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Unidad 1. Introducción
A) OBJETIVOS
PRERREQUISITOS
1. INTRODUCCIÓN
G = w2 r (1)
Si en la ecuación (1) se sustituye el valor de velocidad angular del rotor (w) en revoluciones por minuto
2πrpm
(rpm), [ w = ], queda la ecuación (2):
60
4π 2 ( rpm ) 2 r (2)
G=
3600
El campo centrífugo (G) es expresado generalmente en múltiplos de la
aceleración de la gravedad (g, 980 cm s-2) y se conoce como Campo
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Universidad Autónoma Chapingo. Depto. de Zootecnia. Curso de Bioquímica 2011.
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Centrífugo Relativo (RCF), de modo que si consideramos que la velocidad del rotor está en rev min-1
y es de 10 000 rpm y el radio de rotación o distancia radial “r” desde el centro de rotación al centro de
la columna de líquido en el tubo de centrífuga es de 5 cm, entonces al sustituir en la ecuación 3,
queda que el RCF es 5550 veces la aceleración de la gravedad (5550 g).
4π 2 ( r. p.m.) 2 r
R.C .F . = =1.11 x10 −5 ( rpm ) 2 r (3)
(3600 )( 980 )
Las gráficas denominadas nomogramas, combinan tres variables en forma de columna, de manera
que relacionando dos de ellas, es posible conocer la tercera. El nomograma utilizado en la
centrifugación (Fig 1), relaciona, el RCF, la velocidad del rotor (rpm) y el radio promedio de rotación
(r, cm), de manera que si se conocen, el radio y la velocidad, es posible estimar a partir de estos, el
campo centrífugo relativo (RCF) aplicado. En la figura 1 se indica que un RCF de 600 g se puede
conseguir con un rotor de 6 cm de radio y una velocidad de 3 000 rpm. Este valor de RCF se puede
confirmar, si se sustituyen los datos de radio y velocidad en la ecuación 3.
Figura 1. Nomograma que relaciona el radio, el campo centrífugo relativo, RCF y la velocidad del
rotor. (Williams B. y K. Wilson, 1976. Principles y Techniques of Practical Biochemistry.London: E.
Arnold).
En función de la magnitud del RCF, las centrífugas se clasifican en: centrífugas clínicas (500 - 4000
g), super centrífugas (4000 - 20 000 g) y ultra centrífugas (30 000 - 500 000 g).
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En una centrífuga, las partículas a separar están normalmente en un medio líquido, contenido en un
recipiente llamado “camisa”, el que se coloca en el rotor.
En la figura 2 se presenta un esquema para separar por centrifugación, los diferentes componentes
de un homogenado de tejido. Así, para obtener células enteras se deberá aplicar al homogenado un
RCF de 600 g y para aislar mitocondrias, lisosomas y peroxisomas, el RCF deberá ser
aproximadamente de 20 000 g.
Suero y Plasma
Las precauciones y los procedimientos de conservación de suero/plasma varían en cada caso, según
la naturaleza de la muestra y los parámetros que vayan a determinarse en ella. (Revisar referencias 1
y 4, apartados 4 y 8).
D) MATERIAL Y REACTIVOS
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Material
Pipeta Pasteur con bulbo, Centrífuga clínica con camisas para tubos de 13 x 100 mm, Balanza de dos
platillos, Tubos de ensaye de plástico cónicos y redondeados, Gradilla, Piceta, Pipetas graduadas de
1 y 10 cm3, Micropipeta automática, Tubos Vacutainer de 7 ml con tapón rojo y gel acelerador de la
coagulación, tubos con tapón morado, propipeta, regla de 10 cm.
Reactivos
Sangre completa, Ba(OH)2 5%,
ZnSO4 5%, EDTA al 5%,
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1. Extraer 3 cm3 de sangre y depositarla cuidadosamente en un tubo de centrífuga CON
anticoagulante. Como anticoagulante pueden usarse oxalato de sodio o Etilendiamino
tetraacético disódico, (EDTA) en una concentración de 1-2 mg por cm 3 de sangre (tubo con tapón
morado). Mezclar suavemente por inversión y centrifugar la mezcla a 600 g, por 20-30 minutos.
NOTA: Verificar el radio de rotación de la centrífuga y la velocidad a aplicar para obtener el RCF
deseado.
2. Con una pipeta Pasteur, transferir el plasma (fase superior amarillenta) a un tubo de plástico,
graduado, limpio y seco. Determinar el volumen de plasma para calcular el %.
3. Refrigerar el plasma a 4°C o congelar, si este procedimiento no efecta al análisis.
1. Pipetear 0.5 cm3 de plasma o suero a un tubo de 16 x150 mm. Agregar 1.0 cm3 de ZnSO4 al 5%,
1.0 cm3 de Ba(OH)2 al 5% y 7.5 cm3 de agua destilada. Se observará la formación de un
precipitado consistente principalmente de proteínas.
2. Tapar el tubo muy bien y mezclar fuertemente para romper los grumos
3. Centrifugar el tubo por 10 minutos a 600 g.
4. Con una pipeta Pasteur o con una micropipeta automática o por decantación, transferir el
sobrenadante a un tubo limpio y seco. Este líquido, incoloro y sin partículas, representa un
“Filtrado libre de proteínas”. El suero obtenido mediante este método, queda con una dilución
1:20, la que debe ser considerada en los cálculos para glucosa. Guardar en refrigeración mientras
se realiza el análisis de glucosa.
CÁLCULOS Y RESULTADOS
1. Medir el volumen de suero o plasma y calcular el porciento, multiplicando por 100 el cociente de
dividir, los cm3 de suero/plasma entre los cm3 de sangre. Comparar el % de plasma obtenido con
la diferencia de 100 y el % de Hematocrito. (Consultar referencia 4).
AUTOEVALUACIÓN
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Tietz W. N. 1976. Fundamentals of Clinical Chemistry. Philadelphia:W.B. Saunders.
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15. Definir diez conceptos clave para la presente práctica.
F) BIBLIOGRAFÍA
1. Bateman, J. V. 1970. Nutrición Animal. Manual de Métodos Analíticos. México, D.F.: Herrero,
Hnos. Los capítulos 3 y 14 son especialmente útiles para este curso, pues tratan información
general del laboratorio. Algunos de los métodos empleados en Bioquímica, son descritos en el
capítulo 3. En el capítulo 14, se tratan algunos aspectos sobre la obtención y conservación de las
muestras de sangre, que son de interés para la presente práctica.
2. Coles, H. E. 1989. Diagnóstico y Patología en Veterinaria. 4ª Ed. México, D.F.: Ed. Nueva
Editorial Interamericana. El capítulo 1, expone el material básico para integrar un laboratorio
clínico, así como las observaciones que deben seguirse para obtener una muestra biológica
procedente de un animal enfermo y como enviarla al laboratorio. El capítulo 6 incluye temas
como: recolección y manejo correcto de muestras de sangre, de suero y plasma, filtración y
centrifugación, uso de pipetas, colorimetría y control de calidad, entre otros.
3. Manual de cuidado de equipo de laboratorio clínico. Recuperado el 8 de enero de 2010, de
http://www.scribd.com/doc/529159/Manual-de-Cuidado-de-Equipo-de-Laboratorio-clinico. El
apartado IV contiene algunas recomendaciones sobre el cuidado de la centrífuga, así como sus
principales componentes.
4. García, S. Y. 2009. Composición de la sangre. Recuperado el 14 de enero de 2011 de:
http://www.mailxmail.com/curso-laboratorio-obtencion-muestras/muestras-sangre-extraccion-
procedimientos-previos