PRUEBA DE BIURET PARA ENLACES PEPTIDICOS

PRUEBA DE BARFOED PARA IDENTIFICAR MONOSACÁRIDOS

La prueba de biuret es aquella en la que un investigador puede determinar si una

mezcla tiene enlaces peptídicos en él o no. Con la prueba de biuret, en cuestió n de
segundos un individuo sabe si está n allí. Una vez que sabemos que los enlaces
peptídicos son, de hecho, allí, a continuació n, puede intentar medir la cantidad de
enlaces peptídicos en ella mediante el uso de la Ley de Beer-Lambert.

¿Có mo funciona?
Una pequeñ a cantidad de la mezcla que se cree que los enlaces peptídicos en el que
se añ ade a un tubo de ensayo y reservar. Si cinco ml de la mezcla se utiliza, cinco
ml de una base fuerte - como el hidró xido de sodio o hidró xido de potasio - se
agrega a la mezcla. Una vez que esto ha sido mezclados, tome unas gotas de cobre
(II) sulfato en su fase acuosa y soltarlos en el tubo de ensayo. Dar el tubo de ensayo
un remolino rá pido y si la mezcla se vuelve pú rpura, que significa que hay enlaces
peptídicos en la mezcla.

Para determinar exactamente cuá nto, sin embargo, requiere el uso de la Ley de
Beer-Lambert. La Ley de Beer-Lambert - comú nmente llamada Ley de Beer - es una
ley que compara la concentració n de la mezcla respecto de la absortividad de la
mezcla. La ecuació n es como sigue:

A = AxBxC

En otras palabras, se midió la absorbencia (A) es igual a la longitud de onda

coeficiente de absortividad-dependiente (varias veces) la longitud del camino (b)
veces la concentració n del analito (c). Lo que se resuelve para c es porque fueron
capaces de medir A. La forma de medir A es tomar una pequeñ a cantidad de la
mezcla con la base y el cobre (II) sulfato y ponerla en un tubo pequeñ o. A
continuació n, coloque esto en un espectró metro fijado en 540 nanó metros. Tome
la lectura y el enchufe para que en A. El uno es constante y se puede encontrar en
un libro de recursos. Por ú ltimo, dependiendo de la célula (tubo) utilizado
determina el tamañ o de b. Haga sus cá lculos para encontrar c.

Formula química del Biuret Representació n 3D del Biuret

El Reactivo de Biuret es aquel que detecta la presencia de proteínas, péptidos
cortos y otros compuestos con dos o má s enlaces peptídicos en sustancias de
composició n desconocida.

Está hecho de hidró xido potá sico (KOH) y sulfato cú prico (CuSO4), junto con
tartrato de sodio y potasio (KNaC4O6·4H2O). El reactivo, de color azul, cambia a
violeta en presencia de proteínas, y vira a rosa cuando se combina con polipéptidos
de cadena corta. El Hidró xido de Potasio no participa en la reacció n, pero
proporciona el medio alcalino necesario para que tenga lugar.

Se usa normalmente en el ensayo de Biuret, un método colorimétrico que permite

determinar la concentració n de proteínas de una muestra mediante espectroscopía
ultravioleta-visible a una longitud de onda de 540 nm (para detectar el ió n Cu2+).

Ejemplo de aplicació n mediante el siguiente procedimiento

1. Se toma un tubo de ensayo y se colocan tres centímetros cú bicos de
albú mina de huevo, es decir la parte transparente.
2. Se añ aden 2 centímetros cú bicos de solució n de hidró xido de sodio al 20%.
3. Má s adelante se agregan 4 ó 5 gotas de solució n de sulfato cú prico diluida al
1%.
4. El resultado es que la mezcla se torna de color violeta, indicando la
presencia de proteínas.
 PRUEBA DE BIURET PARA ENLACES PEPTIDICOS
PRUEBA DE BARFOED PARA IDENTIFICAR MONOSACÁRIDOS

Objetivos:
1. Determinar cualitativamente la presencia de proteínas a través de sus enlaces.
2. Determinar cuantitativamente el contenido de azúcares (carbohidratos).

Extraer jugo de frutas:

 Naranja.
 Plátano.
 Tánguelo.
 Mandarina.
 Papaya.
 Sandia.
 Uva.
 Mango Ciruelo.
 Gelatina.
*No se conto con sandia ni uva.

Metodología:
1. Para proteína se escoge el tubo”A”, agregue 5gotas de sulfato de cobre
(SO4CU). Y luego agregue 2ml de de NaOH 10M, agitar vigorosamente y
observar luego los colores obtenidos.

2. Grafique los colores de acuerdo a lo observado (Comparar tubo “A” y “B”).

TUBOS “A” TUBOS “B”

*Se le agrego al tubo 5 gotas de sulfato

de cobre; además se observo el cambio
de color en los tubos “A” (se decoloraron); cómo podemos apreciar.
 Observar con el refractómetro los jugos de las frutas para determinar sus grados Brix

25

20

15

Plátano
Mango
10 CITRICOS
Gelatina
Papaya

0
ya

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1ª

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