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BILIRRUBINAS
1. OBJETIVO: Determinar la concentracin de Bilirrubinas directa y total en
suero y otros lquidos biolgicos por el mtodo colorimtrico.
2. DEFINICIONES:
Bilirrubinas: Compuesto de degradacin de la hemoglobina, es
captada por el hgado para su conjugacin y excrecin en las bilis, las
alteraciones
hepatocelulares
u
obstrucciones
provocan
hiperbilirrubinemias. La eritroblastosis fetal o anemia hemoltica es una
patologa provocada por destruccin excesiva de glbulos rojos.
3. DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO:
3.1. Fundamento: La bilirrubina reacciona especficamente con el acido
sulfanilico diazotado produciendo un pigmento color rojo-violaceo (azo
bilirrubina) que se mide foto colorimtricamente a 530 nm. Si bien la
bilirrubina conjugada (directa) reacciona directamente con el diazo
reactivo, la bilirrubina no conjugada (indirecta) requiere la presencia de un
desarrollador acuoso que posibilite su reaccin. De forma tal que, para
que reaccione la bilirrubina total (conjugada y no conjugada) presenta en
la muestra, debe agregarse benzoato de cafena al medio de reaccin.
3.2. Muestra: Suero o plasma con heparina o liquido amnitico.
3.2.1. Cantidad: 300 ul.
3.2.2. Requisitos: No hemolizado, limpio y fresco. protegido de la luz natural
o artificial, envolver el tubo con papel negro.
3.3. Equipos, materiales y reactivos:
3.3.1. Equipos:
Centrifuga
Espectrofotmetro (Stat Fax)
Vortex
3.3.2. Materiales:
Micropipetas :10 a 100;100 a 1000 ul
Pipetas de 2 o 5 ml
3.3.3.
BLANCO
DIRECTA
TOTAL
Agua Destilada
1,250 ml
1,250 ml
Desarrollador
1,250 ml
Sulfanilico
100 ul
Diazoreactivo
100 ul
100 ul
Muestra
100 ul
100 ul
100 ul
Mezclar en el vortex dejar actuar en la oscuridad 5 minutos a temperatura
ambiente
Realice la lectura de absorbancias comenzando por el blanco , directa y total
Luego leer en el STAT FAX :N_____
Absorbancias obtenidas multiplicar por Factor = 17.3
Registrar los resultados e informar
3.4.1. Estabilidad de la mezcla de reaccin final:
Las lecturas pueden efectuarse entre 4 y 15 minutos excepto para la
bilirrubina directa que debe leerse a los 5 minutos exactos.
Si se lee antes habr subvaloracin de los resultados por reaccin
incompleta.
Si se lee despus habr sobre valoracin porque comienza a
reaccionar la bilirrubina libre.
3.5. Valores de referencia:
Adultos :
Directa : 0.1 - 0.4 mg/dl
Total
4. ANEXOS:
Factor = 17.3
absorbancia x Factor
absorbancia x Factor
bilirrubina Total - bilirrubinas Directa
6. CUESTIONARIO
1. Que es la eritroblastosis fetal?
2. Que es la fototerapia?
3. Cules
y
a que se deben las alteraciones hepatocelulares u
obstrucciones?
4. Cual es la estructura qumica de las bilirrubinas?
5. Como se elimina la bilirrubinas?