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INTRODUCCIÓN ............................................................................................................. 2

OBJETIVO GENERAL ..................................................................................................... 3

REGLAMENTO GENERAL DE LOS LABORATORIOS .................................................. 3

INDICACIONES GENERALES PARA EL DESARROLLO DE LAS PRÁCTICAS ........... 6

Equipos de trabajo: ...................................................................................................... 7
Limpieza y seguridad de laboratorio: ........................................................................... 7
Permanencia en laboratorio: ........................................................................................ 7
Prácticas de laboratorio: .............................................................................................. 8
Evaluación de laboratorio:............................................................................................ 8

ELABORACIÓN Y ENTREGA DE REPORTES DE LABORATORIO .............................. 8

PRÁCTICA No. 1 ....................................................................................................... 10

PRÁCTICA No. 2 ....................................................................................................... 12
PRÁCTICA No. 3 ....................................................................................................... 15
PRÁCTICA No. 4 ....................................................................................................... 17
PRÁCTICA No. 5 ....................................................................................................... 21
PRÁCTICA No. 6 ....................................................................................................... 23
PRÁCTICA No. 7 ....................................................................................................... 26
PRÁCTICA No. 8 ....................................................................................................... 28
PRÁCTICA No. 9 ....................................................................................................... 31
PRÁCTICA No. 10 ..................................................................................................... 34
PRÁCTICA No. 11 ..................................................................................................... 37

ANEXOS ........................................................................................................................ 39
RÚBRICA PARA EVALUAR UN INFORME DE PRÁCTICA ...................................... 39
INFORMACIÓN COMPLEMETARIA PRÁCTICA No. 1 ............................................. 40
INFORMACIÓN COMPLEMENTARIA PRÁCTICA No. 2 .......................................... 42
INFORMACIÓN COMPLEMENTARIA PRÁCTICA No. 4 .......................................... 43
INFORMACIÓN COMPLEMETARIA PRÁCTICA No. 5 ............................................. 45
INFORMACIÓN COMPLEMETARIA PRÁCTICA No. 7 ............................................... 47
CARIOTIPO HUMANO DESORDENADO ................................................................. 49
INFORMACIÓN COMPLEMENTARIA PRÁCTICA No. 10 ........................................ 50
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El presente Manual de Laboratorio de Biología celular reúne las prácticas a
desarrollar en las sesiones de laboratorio de la asignatura, recopila la información
necesaria para su realización e indica los pasos principales de la experimentación, de
tal manera que los estudiantes cuentan con la herramienta teórica básica para la
realización exitosa de las prácticas.

Este material de apoyo didáctico ha sido diseñado para servir de apoyo tanto
para los alumnos como para los instructores, el proceso de experimentación en un
laboratorio escolar es fundamental para relacionar y aplicar los conocimientos
adquiridos en clase y reforzar el proceso de enseñanzaaprendizaje, sin importar la
orientación científica por la que se inclinen los alumnos.

Para que el alumno desarrolle las capacidades de resolución de problemas es

necesario proporcionarle un ambiente donde tenga la oportunidad de encontrarse con
casos y/o situaciones que lo motiven a experimentar. El proceso constante de
integración de información requiere apoyarse en la construcción de ideas, y es ahí
donde las actividades experimentales propician la reorganización y clarificación de
conocimientos que facilitan alcanzar un aprendizaje significativo.

Así pues, el seguimiento y la aplicación del método científico en un proceso de

experimentación culmina con encontrar una respuesta a cuestionamientosque surgen
en base a sucesos reales; los objetivos del laboratorio de Biología celular, es extrapolar
a casos reales problemáticas revisadas en teoría, donde el alumno podrá sugerir
posibles soluciones en base a datos arrojados por un proceso de experimentación
desarrollado por el mismo.

  
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El objetivo general que persigue el presente Manual de Laboratorio como
herramienta de trabajo es que el alumno tenga a su alcance la información necesario
referente a la reglamentación del uso y permanencia de laboratorio, asi como la
temática de cada una de las prácticas permitiendo asi avanzar favorablemente en la
práctica.
Las ilustraciones y ejemplos que contienen las practicas aquí propuestas
respaldan y demuestran los resultados de las practicas, de ésta manera, el alumno
podrá apoyarse en las mismas para elaborar un informe de laboratorio completo y al
nivel de trabajo que la materia y la sesión práctica exija.

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Este reglamento es de observancia obligatoria para cualquier persona que ingrese o
visite nuestros laboratorios.
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1. Presentarse preparados previa lectura de la práctica correspondiente de su
manual de laboratorio.
2. Usar bata de laboratorio manga larga, limpia, abotonada, pantalón al tobillo,
zapato cerrado con tacón máximo de 6 cm de altura, cabello recogido, uñas
cortas. La bata será de uso exclusivo para las prácticas y no deberá portarse
fuera del laboratorio o clínica.
3. Portar credencial de identificación visible en todo momento.
4. No presentarse bajo el influjo de bebidas alcohólicas o cualquier otra droga.
5. Mantener sus pertenencias fuera del área de trabajo o en espacios asignados
por el profesor del laboratorio.
6. $%& introducir alimentos, bebidas, mascotas fumar, gritar, correr, jugar y
sentarse en las mesas de trabajo. El uso de accesorios, joyería y alhajas. El uso
de celulares o sistemas de comunicación móvil.
7. Lavarse las manos antes y después de trabajar de cada sesión.
8. Mantener limpia, ordenada y/o saneada su área de trabajo, antes y después de
realizar la actividad.
9. El usuario deberá de contar con material de limpieza de acuerdo a las
actividades realizadas.
10. Uso de equipo de protección personal (guantes de látex, goggles, mascarilla,
etc) durante la permanencia dentro del laboratorio, de acuerdo a la actividad a
realizar.
11. Mantener las puertas y ventanas cerradas en caso de que la actividad a realizar
así lo requiera.
12. Reportar incidentes o accidentes por leve que sean con o sin lesión, condiciones
inseguras y equipo dañado al personal de laboratorio o al responsable del
laboratorio.
13. No trate de atender un accidente o contingencia para lo cual no ha sido
capacitado.
14. En simulacros o contingencias obedecer las disposiciones de seguridad
indicadas por el profesor, coordinador o responsable del evento.
15. No distraer a sus compañeros durante la manipulación de material, equipo y
sustancias.

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16. Respetar horarios de actividades y en caso de no terminar la actividad en su
horario, solicitar acceso al responsable.
17. No se podrán realizar prácticas sin la supervisión de un responsable del
laboratorio.
18. No mover, sustraer, manipular o hacer uso indebido de equipo sin autorización,
así como sistemas de cómputo y transmisión de datos.
19. En caso de ruptura o daño del material de laboratorio este deberá ser repuesto
en un lapso no mayor de 15 días.
20. Disponer los residuos generados en la práctica en su contenedor
correspondiente bajo supervisión del técnico académico, responsable del
laboratorio o por personal capacitado para ello. Es responsabilidad del instructor
de laboratorio proporcionar la información acerca de la disposición de residuos.
21. Prohibido verter sólidos o sustancias peligrosas en los lavabos.
22. Prohibido visitas no autorizadas. (Los responsables del laboratorio o dirección
son los que autorizan las visitas y deberán de advertir a los visitantes sobre los
riesgos y medidas de seguridad del laboratorio).
23. El responsable de la sesión o actividad que se realice, deberá supervisar el
desarrollo de la misma.
24. Los alumnos que tengan asignada gaveta o área mantenerla limpia, en buenas
condiciones y desocuparla en el tiempo establecido por el CISALUD.
25. No se podrá guardar reactivos, ni muestras biológicas en las gavetas de los
alumnos.
26. Respetar las condiciones de seguridad y funcionalidad del laboratorio.
27. El responsable de la sesión o actividad, deberá anotar, las cantidades utilizadas
de reactivos y lo que genere de residuos en las prácticas, investigaciones o
servicios externos, en la bitácora de consumo de reactivos y generación de
residuos.
28. Se deberá notificar al coordinador de laboratorio acerca de las prácticas que
requieran muestras biológicas. En caso de ser externas, se llenará y firmará el
formato de consentimiento informado. Las muestras solo pueden ser utilizadas
con fines de docencia.
29. No se podrán tomar muestras biológicas sin la autorización y supervisión de un
responsable de laboratorio.
30. Al terminar la sesión de laboratorio, verificar que los servicios de agua y energía
eléctrica no se desperdicien.

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Por lo cual, en caso de incumplimiento parcial o total a estos lineamientos, se harán
acreedores a las sanciones correspondientes indicadas en la reglamentación
universitaria o estipulada en el contrato colectivo de trabajo según corresponda.

&Y
a) En el caso de alumnos se sancionará según lo establecido en el reglamento
universitario para alumnos.
b) En el caso de empleados o maestros se sancionará según el contrato colectivo de
trabajo SPSU o SUTU, según corresponda.
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Y Los alumnos (as) que se encuentren inscritos en el curso de Biología celular
deberán contar con el presente manual de laboratorio y presentarse con él en todas las
sesiones prácticas. Así mismo, deberán ingresar al laboratorio con conocimiento de la
práctica que se va a realizar y los materiales a utilizar (en caso de ser necesario que
los alumnos traigan algún material).

„

 
Los alumnos (as) serán asignados el primer día de curso a un equipo de trabajo
para todo el semestre, en cada práctica se dotará a cada equipo del material de trabajo
que utilizará, responsabilizándose de la integridad del mismo para entregarlo al finalizar
la práctica. El material o equipo que sea destruido o perdido será restituido por los
alumnos responsables.
Se pretende que los equipos en las mesas de trabajo no sean numeroso, de ésta
manera, la sesión de laboratorio se hará más eficiente y todos los alumnos podrán
tener acceso al trabajo.




 

El aseo del laboratorio es de primordial importancia, por lo que los alumnos (as)
deberán cooperar en el mantenimiento de la limpieza de su mesa de trabajo y del
material que así lo requiera. Deberán limpiar con solución desinfectante el área de
trabajo ANTES de empezar y al TERMINAR la práctica.Los alumnos (as) son
responsables de que las llaves de agua y de gas de sus mesas de trabajo queden
debidamente cerradas al finalizar cada práctica.
Se requiere que los alumnos aporten ciertos materiales para el mantenimiento y
trabajo en el laboratorio. Sin falta, para cada sesión traer:
A Por grupo: Un encendedor y una cinta adhesiva.
A Por mesa de trabajo: Un rollo de papel para limpieza y una botella de
jabón líquido.
A Por equipo: Un atomizador y un plumón negro permanente de punta extra
fina (Sharpie)
A Vndividual: Bata de laboratorio, lentes de seguridad, guantes de látex,
cuaderno de uso exclusivo para el laboratorio.
Los alumnos (as) que no aporten el material que les sea solicitado para alguna
de las prácticas no podrán entrar al laboratorio.

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 Los alumnos deberán permanecer en laboratorio mientras el instructor así lo
indique, se planeará el trabajo de manera que la práctica se complete puntualmente, y
los alumnos puedan salir del laboratorio 10 minutos antes de la próxima clase o

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práctica, previendo el tiempo que utilizarán para recoger, ordenar el material y limpiar
su mesa.
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Para la elaboración de los informes de laboratorio, los alumnos deberán
consultar el formato general para su realización que se encuentra seguido del
reglamento general del uso de laboratorios. Y
Y
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La evaluación de los alumnos en laboratorio incluye, además de la realización
del informe de práctica, mantener una buena conducta, demostrar destreza en el
desarrollo de los experimentos, tener una actitud de compañerismo, trabajo y respeto
basado en valores, estos aspectos serán considerados para su evaluación final.
La calificación obtenida en cada informe de laboratorio estará basada en los
requisitos que marca una rúbrica de evaluación (anexo 1), la cual precisa los puntos a
seguir para elaborar un reporte de la laboratorio completo.

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Los reportes de las prácticas realizadas en el Laboratorio de Biología Celular,
deberán ser entregados la siguiente semana de haberse realizado la práctica y deberán
contener los siguientes rubros:

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 Nombre de la Universidad, unidad universitaria ó facultad.
 Materia y nombre el maestro
 Grupo y subgrupo al que pertenece
 Título de la práctica, nombre del alumno y fecha de entrega

ë )Y
 Fundamentos y marco teórico

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 Materiales utilizados
 Descripción breve de las técnicas o métodos experimentales utilizados

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 Descripción de los resultados obtenidos. Tablas, Figuras, Gráficas, etc.

ë Y
 Resolución de los cuestionamientos y temas a investigar.Y

ë )Y
 Análisis de los resultados obtenidos y comparación de tus resultados con
los de otros trabajos, ya sean internos (compañeros) o de investigación
bibliográfica. Observaciones y/o recomendacionesY

ë  Y
 Plasmar las conjeturas a las cuales llegaron después de la realización de
la práctica y habiendo analizado y comparado los resultados.Y

ë -Y%% ./-&Y
 Libros, artículos, sitios de internet, colaboración y discusiones con
maestros y compañeros de clase. Debidamente citados.Y
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 De considerarlo necesario agregar un sección al final del informe donde
se encuentre material de apoyo.Y

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(&Y Introducción al curso de Biología celular y bases
químicas de la biología.Y

  
Y!
& Que el alumno revise y se informe respecto a la normatividad
vigente del uso de laboratorio, sus obligaciones con respecto al mismo y las sanciones
a las que se hará acreedor en caso de incumplimiento de las mismas. Así mismo, que
identifique, maneje, envase y recolecte, los residuos peligrosos biológico infecciosos
(R.P.B.I.) en forma adecuada y segura, de acuerdo a la NOM-087-ECOL-2002 y/o
NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002 y que conozca los principales métodos de
desinfección.
Y



Y Y Y ' &Es de suma importancia que los alumnos
conozcan el reglamento vigente de laboratorio ya que infringir las normas de seguridad
y disciplina entorpecen las prácticas de laboratorio además de poner en riesgo la
seguridad y salud de los estudiantes. Así mismo, la realización de las prácticas del
Laboratorio de Biología Celular, se generan R.P.B.I. por lo que es importante conocer y
aplicar la Norma Oficial Mexicana NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002 (ás
información, ver anexo 2).
Y
 &Y
a) Recipientes y bolsas especiales para depósito de R.P.B.I.
b) Jeringas, tubos, gasas, asas de inoculación, caja petri, etc.
Y



!"&Y
- Primera parte:
a) El reglamento deberá ser leído íntegramente en la primera sesión de trabajo. El
instructor (a) hará del conocimiento del alumnado la serie de requisitos y
obligaciones vigentes para el uso del laboratorio.
b) El instructor (a) explicará las sanciones en caso de desobedecer el reglamento.
c) Después de haber desarrollado el tema en cuestión el instructor (a) resolverá las
dudas del alumnado con respecto al uso del laboratorio.

- Segunda parte:
a) El instructor explicará a los estudiantes la generación, uso y manejo de los
residuos peligrosos biológico infecciosos en el laboratorio.
b) Los alumnos llevará a cabo un simulacro de depositación de R.P.B.I mediante la
colocación de materiales, presentados por el instructor, en los recipientes
señalados según la naturaleza de los mismos como sigue:
1. Identifique y separe los materiales de acuerdo a la Tabla 1 (anexo 2).

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2. Identifique y envase los materiales en los recipientes adecuados de acuerdo
a la Tabla 2 (anexo 3).
3. Identifique el área de depósito de los R.P.B.I. en el Laboratorio.

  
:Al finalizar la práctica de laboratorio se espera que el alumno cuente con
el conocimiento necesario para permanecer en el laboratorio bajo las normas de
seguridad, así como el correcto confinamiento de los R.P.B.I. Anotar en su bitácora de
laboratorio los resultados obtenidos.
Y


 

&Plasmar las conjeturas a las que el alumno llegó con la realización de
la práctica, así como la utilidad de la misma en su profesión.Y
Y
  


&Y
1. ¿Qué es un residuo peligroso biológico infeccioso?
2. ¿Por qué es importante el buen manejo de los residuos peligrosos biológico
infecciosos dentro del laboratorio?
3. Enliste los residuos peligrosos biológico infecciosos que identifique dentro de
las actividades relacionadas con el laboratorio.
4. ¿La orina y excremento se consideran residuos peligrosos biológico
infecciosos?
Y
Y
#
Y ' &La generación y manejo de los R.P.B.I. es una práctica
habitual en el ejercicio profesional de las ciencias medicas, por tal motivo, en cualquier
caso clínico será de mucha utilidad saber sobre el confinamiento de este tipo de residuos.Y
Y

!"&Y
- NOM 087 SEMARNAT SSA1 2002
- http://www.cdc.gov/ncidod/dhqp/pdf/bbp/Exp_to_Blood.pdf
- http://msds.ehs.cornell.edu/msdssrch.asp

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(&Estructura de la célula. Diferenciación celular.Y

  
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&Al finalizar la práctica el estudiante conocerá el manejo
adecuado del microscopio óptico mediante la observación de laminillas e identificación
de diferentes tipos celulares. Conocerá de manera teórica los tipos avanzados de
microscopía óptica y electrónica más utilizados, sus principios de funcionamiento y
utilización (contraste de fase, interferencia diferencial, marcadores fluorescentes, TEM,
SEM, etc.).
Y



Y Y Y ' &Dadas las dimensiones extremadamente
pequeñas de los objetos materiales que estudia, la biología celular y molecular
depende más de instrumentos y técnicas en comparación a cualquier otra rama de la
biología. Por consiguiente, para estudiar estas materias es necesario conocer y
manejar adecuadamente un microscopio de luz, instrumento que permitió a los biólogos
descubrir la existencia física de la célula.
Adicionalmente al uso del microscopio óptico tradicional, existen técnicas
avanzadas de microscopía que nos permiten visualizar de una manera más precisa la
estructura interna de la célula, ya sea porque permiten un grado mayor de resolución
de la imagen o por resaltar ciertos componentes o compartimientos celulares. Las
técnicas de microscopía óptica por contraste de fase e interferencia diferencial utilizan
las diferencias en el modo de transmisión de la luz a través de regiones celulares con
diferente índice de refracción. El uso de marcadores fluorescentes que se fijan a
moléculas específicas, permite su visualización al absorber la luz de una cierta longitud
de onda y emitirla en otra longitud de onda (más larga). Las técnicas de microscopía
electrónica permitan visualizar estructuras celulares más allá de la limitación impuesta
por la longitud de onda de la luz visible (200 nm) (microscopía electrónica de
transmisión), y es posible incluso observar estructuras de manera tridimensional
(microscopía electrónica de barrido) (ás información, ver anexo 3).
Y
 &Y
a) Microscopio óptico.
b) Laminillas con diferentes tipos celulares.
c) Papel y líquido para limpieza de lentes de microscopio.
d) Aceite de inmersión.
e) Imágenes representativas de los diferentes tipos de microscopía avanzada.
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A. El alumno (a) deberá dominar los siguientes temas antes de iniciar la práctica:

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1. Unidades y equivalencias correspondientes a micrómetros (ȝm) y nanómetros
(nm).
2. Cuanto miden generalmente las células procariotas y las eucariotas.
3. Cuál es la longitud de onda del espectro visible en humanos.
B. El instructor (a) demostrará imágenes representativas de cada una de las técnicas
avanzadas de microscopía.
C. El instructor (a) demostrará los elementos más importantes de un microscopio
óptico.
D. Se observarán diferentes laminillas bajo el microscopio con el siguiente
procedimiento:
a) Coloque la laminilla sobre la platina, en el centro, deslizando los clips
sujetadores.
b) Verifique que el objetivo que esté colocado para la visualización sea el de
menor aumento.
c) Coloque mediante el movimiento de la platina la muestra de estudio en el
centro.
d) Mediante el ajuste macrométrico, y bajo la visión directa de la platina, acercar
la platina al objetivo hasta alcanzar una distancia de 2 mm. aproximadamente
entre el cubreobjetos y el objetivo.
e) Posteriormente viendo a través del ocular y usando el ajuste micrométrico,
enfocar la muestra a observar. Ajustar el diafragma para mejorar la
iluminación.
f) Una vez observando las características de la muestra con el objetivo menor,
cambiar el objetivo por el siguiente de mayor aumento. Enfocar la imagen
con el ajuste micrométrico y observar la diferencia.
g) ³Barrer´ la muestra a través de movimientos de arriba hacia abajo en forma
de ondas.
h) Cambie nuevamente el objetivo hacia el de mayor aumento. Ajuste
nuevamente la imagen con el ajuste micrométrico y ajuste el diafragma para
mejor iluminación.

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E. Los alumnos (as) observarán y realizarán un dibujo de lo observado de las laminillas

de diferentes tipos celulares.

  
: Consignar en cuaderno de prácticas y en su reporte las imágenes de los
diferentes tipos celulares observados.Describir en el reporte, el principio de
funcionamiento, ventajas y desventajas de cada técnica de microscopía avanzada,
incluyendo imágenes representativas de cada una de ellas.
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&Y Consignar en el reporte las conclusiones relativas a la importancia
del microscopio óptico en la investigación biomédica y práctica clínica, así como el uso
de las diferentes técnicas de microscopía avanzada.Y
Y
#
Y' : El adecuado manejo del microscopio óptico permite observar
diferentes tipos, características y organizaciones inter e intracelulares, en el ejercicio
medico se utiliza ampliamente en el diagnóstico clínico y actualmente, con microscopias
más finas, para estudiar enfermedades a nivel molecular.Y
Y

!"&Y
1. Karp, G. 2001. Biología Celular y Molecular. ISBN: 9701016440
2. Albertset al. 2006. Essential Cell Biology: An Introduction to the Molecular Biology
of the Cell. Garland Publishing, Inc. ISBN 0-8153-2045-0

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(&Generalidades de la organización y estructura
celular.Organelos.Y

  
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&Observar células animales al microscopio y sus principales
estructuras, así como iniciarse en las técnicas de realización de preparaciones.




Y Y Y ' &Todas las paredes de la cavidad bucal están
tapizadas por mucosa. La mucosa es una superficie húmeda, que consta de un
revestimiento epitelial y tejido conjuntivo. Las células en su estado natural, son casi
invisibles al microscopio convencional. Una manera de hacerlas visibles es teñirlas con
colorantes orgánicos selectivos. La Coloración es el proceso mediante el cual un
cuerpo es teñido por una sustancia colorante, sin perder el color cuando es lavado con
el disolvente utilizado al preparar la solución colorante. Los colorantes se comportan
como compuestos ácidos o básicos y tiene la tendencia de formar uniones
electrostáticas con los radicales ionizables de los tejidos.

 &Y
A Células epiteliales de la mucosa bucal
A Microscopio
A Portaobjetos
A Cubreobjetos
A Gotero
A Papel para la limpieza del microscopio
A Aplicadores de madera o hisopos
A Azul de metileno
A Puente para tinción
Y



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1. Tomar un portaobjetos y un cubreobjetos bien limpios y secos.
2. Tirando del labio inferior hacia fuera, raspar la parte interna del mismo con el borde
del portaobjetos o con el palillo.
3. Colocar una gota de agua en el centro del portaobjetos.
4. Con un palillo, extender la mucosa extraída y dispersarla en la gota de agua. A esto
se le llama realizar un frotis.
5. Teñir las preparaciones con una gota de azul de metileno.
6. Colocar el cubreobjetos.
7. Observar al microscopio, enfocando progresivamente con los objetivos de mayor
aumento.
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:La fotografía muestra un ejemplo de las células que se observarán en el
microscopio después de la preparación.

Imagen de una célula de la mucosa bucal teñida con azul de

metileno. Se indican dos de sus organelos.

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Y


 

&El alumno indicará el aprendizaje obtenido a partir de la realización de
la práctica, así como su comentario final al respecto de las observaciones.Y
Y
  


&Y
a. Dibuje lo observado con cada objetivo.
b. Indique en su imagen o dibujo las partes de la célula que alcance a distinguir
c. ¿Cómo debe procederse para colocar el cubreobjetos?
d. ¿Qué diferencias se observan entre las células teñidas y las no teñidas?
e. ¿Se observa algún orgánulo citoplasmático?
f. ¿Porqué las células retienen los colorantes?
g. ¿Cuáles colorantes se utilizan para teñir células eucariotas, además del azul de
metileno?

#
Y ' &Se utilizan tinciones específicas para observar ciertas

características celulares como la organización de organeloso resaltar de manera especial
alguna característica o componente celular.
Y

!"&Y
1. Karp, G. 2001. Biología Celular y Molecular. ISBN: 9701016440
2. Albertset al. 2006. Essential Cell Biology, An Introduction to the Molecular
Biology of the Cell. Garland Publishing, Inc. ISBN 0-8153-2045-0
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(&YTejido sanguíneo.Y

  
Y!
&Conocer el protocolo básico para la obtención de una muestra
sanguínea mediante la punción venosa.
Y



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La sangre se compone de células suspendidas en un líquido llamado plasma. El
color de la sangre se debe a los eritrocitos (glóbulos rojos), los cuales contienen el
pigmento hemo; también hay leucocitos (glóbulos blancos) y trombocitos (plaquetas).
Las características físicas de la sangre incluyen una temperatura aproximada de 38ºC,
un pH promedio de 7.4 aunque varía de 7.35 a 7.45 que le da una ligera alcalinidad.

La técnica de venopunción es muy común en la práctica clínica, se realiza

cotidianamente con fines de diagnóstico y es de suma importancia que los alumnos
conozcan el procedimiento y los realicen exitosamente (ás información, ver anexo 4).

 &Y
a) Guantes de látex
b) Brazo para realizar la técnica de venopunción
c) Torniquete
d) Torundas de algodón
e) Alcohol
f) Jeringas con aguja
g) Tubosvacutainer
h) Cintaadhesivaredonda (Curita)
i) Contenedores de RPBI
j) Marcadorpermanente
k) Agujarvacutainer
l) Portavacutainer




!"&Y
 cnica de extracciónsanguínea
1. Lavarselasmanos.
2. Preparar el equiponecesario.
3. Identificar al paciente y explicar el procedimiento, esto ayuda a reducir ansiedad.
4. Seleccione la vena que va a puncionar, teniendo en cuenta el flujo venoso.
Inicie por la parte distal a la proximal de la extremidad (región cubital del brazo)

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5. Si se utiliza el sistema vacutainer, se debe enroscar la aguja en el capuchón
plástico y se coloca (sin insertar) el tubo por el otro extremo del capuchón. El
borde del tapón de color debe alcanzar la delgada línea de guía en el capuchón.
No ejerza presión sobre el tubo, si se sobre pasa la línea descarte el tubo ya que
pudo haberse liberado el vacío.
6. Si se utiliza el método con jeringa, abrir el paquete, asegurar la aguja en la
jeringa, soltar el tapón de la aguja (sin retirar hasta que vaya a ser utilizado) y
mover el embolo hacia arriba y abajo.
7. El brazo deberá estar extendido en una posición donde la palma de la mano
quede hacia arriba.
8. Aplique un torniquete adecuadamente aproximadamente de 4 a 6 centímetros de
distancia por encima del sitio donde realizara la punción, esto es para que las
venas se salten.
9. Ponerse los guantes de látex.
10. Se escoge una vena apropiada para la punción. Con el dedo índice, se palpa el
brazo hasta encontrar la mejor vena, si no se siente una vena se puede buscar
en el otro brazo.
11. Limpiar el sitio con una torunda con alcohol en un movimiento circular
comenzando del sitio de la punción hacia afuera, o bien con un barrido, evitando
pasar el algodón varias veces por el mismo sitio.
12. Deje que el alcohol se evapore.
13. Estabilice la vena colocando el dedo pulgar de la mano no dominante
aproximadamente a 4 cm del sitio de punción y jalar la piel para tensarla y evitar
que la vena se mueva.
14. Insertar la aguja con el bicel hacia arriba, en un movimiento lento y suave con
una angulación aproximada de 15 a 30 grados. No se requiere empujar mucho la
vena ya que se puede atravesar. Esconvenientemantener la agujaalineada con
la vena.
15. Una vez canalizada la vena se observara en la aguja una gotita de sangre.
16. Si se utiliza el método de aguja y jeringa se puede mover el émbolo hacia atrás
para succionar la sangre.
17. Si se utiliza el sistema vacutainer, entonces se deberá fijar la aguja en la vena,
sostenga de manera firme el dispositivo base y se deberá empujar únicamente el
tubo sobre el capuchón para que se active el vacío y salga la sangre. El tubo se
llenara hasta aproximadamente ¾ de su volumen (hasta que el mismo vacio del
tubo se lo permita).

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18. Retirar el torniquete antes de extraer la aguja, de preferencia en cuanto empiece
a llenar los tubos, es importante no mantener el torniquete por un tiempo
prolongado ya que esto le pudiera afectar en alguno de sus resultados
19. En cuanto se retira la aguja se debe colocar una torunda seca o gasa
ligeramente humedecida con alcohol sobre el sitio de punción aplicando una
presión firme, esto ayuda a disminuir el riesgo de formación de hematoma.
20. Colocar cinta adhesiva piel o curita redonda (si se cuenta con ella) sobre el sitio
de punción.
21. Si se utilizó el método de aguja y jeringa, con la aguja puesta se puede encajar
en un tubo Vacutainer y automáticamente se vaciara la sangre al tubo. Si se
utiliza un tubo de ensayo de vidrio entonces se deberá retirar la aguja y
depositará la sangre lentamente dejando que esta corra por las paredes del
tubo.
22. En caso de que requiera del llenado de varios tubos estos deberán llevar un
orden de tal manera que no se vea afectada ninguna de las muestras. (*
valorarsiesnecesarioestepunto o no)
23. Descarte la aguja como un RPBI (objeto punzocortante) de acuerdo a la
legislación aplicable.
24. De manera suave invertir los tubos con la muestra de 8 a 10 veces.
25. Etiquete los tubos con el nombre del paciente, fecha, hora, número de
identificación, o de acuerdo a l procedimiento de laboratorio.
26. Retire los guantes y deposítelos en la bolsa roja para RPBI no anatómicos.
27. Lavarselasmanos.

Y
  
: Anotar los resultados de la venopunción realizada por cada uno de los
alumnos.
Y


 

&YDefinir los aciertos, errores y anotaciones pertinentes para una buena
práctica, finalizando con una conclusión que aporte acerca de la importancia de ésta
técnica en la práctica clínica.
Y
  


&Y
a) Elabore un cuadro sinóptico con los componentes de la sangre
b) ¿Cuál es la función del plasma?
c) ¿Cuál es la diferencia entre el suero y plasma?
d) Mencione las venas que comúnmente se utilizan para obtener muestras de sangre.
e) ¿Qué es la venopunción?
f) ¿Qué actitudes se deben tomar en cuenta durante la práctica?

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Y ' &La aplicación de ésta técnica de venopunción es

prácticamente diaria, por lo cual los estudiantes deberán contar con ésta habilidad al
terminar el curso práctico.
Y

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1. Sánchez, Uribe, Flores. 2008.Manual de Prácticas de Bioquímica, 2ª edición. Mc
Graw Hill.
2. Medical assisting, Laboratory procedures- module E, 2007. 3rd. Edition. Perason
Custom Publishing.
3. BectonDickinson. Guía para la flebotomía. Disponible en la red:
http://www.mydigitalpublication.com/display_article.php?id=276304

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(&YMembrana celular. Transporte. Ósmosis

  
Y !
&Al finalizar la práctica el alumno(a) comprobará
experimentalmente la fragilidad osmótica de la membrana eritrocitaria y verificará el
efecto de los detergentes en las membranas celulares.




Y Y Y ' &La membrana eritrocitaria es la más sencilla de
las membranas celulares. Esta consta de una doble capa lipídica y un esqueleto
proteico en su cara citoplasmática. La morfología del eritrocito depende de la
osmolaridad del medio en que se encuentra. En condiciones fisiológicas (osmolaridad
de 290 mOsm/Kgr), el eritrocito tiene forma de disco biconcavo.
En ésta práctica se visualizarán al microscopio los cambios morfológicos del
eritrocito en medios hipertónico, isotónico e hipotónico.
Y
 &Y
1. Microscopio óptico.
2. Laminillas portaobjetos
3. Cubreobjetos
4. Papel y líquido para limpieza de lentes de microscopio.
5. Aceite de inmersión.
6. 500 ml de Solución estéril de NaCl al 1.8%
7. Agua destilada
8. 20 ml de solución de sodio-dodecil-sulfato (SDS) al 0.1%
9. 4 tubos de microcentrífuga de 1.6 ml
10. 1 Jeringa de 10 ml con aguja
11. Ligadura para venoclisis
12. Antiséptico para limpieza de piel antes de la venopunción
13. 1 tubo recolector de sangre con EDTA o heparina
14. Contenedor para productos contaminados con sangre
Y



!"&Y
1. Antes de la práctica, el alumno estudiará los conceptos de ósmosis, difusión y los
principales tipos de transporte de solutos a través de las membranas celulares.
2. Se obtendrá sangre fresca (aprox. 5 ml) de uno de los alumnos del subgrupo,
utilizando la técnica apropiada de venopunción y se transferirá la sangre a un tubo
conteniendo EDTA o heparina.
3. Preparar una solución NaCl al 1.8% en 1.5ml de agua desionizada.
4. A partir de la solución NaCl al 1.8%, realizar diluciones para obtener las
soluciones de NaCl al 0.9% y al 0.45%.

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5. Agregar 1 gota de SDS al 0.1% a una de las soluciones al 0.9%.
6. Colocar 1 gota de sangre a cada una de las soluciones. Mezcle con cuidado.
7. Aplique 1 gota de cada una de las suspensiones obtenidas en una laminilla
portaobjetos y cubra cuidadosamente con un cubreobjetos. Visualize la
morfología eritrocitaria al microscopio.
Y
  
:
a) Describa en su reporte la morfología observada en cada tipo de solución de NaCl y
con el SDS.
b) Realice un dibujo (a mano, no copiar una imagen) de la membrana eritrocitaria,
indicando la doble capa lipídica y la estructura detallada del esqueleto proteico.
Y


 

&Y Consignar en su reporte las conclusiones relativas a la fragilidad
osmótica del eritrocito.
Y
  


&Y
a) ¿A qué se le denomina fantasma de eritrocito?
Y

!"&Y
1. Karp, G. 2001. Biología Celular y Molecular. ISBN: 9701016440
2. Albertset al. 2006. Essential Cell Biology, An Introduction to the Molecular
Biology of the Cell. Garland Publishing, Inc. ISBN 0-8153-2045-0
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(&YTejido sanguíneo.

  
Y !
&El alumno aprenderá a utilizar la cámara de Neubauer con la
finalidad de realizar un conteo celular de tejido sanguíneo.




Y Y Y ' &El recuento de las células hemáticas, tanto de
eritrocitos como de leucocitos, es una de las pruebas clásicas en analítica clínica. El
recuento de plaquetas no se suele hacer, salvo cuando se sospecha que el paciente
tiene alguna anomalía grave (normalmente de tipo leucémico).Y
Estas pruebas tienen por objeto determinar la concentración de los distintos tipos
celulares presentes en la sangre. Permiten detectar anomalías como anemias y
policitemias en el caso de los glóbulos rojos, y leucopenias y leucocitosis en los de los
glóbulos blancos.En el recuento leucocitario no existe distinción entre las diferentes
sub-poblaciones leucocitarias normales, si no que se hace referencia a la
concentración total de leucocitos en la sangre. Los límites normales para adultos están
situados entre 4500 y 11000 células por mm3.
La sangre debe estar con anticoagulante EDTA u oxalato de sodio.

 &Y
1. Cámara de recuento de Neubauer.
2. Cubre cámara.
3. Pipeta automática de 10-100 micro litros.
4. Pipeta automática de 10 micro litros.
5. Solución, diluyente para sangre. (liquido de turk)
6. Microscopio.
Y



!"&Y
1. Tomar 10 micro litros de sangre total y colocar en un tubo de 0.2 mililitros.
2. Agregar 90 micro litros de diluyente de turk.
3. Mezclar vigorosamente con un homogeneizador.
4. Tomar una gota y llenar las 2 cámaras de recuento.
5. Contar los leucocitos en los 4 cuadrantes de las esquinas con el objetivo de 40X.

Un consejo al momento de realizar la cuantificación: en ocasiones pueden

aparecer células que se encuentren entre 2 cuadros, en estos casos es conveniente
aplicar un criterio para evitar duplicar su recuento, este puede ser el contabilizar a las
células que se encuentren entre las líneas superior e izquierda como presentes en ese
cuadro.

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Las células se cuentan en cada uno de los cuadros pequeños, primero de
izquierda a derecha, empezando por la parte superior de 4 cuadrados pequeños y
luego de derecha a izquierda para la próxima hilera y así sucesivamente. El número de
células de cada uno de los 8 grupos de 16 cuadrados cada se registran por separado y
se suman los resultados.

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Profundidad de la cámara de
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Y recuento
Y
VALORES DE REFERENCIA: 4000 a 9000 células por micro litro.

FORMULA:

No. de células en 4 cuadrantes X 10 (1 mm3) X 10 (dilución)

Número de leucocitos = 4

Número de leucocitos = Número de de células en 4 cuadrantes x 25 células x micro

litro.

  
: Calcular el número de células por micro litro de sangre total.



 

&Y Consignar en su reporte las conclusiones relativas a la fragilidad
osmótica del eritrocito.

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1. ¿Cómo se miden las poblaciones celulares?
a) Describa tres técnicas directas.
b) Describa tres técnicas indirectas.
2. ¿Qué estudia la citometría?
Y
#
Y ' &Algunas enfermedades son detectables por medio de la
determinación de concentraciones, presencia y/o ausencia de algunas formas celulares,
tal es el caso de algunas enfermedades como la leucemia, cuya cantidad de glóbulos
blancos aumenta de manera anomal, provocando esta patología en los pacientes.
Y

!"&Y
1. Karp, G. 2001. Biología Celular y Molecular. ISBN: 9701016440
2. Alberts et al. 2006. Essential Cell Biology, An Introduction to the Molecular
Biology of the Cell. Garland Publishing, Inc. ISBN 0-8153-2045-0
Y
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YY5 Y
(&YComposición y propiedades del núcleo. Patrones de
bandeo. Anormalidades cromosómicas.Y

  
Y !
&Aprender a reconocer los cromosomas humanos. Elaborar un
cariotipo a partir de una fotografía y saber determinar las anomalías cromosómicas más
frecuentes.




Y Y Y ' &El cariotipo es el complemento cromosómico
particular de un individuo y viene definido por el número y morfología de los
cromosomas en la metafase mitótica. En la especie humana la dotación cromosómica
es de 2n = 46 (22 pares de autosomas y un par de cromosomas sexuales). Utilizando
técnicas de tinción estándar los cromosomas aparecen uniformemente teñidos en
metafase y se clasifican en 7 grupos de la A a la G atendiendo a su longitud relativa y a
la posición del centrómero que define su morfología. Hay cromosomas grandes,
medianos y pequeños. Dentro del cariotipo humano podemos encontrar cromosomas
metacéntricos (tienen los dos brazos aproximadamente iguales en longitud),
submetacéntricos (con un brazo más pequeño que otro) y acrocéntricos (con un brazo
corto muy pequeño)å er anexo 6).
Y
 &Y
1. Imagen de un cariotipo humano.
2. Idiograma
3. Tijeras
4. Cinta adhesiva o goma.
Y



!"&Y
1. Se les proporcionará una imágen de un cariotipo humano, sin anomalías
cromosómicas, de una persona sanaåanexo 7).
2. Cuente los cromosomas de la fotografía y recorte todos y cada uno de ellos.
3. Ordénelos por tamaños e identifique, por su patrón de bandas, los pares
cromosómicos. Para averiguar de qué cromosoma se trata, compárelos con el
patrón de bandas mostrado por el ejemplo.
4. Una vez ordenados los cromosomas, sujételos con cinta adhesiva o goma.
5. Indique qué cromosomas son metacéntricos, cuales submetacéntricos y cuales
acrocéntricos.

  
: Entregar el cariotipo humano organizado y clasificado según lo
requerido en la metodología.

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&YDetallar las conclusiones a las cuales llegaron al finalizar su cariotipo.
¿Pertenecía a una persona sana? ¿Enferma? ¿Hombre? ¿Mujer?.Y
Y
  


&Y
1.- ¿Qué características permiten diferenciar, en general, unos cromosomas de
otros?
2.- ¿Cuáles son las diferencias que podrían encontrarse en un cariotipo de una
persona sana y en una persona con alguna enfermedad relacionada con aberraciones
cromosómicas?
3.- ¿Cuáles son las características cromosómicas de las personas con síndrome
de down y síndrome de Turner?
Y
#
Y' & La organización de los cromosomas en un cariotipo permite
identificar ciertas anomalías cromosómicas que indican o comprueban la prevalencia de
una enfermedad, cuando se trata de un producto en gestación en ocasiones se opta por
hacer un cariotipo si se tiene la sospecha de alguna anormalidad genética.
Y

!"&Y
1. Karp, G. 2001. Biología Celular y Molecular. ISBN: 9701016440
2. Alberts et al. 2006. Essential Cell Biology, An Introduction to the Molecular
Biology of the Cell. Garland Publishing, Inc. ISBN 0-8153-2045-0
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Y !
&El alumno distinguirá las técnicas básicas de tinción para la
identificación morfológica de células sanguíneas; utilizando técnicas básicas de
microscopia óptica. Identificarán los subtipos celulares y realizarán un conteo celular.
Y



Y Y Y ' &Un procedimiento útil para el examen de
muestras es el estudio microscópico de preparaciones fijas y coloreadas por un método
adecuado. La forma más común de preparar un frotis es extender un poco de muestra
sobre un portaobjetos desengrasado, con el asa bacteriológica, pero también se puede
hacer con un hisopo ó presionando el portaobjetos sobre la muestra. Dependiendo del
tipo de célula que se desee observar es el tipo de tinción que se emplea. Los
colorantes son productos químicos sintéticos del tipo de la anilina, capaces de
combinarse con una gran variedad de sustancias confiriéndoles color. El color se debe
a la estructura química de los pigmentos. Los colorantes de alquitrán de hulla usan
bases de anillos aromáticos tales como benceno, naftaleno o antraceno. Varios grupos
químicos son ligados a los anillos aromáticos para impartir los diferentes colores. Los
grupos productores del color son llamados cromóforos, siendo los más comunes ȡ-
quinona y diazo. Ciertos grupos químicos llamados auxocromos, tales como los grupos
amino e hidroxilo ayudan a fortalecer a los cromóforos.



La tinción diferencial requiere más de un tipo de colorante y se utiliza para distinguir
entre varios tipos de células bacterianas o estructuras celulares. Una tinción diferencial
típicamente consiste de tres pasos principales: primero un colorante primario, el cual se
utiliza para teñir a todas las células en la tinción; enseguida un paso de decoloración, el
cual remueve el colorante solo de ciertos tipos de células y finalmente un colorante de
contraste, el cual tiñe las células recién decoloradas pero no tiene efecto sobre las
células que aún retienen el colorante primario.
Y
 &Y
ë Para la toma de muestra sanguínea:
 Jeringa con aguja desechable o Sistema Vacutainer®
 Tubo con anticoagulante (EDTA)
 Torniquete
 Torundas con alcohol
ë Otrosmateriales y Reactivos
 Portaobjetos

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 Alcohol
 Agua Destilada
 Colorantesparatinción de Wright
 Microscopioóptico
 Aceite de inmersión
 Recipientes RPBI
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6. Tomar una muestra de sangre por vía venosa y

depositarla en un tubo con anticoagulante
EDTA.
7. Depositar una gota de sangre en un
portaobjetos limpio, realizar la extensión con gota de
sangre
otro portaobjetos en un ángulo de 45 grados,
procurado no dejar el frotis demasiado grueso o
delgado.
8. Dejar secar el frotis y fijar con metanol, teñir enseguida con la eosina por 40
segundos, enseguida lavar y posteriormente teñir con el policromo por 30
segundos).
9. Lavar el frotis con agua de la llave o con una piceta y observarlo con el objetivo
de 40 X y 100X.

Ô



Al microscopio se verán con un dominio predominante los glóbulos rojos,

hematíes o eritrocitos teñidos de color rojo por la eosina. No tienen núcleo y son
más delgados por el centro que por los bordes.
Los glóbulos blancos o leucocitos se identifican fácilmente por la presencia de
núcleo, teñido de morado por la hematoxilina. Hay variasclases de leucocitos:
1. Linfocitos: De tamaño aproximado al de los glóbulos rojos, tienen un solo núcleo
que ocupa casi todo el glóbulo.
2. onocitos: Son los leucocitos mayores, poco frecuentes normalmente, núcleo
grande, redondo, son los más móviles y su función principal es la fagocitosis.
3. Polimorfonucleares: Núcleo fragmentado. Pueden ser eosinófilos, con
abundantes granulaciones teñidas de rojo por la eosina, así como neutrófilos y
basófilos.
Las plaquetas no son visibles ya que precisan una técnica especial de tinción.

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ß ›ealice un conteo diferencial de la subpoblación de leucocitos, contará 100
c lulas en total.
Y
  
: Dibuje los diferentes tipos y subtipos celulares observados. Reporte el
diferencial que obtuvo según su conteo celular. Indique los valores de referencia de
cada uno de los tipos celulares observados



 

&Y En base a sus resultados obtenidos realice sus conclusiones de
acuerdo a la utilidad y/o relación que tenga con su carrera profesional. Según el conteo
diferencial proponga si es muestra de una persona sana o con alguna deficiencia,
basándose en los valores de referencia.
Y
  


&Y
1.- ¿Cuales son las diferencias morfológicas que observó en cada uno de los diferentes
tipos celulares?
2.- ¿De qué color aparece teñido el núcleo de los leucocitos?
3.- ¿Existe alguna diferencia en el citoplasma de los diferentes tipos celulares
observados? ¿Explique cuáles y porque?
4.- ¿Qué forma tienen los eritrocitos? Tienen núcleo?
Y

!"&Y
1. Karp, G. 2001. Biología Celular y Molecular. ISBN: 9701016440
2. Alberts et al. 2006. Essential Cell Biology, An Introduction to the Molecular
Biology of the Cell. Garland Publishing, Inc. ISBN: 0-8153-2045-0
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YY5 Y
(&YDivisión celular. Cromatina y cromosomas.Y

  
Y !
&El alumno observará células eucarióticas de vegetales y
animales e identificará la organización de genoma en interfase y mitosis.
Y



Y Y Y ' &El estudio de los cromosomas de células
eucarióticas con el microscopio óptico se hace preferencialmente en metafase, cuando
estos tienen la morfología y estructura definida.La observación de la estructura del
genoma en interfase, está fuera de la resolución del microscopio óptico, sin embargo,
en algunas células es posible observar el cromosoma X heterocromatizado que se
identifica como un corpúsculo, el cuerpo de Barr o cromatina sexual.

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Y
 YY %YYBY  Y Y YYBY
Raices primarias de allium cepa
2 Portaobjetos
(cebolla)
2 cubreobjetos Células de epitelio bucal
1 Vidrios de reloj Barniz de uña transparente
1 Estuche de disección  YY %YY.Y
1 Lámpara de alcohol HCl 1 N
1 Microscopio Ac. Acético 45%
1 pinzas Orceína acética
Y
Y



!"&Y
Preparación de los meristemos

1. Cortar de 1-2 cm la parte terminal de las raíces y colocar en vidrio de reloj con
orceina acética. Cuidar que los meristemos queden perfectamente cubiertos con
el colorante.
2. Calentar a la llama de la lámpara de alcohol, retirar al desprenderse vapores,
enfriar y volver a calentar suavemente por 2-3 veces, cuide que la temperatura
no ponga en ebullición el colorante, ya que esto daña los meristemos.
3. Enfríe y transfiera cada una de las raíces a un portaobjeto, corte 2 mm después
del ápice, añada una gota de orceína y coloque encima el porta, presione con la
punta de un lápiz la zona donde se encuentra el meristemo y mediante golpes
con la goma del lápiz, dispérselo en monocapa, quite el exceso de colorante.

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4. Observe al microscopio a 40X.

 todo para la cromatina sexual-cuerpo de Barr

1. En porta objetos perfectamente lavados y desengrasados (alcohol etílico-ácido

acético 45%, 3:1), coloque una muestra de epitelio bucal (enjuague varias veces
la boca), tomando por raspado suave con un abatelenguas, haga frotis de
hombre, etíquetelos.
2. Hidrolice con HCl 1N por 30-60 seg. Y absorba el ácido acético por goteo, cubra
con un portaobjetos y selle con barniz. Observa al microscopio a 100X.

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Meristemos
Descripción

Cromatina Sexual
Descripción

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&Y Aportar las conclusiones producto de la realización de la presente
práctica.Y
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1. ¿Qué es el cariotipo? Explique cómo haría usted uno.
2. ¿Qué aplicación daría usted a la observación de las células meristemáticas?
3. ¿Qué diferencia hay entre la mitosis de células animales y vegetales?
4. Investiga cómo Barr y Bertram (1949), encontraron cromatina sexual.
5. Investiga que dice la hipótesis de Mary Lyon, respecto a la heterocromatización
del cromosoma X
6. De acuerdo a la hipótesis de Lyon explica por qué en hombres con una formula
cromosómica 46XY, no se observa la cromatina sexual o cuerpo de Barr.
Y

!"&Y
1. Karp, G. 2001. Biología Celular y Molecular. ISBN: 9701016440
2. Alberts et al. 2006. Essential Cell Biology, An Introduction to the Molecular
Biology of the Cell. Garland Publishing, Inc. ISBN: 0-8153-2045-0
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(&YComponentes del núcleo. Cromosomas. Patrones de
bandeo cromosómico.

  
Y !
&Al finalizar la práctica el alumno será capaz de identificar la
estructura microscópica de los cromosomas politénicos presentes en las larvas de la
mosca de la fruta, así como reconocer del patrón de bandeo y tener conocimiento
sobre la importancia del estudio de estos cromosomas.
Y



YYY' &Algunos insectos como la mosca de la fruta cuyo
nombre científico es ÷rosophila melanogasterposee en sus glándulas salivales células
que se encuentran en una fase de la división celular llamada Interfase, éste proceso se
puede prolongar permanentemente, de tal manera que en el tercer estadio de las larvas
la división celular se detiene pero las células siguen en crecimiento4. De ésta manera,
los cromosomas contenidos en el núcleo se duplican repetidamente sin separarse, lo
que se conoce como endomitosis. El resultado de este proceso son cromosomas
gigantes compuestos gran cantidad de información genética (Politenia). Solo para
hacer una comparación, los cromosomas de ÷rosophila en una metafase es del orden
de 7,5ȝ mientras que el largo total de los cromosomas en un núcleo de las glándulas
salivares es de alrededor de 2.000ȝ.
Los cromosomas implicados en este proceso muestran un patrón particular de bandeo
transversal que consiste en zonas más oscuras, llamadas bandas, que alternan con
zonas claras, llamadas interbandas. Cuando se observan al microscopio óptico se
identifican como bandas oscuras y claras transversales alternantes7. El patrón de
bandeo que presentan los cromosomas politénicos es un reflejo constante de las
secuencias de ADN, las bandas sirven como marcadores para localizar varias
características genéticas (lugar de los genes, o cambios en el genoma debido a
reordenamientos cromosómicos, por ejemplo deleciones, duplicaciones de bandas y
translocaciones) y se han utilizado en diversos estudios genéticos y evolutivos.
Y
 &Y
Larvas activas del tercer estadio de la mosca ÷rosophila melanogaster
MicroscopioestereoscopioY
Microscopioóptico.Y
1 platina de vidrio.Y
PortaobjetosY
CubreobjetosY
Reactivo de Aceto ± orceínaY
Pipeta PasteurY
Estuche de disecciónY

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1. Se extrae con una aguja de disección una larva de tercer estadio de ÷rosophila,
la cual se reconoció por ser proporcionalmente más grande que las de 1° y 2°
estadios. Generalmente estas larvas se encuentran en las paredes del frasco de
cultivo. Se elige a unaque se encuentreactiva.
2. Se coloca la larva en una platina de vidrio, se le añade una mínima cantidad de
agua, esto para no dejar que se seque la larva y así poder realizar la disección.
3. La disección comienza localizando primero las mandíbulas las cuales se
distinguen claramente por su forma y color negro(Fig. 1, anexo 8). Se coloca la
punta de una de las agujas en las mandíbulas y la punta de la otra aguja en la
región media del cuerpo de la larva.
4. Se jalan en sentido opuesto las 2 agujas al mismo tiempo, para poder desgarrar
así a la larva.
5. Se separan las glándulas salivales del resto de los órganos por la forma
característica de sacos alargados que aparentan estar formados por una red.
Las glándulas generalmente se quedan adheridas a la región mandibular.
6. Las glándulas salivales están rodeadas por tejido adiposo opaco, se quita la
mayor cantidad de este tejido con ayuda de las agujas con el fin de que la
preparación quedara más limpia.
a. Las glándulas salivales son órganos pares localizados cerca de extremo
anterior de larva, generalmente tienen un cuerpo graso largo, delgado,
unido a ellas.
7. Una vez separadas las glándulas salivales, se transportan con las agujas a un
portaobjetos y se les agrega unas gotas de Aceto ± orceína.
8. Observar las células de las glándulas (Fig. 2, anexo 8).
9. Para poder apreciar los cromosomas politénicos, la muestra de tejido se aplana
colocando suavemente el dedo pulgar sobre el cubreobjetos y se presiona lo
más fuertemente posible (Fig. 3, anexo 8).

Y
  
: En ésta sección se dan a conocer los resultados obtenidos en esta
práctica: células de las glándulas salivares con su núcleo claramente definido y
cromosomas politénicos.



 

&Y Concluir acerca de la utilidad e importancia de estudiar estos
cromosomas.
Y
  


&Y
a) ¿En qué tipos de organismos se pueden observar los cromosomas politénicos?
b) ¿Cuál es su función?
c) Explique brevemente la forma en la que se generan los cromosomas politénicos.
d) ¿Qué es un Puff y un anillo de Balbiani, existe alguna diferencia?
e) En Genética ¿Qué utilidad tiene los cromosomas politénicos?

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1. Karp, G. 2001. Biología Celular y Molecular. ISBN: 9701016440
2. Alberts et al. 2006. Essential Cell Biology, An Introduction to the Molecular
Biology of the Cell. Garland Publishing, Inc. ISBN: 0-8153-2045-0W.
3. Kulg et al. Conceptos de genética. Ed prentice hall 5ª ed. Madrid 1999. pp.
43-45.
4. Del Castillo Falcón, V. M., Jiménez Pedraza, M., Romero Rosales M. G.,
Romo Bonilla, J. A., Valdez Hernández M. Identificación de los cromosomas
politénicos en las glándulas salivales de la fase larvaria de ÷rosophila
melanogaster. Facultad de Ciencias, Universidad Nacional Autónoma de
México. Coyoacán; México DF.
5. http://www.cienciaybiologia.com/bgeneral/organizacion-material-
genetico.htm
6. http://www.uniovi.es/esr/pp/tch2.pdf
7. http://www.agro.uchile.cl/docencia/dpan/genetica/clase6/6Sexta.pdf
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(&YEstructura del ADN.

  
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&El alumno al finalizar la práctica conocerá el procedimiento para
extraer ADN a partir de una muestra de células epiteliales de la mucosa bucal humana.
Observar la ADN a simple vista y conservarlo.




Y Y Y ' &Y ADN es la abreviatura del ácido
desoxirribonucleico (en inglés, DNA), esta molécula constituye el material genético de
los organismos. Es el componente químico primario de los cromosomas y el material
del que los genes están formados. Para extraer el ADN de un organismo es necesario
llevar a cabo una serie de etapas que permiten ir liberando la molécula de los
componentes químicos que lo acompañan.Existen diferentes técnicas de extracción de
ADN de las células, ya sean eucariotas o procariotas, varían en algunos pasos entre si
pero al finalizar la practica e producto se puede distinguir mediante la observación de
un material precipitado. Estos resultados pueden utilizarse en numerosas
investigaciones, diagnósticos, estudios moleculares, etc. los cuales arrojan resultados
sobre ciertas regiones de interés del genoma, todo esto aunado a que conociendo la
información genética de un individuo se pueden manipular muchas de sus funciones
con fines médicos.

 &Y
Kit de extracción de ADN Genes in a bottle (166-2000EDU).
Muestra de células epiteliales
Alcohol isopropanol o etanol
Agua potable
Tubos Falcon de 15 ml
Pipetas de transferencia
Gradilla para tubos Falcon
Baño maría
Termómetro
Cronómetro
Y



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1. Colocar el alcohol (isopropanol o etanol) en el congelador.
2. Un estudiante se llevará a la boca los 3 ml de agua potable. Hará que el agua
pase por las paredes bucales durante 30 segundos para obtener una muestra.
3. Cuidadosamente se regresa el líquido a un tubo Falcon de 15 ml.
4. Se agregan 2 ml de buffer de Lisis. Colocar la tapa al tubo e invertirlo 5 veces.
NO AGITAR!

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5. Observa el tubo, ¿Notas algún cambio? Anota observaciones.
6. Agrega 5 gotas de proteasa al tubo con la muestra. Tapar el tubo e invertirlo.
7. Incubar el tubo en baño maría a 50° C, por 10 minutos.
8. Destapar el tubo e inclinarlo a 45°. Llena el tubo con alcohol frío (10 ml +/-).
9. Tapar el tubo y dejarlo reposar 5 minutos. Anota observaciones de que lo
observas en el tubo.
10. Despacio y cuidadosamente invertir el tubo 5 veces.
11. Transferir a un vial de vidrio el precipitado de DNA con 750 microlitros de la
solución de alcohol.
Y
  
: Anota tus observaciones. ¿Cuál era la apariencia del ADN?. ¿En que
momento se empezó a observar?
Y


 

&YEnriquece y finaliza tus observaciones concluyendo acerca del
proceso de extracción y el resultado esperado.
Y
  


&Y
a) Explique la importancia de la extracción y purificación de DNA en la investigación
biomédica y práctica clínica.
Y
#
Y ' &La extracción de ADN hoy en día es una técnica molecular
utilizada ampliamente con el fin de conocer ciertas características de la información
genética, parentescos, secuencias de interés, mutaciones, silenciamiento de genes, etc.
En algunas ocasiones para investigación molecular y en otras para diagnóstico de
predisposición a enfermedades hereditarias.
Y

!"&Y
1. Karp, G. 2001. Biología Celular y Molecular. ISBN: 9701016440
2. Alberts et al. 2006. Essential Cell Biology, An Introduction to the Molecular
Biology of the Cell. Garland Publishing, Inc. ISBN: 0-8153-2045-0W.
3. Kulg et al. 2onceptos de gen tica. Ed. Prentice Hall. 5ª ed. Madrid 1999. pp. 43-45.

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Se incluye diagramas claros, Se incluye
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etiquetados, se
Y precisa de los datos en tablas se agrupan en datos se presentan
muestran los datos o
6CEY y/o gráficas debidamente tablas y/o gráficas. de forma escrita no
están en desorden.
descritas. estructurados.
Se maneja la
Se refleja un
El reporte representa y información de El reporte representa
entendimiento
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limitado de los
Y entendimiento por parte del entiende la mayoría incorrecto o nulo de
conceptos
<-Y alumno de los conceptos de los conceptos los conceptos
científicos
1=EY científicos esenciales para científicos científicos esenciales
esenciales en el
llevar a cabo la práctica. esenciales en el en el laboratorio.
laboratorio.
laboratorio.
Toda la información
Son utilizadas y referenciadas Las fuentes son fue es copiada
correctamente varias fuentes Pocas fuentes de escasas, algunas textualmente. Las
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de importancia para realizar el antecedentes de de buena fuente y fuentes de
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marco teórico. Se evita la renombre son otras no, algo de la antecedentes están
%% ./-Y
copia textual de la cita, las usadas y citadas información o ideas citadas
1=EY
ideas son expresadas en correctamente. principales no son incorrectamente,
propias palabras del alumno. propias del alumno. faltan datos en las
citas bibliográficas.
Se observa orden y Se observa un El informe está
El informe está escrito de
secuencia en la poco de escrito a mano
FY manera ordenada, separa la
información, usa desorganización en descuidando la
.G)FY información en títulos y
títulos para el informe, la organización y
Y Y subtítulos, se observa
organizar el secuencia se limpieza, con
+Y limpieza y cuidado en su
material. Puede vuelve poco tachones y borrones,
<-Y elaboración. Se respeta la
estar escrito a mano confusa, se omite además de omitir la
9CEY secuencia del método
de manera algún paso del secuencia del método
científico.
organizada. método científico. científico.
No se cuida la
Se observan
ortografía y
algunos errores Los errores de

.-<FY Se cuidaron los errores de gramática. Muchos
repetidos en la ortografía son
)Y*Y gramática y puntuación. Se errores ortográficos.
ortografía, consistentes. Falta
./Y observan pocas faltas de La puntuación es
puntuación y puntación
1CEY ortografía. escasa. Los textos
gramática en el importante.
son seguidos sin
reporte.
respetar las ideas.
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Cultivos en caja, tubos, hisopos, medios de
Cultivos y cepas Líquido / sólido
transporte, guantes, colorantes, placas, etc.
Patológicos Sólido / liquido Biopsias, líquidosorganicos.
No anatómicos Sólido Gasas, hisopos, papel, tiras reactivas, etc.
Lancetas, agujas, agujas de bolsa de sangría,
Punzocortantes Sólido capilares de hematocrito, aplicadores, tubos
rotos, portaobjetos, etc.

Y
!)Y *Y Y Y 000Y Y  Y %&Y Es importante minimizar la
generación de R.P.B.I. identificando y segregando los materiales que NO los
contengan, por ejemplo: papel de envoltura de gasa estéril, envoltura de la jeringa,
protector de las agujas, etc. En el desarrollo de las actividades se deberá separar
adecuadamente los materiales que son reciclables, depositándolos en los recipientes
destinados para su posterior tratamiento y recuperación (Ejemplo: tubos de ensayo,
matraces, etc.). En el manejo de R.P.B.I. se deberán utilizar los implementos de
protección personal para su manejo e identificar los sitios designados en el laboratorio
para depositarlos. El depósito y envasado de R.P.B.I. se realizará de acuerdo a la
siguiente tabla, observando que los recipientes solo se llenarán hasta las ¾ partes de
su capacidad. Los depósitos se etiquetaran con la leyenda !
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)Y *Y -&Y El área temporal de depósito se encuentra previamente
señalado en el Laboratorio con el símbolo universal que lo identifica y todos los
recipientes que contiene R.P.B.I. deben ser colocados en estos sitios. El personal
responsable del manejo de los R.P.B.I., de acuerdo a la norma NOM-087-Ecol-2002,
también es responsable de la recolección y transporte al almacén general,
almacenamiento y entrega a la empresa tratadora, registro y elaboración de bitácoras y
reportes, disposición y tratamiento interno y externo y capacitación y monitoreo.
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Sangre Líquidos Recipientesherméticos Rojo
Cultivos y cepas de
Sólidos Bolsas de polietileno Rojo
agentes infecciosos
Sólidos Bolsas de polietileno Amarillo
Patológicos
Líquidos Recipientesherméticos Amarillo

Residuos no Sólidos Bolsas de polietileno Rojo

anatómicos Líquidos Recipientesherméticos Rojo
Recipientesrígidos
Objetospunzocortantes Sólidos Rojo
polipropileno
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Y .Y1& Imágenes de la misma célula utilizando

Y diferentes técnicas de microscopía óptica.
0 Microscopía óptica convencional.
Y 0YContraste de fases.
Y 0 Contraste Diferencial de Interferencia.
Y
Y
Y Y Y

.Y 6& Imágenes de microscopía utilizando marcadores fluorescentes para

componentes celulares específicos. 0 Filamentos de actina. 0Microtúbulos0YYYYY
0 Filamentos intermedios.

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Y .Y 9& Microscopía electrónica. 0 Imagen de barrido del
estereocilio de una célula del oído interno. 0Imagen de transmisión
de unamitocondria.

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Cuando se extrae sangre del cuerpo y se deja reposar en un recipiente de vidrio
por algunos minutos, ésta se coagula, el cual se debe a la precipitación de una proteína
plasmática llamada fibrinógeno, que forma hebras de fibrina insoluble. Las células de la
sangre son atrapadas en una red de fibrina que gradualmente se contrae y libera un
líquido llamado suero. El suero no contiene fibrinógeno ni algunos factores de la
coagulación, ya que estos se han consumido durante la formación del coagulo. El
plasma a diferencia del suero, si contiene factores de coagulación y se obtiene si el
tubo donde se recolecta la sangre tiene un anticoagulante.
Y
Si se requiere una pequeña cantidad de sangre ésta puede obtenerse por
punción capilar (puncionando la piel del dedo o el lóbulo de la oreja con un instrumento
cortante), para obtenerla primero se limpia la piel con alcohol y se deja secar. Se
inserta una lanceta o aguja estéril en la piel a profundidad de 1 o 2 mm. La primera
gota de sangre que sale de la herida se limpia con torunda de algodón. Las gotas
subsecuentes se recogen con un portaobjetos para frotis, o con una pipeta o con algún
otro recipiente para pruebas diversas.

Si se requiere un volumen mayor de 0.5 ml entonces se debe realizar la técnica

de venopunción o flebotomía. Esta técnica consiste en la punción de la barrera
protectora exterior (piel) por vía extracutánea; con un objeto punzocortante (cánula o
aguja) para la obtención de una muestra sanguínea que puede ser periférica, arterial o
venosa. Por lo general se prefiere sangre venosa para la mayor parte de exámenes y
se procurara obtener una mayor cantidad por si fuese necesario verificar alguna
prueba. La flebotomía se puede realizar por dos métodos diferentes: utilizando tubos al
vacío (sistema Vacutainer) y utilizando aguja y jeringa convencional. El método de
utilizar tubos al vacío es más rápido, pero se prefiere utilizar aguja y jeringa cuando se
trabaja en venas pequeñas y frágiles, para evitar que estas colapsen.

Comúnmente se emplea una vena del brazo (fosa antecubital) ya que éstas son
de fácil acceso, relativamente largas y fáciles de localizar. Se utiliza un torniquete para
bloquear la circulación venosa, se selecciona alguna vena adecuada por su calibre y
prominencia y se limpia la piel con alcohol (utilizando técnicas de asepsia y antisepsia
ya estandarizadas). Una vez que el alcohol se ha evaporado se introduce una aguja
afilada adaptada a una jeringa de tamaño adecuado y estéril; enseguida se tira del
embolo de la jeringa para que la sangre penetre en ésta. Tan pronto como se haya
obtenido una cantidad adecuada se libera la presión ejercida sobre el brazo y se extrae
la aguja. Se aplica una torunda de algodón estéril en el sitio de la punción y se ejerce
presión firme durante medio minuto para evitar escurrimiento de la sangre en los tejidos

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circunvecinos. Debe quitarse la aguja de la jeringa antes de distribuir la sangre en los
tubos de ensayo (no así cuando se depositará dentro de un tubo al vacío ± vacutainer).

Si se requiere suero, la sangre puede ser vertida en el interior de un tubo de ensayo

(esterilizado). Si se necesita sangre total o plasma, deberá utilizarse algún
anticoagulante, el más común para la mayor parte de análisis es el ácido etilen-
diamino-tetra-acético (EDTA). El citrato de sodio al 3% también es un anticoagulante.
La heparina es un anticoagulante antitrombínico que se usa en pruebas donde no se
desea la eliminación de iones calcio. Los tubos del sistema Vacutainer vienen con
tapones de diferentes colores que indican los anticoagulantes o aditivos que contienen:
ë Tapón rojo: el tubo no contiene anticoagulante y el interior del tubo es estéril, la
sangre coagulará y liberará suero después de la centrifugación. Se
utilizaparaanalizar la química del suero.
ë Tapón rojo y gris/negro: también llamado tubo de separador de suero, este tubo
contiene un gel que separa permanentemente el suero del coagulo después de
la centrifugación. Tambiéncontieneactivador de coágulos.
ë Tapón lavanda/púrpura: este tubo contiene EDTA, se usa si se requiere sangre
entera o plasma.
ë Tubo verde: el tubo contiene heparina, se utiliza si se requiere sangre entera o
plasma.
ë Tapón azul cielo: el tubo contiene citrato de sodio, se utiliza si se requiere
sangre entera o plasma, comúnmente se usa para determinación de tiempo de
protrombina o tiempo parcial de tromboplastina.
ë Tapón gris: el tubo contiene oxalato de potasio, se utiliza si se requiere sangre
entera o plasma, comúnmente se usa para la prueba de tolerancia a la glucosa.


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Vmagen extraída de
http://www.proveedormedico.com/pmhyl.html

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1. El operador debe inspirarY confianza durante
la extracción. Y
2. Debe utilizarse una Yaguja con grosor
adecuado para obtener Ysangre fácilmente y
la cantidad necesaria deY sangre.
3. Debe utilizarse venas queY se vean o palpen
con facilidad. Y
Y
4. El antebrazo siempre deberá estar apoyado
en una superficie fija. Y
5. Al realizar la punciónY venosa, el Bicel
Y
deberá estar hacia arriba.
Y
2omplicaciones que se pueden Y presentar en la
venopuncion: Y
Y
1. Algunas veces se Y produce sincope
(desvanecimiento Y
con pérdida de
Y
conocimiento repentina y por lo general es
Y
breve y reversible), en general se presenta
Y
en algunas personas emotivas. Si el
paciente se mantiene acostado, Yla ÷


recuperación espontánea es rápida. Y Y
Y

2. En algunos pacientes con tendencia a las hemorragias, puede producirse una

estribación local de la sangre. Aplicando una presión adecuada (torunda) sobre el
lugar de punción se evita la formación de hematomas.
3. Después de una serie de punciones venosas repetidas puede producirse trombosis
(Formación de un trombo en el interior de un vaso sanguíneo). O flebitis (inflamación
de las venas).

›iesgos relacionados con la punción venosa:

1. Sangrado excesivo
2. Desmayo o sensación de mareo
3. Hematoma (acumulación de sangre debajo de la piel)

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4. Infección (un riesgo leve en cualquier momento que se presente ruptura de la
piel)
5. Punciones múltiples para localizar las venas

2ontraindicacionesabsolutas:

1. Inserción en zonas con hematomas.

2. Inserción en zonas de infiltración o flebitis.
3. Venasesclerosadas o trombosadas.
4. Sitios con reaccionesinflamatorias.
5. Sitios con enfermedades de la piel.
6. Sitios con solución de continuidad de la piel.
7. Sitios con procesoinfeccioso.
8. Venas del cuerocabelludo.

2ontraindicacionesrelativas:

1. Zonas de flexión.
2. Venasmuypequeñas

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Y
Los grupos que comprende el cariotipo humano son los siguientes:
- 2romosomas grandes
* Grupo A, (cromosomas 1, 2 y 3), meta y submetacéntricos
* Grupo B, (cromosomas 4 y 5), submetacéntricos
- 2romosomas medianos
* Grupo C, (cromosomas 7, 8, 9, 10, 11, 12 y además los cromosomas X),
submetacéntricos
* Grupo D, (cromosomas 13, 14 y 15) acrocéntricos
- 2romosomas pequeños
* Grupo E, (cromosomas 16, 17 y 18) submetacéntricos
* Grupo F, (cromosomas 19 y 20) metacéntricos
* Grupo G, (cromosomas 21 y 22) acrocéntricos
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Y Patrón de bandeo
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Un idiograma es la representación esquemática del tamaño, forma y patrón de
bandas de todo el complemento cromosómico, los cromosomas se sitúan alineados por
el centrómero, y con el brazo largo siempre hacia abajo.Los cromosomas sexuales X e
Y se separan de sus grupos correspondientes y se ponen juntos aparte al final del
cariotipo.

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Y Vdiograma de una persona sana
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.0Y10 Vista esquemática de la estructura de una larva de
÷rosophilamelanogaster donde puede observarse la localización de las
glándulas salivales.

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.0Y6Y Y
Y
Células de las glándulas
salivales con núcleo Y
claramente definido Y
Y
Y
.0Y60YTinción de las glándulas salivales con reactivo de aceto - orceína

.0Y 9Ejemplo de un cromosoma politénicos de ÷rosophila melanogaster.El

cromocentro se halla en el ángulo superior derecho. La flecha señala el extremo del
cromosoma X. La imagen ampliada (B) muestra las bandas y las interbandas con
mayor detalle.

 Y