IDENTIFICACION DE AGENTES ETIOLOGICOS EN NEONATOS

CON CATETER UMBILICAL

Antecedentes

El inexorable progreso de la ciencia y la tecnología médica ha sido acompañado por el

desarrollo de una enorme cantidad de nuevos dispositivos médicos diagnósticos y
terapéuticos cada uno de los cuales se asocia con sus propias complicaciones 1. Los
gérmenes del medio hospitalario que actualmente causan enfermedad no pueden ser
eliminados sólo con técnicas de higiene ambiental 2, la infección asociada a catéter se ha
convertido en una de las infecciones intrahospitalarias más comunes 3. Por lo tanto, los
esfuerzos recientes han sido enfocados hacia la manera de prevenir la transmisión de estos
agentes y disminuir la susceptibilidad del paciente. 2

El uso de catéter (del lat. cathĕter, y éste del gr. καθετήρ) es, en medicina, un dispositivo que
puede ser introducido dentro de un tejido o vena, con el objeto de permitir la inyección de
fármacos, el drenaje de líquidos o bien el acceso de otros instrumentos médicos.

CATÉTER VENOSO UMBILICAL

 Recambios sanguíneo
 Recambio parcial.
 Shock hipovolémico grave.
 Medición de presión venosa central en pacientes críticamente enfermos.

CATÉTER ARTERIAL UMBILICAL

 Recién nacido de pretérmino menos de 1500 grs. con distrés respiratorio.
 Recién nacido con distrés respiratorio con requerimientos de oxigeno mayor de 50 %.
 Recién nacido conectado a ventilación mecánica.
 Administración de fluidos en situaciones de recién nacido de pretérmino en que es
imposible el acceso a venas periféricas. 4

1
 Existen diferentes tipos de catéteres venosos centrales, de acuerdo al tiempo de uso: corta
duración, larga duración, número de lúmenes y uso terapéutico, por lo cual se hace
necesario conocer sus ventajas y riesgos, como sus indicaciones, manejo y mantención 4

Según su tiempo de duración

Corta duración

- Catéteres venosos periféricos: generalmente en miembros superiores, especialmente en

manos y antebrazos
- Catéteres arteriales periféricos: usualmente en arteria radial o braquial. También, tibia
posterior o femoral
- Catéteres venosos centrales: yugular interna, subclavia o femoral-
- Catéteres arteriales pulmonares: a través de un introductor de teflón en una vena central
(subclavia, yugular o femoral).
- Catéteres umbilicales: se insertan dentro de la vena o la arteria umbilical 5

Larga duración

- Catéteres venosos de inserción periférica (percutanea): generalmente en la vena basílica,

cefálica o venas de miembros inferiores. Entran en la vena cava superior o inferior.
- Catéteres venosos centrales tunelizados (semiemplantables): se implantan quirúrgicamente
en subclavia, yugular interna o femoral-
- Catéteres totalmente implantados: tunelizados a través de la piel, tienen un reservorio
subcutáneo al que se accede por punción5

Según su material:

- Cloruro de polivinilo
- Poliuretano
2
- Silicona
- Teflón6

Los CVC de Silicón tienen un menor porcentaje de colonización 38%, en comparación con
los de poliuretano con 62%7

RETIRO

Los catéter se retiran de acuerdo ha:

CATÉTER VENOSO UMBILICAL

 Exanguineotransfusión y recambio parcial cuando haya terminado el procedimiento, 30
a 90 minutos.
 Inmediatamente posterior al cese de la indicación.

CATÉTER ARTERIAL UMBILICAL

 Recién nacido con requerimientos bajo 40% y punción arterial sin problemas.
 Retiro de ventilación mecánica.
 Evidencia clínica o confirmación bacteriológica de infección del catéter
 Catéter arterial ubicado en zona peligrosa de acuerdo a Rx toracoabdominal 4

Las Infecciones del Torrente Sanguíneo son una de las complicaciones mas graves que
puede ocurrir en el hospital, si bien su incidencia no es tan elevada, su alta LETALIDAD
determina la prioridad que se debe tener en las medidas tendientes a su prevención.

DEFINICION DE LOS TIPOS DE CATETERIZACION

- CATETERIZACIÓN VASCULAR: es la canalización de un vaso sanguíneo venoso o

arterial realizada por medio de un catéter a través de una punción o incisión.

- CATETERIZACIÓN TEMPORAL: es aquella cateterización que tiene una duración

mínima ya que se introduce y se retira el catéter en el mismo procedimiento.
3
 - CATETERIZACIÓN PERMANENTE: es aquella cateterización en que se introduce el
catéter en el vaso por un tiempo mayor que la duración del procedimiento

CONCEPTO DE SINTOMAS DE UN NEONATO CON CATETER INFECTADO

- BACTEREMIA POR CATETER: Aislamiento de bacterias viables en la sangre, con

cultivo de catéter positivo, sin que se identifique otro foco originario.
Primaria: es aquella en que no existe otro foco de infección. Se consideran
asociadas a los equipos de infusión endovenosa.
Secundaria: es aquella en que existe foco infeccioso en otro sitio (pulmonar,
urinario, piel, gastrointestinal), por el mismo microorganismo.

- FLEBITIS: es la inflamación de la íntima de la vena, puede evolucionar de compromiso

leve a severo, con tromboflebitis, embolía pulmonar y bacteremia. Este compromiso se
inicia con sensibilidad local, ligero dolor, eritema, calor local, ligera induración y cordón
venoso palpable.

- INFILTRACIÓN: es la extravasación de fluidos endovenosos al espacio intersticial a

causa del desplazamiento del catéter o la perforación de la pared venosa. La
infiltración de soluciones ácidas, alcalina o hipertónica, puede producir necrosis
hística.4

- COLONIZACION DE CATETER: se define por un cultivo positivo de punta de catéter

con 15 UFC (Unidad Formadora de Colonias) utilizando la técnica descrita por maki.

- CONTAMINACION DE CATETER: Presencia de un cultivo semicuantitativo o

cuantitativo con un número de UFC/ml por debajo del nivel considerado como positivo,
según la técnica considerada.8

4
 - SEPSIS POR CATETER: Traduce la respuesta inflamatoria del paciente a la
9
colonización de un catéter. Esta puede ser de tipo local o sistémica.

Catéter umbilical en neonatos:

El uso de catéteres umbilicales se utilizan como líneas centrales para administrar

soluciones y medicamentos, monitorizar la presión arterial y tomar muestras de gases
arteriales en la Unidad de Recién Nacidos, así como las complicaciones que se presentan
con esta práctica, haciendo especial énfasis en la vía oral concomitante el cateterismo de
los vasos umbilicales es un procedimiento relativamente sencillo, rápido y de uso común
en las unidades de cuidado intensivo neonatal 10.

Los vasos umbilicales son la vía de elección para el neonato críticamente enfermo. La
canalización de los catéteres umbilicales es realizada por el facultativo.
El cateterismo de la arteria umbilical está indicado cuando se requieren determinaciones
frecuentes de los gases en sangre arterial, este procedimiento también se utiliza para la
monitorización continua de la presión arterial y para realizar exanguinotransfusión.
El cateterismo de la vena umbilical está indicado para la monitorización de la presión venosa
central, acceso inmediato para líquidos intravenosos y fármacos de emergencia,
exanguinotransfusión, acceso venoso de largo plazo en recién nacidos de peso
extremadamente bajo y en espera de la canalización por enfermería de un catéter venoso
epicutáneo11

Agentes etiológicos

Entre los agentes etiológicos bacterianos que con mayor frecuencia causan infecciones
asociadas a catéter, y que a su vez son los más estudiados, se encuentran: Gram
positivos como Staphylococcus coagulasa negativos, Staphylococcus aureus,
streptococcus ssp. Enterococcus ssp. Gram negativos como Escherichia coli, Klebsiella
ssp, Enterobacter, serratia ssp. Los agentes etiológicos fúngicos de mayor incidencia son
Candida albicans, otras especies de Candidas.12

5
La colonización de un catéter depende de un proceso de adhesión bacteriana mediada
por una interacción físico-química (interacción hidrofóbica, fuerzas de Van der Waals),
que afecta también al depósito de proteínas séricas en la superficie del catéter. La
adhesión varía según el material del catéter, siendo mayor en los de polivinilo o látex
siliconado y menor en los catéteres de poliuretano, polietileno o teflón. A este primer
paso, que es reversible, le sigue un proceso de adherencia bacteriana mediante un
sistema de adhesinas a diferentes receptores como son el fibrinógeno o la fibrina.
Mientras el Staphylococcus epidermidis se une al catéter principalmente mediante
interacción hidrofóbica, la adhesión de Staphylococcus aureus o Candida está estimulada
por las proteínas séricas, siendo su adherencia mayor. Una vez colonizado el catéter, los
microorganismos forman la llamada biocapa bacteriana, mediante una sustancia
polimérica ("slime"), que protege a las bacterias facilitando su adhesión y disminuyendo
su sensibilidad a los antibióticos, favoreciendo la aparición de resistencias. 13

La prolongada hospitalización y los procedimientos invasivos a los que son sometidos los
recién nacidos han contribuido al aumento de ciertas infecciones bacterianas. La duración de
la estancia hospitalaria es inversamente proporcional al peso del nacimiento y a la edad
gestacional, factores relacionados directamente con infecciones nosocomiales. A pesar de
todos los avances en la prevención y el tratamiento, las infecciones continúan siendo una
importante causa de morbilidad y mortalidad en el periodo neonatal 14

Factores de riesgo

Los factores de riesgo de infecciones asociadas a catéteres umbilicales, son diferentes:

dependen del sitio donde se instale el catéter, aunque el tiempo de permanencia del catéter
en los vasos umbilicales parece ser un factor de riesgo común independientemente del vaso
canalizado15

6
Infección en catéter umbilical

El empleo de los catéteres umbilicales en el tratamiento de niños recién nacidos es un

procedimiento común en el manejo que se hace en ellos en las unidades de cuidados
intensivos neonatales (UCIN), ante problemas que ponen en peligro su vida. Los primeros en
usar los vasos umbilicales para alguno de los propósitos mencionados fueron Diamond
(1947) y James(1959)16

A pesar de la aparente facilidad para colocar los catéteres umbilicales el procedimiento no

está exento de complicaciones; las más frecuentes son: infecciones, arritmias cardiacas,
vasoespasmo, trombosis y embolias vasculares, taponamiento cardiaco, enterocolitis
necrosante, necrosis hepática e hipertensión de la porta. 17,18 Como factor predisponente se
menciona el tiempo de permanencia catéter en el vaso canalizado, por lo que se tiene el
cuidado de retirarlo tan pronto como se logre la estabilización del niño y sea posible contar
con otra vía es por la relativa facilidad de canalizar estos vasos para obtener en ellos
muestras de sangre, para administrar soluciones y medicamentos y para hacer mediciones
vascular central.

Se informa una mayor frecuencia de las complicaciones infecciosas, que generalmente

obedecen a dos circunstancias: 1) que 90% de estos vasos se encuentran colonizados por
bacterias al tercer día de vida y, 2) que el catéter, por su carácter invasivo, favorezca la
entrada de bacterias al organismo.19

Epidemiologia

El indicador de infección relacionada con catéter recomendado y utilizado en los principales

estudios de vigilancia de infección nosocomial, es la BRC. Su definición puede variar
teniendo en cuenta aspectos epidemiológicos, que incluyen la bacteriemia primaria (origen
desconocido), o clínicos (comprobación de la BRC con cultivos de microorganismos iguales
en el catéter y en hemocultivos). La CDC y la JCAHO recomiendan que las tasas de BRC se
expresen en episodios de BRC/1.000 días de catéter 20
Aunque la incidencia de BRC ha disminuido en los últimos años a unos 5,6 episodios/1.000
días de catéter, posiblemente por mejor diseño y calidad de los catéteres, el número de
7
 pacientes con BRC sigue siendo elevado. Esto es debido al mayor uso de CVC, su elevada
manipulación, a los avances en los métodos de diagnóstico microbiológico y a la puesta en
marcha de estándares de sistemas de vigilancia de infección nosocomial. 21

Patogenia

Se considera que la patogénesis de las infecciones relacionadas a catéter es compleja y

multifactorial. Las bacterias pueden llegar al torrente sanguíneo por dos vías principales:

􀂃 Pueden migrar desde la piel en la interfase del catéter hasta colocarse en la superficie externa
de éste.

􀂃 Pueden ingresar a la luz interna del catéter a través del conector

La migración de microorganismos presentes en la piel en el sitio de inserción del catéter con

colonización de la punta es la ruta mas común de infección en catéteres de corta
permanencia mientras que los catéteres de larga permanencia la contaminación del tubo de
catéter contribuye sustancialmente a su colonización intraluminal 22

Se han reconocido numerosas medidas de prevención efectivas en la reducción de las

infecciones, pero la ejecución de estas medidas en la práctica parece ser el problema más
relevante, existiendo gran diferencia entre la mejor evidencia disponible y la práctica clínica

Bases Clínicas
Cultivo semicuantitativo de la punta del catéter fue descrito por primera vez por Maki y cols.
en 1977. Este método cultiva la superficie externa de la punta del catéter. El criterio de
positividad (>15 UFC) fue elegido porque la mayoría de los pacientes con recuentos
inferiores no presentaban datos sugestivos de infección, mientras que todos los casos que
cursaban con bacteriemia tuvieron recuentos superiores a 15 UFC y con frecuencia las
colonias fueron incontables. La especificidad de ésta técnica fue del 76%. Este método, por
su sencillez ha sido aceptado por la mayoría de los laboratorios de microbiología y es la
técnica de referencia.23

8
En el estado o condición, con relación a un catéter ya colocado, por la cual el cuerpo o parte
de este ha sido invadido por un agente patógeno que, en condiciones favorables, se
multiplica y produce efectos dañinos. Una vez que el microorganismo se ha instalado en el
catéter, hay un cierto número de condiciones subsiguientes posibles, ya sean localizadas o
sistémicas. La mejor manera de determinar si el catéter es la causa de la infección, es hacer
un cultivo cuantitativo de catéteres junto con un cultivo periférico de sangre. Usando un
método semicuantitativo para un cultivo de catéter, las siguientes definciones son aplicables
al diagnóstico de infección:

A. Estéril: No hay crecimiento.

B. Contaminación: < 15 UFC de la punta del catéter.

C. Localizada:

1. Colonización: > 15 UFC de la punta del catéter. El organismo se presenta sin síntomas.

2. Infección del lugar de inserción: > 15 UFC en cultivos de la punta del catéter;
generalmente con síntomas externos de infección localizada.

D. Sistémica: Bacteremia relacionada con el catéter: > 15 UFC en cultivos de l apunta del
catéter y en cultivos periféricos de sangre positivos con el mismos organismo, sin
identificarse otro sitio de infección23

Agentes etiológicos de infecciones en catéter umbilical

La bacteremia es una invasión del torrente sanguíneo por bacterias. La bacteremia se

desarrolla como resultado del daño externo (la piel) o el interior (el tracto respiratorio, el
tracto digestivo) de las barreras del cuerpo. El agente causante de la bacteremia en un 71%
es el Staphylococcus aureus; Una entrada para la sepsis en pacientes con quemaduras
puede ser las heridas, catéteres de la vena, las vías aéreas, los pulmones, el tracto digestivo,
etc.24

Staphylococcus aureus
9
S. aureus forma parte de la familia Microccocaceae, género Staphylococcus, el cual contiene
más de 30 especies diferentes Es un coco gram-positivo, no móvil. No forma esporas, puede
encontrarse solo, en pares, en cadenas cortas o en racimos. Es un anaerobio facultativo,
pero crece mejor en condiciones aerobias 25 . El S. aureus es un microorganismo positivo a la
coagulasa, que se aísla con mayor frecuencia en infecciones de piel. 26 Staphylococcus
aureus es la principal especie patógena de su género y la causa común de diversas
infecciones de origen nosocomial y comunitario. 27

Los Staphylococcus producen muy diversos síndromes, con manifestaciones clínicas que
van desde una simple pústula hasta la sepsis y la muerte. 28

Escherichia coli y Klebsiella pneumoniae

Escherichia coli es un bacilo que reacciona negativamente a la tinción de Gram, es anaerobio

facultativo, móvil por flagelos peritricos (que rodean su cuerpo), no forma esporas, es capaz
de fermentar la glucosa y la lactosa. Klebsiella es un género de bacterias no mótiles, Gram-
negativas, con una prominente cápsula de polisacáridos. Estas especies patógenas están
significativamente asociadas a infecciones nosocomiales cuyas alternativas terapéuticas
cada vez son menores, por ser importantes fuentes de resistencia antibiótica transferible. 29

Estos patógenos están asociados con infecciones en infantes prematuros y pacientes de las
unidades de cuidado intensivo, son causantes de neumonías, bacteriemias, infecciones del
tracto urinario e infecciones de herida quirúrgica. 30

10
 Planteamiento de problema

¿Cuales son los agentes etiológicos que presentan los pacientes neonatos con catéter
umbilical durante su atención hospitalaria?

11
 Justificación

El uso temprano de catéteres umbilicales es una alternativa segura para el acceso

vascular en el recién nacido; sus complicaciones son escasas y no asociadas a la
administración de medicamentos o al uso de la vía enteral.

El catéter umbilical en neonatos es muy útil como línea central para administrar
soluciones y medicamentos, monitorizar la presión arterial y tomar muestras de gases
arteriales.

El siguiente trabajo descriptivo transversal se realiza con el objetivo de analizar las

complicaciones que se presentan con esta práctica, haciendo especial énfasis en la vía
oral concomitante.

Es sumamente importante contar con un buen método diagnóstico  para poder enfrentar
las infecciones asociadas a catéter, por lo tanto la decisión de retiro de un dispositivo
debe ser evaluada en forma responsable y criteriosa. La sola presencia del cuadro
clínico no determina su asociación con el dispositivo intravascular, ya que habitualmente
los signos clínicos son inespecíficos; es el diagnóstico microbiológico el que
determinará su retiro y/o tratamiento según corresponda.

12
 Objetivos

Objetivo general:

1.- Conocer la frecuencia de la flora bacteriana del ombligo del neonato por uso de catéter
durante su atención hospitalaria.

Objetivos específicos:

1.- Identificar el género y especie de los agentes etiológicos presentes en infecciones del
ombligo por uso de catéter umbilical en neonatos durante la atención hospitalaria.

2.- Proporcionar información al servicio de Vigilancia y Control de Enfermedades

Hospitalarias.

13
 Hipótesis

HI:

Los pacientes neonatos con catéter umbilical adquieren infecciones bacterianas como
Staphylococcus coagulasa negativos, Staphylococcus aureus, streptococcus ssp.
Enterococcus ssp. Gram negativos, Escherichia coli, Klebsiella ssp, Enterobacter, Serratia
ssp. Los agentes etiológicos fúngicos de mayor incidencia son Candida albicans, otras
especies de Candidas en su estancia en el hospital regional

Ho:

Los pacientes neonatos con catéter umbilical no adquieren infecciones bacterianas como
Staphylococcus coagulasa negativos, Staphylococcus aureus, streptococcus ssp.
Enterococcus ssp. Gram negativos, Escherichia coli, Klebsiella ssp, Enterobacter, Serratia
ssp. Los agentes etiológicos fúngicos de mayor incidencia son Candida albicans, otras
especies de Candidas en su estancia en el hospital regional.

14
MATERIAL Y METODOS

 Lugar de estudio y ubicación

La investigación se realizó en Veracruz, Veracruz, México que se encuentra ubicado en la

zona centro del estado.

 Ensayo clínico y tamaño de muestra

Para calcular el tamaño de la muestra y conformar el grupo de pacientes neonatos con

catéter umbilical se utilizo un intervalo de confianza de 95%. De tal manera, el tamaño de
muestra estimado fue de 80 pacientes, pero se eliminaron 30 debido a bajas del Hospital y
por defunción debido a padecimientos asociados al nacimiento prematuro del neonato.

 Criterios de inclusión

Se desarrolló un estudio transversal descriptivo para identificar pacientes neonatos que

adquirieron alguna infección de forma natural y conocer su prevalencia. Sólo fueron
considerados pacientes neonatos nacidos en el Hospital de Alta Especialidad de Veracruz,
del área de Pediatría, con sospecha de infección bacteriana, que fueran mayores de una
semana de vida y no mayores a 1 año, así como también que los catéteres umbilicales
fueran retirados en condiciones higiénicas apropiadas en base a lo descrito en la SS y sin
antecedentes de alguna infección previa. Se lograron reunir un grupo de 50 pacientes que
reunió las características óptimas para este estudio.

 Criterios de exclusión

15
No se tomaron en consideración para este estudio los cultivos de catéteres umbilicales que
no fueron retirados en condiciones apropiadas y los catéteres umbilicales de neonatos que
fueron transportados en un medio de cultivo inadecuado. Los Pacientes neonatos que
autorizada su participación en el estudio presentaron una patología traumática asociada y
los pacientes neonatos que autorizada su participación en el estudio presentaron una baja
por defunción fueron totalmente descartados para fines de esta investigación.

 Características de la unidad de pediatría.

La unidad de pediatría del Hospital Regional de Alta Especialidad está dividida en diferentes
aéreas de las cuales para fines de esta investigación se analizaron pacientes neonatos de
UCIN, UCIM, y cunero patológico. Debido a que existen pacientes en el área de pediatría que
ya no cumplen con el régimen de edad estipulado para este estudio.

 Muestreo para la selección de neonatos

Para la selección de los neonatos y para reunir el tamaño de la muestra necesario para el
estudio, se analizaron catéteres de todos los neonatos con sospecha de infección bacteriana
a partir de un mes de edad con el uso de medios de Stuart para transportar el catéter. Para
este muestreo no se tomó en cuenta el sexo. Cada tubo de Stuart se identificó con el nombre
completo del paciente, el servicio de donde se tomo, el tipo de muestra, fecha y un número
de folio con continuidad. Las muestras se conservaron a temperatura ambiente durante la
transportación a su análisis y luego, fueron remitidas al laboratorio para su análisis
microbiológico.

 Técnicas de laboratorio

Para el estudio microbiológico del catéter umbilical del neonato fue utilizada la técnica
semicuantitativa de maki. Esta técnica ha sido aceptada por la mayoría de los laboratorios
de microbiología y es la técnica de referencia.

16
Proceso de Investigación

Se trabajo con pacientes nacidos en el Hospital Regional De Alta Especialidad De Veracruz,

los cuales tuvieron participación en esta investigación hasta la identificación del agente
etiológico en el catéter umbilical.

Se realizo el retiro del catéter umbilical del neonato con una técnica aséptica utilizando
material estéril, se desinfecto la piel con alcohol al 10% y se dejo secar, con pinza se retiro el
catéter cuidando de no rosar la piel, se corto de 3 a 5 cm de la porción distal y se coloco en
el medio de transporte Stuart para remitirlo al laboratorio de microbiología para su análisis
bacteriológico.

En el laboratorio se inoculo el catéter umbilical en el agar base sangre por la técnica

semicuantitativa de maki rotando el catéter con ayuda del asa bacteriológica 5 veces. Se
incubo 24 Hrs. A 37°C en atmosfera O2. Se prosiguió con la interpretación de la morfología
colonial, se resembraron colonias en los medios: Agar sal y manitol, Agar Mac Conkey y Agar
Biggy para su diferenciación, se Incubo 24 Hrs. A 37°C en atmosfera de O2 continuando con
la Interpretación de la morfología colonial.

Se realizaron tinciones gram para diferenciar Gram positivas de Gram negativas., para Gram
positivas como para Gam negativas se procedió a la preparación de paneles. Se Incubaron
los paneles Gram en la estufa del Sensititre a 37°C por 24 Hrs en atmosfera de O2. Se
continúo con la lectura de paneles Gram en autoreader Sensititre., obteniendo así el
resultado bacteriano en cuanto a género y especie.

17
 Material empleado:

 Paneles Combo Sensititre.

 Laminas adhesivas.
 Agua desmineralizada Sensititre.
 Tira de substrato para prueba de Gram positivos.
 Aceite mineral.
 Reactivos para tinción de Gram.
 Cabezales de dosificación Sensititre.
 Estándar de turbidez McFarland 0.5.
 Puntas desechables para pipeta.
 Tubos de ensaye 13 x 100
 Tubos de ensaye 10 x 75
 Pipetas Automáticas de 5 ųl
 Gradilla
 Quemador bunsen
 Asa bacteriológica
 Cajas petri
 Goteros
 Jabón de manos
 Detergente
 Toalla
 Franela
 Alcohol
 Cubrebocas
 Guantes desechables
 Recipiente para material contaminado
 Rollo de papel adsorbente
 Cloro
 Gasas
 Bolsas de plástico
 Cerillos
18
 Porta objetos
 Cubre objetos
 Papel estraza
 Computadora.
 Impresora.
 Hojas tamaño carta blancas.

Medios de cultivo:

 Agar base sangre

 Agar Sal de manitol
 Agar Mac Conkey.
 Biggy.
 Caldo de cultivo Mueller Hinton con cationes ajustado a Sensititre.
 Medio de transporte Stuart.

Equipos de Laboratorio:

1. Estufa de cultivo
2. Microscopio
3. Vortex
4. Auto inoculador.
5. SISTEMA SENSITITRE
a. Autoreader Sensititre.
b. Estufa Sensititre.

19
Fundamentos.

Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es observar

su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material
alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de
los microorganismos es el Cultivo.

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir
una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presión de oxígeno
adecuadas, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe
contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo
microorganismo contaminante.

Estos Medios fueron utilizados en esta investigación para fines de identificación de

microorganismos bacterianos, Cada medio tiene una característica importante para ser
empleado en este proyecto.

A continuación se describen:

Medio de Transporte Stuart:

Medio semisólido, no nutritivo. Contiene tioglicolato de sodio, el cual provee un ambiente
reducido y es útil para suprimir cambios oxidativos en el medio de transporte, y azul de
metileno, que es el indicador de oxido reducción. De esta manera se favorece la viabilidad de
los microorganismos durante su envío al laboratorio.

Agar sangre:
La infusión de músculo de corazón y la peptona, otorgan al medio un alto valor nutritivo, que
permite el crecimiento de una gran variedad de microorganismos, aún de aquellos
nutricionalmente exigentes. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico.
El agregado de sangre al medio de cultivo, en concentración final de 5-10 %, aporta
nutrientes para el crecimiento bacteriano, y permite detectar hemólisis.

20
Agar Mac Conkey:
En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo
bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la mezcla de sales biliares y el
cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora
Gram positiva. Por fermentación de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto
produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro), la absorción en las colonias, y la
precipitación de las sales biliares. Los microorganismos no fermentadores de lactosa
producen colonias incoloras.

Agar sal y manitol:

Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentración salina. Los
estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio; las colonias
aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante. Los estafilococos coagulasa negativos,
presentan colonias rodeadas de una zona roja o púrpura. En el medio de cultivo, el extracto
de carne y la pluripeptona, constituyen la fuente de carbono, nitrógeno, vitaminas y
minerales, el manitol es el hidrato de carbono fermentable, el cloruro de sodio (que se
encuentra en alta concentración) es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora
acompañante, y el rojo fenol es el indicador de pH. Las bacterias que crecen en un medio
con alta concentración de sal y fermentan el manitol, producen ácidos, con lo que se modifica
el pH del medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo. Los estafilococos crecen
en altas concentraciones de sal, y pueden o no fermentar el manitol. Los estafilococos
coagulasa positiva fermentan el manitol y se visualizan como colonias amarillas rodeadas de
una zona del mismo color. Los estafilococos que no fermentan el manitol, se visualizan como
colonias rojas, rodeadas de una zona del mismo color o púrpura.

Agar Biggy:
El Agar Biggy es una modificación de la fórmula desarrollada por Nickerson. La
diferenciación está basada en la morfología colonial y la pigmentación típica que se presenta
en este medio. La reducción del sulfito de bismuto se manifiesta en una pigmentación de la
colonia que en ocasiones difunde en el medio. En este medio el extracto de levadura
proporciona vitaminas y aminoácidos. La glicina es utilizada para estimular el crecimiento. La
dextrosa es la fuente de carbono. El indicador sulfito de bismuto actúa también como un
inhibidor del desarrollo bacteriano. El agar es adicionado como agente solidificante.

21
Caldo de cultivo Mueller Hinton con cationes:
El caldo Mueller-Hinton se recomienda como el medio preferido para pruebas de
susceptibilidad de organismos comúnmente aislados, aeróbicos o facultativos de rápido
crecimiento. El caldo debe tener el contenido apropiado de cationes (Ca++ y Mg++). El pH
debe estar entre 7,2 y 7,4 a temperatura ambiente (25º C).

22
Paneles Combo Sensititre para identificación y determinación de sensibilidad de
bacterias Gram positivas:

La placa Sensititre Combo Gram positivos es un producto de diagnostico en Vitro para la

identificación y determinación de la sensibilidad automatizada de bacterias Gram positivas.
Cada placa combo contiene 32 pruebas bioquímicas secas cada una y agentes
antimicrobiamos a las diluciones adecuadas. Las pruebas de identificación incluyen medios
bioquimicos clásicos reformulados para lectura fluorometrica y pruebas que utilizan
substratos fluorogenicos. Las pruebas de sensibilidad implica la detección cuantitativa del
crecimiento bacteriano mediante el control de la actividad de las enzimas producidas por los
organismos. Los substratos fluorescentes se encuentran deshidratados en la placa o se
agregan como una tira de papel en el caldo de cultivo.

1.- Pruebas de fermentación de azúcar: glucosa, glicerol, maltosa, manitol, B-metilglucósido,

ramnosa, sacarosa, sorbitol, trehalosa. La producción de acido reduce la fluorescencia de un
fluoróforo sensible al pH.

2.- Pruebas de substrato fluorogénico: el substrato enzimático esta vinculado a un fluoróforo

que suprime la fluorescencia. La ruptura enzimática de la unión libera el fluoróforo con
capacidad de fluorescencia.

3.- Pruebas especificas: la hidrólisis de la urea y la arginina (requieren la adición de aceite

mineral estéril) incrementa el pH y la fluorescencia. La esculina es una molécula fluorescente
que, al hidrolizarse, se descompone en productos no fluorescentes.

23
Paneles Combo Sensititre para identificación y determinación de sensibilidad de
bacterias Gram negativas:

La placa Sensititre Combo Gram positivos es un producto de diagnostico en Vitro para la

identificación y determinación de la sensibilidad automatizada de bacterias Gram positivas.
Cada placa combo contiene 32 pruebas bioquímicas secas cada una y agentes
antimicrobiamos a las diluciones adecuadas. Las pruebas de identificación incluyen medios
bioquimicos clásicos reformulados para lectura fluorometrica* y pruebas que utilizan
substratos fluorogenicos. Las pruebas de sensibilidad implica la detección cuantitativa del
crecimiento bacteriano mediante el control de la actividad de las enzimas producidas por los
organismos. Los substratos fluorescentes se encuentran deshidratados en la placa o se
agregan como una tira de papel en el caldo de cultivo.

1.- Pruebas de fermentación de azúcar: Arabinosa, arabitol, celobiosa, fructosa, inositol,

maltosa, manitol, rafinosa, sacarosa, sorbitol, trehalosa, xilosa. La producción de acido
reduce la fluorescencia de un fluoróforo sensible al pH.

2.- Pruebas de substratos fluorogénico: Cada substrato enzimático esta vinculado a un

fluoróforo que suprime la fluorescencia. La ruptura partición enzimático de la unión libera el
fluoróforo con capacidad de fluorescencia.

3.- Pruebas de utilización de carbono: Agmatina, arginina, citrato, lisina, malonato, ornitina y
piruvato. La descomposición del substrato provoca un aumento de pH y la fluorescencia.

4.- Otras pruebas especificas: la hidrólisis de la urea incrementa el pH y la fluorescencia. La

esculina es una molécula fluorescente que, al hidrolizarse, se descompone en productos no
fluorescentes. Desaminación del triptofano. La formación de un color oscuro suprime la señal
fluorescente.

24
Sistema Sensititre

Es un sistema automatizado para microbiología el cual realiza la identificación y

susceptibilidad microbiana en concentración mínima inhibitoria (MIC). Utiliza un sustrato
fluorescente* presente en cada medio, para detectar el crecimiento microbiano y medir la
actividad metabólica.

* Fluorescencia es un proceso de emisión en el cual las moléculas son excitadas por la

absorción de radiación electromagnética. Las especies excitadas se relajan al estado
fundamental, liberando su exceso de energía en forma de fotones. Una vez excitada, la
molécula pasara al modo vibracional de menor energía del estado excitado. El fotón emitido
por fluorescencia tiene menos energía que el absorbido. Por tanto, posee una frecuencia
menor y emite a mayor longitud de onda.

25
 Tecnica:

Protocolo de trabajo e inoculación de las placas combo MEXPC1, para identificación y

susceptibilidad a organismos Gram-positivos

 Encender el autoinoculador y calibrar con el estándar de Mc Farland de 0.5.

 Se tomó de dos a tres colonias aisladas y de las mismas características coloniales
(previa verificación de ser bacterias Gram-positivas) de una placa de Agar Sangre y
suspenderlas en el caldo estandarizado para inóculo y ajustarlo al estándar de Mc Farland de
0.5 en el autoinoculador.
 Una vez ajustado el caldo para inóculo al estándar de 0.5, transferir 10 μl con
micropipeta y punta estéril al caldo de Muller-Hinton y homogenizo.
 Inmediatamente después colocar al caldo Muller-Hinton en condiciones de asepsia
una tira con sustrato fluorogènico.
 Homogenizar.
 En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el patron 22
/ sample 1, el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales
contienen las pruebas bioquímicas.
 Después se coloca el caldo de Muller-Hinton y con sample 2, el equipo inocula el resto
de los pocillos, dispensando 100 μl para las pruebas de susceptibilidad.
 Finalmente con sample 3, el equipo dispensara aceite mineral en el primer pocillo.
 Leer las placas a las 24 horas.

26
 Protocolo de trabajo e inoculación de las placas combo MEXNC1F, para identificación
y susceptibilidad a organismos Gram-negativos.

 Encender el autoinoculador y calibrarlo con el estándar de Mc Farland de 0.5 .

 Tomar de dos a tres colonias aisladas y de las mismas características coloniales
(previa verificación de ser bacterias Gram-negativas) de una placa de Agar Sangre o Agar
Mc Conkey y suspenderlas en el caldo estandarizado para inóculo y ajustarlo al estándar de
Mc Farland de 0.5 en el autoinoculador.
 Una vez ajustado el caldo para inóculo al estándar de 0.5, transferir 10 μl con
micropipeta y punta estéril al caldo de Muller-Hinton y homogenizar.
 Homogenizar.
 En el autoinoculador colocamos el caldo estandarizado para inoculo y con el Patron 21
/ Sample 1, el equipo dispensara 50 μl del mismo en los primeros 32 pocillos los cuales
contienen las pruebas bioquímicas.
 Después colocamos el caldo de Muller-Hinton y con sample 2, el equipo inoculara el
resto de los pocillos, dispensando 50 μl para las pruebas de susceptibilidad.
 Finalmente con sample 3, el equipo dispensara aceite mineral en dos pocillos.
 Leer las placas a las 24 horas.

NOTA:

- ESTA PLACA NO REQUIERE LA ADICIÓN DE TIRA FLUOROGENICA.

27
RESULTADOS:

En relación al aislamiento de agentes bacterianos a partir del cultivo del catéter umbilical se
obtuvo que el 78% de los pacientes fueron positivos al cultivo bacteriano, mientras que el
22% fue negativo (grafica No. 1).

Grafica No. 1
AISLAMIENTOS POSITIVOS A AGENTES BACTERIANOS DEL CULTIVO DE LA PUNTA
DEL CATETER UMBILICAL

MUESTRAS TOTALES
POSITIVAS NEGATIVAS
22%

78%

28
De estos cultivos positivos el 57% mostró desarrollo de bacterias Gram positivas, el 29%
fueron bacterias Gram negativas y el 14% fueron levaduras (grafica No. 2).

Grafica No. 2
ESPECIES GRAM POSITIVAS Y NEGATIVAS AISLADAS EN CULTIVOS DE CATETER
UMBILICAL
n = 39 Aislamientos

MORGOLOGIA COLONIAL
Coccos Gram + 50% Basilos Gram + 7%
Basilos Gram - 29% Hongos Levaduriformes 14%
14%

50%

29%

7%

29
De las bacterias Gram positivas encontradas el 36% correspondió a la especie S.
epidermidis, el 16% a S. haemolyticus y con menor incidencia se encontró al S. aureus con 1
caso correspondiente al 4%. (Grafica No. 3).

Grafica No. 3
AGENTES BACTERIANOS GRAM + CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES
INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL.
n = 25 Aislamientos

GRAM POSITIVOS
40%

35%

30%

25%

20% 36.00%

15%

10% 16.00%
12.00% 12.00% 12.00%
5% 8.00%
4.00%
0%
is us is tis g ry us
id t ic in pi ne rne re
rm y m a a a u
e ol ho -c as .w .a
id m s- i tis ul S
ep e in
i p g S
S. ha ca co
a
S. hom . .
S S
S.

30
De las bacterias Gram negativas encontradas el 40% correspondió a la especie P.
aeruginosa, el 30% a E. coli y con menor incidencia se encontró K. oxytoca con 1 caso
correspondiente al 10%. (Grafica No. 4).

Grafica No. 4
AGENTES BACTERIANOS GRAM - CAUSANTES DE INFECCION DE PACIENTES
INCLUIDOS EN EL ESTUDIO CON CATETER UMBILICAL.

n = 10 Aislamientos

GRAM NEGATIVOS

K. oxytoca 10.00%

K. pneumoniae 20.00%

E. coli 30.00%

P. aeruginosa 40.00%

31
De manera particular en cuanto al género Cándida se encontró que el 50% correspondió a C.
albicans y el 50% a C. tropicalis (grafica No. 5).

Grafica No. 5
ESPECIES DEL GÉNERO Cándida AISLADOS E IDENTIFICADOS EN CULTIVO DE
CATETER UMBILICAL.

n = 4 Aislamientos.

HONGOS LEVADURIFORMES

50% 50% C. albicans

C. tropicalis

32
DISCUSIÓN

Clark R. (2004), en su estudio de Prevención y Tratamiento de Enfermedades Nosocomiales

en la UCIN (Unidad de Cuidados Intensivos Neonatales) menciona que los factores de riesgo
de infecciones asociadas a catéteres umbilicales, son diferentes ya que dependen del sitio
donde se instale el catéter, aunque el tiempo de permanencia del catéter en los vasos
umbilicales parece ser un factor de riesgo común independientemente del vaso canalizado.
En el presente trabajo del total de pacientes, 50% fueron colocados en arteria y 50% en
vena, dando como resultado una colonización de catéter de 39 muestras correspondiente al
78%.

Gaspar U. (2007), menciona en su artículo que las complicaciones infecciosas, generalmente

obedecen a dos circunstancias: 1) que 90% de estos vasos se encuentran colonizados por
bacterias al tercer día de vida y, 2) que el catéter, por su carácter invasivo, favorezca la
entrada de bacterias al organismo.

Lo que llamo la atención en este tipo de estudio realizado en el Hospital de Alta Especialidad
es la diversidad de especies encontradas como fue: 4 muestras de S. haemolyticus
correspondiente al 10.3%, S. hominis-hominis, con 3 muestras correspondiente al 7.7% y S.
warnery que aunque no es considerada de importancia clínica obtienen relevancia para este
estudio.

El género más relevante en esta investigación fue el S. epidermidis con un 23% ya que es
una bacteria de flora normal, esta bacteria está muy lejos de ser oportunista ya que es
encontrada normalmente en incisiones o heridas debido a que se encuentra en piel, respecto
a esta bacteria no se puede decir que es de origen nosocomial, debido a esta característica
el s. epidermidis es la bacteria mas susceptible de encontrar en el catéter.

33
Al encontrar hallazgos de hongos levaduriformes se expresa que al tratarse de c. albicans
esto nos habla de que el microorganismo bacteriano fue contraído de la madre al hijo, siendo
esta la portadora de la candidiasis.

La estancia hospitalaria favoreció la colonización por agentes microbianos tanto por Gram
positivos y Gram negativos, teniéndose que el 38.46% de los pacientes permaneció entre 15
y 30 días dentro del hospital, la estancia y el tiempo favoreció el desarrollo de
microorganismos en el cateter de los pacientes.

El Cultivo semicuantitativo de la punta del catéter que en esta investigación se empleo fue
descrito por primera vez por Maki y cols. en 1977. Este método cultiva la superficie externa
de la punta del catéter con un criterio de positividad (>15 UFC) fue elegido porque la mayoría
de los pacientes con recuentos inferiores no presentaban datos sugestivos de infección. La
especificidad de ésta técnica fue del 76%.

Este método, por su sencillez ha sido aceptado por la mayoría de los laboratorios de
microbiología y es la técnica de referencia que se tomo para esta investigación en donde de
los 39 casos positivos únicamente 9 muestras correspondientes al 23.07% coinciden con
este parámetro, esto no significa que el 76.93% no tengan importancia clínica.

34
CONCLUSION

La colonización de un catéter depende de un proceso de adhesión bacteriana mediada por

una interacción físico-química (interacción hidrofóbica, fuerzas de Van der Waals).
Staphylococcus epidermidis se une al catéter principalmente mediante interacción
hidrofóbica, la adhesión de Staphylococcus aureus o Candida está estimulada por las
proteínas séricas, siendo su adherencia mayor.

Se logro identificar la flora bacteriana que con frecuencia de desarrolla en el ombligo del
neonato al utilizar el catéter como via de administración de soluciones, o para la toma de
presión durante su atención Hospitalaria, obteniendo el genero y especie de los
micoorganismos encontrados.

De los resultados obtenidos en esta investigación el agente microbiano con mayor incidencia
fueron los Gram positivos en un 50% donde el género más relevante fue el S. epidermidis
con un total de 9 casos correspondiente al 23%.

A pesar de que K. pneumoniae al igual que E. coli están en igualdades de proporción con 2
casos cada uno correspondiente al 5.1% llaman la importancia las P. aeruginosa con 4 casos
correspondientes al 10.3% no sin olvidar la presencia de órganos levaduriformes con 2 casos
cada uno de las especies albicas y tropicalis; indiscutiblemente es importante su
identificación es estos casos en los que la prolongada hospitalización y los procedimientos
invasivos a los que son sometidos los recién nacidos han contribuido al aumento de ciertas
infecciones bacterianas. La duración de la estancia hospitalaria un factores relacionado
directamente con infecciones nosocomiales.

35
Aunque se tienen avances en la prevención y el tratamiento, las infecciones continúan
siendo una importante causa de morbilidad y mortalidad en el periodo neonatal.

Se proporciono esta información al servicio de vigilancia y control de enfermedades

Hospitalarias, para una mayor calidad del servicio del Hospital a la comunidad. Logrando así
los objetivos de esta investigación.

BIBLIOGRAFIAS

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