Procesi prenoenja i razmene naslednih informacija

Gubitak genetske informacije znai bioloku smrt

Votson i Krik otkrivaju strukturu DNK (Watson, J.D. and

F.H. Crick, Molecular Structure of Nucleic Acids: A
Structure for Deoxynucleic Acids, Nature 171 (1953) 738)

James D. Watson

Francis H. Crick

Maurice H. F. Wilkins
Rosalind Franklin?

Doprinosi razumevanju finih molekulskih struktura

DNK, RNK i virusa

Ribozomi

Hromozom
i DNK
Jedro

Goldijev
aparat

Endoplazmatini
retikulum

Mitohondrije

Jedro
Sadri nasledni materijal (nuklearna DNK)

Citoplazma
Sadri elijske organele
Mitohondrije (mitohondrijalna DNK)

Graa organizma

U ljudskom telu postoji 1017 elija

Gen je osnovna jedinica naslednosti
Genom je skup svih gena u organizmu
Ljudski organizam ima 46 hromozoma

Hromozomi strukture u
koje sadre genetski
materijal

Genski lokus pozicija

gena na hromozomu
Genski aleli razliiti
oblici jednog gena

Hromozom

Hromozomi

Genski
lokus

Genski
aleli

22 autozomna hromozoma + polni

hromozomi

enski i muki kariotip

Struktura makromolekula DNK

Izuvijane merdevine
DNK je dvostruki heliks
Ram merdevina je
Lanac DNK (polinukleotid)
sainjen od eera i
linearne strukture ine
fosfata
nukleinske kiseline povezane
Preke merdevina su
fosfodiestarskim vezama
sainjene od nukleotida

Zavojnica

irina zavojnice je svuda ista - 2 nm

Zavoj ini 10 parova nukleotida ukupne duine 3,4 nm

3,4 nm

2 nm

Nukleotidi

4 nukleinske kiseline (nukleotida) ulaze u sastav DNK

(A)denin

Guanin

Adenin

(T)imin

(G)uanin

(C)itozin

Purini

Nukleotid ini
Molekuli eera
Atomi fosfora

Atomi azota
Pirimidini
Citozin

Timin

Sparivanje nukleotida

Sparivanje baza se vri po pravilu komplementarnosti

A-T (dvostruke H veze)

G-C (trostruke H veze)

A i C se ne mogu poravnati
kako bi formirali H vezu

Ako se zna redosled

nukleotida u jednom
lancu DNK, moe se
odrediti redosled
drugog lanca

G i T se ne mogu poravnati
kako bi formirali H vezu

A i T se mogu poravnati
kako bi formirali dvostruku
H-vezu
G i C se mogu poravnati
kako bi formirali trostruku
H-vezu

RNK
Ribonukleinska kiselina

Pentoza koja ulazi u sastav RNK je riboza

U sastavu RNK se umesto timina javlja uracil
Jednolanani molekul
Nasledni materijal kod nekih virusa

Univerzalnost
Jedinstvenost???
Nepromenljivost
Dostupnost???
Praksa korienja u forenzici

 Identifikacija rtava i poinioca krivinih dela

Utvrivanje oinstva
Utvrivanje rodbinskih veza u imigracionim sluajevim
Identifikacija nestalih osoba
Utvrivanje osobe u automobilskim nesreama
Nezakonito ubijanje divljai

Opipljiv uzorak
Poreenje/utvrivanje
identiteta se ne obavlja u
realnom vremenu i sve faze
procesa nisu automatizovane
Ne postoje abloni i
ekstrakcija karakteristika

Identifikacija se zasniva na poreenju DNK profila

dobijenog iz biolokog traga sa DNK profilom osobe za
koje se sumnja da je ostavila taj trag
esto iz vrlo male koliine biolokog materijala

1980

Ray White opisuje prvi polimorfni RFLP marker

1985

Alec Jeffreys otkriva multilokusne VNTR probe

1985

Prvi rad o PCR-u

1986

DNK prvi put u kriminalistikoj istrazi (UK)

1988

FBI koristi DNK

1991

Prvi rad o STR-u

1995

U UK formirana DNK baza podataka

1998

FBI formira CODIS bazu podataka

DNK analiza poinje nakon pregleda dokaznog

materijala i pozitivne identifikacije uzoraka
Da li je DNK ista u svakoj eliji u telu i tokom ivota?
Forenzika DNK analiza obrauje mali procenat
sekvence DNK koji se razlikuje meu ljudima (VNTRs)

Telesne tenosti:

Tkiva:

Krv

Koa

Sperma

Kosti

Pljuvaka

Kosa

Urin

Nokti

Feces

Vosak iz uiju
Povraeni sadraj
Vaginalni bris

Znoj

Sterilni bris (tapii) u epruveti

Obeleiti epruvetu imenom ili ifrom osobe iji e se
bukalni bris uzeti tim brisom
Bris se izvadi iz epruvete i protrlja sa leve i desne
unutranje strane obraza 5-6 puta

Sterilni uslovi
Bez puenja, jela, pia i bacanja ubreta
to manji broj ljudi koji barata biolokim materijalom

Osoba koja prikuplja dokazni materijal mora imati minimalni

lini kontakt sa telesnim tenostima, materijalima i biolokim

uzorcima

Oprema
Sterilne lateks rukavice
Maske za lice, natikae, kapa, jednodelni kombinezon

Sterilni forcepsi za prikupljanje opuaka i sl.

Otisci prstiju
Oruje
Ugrizi
vakaa guma
Paketii droge koji su
prethodno drani u ustima
Opuci cigareta
Maramice, posteljina
Koriene koverte i
markice
Escajg
Odea

Koriene ae, flae i

konzerve
etke za kosu
etkice za zube
Obua, arape
Hanzaplast
Korieni pricevi
Odbaeni kondomi
Cucle
Konac za zube
Brijai
Znojave majice

Teni uzorci
Krv, sperma, pljuvaka
Pokupiti delom vate sa brisa

Osueni uzorci
Pokupiti vlanim brisem

Oguliti
Isei
Podii lepljivom trakom

Kako?
Pakovanje osuenih materijala
Svaki predmet sa biolokim tragom treba upakovati

posebno u papirnu kesu/kesu sa ventilacijom

Izbei pakovanje u plastine i vakumirane kese

Gde?
Svi paketi koji sadre bioloki materijal bi trebalo da stoje

u friideru ili na hladnijem mestu

Problemi sa izmeanim uzorcima i degradacijom

DNK rezultiraju u parcijalnim DNK profilima
Bioloki tragovi mogu biti od presudne vanosti
kao dokaz u sudskom postupku
Procedure za otkrivanje, dokumentovanje,
prikupljanje i uvanje biolokih tragova

Tokom amplifikacije (replikacije)

dve niti DNK se odvoje
Nove komplementarne niti se
grade koristei ogoljene
nukleotide kao matricu

Lanana reakcija polimeraze (Kary Mullis, 1980)

Enzimska reakcija koja omoguava amplifikaciju
segmenata DNK kroz termalne cikluse
Osetljiva
Brza

Denaturacija (94-97 C)
Vezivanje prajmera (50-60 C)
Kopiranje (70-72 C)

Razdvajanje naelektrisanih DNK fragmenata

po njihovoj veliini putem proputanja struje
kroz pufer
Amplifikovana DNK se proputa kroz gel

PAGE
SDS-PAGE

Razdvajanje fragmenata DNK na osnovu odnosa njihove

veliine i naelektrisanja u unutranjosti kapilare sa elektrolitom
Amplifikovana DNK se proputa kroz genetski analizator

A, T, G i C fluorescentno obeleeni
Pod dejstvom elektrinog polja DNK migrira i prolazi kroz

lasersku svetlost, a laser oitava svaki nukleotid

99,7% ljudske DNK je isto kod svih ljudi

0,3% ljudske DNK je jedinstveno za svaku osobu
Pouzdana identifikacija
Minisateliti (ponovljena sekvence, 10-100 baznih parova)
Kratki tandemski ponovci (STR) (2-9 baznih parova)
Pojedinane polimorfizmi nukleotida (SNP)

ta su STR?
Visoko varijabilni nekodirajui segmenti DNK koji se
ponavljaju
Stabilni kod pojedinaca
Razliiti meu pojedincima

Postoji oko 2000 razliitih STR u ljudskoj populaciji

13 se rutinski koristi u forenzikoj praksi za identifikaciju

osoba

Iskljuen
Uporeeni DNK profili se ne podudaraju

Ukljuen
Uporeeni DNK profili se podudaraju
Mora se predstaviti verovatnoa sluajnog podudaranja

Svi aleli analiziranih lokusa iz spornog uzorka moraju biti isti

kao aleli za te lokuse iz referentnog uzorka profila iz baze

Nemogu zakljuak
Nedovoljna koliina materijala za analizu
Uzorci vie osoba (vie uinilaca)

Odreena uestalost pojedinanih STR lokusa

Mnoenjem statistikih podataka o uestalosti svakog
od 13 STR regiona dobija se visoko jedinstven rezultat
Verovatnoa sluajnog podudaranja

Rezultat PCR analize DNK

Testirani mukarac nije bioloki otac deteta, poto ne dele genetske markere
9 od 15 genskih identiteta se ne poklapa

Vri se preko
Jedarne (nuklearne) DNK
Mitohondrijalne DNK

Jedinstveni segmenti DNK na Y hromozomu i

mitohondrijalnoj DNK
Y hromozom nasleuju mukarci od oca
Mitohondrijalnu DNK nasleuju i mukarci i ene od
majke

MtDNK se
nasleuje od
majke

Nuklearna
DNK se
nasleuje od
oba roditelja
Potomak elija

Srodstvo po majinoj liniji se moe utvrditi generacijama

unazad
Nuklearna DNK se nasleuje od svih
predaka

DNK analizom muke

komponente genetskog
materijala (Y hromozom)
mogue je utvrditi i
daleka srodstva po
mukoj liniji

MtDNK se nasleuje po jednoj liniji

RFLP analiza
PCR analiza
STR analiza
Analiza Y hromozoma (Y-STR)
Analiza mitohondrijalne DNK (MtDNA)

Tehnika za analiziranje
varijabilnih duina DNK
fragmenata koji su
rezultat divergiranja DNK
uzorka restrikcionim
endonukleazama

Nedostaci
Zahteva velike koliine DNK
Degradacija uzoraka

Umnoavanje segmenta molekula DNK

Sekvenciranje gena i dijagnoza naslednih poremeaja,
detekcija i dijagnoza infektivnih oboljenja i kreiranje
DNK profila
Primena PCR omoguava analizu genetskog materijala
iz samo jedne elije
Prevencija kontaminacije drugim biolokim materijalima

Razlike po prisustvu i odsustvu STR na odreenim

lokusima, kao i po broju ponovaka unutar odreenog
lokusa
STR se nasleuju kombinacijom ovih genetskih
elemenata oba roditelja
Krvni srodnici imaju slian, ali ne i isti profil osim u
sluaju jednojajanih blizanaca
Pri analizi DNK koristi se 10-15 STR lokusa

Geni sadre odreene ponavljajue sekvence

razliitih duina
Ponavljajue sekvence od 2 do 5 baza se nazivaju
mikrosateliti ili STR Sistemi
Pogodni za forenzike analize
PCR reakcije i metoda kapilarne elektoforeze
Kada je jedan dovoljno veliki broj STR sistema
obuhvaen analizom, dobija se tzv. DNK otisak

EIF1AY

SMCY

DFFRY
DBY
UTY
IB4Y

RPS4Y
ZFY

AMELY

Nerekombinujui region
heterohromatin

1A 1A 1A

AZFa
Spermatogeneza

Gonadoblastom
Rast

6D 6E 6F
DAZ
BPY2
PHY
CDY

PRY
IIY2
RRM

RBM

5D5E 5F 5G 5H5I 5J 5K 5L 5M5N 5O5P 5Q 6A 6B 6C

XKHY

5A 5B 5C

CDY

SRY

Geni
(familije)
specifini za
Determinacija
testise
pola

4A

BPY1
BPY1

1B 1C1D 1E 2A 2B 2C 3A 3B 3C 3D 3E 3F 3G

PRY
TTY1
TTY1
TTY2
TTY2
TSPY

1A 1B 2

TTY1
TTY1
TSPY

pter

Geni Y hromozoma kod oveka

PAR

X- homologi geni

Analiza markera sa Y hromozoma

Nasleuju se preko muke predako-potomake linije

Fenotipovi

qter

AZFc
Spermatogeneza
Spermatogeneza
AZFb

Genetski materijal koji se nalazi u mitohondrijama

nasleuje se iskljuivo od majke
Identifikacija Romanovih i njihove dece

Od 1985.godine najmoniji alat za identifikaciju osoba

Identifikacija osoba i utvrivnje oinstva su dve
najzastupljanije forenzike DNK analize
Za identifikaciju se skenira 13 delova DNK (STR) uz
kreiranje DNK profila osobe
Izuzetak su jednojajani monozigotni blizanci
Razlike u DNK profilima osoba

Identifikacija poinilaca krivinih dela

U Srbiji se DNK analize primenjuju od 1997. godine
Bioloki tragovi na mestu zloina i na predmetima
Utvruje se DNK profil iz biolokog traga i DNK
profil iz uzorka uzetog od osumljienog

Identifikacija potencijalnih osumnjienih

Identifikacija rtava katastrofa
Utvrivanje oinstva i drugih srodnikih veza
Identifikacija ugroenih i zatienih vrsta
Pronalaenje odgovarajueg donatora i recipijenta
pri transplantaciji

Evropska nacionalni DNK registri

Prvi put napravljene u SAD i Engleskoj
Tehniko-tehnoloki, pravni i etiki aspekt

Baze podataka (skladitenje DNK profila individua)

Referentni DNK profili
DNK profil okrivljene osobe
DNK profil osumnjiene osobe

DNK profil oteene osobe

DNK profili tragova (bioloki tragovi)

Krv
Pljuvaka
Sperma
Meko tkivo
Kosti

Sjedinjene Amerike Drave (FBI)

Februar 2010
Preko 8 miliona profila
300 000 profila iz uzoraka sa MKD

13 STR lokusa

Nezavisni STR (na razliitim hromozomima) obezbeuju

veliku mo diskriminacije

Obrauje
DNK profile osuenika

Nerazreene zloine
Nestale osobe

Testira (13 + 1) markera

za unos u CODIS
FBI i CODIS
13 CODIS STR lokusa, amelogenin i njihove hromozomske pozicije

1.

2.

3.

4.

Baza osuenih prestupnika

Svaka drava odreuje za koja krivina dela
Baza uhapenih/baza osumnjienih
U nekim dravama SAD
Baza nestalih, neidentifikovanih (humani ostaci) i
referentna baza nestalih osoba (roaci nestalih)
Forenzika baza

Kontrola profila na saveznom nivou

FBI, tajna lokacija
180 laboratorija, 50 drava

Kontrola profila na dravnom nivou

Kontrola profila na lokalnom nivou

Unos i menadment DNK profila

Pretraga baza DNK profila
Statistike kalkulacije
Komunikacija izmeu CODIS laboratorija i centralnog
FBI sistema

Velika Britanija
7 STR lokusa
3 miliona profila

50 000 profila uzoraka sa MKD godinje

Obrada istih lokusa u razliitim zemljama

Omoguava meunarodnu saradnju

Formiranje Agencije za voenje DNK registra

Nekoliko DNK baza podataka
DNK profili dobijeni analizom biolokih tragova koji se

pronau na mestu zloina

DNK profil svih ljudi koji su pravosnanom sudskom
presudom osueni na zatvorske kazne zbog uinjenih
odreenih krivinih dela

Poreenje forenzike baze sa njom samom

Potencijalna veza izmeu dva ili vie sluaja
Identitet potencijalnih prestupnika
Nacionalni DNK registri od izuzetnog znaaja za
svaku dravu
Meunarodna saradnja

Belgija
Osueni za teka krivina dela

Velika Britanija
Osumljieni i osueni za sva krivina dela i veinu

prekraja, dobrovoljci

vajcarska
Osueni na zatvorske kazne

1.

Profili osuenih prestupnika

Za sve zloine ili za posebno oznaene zloine
Za sve ili samo za odreene duine kazne
Sa presudom i specifinim sudskim nalogom ili bez ovih

dokumenata
2.

Profili osumnienih
Bilo koje krivino delo ili samo odreena

Britanska baza DNK podataka sadri podatke 5 000

000 graana (8% stanovnitva)
Rutinska hapenja

Crnaka baza DNK podataka

Specijalna Komisija trai od Vlade da izvri reviziju

baze podataka

Od 5 000 000 ljudi u Britanskoj DNK bazi podataka,

oko 860 000 nema policijski dosije
Da li treba izbrisati DNK profil iz baze podataka ukoliko se

dokae da je osoba nevina?

Povodom odluke donete 2008. godine u Evropskom sudu za
ljudska prava, Velika Britanija 2009. godine brie ~800 000
DNK profila iz svoje baze podataka

1.

Profili osuenih prestupnika

Neograniena duina
Do smrti osuenog

Do isteka dodeljene kazne

2.

Profili osumnjienih/uhapenih
Uklanjanje nakon oslobaajue presude ili odbacivanja optubi

Kako tretirati bioloki materijal iz koga je dobijen

DNK profil?
Bioloki uzorak se u nekim zemljama unitava nakon
analize
Belgija
Danska

NARANDASTO - DA, BELO - NE,

UTO - NE POSTOJE PODACI

188 zemalja lanica

INTERPOLA veina
radi forenziku analizu
DNK

LJUBIASTO - DA, BELO - NE,

UTO - NE POSTOJE PODACI

INTERPOL - DNK BAZE PODATAKA

54 zemlje - postoji DNK baza

29 zemalja - DNK baza je u fazi formiranja

Policija zemalja lanica unosi DNK profile prestupnika,

sa MDK, nestalih lica, neidentifikovanih tela
Kreirana 2002. godine
Preko 82 000 DNK profila (kraj 2008. godine)

Colin Pitchfork je prvo vetaenje metodom DNK

Velika Britanija (1987)
Rasvetljena ubistva i silovanja dve devojke pomou DNK

profila (ne uz pomo krvnih grupa)

Srbija
Prva vetaenja 1997. godine

Ubistva
Silovanja
Teki sluajevi razbojnitva i razbojnikih kraa
Teka dela protiv bezbednosti javnog saobraaja
Krivina dela protiv opte sigurnosti ljudi i imovine

2002. godine u Zakonik o krivinom postupku SRJ se

uvode bioloka vetaenja
Republika Srbija preuzima odreene odredbe ovog
Zakonika, ali nedostaju odredbe koje se specifino
odnose na bioloka vetaenja

Putem krvnih grupa (pouzdanost 80-99 %)

DNK analize
Neroene dece

2. mesec trudnoe uzorci iz horionskih upica

Poodmakla trudnoa uzorci iz amniona ili fetalne krvi
Roene dece
Bukalni bris
Dlake
Krv

Poreenje DNK profila deteta i potencijalnog oca

Utvrivanje oinstva na bazi DNK analiza 15 genetskih
lokusa

Porast preciznosti
rezultata

Oinstvo nije iskljueno

Oinstvo jeste iskljueno