Conceptos y Técnicas de La Biotecnologia Animal

Biotecnologa en reproduccin animal
Lino Baraao
Cambiado con la DEMO VERSION de CAD-KAS PDF-Editor (http://www.cadkas.com).
Curso 2011
Agrobiotecnologa
Departamento de Fisiologa, Biologa Molecular y Celular

Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Universidad de Buenos Aires
Biotecnologa
en reproduccin
animal
Introduccin
Inseminacin artificial
Agrobiotecnologa
Sumario
Superovulacin / Transferencia de embriones

Produccin de embriones in vitro
Micromanipulacin
Criopreservacin
Aplicacin a diferentes especies animales

Conclusiones
Referencias
Biotecnologa
en reproduccin
animal
Agrobiotecnologa
Introduccin
La capacidad
reproductiva
de las
hembras
es limitada
En la mayora de las especies domsticas

existen entre 300.000 y 500.000 ovocitos por
ovario en el momento del nacimiento.
El ciclo estral en bovinos tiene una duracin de
21 das.
En bovinos se produciran 17,4 ovulaciones
por ao y 261 ovulaciones en 15 aos.
La capacidad reproductiva de la hembra bovina
es menor en comparacin a su potencial.
Agrobiotecnologa
Biotecnologa
en reproduccin
animal
La biotecnologa de la reproduccin est

fundamentalmente orientada a aumentar la
capacidad reproductiva de las hembras.
Biotecnologa
en reproduccin
animal
Ovario
Agrobiotecnologa
Ovognesis
y desarrollo
folicular
Folculo Terciario
Folculo Primario
Folculo
Terciario
Folculo Secundario
Folculo atr sico
Epitelio germinal
Cuerpo
hemorrgico
Cue rpo lteo
Cuerpo blanco
Crecimiento Folicular
Independiente de gonadotrofinas
Folculo preantral
Folculo en
crecimiento
Folculo antral temprano
Reclutamiento
inciado por FSH
Control
intraovrico
Control
gonadotrofinas
Folculo
ovulatorio
Folculos
primordiales
Adaptado de: Senger. Pathways to pregnancy and parturition, 1997.
Zona pelcida
Ovocito
Ncleo
Ovocito
Clulas de la granulosa
Microscopa
electrnica de
barrido de un
folculo antral
Biotecnologa
en reproduccin
animal
Agrobiotecnologa
Clulas de la granulosa
Esquema de
un folculo
antral
Folculo
antral
Hipfisis
Progesterona
FSH
LH
Folculo
CL
Ovario
Inhibina
Estradiol
GnRH
Agrobiotecnologa
Hipotlamo
Biotecnologa
en reproduccin
animal
El ciclo estral est regulado por el eje hipotlamo-hipfiso-gonadal
Control
hormonal del
ciclo estral
- Progestgenos
CA
Progesterona
FSH
Atresia
Ovulacin
Estradiol
PGF2
LH
Biotecnologa
en reproduccin
animal
Agrobiotecnologa
Ciclo estral
CL
CL
- Prostaglandina F2 alfa
Sincronizacin de celos
Ciclo estral y
sincronizacin
de celos
Dimetro de los folculos (mm)
Dinmica folicular
18
16
14
12
10
8
6
4
2
Folculo
ovulatorio
Lutelisis
Onda anovulatoria
Onda ovulatoria
10 12 14 16 18 20 22
Das del ciclo estral
Sincronizacin de onda folicular y ovulacin: GnRH, estradiol
Agrobiotecnologa
Biotecnologa
en reproduccin
animal
Dimetro de los folculos (mm)
Dinmica
folicular
durante el
ciclo estral
y control de
las ondas
foliculares
18
16
14
12
10
8
6
4
2
GnRH
PF2
Folculo
ovulatorio
10 12 14 16 18 20 22
Das del ciclo estral
Biotecnologa
en reproduccin
animal
Agrobiotecnologa
Biotecnologa
en reproduccin
animal
Agrobiotecnologa
La
inseminacin
artificial es
la tcnica
reproductiva
mas difundida
Tcnica de
inseminacin
artificial en el
ganado bovino:
- Simple
- De bajo costo
- Efectiva
Oviducto
Vagina
Cervix
tero
102
Sitio de
fertilizacin
Unin tero-tubal
107
105
103
Gradiente en el nmero de espermatozoides viables

despus del servicio en el tracto genital de la hembra
Ventajas y
aplicaciones
de la
inseminacin
artificial
Aumento del progreso gentico

- Aumento de la eficiencia de estimacin del valor
. gentico (ensayo de progenie)
- Uso intensivo de un macho de alto valor gentico
- Rpida difusin de la gentica superior
Control de enfermedades venreas

Eliminacin de costos asociados al toro
Uso de machos incapacitados
Agrobiotecnologa
Biotecnologa
en reproduccin
animal
Transporte y conservacin prolongada

de material gentico
Utilizacin de semen sexado
Centros de
coleccin de
semen
frica
Produccin de semen en el ganado bovino
Toros
Dosis
producidas
frescas
Dosis
producidas
congeladas
18
646
55.204
1.484.850
Norteamrica
69
9.627
Sudamrica
71
530
Lejano Oriente
188
9.228
8.874.920
63.938.027
Oriente Medio
17
268
16.794
2.559.640
Europa
239
19.803
2.694.903
115.176.785
Total
602
40.102
11.641.821
232.347.071
Regin
43.270.500
5.917.269
Adaptado de: Vishwanath, Theriogenology, 2003.
Diferencia
X-Y (%)
Humana
2,8
Porcina
3,6
Equina
3,7
Bovina
3,8
Canina
3,9
Ovina
4,2
Especie
Inseminacin artificial con semen sexado
Adaptado de: Johnson and Welch,

Theriogenology, 1999.
Produccin animal
Animales de compaa
Posibles
usos del
semen
sexado
Deportes (perros, caballos)

Investigacin
Animales transgnicos
Medicina humana
Agrobiotecnologa
Biotecnologa
en reproduccin
animal
- Enfermedades genticas ligadas al sexo

- Eleccin del sexo
El uso de
semen
sexado para
inseminacin
artificial de
bovinos es
an limitado
Alto costo de la tecnologa
- Utilizacin de semen fresco (no criopreservado)

- Separacin de 1x107 espermatozoides de cada
sexo por hora con una pureza de 90%
- Equipamiento costoso
Menor fertilidad
- Dosis de inseminacin reducidas (2x106)

- Espermatozoides con reducida fertilidad
Utilizacin de semen sexado

Agrobiotecnologa
Biotecnologa
en reproduccin
animal
- Test de progenie
- Aumento de la presin de seleccin
- Asociado con otras tecnologas (superovulacin y
transferencia de embriones, fertilizacin in vitro)
Biotecnologa
en reproduccin
animal
Agrobiotecnologa
Superovulacin / Transferencia de
embriones
La superovulacin y transferencia de embriones permite incrementar

la tasa reproductiva de hembras de alto valor gentico
Donante
Superovulacin
Sevicio natural
o inseminacin
artificial
Recuperacin
de embriones
Receptoras
Transferencia
de embriones
Cras de la
donante
Biotecnologa
en reproduccin
animal
Hormonas utilizadas:
Agrobiotecnologa
Las respuestas a
los tratamientos
superovulatorios
son muy variables
Gonadotrofinas extradas de la hipfisis

de porcinos u ovinos (pFSH y oFSH)
- Relacin FSH/LH variable
- Vida media corta, mltiples aplicaciones
- Riesgo de Encefalopata Espongiforme
Bovina (EEB)
Gonadotrofina de yegua preada (eCG)
- Vida media larga, anticuerpos anti-eCG
Gonadotrofina de la menopausia humana
(hMG)
- Alto costo
FSH y LH recombinante
- Alto costo
Da 5
Da 4
Da 2
Da 6-8
Da 1
Da 0 = Celo
Da 3
Desarrollo y trnsito embrionario en el tracto genital
Embriones bovinos da 8
Embriones bovinos da 4
Morfologa embrionaria
Tomado de: Lattanzi et al., Biol. Reprod., 2003.
Biotecnologa
en reproduccin
animal
Agrobiotecnologa
Catter de 3 vas
Circuito cerrado con flujo continuo
La recoleccin
de embriones
se realiza por
medios no
quirrgicos
Catter de 3 vas: flujo continuo

Entrada de fluido Crvix
Salida de fluido
Vagina
Biotecnologa
en reproduccin
animal
Entrada de fluido
(1o va)
Entrada de aire
(2o va)
Salida de fluido
(3o va)
Catter de 2 vas: flujo discontinuo
Entrada y salida de fluido
Agrobiotecnologa
Instrumental
utilizado para
la recoleccin
no quirrgica
Baln con aire
Entrada y salida de fluido

(1o va)
Entrada de
aire
(2o va)
Biotecnologa
en reproduccin
animal
Agrobiotecnologa
Blastocistos en diferentes estadios

Bsqueda de embriones
Lavado de los filtros
Filtro para
retener embriones
Bsqueda y
evaluacin de
los embriones
en el
laboratorio
zona pelcida
C
Lavado de
embriones
C
B
A
Biotecnologa
en reproduccin
animal
Agrobiotecnologa
Embriones no
aceptables
patgeno
Interaccin
patgenoembrion
Manejo
sanitario
de los
embriones
Catter y puntas
plsticas estriles
descartables.
(Minitb, Alemania)
Pajuelas (0,25 ml) empleadas

para la transferencia (Mintb,
Alemania).
Catter de transferencia metlico (Mintb, Alemania)

Cargado de la pajuela empleada para la transferencia
Algodn
Medio de
cultivo
Aire
Transferencia no quirrgica de embriones
Aire
Embrin en medio
de cultivo
Medio de
cultivo
Aumento del progreso gentico

- Aumento de la presin de seleccin
- Reduccin del intervalo generacional
- Difusin de la mejora gentica
Control de enfermedades
Importacin-exportacin
Agrobiotecnologa
Biotecnologa
en reproduccin
animal
Aplicaciones
de la
transferencia
de embriones
Conservacin de especies en peligro

de extincin
Biotecnologa
en reproduccin
animal
Agrobiotecnologa
Biotecnologa
en reproduccin
animal
Agrobiotecnologa
Produccin
de embriones
in vitro
Ovarios de matadero
Recoleccin de ovocitos
Animales vivos (OPU)

Maduracin in vitro
Fertilizacin in vitro
Cultivo in vitro
Transferencia de embriones
Descongelado y
capacitacin de los
espermatozoides
Criopreservacin
Recoleccin de los ovocitos
Obtencin de ovocitos a partir de animales sacrificados

para consumo
- Progreso gentico mnimo

- Garanta sanitaria escasa
- Uso en Investigacin
Lavado de ovarios
Aspiracin de los folculos antrales
Complejos cmulus-ovocito
24 h
24hs
Reinicio de la meiosis
Metafase II
10-12 h
Metafase I
10-12 h
CP
Vesicula germinal
Expansin del cmulus
Maduracin nuclear y maduracin citoplasmtica
Inhibidor de
la meiosis
Inhibidor de
la meiosis
Maduracin nuclear: reinicio de la meiosis
MAPKinasa
Ovulacin Fertilizacin
Vescula Ruptura de la
germinal vescula germinal
Pico preovulatorio
de LH
MPF
Remocin
del ovocito
del folculo
1er Cuerpo
Metafase I polar
Metafase II
Evolucin de los niveles de MPF y MAP-quinasa.
Despus de la
centrifugacin
Diluyente
Semen
45%
Percoll
Espermatozoides no
motiles
90%
Percoll
Espermatozoides
motiles
Coincubacin
de ovocitos y
espermatozoides
Gradiente de Percoll
Antes de la
centrifugacin
Fertilizacin in vitro
Biotecnologa
en reproduccin
animal
Agrobiotecnologa
Activacin
del ovocito
y bloqueo
espermtico
Fertilizacin, descondensacin de la cromatina

y formacin de proncleos
2do CP
1er CP
1er CP
Segregacin de
cromosomas homlogos
Descondensacin de
la cabeza del espermatozoide
Espermatozoide
descondensndose
en el citoplasma
Proncleos
2do CP
1er CP
Formacin de
proncleos y singamia.
1er y 2do CP
1er CP
Espermatozoide que no
penetr la zona pelcida
Proncleos
Embrin de
4 - 8 clulas
Blastocisto
expandido
Blastocisto
protrudo
Mrula
Embrin de
2 clulas
Estadio
pronuclear
Desarrollo de embriones in vitro
Los ovocitos fertilizados se cultivan in vitro por 8 das
Sistemas
para el
cultivo de
embriones
in vitro
Co-cultivo: relacionado a altos ndices de anormalidades

. al nacimiento (mayor tamao, distocia, malformaciones).
- Concentracin de O2: 20%
- Medio de cultivo: TCM-199 o Menezos B2 + suero fetal

. bovino (SFB)
- Lneas celulares: Vero; BRL
- Cultivos primarios: clulas de la granulosa; clulas

. oviductales
Medios Definidos: mayores tasas de desarrollo, menor

. mortalidad perinatal y porcentaje de malformaciones.
. Mayor reproducibilidad.
Agrobiotecnologa
- Concentracin de O2: 5%
Biotecnologa
en reproduccin
animal
- Medio de cultivo: SOF (Synthetic Oviductal Fluid) .

. + aminocidos + seroalbmina bovina (BSA)
Los embriones
producidos
in vitro
son menos
viables que
los producidos
in vivo
Caractersticas de los embriones producidos

in vitro:
- Menor viabilidad
- Mayor sensibilidad al enfriamiento y criopreservacin

- Mayor cantidad de lpidos
- Uniones intercelulares anormales
- Menor nmero de clulas
- Menor proporcin de clulas en el macizo celular interno

- Mayor incidencia de anormalidades cromosmicas
Agrobiotecnologa
Biotecnologa
en reproduccin
animal
- Menor tasa de preez despus de la transferencia

- Mayores prdidas fetales durante la gestacin
Puncin folicular (Ovum Pick-Up; OPU)
Obtencin de ovocitos a partir de animales vivos

Dispositivo de OPU
Tubo interno
de acero del
sistema de
gua
Transductor
Aguja 19-G
Tubo de acero
Conector
de acero
Fijacin
del ovario Ovario
Aguja
Tubo de
silicona
Pared rectal
Bomba
de vaco
Mango
Tubo de
acero
Transductor
Pared vaginal
Dispositivo de OPU
Cervix
Adaptado de: Bols et al., Theriogenology, 1995.
Ecgrafo
Investigacin bsica:
Aplicaciones
de la
produccin
de embriones
in vitro
- Produccin de embriones en diferentes estadios de

. desarrollo a bajo costo a partir de ovarios de animales
. sacrificados para consumo
Aplicaciones comerciales:
- Produccin de mayor nmero de embriones

- Menor intervalo generacional por uso de animales
. prepberes (OPU)
- Obtencin de embriones de vacas preadas (OPU)
- Obtencin de embriones de vacas que no pueden ser
. superovuladas y/o con problemas reproductivos (OPU)
- Obtencin de embriones de animales muertos
Agrobiotecnologa
Biotecnologa
en reproduccin
animal
Base para el desarrollo y/o aplicacin

. de otras tcnicas:
- Clonacin
- Produccin de animales transgnicos
Biotecnologa
en reproduccin
animal
Agrobiotecnologa
Micromanipulacin
Tomado de: Palma, Biotecnologa de la

Reproduccin, INTA (Argentina), 2001.
Apertura de
la zona
pelcida
para extraer
al embrin.
Divisin de
una mrula
fuera de la
zona
pelcida.
Hemiembriones
despus de
la divisin.
Produccin de mellizos por microciruga
Unidad de micromanipulacin
Tomado de: Palma et al., Rev. Arg. Med. Vet.,1991.
Mellizos idnticos producidos por

microciruga
PCR
Blastmero
Biopsia y sexado
Micropipeta
Ovocito maduro
(metafase II)
Inyeccin intracitoplasmtica de espermatozoide

(Intracitoplasmic Sperm Injection; ICSI).
Micropipeta
Proncleo
Ovocito fecundado
Inyeccin pronuclear
Enucleacin
Clula donante
Transplante nuclear
Ovocito en MII
Transplante nuclear
Clulas inyectadas
Micropipeta
Blastocisto
Produccin de quimeras por agregacin

de clulas a un blastocisto
Biotecnologa
en reproduccin
animal
Agrobiotecnologa
Criopreservacin
Vitrificacin
Estabilizacin
Temperatura (oC)
25
-7
-30
-196
15
Tasas de enfriamiento para diferentes

sistemas de criopreservacin
Congelamiento gradual
Seeding
0,3 0,6 oC/min
2.500 20.000 oC/min
25
Tiempo (minutos)
90
Adaptado de: Palma, Biotecnologa de la Reproduccin, INTA (Argentina), 2001.
Caractersticas de los mtodos de criopreservacin

Congelamiento Gradual
- Formacin de cristales de hielo

- Baja concentracin de crioprotectores: mayor
. probabilidad de dao por enfriamiento
- Alto costo: equipo para el descenso controlado
. de la temperatura
Equipo para enfriamiento controlado
Vitrificacin
- No hay formacin de cristales de hielo

- Alta concentracin de crioprotector: mayor
. probabilidad de dao osmtico y por toxicidad
- Bajo costo: enfriamiento directo en N2 lquido
Refrigeracin
- Enfriamiento a 4 oC por 24 a 72 h
Termo de nitrgeno lquido
Descongelamiento: mtodo de transferencia directa

Tapn algodn
Solucin extractora del

crioprotector
Tapn algodn
Solucin
extractora del
crioprotector
Embrin en
solucin con
crioprotectores
Aire
Aire
Embrin en solucin
con crioprotectores
Sellado
Solucin extractora del

crioprotector
Crioprotectores permeables:
- Glicerol
- Dimetilsulfxido (DMSO)
- Propilenglicol
- Etilenglicol
Crioprotectores impermeables:
- Sacarosa
- Trealosa
- Glucosa
- Rafinosa
Embriones bovinos transferidos en el ao 2002

Embriones producidos in vivo
Continentes
Embriones producidos in vitro
Frescos
Congelados
Total
Frescos
Congelados
Total
Africa
5.557
8.785
14.342
(2,7%)
97
101
Amrica del
Norte
89.472
99.652
189.124
(34,7%)
464
30
494
Amrica del
Sur
73.952
45.166
119.118
(22,2%)
46.630
2.040
48.670
Asia
39.375
53.037
92.412
(17,2%)
13.859
8.968
22.827
Europa
41.753
48.618
90.371
(16,8%)
5.952
5.191
11.143
Oceana
17.631
15.314
32.945
(6,4%)
42
52
94
Total
267.740
(48%)
270.572
(52%)
538.312
66.951
16.378
83.329
Adaptado de: Data Retrieval Committee Annual Report, IETS, 2003.
Conclusiones:
aplicaciones
biotecnolgicas
a la reproduccin
de animales
Inseminacin artificial y congelacin de semen

- Control de enfermedades de transmisin sexual
- Aumento de la eficiencia de estimacin del valor gentico
. (ensayos de progenie)
Sincronizacin e induccin de la ovulacin

- Aumento de la eficiencia de la produccin de terneros
- Aumento de la eficiencia del manejo productivo y reproductivo
Superovulacin, transferencia y criopreservacin de

. embriones
Agrobiotecnologa
Biotecnologa
en reproduccin
animal
- Uso intensivo de hembras de alto valor gentico

- Rpida difusin de gentica superior: transporte y
. comercializacin alrededor del mundo a bajo costo
- Sanidad Animal: importacin de embriones libres de patgenos
- Recuperacin mas eficaz de individuos exticos y razas en
. peligro de extincin
- Conservacin in vitro por tiempo indefinido de una amplia
. variedad de especies mamferas
Sexado de espermatozoides y embriones

- Produccin de descendencia del sexo deseado
Produccin in vitro de embriones
- Uso mas intensivo de hembras de alto valor gentico

- Utilizacin de hembras que no pueden ser superovuladas
- Produccin de embriones con ovarios de matadero
Micromanipulacin
Agrobiotecnologa
Biotecnologa
en reproduccin
animal
Conclusiones:
aplicaciones
biotecnolgicas
a la reproduccin
de animales
- Produccin de mellizos idnticos para investigacin o aumentar

. la eficiencia de los programas de transferencia de embriones
- Clonacin por transferencia nuclear, inyeccin pronuclear o
. produccin de quimeras para generar organismos transgnicos
- Inyeccin intracitoplasmtica de espermatozoides en especies
. en las que no es factible la fertilizacin in vitro
Biotecnologa
en reproduccin
animal
Agrobiotecnologa
Aplicaciones a diferentes especies

animales
Biotecnologa aplicada a la reproduccin de porcinos

- IA: Inseminacin artificial convencional en el cervix (3x109 espermatozoides)

- IIU: Inseminacin intrauterina en el cuerpo del tero
- IIUP: Inseminacin intrauterina profunda a 2/3 de la distancia entre el cervix

. y la unin tero-tubal (UUT) (50x106 esperm.)
Cuerpo del tero
Cuerno uterino
25 cm de
la UUT
3. IIUP
18-20 cm del cervix
2. IIU
Ovario
13-15 cm
Canal cervical
Unin
terotubal
(UUT)
1. IA
Adaptado de: Belstra, Annual Swine Report, 2002.
Tracto
reproductivo
de una
cerda
Instrumental
para
inseminacin
intrauterina
Deteccin de celo
Inseminacion artificial
Control hormonal de estro y ovulacin

- Una sola inseminacin por hembra
- Inseminacin a tiempo fijo
- Disponibles: PG600 (Intervet ,Inc.)
- No aprobados: Progestagenos, GnRH, eCG, hCG
Transferencia de embriones:
- Quirrgico
- Endoscopa
- No quirrgico: trasncervical
Colecta de embriones: quirrgica
- Por ciruga o posterior al sacrificio
Transferencias de embriones en cerdos en 2002

Pases
Lavajes
Embriones
transferibles
Hembras
recipientes
Canada
129
2.405
43
Corea
30
505
12
Europa
105
2.098
85
USA
----
----
80
Total
264
5.008
176

Sistemas de produccin de
. embriones in vitro
- Uso comercial: aumento del progreso
. gentico, transporte del material gentico
. a bajo costo y con bajo riesgo sanitario.
- Investigacin bsica.
- Investigacin con propsitos biomdicos:

. xenotransplante de tejidos/rganos,
. transgnicos.
Problemas del sistema:
Maduracin in vitro:
- Maduracin nuclear: FSH, LH

- Maduracin citoplasmtica: EGF, clulas del
. cmulus, cistena.
Fertilizacin in vitro:
- Variabilidad del semen: fresco, criopreservado
- Contenido de glutatin.
- Factores para reducir poliespermia.
- Formulacin de medio de FIV (TALP, mTBM)
- Formacin de proncleo masculino.

- Poliespermia.
Origen de los ovocitos
Cultivo in vitro:
- Modified Whittens medium

- North Carolina State University 23 medium
- Ovarios
- Iowa State University medium
- Tamao de los folculos
- Beltsvile Embryo Culture Medium 3

Criopreservacin de embriones
- Alta sensibilidad a la hipotermia (15oC) debido al alto contenido lipdico

- Vitrificacin: open pulled straw; OPS
Microscopa
confocal de un
embrin porcino
despus de la
criopreservacin
para examinar el
dao en el
citoesqueleto
Biotecnologa aplicada a la reproduccin de equinos

- Semen refrigerado (5 oC por 24-48 h) o congelado (gran variabilidad individual en

. cuanto a tolerancia la congelacin)
Transferencia de embriones (TE)
- Pases lderes: Estados Unidos, Argentina y Brasil (Australia; Canad; Italia;

. Alemania y Francia utilizan la TE en menor medida)
- Limitante para la difusin de la TE: Asociaciones de Criadores
- Recoleccin de embriones de yeguas que ovulan espontneamente: 0,5-1 embrin

. por hembra
- Aplicaciones de la TE: Yeguas viejas con pobre historial reproductivo; yeguas en
. competencia (carrera, polo, etc.)
Superovulacin
- No existe producto comercial para superovular yeguas: Las hormonas eCG, GnRH y
. FSH porcina no son activas. Extracto de pituitaria equina (EPE) aumenta 3-4 veces
. la tasa de ovulacin.
- Aplicaciones de la superovulacin: TE, puncin folicular, fertilizacin in vitro, ICSI,
. criopreservacin.

Criopreservacin
- Refrigeracin y transporte de embriones: se pueden mantener a 5 oC por 24 h

. sin perder viabilidad
- Limitantes de la criopreservacin de embriones: cpsula del embrin
. (membrana proteica acelular); asociaciones de criadores
- Congelacin y vitrificacin de ovocitos
Blastocisto temprano
Blastocele en formacin
Zona Pelcida
Detritos celulares
Blastocisto expandido
Blastocele
Trofoblasto
Macizo celular
interno
100 m
100 m
Cpsula

Recoleccin no quirrgica de embriones
Ovario
Cervix
Recto
Oviducto
Medio
de lavaje
Embriones equinos transferidos en 2002

Pases
Frescos
Argentina
2.500
Brasil
Canad
Entrada
medio
Europa
Vagina
Baln
inflable
Vejiga
Utero
Sudfrica
Estados
Unidos
Aire
Australia
Filtro
Salida
medio
Adaptado de: Aguilar and Woods,

Current Therapy in Large Animal Theriogenology, 1997.
Nueva
Zelanda
Total
Congelados
3.000
20
62
11
71
47
5.000
200
30
15
10.725
234
Adaptado de: Data Retrieval Committee Annual Report,

IETS, 2003.

Produccin in vitro de embriones: fertilizacin in vitro (FIV); inyeccin
. intracitoplasmtica de espermatozoide (ICSI)
- Limitantes de la FIV: maduracin del ovocito y capacitacin espermtica
- Disponibilidad de ovarios de matadero para investigacin limitada: informacin limitada
. sobre sistemas de maduracin, fertilizacin y cultivo in vitro
- ICSI es utilizada como alternativa a la FIV: La inyeccin del espermatozoide evita las
. deficiencias de los sistemas de FIV
Transferencia de ovocitos
- Recoleccin de ovocitos: De folculos preovulatorios (madurados in vivo), o durante el diestro

. (maduracin in vitro)
- Aplicaciones de la transferencia de ovocitos: Infecciones uterinas persistentes; estudios sobre
. maduracin de ovocitos in vitro; como alternativa a la FIV
Transferencia de gametas (Gamete Intrafallopian Tube Transfer; GIFT)

- Transferencia de ovocitos y espermatozoides (200.000) al oviducto.
- Aplicaciones de la transferencia de gametas: En casos de semen limitante (semen sexado,

. congelado, padrillos con bajo recuento espermtico), como alternativa a la FIV
Biotecnologa aplicada a la reproduccin de ovinos y caprinos

Inseminacin Artificial
- Mtodo de inseminacin: vaginal, cervical, transcervical, intrauterina

Inseminacin transcervical
Inseminacin transcervical
con endoscopio
Superovulacin y transferencia de embriones
Inseminacin intrauterina
por laparoscopa
- Alta variabilidad de la respuesta al tratamiento superovulatorio y de

. las tasas de fertilizacin.
- Recoleccin de embriones y transferencia: procedimiento quirrgico
Biotecnologa aplicada a la reproduccin de ovinos y caprinos

- Ovarios de matadero
- Puncin folicular laparoscpica de animales vivos
Criopreservacin
- Congelacin gradual o vitrificacin
- Embriones producidos in vitro son mas sensibles
Embriones de oveja y cabra transferidos en 2002

Embriones
recolectados
Embriones Transferidos:
Frescos
Congelados
Almacenados
Exportados
Ovinos
100.496
83.453
52.433
21.457
19.214
Caprinos
17.921
7.004
9.234
7.843
6.784
Llama (Lama glama)
Vicua (Vicugna vicugna)
Alpaca (Lama pacos)
Guanaco (Lama guanicoe)
Biotecnologa aplicada a la reproduccin

de camlidos sudamericanos
Poblacin de camlidos sudamericanos

en los pases andinos (nmero estimado)
Pas
Guanaco
Argentina
578.700
Bolivia
Chile
54
25.000
Colombia
----
Ecuador
----
Paraguay
53
Vicua
Llama
Alpaca
23.000
135.000
400
12.000
2.022.569
324.336
30.000
70.363
27.585
----
200
----
482
9.687
100
----
----
----
Per
1.600
100.000
989.593
2.510.912
Total
602.907
165.482
3,776.793
2.811.612
Tomado de: Larocca, Transferencia de embriones y biotecnologa, 2001.
Estacionalidad de la actividad
. reproductiva, que es mas marcada en los
. camlidos silvestres (vicua y guanaco)
Ovulacin inducida: 22 a 46 h despus de
. la cpula
Alta mortalidad embrionaria
Blastocistos bovinos da 7
Embrin de llama da 7
Blastocistos reexpandidos 72 h post-descongelacin
Biotecnologa aplicada a la reproduccin

de camlidos sudamericanos
Inseminacin artificial: 30 h despus de

estmulo ovulatorio
- Dificultosa colecta de semen
- Alta viscosidad, baja concentracin
. espermtica, baja motilidad.
- Criopreservacin poco eficiente de semen
Superovulacin y transferencia de
embriones: respuestas muy variables
- Ausencia de fase luteal
- Folculos dominantes por largos perodos
Sistema de produccin de embriones in

vitro: poco desarrollado
- Preez de un embrin vitrificado (2002)
- Mrulas producidas in vitro por transferencia
. nuclear (2003)
- Puncin folicular guiada por ultrasonografa
. (2000)
Hbridos
Biotecnologa
aplicada a la
reproduccin
de bfalos
(Bubalus
bubalis)
Poblacin mundial: 163 millones de cabezas

Produccin importante en regiones pantanosas y anegadizas,
. donde es irremplazable
Baja eficiencia de superovulacin y recoleccin de embriones
Agrobiotecnologa
Biotecnologa
en reproduccin
animal
Desarrollo de sistemas de produccin de embriones in vitro a

. partir de ovarios de matadero o de animales vivos a travs de
. la puncin folicular
En India 124 embriones fueron recolectados in vivo, 78 fueron
. transferidos frescos y 19 congelados en el 2002. Adems 265
. embriones de bfalo estn almacenados
Biotecnologa
aplicada a la
reproduccin
de ciervos
(Cervus
elaphus)
Existen 2,4 millones de cabezas en 4.500 establecimientos.

Altamente estacionales: La actividad ovulatoria comienza en
. otoo, los partos estn sincronizados en el verano.
Agrobiotecnologa
Biotecnologa
en reproduccin
animal
La produccin in vitro de embriones sera la mejor alternativa

. para el uso eficiente del semen recuperado.
En 2002, se colectaron ms de 1.000 embriones; cerca de
. 800 fueron transferidos. Canad report preeces de
. embriones producidos in vitro.
Conclusiones:
aplicaciones
biotecnolgicas
a la reproduccin
de animales
Inseminacin artificial y congelacin de semen

- Control de enfermedades de transmisin sexual
- Aumento de la eficiencia de estimacin del valor gentico
. (ensayos de progenie)
Sincronizacin e induccin de la ovulacin

- Aumento de la eficiencia de la produccin de terneros
- Aumento de la eficiencia del manejo productivo y reproductivo
Superovulacin, transferencia y criopreservacin de

. embriones
Agrobiotecnologa
Biotecnologa
en reproduccin
animal
- Uso intensivo de hembras de alto valor gentico

- Rpida difusin de gentica superior: transporte y
. comercializacin alrededor del mundo a bajo costo
- Sanidad Animal: importacin de embriones libres de patgenos
- Recuperacin mas eficaz de individuos exticos y razas en
. peligro de extincin
- Conservacin in vitro por tiempo indefinido de una amplia
. variedad de especies mamferas
Sexado de espermatozoides y embriones

- Produccin de descendencia del sexo deseado
Produccin in vitro de embriones
- Uso mas intensivo de hembras de alto valor gentico

- Utilizacin de hembras que no pueden ser superovuladas
- Produccin de embriones con ovarios de matadero
Micromanipulacin
Agrobiotecnologa
Biotecnologa
en reproduccin
animal
Conclusiones:
aplicaciones
biotecnolgicas
a la reproduccin
de animales
- Produccin de mellizos idnticos para investigacin o aumentar

. la eficiencia de los programas de transferencia de embriones
- Clonacin por transferencia nuclear, inyeccin pronuclear o
. produccin de quimeras para generar organismos transgnicos
- Inyeccin intracitoplasmtica de espermatozoides en especies
. en las que no es factible la fertilizacin in vitro
Referencias
1. Palma, G.A. Biotecnologa de la Reproduccin. Instituto

Nacional de Tecnologa Agropecuaria (INTA, Argentina), 2001.
2. Gordon, I. Controlled reproduction in cattle and buffaloes.
Centre for Agriculture and Biosciences International (CABI), 1996.
3. Karow, A.M. and Critser, J.K. Reproductive tissue banking.
Academic Press, 1997.
4. Stringfellow, D.A. and Seidel, S.M. Manual of the International
Embryo Transfer Society, IETS, 1998.
5. Larocca, C. Transferencia de embriones y biotecnologa rea
de Biotecnologa de la Reproduccin Animal, Facultad de
Veterinaria, Universidad de la Repblica, Montevideo, Repblica
Oriental del Uruguay. Libro electrnico, 2001.
Agrobiotecnologa
Biotecnologa
en reproduccin
animal

Conceptos y Técnicas de La Biotecnologia Animal

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Biotecnologa en reproduccin animal

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Departamento de Fisiologa, Biologa Molecular y Celular

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Superovulacin / Transferencia de embriones

Aplicacin a diferentes especies animales

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En la mayora de las especies domsticas

La biotecnologa de la reproduccin est

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Cue rpo lteo

Folculo antral temprano

Adaptado de: Senger. Pathways to pregnancy and parturition, 1997.

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El ciclo estral est regulado por el eje hipotlamo-hipfiso-gonadal

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Dimetro de los folculos (mm)

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Das del ciclo estral

Sincronizacin de onda folicular y ovulacin: GnRH, estradiol

Dimetro de los folculos (mm)

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Das del ciclo estral

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Gradiente en el nmero de espermatozoides viables

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Aumento del progreso gentico

Control de enfermedades venreas

Transporte y conservacin prolongada

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Produccin de semen en el ganado bovino

Adaptado de: Vishwanath, Theriogenology, 2003.

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