Biotinidase 活性測定

N-biotinyl-p-aminobenzoate から p-aminobenzoate の遊離を比色法で測定

Mixture
・0.1M PBS (pH6.0)
・10mM EDTA
・150uM biotin-4-aminobenzonic acid
・250ug/ml serum albumin
　　↓
preincubate 37℃, 10m

Mixture 950ul
　　↓　←50ul sample
incubate 37℃, 30m
↓　←100ul 30%TCA（反応停止）
centrifuge 2000g, 10m,
↓
Sup 200ul
↓ 20ul 0.1%NaNO（用事調製）
　　↓ 20ul 0.5%ammonium sulfamate
↓ 20ul 0.1%N-1-naphtyl ethylendiamine hydrochloride
incubate RT, 10m
↓
吸光度測定（550nm）