2.2.

25 Abszorpcis spektrofotometria az ultribolya

Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.5.2. 1

2.2.25. ABSZORPCIS SPEKTROFOTOMETRIA AZ ULTRAIBOLYA S LTHAT SZNKPTARTOMNYBAN

07/2005:20225 Az abszorbancia meghatrozsa. Valamely oldat abszorbancijt (A) az oldat monokromatikus fnyt tereszt kpessge (transzmittancija /T/) reciproknak tizes alap logaritmusaknt definiljuk:

I 1 A = log10 = log10 0 T I
ahol T = I/I0, I0 = a bees monokromatikus fnysugr intenzitsa, I = az teresztett monokromatikus fnysugr intenzitsa. Amennyiben az egyb fizikai-kmiai tnyezk elhanyagolhatk, a mrt abszorbancia (A) egyenesen arnyos az oldatban lv anyag koncentrcijval (c), valamint azzal a rtegvastagsggal (b), amelyen a sugrzs thaladt. Ekkor a kvetkez sszefggs rvnyes: A = cb ahol = molris abszorpcis koefficiens, ha a rtegvastagsgot (b) centimterben s a koncentrcit (c) mol/literben adjuk meg.
1% Valamely oldott anyag fajlagos abszorpcis koefficiense ( A1cm ), amely a 10 g/l tmnysg s 1 cm rtegvastagsg oldat abszorbancijt jelenti az adott hullmhosszon, az albbi sszefggssel adhat meg:
1% A1cm =

10 Mr

Ha ms elrs nincs, az abszorbancit az elrt hullmhosszon, 1 cm rtegvastagsgban, 201 C-on mrjk, s kompenzl folyadkknt a vizsglati oldat ksztshez alkalmazott oldszert vagy oldszerelegyet hasznljuk. Az

2.2.25 Abszorpcis spektrofotometria az ultribolya

Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.5.2. 2

oldszer levegvel szemben mrt abszorbancija az elrt hullmhosszon legfeljebb 0,4 lehet, de lehetleg a 0,2 rtket se haladja meg. Az abszorpcis spektrum brzolshoz az ordintn az abszorbancit vagy annak valamilyen fggvnyt, az abszcisszn a hullmhosszat vagy annak valamilyen fggvnyt tntetjk fel. Ha a cikkely az abszorpcis maximum helyre egyetlen hullmhosszrtket ad meg, a mrt rtk az elrttl legfeljebb 2 nm-rel trhet el. Kszlk. A lthat s az ultraibolya sznkptartomnyban hasznlatos spektrofotomterek olyan optikai rendszerek, amelyek a 200-800 nm hullmhossztartomnyban monokromatikus sugrzs ellltsra alkalmasak, s magukban foglaljk az abszorbancia mrsre alkalmas berendezst is. A hullmhossz-skla ellenrzse. A hullmhossz-sklt az R holmium-perklort oldat abszorpcis maximumai s a hidrogn-, a deutrium- vagy a higanygzlmpa vonalai alapjn ellenrizhetjk (lsd a 2.2.25.-1. tblzatot). A megengedett eltrs az ultraibolya sznkptartomnyban 1 nm, a lthat sznkptartomnyban pedig 3 nm. Az ellenrzsre megfelel, bizonylattal elltott referenciaanyagok is hasznlhatk. 2.2.25.-1. tblzat. A hullmhossz-skla ellenrzsre hasznlt abszorpcis maximumok 241.15 nm (Ho) 253.7 nm (Hg) 287.15 nm (Ho) 302.25 nm (Hg) 313.16 nm (Hg) 334.15 nm (Hg) 361.5 nm (Ho) 365.48 nm (Hg) 404.66 nm (Hg) 435.83 nm (Hg) 486.0 nm (D) 486.1 nm (H) 536.3 nm (Ho) 546.07 nm (Hg) 576.96 nm (Hg) 579.07 nm (Hg)

Az abszorbancia ellenrzse. Az abszorbancit megfelel szrkkel vagy R kliumdikromt oldatval ellenrizzk a 2.2.25.-2. tblzatban megadott hullmhosszakon. A tblzat tartalmazza az egyes hullmhosszakhoz tartoz fajlagos abszorpcis koefficiensek pontos rtkeit s a megengedett hatrrtkeket. Az abszorbancialeolvassok megengedett eltrse 0,01.

2.2.25 Abszorpcis spektrofotometria az ultribolya

Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.5.2. 3

Az abszorbancia ellenrzsre 130 C-on tmegllandsgig szrtott R kliumdikromt oldatait hasznljuk. A 235, 257, 313 s 350 nm-en mutatkoz abszorbancia ellenrzsre 57,063,0 mg R klium-dikromtot 0,005 M knsavval 1000,0 ml-re oldunk. A 430 nm-en mutatkoz abszorbancia ellenrzsre 57,063,0 mg R kliumdikromtot 0,005 M knsavval 100,0 ml-re oldunk. Az ellenrzsre megfelel, bizonylattal elltott referenciaanyagok is hasznlhatk. 2.2.25.-2. tblzat Hullmhossz Fajlagos abszorpcis koefficiens (nm) 1% Megengedett hatrrtkek 122.9126.2 142.8146.2 47.050.3 105.6109.0 105.6109.0 15,716,1

(A )
1 cm

235 257 313 350 350 430

124.5 144.5 48.6 107.3 107.3 15,9

A szrt fny ellenrzse. A szrt fny adott hullmhosszon megfelel szrkkel vagy oldatokkal ellenrizhet: pl. R klium-klorid 12 g/l-es oldatnak abszorbancija 1 cm-es rtegvastagsgban, 220 s 200 nm kztt meredeken emelkedik s 190 nmen kompenzl folyadkknt R vizet alkalmazva nagyobb, mint 2,0. Az ellenrzsre megfelel, bizonylattal elltott referenciaanyagok is hasznlhatk. Felbontkpessg (kvalitatv vizsglatokhoz). Ha a cikkely elrja a kszlk felbontkpessgnek ellenrzst, felvesszk R toluol R hexnnal kszlt 0,02 %V/V-os oldatnak spektrumt. A 269 nm-en lv maximumon s a 266 nm-en lv minimumon mrt abszorbancik hnyadosnak legkisebb megengedett rtkt az egyes cikkelyek rjk el. Az ellenrzsre megfelel, bizonylattal elltott referenciaanyagok is hasznlhatk. Spektrlis rsszlessg (kvantitatv analzishez). Amennyiben olyan mszert hasznlunk, amelynek rsszlessge vltoztathat a vlasztott hullmhosszon, a spektrlis rsszlessg okozta hiba elkerlse rdekben az abszorpcis sv flszlessghez kpest keskeny rsszlessget kell belltani, amely azonban elg szles ahhoz, hogy nagy I0 rtket kapjunk. A rsszlessget ezrt mindig gy kell

2.2.25 Abszorpcis spektrofotometria az ultribolya

Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.5.2. 4

megvlasztani, hogy a leolvasott abszorbancia a rs tovbbi szktsvel ne vltozzk. Kvettk. A kvettk rtegvastagsgnak megengedett eltrse 0,005 cm. Ha a vizsglati oldatnak s a kompenzl folyadknak sznt kvettkat ugyanazon oldszerrel tltjk meg, azonos transzmittancia-rtkeket kell kapnunk. Az esetleges eltrst megfelelen korriglni kell. gyelni kell a kvettk gondos tiszttsra s kezelsre.

DERIVATV SPEKTROFOTOMETRIA A derivatv spektrofotometris vizsglatok sorn az abszorpcis spektrumot (amely nulladrend) els-, msod- vagy mg magasabb rend derivatv spektrumm alaktjuk t. A spektrum els derivltja az abszorpcis-grbe grdienst (a hullmhossz szerinti abszorbancia vltozst, dA/d) brzolja a hullmhossz fggvnyben. A spektrum msodik derivltja az abszorpcis spektrum grblett brzolja a hullmhossz fggvnyben (d2A/d2). A msodik derivlt sszefggse a koncentrcival brmely hullmhosszon:
1% d 2 A d 2 A1cm c b d 2 A cb = = 10 d2 d2 d2 10

ahol c= az abszorbel, oldott anyag koncentrcija g/l-ben. Kszlk. Derivatv spektrumok ellltsra a fentebb elrt kvetelmnyeknek megfelel, analg rezisztencia-kapacitancia differencil modullal, digitlis differencil egysggel, vagy egyb, derivatv spektrum ellltsra alkalmas eszkzzel elltott spektrofotomtert hasznlunk. A spektrumok msodik derivltjnak ellltsra alkalmazott mdszerek nmelyike hullmhosszeltoldst eredmnyez a nulladrend spektrumhoz kpest, s ezt az adott esetben figyelembe kell venni. Felbontkpessg.. Ha a vonatkoz cikkely elrja, felvesszk az R toluol R metanollal kszlt, 0,2 %V/V-os oldatnak msodik-derivlt-spektrumt, kompenzl folyadkknt R metanolt hasznlva. A spektrumban a kt nagy negatv jel (261 s

2.2.25 Abszorpcis spektrofotometria az ultribolya

Ph.Hg.VIII. Ph.Eur.5.2. 5

268 nm) kztt egy kis negatv jelnek kell megjelennie (lsd a 2.2.25.-1. brt). Hacsak a cikkelyben nincs ms elrs, az A/B arnynak (lsd a 2.2.25.-1. brt) legalbb 0,2 -nek kell lennie. Vizsglat. Elksztjk a vizsgland anyag oldatt, s a kszlk hasznlati utastsnak megfelelen elvgezzk a mrst, majd a cikkely elrsainak alapjn kiszmoljuk a vizsgland anyag mennyisgt.

2.2.25.-1. bra