2009 generalidades: REPLICACION

VIRAL
Virología General
Microbiologia I ADN Enzimas y Virus
Proteínas proteínas de Nucleoproteina Desnudos
Estructurales unión a ac.
EVENTOS TEMPRANOS DE LA ARN nucleicos

REPLICACION VIRAL
Glicoproteinas y Virus
Nucleoproteina
generalidades: REPLICACION membrana Envueltos

VIRAL

Adhesion viral: EJEMPLO DE RECEPTORES

REPLICACION VIRAL : Eventos Tempranos VIRUS PROTEINA CELULA RECEPTOR
VIRAL BLANCO CELULAR
EBV gp/350/220 B cell. Epitelio CD21 (C’ receptor)
Rinovirus VP1, 3 epitelio Nasal ICAM-1
1. Adhesion: el virus usa proteínas especificas para Poliovirus VP1 GI epitelio Superfamilia de Ig
adherirse a moleculas en la superficie de la celula
Hu Coronavirus gp180 epitelio TRS GI aminopeptidasa N
(“receptores”). Es una interaccion ionica. No es una
Influenzavirus HA epitelio TRS sialic-glycoprotein
reaccion enzimatica. Ocurre en un amplio rango de
temperaturas. El numero y la naturaleza de los Parainfluenzavirus HN URT epitelio gangliosido GD1a

receptores en las celulas varía ampliamente Rotavirus VP4/VP7 GI epitelio sialic glycoprotein
HIV-1 gp120 T cell, Mϕ, CNS CD4 + correceptor*

* -cepas HIV-1 con tropismo a celulas T usan el receptor alfa chemokine

como co-receptor; mientras, cepas HIV-1 con tropismo a macrofagos usan
el receptor beta chemokine como co-receptor. Todas las cepas usan el
CD4 como receptor principal al cual los peplomeros de gp120 se adhieren.
 Adhesion viral: EJEMPLO DE RECEPTORES. Virus de
Influenza tiene diferente afinidad por receptores
dependiendo del huesped
REPLICACION VIRAL : Eventos Tempranos
2. Penetración: el virus entra a la celula via viropexis o
fusion (solo en algunos virus envueltos). Usa energia;
temperatura dependiente. Viropexis es un proceso
similar a la endocitosos mediada por receptor; la
membrana celular forma vesiculas que transportan al
virion dentro de la celula y se fusiona con endosomas o
lisosomas (fusion interna) para liberar al genoma. En
algunos virus envueltos, la fusion es mediada por
peplomeros fusogenicos. El envelope se funde con la
membrana celular

Entrada del virus por ENDOCITOSIS

Penetracion por Viropexis
El virion adherido es
introducido en una vesicula
de la membrana celular que
entra a la celula & donde se
genera una fusion interna
con endosomas o lisosomas
a bajo pH.

Micrografia Electronica de
un virion de Togavirus
entrando a la celula via
Viropexis.
 PENETRACION POR FUSION: un virion de Herpes simplex
tipo 1 comienza su fusion (flecha) con la membrana plasmatica. La
fusion es mediada por peplomeros virales especificos
(glicoproteinas) que tienen un dominio fusogenico. La Fusion es
temperatura dependiente.
REPLICACION VIRAL : Eventos Tempranos
Desnudamiento en virus de Influenza. Rol de M2
dependiente de pH
REPLICACION VIRAL : Eventos Tempranos
3. Desnudamiento: el envelope y, en algunos casos, la
capside es eliminada para que el genoma pueda ser
expresado. Virus con capside helical sufren un
desnudamiento parcial. Mientras el genoma es
expresado, esa parte de la capside es temporariamente
desplazada. Si el virion entra via viropexis, el paso de
fusion interna con el endosoma o lisosoma produce el
desnudamiento.
Desnudamiento: una particula de Adenovirus (V) penetra y es
desnudada. Ocurre una perdida de fibras del penton (VU1). En el
citoplasma se libera la capside y se expone el core (VU2). En VU4
el core entra al nucleo; alternativamente, en VU3 el ADN viral entra
al nucleo por via de un poro.
Core
Replicacion de los virus
ADN. Vision idealizada. Adhesión Generalidades de REPLICACION de VIRUS ADN
La transcripcion del
FAMILIA REPLICACION REPLICACION del ADN
genoma a ARNm viral Penetración
ocurre en el nucleo Parvoviridae Nucleo Usa una ADN polimerasa celular
Desnudamiento
(excepto para Poxviridae).
Transcripcion del
Papovaviridae Nucleo Usa una ADN polimerasa celular
La fase temprana de
mRNA temprano
transcripcion es dividida Adenoviridae Nucleo Usa ADN polimerasa Viral
usualmente en inmediata Trascripción de
proteínas tempranas Herpesviridae Nucleo Usa ADN polimerasa Viral
temprana y temprana.
Los primeros ARNms Replicación del DNA Poxviridae Citoplasma Muchas enzimas codificadas por
viral
codifican proteinas Trascripción del
el virus; el virus codifica
virales regulatorias. Los mRNA tardío transcriptasa y ADN polimerasas.
ARNms tardios codifican Trascripción de Hepadnaviridae Nucleo REPLICACION UNICA. El ADN es
para proteinas proteínas tardías
replicado via un intermediario de
estructurales. Ensamble de los RNA y por una Transcriptasa
viriones
Traduccion: ocurre en el reversa codificada por el virus que
citoplasma. lo transforma en ADN.
Ensamble: ocurre en el Liberación
nucleo y el virus egresa.

GENERALIDADES SOBRE LA REPLICACION DE LOS

Sintesis de los pasos de REPLICACION de VIRUS ADN
i) ADN ---> mRNA temprano ---> PROTEÍNAS tempranas
ii) ADN ---> ADN
iii) ADN ---> ARNm tardío ---> PROTEÍNAS tardías
VIRUS ARN
Hay cuatro estrategias principales
1.Virus cuyo RNA es de una sola cadena y su polaridad positiva.
Este RNA sirve como RNA mensajero, dirigiendo la síntesis de
proteínas virales in vitro (por ej, el virus de la poliomielitis).
En este caso, actúa como RNA mensajero policistrónico. Cuando se
traduce, se sintetiza un sólo polipéptido precursor, que rápidamente
se rompe dando lugar a proteínas estructurales y no-estructurales.
Estas últimas son las encargadas de replicar al RNA viral, de inhibir
la síntesis de componentes celulares, etc. Como las células vivas no
son capaces de realizar el proceso de síntesis de RNA a partir de RNA
la enzima que cataliza la replicación del RNA viral es una RNA
Polimerasa RNA-dependiente, codificada x el virus. El RNA genomico
es infeccioso.
i) RNA + ---> PROTEÍNAS
ii) RNA + ---> RNA - ---> RNA +
GENERALIDADES SOBRE LA REPLICACION DE LOS
VIRUS ARN
2. Virus RNA de cadena simple, pudiendo estar o no fragmentado y de
polaridad negativa. El RNA viral no actúa como RNA mensajero,
dado que tiene polaridad negativa (ej: virus influenza). La síntesis
de ácido nucleico y proteínas virales se resuelve con la síntesis de
un RNA de polaridad positiva que sirve como molde para la
síntesis de nuevas moléculas de RNA con polaridad negativa, las
cuales constituyen el RNA genómico y además actúan como RNA
mensajero en la síntesis de proteínas virales. Para sintetizar el
RNA de polaridad positiva, complementario al genómico, utiliza
una RNA polimerasa RNA-dependiente, que forma parte del virión y
que posteriormente es sintetizada como una proteína viral, puesto
que la información genética para esta proteína está contenida en el
RNA viral. Estos procesos se resumen del modo siguiente:
i) RNA - ---> RNA +
ii) RNA + ---> PROTEÍNAS
iii) RNA + ---> RNA –
Genomico no infeccioso
GENERALIDADES SOBRE LA REPLICACION DE LOS
VIRUS ARN
4. Retrovirus. Los retrovirus poseen dos copias de un RNA de
cadena simple. La información genética contenida en estos RNA
genómicos es copiada en reverso para generar una copia de DNA
viral de doble cadena, que se integra al genoma celular,
comportándose como otros genes celulares, dando origen a un
mRNA y proteínas virales. Para realizar el proceso de síntesis de este
DNA viral o transcripción inversa- es decir, síntesis de DNA a partir
de RNA-, estos retrovirus poseen una enzima DNA polimerasa RNA
dependiente, llamada comúnmente transcriptasa reversa. La
transferencia de información genética ocurre de acuerdo a:
i) RNA + ---> DNA - ---> DNA +-
ii) DNA +- ---> mRNA ---> PROTEÍNAS
iii) DNA +- ---> RNA V
GENERALIDADES SOBRE LA REPLICACION DE LOS
VIRUS ARN
3. Virus cuyo RNA es doble hebra, fragmentado. Estos traen
consigo una RNA polimerasa RNA-dependiente que transcribe una
cadena del RNA viral, sintetizando RNAm del mismo tamaño y
complementarios al RNA parental, que dirigen la síntesis de
proteínas virales. El virus genera además otras copias de RNA
polimerasa RNA-dependiente que es la encargada de sintetizar RNA
viral de doble cadena, que constituye el material genético de los
viriones; para esto utiliza como molde las hebras de RNA
sintetizadas por la enzima estructural del virión. Ejemplo, reovirus.
ENCAPSIDACION: Las proteinas de la capside se
autoensamblan. En algunos virus con capside icosaedrica,
primero se forma una capside vacia y luego se inserta el genoma.
Para virus con capside(s) helical, las proteinas de la capside se
asocian con el nuevo RNA genomico a medida que es sintetizado.
Algunos virus como Reoviridae, Poxviridae, etc. tienen un proceso
de ensamble bastante complicado. Poxviridae se ensambla en el
citoplasma.
ENVOLTURA: La envoltura de todos los virus es derivada de la
membrana celular por un proceso de brotacion. Para viriones con
una proteina de Matriz (M), la proteina se asocia con el dominio
citoplasmico de los peplomeros insertados en la membrana celular
y entonces la capside interactua con la proteina M para
desencadenar la brotacion. Para viriones que no tienen proteina
M, la capside interactua con el dominio citoplasmico de los
peplomeros insertados en la membrana celular para desencadenar
la brotacion. Herpesviridae obtienen su envoltura a partir de la
membrana nuclear interna en la cual el tegumento interactua con
la misma. Herpesviridae pueden desenvolverse y adquirir una
envoltura en el RE. Poxviridae tienen varias capas de envoltura
 Importacion al
Nucleo. La SLN es
Señales de localización nuclear
reconocida y ligada
(SLN) a la importina -a.
SLN simples contienen una Luego, la importina
prolina seguido por una corta –b se une a este
cadena de residuos basicos. complejo y lo lleva
SLN bipartidos, como en hasta el poro
polimerasa de adenovirus, tiene nuclear donde se
dos tramos de aminoacidos une a nucleoporinas
básicos separados por una en los filamentos
secuencia espaciadora variable citoplasmicos
Estas SLN son reconocidas por
moleculas de importacion como La translocacion del complejo de proteina dentro del nucleo
la importina-a. Proteinas que van requiere de Ran una proteina de union a nucleosidos de guanina
y vienen al nucleo como Rev, en la forma de Ran–guanosina difosfato (GDP). Ran se une
poseen un segundo motivo, la
especificamente a ciertas nucleoporinas y media la transferencia
señal de exportacion nuclear
(SEN) caracterizada por un del complejo desde la cara citoplasmica del poro nuclear a la
patron de residuos de leucina. cara nuclear. En el nucleo, una proteina especifica de
intercambio de nucleotidos (Rcc) convierte Ran- GDP en Ran–
GTP y el complejo se disocia terminando el delivery de la carga
de proteinas en el nucleo.

Ensamble de Poliovirus. La
proteina precursora P1 es
clivada dos veces en una
reaccion autocatalitica por la
proteasa 3CD- produciendo
VP1, VP3, y VP0. Este clivaje
es escencial para el ensamble
de monomeros 5S en los
pentameros 14S. Doce de
esos pentameros se asocian
directamente con el RNA
genomico naciente para
ensamblar un provirion
inmaduro 150S. El clivaje de
maduracion de la VP0 para
Las proteinas a ser exportadas fuera del nucleo se unen a la producir las VP2 y VP4 resulta
exportina-1 a traves de su SEN. Este complejo, junto a Ran-GTP, se en la conversion del
une a nucleoporinas localizadas en el complejo del poro e inician la provirion inmaduro en el
translocacion al citoplasma. Una vez alli, Ran-GTP se convierte en virion maduro de 160S.
Ran-GDP por una proteina de activacion de la Ran-GTPase (RanGAP-
1), causando que el complejo carga-exportina-1-Ran se disocie, por
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lo tanto completa el delivery de la carga al citoplasma.

Coronavirus localiza 3 proteinas de membrana
(E, M, y S) en un compartimiento del RE, en el
cual ocurre la brotacion viral. En contraste, la
nucleocapside del virus vaccinia aparece
envuelta en una doble memb. derivada de este
compartimiento pero permanece libre el el
citoplasma por lo que puede entonces ser
envuelta por memb. derivadas del Golgi. Las
glicoproteinas G1 y G2 de Bunyavirus se
localizan en el compartimiento trans-Golgi para
hacer brotar directamente las nucleocapsides
desde alli.
Envoltura de Herpesvirus: Proceso en dos pasos
Ensamble viral en la memb.
celular. Herpesvirus, dos vias 1. ENVOLTURA DE HERPESVIRIDAE : Una nucleocapside
brota en el lumen de la mem. de Herpesvirus con su tegumento asociado obtiene
nuclear y entonces es inicialmente una envoltura de la membrana nuclear interna por
transportado a la sup. celular brotacion desde el nucleo
por la via secretoria; 2, virus
tambien brota en el lumen de la
mem. nuclear , pero se fusiona
con la mem. Externa de la mem. NUCLEO
nuclear para liberar la capside,
que obtiene su envoltura del
Golgi.
Rotavirus usa la memb del RE
como plataforma de ensamble
de las proteinas de la capside la
cual es envuelta solo
temporalmente, y las particulas
no envueltas se acumulan en el
lumen del RE
Citoplasma
ENVOLTURA de HERPESVIRUS: Dos vías, A y B
SITIO DE ENVOLTURA DE PRINCIPALES FAMILIAS DE VIRUS
Envoltura viral por brotacion desde Fuera de la celula
Familia Genoma Obtencion de envoltura la membrana plasmatica.
Replica en de la mem. celular en
Arriba: peplomeros virales se
Herpesviridae Nucleo Nucleo insertan en la mem. plasmatica y
Poxviridae Citoplasma Golgi empiezan a desplazar a proteinas
celulares.
Hepadnaviridae Nucleo R.E.
Centro: Capside con el genoma
Flaviviridae Citoplasma mem. plasmatica interactua con el dominio
Coronaviridae Citoplasma Golgi citoplasmico de los peplomeros
dentro de la membrana plasmatica y
Bunyaviridae Citoplasma Golgi
empiezan a brotar.
Arenaviridae Citoplasma mem. plasmatica
Abajo: el virion se ha formado y
Retroviridae Nucleo mem. plasmatica obtuvo su envoltura por brotacion
Orthomyxoviridae Nucleo mem. plasmatica
de una porcion modificada de la
mem. plasmatica. La envoltura es
Rhabdoviridae Citoplasma mem. plasmatica
bi-lipidica y tiene peplomeros de
Paramyxoviridae Citoplasma mem. plasmatica
transmembrana compuestos de
glicoproteinas virales.

Maduracion de
Maduracion de un virion de Paramixovirus: capside Influenza HA & NA
helicoidal acarreando genoma RNA que interactua con la proteina transportado al lipid raft. El
M que se ha unido a los peplomeros insertados en la membrana complejo M1-vRNAP se
plasmatica. La brotacion desde la mem. Plasmatica forma el exporta fuera del nucleo y
envelope. puede unirse a HA/NA para
ser transportado a este sitio
rico en lipidos y brotar. El
A complejo M1-RNP tiene
vRNA, NP, NEP, 3P, y M1.
Lipid Raft: Dominio rico en
colesterol y
glicoesfingolipidos;
plataforma de ensamble
viral.
Tetramero de M2 insertado
en la memb. celular y en el
virion tiene un canal.
Importante en
desnudamiento de los Tipo
A. Blanco de drogas.
Curva ideal de crecimiento: El tiempo que requiere un virus Proteinas del virion
para replicar y las cantidades relativas de virus liberado versus el La lista sumariza las proteinas en los virus
que esta asociado a celulas varia entre los mismos.
1. CAPSIDE: Comprende la capside per se, sea icosaedrica, helicoidal,
de simetria compleja. Capside helicoidal tiene una sola proteina.
2. MATRIZ: Algunos (no todos) virus envueltos tienen proteina M
3. PEPLOMERO: estructura glicoproteica en todos los viriones
envueltos
4. CORE: proteinas internas asociadas al genoma (ej. polio VP4 )
5. ENZIMAS: Algunos viruses tienen enzimas en el virion: Todos los
Virus RNA Negativos; Retroviridae; Poxviridae, Hepadnaviridae
6. FIBRAS de Adenovirus; la fibra esta en cada vertice; NO es un
peplomero
7. Proteina M2 (Canal) : Presente en Orthomyxoviridae Tipo A
8. TEGUMENTO: capa entre la capside y el envelope en Herpesviridae.
Aloja algunas proteinas regulatorias.
9. RIBOSOMAS: atrapados en los Arenaviridae; No tienen ninguna
funcion.

Funcion de las proteinas virales No estructurales La Clasificacion de Baltimore

1. REPLICACION: RNA Pol; DNA Pol; Timidine Kinasa; Helicasa; etc.
Se basa en el contenido genetico y en la estrategia de replicacion
2. TRANSCRIPCION: RNA Pol; Poly-A Pol; DNA-binding; Metilasa; etc. de los virus. El material genetico de todo tipo de celulas es
ADN de doble cadena, pero algunos virus usan RNA o DNA
3. INHIBEN al HUESPED: Destruye mRNA; Bloquean sintesis proteica; de cadena simple para codificar su informacion.
Roban el cap del mRNA celular; Daña la mem. cel; Inhibe el transporte de De acuerdo con la clasificacion de Baltimore, los virus se dividen
mRNA; Altera citoesqueleto; muchos otros efectos celulares en las sig. siete clases:
virus ADN dc
4. INHIBE RESPUESTA INMUNE : Bloqueo de MHC; del procesamiento virus ADN cs
de Ag; Destruye moleculas CD4; mata macrofagos, etc.
virus ARN dc
5. TRANSFORMACION: Varios mecanismos para transformar la virus ARN cs sentido(+)-
celula Muchos Retroviridae codifican cONC virus ARN cs sentido(-) -
HTLV I y II usan gen TAX virus ARN transcripcion reversa
Oncoproteinas de virus tumoral DNA bloquean supresores de virus ADN transcripcion reversa
tumor Donde “dc" representa "doble cadena" y “cs" representa “cadena
Hepatitis C and Hepatitis B: Mecanismo no bien entendido
simple".
 Necesario convenir que
genomas ARN cadena simple
El ARNm es definido como cadena positiva(+) porque contiene
informacion que puede ser traducida inmediatamente.
Una cadena de ADN de polaridad equivalente tambien es • genomas ARN (sentido) +vo y (anti-
designada (+) pues, si fuera mRNa podria ser traducido a
proteina. sentido) -vo
La cadena de ARN y ADN complementaria a la (+) es la cadena
(sentido) AUG GCA CGA
(-).
Positivo
Esta no puede ser traducida en las correspondientes proteinas; met ala arg
debe ser primero copiada para obtener su cadena (+)

(anti-sentido)
Negativo UAC CGU GCU

Clase I: ADN de doble cadena (Adenovirus; Herpesvirus;

Poxvirus; Papovavirus):
Pueden ser subdivididos en dos grupos:

a) Replicación es exclusivamente nuclear (ej. Adenovirus,

Papovavirus, Herpesvirus).
La trascripción del genoma ocurre en ciclos sucesivos:
Inmediato-Temprano } Dependiente de lo codificado por el virus.
Temprano} factores de trans-activación.
Tardio

b) Replicación ocurre en el citoplasma (ej. Poxvirus). Estos virus

han desarrollado todos los factores necesarios para la
Tabla 1-E-1. Ej de virus comunes.
ss = cadena simple; ds = cadena doble.
trascripción/replicación y por lo tanto son independientes de la
RNA (+) es el unico que puede funcionar como mRNA para la sintesis de proteinas. RNA(-) no maquinaria celular.
funciona como mRNA.
Reovirus e influenza virus tienen genomas RNA segmentados;
 Clase II: ADN de cadena simple, de sentido (+) (Parvovirus):
La replicación ocurre en el núcleo, involucra la formación de 1
cadena de sentido (-) que sirve como molde para la síntesis de
cadenas (+).

Clase III: ARN de cadena doble (Reovirus):

Clase IV: ARN de cadena simple de sentido (+) (Picornavirus;
Estos virus tienen genoma segmentado. Cada segmento
Calicivirus; Togavirus; Flavivirus; Coronavirus):
genómico es traducido separadamente para producir mRNAs
Pueden ser sub divididos en dos grupos:
monocistronicos.
a) ARNm Policistronico ej. Picornavirus; Hepatitis A.
Genoma ARN = ARNm. La traducción resulta en la
formación de una poli proteína, la cual es
subsecuentemente clivada para dar origen a las proteínas
maduras.

b) Trascripción Compleja e.g. Togavirus. Son necesarios dos

o más ciclos de traducción para producir ARN genomico.
Clase V: ARN de cadena simple de sentido (-)
(Orthomyxovirus; Paramyxovirus; Rhabdovirus; Filovirus;
Bunyavirus):
Pueden ser:

a) Segmentados. Ej. Orthomyxovirus. El primer paso en la

replicación es la trascripción del genoma ARN de sentido
(-) por la RNA-polimerasa del virion, dependiente de ARN
para producir mRNAs monocistronicos, el que sirve
también como molde para la replicación del genoma.

b) No-segmentados. Ej. Rhabdovirus. Replicación ocurre

como en el anterior y se producen ARNms
monocistronicos.

Clase VI: ARN de cadena simple de sentido (+) con

intermediario de ADN (Retrovirus):
El genoma es de sentido (+) pero lo original entre los virus
es que es DIPLOIDE, y no sirve como ARNm sino como
molde para la trascripción reversa.
Clase VII: ADN de cadena doble con intermediario de ARN
(Hepadnavirus):
Este grupo de virus también se basa en la trascripción
reversa pero a diferencia de los Retrovirus esto ocurre
dentro de la partícula en maduración. Cuando infecta
una nueva célula, lo primero que ocurre es la
reparación del genoma viral seguido por la
trascripción.