Curso de Inmunología General Laboratorio

Semestre 2011-I

EJERCICIO EXPERIMENTAL 3
Curva de precipitación en capilar

OBJETIVO
Determinar la presencia de anticuerpos específicos en contra de la toxina tetánica en suero de
individuos sanos.

¿CÓMO?
Mediante la reacción de precipitación en capilar, que consiste en mezclar el antígeno soluble
(toxoide tetánico) con su anticuerpo específico (suero de individuos sanos con anticuerpos
específicos) para formar un precipitado, que varía según la proporción de reactivos

INTRODUCCIÓN
Dada la especificidad de la reacción antígeno-anticuerpo, esta ha sido utilizada en diferenciar e
identificar microorganismos, antígenos solubles, así como en la investigación y cuantificación de
anticuerpos séricos, sobre todos con fines de diagnóstico.

En la interacción in vitro de un antígeno con su correspondiente anticuerpo se distingue dos

etapas. La reacción primaria que consiste en la unión del antígeno con el anticuerpo (fenómeno no
visible) y la reacción secundaria, que sigue a la anterior y se caracteriza por la aparición de un
fenómeno visible como la aglutinación o precipitación.

La reacción de precipitación ocurre cuando se combina un anticuerpo, por lo menos bivalente, con
un antígeno soluble y esto conlleva a la formación de agregados que precipitan. Para que la
precipitación ocurra en forma máxima se necesita que tanto el antígeno como el anticuerpo estén
en concentraciones óptimas (cantidades equivalentes), cuando el antígeno o el anticuerpos están
en exceso no se pueden formar grandes agregados antígeno-anticuerpo.

Ab = K

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Semestre 2011-I

MATERIAL
• 7 capilares de 75 X 1.2 mm.
• 6 tubos de ensayo de 12X75 mm.
• 1 pipeta de 1 mL.
• 1 gradilla para tubos de ensaye
• 1 propipeta
• 1 portaobjetos
• Plastilina
• Solución Amortiguadora de Fosfatos. (PBS)
• Toxoide tetánico NIBSC Aventis Pasteur MSD [4.5mg/mL] Lote: EN63QG.

METODOLOGÏA

1. Diluciones seriadas (2X) del estándar de toxoide tetánico en PBS :

• Rotular 6 tubos de ensayo para realizar diluciones seriadas del antígeno (toxoide
tetánico)
• Colocar 1 mL. de solución amortiguadora de fosfatos (PBS) en cada uno de los tubos.
• Al tubo No 1 agregar 1mL del estándar de toxoide tetánico y mezclar con la misma pipeta
(dilución 1:2).
• Transferir 1 mL del tubo No 1 al tubo No 2 y mezclar perfectamente (dilución 1:4)
• Repetir el procedimiento hasta el tubo número 6. (Dilución 1:8 a 1:32)

2. Marcar los capilares a 2 y 4 cm. a partir de un extremo, con un marcador indeleble.

3. Tomar un tubo capilar y absorber por capilaridad un volumen de suero problema hasta
llegar a la primera marca del tubo capilar (2 cm), y manteniendo el dedo índice en el
extremo del capilar, limpiar la parte externa con papel absorbente.
4. Quitando el dedo índice del extremo, permitir que ascienda por capilaridad la solución de
toxoide tetánico (tubo 1) de tal manera que el volumen total llegue hasta la segunda marca
del capilar (4 cm.). Limpiar nuevamente la parte externa del capilar con papel absorbente.
5. Mezclar las soluciones moviendo el líquido de un lado al otro y rotando el capilar
simultáneamente 15 veces.
6. Con el dedo índice tapar uno de los extremos del capilar y centrar el líquido dentro del
capilar, colocando el dedo índice en un extremo.
7. Insertar el capilar verticalmente sobre un portaobjetos cubierto con plastilina, dejando unos
mm con aire entre la mezcla y la plastilina para evitar desnaturalización de los reactivos por
contacto con ésta.
8. Repetir el procedimiento para cada uno de los capilares correspondientes a las otras
diluciones del toxoide tetánico.
9. Realizar todo el procedimiento para cada uno de los sueros problema, cada equipo contará
con dos muestras problema.
10. Incubar los capilares 24 horas a temperatura ambiente.
11. Medir la cantidad de precipitado en milímetros en cada capilar. Si el precipitado es difuso o
esta fraccionado, centrifugar los capilares 1 min. a 1000 rpm. en una centrifuga para
hematocrito.
12. Cuidar que al sacar cada uno de los capilares de la plastilina queden tapados con la misma
en su parte inferior.
13. Con los datos obtenidos con el suero positivo (suero que tiene anticuerpos anti
14. toxoide tetánico) construir la curva de precipitación. Graficando concentración de toxoide
tetánico (abscisas) contra la cantidad de precipitado formado expresado en mm
(ordenadas).

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