UNIVERSIDAD DEL CAUCA

FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES EXACTAS Y DE LA EDUCACIÓN

DEPARTAMENTO DE QUÍMICA
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA I MACROMOLÉCULAS

Práctica # 6
Pruebas para Carbohidratos
1. INTRODUCCIÓN
Los carbohidratos contienen los grupos funcionales hidróxidos o cetonas
potenciales. Existen varias pruebas para caracterizar a los azúcares específicos
dependiendo de las propiedades fisicoquímicas de los mismos.
Las pruebas que se proponen para esta práctica, deben realizarse con algunos
productos comerciales conocidos que contengan entre 1 y 10 g/L de
carbohidrato. Se utilizarán mezclas problema comestibles tales como jugos de
frutas, miel y papas, además de soluciones de azucares específicos.

2. OBJETIVOS.
2.1. Reconocer la presencia o ausencia de carbohidratos en una muestra
problema a través de la ejecución de reacciones características de
carbohidratos.

3. CONSULTAS PRELIMINARES
3.1. Que indica el término azúcar reductor.
3.2. ¿Que pruebas se espera, sean positivas para este tipo de carbohidratos?
3.3. Consultar las frases R y S de los reactivos a manipular en la práctica
3.4. Consultar las fichas de seguridad de los reactivos a manipular en la
práctica.
3.5. Escribir todas las reacciones químicas que se presenten durante la
práctica.
3.6. Escriba como se realiza y en que consiste la prueba de ozasonas

4. MATERIALES
MATERIAL CANTIDAD
Pipeta graduada de 5 mL 2
Pipeta graduada de 1 mL 1
Vaso de precipitados de 250 mL 2
Vaso de precipitados de 100 mL 1
Varilla de vidrio 1
Tubos de ensayo 20
Gradilla 1
Pinza de madera 1
Goteros 3
Propipeta 2
Termómetro 1
Frasco lavador 1
Trípode 1
Mechero 1
Malla de asbesto 1

Fecha de
Elaborado por: Revisado Por: Aprobada por:
Aprobación:
Mag. Carlos F. Sánchez Ec. CARLOS VALLEJO
Dr. Ricardo Benítez Benítez Responsable del Área Presidente Comité Técnico
Dr. Luis Alberto Lenis V. Comité de Plan del Dpto Química Ambiental Enero 2007
Mag. Efrén Giraldo Comité Desactivación Residuos Mag. DANILO R. VIVAS
Químicos Rector
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DEPARTAMENTO DE QUÍMICA
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA I MACROMOLÉCULAS

5. REACTIVOS*
SUSTANCIAS CANTIDAD
Solución patrón de carbohidratos: Glucosa, Fructosa, Lactosa,
Maltosa, Ribosa, Galactosa, Sacarosa, 2 muestras problemas: Al 100 mL c/u
1%.
Almidón al 1% 50 mL
Jugo de frutas recién elaborado o comercial (de color claro) 10 mL
Agua destilada 1 galón
Reactivo de Molish 10 mL
Reactivo de Bail 30 mL
Reactivo de Barfoed 80 mL
Reactivo de Seliwanoff 80 mL
Reactivo de Benedict 100 mL
Solución de yoduro (0.01M de I2 y 0.12M de KI). 10 mL
*Remitirse al manual de protocolo de riesgo/ seguridad y fichas técnicas de
seguridad.

6. EQUIPOS
EQUIPOS CANTIDAD
Agitador mecánico (vortex) 2
Plancha de calentamiento 1

7. METODOLOGÍA

7.1. Prueba de Molish

Añadir 1 mL de cada una de las soluciones de carbohidrato a tubos de ensayo
rotulados y posteriormente agregar 2 gotas del reactivo de Molish a cada tubo.
Cuidadosamente agregar 0.5mL de H2SO4 concentrado a través de las paredes
de los tubos, de tal forma que el ácido forme una capa por debajo de la
solución del carbohidrato. Un color rojo violeta en la interfase entre el ácido y
la solución acuosa indica una prueba positiva para carbohidratos.

7.2. Prueba de Seliwanoff

Añadir 1 mL del reactivo de Seliwanoff a 0.5 mL de las soluciones de
carbohidrato en tubos de ensayo debidamente rotulados. Mezclar y colocar los
tubos en un baño de agua hirviendo por 4 minutos. Un color rojo intenso es
prueba positiva para cetohexosas. El color es más fuerte si se continúa
calentando, pero en éste caso las aldohexosas también darán color rojo. La
prueba también es positiva para sacarosa, indique en su informe por que. Un
color verde índica una prueba (+) para pentosas.

Fecha de
Elaborado por: Revisado Por: Aprobada por:
Aprobación:
Mag. Carlos F. Sánchez Ec. CARLOS VALLEJO
Dr. Ricardo Benítez Benítez Responsable del Área Presidente Comité Técnico
Dr. Luis Alberto Lenis V. Comité de Plan del Dpto Química Ambiental Enero 2007
Mag. Efrén Giraldo Comité Desactivación Residuos Mag. DANILO R. VIVAS
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7.3. Prueba de Bial o de Orcinol

Añadir 1 mL de reactivo de Bial a 0.5 mL de las soluciones de carbohidrato en
tubos de ensayo debidamente rotulados. Mezclar y calentar suavemente los
tubos en un mechero hasta que la solución comience a hervir. Dejar enfriar
ligeramente el contenido. Agregar 5 mL de agua y mezclar.
Finalmente, añadir 0.5 mL de alcohol butílico (1- butanol), mezclar bien, dejar
reposar y examinar la capa de alcohol butílico. Un color amarillo oscuro es
prueba positiva para hexosas y verde oliva positiva para pentosas.
7.4. Prueba para azucares reductores. Reacción de Benedict.
A 2 mL del reactivo de Benedict añadir 8 gotas de la solución de la muestra de
carbohidrato en tubos de ensayo debidamente rotulados. Mezclar y calentar la
solución en un baño de agua hirviente durante 5 minutos. Un precipitado
verde; amarillo o rojo, indica resultado positivo para azúcares reductores. Los
diferentes colores que pueden aparecer se deben al tamaño de las partículas
formadas: Las partículas grandes forman precipitados rojo y las partículas
pequeñas un precipitado verde.
7.5. Prueba de yodo para polisacáridos
Añadir 2 gotas de solución de yoduro a 1 mL de la solución de carbohidrato en
tubos de ensayo debidamente rotulados. Mezclar. ¿Qué indica un color azul o
rojo oscuro en la muestra? Es conveniente comparar con un blanco que
contenga agua y solución de yoduro.
7.6. Prueba de Barfoed
A 1 mL de reactivo de Barfoed agregar 0.5 mL de solución de carbohidrato en
tubos de ensayo debidamente rotulados y mezclar. Poner los tubos en baño de
agua hirviendo por exactamente un minuto. Remover y luego dejar reposar a
temperatura ambiente. El tiempo de reacción es fundamental, debido a que el
reactivo reaccionará con monosacáridos y disacáridos, pero en el caso de los
monosacáridos la reacción será más rápida. El calentamiento prolongado puede
dar reacciones falsamente positivas ¿por qué?
Examinar el color y la cantidad de precipitado obtenido. Una pequeña cantidad
de precipitado no es prueba positiva.
8. OBSERVACIONES, CÁLCULOS Y RESULTADOS
Tabla I. Registro de pruebas colorimétricas para la identificación de carbohidratos.
Pruebas
Carbohidratos
Molish Seliwanoff Bial Benedict Polisacaridos Barfoed
Almidón
Sacarosa
Glucosa
Galactosa
Ribosa
Fructosa
Muestra Problema 1
Muestra Problema 2
Indicar coloración, y si es + (prueba positiva) ó – (prueba negativa)
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Observaciones
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9. PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS
9.1. ¿Por qué la fructuosa da una prueba positiva con el reactivo de Benedict
el cual es específico para azucares reductores?
9.2. ¿Por qué se dice que la maltosa y la lactosa tienen un grupo aldehído
potencial?
9.3. ¿Por qué el glucógeno y el almidón dan resultados negativos como
azucares reductores?
9.4. Explique por que en la prueba de Barfoed los disacáridos reaccionan más
lentamente que los monosacáridos.
9.5. ¿Qué se deduce de la solubilidad del ácido glucosacárido?

10. RECUPERACIÓN, DESACTIVACIÓN Y/O ALMACENAMIENTO

TEMPORAL DE LOS RESIDUOS QUÍMICOS
10.1 RECUPERACIÓN
No aplica
10.2 DESACTIVACIÓN
No aplica
10.3 ALMACENAMIENTO TEMPORAL
Los residuos generados en el procedimiento 7.1 deben depositarse en el
recipiente para ácidos y bases, los generados en 7.2 y 7.5 en el recipiente de
hidrocarburos no halogenados, los del 7.3 en el recipiente para solventes
orgánicos y los residuos de la pruebas 7.4 y 7.6 deben depositarse en el
recipiente de agroquímica.

11. BIBLIOGRAFÍA
 LOZANO, J. A and TUDELA, J.; “Practicas de Bioquímica:
Experimentación y simulación” 1ed Ed Síntesis, Madrid, 1989. ISBN:
84-7738-027-9
 PLUMMER, D. T. "Bioquímica Practica" 2da. Ed. Mc Graw-Hill
Latinoamericana, Bogotá, 1981. ISBN: 968-451-054-3.

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Aprobación:
Mag. Carlos F. Sánchez Ec. CARLOS VALLEJO
Dr. Ricardo Benítez Benítez Responsable del Área Presidente Comité Técnico
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