en
el secado. Este proceso generalmente sigue una cintica de primer orden que
depende de la concentracin de agua, la temperatura y el tiempo de secado, de
acuerdo a la siguiente expresin:

dPr
E
= ko exp
(Pr )
(13.15)
dt
RT
donde:
Pr : Medida de la concentracin de la protena no desnaturalizada.

ko : Constante caracterstica del material. [t1 ].
13.2. FUNDAMENTOS
629
E: Energa de activacin del material. [cal/mol].

R: Constante de los gases ideales. [cal/(mol K)].
T : Temperatura absoluta. [ K].
La integracin de la ecuacin (13.15) entre los lmites:
t = to
Pr = Pro
t = t Pr = Pr
genera la expresin:
ln
Pro
Pr
= ko exp
E
RT
(13.16)
Entre menor sea la temperatura y el tiempo de secado, menor es el grado de

desnaturalizacin. Generalmente es ms conveniente utilizar una combinacin
de una temperatura baja con un tiempo alto de secado, para evitar una desnaturalizacin excesiva.
Ejemplo 13.8. Desnaturalizacin de catalasa.
Cuando se seca una pasta concentrada de la enzima catalasa a 37 C por
10 min se desnaturaliza 63 % de la enzima. Mientras que cuando se seca esta
pasta a 20 C por 30 min, se desnaturaliza slo un 28 %.
Se pide: Estimar el grado de desnaturalizacin cuando el material se seca
a 4 C por 90 min.
Solucin:
Utilizando la ecuacin (13.16) se pueden obtener dos ecuaciones que permiten
determinar los parmetros ko y E.
ln
ln
Pro
(Pro 0.63 Pro )
Pro
(Pro 0.28 Pro )
(10 min)
cal
K
1.99
310
mol K
= ko exp
= ko exp
(30 min)
cal
1.99
293 K
mol K
resolviendo las expresiones anteriores se obtiene:
E
ko
cal
mol
= 3.22 1015 min1
= 23, 453
630
CAPTULO 13. SECADO
Con estos parmetros se puede estimar el grado de desnaturalizacin utilizando la misma ecuacin con T = 4 C y t = 90 min.
ln

3.22 1015 min1 exp
Pro
Pr
Pr
Pro
= 0.91
23453
cal
mol
(90 min)
cal
K
1.99
277
mol K
Bajo estas condiciones se desnaturaliza slo el 9 % de la enzima.
13.3.
Equipos de Secado
Los equipos de secado son muy variados. Los empleados en los procesos
biotecnolgicos se pueden clasificar de acuerdo al mtodo de secado empleado
en:
Secadores adiabticos.
Secadores no adiabticos.
13.3.1.
Secadores Adiabticos
Los secadores adiabticos producen el secado empleando el flujo de entrada

de un gas caliente y seco. El gas evapora lquido del slido y sale fro y hmedo.
Los principales tipos de secadores adiabticos (Quinn, 1983) son: a) secadores
por aspersin, b) secadores instantneos y c) secadores de lecho fluidizado.
Secador por aspersin
En los equipos de secado por aspersin (Fig. 13.4) es posible secar soluciones
o suspensiones de slidos, rociando stas en un recipiente a travs del cual se
hace pasar una corriente de aire caliente. Los slidos secos se colectan en el fondo
del secador y del fondo de ciclones que se utilizan para procesar los polvos de
salida del secador.
Los secadores por aspersin son utilizados para la produccin de grandes
volmenes de productos termolbiles como enzimas, bacterias, levaduras, frmacos y protenas (Prabakaran y Hoti, 2007; Sloth et al., 2009).
Uno de los componentes claves del secador por aspersin es el atomizador
que permite formar pequeas gotitas de la mezcla incrementando notablemente
el rea de secado, de tal manera que el tiempo del secado sea menor que el
tiempo que dura la gota en alcanzar la pared del recipiente.
Existen dos tipos bsicos de atomizadores: a) los tipo disco giratorio (15, 000
a 24, 000 rpm) y b) los tipo de eyector a presin. El primero es ms empleado en
13.3. EQUIPOS DE SECADO
Figura 13.4: Secado por aspersin. Tomada de: Brocklebank, 1990.
631
Reproducida
c
con el permiso de M arcel Dekker Inc. Copyright 1990.
los procesos biotecnolgicos debido a que presentan menos problemas de taponamiento y ofrece la posibilidad de controlar el tamao de la gota controlando
la velocidad del disco.
Las capacidades de los secadores por aspersin son muy variadas. Las capacidades de evaporacin varan de 1.0 kg/h hasta 2.0 ton/h de agua, con dimensiones tpicas de 2 2 3.5 m para los modelos pequeos y de 10 5 12 m
para los modelos intermedios.
Secador instantneo
Los secadores instantneos o flash (Fig. 13.5) son utilizados para secar slidos de baja humedad o slidos difciles de manejar por formar partculas muy
pequeas o ser muy pegajosos en forma seca (protenas y almidn).
En un secador instantneo el material slido que se va a secar se alimenta
conjuntamente con aire caliente a un ducto, a travs del cual el slido viaja
y se seca por accin del aire. Al final del ducto la corriente de aire-slido se
separa por accin de un cicln. Parte de la corriente es recirculada para secar
las partculas grandes que son ms difciles de secar. Si debido a su tamao
las partculas de la alimentacin no pueden ser transportadas por el secador,
el secador puede incorporar un molino desintegrador a la entrada del ducto de
secado.
Secador de lecho fluidizado
El secador de lecho fluidizado (Fig. 13.6) puede ser utilizado para secar
rpidamente materiales slidos que permitan su fluidizacin por medio de una
632
CAPTULO 13. SECADO
Figura 13.5: Esquema de un secador instantneo.

corriente de aire caliente (Treybal, 1980). El material se alimenta a un lecho
soportado por una malla inferior y se le hace pasar una corriente de aire caliente,
de tal manera que las partculas del slido se separan y forman una suspensin
fluida, que permite su transporte hasta el punto de descarga. Los secadores de
lecho fluidizado continuos pueden ser circulares, cuadrados o rectangulares en
su seccin de flujo. Pueden alcanzar capacidades de hasta 10 ton/h de producto
seco, mientras que los intermitentes son utilizados en escalas ms pequeas del
orden de 500 kg/lote.
13.3.2.
Secadores no Adiabticos
Los secadores no adiabticos requieren un sistema de calentamiento y generalmente trabajan con sistemas de vaco. Los principales secadores no adiabticos utilizados en biotecnologa son: el tipo charola, el de doble cono, el tambor
rotatorio y el liofilizador (De Vivo, 1983).
Secador de charolas
Los secadores de charolas (Fig. 13.7), son utilizados a escala piloto o para
producciones bajas de productos de alto valor econmico, susceptibles a temperaturas elevadas o a dao por manejo mecnico excesivo.
En el secador de charolas la muestra se coloca en las charolas que se introducen a una cmara. Las charolas son calentadas por medio de chaquetas de
13.3. EQUIPOS DE SECADO
633
Figura 13.6: Esquema de un secador de lecho fluidizado.

vapor y la cmara cuenta con un sistema de vaco, lo cual permite el secado de
la muestra a condiciones moderadas.
Secador de doble cono
El secador de doble cono es un secador giratorio al vaco (Fig. 13.8a), que
tiene dos conos unidos por sus bases por medio de un cilindro corto. Este recipiente gira sobre un eje para inducir el movimiento del material y evitar zonas
de sobrecalentamiento. El secador cuenta con un sistema de vaco para facilitar
el secado.
Este tipo de secador es ampliamente utilizado en la obtencin de productos
biotecnolgicos a escala industrial.
Secador de tambor rotatorios
Un secador tipo tambor rotatorio muy utilizado industrialmente consiste de
un recipiente cilndrico horizontal que no gira y el movimiento del material se
realiza por accin de agitadores internos que remueven el material de las paredes
calientes del tambor (Fig. 13.8b). Estos equipos generalmente operan por lotes
y el calor se provee por medio de agua caliente que fluye por una chaqueta o
por un tubo concntrico a la flecha.
Liofilizadores
Los liofilizadores son utilizados para obtener slidos secos de alto valor comercial. Se emplean cuando los slidos son muy lbiles o frgiles para ser tratados por un mtodo convencional de secado o una filtracin, o bien son muy
634
CAPTULO 13. SECADO
Figura 13.7: Esquema de un secador de charolas.

solubles (sales de sodio) de tal manera que no pueden ser obtenidos por precipitacin o cristalizacin. La liofilizacin ha sido empleada para la obtencin de
enzimas, hormonas y otro tipo de protenas de uso farmacutico.
En un proceso de liofilizacin (Fig. 13.9) la solucin a secar, con una concentracin entre 5-25 % peso/volumen, se alimenta a un sistema de filtrado (0.2
m) para ser esterilizada y entrar al secador que opera en forma estril. En el
proceso de secado la solucin primero se congela, y posteriormente se deshidrata
mediante un sistema de calentamiento y un sistema de vaco, acoplados de tal
manera que el agua de la muestra siempre est en forma slida y su prdida sea
slo por sublimacin.
Recientemente se ha investigado el uso de liofilizadores que operan a la atmsfera como una alternativa a los liofilizadores al vaco con el propsito de
reducir los costos de operacin en el secado (Claussen et al., 2007).
13.4.
Diseo de Secadores
El diseo confiable de sistemas de secado de materiales biolgicos generalmente requiere experimentos de laboratorio para determinar propiedades del
material a secar y las condiciones de operacin, una vez que se ha seleccionado
cuidadosamente el tipo de secador. La teora de secado y el usos de correlaciones
empricas son tiles para estimar el tamao del secador y el tiempo de secado.
Una vez establecidos los requerimientos de diseo, se desarrolla el diagrama
del sistema de secado para cumplir con las especificaciones de diseo. Seguidamente se calculan los balances de masa y energa para obtener los parmetros
del proceso como flujo de aire necesario, capacidad de los sopladores y el calor
transferido en los intercambiadores. Finalmente se selecciona el equipo necesario. Es importante considerar que actualmente existe una gran diversidad de
13.4. DISEO DE SECADORES
635
Figura 13.8: Esquemas de secadores giratorios. a) Secador de doble cono y b)

Secador de tambor.
software comercial para apoyar en este proceso de diseo y anlisis de sistemas
de secado (Gong y Mujumdar, 2008).
Los mtodos para el diseo de equipos de secado estn ntimamente relacionados con la forma en que se transfiere el calor en el equipo y con el grado
de complejidad de la descripcin del mismo. Dos tipos de diseo de secadores
son de particular importancia:
Diseo de secadores adiabticos.
Diseo de secadores no adiabticos.
13.4.1.
Diseo de Secadores Adiabticos: Calor convectivo
Los secadores adiabticos son utilizados para secar: a) slidos (porosos o no

porosos) y b) suspensiones de productos de inters.
636
CAPTULO 13. SECADO
Figura 13.9: Esquema de un liofilizador de placas y del proceso de liofilizacin.

La muestra pierde humedad de la periferia al centro (a-d).
Secado de slidos
Para obtener experimentalmente la velocidad de secado de un material slido, se procede a colocar una muestra en una charola, de tal manera que slo se
exponga la superficie del slido a la corriente de aire que se utilice para secar.
La variacin de la humedad del slido puede medirse por medio de una balanza.
Las condiciones de secado deben ser constantes y aproximadamente iguales a
las que se utilizarn a gran escala.
Curvas de secado La Figura 13.10 muestra una curva tpica de un secado
experimental. La Figura 13.10a muestra la variacin del contenido de humedad
de slido (W ) con el tiempo. Diferenciando estos datos se puede obtener la
velocidad de secado y graficarla contra el contenido de humedad como aparece
en la Figura 13.10b, o contra el tiempo.
Revisando la forma de las curvas de la Figura 13.10 se observan dos regiones:
La regin A-B de las curvas (de 0 a tc ), donde la humedad del slido desciende
linealmente y la velocidad de secado se mantiene constante, llamada regin de
velocidad de secado constante; y la regin B-C de las curvas donde la humedad
decrece en forma ms lenta y la velocidad de secado disminuye con el tiempo,
llamada regin de velocidad de secado decreciente.
Las regiones caractersticas del secado pueden ser racionalizadas en funcin
de los conceptos: a) agua libre en el slido y b) agua ligada en el slido.
En la regin de velocidad de secado constante, se presenta la evaporacin del
agua libre, de tal manera que su movimiento a travs del slido por capilaridad o
difusin es ms rpido que su velocidad de evaporacin. El secado se efecta por
evaporacin de agua de la superficie saturada del slido a travs de la pelcula
estancada de aire localizada sobre ste. Cuando esta superficie empieza a perder
el 100 % de saturacin, la velocidad de secado disminuye. El agua ligada empieza
637
Figura 13.10: Curva de secado experimental. a) Variacin del contenido de

humedad con el tiempo de secado y b) Variacin de la velocidad de secado con
la humedad. Tomada de: Porter et al., 1973. Reproducida con el permiso de M cGraw-Hill
c
a evaporarse dentro del slido y el vapor a difundirse a travs del slido hasta
el aire. Este proceso es ms lento y por lo tanto retarda la velocidad de secado.
Debido a la situacin descrita anteriormente, el tiempo de secado de un proceso
debe ser calculado sumando los tiempos de los periodos de secado constante y
de secado decreciente.
Velocidad de secado constante Cuando el calor de evaporacin en el periodo de velocidad de secado constante es proporcionado por aire caliente, se
establece un equilibrio dinmico entre la velocidad de transferencia de calor del
aire al slido y la velocidad de evaporacin. Bajo estas condiciones la superficie
del slido alcanza la temperatura de saturacin adiabtica o temperatura de
bulbo hmedo.
De acuerdo a la Figura 13.11 la velocidad de transferencia convectiva de
calor q (energa/tiempo) est dada por:
q = hA(T Ti )
donde:
(13.17)
638
CAPTULO 13. SECADO
Figura 13.11: Transferencia convectiva de calor.

h: Coeficiente de transferencia de calor entre la pelcula estancada de aire sobre
la superficie del slido y sta
(anlogo a los coeficientes de transferencia

de masa). [cal/ L2 o t ].
A: rea expuesta al secado. [L2 ].
T : Temperatura en el seno del aire. [ ].

Ti : Temperatura en la superficie del slido. [ ].
El flux msico de agua puede ser expresado como:
J = k(Ci C)
(13.18)
J = k (Hi H)
(13.19)
donde:

J: Flux de agua. [M/ L2 t ].
Ci : Concentracin de agua en la superficie del slido. [M/L3 ].
C: Concentracin de agua en el seno del aire. [M/L3 ].

k: Coeficiente de transferencia de masa en la pelcula estancada de aire sobre
el slido. [L/t].

: Densidad de aire seco. [kg aire seco/ L3 de mezcla ].
: 1/VH
El balance de agua en el sistema puede expresarse como:

dW
= JA
(13.20)
dt
donde m es la masa de slido seco utilizado y W la humedad del slido.
m
dW
=
dt
639

k A
m
(Hi H)
(13.21)
El resultado anterior es difcil de utilizar debido a que generalmente las

humedades no son medidas directamente. Entonces las humedades de la ecuacin
(13.21) se expresan en funcin de temperaturas combinando esa ecuacin con el
balance de energa.
En un proceso adiabtico la transferencia de calor del aire al slido es igual
al total del calor latente de evaporacin, de tal manera que:
Calor transferido = (Calor latente de evaporacin) (Masa evaporada),
q = () (JA)
(13.22)
Combiando las ecuaciones (13.17), (13.21) y (13.22) se obtiene la siguiente

expresin:

hA
dW
=
(T Ti )
(13.23)
dt
m
La ecuacin anterior es equivalente a la ecuacin (13.21), pero est expresada

en funcin de dos temperaturas fcilmente medibles: la temperatura de bulbo
seco del aire T y la temperatura de saturacin adiabtica o temperatura de
bulbo hmedo Ti .
Se puede calcular el tiempo de secado en el periodo de velocidad de secado
constante integrando la ecuacin (13.23) entre los lmites siguientes:
t=0
W = Wo
t = tc
W = Wc
obtenindose:

m
(Wo Wc )
tc =
hA(T Ti )
(13.24)
h = 0.0204 G0.8
(13.25)
donde tc es el tiempo para alcanzar la humedad crtica del slido, que es la

humedad a la cual termina el periodo de velocidad de secado constante.
Para el clculo de tc es necesario calcular h. Este coeficiente depende de la
geometra del secador.
En el caso de secado con flujo de aire paralelo a la superficie de un slido
y una temperatura entre 45 150 C, el coeficiente de transferencia de calor
puede ser evaluado con la ecuacin,
donde:
640
CAPTULO 13. SECADO

G: Flux msico de aire. [kg/ m2 h ].

h: Coeficiente de transferencia calor. [W/ m2 K ].
En el caso de gases en flujo turbulento y sistemas aire-agua, tambin puede

ser utilizada la analoga de Reynolds la cual establece una relacin directa entre
el coeficiente de transferencia de masa y el coeficiente de transferencia calor de
la siguiente forma:
k=
h
CP
(13.26)
donde:
k: Coeficiente de transferencia de masa de la ecuacin (13.18).
: Densidad msica total del gas.
CP : Capacidad calorfica. [cal/M ].
La ecuacin (13.24) puede ser utilizada en forma combinada con la ecuacin
(13.25) o con la (13.26).
Velocidad de secado decreciente En el periodo de secado de velocidad
constante generalmente se evapora la mayor parte del agua contenida en el
slido, pero puede implicar slo una pequea fraccin del tiempo total de secado.
Por otro lado, el periodo de velocidad de secado decreciente puede involucrar
una evaporacin de menos agua pero una mayor fraccin del tiempo total de
secado.
En el periodo de velocidad de secado decreciente la evaporacin del agua
(ligada) es ms difcil, la velocidad de evaporacin depende de mecanismos como:
a) difusin del agua lquida en materiales homogneos continuos, b) difusin del
vapor de agua en materiales porosos o granulares, c) flujo capilar en slidos
porosos o granualares, d) flujo por gravedad en materiales granulares y e) flujo
causado por contraccin del slido. Uno de estos mecanismos es generalmente
el dominante, no obstante que varios de ellos puedan ocurrir simultneamente.
Modelo lineal El anlisis detallado del periodo de velocidad de secado
decreciente es complejo y su descripcin se realiza en forma aproximada. Uno
de los modelos ms sencillos para describir este periodo establece una relacin
lineal de la velocidad de secado con la humedad, de la siguiente forma:
dW
= aW
dt
donde a es una constante.
La ecuacin (13.27) puede integrarse entre los lmites:
t = tc
W = Wc
(13.27)
641
t=t
W =W
obtenindose la ecuacin siguiente:

t tc =
1
ln
a
Wc
W
(13.28)
Tiempo de secado El tiempo total de una operacin de secado puede calcularse sumando las ecuaciones (13.24) y (13.28):

m
1
Wc
t=
(Wo Wc ) + ln
(13.29)
hA(T Ti )
a
W
En el diseo de secadores el clculo del tiempo de secado permite su dimensionamiento adecuado. En el caso de los secadores por aspersin, el tiempo de
secado debe ser menor al tiempo que dura la partcula en alcanzar la pared del
secador, de tal manera que cuando esto ocurra la partcula ya est seca y deslice
suavemente por la pared del secador. Es decir, el tiempo de secado determina
el dimetro del secador (Oakley, 2004).
Ejemplo 13.9. Secado en la regin de velocidad constante.

Un material granular insoluble se va a secar en una charola de 45.7 45.7
2.54 cm. El material ocupa completamente la charola y se puede considerar que
los lados y el fondo de la bandeja estn aislados, de tal manera que el calor slo
se transmite por conveccin desde una corriente de aire que fluye paralela a la
superficie a una velocidad = 6.1 m/s. El aire est a una temperatura de 65.6
C y tiene una humedad de 0.01 kg de agua/kg de aire seco.

Se pide: Estimar la velocidad de secado del slido.
Solucin:
Para el clculo de la velocidad de secado se utiliza la ecuacin (13.23):
m dW
h
= (T Ti )
A dt
El empleo de esta ecuacin requiere calcular Ti , h y .

a) Clculo de Ti .
Para una humedad de H = 0.01 agua/kg de aire seco y una temperatura de
bulbo seco de 65.6 C, mediante la carta psicomtrica y utilizando la lnea de
saturacin adiabtica se puede encontrar,
Ti = 28.9o C
b) Clculo de h.
Se puede utilizar la ecuacin (13.25) con G = .
Para el clculo de la densidad del aire se necesita calcular el volumen hmedo
del aire. Utilizando la ecuacin (13.10),
642
CAPTULO 13. SECADO
VH
VH
VH

m3 mezcla
= (0.00283 + 0.00456H)(T + 273)
kg aire seco
3

m mezcla
= (0.00283 + 0.00456 0.01)(65.6 + 273)
kg aire seco
m3 mezcla
= 0.974
kg aire seco
La densidad de 1.0 kg de aire seco y 0.01 kg de agua acompaante es:

=
kg
1 + 0.01
= 1.037 3
0.974
m
El flujo msico es:

m
kg
3600 s
kg
1.037 3
= 22, 770 2
s
m
h
m h
El coeficiente de transferencia de calor se puede calcular con la ecuacin
(13.25):
G = 6.1
h = 0.0204 (22, 770)0.8

W
h = 62.45 2
m K
c) Clculo de .
El calor de evaporacin se obtiene de tablas de vapor a Ti = 28.9 C, este
valor es:
kJ
= 2, 433
kg
y de acuerdo a la ecuacin (13.23),
J
3600 s
W
62.45 2 s
(65.6 28.9) K
m dW
m
K
W
h
=
kJ 1000 J
A dt
2, 433
kg
kJ
m dW
kg agua
= 3.39
A dt
m2 h
el rea de transferencia de acuerdo a las dimensiones de la charola es:
A = 0.457 m 0.457 m = 0.209 m2
de tal manera que la velocidad de secado es:

m
kg agua
dW
= 0.709
dt
h
643
Secado de slidos no porosos El modelo terico ms utilizado para describir todo el fenmeno de secado de slidos no porosos es el modelo difusivo,
que es un mtodo de parmetros agrupados que reduce la complejidad de la
descripcin de la cintica de secado a un coeficiente de difusin efectivo (el
modelo tambin ha sido utilizado para describir slo la fase de velocidad de
secado decreciente) (Schlunder, 2004).
Cuando se supone un mecanismo unidireccional de transporte en una placa
(slab) en la direcccin y, con una difusividad efectiva constante Def ; la difusin
de agua lquida a travs de la matriz slida no porosa sujeta al proceso de secado,
puede ser descrita por la segunda Ley de Fick de la difusin. En trminos de la
humedad del slido se expresa como:
W
2W
= Def
t
y 2
(13.30)
La solucin analtica de esta ecuacin para secado es (Crank, 1975):

W We
8 1
1
(2i + 1)2 2
= 2
exp
Def t
W0 We
i=0 (2i + 1)2
4L2
(13.31)
donde We es la humedad de equilibrio, W0 es la humedad inicial y L es el espesor

de la placa cuando el secado es por una cara de la placa y L es la mitad del
espesor de la placa para secado por las dos caras.
Para periodos largos de tiempo de secado y 4Def t/L2 > 0.1, el primer trmino de la serie anterior es una buena aproximacin de la solucin, entonces:

8
2
W We
= 2 exp 2 Def t
W0 We
4L
(13.32)
dW
2 Def
=
(W We )
dt
4L2
(13.33)
Diferenciando la ecuacin anterior se obtiene la expresin para la velocidad

de secado siguiente:
Ejemplo 13.10. Secado de pimientos rojos. En el estudio de la cintica

de secado con aire de placas (slabs) de pimientos rojos y de la cintica de
descomposicin del cido ascrbico, se han utilizado los modelos siguientes (Di
Scala y Crapiste, 2008; Turhan y Turhan, 1997):
Modelo de la cintica de secado:
dW
2 Def
=
(W We )
dt
4L2
El efecto de la temperatura sobre el coeficiente de difusin se describe mediante una ecuacin tipo Arrhenius:
644
CAPTULO 13. SECADO
Def

Ed
= D0ef exp
RTa
Modelo de variacin de la temperatura del producto:

Para describir el cambio de la temperatura en las placas experimentales de
pimiento rojo se utiliza el siguiente balance de energa:
aV
dTS
=
[JHV + hg (Ta Ts )]
dt
S Cps
El clculo del flux de agua se realiza utilizando la siguiente igualdad:
dW
JA
JaV
=
=
dt
m
S
El modelo considera la variacin de las propiedades del producto con la
humedad del producto.
La variacin de la densidad del pimiento rojo est dada por:

W
W
S = 2798 exp 15.83
+ 845.2 exp 0.125
W0
0

W

W
S = 1138 exp 2.33
W0
W
0.1
W0
W
para
< 0.1
W0
para
La rea especfica de transferencia de calor por:

aV = aV 0 5.149 18.813
W
W0
+ 28.684
W
W0
2
14.02
W
W0
3
El calor especfico del producto vara de acuerdo a:

W
Cps = 815.4 + 3382
1+W
El coeficiente de transferencia de calor:
hg = hg0
aV 0
aV 0
0.36
Modelo de la cintica de descomposicin del cido ascrbico:

Se supone una cintica de descomposicin del cido ascrbico de pseudo
primer orden de la forma:
dAa
= ka Aa
dt
donde:
645

Eaa
ka = k0a exp
RTs
k0a = K1a W K2a
Eaa
= K3a + K4a W
R
Los parmetros experimentales del sistema se presentan en la tabla siguiente:
Parmetro
Conc. cido ascrbico
Relacin rea/volumen
Cte. de dif. efectiva
Energa activ. de difusin
Coef. de transf. de calor
Ctes. reaccin ascrbico
Ctes. reaccin ascrbico
Dimensin de placas
Cte. de los gases ideales
Temperatura del aire
Temp. inicial del producto
Humedad en equilibrio
Humedad inicial
Calor de vaporizacin
Smbolo
Aa0
av0
D0ef
Ed
hg0
K1a , K2a ,
K3a y K4a
R
Ta
Ts0
We
W0
HV
Valor
0.02 953 1 kg asc/kg prod seco
200 m1
2.6 104 m2 /s
33, 830 J/mol
57.3 W/m2 K
1.820, 0.590,
3144 y 8.99
0.02 0.02 0.005 m
8.314 J/mol K
60 C
25 C
0.0058 kg agua/kg prod seco
12.16 kg agua/kg prod seco
2.36 106 J/kg
Se pide: Escribir un programa MATLAB para graficar la variacin de la

humedad y el contenido de cido ascrbico en las placas de pimiento rojo.
Solucin:
En la Figura 13.12 se presenta el programa MATLAB para la solucin del
ejemplo. Las grficas de las cinticas se presentan en la Figura 13.13.
Secado de suspensiones por aspersin: balances y dimensionamiento
El diseo de secadores por aspersin requiere del anlisis global del proceso
de secado que involucra: a) la atomizacin de la suspensin, b) el mezclado de
las gotas con el gas de secado, c) el secado (cintica y tiempo de residencia) y
d) la separacin de los slidos secos del gas de salida (Thybo et al., 2008; Wang
y Langrish, 2009).
En los secadores por aspersin el tiempo de residencia del aire en la cmara
de secado es un factor de diseo clave. Se puede suponer que el tiempo de
residencia mnimo del producto en el secador es igual al tiempo de residencia del
aire. En el caso de productos sensibles al calor, el tiempo promedio de residencia
se recomienda sea menor a 35 s. A su vez, este tiempo debe ser menor al tiempo
que dura la gota en alcazar la pared del recipiente.
646
CAPTULO 13. SECADO

Existen varios enfoques ingenieriles para el diseo de secadores por aspersin
(Oakley, 2004). Un enfoque prctico de diseo se basa en el tiempo de residencia
del aire en el secador y en el uso de balances de masa y energa. Esto permite
desarrollar el diseo conceptual para estimar las dimensiones crticas de los
equipos.
Una vez fijado el tiempo de residencia del aire, t, en el secador por aspersin,
se calcula mediante balances el flujo volumtrico de la mezcla aire-agua GV . Con
estos dos valores se determina el volumen de la cmara del secador (V = GV t).
Las dimensiones de la cmara dependen del tipo especfico de secador. En
el caso de secadores con aspersores tipo disco giratorio la relacin de esbeltez
H/D recomendable es de (0.6-1.0):1.0, para asegurar un adecuado tiempo de
viaje de las gotas que evite incrustamientos en la pared del secador.
Ejemplo 13.11. Secado de un antibitico.
Se requiere utilizar un secador por aspersin en un arreglo como el que se
muestra en la Figura 13.14, para secar una solucin de antibitico que contiene
25 % (kg/kg) de slidos y se encuentra a una temperatura de 20 C. El aire que
entra al secador es tomado de la atmsfera a 15 C y con 50 % de humedad. Se
647
Figura 13.13: Cinticas de secado de pimiento rojo. a) Curva de secado y b)

Retencin de cido ascrbico.
calienta hasta 150 C en un intercambiador de calor utilizando vapor en forma
indirecta. El aire de salida del sistema tiene una temperatura de 75 C.
Figura 13.14: Esquema del sistema de secado por aspersin del Ejemplo 13.11.
La capacidad calorfica de los slidos es de 0.4 kcal/ (kg C) y la temperatura de referencia es de 0 C. En el proceso se requiere producir 316 kg/h de
antibitico con una humedad del 5 % y una temperatura de 60 C.
Se pide estimar:
a) El flujo msico de alimentacin.
b) La cantidad de masa de agua evaporada en el proceso.
c) El flujo msico de aire necesario y la humedad de aire a la salida.
d) El flujo msico de vapor a la salida.
648
CAPTULO 13. SECADO
e) Flujo volumtrico de aire hmedo

f) Las dimensiones de la cmara de secado
Solucin:
a) El flujo de alimentacin puede ser calculado mediante un balance de slidos.
Entrada de slidos = Salida de slidos
F 0.25
kg slidos
kg totales
F
kg
kg slidos
0.95
h
kg totales
kg
= 1, 200
h
= 316
b) La cantidad de agua evaporada puede calcularse mediante un balance de

agua en los slidos.
Agua evaporada = Agua en la alimentacin Agua en el producto
kg
kg agua
Agua evaporada = 1200
0.75
h
kg
kg
kg agua
0.05
316
h
kg
kg
Agua evaporada = 884
h
c) La humedad del aire a la salida y el flujo de aire, pueden calcularse
mediante un balance de masa y un balance de energa.
El balance de masa se pude escribir como:
kg agua
h
La humedad H1 del aire a la entrada puede encontrarse en la carta psicomtrica de la Figura 13.2,
G(H2 H1 ) = 884
H1 = 0.005
kg agua
kg aire seco
El balance de energa est dado por:
[Entalpia de la alimentacin] + [Entalpia del aire a la entrada] =
[Entalpia del producto] + [Entalpia del aire a la salida]
649
La entalpia de la alimentacin est dada por:

kg slido
kcal
kg
0.25
0.4
(15 0) C +
h
kg
kg slido C
kg
kg agua
kcal
1200
0.75
1.0
(15 0) C
h
kg
kg agua C
kcal
= 15, 300
h
1200
La entalpia del producto es:

kg
kg slido
kcal
0.95
0.4
(60 0) C +
h
kg
kg slido C
kg
kg agua
kcal
316
0.05
1.0
(60 0) C
h
kg
kg agua C
kcal
= 8, 152.8
h
316
La entalpia del aire a la entrada puede calcularse utilizando la ecuacin

(13.12),

kg aire seco
G
{[1.005 + (1.884)(0.005)] (150) +
h

kcal
kJ
(2502)(0.005)}
kg aire seco
4.187 kJ

kcal
= 39.33 G
h
de igual manera la entalpia de aire a la salida es:

kg aire seco
G
{[1.005 + (1.884)(H2 )] (75)+
h

kJ
kcal
(2502)(H2 )}
kg aire seco
4.187 kJ

kcal
= 18 G + 631.3 GH2
h
El balance de energa puede ser expresado como:
(15, 300) + (39.33 G) = (8152.8) + (18 G + 631.3 GH2 )
kcal
h
resolviendo simultneamente las ecuaciones de balance de masa y energa se

obtiene:
650
CAPTULO 13. SECADO
G = 30, 320
kg aire seco
;
h
H2 = 0.0341
kg agua
kg aire seco
d) Flujo de vapor
kg agua
kg agua
kg aire seco
0.0341
= 1, 034
h
kg aire seco
h
F V = GH2 = 30, 320
e) Flujo volumtrico de aire hmedo.

Para el clculo del flujo volumtrico de la mezcla es necesario calcular primero
su peso molecular promedio:
Mprom =
g
1.0341
= 28.33
0.0341
1
mol
+
18
28.9
La densidad de la mezcla a la salida es:
sal
PM
=
=
RT
kg
g
kg
mol
103 g
= 0.993 3
3
m
atm m
348 K
mol K
1 atm 28.33
82. 106
entonces el flujo volumtrico de aire hmedo es:

1, 034
GV =
kg agua
kg aire seco
+ 30, 320
m3
h
h
= 31, 575
kg
h
0.993 3
m
f) Dimensiones de la cmara de secado considerando un tiempo de residencia

de 35 s.

m3
h
V = GV t = 31575
35 s
= 307 m3
h
3600 s
Utilizando una relacin de esbeltez de H/D = 0.8 se tiene:
V =
D2
D2
H =
0.8D = 307 m3
4
4
De tal manera que:

D = 7.87 m;
H = 6.3 m
El dimetro es mayor al recomendado para secar partculas de tamao relativamente grande del orden de 100 m.
13.4.2.
651
Diseo de Secadores no Adiabticos: Calor conductivo
En los secadores no adiabticos la velocidad de secado depende de la velocidad de transferencia de calor a travs de una pared, hacia el slido que se desea
secar. Este tipo de secado se efecta al vaco para remover rpidamente el vapor
formado. La velocidad de secado debe ser tal que evite la formacin de zonas
de sobrecalentamiento que daen el material.
Dos tipos de secadores no adiabticos son de particular importancia: a)
secadores no adiabticos de torta estacionaria y b) secadores no adiabticos
giratorios.
Secado de tortas estacionarias
Para calcular el tiempo de secado de slidos en charolas o en liofilizadores
se puede utilizar un modelo aproximado. De acuerdo con la Figura 13.15, el
calor para producir la evaporacin (o la sublimacin) del agua, se transfiere por
la pared del recipiente y a travs del slido. Este calor permite que el agua se
evapore a partir de una superficie mvil localizada a una distancia Z. Arriba de
esta superficie el slido est seco y abajo de ella el slido se encuentra hmedo. Conforme el slido se seca el frente desciende, aumentando la zona seca.
Este modelo implica que tanto el agua lquida ligada como la no ligada, no se
transportan en el interior del slido.
Figura 13.15: Diagrama del secado de una torta estacionaria.

De acuerdo con el modelo el secado del slido se logra cuando la distancia
Z es igual a cero. El tiempo para lograr lo anterior se puede obtener realizando
balances de energa.
Suponiendo que la velocidad de secado es lenta, de tal manera que el calor
transferido de la pared hacia el slido es igual al valor de estado estacionario
(constante) dado por:
q = hA(To TZ )
que para el caso de slidos puede ser expresado como:
(13.34)
652
CAPTULO 13. SECADO
q=
A(To TZ )
Z
(13.35)
donde:

h: Coeficiente de transferencia de masa. [cal/ L2 t ].
: Conductividad trmica. [cal/ (L t )].
To : Temperatura en la base de la charola. [ ].

TZ : Temperatura en el frente de secado. [ ].
q: Flujo de calor. [cal/t].
El calor transferido puede ser relacionado con el movimiento del frente de
secado por medio del balance de calor en estado estacionario:
Calor transferido = (Agua evaporada)(Calor de evaporacin)

En forma de ecuacin:
q = o
d(AZ)
dt
(13.36)
donde:
A: rea de la seccin transversal de la charola. [L2 ].
: Calor de evaporacin. [cal/M].
o : Masa de agua ligada y no ligada por volumen de slido mojado. [M/L3 ].
Combinando las ecuaciones (13.35) y (13.36) e integrando entre los lmites,
t=0
Z =l
t=t
Z =Z
se obtiene:
Z 2 = l2

2(To TZ )
t
o
(13.37)
Al final de la operacin cuando t = tf , todo el slido est seco y Z = 0, la

ecuacin (13.37) se puede expresar como:

o l2
1
(13.38)
tf =
2 (To TZ )
13.5. SUMARIO
653
Este resultado indica que el espesor de la torta es un factor importante en

el tiempo de secado. Si el espesor se dobla el tiempo de secado se incrementa
cuatro veces.
La ecuacin (13.37) tambin puede utilizarse para calcular la evolucin del
secado con el tiempo, como porcentaje o fraccin de la zona seca , expresndose

1
2(To TZ )
Z
2
= 1
t
=
l
o l2
(13.39)
El anlisis anterior es sencillo y til como punto de partida en el diseo de

secadores no adiabticos.
Secado giratorio al vaco
La descripcin del secado en equipos giratorios como los secadores de tipo
tambor o los de doble cono, es ms compleja. La carga de material se mueve
constantemente, de tal manera que las partculas contactan la superficie caliente
en forma intermitente y en repetidas veces, durante su residencia en el equipo
de secado.
El diseo de este tipo de secadores se basa en determinaciones experimentales a nivel piloto. El escalamiento se realiza considerando que el producto del
tiempo de secado por el rea de secado por unidad de volumen se mantiene
constante al cambiar de escala, es decir:
to A
V
=
P iloto
to A
V
(13.40)
Industrial
Esta ecuacin supone que las condiciones a nivel piloto son iguales a las de
nivel industrial: temperaturas, niveles de vaco y el porcentaje del volumen total
que es ocupado por el slido (50-65 %).
13.5.
Sumario
El secado es una operacin empleada en la preparacin final de los bioproductos. Consiste en una reduccin del contenido de humedad de los slidos
con el propsito de mejorar su estabilidad, reducir su volumen y preservar su
actividad.
Los mtodos para efectuar una operacin de secado se clasifican en adiabticos y no adiabticos. En el secado adiabtico se agrega aire caliente directamente
sobre el material que se desea secar. El secado no adiabtico se realiza mediante
un calentamiento indirecto del material de inters.
Existen diversos equipos de secado, los cuales se pueden clasificar mediante
la forma en que se realiza el secado. Los secadores adiabticos ms utilizados
son el de aspersin, el secador instantneo y el de lecho fluidizado. Entre los no
654
CAPTULO 13. SECADO
adiabticos se pueden citar los secadores tipo charola, de doble cono, tambor
rotatorio y los liofilizadores.
El diseo de los secadores est basado en una combinacin de la teora de
secado y datos experimentales obtenidos directamente con el material de inters.
13.6. PROBLEMAS
13.6.
655
Problemas
13.1. Humedad de aire. El aire de una habitacin tiene una humedad H

de 0.021 kg de agua/ kg aire seco, se encuentra a 32.2 C y a una atmsfera de
presin.
Se pide calcular:
a) El porcentaje de humedad del aire de la habitacin.
b) El porcentaje de humedad relativa.
Resp. a) 67.5 % y b) 68.9 %.
13.2. Temperaturas para el clculo de humedad. Una mezcla airevapor de agua tiene una temperatura de bulbo seco de 65.6 C y una temperatura de bulbo hmedo de 32.2 C.
Se pide: Calcular la humedad de la mezcla.
Resp. H = 0.0175 kg agua/kg aire seco
13.3. Humedad de aire. Se desea secar aire con temperatura de bulbo

seco de 37.8 C y temperatura de bulbo hmedo de 26.7 C, enfriando primero
a 15.6 C para condensar vapor de agua y despus calentndolo a 23.9 o C.
Se pide calcular:
a) La humedad y porcentaje de humedad iniciales.
b) La humedad y el porcentaje de humedad finales.
Resp. b) H = 0.0115 kg agua/kg aire seco. % H = 60 %
13.4. Secador de charola. Una torta de filtrado se coloca en una charola

de 30.530.52.54 cm. Se seca por la parte superior con aire cuya temperatura
de bulbo hmedo es de 26.6 C y su temperatura de bulbo seco es 48.9 C. El
aire fluye en forma paralela a la superficie con una velocidad de 45.75 m/min.
Se pide: Estimar el tiempo para pasar el slido de una humedad inicial
de 0.2 kg de agua/kg de slido seco, hasta su humedad crtica de 0.09 kg de
agua/kg slido seco.
Resp. t = 13.3 h
13.5. Cintica de secado. En el secado de una muestra de 3.765 kg de un

alimento, mediante un flujo de aire sobre la superficie superior de una charola
de 0.186 m2 de rea, se obtuvieron los siguientes datos:
656
CAPTULO 13. SECADO

Tiempo (h)
0.0
0.4
0.8
1.4
2.2
3.0
4.2
5.0
7.0
9.0
12.0
Peso (kg)
4.944
4.885
4.808
4.699
4.554
4.404
4.241
4.150
4.019
3.978
3.955
Se pide:
a) Graficar los datos de humedad del slido W contra el tiempo.
b) Obtener la velocidad de secado en cada punto y graficarla contra la
humedad del slido.
c) Estimar la velocidad de secado en el periodo de velocidad constante.
d) Estimar la humedad crtica.
e) Estimar la humedad de equilibrio.
f)Estimar el tiempo para disminuir la humedad del slido de 0.25 a 0.09
kg/kg.
Resp. c) 0.996 kg/hm2 , d) 0.17 kg/kg e) 0.05 kg/kg y f) 4.1 h.
13.7. BIBLIOGRAFA
13.7.
657
Bibliografa
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Parte VI
Diseo del Bioproceso
661
En esta Parte V del libro en su Captulo 14 se combina la informacin presentada en los captulos anteriores para analizar en forma integral un bioproceso
de inters. La metodologa requiere considerar por un lado aspectos de mercado
como el precio y la demanda especfica del producto. Por otro lado, aspectos
tcnico-econmicos como la produccin anual, las dimensiones de los equipos,
las necesidades de insumos, los costos asociados, la inversin proyectada y el
impacto ambiental. Este enfoque ayuda a seleccionar el mejor diseo entre las
alternativas tcnicamente plausibles.
Captulo 14
Anlisis del Bioproceso

14.1.
Introduccin
El anlisis de un bioproceso consiste en la evaluacin y comparacin de

diagramas de flujos alternativos para la obtencin del producto de inters,
integrados por las operaciones unitarias seleccionadas durante la sntesis del
bioproceso.
El diseo de un bioproceso puede desarrollarse a diferentes niveles de detalle
que varan en su objetivo, precisin, costo y tiempo para efectuarse. El objetivo
vara tpicamente desde un estudio de factibilidad hasta uno de comercializacin.
La precisin aumenta con el grado de desarrollo del bioproceso desde la escala
laboratorio hasta el nivel de planta piloto. El costo y el tiempo del estudio
generalmente aumenta conforme el grado de precisin aumenta.
En este captulo, en la seccin 14.2, se presenta la metodologa general del
anlisis de bioprocesos y los principales aspectos tcnicos a considerar en este
tipo de estudios. El uso de paquetes computacionales para el diseo de bioprocesos se describe en la seccin 14.3. En la seccin 14.4 se presenta un caso prctico
sobre el uso de esta metodologa.
14.2.
Fundamentos
El diseo, desarrollo y evaluacin econmica de un bioproceso se basa en

la demanda comercial o social del producto, su sustentabilidad y las especificaciones regulatorias que es necesario cumplir (Freitas et al., 2009; Nfor et al.,
2008). Este tipo de trabajos precisan la integracin de informacin y conocimiento de varias disciplinas ingenieriles y cientficas (Fig. 14.1).
Un enfoque comnmente utilizado para lograr esta integracin consiste en: a)
establecer la escala y modo de operacin del bioproceso, b) desarrollar un modelo
conceptual del bioproceso constituido por los submodelos biolgico, fsico y de
costos, c) resolver los balances de masa y energa del bioproceso y d) realizar la
evaluacin econmica y anlisis de resultados correspondientes.
664
CAPTULO 14. ANLISIS DEL BIOPROCESO
Figura 14.1: Anlisis de bioprocesos. Integracin de informacin y conocimientos

para el diseo y evaluacin de bioprocesos.
14.2.1.
Escala y Modo de Operacin
El volumen de produccin o escala del bioproceso depende del mercado y

de las caractersticas de produccin. El mercado determina entre otras cosas el
volumen de la demanda a cubrir. La produccin se caracteriza por la productividad en el fermentador y el rendimiento de las bioseparaciones. De tal manera
que el volumen de produccin est dado por:

kg
Demanda
[Participacin ( %)]
ao

V P rd =
kg
[Rendimiento global ( %)]
Productividad
L ao
(14.1)
En el caso de productos intracelulares, la productividad del bioproceso depende de la concentracin celular alcanzable (kg/L) o rendimiento volumtrico y
de la concentracin especfica del producto en la clula (kg/kg) o rendimiento especfico. Tambin depende del tiempo de procesamiento para sistemas por lotes
o del tiempo de residencia para sistemas continuos. Entre menores sean estos
tiempos mayor productividad. La productividad anual se estima considerando
el tiempo anual de operacin (TAO), de tal manera que,

kg
=
Productividad
L ao
14.2. FUNDAMENTOS
665

kg
h
kg
Rend. especfico
TAO
Rend. volumtrico
L
kg
ao
=
[Tiempo de procesamiento (h)]
(14.2)
14.2.2.
Modelo del Bioproceso
El modelo del bioproceso se integra con tres submodelos: a) biolgico, b)

fsico y c) de costos. A continuacin se describen brevemente cada uno de estos
submodelos.
Submodelo biolgico
El submodelo biolgico comprende generalmente la cintica, la termodinmica (calor de reaccin y equilibrio) y la estequiometra de las biorreacciones. sta
es la informacin bsica para el diseo de las operaciones previas del bioproceso
(biorreactor, esterilizador de aire, preparacin de medio). La cintica determina
el tiempo necesario para lograr una conversin especificada, la termodinmica
permite calcular la cantidad de calor que es necesario remover en el biorreactor
y la estequiometra es la base para desarrollar los balances de masa del bioproceso. Esta informacin es obtenida a partir de los datos de laboratorio y/o
planta piloto, as como de la literatura.
Submodelo fsico
El submodelo fsico se basa en el diagrama de flujo desarrollado en la sntesis del bioproceso, organizado por secciones, v.g. fermentacin, recuperacin,
concentracin, purificacin y empaque. Incluye todas las operaciones y procesos
unitarios necesarios para la obtencin del producto. Las operaciones unitarias
son los pasos bsicos en el bioproceso como la esterilizacin, la fermentacin
y la cromatografa. Los proceso unitarios comprenden un conjunto de acciones
que se desarrollan secuencialmente para llevar acabo una operacin unitaria.
Por ejemplo, equilibrar, adsorber, lavar, eluir y regenerar una columna durante
la operacin cromatogrfica. El submodelo fsico tambin requiere de datos de
todos los materiales que entran y salen del proceso, incluyendo sus principales
propiedades fsicas y qumicas.
Submodelo de costos
El submodelo de costos involucra los costos unitarios y los mtodos de estimacin de costos necesarios para calcular los costos de inversin y operacin de
un bioproceso dado. Esta informacin se obtiene a partir de los proveedores o
bien de bancos de datos disponibles.
666
14.2.3.
Balances de Masa y Energa
Los balances de masa y energa permiten estimar la entrada y salida de materiales y calor de cada una de las operaciones. Esto se utiliza para dimensionar
los equipos y estimar los costos asociados.
14.2.4.
Evaluacin Econmica
La evaluacin econmica de bioprocesos es una herramienta que involucra el

anlisis de los ingresos esperados, los costos de adquisicin del equipo, la inversin total de capital y el costo anual de operacin. Tiene por objetivo principal
medir la eficiencia de la inversin propuesta, particularmente su rentabilidad.
Existen varios ndices que se utilizan en forma integral para medir la rentabilidad de los bioprocesos, que pueden ser clasificados en dos tipos: a) mtodos
que no toman en cuenta el valor del dinero en el tiempo como el margen bruto, el
retorno sobre la inversin y el periodo de pago en aos (estos mtodos han sido
presentados en el captulo 2 de este libro) y b) mtodos que toman en cuenta el
valor del dinero en el tiempo como el mtodo del valor presente neto (VPN) y
el mtodo de la tasa interna de rendimiento (TIR).
Tanto el VPN como el TIR requieren para su aplicacin los siguientes datos:
a) la inversin requerida, b) el horizonte de planeacin o vida del proyecto, c)
el valor de salvamento de las inversiones, d) el rendimiento mnimo aceptable
para la inversin y e) los flujos netos de efectivo estimados para cada periodo
de la vida del proyecto. Hemos visto que estos flujos se calculan de la siguiente
forma:
Ingresos
Costo operacin
Utilidad bruta
ISR
Utilidad neta
+ Depreciacin
Flujo de efectivo
Mtodo del VPN
El mtodo del valor presente neto consiste en calcular la suma algebraica
de los flujos netos de efectivo actualizados utilizando una tasa de descuento,
que generalmente es la tasa de rendimiento mnima aceptable (TREMA). La
ecuacin para el clculo del VPN es:
V P N = F0 +
n
1
t=1
donde:
F0 : Inversin inicial.
Ft : Flujo neto de efectivo del periodo t.
Ft
(1 + i)n
(14.3)
14.3. CASO DE DISEO
667
i: Tasa de descuento o actualizacin.

Cuando el valor presente neto es positivo (V P N > 0) la rentabilidad del
bioproceso es mayor al TREMA y es un indicador positivo para la evaluacin.
Mtodo del TIR
La tasa interna de rendimiento es la tasa de descuento que iguala a cero el
valor presente neto de los flujos de un proyecto. La ecuacin para el clculo del
TIR es:
V P N = F0 +
n
1
t=1
Ft
=0
(1 + i)n
(14.4)
donde:
F0 : Inversin inicial.
Ft : Flujo neto de efectivo del periodo t.
i: TIR
Cuando la tasa interna de rendimiento es mayor al TREMA (T IR > T REM A),
la rentabilidad del bioproceso es mayor al TREMA y es un indicador positivo
para la evaluacin.
14.3.
Caso de Diseo
Para describir el desarrollo de un diseo especfico, se utilizar el caso de un

bioproceso por lotes para la obtencin de plsmidos para uso mdico a partir de
caldos fermentados con E. coli como bacteria hospedera. El proceso se caracteriza por el uso de operaciones de membrana tanto para la recuperacin como
para la purificacin del plsmido.
14.3.1.
Plsmidos
Los plsmidos son molculas extracromosmicas de DNA cerradas y de doble

hlice, presentes en bacterias. Se caracterizan porque se pueden replicar de manera independiente del DNA genmico (gDNA). Actualmente, el desarrollo de
nuevas vacunas y terapias gnicas utilizando DNA plasmdico ha generado una
gran demanda de estas macromolculas biolgicas en condiciones de alta pureza,
de acuerdo con los lineamientos de los organismos reguladores para su administracin en seres vivos (Freitas et al., 2006).
14.3.2.
Diagrama de Bloques del Bioproceso
La Figura 14.2 muestra el diagrama de bloques del caso de diseo el cual se

divide en 4 secciones: propagacin del plsmido, recuperacin primaria, recuperacin intermedia y purificacin final. Durante la fermentacin se propaga la
cepa hospedera que contiene el plsmido de inters. La recuperacin primaria
668
consiste en la cosecha celular, el rompimiento celular por medio de lisis alcalina y una neutralizacin. Los agregados indeseables formados son separados
del caldo mediante filtracin. En la recuperacin intermedia se lava, purifica y
concentra el caldo mediante diafiltracin. La purificacin final del plsmido se
realiza mediante cromatografa de intercambio inico. Finalmente, la solucin
de plsmido se lava y concentra por medio de una diafiltracin.
Figura 14.2: Diagrama de bloques de un proceso para la produccin de plsmidos

superenrollado basado en el uso de membranas.
A continuacin se describen las acciones necesarias para el de diseo de este
bioproceso.
14.4.
Desarrollo del Diseo
Actualmente, es altamente recomendable el uso de simuladores computacionales para facilitar la representacin y el anlisis de todo el bioproceso. Varios simuladores como Aspen Plus, ChemCAD, HYSYS y PRO/II, son utilizados
generalmente para el diseo de procesos de estado estacionario en la industria
petroqumica. Algunos simuladores como SuperPro Designer, Biotechnology De-
14.4. DESARROLLO DEL DISEO
669
Tabla 14.1: Datos del caso de diseo.

Concepto
Demanda
Dosis
Rend. global
Rend. volumtrico
Rend. especfico
Cantidad
1.16 107 ampolletas/ao
2 mg/ampolleta
0.65
7 g de biomasa/L
0.007 g de plsmido/g de biomasa
sign Simulator y Batches son especficos para el anlisis de bioprocesos (Harrison

et al., 2003).
Tpicamente, el diseo de un bioproceso utilizando un simulador como SuperPro Designer requiere realizar las siguientes actividades:
1. Descripcin general de bioproceso.
2. Establecimiento de las bases de diseo.
3. Preparacin del diagrama de flujo.
4. Incorporacin de los procesos unitarios.
5. Especificaciones de equipos y corrientes.
6. Establecimiento de las bases para el anlisis econmico.
7. Simulacin del bioproceso.
8. Anlisis de resultados.
14.4.1.
Descripcin general del bioproceso
La etapa inicial del diseo comprende la descripcin del proyecto como

el nombre, fecha de inicio y datos generales. En esta etapa se define adems
el modo de operacin (por lotes o continuo), tiempo anual de operacin y el
tiempo de duracin de cada lote (cuando corresponda). En este caso de diseo
el modo de operacin es por lotes, el tiempo anual de operacin es de 7, 920
h/ao y la duracin de los lotes 48 h.
14.4.2.
Bases de Diseo
Para desarrollar el anlisis del bioproceso es necesario establecer las bases del
diseo, que estn relacionadas con la demanda del producto y la tecnologa de
produccin. En la Tabla 14.1 se presentan las bases correspondientes al presente
caso. Mediante el uso de esta informacin se calcula la demanda de plsmido,
el volumen de operacin del fermentador y las entradas al bioproceso.
Demanda anual
Con los datos anteriores es necesario calcular la demanda de plsmido,
670
Tabla 14.2: Composicin del medio de cultivo para la produccin de plsmidos.

Compuesto
Triptona
Extracto de levadura
Cloruro de sodio
Kanamicina
Demanda = 1.16 107
Composicin
16.0 g/L
10.0 g/L
5.0 g/L
0.1 g/L
amp
mg
kg
kg
2
6
= 23.2
ao
amp 10 mg
ao
Volumen de operacin del fermentador

Mediante el uso de la ecuacin (14.1) se calcula el volumen de operacin
(este volumen es una fraccin del volumen del equipo, en este caso es el 80 %)
del fermentador,
kg
103 g
ao
23.2
L
ao
kg
7920 h
= 4, 415
V = g
g
lote
7 0.007
g
L
0.65
h
48
lote
El volumen de operacin se ajusta considerando una prdida por evaporacin

de aproximadamente 2 %, de tal manera que:
L
L
lote
= 4, 500
V =
(1 0.02)
lote
4, 415
Entradas al bioproceso
Para realizar la simulacin es necesario establecer las entradas de masa al
bioproceso (agua, medio slido y antibitico) tomando como base el volumen de
operacin y la composicin del medio de cultivo (Tabla 14.2). En este caso se
utilizan 4, 226 L de agua y 131 kg de medio por cada lote.
14.4.3.
Preparacin del Diagrama de Flujo
En base a toda la informacin obtenida sobre el bioproceso se definen los

componentes puros y mezclas que se utilizan en el bioproceso (esta informacin puede ser obtenida de las bases de datos del programa o ser definida por
671
el usuario). Tambin se prepara el diagrama de flujo del mismo. Esta actividad comprende la incorporacin de las operaciones unitarias y las corrientes
respectivas. El diagrama de flujo del caso de diseo se presenta en la Figura
14.3 y consta de 5 secciones: propagacin del plsmido, recuperacin primaria,
recuperacin intermedia, purificacin final y empacado.
Propagacin del plsmido
El medio se prepara en un tanque de acero inoxidable (P-1) y se esteriliza en
un equipo continuo (P-2). El fermentador se inocula con E. coli que contiene
el plsmido de inters. La solucin de kanamicina que se utiliza para evitar el
crecimiento de E. coli sin plsmido o de otros microorganismos se prepara en
el tanque (P-3) y se filtra para ser esterilizada en el filtro (P-4). El aire para
la fermentacin es proporcionado por un compresor axial (P-5) debidamente
filtrado (P-6) a una velocidad de 1.5 vvm. La fermentacin se realiza en el
biorreactor (P-7) por 24 h a 37 C. La concentracin final en el biorreactor es
de 7.0 g/L en peso seco. Los gases de salida del biorreactor antes de ser liberados
son procesados en el filtro (P-8). El caldo final de la fermentacin se almacena
temporalmente en un tanque (P-9).
Recuperacin primaria
La biomasa se cosecha en una centrfuga (P-10) que remueve el 98 % de la
biomasa y concentra el caldo 20 veces aproximadamente. Despus de la centrifugacin la pasta se resuspende y se somete a un proceso de lisis alcalina con
NaOH en el biorreactor (P-11). Al final de la lisis la solucin se neutraliza con
acetato de potasio que permite precipitar restos celulares, DNA genmico y protenas contaminantes. Este precipitado es removido por un sistema de filtracin
(P-12, P-13 y P-14).
Recuperacin intermedia
Para lavar, purificar parcialmente y concentrar el caldo se utiliza una unidad
de diafiltracin (P-15). El caldo se concentra primeramente 5 veces, despus se
lava diez veces y finalmente se concentra de nuevo dos veces.
Purificacin final
La purificacin final del caldo se realiza en 5 columnas de membranas de
intercambio inico que operan en paralelo a razn de 4 ciclos por lote (P-16).
La operacin se realiza en forma frontal en la etapa de adsorcin y eluyendo
con gradiente salino. Para su preparacin final la solucin de plsmido eluida
de la columna se concentra 2 veces, se lava 10 veces y se vuelve a concentrar 5
veces, en el equipo de diafiltracin (P-17). Finalmente, la solucin se esteriliza
mediante filtracin (P-18).
672
Figura 14.3: Diagrama de flujo del bioproceso para la produccin de plsmidos

superenrollado basado en el uso de membranas.
673
Empacado
La solucin esterilizada se almacena en un tanque (P-19) y se usa para el
llenado de ampolletas (P-20). Finalmente las ampolletas se etiquetan (P-21) y
empacan en cajas de tres ampolletas (P-22).
14.4.4.
Incorporacin de los Procesos Unitarios
Algunas operaciones del bioproceso implican varias acciones secuenciales o

procedimientos. Por ejemplo, la fermentacin requiere el proceso unitario que
comprende la transferencia de nutrientes, la transferencia de antibitico, la fermentacin, la salida del fermentado, la limpieza y la esterilizacin.
Cada accin del proceso debe ser claramente especificada. En el caso de la
fermentacin es necesario definir la estequiometra de la biorreaccin, que en
este caso en moles est dada por:
CH1.91 O0.56 N0.23
Extracto de Levadura
+ 2.121CH1.8 O0.5 N0.2 + 0.47851 O2

Triptona
2.7258 CH1.77 O0.49 N0.24 + 0.39516 CO2 + 0.45153 H2 O

Biomasa
Tambin se especifica para la fermentacin entre otros datos, la temperatura

operacin de 37 C, el tiempo de la fermentacin 24 h, la concentracin celular
a la salida del fermentador 7.0 g/L, la entalpia de reaccin H = 3, 747.2
kcal/kg y la cantidad de aire necesario 1.5 vvm.
Otra operacin que requiere la definicin de su procesos unitarios es la lisis
que comprende agregar buffer de resuspensin, cargar la suspensin de biomasa,
agitar, resuspender, enfriar, agregar solucin de lisis, la lisis, cargar solucin de
precipitacin, precipitar, transferir a un filtro y la limpieza en su sitio. La lisis
tambin involucra definir una estequiometra en base a la composicin de la cepa
hospedera, en este caso utilizando unidades de masa:
100 biomasa 50.0 protenas + 16.7 endotoxinas + 1.7 gDNA +

+0.7 pDNA + 20.0 RNA + 10.9 molculas pequeas
Tambin la cromatografa es una operacin que requiere la definicin de su
proceso unitario que consiste en equilibrado, carga, lavado, elucin y lavado de
la columna.
Para cada accin dentro del proceso unitario, el simulador incluye un modelo
para calcular los balances de masa y energa. Con base en los balances de masa
tambin calcula el tamao de los equipos. Si existe diferencia en el tamao
necesario para cada accin el programa selecciona el que sea til para todo el
proceso.
674
14.4.5.
Especificaciones de Equipos y Corrientes
Una informacin que es necesario proporcionar es la relacionada al funcionamiento de los equipos y sus procesos unitarios. En el caso de los equipos
de separacin como filtros y centrfugas es necesario especificar los tamaos de
corte, tiempo de filtracin y las reas de las unidades. En los tanques se especifican propiedades como el material de construccin, el porciento del volumen de
operacin y la presin de operacin.
En esta fase tambin se requiere establecer la informacin relacionada a las
corrientes de entrada a los equipos en cuanto a su composicin, temperatura y
en algunos casos el volumen. El clculo del volumen frecuentemente se realiza
en funcin de factores de dilucin, lavado y elucin de los equipos. Por ejemplo,
una vez que se conoce la concentracin de la suspensin de biomasa obtenida
despus de la centrifugacin, es posible establecer el volumen de la solucin de
resuspensin para obtener una suspensin (diluida) manejable para la lisis.
14.4.6.
Bases del Anlisis Econmico
Para realizar el anlisis econmico del bioproceso es necesario establecer

los parmetros para realizar los clculos de: a) la evaluacin econmica, b) la
inversin total de capital y c) los costos de operacin. En este caso todas las
cifras se manejan en dlares.
Parmetros para la evaluacin econmica
Los parmetros financieros y tcnicos para realizar la evaluacin econmica
del caso de diseo se presentan en la Tabla 14.3. Se establece un precio de
$10.00/caja de producto. El anlisis econmico se realiza sobre el proyecto sin
financiamiento. Este enfoque permite calcular la eficiencia inherente al proyecto.
El horizonte de planeacin del proyecto son 15 aos y se consideran 3 aos
para construccin y arranque. El plan de produccin establece un 100 % de
utilizacin de la capacidad instalada del ao 4 al ao 15. Los equipos se deprecian
linealmente en 10 aos con un valor de salvamento del 10 %. Se considera un
impuesto sobre la renta del 40 % y los flujos se descuentan con un TREMA del
7 %.
Parmetros para el clculo de la inversin total de capital

En este caso el clculo de la inversin total de capital se realiza utilizando como concepto bsico de evaluacin el costo de adquisicin del equipo. El
costo de adquisicin de un bien de uso representa el sacrificio econmico para
adquirir el bien y ponerlo en condiciones de ser utilizado en la actividad. Este incluye la compra del equipo y dems erogaciones necesarias, como fletes, seguros,
honorarios de aduana, trmites de registro, la construccin de plataformas, el
montaje y la puesta en operacin.
675
Tabla 14.3: Parmetros para la evaluacin econmica del caso de diseo.

Concepto
Precio
Financiamiento
Vida del proyecto
Periodo de arranque
Plan de produccin (aos 4-15)
Depreciacin
Valor de salvamento
Impuesto sobre la renta
TREMA
Valor
$10.00/caja
Slo operacin
15 aos
3 aos
100 % anual
lineal 10 aos
10 %
40 %
7%
La fecha lmite para la activacin de un componente en el costo de adquisicin

de un bien es aquella en la cual el bien se pone en marcha, los gastos en que se
incurra despus de esa fecha sern considerados costos del periodo de operacin
respectivo.
En la Tabla 14.4 se presentan los multiplicadores utilizados para la estimacin de la inversin total de capital que se integra por la inversin fija
directa, el capital de trabajo y los costos de arranque y validacin (T CI =
DF C + W C + SV C).
Parmetros para el clculo de los costos de operacin

En la Tabla 14.5 se presentan algunos parmetros utilizados en el clculo
de los costos de operacin. Las materias primas comprenden medio de cultivo,
membranas, reactivos qumicos y materiales de limpieza. En el presente caso
los costos de las materias primas se obtuvieron de la base de datos del programa y algunos de ellos como el de las membranas fueron obtenidos de los
proveedores. Los costos de operacin y mantenimiento se estimaron utilizando
multiplicadores. El costo de la mano de obra y supervisin se calcul en base
a las horas de operacin de los equipos. El costo de los servicios se realiz con
base a los costos unitarios respectivos. Dentro de los costos fijos se contempla
la depreciacin lineal a 10 aos de la inversin fija directa.
14.4.7.
Simulacin del Bioproceso
Una vez que se ha construido el diagrama de flujo y se ha proporcionado

la informacin tcnica y econmica necesaria, el programa permite simular el
bioproceso para: a) obtener los balances de masa y energa, b) estimar tamaos y
nmero de los equipos, c) calcular las necesidades de mano de obra y servicios, d)
676
Tabla 14.4: Rubros para la estimacin de la inversin total de capital (TCI).

Rubro
Concepto
Monto
1.00 P C
0.40 P C
Tubera
0.35 P C
Instrumentacin
0.40 P C
Aislamiento
0.03 P C
Electricidad
0.10 P C
Edificios
0.45 P C
Acondicionamiento
0.15 P C
Servicios
0.40 P C
Ingeniera
0.25 T P DC
Construccin
0.35 T P DC
T P DC + T P IC
Consultaras
0.05 T P C
Contingencias
0.10 T P C
T P C + AC
Capital de trabajo (W C)
Mano de obra
30 das
Materias primas
30 das
Servicios
30 das
Tratamientos
30 das
Capital de arranque y validacin (SV C)
0.05 DF C
Tabla 14.5: Rubros del costo anual de operacin.
I. Costos de Operacin
Directos Variables
A. Materias primas y suministros
B. Mano de obra y supervisin

C. Servicios
II. Costos Fijos

A. Depreciacin
a. Materias primas:
Base de datos y usuario
b. Costo de operacin: 0.06 T P DC
c. Mantenimiento: 0.10 P C
a. Horas equipo
a. Vapor: $4.20/100 kg
b. Electricidad: $0.1/ kWh
c. Agua: $0.10/1000 kg agua fra
d. Tratamiento de desechos: $0.3/m3
a. 0.1 DF C
677
Tabla 14.6: Materias primas del proceso global.

Material
Agua
NaCl
Triptona
Ext. levadura
NaOH
Aire
EDTA disdico
TRIS HCl
Agua inyectable
SDS
kg/ao
2,651,791
9,992
11,080
6,924
267
1,821,930
334
1,383
529,076
742
kg/lote
16,169
61
68
42
2
11,109
2
9
3,226
5
estimar la duracin de cada ciclo de trabajo, e) realizar la evaluacin econmica

y f) evaluar el impacto ambiental del bioproceso. La informacin generada se
puede obtener mediante reportes detallados con informacin como la que se
presenta a continuacin.
Balances de masa
En la Tabla 14.6 se presentan algunos datos del balance de masa global del caso de diseo en kg/ao y en kg/lote, considerando la produccin de 164 lote/ao
y una duracin de 48 h/lote. Estos reportes tambin pueden ser obtenidos por
seccin del bioproceso.
Evaluacin econmica
Una vez efectuados los balances de masa y energa se puede proceder a
calcular el flujo de efectivo correspondiente y realizar la evaluacin econmica
del bioproceso. En la Tabla 14.7 se presentan algunos datos de la evaluacin
econmica relacionados al caso de diseo, de los rubros de flujo de efectivo,
inversin total requerida e ndices de evaluacin.
14.4.8.
Anlisis de Resultados
El bioproceso tiene un margen bruto del 73 % que refleja una diferencia

considerable entre los ingresos y los costos de operacin. El ROI y el periodo
de retorno indican que la inversin se recupera al primer ao de produccin.
La tasa interna de rendimiento es del 57 % que es sustancialmente mayor al
TREMA del 7 % empleado en el anlisis. El valor presente neto del proyecto es
678

Tabla 14.7: Evaluacin econmica del caso de diseo
Rubro
Flujo de efectivo
Inversin
Evaluacin
Concepto
Ingresos
Costo de operacin
Costo unitario
Inversin total de capital
Margen bruto
Retorno sobre la inversin (ROI)
Periodo de retorno
Tasa interna de rendimiento (TIR)
Valor presente neto (VPN)
Valor
$40,311,000/ao
$10,930,000/ao
$2.71/caja
$18,669,000
73 %
103 %
1 ao
57 %
$111,253,000
positivo y considerablemente alto debido tambin al TREMA del 7 % utilizado

para descontar los flujos.
El anlisis de resultados puede ampliarse mediante un anlisis de sensibilidad
para evaluar el impacto de los parmetros crticos (rendimientos, costos y precio)
sobre los indicadores claves del bioproceso como la rentabilidad, el costo de
produccin y la productividad.
En la Figura 14.4a se presenta en forma grfica la sensibilidad del TIR y
el periodo de retorno del bioproceso al precio de venta de la caja de producto.
Ambos ndices mejoran de forma significativa con el precio, mostrndose una
dependencia prcticamente lineal del TIR con el precio en el rango estudiado.
La Figura 14.4b muestra el efecto de la variacin de la concentracin celular
alcanzada en el biorreactor sobre los mismos indicadores. En este caso la mejora
de los indicadores es ms acentuada, lo que permite visualizar la importancia
que representa la optimizacin de la fermentacin para el xito de este tipo de
bioprocesos.
Figura 14.4: Anlisis de sensibilidad del TIR () y el periodo de retorno (). a)
Efecto del precio de venta y b) Efecto de la concentracin celular alcanzada en
el biorreactor.
14.5. SUMARIO
679
Cuando existe incertidumbre en los parmetros crticos, el anlisis de sensibilidad puede complementarse con simulaciones Monte Carlo que permitan
cuantificar tal incertidumbre. En este mtodo las variables de diseo que presentan incertidumbre se representan mediante distribuciones de probabilidad.
La simulacin se conduce evaluando diferentes escenarios a partir de los valores
de probabilidad de las variables. Los resultados se evalan estadsticamente para
cuantificar el riesgo y determinar la confiabilidad de obtener los valores deseados
de los indicadores claves del bioproceso (Petrides, 2010).
14.5.
Sumario
El anlisis de un bioproceso consiste en la evaluacin y comparacin de

diagramas de flujos alternativos para la obtencin del producto de inters,
integrados por las operaciones unitarias seleccionadas durante la sntesis del
bioproceso.
La metodologa requiere considerar por un lado aspectos de mercado como el precio y la demanda especfica del producto. Por otro lado, aspectos
tcnico-econmicos como la produccin anual, las dimensiones de los equipos,
las necesidades de insumos, los costos asociados, la inversin proyectada y el
impacto ambiental. Actualmente, es altamente recomendable el uso de simuladores computacionales para facilitar la representacin y el anlisis de todo el
bioproceso. El uso de estas herramientas se describe mediante el desarrollo de
un caso de un bioproceso por lotes para la obtencin de plsmidos para uso
mdico a partir de caldos fermentados con E. coli como bacteria hospedera.
680
14.6.
Problemas
14.1. Produccin de tPA. Se desea evaluar un bioproceso para la purificacin de tPA a partir de leche de cabra transgnica (Goldman et al., 2002). En
la siguiente tabla se presentan los datos de mercado y de costos.
Concepto
Demanda anual tPA
Dosis
Precio
Concentracin
Costo leche
Valor
100 kg
100 mg
$350/dosis
20 g de tPA/L de leche
$4, 000/L
Se pide:
a) Desarrollar el diagrama de flujo del bioproceso consultando la literatura
(v.g. Morcol y Bell, 2001).
b) Calcular el TIR y el VPN del proyecto.
c) Evaluar el efecto sobre el TIR de la variacin del costo de la leche en 20
y 10 %.
14.2. Produccin de albmina de suero humana (ASH). Para la evaluacin de un bioproceso para la produccin de ASH (protena no glicosilada) a
partir de un extracto de plantas de tabaco recombinante (Nicotiana tabacum)
obtenido en la etapa de recuperacin primaria de la protena, se cuenta con los
datos siguientes (Goldman et al., 2002):
Concepto
Demanda anual ASH
Precio
Concentracin
Costo extracto
Peso molecular
Valor
150 ton
$3.56/g
200 g de ASH/L de extracto
$100/L
66,500 Da
De acuerdo a los datos tcnicos obtenidos se requiere procesar 5, 000 L/da

de extracto para cumplir con la demanda proyectada.
Se pide:
a) Desarrollar el diagrama de flujo del bioproceso consultando la literatura,
(v.g. Holler y Zhang, 2008).
b) Calcular el TIR y el VPN del proyecto.
14.7. BIBLIOGRAFA
14.7.
681
Bibliografa
Freitas, S.; Canrio, S.; Santos, J.A.; Prazeres, D.M. 2009. Alternatives for the
intermediate recovery of plasmid DNA: performance, economic viability
and environmental impact. Biotechnol J. 4, 265-278.
Freitas, S.; Santos, J.; Prazeres, M. 2006. Plasmid DNA. En: Heinzle, E.;
Biwer, P.; Cooney, C. Development of Sustainable Bioprocesses Modeling
and Assessment. John Wiley and Sons, Ltd. p. 270-285.
Goldman, I.L.; Kadulin, S.G.; Razin, S.V. 2002. Transgenic goats in the world
pharmaceutical industry of the 21st century. Russian J. Genetics. 38, 1-14.
Harrison, R.G.; Todd, P.W.; Rudge, C.R.; Petrides, D. 2003. Bioseparations
science and engineering. Cap. 11. Oxford University Press.
Holler, C.; Zhang, C. 2008. Purification of an acidic recombinant protein from
transgenic tobacco. Biotech. Bioeng. 99, 902-909.
Marcol, T.; Bell, S.J.D. 2001. Method for processing milk. US6183803.
Nfor, B.K.; Ahamed, T.; van Dedem, G.W.; van der Wielen, L.A.; van de Sandt,
E.J.; Eppink, M.H.; Ottens, M. 2008. Design strategies for integrated
protein purification processes: challenges, progress and outlook. J. Chem.
Technol. Biotechnol. 83,124132.
Petrides, D.; Koulouris, A.; Siletti, C.; Jimnez, J.; Lagonikos, P. 2010. The
role of simulation and scheduling tools in the development and manufacturing of active pharmaceutical ingredients. am Ende, D.J. (Ed.). Chemical
Engineering in the Pharmaceutical Industry: From R&D to Manufacturing. John Wiley and Sons.
ndice alfabtico
smosis inversa, 464
Actividad especfica, 17
Adsorbentes hidrofbicos, 279
Adsorcin, 275
columna
patrn constante, 335
Adsorcin fsica, 278
Adsorcin por afinidad, 279
Anlisis del bioproceso, 663
balances de masa y energa, 666
escala y modo de operacin, 664
evaluacin econmica, 666
modelo del bioproceso, 665
submodelo biolgico, 665
submodelo de costos, 665
submodelo fsico, 665
Ayudas-Filtro, 71
Bacterias, 158
Gram negativas, 158
Gram positivas, 158
Bioprocesos, 6, 7
anlisis, 22
sntesis, 22
tpico, 9
Bioseparaciones, 6, 13
tendencias, 23
Capa de Gody-Chapman, 518
Carga de perlas, 174
Caso de diseo, 667
Centrifugacin, 111
Cintica de la adsorcin, 286
Cintica de la cristalizacin, 560
crecimiento, 562
velocidad de crecimiento, 562
nucleacin, 560
primaria, 561
secundaria, 561
velocidad de nucleacin, 561
Coagulacin, 71
Coeficiente de particin, 211
Coeficiente de transferencia de masa,
289
Costo de adquisicin de equipo, 46
Cristales
anlisis de momentos, 566
densidad del magma, 592
distribucin de tamao, 565
ley delta, 565
longitud caracterstica, 564
pureza, 554
tamao dominante, 591
tipos, 553
Cristalizacin, 551
curvas de solubilidad, 554
estrategia de diseo, 552
modo de operacin, 559
sobresaturacin por enfriamiento, 560
sobresaturacin por enfriamiento evaporativo, 560
sobresaturacin por evaporacin
trmica, 560
sobresaturacin por evaporacin
trmica al vaco, 560
sistema, 552
sobresaturacin, 557
NDICE ALFABTICO
683
Cristalizadores
escalamiento directo, 404
diseo
mtodos lineales
enfriamiento controlado y con la
cintico, 385
teora de momentos, 386
nucleacin suprimida, 578
teoria platos-cintica, 390
Cromatografa, 363
van Deemeter, 394
escalamiento, 402
modelos lineales, 373
factores, 403
platos tericos, 374
por elucin isocrtica, 363
sistema, 410
pureza, 399
Diseo de cristalizadores, 570
rendimiento, 400
balance poblacional, 572
resolucin, 397
continuos, 582
teora cintica, 383
continuos
tipos, 365
balances de masa, 597
Curva de ruptura, 319
con remocin selectiva, 595
Desarrollo del diseo, 668
continuos RPMSM, 583
anlisis de resultados, 677
diseo, 590
bases, 669
estimacin de parmetros, 584
bases de anlisis econmico, 674
escalamiento por lotes, 581
descripcin general del bioprocepor lotes, 571
so, 669
Diseo de equipo de centrifugacin, 126
especificaciones de equipos, 674
de discos, 135
preparacin del diagrama de flujo,
filtracin, 144
670
tubular, 127
procesos unitarios, 673
Diseo de equipo de electroforesis, 537
simulacin del proceso, 675
teora cintica, 542
Dilisis, 464
teora de platos, 537
Difusividad, 290
Diseo de equipo de extraccin, 233
Diseo de adsorbedores, 295
continua, 241
columna
de etapas mltiples, 242
anlisis adimensional, 332
diferencial, 253
anlisis aproximado, 323
por etapas no en equilibrio, 259
lecho a contracorriente, 340
por lotes, 234
modelo cintico lineal, 337
mtodo grfico, 239
modelo de Thomas, 334
por lotes
teora cintica, 328
mtodo analtico, 235
teora de platos, 325
Diseo de equipo de filtracin, 78
teoras plato-cintica, 341
continua
por lotes, 295
lavado de torta, 94
modelo cintico, 301
de lecho profundo, 98
modelo de parmetros agrupafiltracin continua, 92
dos, 304
formacin de torta, 92
tanque agitado continuo, 310
optimizacin, 86
Diseo de columnas cromatogrficas, 372
por lotes, 79
cromatografa lineal, 373
paralelo, 89
escalamiento con modelos, 409
tortas compresibles, 90
684
tortas incompresibles, 80
Diseo de equipo de rompimiento celular, 180
homogeneizador de alta presin, 192
microfluidizador, 193
molino de perlas de alta velocidad,
180
continuos, 183
por lotes, 181
Diseo de precipitadores, 444
agregacin ortocintica, 448
cintica, 444
continuos, 453
crecimiento pericintico, 446
floculacin, 449
mtodos, 449
nucleacin, 446
por lotes, 450
Diseo de secadores, 634
adiabticos, 635
curvas de secado, 636
no adiabticos, 651
al vaco, 653
tortas estacionarias, 651
slidos no porosos, 643
secado de slidos, 636
tiempo de secado, 641
velocidad de secado, 637
Diseo interior, 22
Diseo operaciones de equipos de ultrafiltracin, 485
concentracin
continua, 493
concentracin por lotes, 486, 491
concentracin-diafiltracin, 503
continua, 490
diafiltracin, 486
continua en cascada, 500
por lotes repetida, 499
por lotes, 489
purificacin, 486
Efecto de Joule, 527
Electrosmosis, 524
Electroforesis, 513
de zona, 514
NDICE ALFABTICO
dispersin, 523
medios, 528
Enfoque de diseo, 32
Equipo, 35
Equipo de filtracin, 75
a presin, 76
continuos al vaco, 76
de cmara, 76
lecho profundo, 77
marcos y lotes, 76
Equipos cromatogrficos, 371
Equipos de adsorcin, 294
columna, 295
por lotes, 294
Equipos de centrifugacin, 120
cmara mltiple, 122
de discos, 124
decantadora, 123
filtracin, 126
sedimentacin, 120
tazn slido, 121
tubular, 120
Equipos de cristalizacin, 568
continuos, 568
con circulacin forzada de magma, 569
con tubo de tiro y mampara, 570
cristalizador-evaporador, 569
por lotes, 568
Equipos de electroforesis, 532
con recirculacin, 534
desplazada, 535
pelcula delgada, 535
de flujo libre, 532
anulares, 534
de pelcula delgada, 533
electrocromatogrficos, 536
anular rotativa continua, 536
de efectos opuestos, 536
Equipos de extraccin, 230
continua, 231
de etapas mltiples, 231
diferencial, 232
por lotes, 230
Equipos de precipitacin, 443
Equipos de rompimiento celular, 167
NDICE ALFABTICO
685
comparacin, 193
Flujo cruzado o tangencial, 465
homogeneizador de alta presin, 175 Flujo de efectivo, 51
microfluidizador, 178
Flux, 466
molinos de perlas de alta veloci- Fuerza de relajacin, 523
dad, 168
Fuerza de retardamiento, 523
Equipos de secado, 630
GMP, 20
adiabticos, 630
Gradiente de presin transmembrana,
instantneo, 631
467
lecho fluidizado, 631
por aspersin, 630
Incrustacin de la membrana, 478
no adiabticos, 632
Ingresos, 46
de charola, 632
Inmovilizacin de ligandos, 280
de doble cono, 633
Insulina, 9
liofilizadores, 633
Intercambio inico, 279
tambor rotatorio, 633
Inversin total de capital, 47
Equipos de ultrafiltracin, 479
Isotermas, 281
mdulos, 481
Freundlich, 282
dinmicos, 483
irreversibles, 282
fibra hueca, 483
Lagmuir, 282
hoja enrollada en espiral, 482
lineal, 282
hoja plana, 482
hoja plegada, 482
Ley de Darcy, 470
tubos y carcaza, 482
Ley de Stokes, 112
membranas, 480
Longitud de Debye, 519
Escala de operacin, 33
Esfera cargada sumergida, 515
Mtodo heurstico, 37
Evaluacin ambiental, 54
reglas especficas, 37
Evaluacin econmica, 44
reglas generales, 37
Extraccin fraccionaria, 262
Mtodos
de permeabilizacin, 164
Extraccin lquido-lquido, 209
Mtodos
de rompimiento, 160
cambios de soluto, 214
choque
osmtico, 160
cambios de solvente, 214
digestin
enzimtica, 164
seleccin del solvente, 220
disolucin
lipdica, 163
sistemas, 210
mtodos
mecnicos,
164
Extraccin SDFA, 221
solubilizacin
de
la
membrana,
163
diagramas de fases, 222
Margen
bruto,
51
factores, 225
longitud de las lneas de unin, 224 Matrices, 366
Mecanismos de transporte en la adsormodelos, 228
cin, 287
Membranas anisotrpicas, 462
Factor sigma, 141
Mercado, 44
Filtracin, 67
Microfiltracin, 463
convencional, 73
Modelo de la capa doble, 517
de lecho profundo, 74
Modos de la electroforesis, 528, 530
mecanismos, 67
Floculacin, 71
de interfase mvil, 529
686
NDICE ALFABTICO
de zona, 529
enfoque isoelctrico, 531
isotacoforesis, 531
Momentos, 388
Movilidad, 517
concentraciones intermedias y altas, 521
efecto de la capa difusa, 519
soluciones diluidas, 520
efectos colaterales, 628

entalpa total, 625
equilibrio y propiedades trmicas,
618
humedad, 620
humedad de saturacin, 621
mtodos, 627
adiabticos, 627
no adiabticos, 627
porcentaje de humedad, 621
Nmero adimensional de Rayleigh, 527
punto de roco, 623
temperatura de bulbo hmedo, 626
Pared celular, 158
velocidad de secado, 628
PAT, 23
volumen hmedo, 625
Periodo de retorno, 52
Secrecin, 160
Polarizacin, 471
Sedimentacin, 114
Potencial qumico, 211
centrfuga, 115
Potencial Z, 518
por gravedad, 114
Precipitacin, 421
Separacin slido-lquido, 68
con polmeros no inicos, 433
Series de Hofmeister, 427
con sales, 423
Sigma, 132
con solventes, 431
Sistemas expertos
isoelctrica, 430
filtracin, 100
por afinidad, 441
Sustentabilidad social, 55
por desnaturalizacin selectiva, 437
por disminucin de la solubilidad, Tamao de corte, 463
Tasa interna de rendimiento, 667
423
Teora electrocintica, 515
Presin transmembrana, 487
Tiempo equivalente, 141
Proceso unitario, 34
Tipo de adsorbentes, 277
Procesos con membranas, 462
Tipos de adsorcin, 277
Punto isoelctrico, 515
Tipos de ligandos, 281
Pureza, 17
Rendimiento, 16
Rentabilidad, 51
Retorno sobre la inversin, 51
RIPP, 9
Rompimiento celular, 157
Sntesis de proceso, 31, 36
Salting out, 423
Secado, 617
calor hmedo, 623
carta psicomtrica, 620
curva de secado, 618
curvas de saturacin adiabtica, 625
Ultrafiltracin, 461
teora, 466
Valor presente neto, 666
El libro de Bioseparaciones est diseado para ser usado por estudiantes de licenciatura,
de posgrado y profesionales de la industria, de los diversos campos relacionados con los
procesos biotecnolgicos.
El texto se divide en seis partes. La primera parte constituye una introduccin a los
procesos de bioseparacin. En las siguientes cuatro partes: Recuperacin del Producto,
Concentracin, Puricacin y Acabado; se abordan las principales operaciones de bioseparacin siguiendo una secuencia tpica de un bioproceso, tratando con ello de conservar un
enfoque unitario ms que describir procesos particulares. La ltima parte se relaciona con el
Diseo del Bioproceso e integra los aspectos que se revisan en las partes previas.
En cada captulo, dedicado a una operacin determinada, se presentan los fundamentos
de dicha operacin, los equipos comnmente empleados para realizarla y los principales
mtodos de diseo.
Aspectos relevantes
Se presenta un tratamiento detallado y actualizado de las principales operaciones
de bioseparacin utilizadas en los bioprocesos.
Se incluyen varios ejemplos y problemas propuestos en cada captulo.
Un buen nmero de ejemplos y problemas propuestos se resuelven con MATLAB.
Cada captulo contiene bibliografa de consulta.
Se incluye un captulo nal integrador sobre el anlisis y evaluacin de esquemas de
bioseparacin utilizando paquetes de computacin.
Acerca de los autores
Armando Tejeda Mansir. Es Profesor-Investigador de la Universidad de Sonora, dedicado
a la enseanza y estudio de las Bioseparaciones. Su investigacin est orientada a los
aspectos fundamentales y de aplicacin de estas operaciones.
Rosa Mara Montesinos Cisneros. Es Profesora-Investigadora de la Universidad de
Sonora. Realiza trabajos sobre operaciones de purificacin de biomolculas y solucin
de modelos dinmicos del comportamiento de columnas cromatogrcas.
Roberto Guzmn Zamudio. Es Profesor del Departamento de Ingeniera Qumica y
Ambiental de la Universidad de Arizona. Su investigacin se centra en la tecnologa de
interacciones de anidad con nfasis en la separacin de iones metlicos y protenas.

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de posgrado y profesionales de la industria, de los diversos campos relacionados con los

Rosa Mara Montesinos Cisneros

Roberto Guzmn Zamudio

Datos de catalogacin bibliogrfica

Tejeda Mansir, Armando; Montesinos Cisneros,

Bioseparaciones. Segunda edicin.

Todos los derechos reservados

Carlos Mario Ramrez Torres

SEGUNDA EDICIN, 2011

1 Una Perspectiva de las Bioseparaciones

2 Sntesis del Bioproceso

Recuperacin del Producto

4.6. Problemas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 149

Concentracin del Producto

Purificacin del Producto

8. Cromatografa por Elucin

9.4.1. Cintica de la Precipitacin

Diseo del Bioproceso

14.Anlisis del Bioproceso

Una Perspectiva de las

El mercado actual de productos biotecnolgicos es del orden de miles de

CAPTULO 1. UNA PERSPECTIVA DE LAS BIOSEPARACIONES

Figura 1.1: Operaciones de un bioproceso. a) Operaciones previas y b)

c 1985. Todos los derechos reserM cGraw-Hill. Copyright

1.2. TIPOS DE BIOPROCESOS Y BIOPRODUCTOS

tracelular es necesario romper las clulas y separar los restos celulares. En el

Tipos de Bioprocesos y Bioproductos

Actualmente se pueden distinguir de manera general tres generaciones de

CAPTULO 1. UNA PERSPECTIVA DE LAS BIOSEPARACIONES

Factor VIII, tPA

Propiedades de los Bioproductos

El diseo del esquema de bioseparacin de un producto dado debe tomar en

1.3. OPERACIONES DE BIOSEPARACIN

Las operaciones de bioseparacin se basan en las diferencias que existen

Las bioseparaciones generalmente comprenden varias operaciones que se

CAPTULO 1. UNA PERSPECTIVA DE LAS BIOSEPARACIONES

1.3. OPERACIONES DE BIOSEPARACIN

de aminocidos unida a la proinsulina de 82 residuos. La proinsulina se obtiene

Operaciones previas: Seccin de fermentacin

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1.3. OPERACIONES DE BIOSEPARACIN

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1.3. OPERACIONES DE BIOSEPARACIN

Comportamiento del Bioproceso y Calidad del Producto

Las especificaciones son los estndares tcnicos, regulatorios y legales que el

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cantidad de producto obtenido

Para un bioproceso de n pasos, con un rendimiento por paso RP %, se puede

Ejemplo 1.1. Clculo del rendimiento global de un esquema de

1.3. OPERACIONES DE BIOSEPARACIN

Figura 1.4: Programa MATLAB para la solucin del Ejemplo 1.2.

unidades de actividad biolgica

Ejemplo 1.3. Estimacin del rendimiento y la pureza y de una

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Figura 1.5: Representacin grfica del rendimiento global de un proceso

c 1985. Todos los derechos

En la tabla siguiente se presenta la cantidad de enzima y de protena total

Se pide: Obtener el factor de purificacin de la enzima en cada paso, el

1.3. OPERACIONES DE BIOSEPARACIN

a) El factor de purificacin se obtiene mediante el cociente de la fraccin de

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Importancia Econmica de las Bioseparaciones