二次元電気泳動プロコトル→詳細は Invitrogen HP の説明書参照

<試薬>
●Cell dissolution (7M urea, 2M thiourea, 2% CHAPS, 20mM DTT)
Urea/Thiourea/CHAPS 溶液を作製し、分注して冷凍保存
1M DTT も分注して冷凍保存
使用時に Urea/Thiourea/CHAPS 溶液の 1/50 量の１ M DTT（終濃度 20mM）を添加
●0.2%BPB
●10×MOPS SDS running buffer
( 0.5M MOPS, 0.5M Tris-base, 35mM SDS, 10mM EDTA)

<サンプル調整>
Tissue ○mg（微量の場合はマイクロホモゲナイザーを用いる）
　　○l（ml） cell dissolution
homogenize in ice 5s
↓ 　　　5m repeat
10s cool down

15000g, 30m, 4d

Sup→タンパク質定量（BCA assay）

適宜希釈して二次元電気泳動に用いる
タンパク質量 20~100g となるように
例）100g の場合
5l sup（タンパク質濃度 20mg/ml）
145l cell dissolution
2l carrier Ampholytes
2l 0.2%BPB
 <二次元電気泳動>
ZOOM Strip Gel pH3-7NL 膨潤 1 時間以上, RT
↓
等電点電気泳動　IEF ( 200v 20m→450v 15m→750v 15m→2000v 30~45m)

Gel
LDS sample buffer 625ml
Sample reducing agent 0.25ml
蒸留水 で 2.5ml メスアップ
Shaking 15m

Gel
ヨードアセトアミド　56mg
　　 LDS sample buffer 625ml
蒸留水 で 2.5ml メスアップ
Shaking 15m

SDS-PAGE（200v 55m 100mA）

Gel: NuPAGE Bis-Tris 4-12% , Running buffer: MOPS SDS Running buffer

Wash by DDW 5m×3

CBB stain (Simply blue safe stain) 2h

Destain by DDW o/n

あじさい館 C 室でゲルを撮影（USB 持参）