UMSNH

ESCUELA DE QUIMICOFARMACOBIOLOGÍA

MICROBIOLOGÍA
= CRECIMIENTOIY MUERTE DE
MICROORGANISMOS =

CABALLERO PRADO CINDY JOANNA

SECCIÓN 01 SEMESTRE 5TO

 TEMARIO
Concepto y medida de
crecimiento
Crecimiento exponencial
Curva de crecimiento
Conservación de células en fase
exponencial
Crecimiento sincronizado
Definición y medida de muerte
Agentes antimicrobianos y
mecanismos de acción
 INTRODUCCIÓN
• Durante el desarrollo del tema de crecimiento y
muerte de microorganismos, el alumno será capaz de
comprender y distinguir los conceptos de crecimiento,
desarrollo y muerte de un microorganismo, podrá
diferenciar las múltiples etapas de vida que presentan
los microorganismos, las cuales varían en su tiempo de
generación según el microorganismo estudiado, por
ello es importante comprenderlas ya que nos ayudan a
determinar su viabilidad y muerte.
• Podrá entender la importancia del crecimiento
sincronizado de un microorganismo, utilizado en las
diversas áreas de producción industrial, donde se
mantiene a los microorganismos en una misma fase de
su desarrollo, de igual manera aprenderá métodos
matemáticos para la interpretación del crecimiento y la
muerte de poblaciones microbianas, así como la utilidad
de los diferentes agentes antimicrobianos y su sitios de
acción en los microorganismos.
 Conocer los principios generales del
crecimiento microbiano
 Describir los ciclos de crecimiento de las
poblaciones microbianas
 Consideraremos los medios disponibles
para medir el crecimiento
 Conocer instrumentos especiales para la
medición de los m.o.
 ¿QUÉ ?
QUÉ ES EL CRECIMIENTO
Se define como:

El Incremento ordenado
de todos los
constituyentes celulares.

El crecimiento ocasiona un aumento del

número de células cuando los
microorganismos se duplican.
 PROCESOS DE DUPLICACIÓN

•G E M A C I Ó N
•F I S I Ó N B I N A R I A
 GEMACIÓN
Es un sistema de duplicación de
organismos unicelulares donde
por evaginación se forma una
yema que recibe uno de los
núcleos mitóticos y una porción
de citoplasma. Uno de los
organismos formados es de
menor tamaño que el otro.
 FISIÓN BINARIA
Los organismos celulares más simples se reproducen por un proceso conocido como
fisión o escisión.
La célula madre se fragmenta en dos o más células hijas, perdiendo su identidad original.

• transversal (se produce a lo ancho del organismo)

• longitudinal (a lo largo del organismo)
a) (CORTE TRANSVERSAL) ANTES DE QUE SE HAYA COPIADO SU DNA
b) LA REPLICACIÒN COMIENZA Y SE REALIZA A LO LARGO DE LA MOLÉCULA DE DNA
c) LA COPIA DE DNA SE UNE A UN PUNTO CERCANO AL PUNTO DE UNIÓN DE LA MOLÉCULA DE DNA
d) EL CRECIMIENTO DE LA MEMBRANA CELULAR ENTRE LOS DOS PUNTOS DE UNIÓN Y SE
SEPARAN LAS DOS MOLÉCULAS DE DNA
e) EN LA ZONA CENTRAL DE LA CÉLULA COMIENZA A CRECER NUEVO MATERIAL DE MEMBRANA Y
PARED
f) LA MEMBRANA Y LA PARED DEPOSITADAS EN LA ZONA CENTRAL DIVIDEN EL CITOPLASMA EN
DOS
 CRECIMIENTO

INDIVIDUAL POBLACIONAL

incremento en el número de
Es el incremento en células como una
consecuencia del
el tamaño y peso crecimiento y división
celular.

c) Tiempo de
a) Tasa de crecimiento b) Generación
generación
 TIEMPO DE GENERACIÓN
También llamado tiempo de duplicación,
duplicación es el periodo que requieren las células para:

•Crecer, dividirse y dar lugar a dos

nuevas células.
•Aproximadamente el mismo para
las células de una determinada
población.
•No cambia hasta que se agotan
los nutrientes o se acumulan
productos metabólicos tóxicos.
EJEMPLO: TIEMPO DE
DUPLICACIÓN DE E. COLI
Alrededor de 18 min. en un medio
de laboratorio rico.
Tracto intestinal de los vertebrados
(los nutrientes son menos
abundantes) tiempo de duplicación
es de 12 horas
TD ELEVADO TD BAJO
CRECIMIENTO CRECIMIENTO
LENTO RAPIDO

El valor del tiempo de duplicación nos indica la rapidez con que esta
creciendo la población, pero la relación es inversa.
 TASA DE CRECIMIENTO
Tiempo de duplicación por hora
• Elevada para las poblaciones de
crecimiento rápido y baja para las de
crecimiento lento.

Así, la tasa de crecimiento de un cultivo de E.

coli

Tiempo de Duplicación de 18 minutos

Será de 3.3 (60/18) generaciones por hora.
 FACTORES QUE INFLUYEN EN EL
CRECIMIENTO

O2
E S Capacidad
R S
T O
N
O
C O 2
metabólica
A C R
F TE
EX

pH Aw ES
R S
O
T NO
C R
FA TE
IN
T°
 FACTORES EXTERNOS
SOLUTOS Y Aw

Lamembranaplasmáticaselectivamentepermeableseparaalosmodesu

ambiente; porello, éstospuedenverseafectadosporcambiosenla

concentraciónosmóticadel medio.

Lamayoríadelasbacterias, algasyhongosposeenunaparedcelularrígida.
Solutos compatibles. Una molécula
que se acumula en el citoplasma para
ajustar la aw y que no inhibe los
procesos bioquímicos.

Estos solutos son

compatibles
•Metabolismo
•El crecimiento
En concentraciones
intracelulares elevadas
 EJEMPLO

La mayoría de las bacterias eleva su conc. Osmótica

interna, mediante la síntesis o captación de colina,
betaína, prolina, ácido glutámico y otros aa; también
participan, en cierto grado, cantidades elevadas de ion
K.
Por los mismos motivos, las algas y los hongos utilizan
sacarosa y alcoholes de azúcares, por ejemplo, arabitol,
glicerol y manitol.

NO ALTERAN LA ESTRUCTURA Y
FUNCIÓN DE LAS ENZIMAS
 **PLASMOLISIS** proceso por el cual
una célula pierde su contenido de agua,
arrugándose el citoplasma y desprendiéndose la
membrana plasmática de la pared celular.

¿QUE PASA?
Deshidrata la célula y puede
dañar la membrana plasmática.

Consecuencia.
La célula se inactiva
metabólicamente y deja de
CRECER.
 La cantidad de agua disponible
por los mo se puede reducir:

Mediante interacciones con moléculas de

soluto (Efecto osmótico).
O por la adsorción a las superficies de
sólidos (Efecto matricial).

Por tal motivo es de gran

utilidad poder expresar
cuantitativamente el º de
disponibilidad del agua.
 LÍMITES INFERIORES APROXIMADOS DE aw
PARA EL CRECIMIENTO MICROBIANO
Actividad Ambiente Bacterias Hongos Algas
Del agua
1.00-agua pura Sangre La mayoría de las
gramnegativas no
halófilas

Plantas marchitas,
verduras, carne, fruta
Agua de mar

0.95 pan La mayoría de los bacilos Basidiomycetes La mayoría

grampositivos
0.90 Jamón La mayoría de los cocos, Fusarium, Mucor
Bacillus Rhizopus
Levaduras ascomicetales

0.85 Salami Staphylococcus Saccharomyces rouxii (en

sal)
0.80 Conservas Penicillum

0.75 Lagos salados Halobacterium Aspergillus Dunaliella

Pescado salado Actinospora

0.70 Cereales, dulces, frutos

secos
0.60 Chocolate Sacchamyces rouxii (en
azúcares)
Miel

Leche deshidratada Xeromyces bisporus

 pH
El pH es una medida de la
actividad de los iones de
hidrógeno de una solución,
que se define como el
logaritmo negativo de la
pH=De
conc. - log H =
+
iones delog (1/ H )
+
hidrógeno
(expresada en moles).
 Efecto de pH en el
crecimiento mo
Cada especie tiene un rango
definido de pH para su
crecimiento y un pH óptimo
de ACIDÓFILOS
crecimiento. entre 0-5.5
NEUTRÓFILOS entre 5.5-8
ALCALÓFILOS ENTRE 8.5-11.5
ALCALÓFILOS EXTREMOS
ENTRE 10 O MÁS
 TEMPERATURA
La temperatura ambiental afecta intensamente a
los mo
TEMPERATURAS
CARDINALES FACTOR QUE MÁS
mínima INFLUYE “LA
SENSIBILIDAD DE
LAS REACCIONES
Óptima CATALIZADAS POR
ENZIMAS”
máxima

Las temperaturas cardinales

varían ampliamente entre
 Aunque la forma de la
curva de dependencia
de la temperatura puede
variar, la óptima está
siempre más próxima a
la máxima que a la
mínima.

Las tem. cardinales no son invariables, dependen

de otros factores ambientales, como:

• pH
• nutrientes disponibles
EJEMPLO Crithidia
fasciculata
Protozoo flagelado
Habita en el intestino de los
mosquitos
Crecerá en un medio simple entre 22
y 27ºC
SIN EMBARGO
No puede cultivarse a temperaturas de
entre 33 y 34ºC.
A no ser que se añadan metales, aa,
vitaminas y lípidos
 Temp. óptimas se encuentran
normalmente en un rango de 0ºC
hasta un valor tan alto como 75ºC

El crecimiento de mo se produce en
un rango de -20ºC hasta más de
100ºC.

La temperatura de crecimiento de un
mo determinado abarca
normalmente un margen de 30º.
 GLOSARIO
• ESTENOTÉRMICOS especies que tienen un rango
pequeño de temperaturas.
• EURITÉRMICOS crecen en un amplio rango de
temperaturas
• PSICRÓFILOS organismos con temperatura optima
de crecimiento de 15ºC o inferior y una máxima
inferior a 20ºC.
• PSICROTROFOS Crecen a 0ºC, aunque su
temperatura óptima sea 20 a 30ºC.
• MESÓFILOS organismos que crecen a temperaturas
entre 20 y 45ºC
• TERMÓFILOS pueden crecer a temperaturas de 55ºC
o superiores. La temperatura mínima es
normalmente de 45ºC y la óptima de 55 a 65ºC.
• HIPERTERMÓFILOS mo que tienen una temperatura
óptima de crecimiento de 80ºC o mayor.
 CONCENTRACIÓN DEL
OXÍGENO
Un organismo que puede crecer en
presencia de O2 atmosférico es AEROBIO,
AEROBIO
mientras que otro que puede crecer en
ausencia, es ANAEROBIO.
ANAEROBIO

La mayoría de los organismos superiores

dependen totalmente de O2 atmosférico
para su crecimiento, es decir, son
AEROBIOS OBLIGADOS.
OBLIGADOS
• Los ANAEROBIOS FACULTATIVOS no
precisan O2 para crecer, pero lo hacen
mejor en su presencia.

• Los ANAEROBIOS AEROTOLERANTES,

AEROTOLERANTES
como Enterococcus faecalis pueden
crecer bien tanto en su presencia como
en su ausencia.
 Los ANAEROBIOS ESTRICTOS u
OBLIGADOS ( p. ej.,Bacteroides,
Fusobacterium, Clostridium pasteurianum,
Methanococcus) no toleran en absoluto el O2
y mueren en su presencia.

Existen unos pocos mo aerobios, como

Campylobacter, denominados
MICROAERÓFILOS,
MICROAERÓFILOS que son dañados por el
nivel de oxígeno atmosférico (20%), sus
niveles de crecimiento son del 2 al 10%.
 diferentes con el
O2 se deben a
varios factores:
La inactivación de las
proteínas

El efecto de los derivados

tóxicos de O2
 REDUCCIÓN DEL
OXÍGENO
El O2 acepta e- y se reduce fácilmente
porque sus e- de los orbitales externos
no están apareados.

Las flavoproteínas, otros constituyentes

celulares y la radiación promueven la
reducción del O2.
 El resultado suele ser una
combinación de los productos
de reacción del oxígeno:

O2 + e- O2-. radical superóxido

O2-. + e- + 2H+ H2O2 peróxido de hidrógeno
H2O2 + e- + H+ H2O + OH. radical hidroxilo

Son extremadamente
tóxicos y tienen un gran
poder de oxidación,
¿CÓMO SE PROTEGEN
LOS MO?

Muchos mo poseen
ENZIMAS que ofrecen
protección frente a
productos tóxicos del O2.
Los aerobios obligados y los anaerobios
facultativos contienen normalmente las
enzimas superóxido dismutasa y
catalasa, que catalizan la destrucción de
los radicales superóxido y peróxido de
hidrógeno, respectivamente.

2O2-. + 2H+ O2 +
H2 O
Superóxido dismutasa
2

2H2O2 catalasa 2H2O + O2

• Los mo aerotolerantes pueden carecer de catalasa,
pero casi siempre tienen superóxido dismutasa.

EJEMPLO:
Lactobacillus plantarum, aerotolerante, utiliza iones
de Mn, en lugar de superóxido dismutasa, para
eliminar el radical superóxido.
 • Todos los anaerobios
estrictos carecen de ambas
enzimas o las poseen en
concentraciones muy bajas
y, por ello, NO pueden
tolerar el O2.
RELACIÓN DE LAS
BACTERIAS CON EL
OXÍGENO
 MEDIDA DEL CRECIMIENTO
MICROBIANO

CONTEO DE
RECUENTO Medida CÉLULAS
VIABLES
DIRECTO de la
masa de
células

Medida Medida
Medida del de de
número de parámet activida
ros d
partículas bioquími metaból
cos ica
 RECUENTO DIRECTO
-Consiste en la observación al microscopio
de volúmenes muy pequeños de
suspensiones de bacterias.

- Se usan unos portaobjetos especiales

graduado con 25 cuadrados cuyo volumen
y área es conocido denominados cámaras
de Petroff-Hausser.

LIMITACIONES:
-Es muy tedioso, no es práctico para un gran
número de muestras.

-No es muy sensible, se necesitan al menos 106

bact/ml para que sean observadas al microscopio.

-- No distinguen células vivas de muertas.

 CAMARA DE RECUENTO DE
PETROFF-HAUSSER

• Imagen lateral de la
cámara, mostrando el
cubreobjetos y el espacio
entre ambos, que ocupa
una suspensión
bacteriana.
•Vista superior de la
cámara. La rejilla se
encuentra en el centro del
portaobjetos.
•Vista aumentada de la
 SISTEMA DE FILTRO DE
MEMBRANA MILLIPORE
• Partes del conjunto del filtro.
Algunos de los componentes
más importantes son:
1. Embudo
2. Filtro de membrana
3. Base y soporte del filtro
4. Recipiente
• Sistema completo de
filtración.
a) Medio estándar de nutrientes para un recuento bacteriano total. Un indicador colorea las
colonias de rojo para facilitar el recuento.
b) Medio para coliformes fecales que forman colonias azules.
c) Agar m-Endo para detectar E. coli y otros coliformes que producen colonias de color
verde brillante.
d) Agar de extracto de malta para cultivar levaduras y mohos.
MEDIDA DE LA MASA DE
CÉLULAS

midiendo la turbidez células en suspensión

se puede estimar dispersan la luz causando
la masa la turbidez del cultivo

MÁS FÁCIL DE USAR

La turbidez depende
de la masa
en suspensión
PESO SECO
Se determina el peso seco o peso húmedo
de una alícuota de la población separada
por centrifugación. El peso seco es por lo
general el 20-25 % del peso húmedo.

TURBIDIMETRÍA

A través de un colorímetro o
espectrofotómetro midiendo la turbidez
en unidades de absorbancia.
Debe prepararse curva estándar para
cada organismo estudiado.
Mide la turbidez, es decir, la cantidad de luz
que transmite un cultivo, expresada en
unidades de absorbancia.
CONTEO DE CÉLULAS VIABLES
Una célula viable es definida como aquélla que es capaz
de dividirse y formar una colonia en el medio de cultivo.

¿ en que consiste ?

consiste en sembrar un
volumen determinado de
cultivo o muestra sobre el
medio de cultivo sólido
adecuado para estimar el
número de viables
contando el número de
colonias que se forman.
Para que la medida sea
correcta desde el punto de
vista estadístico, es
necesario contar más de
300 células.
 • Diseminación en placa
(siembra en placa por
extensión)
Se asume que cada colonia
surgió de una simple célula,
contando el número de
colonias uno puede calcular
el número de células viables
en la muestra.
El conteo en placas
•Método de vaciado en
placa

Siembra por extensión

Siembra por vertido en

placa
Método de vaciado en placa.-
 Medida del número de
partículas
usando
contadores
electrónicos de
partículas.

Estos sistemas no
nos indican si las
partículas
corresponden a
células vivas o
 D E ADN
ID A S
E D RO
M E T S
Á M C O
A R M I
P QUÍ
BI O

PROTEÍNAS
ARN

PEPTIDOGLICANO
 Medida de actividad metabólica

La actividad metabólica puede

utilizarse, mediante varios
procedimientos, para medir
indirectamente la cantidad de
células microbianas:

•La tasa de formación

de productos
metabólicos
•La tasa de utilización
de un substrato
•La tasa de reducción
 °
CRECIMIENTO
EXPONENCIAL
°
 r io d o de
t e u n pe n
Dura n l i c a c i ó
d e d up
tiemp o
p o b l a ción
t e , u n a ra
on s t an n c u e n t
c a s ee
i a n
microb i m i e n to
en crec
n e n c i al.
expo

¿
durante cada tiempo de
?
Que significa

duplicación, el número de
células de la población se
INCREMENTA en un factor de
Tiempo (hr) Número total de
células
0 1
0.5 2
1 4
1.5 8
2 16
2.5 32
3 64
3.5 128
4 256
4.5 512
5 1024
5.5 2048
6 4096
. .
. .
10 1048576
En este ejemplo se incremento la
población, el número de células
se doblan cada cierto período
de tiempo y se le conoce como
CRECIMIENTO EXPONENCIAL.
 1000

Logarítmica

Número de Número de
células células
(escala 500 (escala
aritmética) logarítmica)

Aritmética
100
0 1 2 3 4 5 6
TIEMPO (Hr)
 • No podemos obtener mucha
información sobre la velocidad
de crecimiento a partir de la
curva aritmética.

• La escala logarítmica (base 10)

es un inmediato indicador de
que las células están creciendo
exponencialmente.
exponencialmente
el número total de células es igual a dos
elevado a un exponente, y dicho
exponente es el número de generaciones
que han transcurrido desde que la
población comenzó a aumentar. Así, una
población que comienza como una célula
(20), se incrementa a dos células (21),
luego a cuatro células (22), ocho células
(23), 16 células (24), y así sucesivamente.
La fórmula general es:

N = N0 2 n

Donde:
• N número final de células
• N0 número inicial de células
• n número de generaciones
• g tiempo de generación = t/n
t= hrs. o min.
 Para expresar la ecuación N=N02n
en términos de n son necesarias las
siguientes transformaciones:

N=N02n
Log N= log N0 + n log 2
Log N - log N0 = n log 2

n=Log N - log N 0 = Log N - log N 0

log 2 0.301
 EJEMPLO:
N=10 , N0 = 5*10
8 7

y t=2
log 108 – log (5*107) 8 – 7.69
n= =

0.301 0.301

n=
 Células/m
l 1*108
t=2
por lo tanto, el tiempo 6*107
n=1
de generación g = t/n
g=t/n= 2hr
= 2/1 = 2 hrs. 4*107

el tiempo de 3*107
generación g puede 2*107
calcularse también de
la pendiente de una 1*107
2 hr

grafica semilogarítmica
0 1 2 3 4 5
de crecimiento
exponencial, como Tiempo (hr)
pendiente 0.301/g
con el conocimiento de n y t, se puede calcular g
para diferentes microorganismos
exponencialmente bajo diferentes condiciones de
crecimiento.
 D E
V A T
U R I E N
C IM
RE C
C O
 Si analizamos el crecimiento microbiano en el tiempo,
éste describe una típica curva de crecimiento que puede
ser dividida en fases.

Fases de Crecimiento

Fase de Latencia Fase exponencial

o Fase Lag log Fase
Fase estacionaria de muerte
 A) FASE LAG O DE
LATENCIA
Cuando se introducen mo en un medio
de cultivo fresco, normalmente no se
produce un aumento inmediato del
número de células o de masa.

La división celular no se produce inmediatamente

No hay incremento neto en la masa
La célula está sintetizando nuevos componentes
• La duración varía considerablemente
según la condición de los mo y la
naturaleza del medio.

• Puede ser bastante larga si el inóculo

procede de un inóculo viejo o de uno
que haya sido refrigerado.
 B) FASE EXPONENCIAL O LOG

mo crecen y se dividen hasta el nivel

máximo posible, en función de su
potencial genético, el tipo de medio y las
condiciones en que crecen.
la velocidad de crecimiento es constante
c/célula se divide y duplica en número de
intervalos regulares.
La población es más uniforme, química y
fisiológicamente.
Se utilizan normalmente en estudios
bioquímicos y fisiológicos.
 La velocidad de crecimiento
exponencial varía mucho de un
organismo a otro. Por ejemplo:
• Salmonella typhi • Mycobacterium
crece muy tuberculosis crece
rápidamente en muy lentamente,
con sólo una o dos
cultivo, con un tiempo
duplicaciones por
de generación de 20 –
día.
30 min.

Las condiciones ambientales, T°, composición del medio de cultivo, afectan a la

velocidad de crecimiento exponencial así como las características del microorganismo.
 C) FASE ESTACIONARIA
El crecimiento de la
población cesa y la curva de
crecimiento se vuelve
horizontal.
El tamaño final de la población depende:
Disponibilidad de nutrientes y otros factores
El tipo de mo que se cultive
El número total de mo viables permanece
constante
El equilibrio entre la división y la muerte de las
células
POBLACIONES MICROBIANAS EN FASE
ESTACIONARIA

•Limitación de nutrientes
EJEMPLO: Los mo AEROBIOS están
limitados a menudo por la
disponibilidad de O2.

•Acumulación de residuos
tóxicos
EJEMPLO: Los mo ANAEROBIOS son
limitados en su crecimiento por este
factor.
Estreptococos puede producir tanto
ácido láctico y otros ácidos orgánicos a
partir de la fermentación de azúcares
que acidifican su medio.
Los cultivos de esté mo pueden también
entrar en fase estacionaria debido a la
reducción de suministro de azúcar.
 D) FASE DE MUERTE
Cambios ambientales perjudiciales, como la
privación de nutrientes y acumulación de residuos
tóxicos, originan la disminución del número de
células viables, hecho que caracteriza la FASE DE
MUERTE.
MUERTE
• La muerte de una población
microbiana, al igual que su
crecimiento durante la fase
exponencial, es normalmente
logarítmica (es decir, una
cantidad constante de células
muere c/hora).
En algunos casos, la muerte se acompaña
por lisis celular, dando lugar a una
disminución del conteo de viabilidad.
La cepa de Lactobacillus casei ha demostrado
tener efecto sobre los problemas
gastrointestinales de niños de corta edad,
demostrando la disminución de la presencia y
frecuencia de diarrea, además de parásitos
intestinales patógenos como la Giardia lamblia
sobre la flora intestinal.

Esto se logró hallando una concentración celular

mediante bioensayos de laboratorio, a
determinados periodos de tiempo y con
características semejantes, por duplicado para
optimizar cada uno de los procesos.
Se realizó a nivel de laboratorio, mediante
recuentos en cámara de Newbauer,
realizando esto en tratamiento por
duplicado de lo cual se obtuvieron los
resultados de fermentar la bebida por 4
horas a una temperatura de 40 °C y sin
agitación.( Propagación de células del
Lactobacillus casei a escala de
laboratorio para la elaboración de una
bebida multifuncional probiótica, con el
fin de evaluarla en el tratamiento y
prevención de enfermedades
gastrointestinales.)
 Bioensayo para estudiar el comportamiento del inóculo de 3 y 2
horas de incubación, sin aplicar agitación.

BIOCONVERSIÓN ESCALA DE LABORATORIO (2 L)

Acidez inicial: 19 °D Inóculo: 3%,

Temperatura empleada: 40 °C. r.p.m. No se
Recuento del inóculo: presenta
Volumen del inóculo: 1,0 – 2,0 * 109 cell / ml
Volumen de trabajo: 60 ml.
Tiempo de proceso: 2000 ml.
Tiempo de incubación 6 horas
del
inóculo: 3 y 2 horas.
Resultados del crecimiento celular para el
inóculo de 3 y 2 horas de incubación, sin
aplicar agitación
 Gráfico - Resultados del
crecimiento celular para el
inóculo de 3 y 2 horas de
incubación sin aplicar agitación
•LA FASE LAG O DE LATENCIA
es relativamente larga (1 hora) si se compara
con organismos que se reproducen en sólo 20
o 30 minutos.

• LA FASE EXPONENCIAL dura 2

horas, por lo tanto cuando las bacterias tienen
2 horas de haber sido cultivadas es cuando se
da el mayor consumo de nutrientes que les
permite incrementar su velocidad de
crecimiento para infectar al objetivo.
•EN LA FASE
ESTACIONARIA ya no hay ni
multiplicación ni infección.
CONSERVACIÓ
N DE CÉLULAS
EN FASE
EXPONENCIAL
 SISTEMA DE
CULTIVO CONTINUO
Es posible cultivar mo en
un sistema abierto
• Se mantengan las condiciones
ambientales constantes a través
de un suministro continuo de
nutrientes y de la retirada de los
residuos.
Mayoritariamente se utilizan
dos clases de cultivo
continuo:
• Bomba
peristáltica
•Un
reservorio
•Un
recipiente
de cultivo
En estas condiciones:

•El número de células en el

vaso de cultivo no cambia.
•El cultivo crece lo
suficientemente rápido
para reemplazar las células
que se pierden a través del
sistema de desagüe.
 • D= velocidad de dilución
• f= velocidad de reflujo (mL/h)
• V= volumen del recipiente (mL)

POR EJEMPLO
si f es 30 mL/h y V 100 mL, la velocidad de dilución
será 0.30 h-1 .
USOS TRADICIONALES DE
LOS MO

El término Biotecnología
se aplica a todos los usos
de los organismos con fines
prácticos, aunque los mo
son su centro de atención.
 • col fermentada
• Ensilados
BACTERIAS
DEL ÁCIDO • Aceitunas de
LÁCTICO mesa
Fermentan los
azúcares. • Quesos y otros
derivados lácteos

Con excepción de algunos estreptococos, las

bacterias del a. láctico son inocuas para la
especie humana y sus productos metabólicos
tienen un sabor agradable.
 LEVADURAS
Fermentan los azúcares, produciendo CO2 y etanol

Se utilizan cepas de Saccharomyces

Los vinos de Sauternes y otros

vinos dulces se obtienen:
• a partir de uvas infectadas
por el hongo Botrytis cinerea.
 LA CERVEZA Y EL
WISKY
Se elaboran por fermentación de cereal
Saccharomyces carlsbergensis y Scerevisie
son la levaduras más utilizadas.

SACARIFICACIÓN
GLUCOSA
I DÓN
M
AL

GRANO DE CEREAL
VINAGRE: La levadura
Saccharomyces cerevisiae,
cerevisiae
fermentan el azúcar del zumo
de frutas hasta etanol. Después
utilizan Acetobacter spp para
oxidar el etanol de forma
incompleta hasta a. acético y
agua
PAN FERMENTADO: Se elaboró
inicialmente utilizando la levadura
de la cerveza, un subproducto de la
industria de obtención de la
cerveza; en la actualidad se utilizan
cepas seleccionadas de la levadura
Saccharomyces cerevisiae para la
panificación.
 LOS MO COMO
INSECTICIDAS
1. Algunas especies de Bacillus son
patógenas de insectos; forman cuerpos
paraesporales (cristales de proteínas),
que son letales para los insectos.
Las endosporas de B. thuringiensis se
producen de manera comercial como
bioinsecticida denominado Bt, para
controlar las orugas y otros insectos.
Las endosporas de B. popilliae producen
Bp, que matan los escarabajos.
2. El protozoo Nosema locustae se usa
como cebo para matar saltamontes y
langostas.
Los baculovirus se están estudiando
también como bioinsecticida.

A diferencia de los insecticidas

químicos, los bioinsecticidas
son seguros desde un punto de
vista ECOLÓGICO.
UN QUIMIOSTATO
ANDANTE

El rumen de la vaca funciona como un

quimiostato
 CRECIMIENTO
SINCRONIZADO
 Crecimiento sincronizado

Son poblaciones de células que están en la

misma etapa de crecimiento. Se pierde la
sincronía debido a que las diferentes
poblaciones no envejecen igual.

El crecimiento sincronizado puede ser

obtenido mediante la alteración del ambiente
(temperatura o nutrientes).
DEFINICIÓN Y
MEDIDA DE
MUERTE
 MUERTE
• La pérdida irreversible de la
capacidad para reproducirse
(crecer y dividirse).
MEDICIÓN DE LA MEDIDA
DE MUERTE

El número de células que mueren

en cada periodo es una función
del número de sobrevivientes que
se encuentren presentes, de tal
manera que la muerte de una
población prosigue como un
proceso exponencial de acuerdo
con la fórmula general:
 S = So e –kt

Donde:

So.- es el número de sobrevivientes en el

tiempo cero

S.- número de sobrevivientes en cualquier

tiempo posterior

-k.- representa la tasa de mortalidad

exponencial cuando la fracciona In (S/So)
se grafica como función del tiempo
 CURVA DE UN SOLO
GOLPE

Log 10 número de células sobrevivientes/ml

6
•Cinética de
5
inactivación.
4
• Es suficiente 3
un solo golpe 2
del agente
1
inactivante
0
para matar a la 10 20 30 40 50 60
célula.
MINUTOS

•Debe dañarse
º CURVA DE
MULTIGOLP
eº
•Célula
que
contiene
varias
copias del
blanco.
 AGENTES
ANTIMICROBIAN
OS Y SITIOS DE
ACCIÓN
 MODO DE ACCION DE LOS
ANTIBIOTICOS
Los antibióticos deben su toxicidad selectiva a las diferencias entre las células
eucariotas y procariotas.

Su eficacia tóxica es la consecuencia de su capacidad de inhibir una reacción

bioquímica específica y esencial, para la célula eucariota o procariota.

Para que el antibiótico ejerza su acción es necesario que llegue al foco

infeccioso, penetre en las bacterias (por difusión o transporte activo) y alcance
intracelularmente la concentración necesaria.
Una vez dentro de la célula el antibiótico puede ser
bacteriostático si inhibe la multiplicación de forma
reversible, o bactericida si tiene un efecto letal.
En general, cada grupo de antibióticos actúa
preferentemente de una forma u otra.

Antibióticos bactericidas: betalactámicos, aminoglicósidos,

polipeptídicos, polienos.

Antibióticos bacteriostáticos: macrólidos, tetraciclinas,

cloranfenicol.
LOS ANTIBIÓTICOS DE USO EN CLÍNICA PUEDEN
EJERCER SU ACCIÓN EN UNA DE LAS SIGUIENTES
ESTRUCTURAS O FUNCIONES:

1.- Inhibición de la
síntesis de la pared
celular.

2.- Alteración sobre la

membrana citoplásmica.

3.- Inhibición de la
síntesis proteíca.

4.- Bloqueo de la síntesis

1.- INHIBICIÓN DE LA SÍNTESIS DE LA PARED
CELULAR
La pared celular de las bacterias está compuesta por peptidoglicano.

FUNCION
• Protege a la célula de su
destrucción por estallido en un
medio normal, no
hiperosmótico puesto que las
bacterias tienen una gran
presión osmótica interna (G+:
20 atmósferas; G-: 5
atmósferas).
 Las células, debido a su crecimiento, están
continuamente sintetizando nuevo peptidoglicano
y transportándolo a su sitio adecuado en la pared
celular.
 Varios antibióticos reaccionan con una o
varias de las enzimas que se requieren para
completar este proceso originando que la
célula desarrolle puntos frágiles en su
pared celular debido a la síntesis de
peptidoglicano deficiente, lo que origina
que sea osmóticamente frágil.
 Los antibióticos que producen este efecto se
consideran bactericidas ya que la célula
debilitada está sujeta a lisis.
La mayor parte de estos antibióticos son activos
frente a células en crecimiento ya que las células
viejas no sintetizan peptidoglicano.
Antibióticos que bloquean la
síntesis de la pared celular:

Bacitracina. Bloquea el transporte de las

subunidades de peptidoglicano a su posición en la
pared celular.

Betalactámicos. Inhiben la síntesis de la pared

celular en su última fase interfiriendo la
transpeptidación.

•Algunas penicilinas son menos efectivas frente a

bacterias G-excepto penicilinas sintéticas y
cefalosporinas.
 2.- Alteración sobre la
membrana citoplásmica
Una célula con la membrana dañada muere
invariablemente.
insufiencia metabólica lisis
PROPIEDAD PRINCIPAL
Actuar como barrera de permeabilidad selectiva

Las sustancias que alteran esta estructura modifican la

permeabilidad, permiten la salida de iones K y
macromoléculas como los ácidos nucleicos y causan un
efecto lítico.

DESAFORTUNADAMENTE, la mayor parte de estos antibióticos son

tóxicos para los humanos.
 Antibióticos que alteran
la membrana
citoplásmica:
POLIMIXINAS. POLIENOS.
Interaccionan con los fosfolípidos
Los antibióticos poliénicos
de las membranas
(nistatina, anfotericina B)
B son
desorganizándolos y aumentando
activos frente a hongos
su permeabilidad originando
formando complejos con los
pérdida de metabolitos
esteroles de las membranas de
esenciales y muerte bacteriana
células fúngicas originando poros
como resultado final.
hidrofílicos, lo que modifica la
Las bacterias más susceptibles permeabilidad de la membrana.
son las (G-).
3.- INHIBICIÓN DE LA SÍNTESIS PROTEICA

La mayor parte de los inhibidores de la síntesis proteica

reaccionan con el complejo ribosoma-mRNA.
Los ribosomas de los eucariotas son diferentes en tamaño y
estructura de los ribosomas de los procariotas (80sy 70s) por lo
que estos antimicrobianos tienen una acción selectiva frente a
bacterias.
Antibióticos que inhiben la síntesis
proteica:

•Aminoglicósidos (estreptomicina, gentamicina)

•Tetraciclinas
•Cloranfenicol
•Macrólidos (eritromicina)
 AMINOGLICÓSIDOS
(ESTREPTOMICINA, GENTAMICINA)
Actúan uniéndose específicamente y de forma irreversible a un
receptor proteico de la subunidad 30s de los ribosomas (en el
caso de la estreptomicina, la proteína P10).
Esta unión causa, el bloqueo de la actividad normal del complejo de
iniciación, con lo que se detiene la síntesis proteica y, distorsiona
el codon del locus A, provocando la incorporación de un
aminoácido distinto al codificado. De esta manera se forman
proteínas anómalas
 TETRACICLINAS

• Se unen a la subunidad
30s de los ribosomas
bloqueando la fijación del
aminoacil-tRNA al locus
A parando la síntesis de
proteínas.
 Cloranfenicol

• Se une a la subunidad
50s de los ribosomas
impidiendo la
transpeptidación.
 Macrólidos
(eritromicina)

• Actúan sobre la
subunidad 50s de los
ribosomas, impidiendo
la translocación ( paso
del peptidil-tRNA del
locus A al locus P, previa
liberación del tRNA).
4.- Bloqueo de la síntesis de los
ácidos nucléicos

La biosíntesis de moléculas
de RNA y DNA es una larga
serie de reacciones
catalizadas por enzimas,
susceptible de romperse en
diferentes puntos.

Los antibióticos que

interfieren en la síntesis de
ácidos nucléicos actúan
bloqueando la síntesis de
sus componentes, inhibiendo
la replicación o parando la
transcripción.
 Compuestos que bloquean la
síntesis de ácidos nucléicos:

• Sulfamidas (quimioterápicos sintéticos)

Se denominan antimetabolitos debido a que interfieren un proceso
metabólico esencial en las bacterias.
Las sulfamidas son análogos estructurales de un compuesto metabólico
natural, el PABA (ácido para-aminobenzoico) necesario para que las
bacterias puedan sintetizar ácido fólico.
 Aunque los humanos requieren ácido fólico en la síntesis de
ácidos nucléicos, los humanos no pueden sintetizar ácido fólico;
éste es un nutriente esencial (vitamina) que se obtiene
exógenamente a través de la dieta.

Ya que los humanos carecen de este sistema enzimático especial

para incorporar el PABA al ácido fólico, su metabolismo no puede
ser inhibido por las sulfamidas.
 Productos metabólicos microbianos que actúan como antibióticos
Antibacterianos Producido por Modo de acción
•aminoglucósidos
•estreptomicina Streptomyces griseus induce síntesis anormal de proteínas
•neomicina Streptomyces fradiae ““““
•cefalosporinas Acremonium cephalosporium inhiben síntesis de pared celular
•cloranfenicol Streptomyces venezuelae ““““
•eritromicina Saccharopolyspora erythraea interfiere con síntesis de proteínas
•lincomicina Streptomyces lincolnensis ““““
•penicilinas Penicillium chrysogenum inhiben síntesis de pared celular
•polipéptidos
•Polimixinas BaciIIus polymyxa deterioro de membrana celular
•bacitracina BaciIIus subtilis inhibe formación de pared celular
•rifamicinas Amycolatopsis mediterranei interfiere con síntesis de proteínas
•tetraciclinas Streptomyces spp. ““““
•vancomicina Arnycolatopsis orientalis ““““
•viomicina Streptomyces griseus ““““

Antifúngicos

•anfotericina B Streptomyces nodosus interfiere con función de membrana

•Griseofulvina PeniciIIium griseofulvum daña la membrana celular
•lipopéptidos
•iturina A BaciIIus subtilis interfiere con función de membrana
•Surfactina BaciIIus subtilis ““““
•nistatina Streptomyces noursei daña la membrana celular
 BIBLIOGRAFIA
• Microbiología médica de Jawetz, Melnick y
Adelber. Editorial el manual moderno.

• Biología de los Microorganismos. Brock.

• Microbiología . Lansing M. Prescott.

MacGraw-Hill, Interamericana

• Introducción a la Microbiología. John L.

Ingraham. Editorial Reverté.