ELEKTROFORESIS

Oleh:
Drs. Hokcu Suhanda, M.Si.

JURUSAN PENDIDIKAN KIMIA UPI

12/07/21 1
 Pembahasan mengenai:
 Pengertian dan jenis
 Kegunaan/manfaat
 Peralatan dan cara kerja
 Pemisahan dengan teknik elektroforesis
 Faktor-faktor yang mempengaruhi
pemisahan
 Kelebihan/kelemahan teknik elektroforesis

12/07/21 2
 Pengertian dan Jenis

a. Pengertian

Elektroforesis adalah suatu teknik

pemisahan/analisis kualitatif suatu zat dengan
bantuan arus listrik.

12/07/21 3
 Pengertian dan Jenis

a. Pengertian

Prinsip pemisahan dalam elektroforesis

didasarkan atas perbedaan migrasi
komponen pada fasa pendukung, karena
adanya perbedaan muatan dan massa
molekul.

12/07/21 4
 Pengertian dan Jenis

b. Jenis-jenis Teknik Elektroforesis

Teknik
TeknikElektroforesis
Elektroforesis
Dibedakan atas Teknik

Konvensional
Konvensional Kapiler
Kapiler
Dibedakan atas Teknik

Frontal
Frontal(moving
(movingboundary): Zonal
boundary): Zonal: :
tak berpendukung
tak berpendukung berpendukung
berpendukung
12/07/21 5
 Pengertian dan Jenis

T.E.F. : konvensional

 Ukuran alat /jumlah cuplikan/fasa pembawa

cukup besar

 Menggunakan arus listrik dengan tegangan

tidak terlalu besar ( beberapa puluh volt
saja)
 Proses lama (lebih dari 0,5 jam)

12/07/21 6
 Pengertian dan Jenis

T.E.F. kapiler :

 Ukuran alat /jumlah cuplikan/fasa pembawa

sangat sedikit/kecil

 Menggunakan arus listrik dengan tegangan

tinggi ( sampai 30.000 volt )

 Proses cepat (kurang dari 0,5 jam)

12/07/21 7
 Kegunaan/Manfaat

Kegunaan / manfaat

 Pemisahan dan analisis senyawa bermuatan

 Pemisahan dan analisis makromolekul seperti

protein, polisakarida, as. Nukleat

 Pemisahan dan analisis campuran senyawa

bermuatan dan tak bermuatan ( untuk E.F.
kapiler)

12/07/21 8
 Peralatan dan cara Kerja

T.E.F. Berpendukung

12/07/21 9
 Peralatan dan cara Kerja

Gambar Alat Elektroforesis

12/07/21 10
 Peralatan dan cara Kerja

Senyawa tidak berwarna dapat dilihat dengan paparan sinar UV

12/07/21 11
 Peralatan dan cara Kerja

Komponen utama alat

1. Larutan elektrolit

2. Zat pendukung

3. Elektroda

12/07/21 12
 Peralatan dan cara Kerja

Komponen utama alat

1. Larutan elektrolit:
Adalah larutan pembawa komponen
umumnya bufer dengan pH tertentu.

12/07/21 13
 Peralatan dan cara Kerja

Komponen utama alat

2. Zat pendukung:
tempat pemisahan terjadi, biasanya berupa
kertas (selulosa asetat, selulosa nitrat), gel
kanji, gel poliakrilamid, busa poliuretan,
agar-agar.

12/07/21 14
 Peralatan dan cara Kerja

Komponen utama alat

3. Elektroda :

katoda dan anoda yang dihubungkan

Dengan arus listrik.

12/07/21 15
 Peralatan dan cara Kerja

Cara Kerja
1. Wadah dijenuhkan dengan larutan elektrolit

2. Cuplikan ditotolkan pada fasa pendukung

3. Pendukung dengan tootolan cuplikan dijenuhkan
dengan uap elektrolit.
4. Ujung-ujung pendukung dicelupkan ke dalam
elektrolit

12/07/21 16
 Peralatan dan cara Kerja

Cara Kerja

5. Kedua elektroda dihubungkan

6. Pemisahan dimulai

7. Hasil pemisahan dihubungkan dengan detektor

untuk keperluan analisis kualitatif dan kuantitatif

12/07/21 17
 Pemisahan dengan Teknik Elektroforesis

Proses Pemisahan

Untuk Melihat Animasi Klik di sini!

12/07/21 18
 Pemisahan dengan Teknik Elektroforesis

Pada fasa
pendukung

Setelah
Melalui
detektor

12/07/21 19
 Pemisahan dengan Teknik Elektroforesis

Perhatikan migrasi komponen berikut ini pada waktu yang sama

Untuk Animasi Klik Di sini!

12/07/21 20
 Pemisahan dengan Teknik Elektroforesis

Latihan Pemahaman Konsep

Jawablah pertanyaan berikut :

1. Pemisahan terjadi karena adanya ………………………

2. Partikel + bergerak ke kutub ………

3. Partikel - bergerak ke kutub ……….

4. Partikel tidak bermuatan bergerak ke kutub ………

Klik disini untuk soal

selanjutnya
12/07/21 21
 Pemisahan dengan Teknik Elektroforesis

5. Laju migrasi partikel dengan Mr kecil ………

daripada partikel dengan Mr besar.

6. Laju migrasi partikel dengan muatan paling besar

bermigrasi ……………….

Bila anda telah dapat menjawab dengan benar teruskan

pada materi berikutnya !

Klik kunci jawaban

12/07/21 22
 Pemisahan dengan Teknik Elektroforesis

Jawaban Soal Latihan

1. Pemisahan terjadi karena adanya perbedaan
migrasi komponen.
2.Partikel + bergerak ke kutub katoda (-).

3.Partikel - bergerak ke kutub anoda (+).

4.Partikel tidak bermuatan (netral) tidak bermigrasi

12/07/21 23
 Pemisahan dengan Teknik Elektroforesis

5.Laju migrasi partikel dengan Mr kecil lebih cepat

daripada partikel dengan Mr besar.

6.Laju migrasi partikel dengan muatan paling besar

bermigrasi paling cepat

Silahkan melanjutkan ke materi berikutnya!

12/07/21 24
 Faktor-faktor yang Mempengaruhi Pemisahan

Faktor yang mempengaruhi pemisahan

dengan ZEF
1. Kemobilan ion/partikel (Ø):
2. Derajat onisasi
3. Pembentukan Kompleks Bermuatan
4. Konsentrasi larutan elektrolit

12/07/21 25
 Faktor-faktor yang Mempengaruhi Pemisahan

1. Kemobilan ion/partikel (Ø):

Perbedaan kemobilan ( Ø) harus besar agar

perbedaan jarak pemisahan besar, sehingga
pemisahan efisien.

12/07/21 26
 Faktor-faktor yang Mempengaruhi Pemisahan

Pada pemisahan dua komponen :

(θ
(θAA 
 θθBB)t.E
)t.E
ΔSSSAA SSBB 
ΔS
LL

L = panjang pendukung
ØA dan ØB = kemobilan A dan B ,
E = tegangan, t= waktu pengembangan,
SA dan SB =jarak komponen A dan B dari titik awal penotolan,

12/07/21 27
 Faktor-faktor yang Mempengaruhi Pemisahan


Jika q
θ
6ππη
Q = muatan ion, r = jari-jari ion
 = viskositas fasa cair (elektrolit)

Berilah penjelasan,
1. Bagaimana viskositas, muatan, dan jari-jari ion
mempengaruhi kemobilan.

12/07/21 28
 Faktor-faktor yang Mempengaruhi Pemisahan

2. Bagaimana pemisahan senyawa (S) bila tegangan,

perbedaan mobilitas, waktu [pengembangan serta
panjang pendukung besar ?

Bila anda telah dapat menjawab pertanyaan di atas, anda

dapat melanjutkan pembelajaran pada materi berikutnya.

Kunci jawaban

12/07/21 29
 Faktor-faktor yang Mempengaruhi Pemisahan

Kunci jawaban :
1. Jika viskositas larutan elektrolit dan jari-jari ion
besar, maka kemobilan suatu ion akan besar pula.
Demikian sebaliknya.

2. Pemisahan akan efisien bila perbedaan mobilitas

ion besar. Demikian pula semakin besar tegangan,
semakin lama waktu pengembangan akan
berdampak pada semakin baiknya pemisahan.
Sampai batas tertentu, terlalu panjangnya fasa
pendukung akan memperkecil efisiensi pemisahan

12/07/21 30
 Faktor-faktor yang Mempengaruhi Pemisahan

2. Derajat onisasi
Mari kita perhatikan ionisasi senyawa asam amino
(asam lemah), HA berikut.

HA (aq) ↔ H+ (aq) + A- (aq) pKa= 4,76

12/07/21 31
 Faktor-faktor yang Mempengaruhi Pemisahan

Jawablah pertanyaan berikut:

Keadaan HA pada
a) pH = 4,76 adalah …………………………………
b) pH > 4,76 adalah …………………………………
c) pH < 4,76 adalah …………………………………

Bila anda telah memahami jawaban pertanyaan di atas,

silahkan teruskan ke materi berikutnya
Kunci Jawaban

12/07/21 32
 Faktor-faktor yang Mempengaruhi Pemisahan

Marilah kita perhatikan data pemisahan dua asam

amino dengan ZEF pada berbagai pH larutan elektrolit !

MIGRASI RELATIF PADA ZEF

ASAM AMINO TIL
pH= 3,3 pH = 7,2 pH = 9,3

HISTIDIN (HIS) 7,7 - 68 -8 +10

AS. GLUTAMAT (AG) 3,3 +7 +72 +77

TIL = Titik Isolistrik, pH di mana struktur senyawa memiliki gugus - dan +

Tanda – menunjukkan arah migrasi ke kutub katoda dan
Tanda + menunjukkan arah migrasi ke kutub Anoda)

12/07/21 33
 Faktor-faktor yang Mempengaruhi Pemisahan

Struktur histidin Struktur asam glutamat

12/07/21 34
 Faktor-faktor yang Mempengaruhi Pemisahan

Jawablah pertanyaan di bawah ini

I. Pada pH larutan 3,3, maka
1. AG bermuatan ….., sedangkan HIS bermuatan ……
2. AG bermigrasi ke kutub ….., sedangkan HIS
bermigrasi ke kutub …….

3. Laju migrasi AG (< , = , > )* dibandingkan dengan laju

migrasi HIS *) pilih salah satu.
4. Apakah AG dapat dipisahkan dari HIS pada kondisi
ini ?
12/07/21 35
 Faktor-faktor yang Mempengaruhi Pemisahan

II. Pada pH larutan 7,2, maka

1. AG bermuatan …., sedangkan HIS bermuatan …..

2. AG bermigrasi ke kutub …., sedangkan HIS

bermigrasi ke kutub …….

3. Laju migrasi AG (< , = , > )* dibandingkan dengan laju

migrasi HIS

4. Apakah AG dapat dipisahkan dari HIS pada kondisi

ini ?

12/07/21 36
 Faktor-faktor yang Mempengaruhi Pemisahan

III. Pada pH larutan 9,3, maka

1. AG bermuatan …., sedangkan HIS bermuatan …..
2. AG bermigrasi ke kutub …., sedangkan HIS
bermigrasi ke kutub …….
3. Laju migrasi AG (< , = , > )* dibandingkan dengan laju
migrasi HIS.
4. Apakah AG dapat dipisahkan dari HIS pada kondisi
ini ?
Kesimpulan : …………………………
Bila anda telah memahami materi ini, silahkan dilanjutkan
ke materi berikutnya
Kunci Jawaban
12/07/21 37
 Faktor-faktor yang Mempengaruhi Pemisahan

3. Pembentukan Kompleks Bermuatan

Senyawa yang tidak bermuatan dapat dipisahkan
dengan ZEF, tetapi terlebih dahulu harus dibuat
bermuatan.

Caranya;
dengan pembentukan kompleks bermuatan
Contoh :

KH + BO33- Kompleks organo-borat bermuatan (-)

12/07/21 38
 Faktor-faktor yang Mempengaruhi Pemisahan

4. Konsentrasi Larutan Elektrolit

Fungsi larutan elektrolit :

a. Fasa pembawa
b. Menyebabkan terjadinya arus
c. Menurunkan tahanan fasa pendukung

Konsentrasi larutan elektrolit erat kaitannya dengan

kemobilan ion.

Berilah penjelasan, kaitkan dengan viskositas larutan.

12/07/21 39
 Kelebihan/Kelemahan Teknik Elektroforesis

Kelebihan Teknik Elektroforesis

 Mudah untuk molekul besar dan bermuatan.
 Dapat digabungkan dengan kromatografi
(Lempeng tipis).
 Lebih cepat dari kromatografi biasa.
 Alat dan teknik sederhana.

12/07/21 40
 Kelebihan/Kelemahan Teknik Elektroforesis

Kelemahan Teknik Elektroforesis

 Sulit untuk analisis kuantitatif, kecuali dengan
EF tidak berpendukung.
 Sukar mendeteksi konsentrasi rendah.

 Sukar untuk senyawa tidak bermuatan.

Kelemahan teknik ZEF dapat diatasi dengan

elektroforesis kapiler
12/07/21 41
 Teknik Elektroforesis Kapiler

Teknik Elektroforesis Kapiler

 Karakteristik

 Pendukung:pipa kapiler terbuat dari gelas

dengan panjang bermeter-meter.

 Elektrolit: larutan bufer

12/07/21 42
 Teknik Elektroforesis Kapiler

 Tegangan 10.000 – 30.000 V.

 Memerlukan larutan elektrolit dan
komponen cuplikan sedikit (mikro).
 Mekanisme berbeda dari EF konvensional.

12/07/21 43
 Teknik Elektroforesis Kapiler

12/07/21 44
 Teknik Elektroforesis Kapiler

12/07/21 45
 Teknik Elektroforesis Kapiler

12/07/21 46
 Teknik Elektroforesis Kapiler

Diagram alat EF kapiler

12/07/21 47
 TERIMAKASIH

12/07/21 48