Nanotecnologia para o Mercosul

Edio 2010 do Prmio Mercosul de Cincia e Tecnologia

Braslia, novembro de 2010

Os autores so responsveis pela escolha e apresentao dos fatos contidos neste livro, bem como pelas opinies nele expressas, que no so necessariamente as da UNESCO, nem comprometem a Organizao. As indicaes de nomes e a apresentao do material ao longo deste livro no implicam a manifestao de qualquer opinio por parte da UNESCO a respeito da condio jurdica de qualquer pas, territrio, cidade, regio ou de suas autoridades, nem tampouco a delimitao de suas fronteiras ou limites.

Nanotecnologia para o Mercosul

Edio 2010 do Prmio Mercosul de Cincia e Tecnologia

 2010 UNESCO

Reviso (portugus): Antnio Joo Guimares - DeBrito Propaganda Reviso (espanhol): Florencia Paoloni - Ministrio de Cincia, Tecnologia e Inovao Produtiva (MINCyT/Argentina) Diagramao: Paulo Selveira e Edson Fogaa Projeto grfico e capa: Edson Fogaa

Nanotecnologia para o MERCOSUL: edio 2010 do Prmio Mercosul de Cincia e Tecnologia. Braslia: UNESCO, MBC, RECyT/ MERCOSUL, CNPq, 2010. 180 p. ISBN: 978-85-7652-134-1

1. Nanotecnologia 2. Tecnologia 3. Mercosul. Amrica Latina I. UNESCO II. Movimento Brasil Competitivo III. Reunio Especializada de Cincia e Tecnologia IV. Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico

Representao no Brasil
SAS, Quadra 5 Bloco H, Lote 6, Ed. CNPq/IBICT/UNESCO, 9 andar 70070-914 - Braslia - DF - Brasil Tel.: (55 61) 2106-3500 Fax: (55 61) 322-3697 E-mail: grupoeditorial@unesco.org.br Site: www. unesco.org/brasilia

Organizao das Naes Unidas para a Educao, a Cincia e a Cultura

AGRADECIMENTOS

Comisso de Avaliao dos trabalhos concorrentes ao Prmio, constituda de representantes indicados pelas coordenaes da Reunio Especializada de Cincia e Tecnologia (RECyT) dos pases-membros do Mercosul, que esteve reunida no escritrio da UNESCO, em Braslia, no perodo de 21 a 23 de setembro de 2010 para analisar e selecionar os trabalhos premiados em quatro categorias. Ao grupo tcnico constitudo por especialistas pertencentes s instituies organizadoras e patrocinadoras do Prmio. Ao Ministrio da Cincia e Tecnologia do Brasil MCT/Brasil, ao Movimento Brasil Competitivo MBC e ao Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico CNPq, parceiros na organizao e execuo desse Prmio, e ao Ministrio da Cincia, Tecnologia e Inovao Produtiva da Argentina MINCYT e Fundao Nanotecnolgica Argentina FAN, patrocinadores do Prmio Mercosul de Cincia e Tecnologia de 2010. A todos que, direta ou indiretamente, contriburam para a realizao desse Prmio.

Comisso de Avaliao Professor Ary Mergulho Filho Presidente da Comisso, UNESCO/Brasil Professor Guillermo R. Castro Representante da RECyT/Argentina Professor Joel Camargo Rubim Representante da RECyT/Brasil Professor Juliano Chaker Representante da RECyT/Brasil Grupo Tcnico da Comisso de Avaliao: Eliana Cardoso Emediato de Azambuja MCT/Brasil Fernanda Velloso UNESCO/Brasil Jos Henrique Dieguez Barreiro MCT/Brasil Michele Knop UNESCO/Brasil Rafaela Marques UNESCO/Brasil Rita de Cssia da Silva CNPq/Brasil Roberta da Silva UNESCO/Brasil

SUMRIO

Abstract....................................................................................................9 Prmio Mercosul de Cincia e Tecnologia Chamada 2010 ......................................................................................11 TRABALHOS PREMIADOS Categoria Iniciao Cientfica Anlise da impregnao de nanopartculas de dixido de zircnio e de prata em um curativo visando ativao da circulao sangunea e efeito antimicrobiano......................................15 Categoria Estudante Universitrio NanoSensores SERS: ampliando os mtodos de Feigl .............................39 Categoria Jovem Pesquisador Sntese de nanotubos de carbono atravs do uso do bagao da cana-de-acar como matria-prima.......................................57 Categoria Integrao Materiais nanoestruturados: sntese, estudos com luz sncrotron, propriedades e aplicaes.........................................75 TRABALHOS AGRACIADOS COM MENO HONROSA Categoria Iniciao Cientfica Modificacin de bentonita para la obtencin de nanoarcillas y su utilizacin en un polmero biodegradable sintetizado a partir del cido L(+)LCTICO policondensado ................................103

Categoria Estudante Universitrio Pontos qunticos de CdTe/CdS: uma nova ferramenta biofotnica na investigao de antgenos eritrocitrios ..........................123 Categoria Jovem Pesquisador Encapsulacin del frmaco antirretroviral efavirenz en nanotransportadores polimricos para la Optimizacin de la farmacoterapia del virus de la inmunodeficiencia humana en pacientes peditricos ........................................................................145 Nota sobre os autores ...........................................................................171 Nota sobre os membros da comisso de avaliao .................................177

ABSTRACT

The Mercosurs Science and Technology Award was established in 1998 by the Science and Technology Specialised Meeting RECyT/Mercosur. In its seventh edition, the call for submission was launched on the 5th of April, 2010, with partnership from United Nations Educational, Scientific and Cultural Organization (UNESCO), Brazilian Ministry of Science and Technology (MCT), Brazilian Competitive Movement (MBC) and National Council for Scientific and Technological Development (CNPq ), and sponsorship from the Argentinian Ministry of Science, Technology and Productive Innovation (MINCYT), and the Argentinian Nanotechnology Foundation (FAN). The goal of the Award is to recognize and award prizes to the best research works that represent potential contribution to scientific and technological development of Mercosur countries. It also provides incentives for scientific and technological research to be carried out, directed at the regional integration process amongst the countries in the block. In 2010, Nanotechnology was chosen as the topic with four categories: Scientific Initiation for students of upper secondary education up to 21 years of age, University Student for higher education undergraduates with no age limit, Young Researcher for graduated scholars of up to 35 years of age and Integration for teams that have graduated, with no age limit and involving at least two different countries. This book presents the Award winners and the Honour received works in its four categories.

PRMIO MERCOSUL DE CINCIA E TECNOLOGIA Chamada 2010

Discutida desde 1959 a partir das ideias propostas pelo fsico americano Richard Feymann, nanotecnologia a capacidade de se criar objetos de qualidade superior aos existentes hoje, com base na organizao dos tomos na forma desejada. As maiores vantagens gerais para o uso da nanotecnologia podem ser definidas pelo menor impacto ambiental produzido pelos produtos gerados e pela otimizao do uso dos recursos envolvidos em etapas de desenvolvimento e produo. De forma mais especfica, a nanotecnologia tem aplicaes centrais nas reas de informtica, medicina e em vrios setores industriais. Pretende-se, por exemplo, com um computador de tamanho muito reduzido, aumentar consistentemente a capacidade atual de processamento de dados, assim como, no campo da medicina, construir medicamentos mais eficazes com um mnimo de efeitos colaterais. Atualmente existem alguns poucos produtos baseados em nanotecnologia, mas todos concordam que as pesquisas nessa rea e suas aplicaes encontram-se, ainda, em estgio bastante inicial. Porm, tambm unnime que num futuro prximo a nanotecnologia ter importncia central no cenrio econmico e social no mundo. O domnio desses conhecimentos e dessas tecnologias ser vital para os pases nas prximas dcadas. Assim, vemos o significado do tema nanotecnologia para o contexto do Mercosul. Esta uma rea cientfica (nanocincia) e tecnolgica (nanotecnologia) que se encontra em fase inicial e com extrema necessidade de investimentos e de cooperao. O Prmio Mercosul de Cincia e Tecnologia em 2010 tem a nanotecnologia como tema central. Esta edio visa identificar e estimular a coope11

rao entre pesquisadores e instituies de pesquisa que j trabalham com o tema. Alm disto, o Prmio visa, tambm, aproximar aqueles que tm inteno de aventurar-se neste novo campo da cincia e da tecnologia. mais um esforo dos pases integrantes do Mercosul e da UNESCO de fazer com que a cincia e a tecnologia alcancem seu principal objetivo: a melhoria da qualidade de vida das pessoas. So apresentados, a seguir, os trabalhos premiados nas quatro categorias. 1 Lugar CATEGORIA INICIAO CIENTFICA Trabalho: Anlise da impregnao de nanopartculas de dixido de zircnio e de prata em um curativo visando ativao da circulao sangunea e efeito antimicrobiano Autoras: Gabriela Schaab da Silva, 18 anos, e Kawoana Trautman Vianna, 18 anos, alunas da 4 srie do curso tcnico em qumica da Fundao Escola Tcnica Liberato Salzano Vieira da Cunha Professora-orientadora: Slvia Stanisuaski Guterres, 49 anos Pas: Brasil 1 Lugar CATEGORIA ESTUDANTE UNIVERSITRIO Trabalho: NanoSensores SERS: ampliando os mtodos de Feigl Autor: Daniel Grasseschi, 22 anos, aluno do 8 semestre do Instituto de Qumica da Universidade de So Paulo (USP) Professor-orientador: Henrique Eisi Toma, 61 anos Pas: Brasil 1 Lugar CATEGORIA JOVEM PESQUISADOR Trabalho: Sntese de nanotubos de carbono atravs do uso do bagao da cana-de-acar como matria-prima Autor: Joner Oliveira Alves, 28 anos, aluno de doutorado em engenharia metalrgica e de materiais na Universidade de So Paulo (USP) Pas: Brasil

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1 Lugar CATEGORIA INTEGRAO Trabalho: Materiais nanoestruturados: sntese, estudos com luz sncrotron, propriedades e aplicaes Autores: Aldo Felix Craievich, 71 anos, brasileiro, nascido na Argentina, doutor em fsica; Noem Elisabeth Walse de Reca, 73 anos, argentina, doutora em qumica; Diego Germn Lamas, 43 anos, argentino, doutor em fsica; e Marcia Carvalho de Abreu Fantini, 54 anos, brasileira, doutora em fsica. Pases: Argentina e Brasil Meno Honrosa CATEGORIA INICIAO CIENTFICA Trabalho: Modificacin de bentonita para la obtencin de nanoarcillas, y su utilizacin en un polmero biodegradable sintetizado a partir del cido L(+)LCTICO policondensado Autor: Brian Samir Gins Bejarano, 18 anos, aluno do 2 curso do Colgio Iberoamericano Professora-orientadora: Fanny Elizabeth Florentn Ramos de Gonzlez, 43 anos Pas: Paraguai Meno Honrosa CATEGORIA ESTUDANTE UNIVERSITRIO Trabalho: Pontos qunticos de CdTe/CdS: uma nova ferramenta biofotnica na investigao de antgenos eritrocitrios Autor: Paulo Euzbio Cabral Filho, 22 anos, aluno do 6 semestre do curso de biomedicina da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) Professora-orientadora: Adriana Fontes, 35 anos Pas: Brasil Meno Honrosa CATEGORIA JOVEM PESQUISADOR Trabalho: Encapsulacin del frmaco antirretroviral efavirenz en nanotransportadores polimricos para la Optimizacin de la farmacoterapia del virus de la inmunodeficiencia humana en pacientes peditricos Autor: Diego Andres Chiappetta, 35 anos, doutor em tecnologia farmacutica. Pas: Argentina

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Categoria Iniciao Cientfica

1 Lugar
ANLISE DA IMPREGNAO DE NANOPARTCULAS DE DIXIDO DE ZIRCNIO E DE PRATA EM UM CURATIVO VISANDO ATIVAO DA CIRCULAO SANGUNEA E EFEITO ANTIMICROBIANO
Autoras: Gabriela Schaab da Silva, 18 anos, e Kawoana Trautman Vianna, 18 anos, alunas da 4 Srie do Curso Tcnico em Qumica da Fundao Escola Tcnica Liberato Salzano Vieira da Cunha Professora-Orientadora: Slvia Stanisuaski Guterres, 49 anos Pas: Brasil

ANLISE DA IMPREGNAO DE NANOPARTCULAS DE DIXIDO DE ZIRCNIO E DE PRATA EM UM CURATIVO VISANDO ATIVAO DA CIRCULAO SANGUNEA E EFEITO ANTIMICROBIANO

Este trabalho o estudo da impregnao de nanopartculas de prata e xido de zircnio em curativos. O objetivo deste curativo ativar a circulao sangunea, aquecendo a pele, e ter ao antimicrobiana, acelerando a cicatrizao e auxiliando no tratamento de ferimentos ou doenas. Sua produo envolveu o preparo de solues de nanopartculas de ZrO2 e de Ag para impregnao no tecido rayon, nas concentraes de 1% p/v e 3% p/v, respectivamente. Estas nanopartculas, medidas no Mastersizer, apresentaram tamanhos de 448 nanmetros (ZrO2) e 119 nanmetros (Ag). Foi feito o teste de clula de Franz durante 3 horas para averiguar se as nanopartculas penetrariam a pele, o que seria perigoso, e o resultado foi que no oferece riscos. Testes de MEV e EDS indicam distribuio adequada das nanopartculas no tecido. O curativo foi enviado ao SENAI, onde foi feito o teste de ao antimicrobiana, cujos resultados indicam que houve total inibio bacteriana (Staphylococcus aureus) e parcial (40%) fngica (Aspergillus niger). O teste do aquecimento cutneo foi avaliado com cmera termogrfica Eletrophysics, aquecendo-se uma barra de alumnio e depositando-se o curativo e o rayon, sendo a temperatura controlada por 12 minutos. O curativo demonstrou capacidade de aumentar em 2C a temperatura da superfcie, em comparao ao controle. O preo agregado ao curativo foi baixo (R$ 0,07). Uma entrevista com enfermeiros indicou que 100% dos profissionais reconhecem a importncia das propriedades do curativo e o utilizariam. O curativo apresentado rene a soluo de problemas enfrentados na rea da sade, e seu uso poder acarretar em bom avano no tratamento de
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doenas. Assim, poderia vir como soluo para estes problemas com a vantagem de agregar tecnologia e reduo dos gastos com sade pblica no MERCOSUL. 1. INTRODUO Este projeto trata de um tema bastante importante na rea mdica: curativos utilizados em tratamentos que visam acelerar o processo de cicatrizao de cortes cirrgicos e evitar infeces durante o mesmo. Lendo boletins informativos sobre tecnologia, as integrantes do projeto tiveram a oportunidade de conhecer melhor a nanotecnologia e se interessaram pelo assunto. Estudando propriedades de certas nanopartculas como as de dixido de zircnio e as de prata, surgiu a ideia de utiliz-las na realizao de um projeto de pesquisa. O dixido de zircnio tem a capacidade de ativar a circulao sangunea quando em contato com a pele, porque reflete os raios infravermelhos (calor) emitidos por ela, e a prata tem efeito antimicrobiano na mesma situao. Assim, decidiu-se analisar a impregnao destas nanopartculas em um curativo visando utilizao deste para aumentar o fluxo sanguneo cutneo e ter efeito antimicrobiano, no local em que o mesmo fosse aplicado, acelerando processos de cicatrizao. O uso de curativos quase indispensvel no tratamento de feridas fechadas e cortes cirrgicos, uma vez que utilizado a fim de prevenir a contaminao do local doente, evitar infeces, facilitar o processo de cicatrizao, auxiliar o processo de remoo de secrees, promover a hemostasia, aliviar a dor e proteger o local ferido. de extrema importncia que ferimentos no apresentem infeces, pois estas impedem o processo de cicatrizao, j que infeces geram inflamaes e estas impedem que a cicatrizao se inicie. O uso de solues antispticas aumenta as reaes inflamatrias locais e desta forma tambm retarda a cicatrizao de ferimentos. Diversas doenas esto relacionadas a deficincias ou dificuldades na circulao sangunea, diante das quais a ativao da circulao local se faz necessria e at mesmo indispensvel. Entre estas doenas, pode-se citar a trombose, a arteriosclerose, edemas, isquemia e embolia, sendo que na maioria das vezes, elas ocorrem juntas. Estas doenas, em estgio avanado, podem provocar complicaes mais graves. A arteriosclerose, o edema e a prpria trombose muitas vezes culminam na amputao do membro afetado por estas doenas.

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Outra situao em que a circulao se faz essencial em tratamentos psoperatrios, como, por exemplo, de amputaes e reimplantes. No caso de amputaes, a circulao sangunea estimula a cicatrizao, e assim evita a necrose e a necessidade de outra amputao. Quando se trata de reimplantes, alm de estimular a cicatrizao, a circulao sangunea vital para o restabelecimento dos vasos que ligam o membro reimplantado e o restante do corpo, o que define se o reimplante ter sucesso ou se haver uma nova amputao. H ainda a diabetes, que sempre um agravante para pacientes que passam por qualquer tipo de procedimento cirrgico, uma vez que diabticos tm mais dificuldade de cicatrizao e consequentemente esto mais propensos a ter uma infeco. A doena a responsvel pela maioria das amputaes feitas atualmente. Uma estimativa feita pela International Diabetes Federation (2010) calcula que nos pases que compem o MERCOSUL, haja mais de 10,5 milhes de diabticos. Sendo a diabetes a causa da morte de mais de 100 mil pessoas, apenas em 2010, nos pases citados. Estudos apontam que o nmero de diabticos na Amrica Latina deve crescer em 38% nos prximos anos, ao passo que a populao dever aumentar em 14%. Assim, aumentaro tambm os casos de amputao causados pela diabetes. Melhorar a qualidade de vida de pessoas com diabetes que possam vir a passar por amputaes, aumentar a chance de uma amputao e de um reimplante terem sucesso e diminuir a chance de amputaes causadas por doenas circulatrias so temas que exigem ateno. Urge a necessidade de tratamentos que auxiliem nesses processos e aumentem a chance dos mesmos serem bem sucedidos. Baseado no exposto, surge a pergunta norteadora da pesquisa: as nanopartculas de dixido de zircnio e as de prata teriam a capacidade de, impregnadas em um tecido, ativar a circulao sangunea e impedir a proliferao de microorganismos, assim auxiliando tratamentos de sade? Parte-se da hiptese de que possvel impregnar tais nanopartculas em um tecido e de que este poder auxiliar em tratamentos ps-cirrgicos e de sade em geral, ativando a circulao sangunea e exercendo efeito antimicrobiano. O objetivo geral do projeto impregnar as nanopartculas desejadas, em tecido prprio para curativos (rayon), gerando no mesmo a capacidade de ativar a circulao e ter efeito antimicrobiano. Os objetivos especficos so: impregnar as nanopartculas no rayon; confirmar a presena e distribuio
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das mesmas no tecido por meio de espectroscopia de energia dispersiva por raios-X e microscopia eletrnica por varredura; verificar se as nanopartculas contidas no tecido penetrariam a pele, atravs do teste de clula de Franz; testar a eficcia da ativao sangunea atravs de teste com uma barra metlica aquecida coberta pelo curativo, fazendo-se o uso de cmera termogrfica; testar a propriedade antimicrobiana do curativo com teste especfico feito em um laboratrio especializado; calcular o custo agregado ao curativo de rayon; entrevistar enfermeiros/mdicos para analisar a aceitao do novo curativo. 2. REFERENCIAL TERICO
2.1. NANOTECNOLOGIA

Nano, um prefixo que denota um fator de 10-9, tem sua origem no grego nanos, que significa ano. Para entender melhor a proporo de um nanmetro, tem-se: 1nm= 10= 0,000000001m. O uso de materiais em dimenses prximas ao nvel atmico foi citado pela primeira vez por Richard Feynman em 1959. No entanto, o primeiro a usar o termo nanotecnologia foi o pesquisador japons Norio Taniguchi em 1974. Desde ento, os estudos na rea da nanotecnologia tm avanado consideravelmente. A nanotecnologia , portanto, o estudo e a aplicao de materiais que se encontram nesta escala. uma rea de estudo que tem crescido muito, devido s diversas aplicaes que podem ser dadas a materiais to pequenos, capazes de serem impregnados em inmeros itens, melhorando sua eficcia ou at agregando a eles novas caractersticas. Isso se deve ao fato de que, segundo Arsenault e Ozin (2005), nanomateriais caracteristicamente exibem propriedades fsicas e qumicas diferentes da estrutura na macroescala. A alterao de propriedades do estado macro para o estado nano se deve grande relao superfcie/volume das partculas, que tm sua energia superficial aumentada, o que as torna mais reativas. Os efeitos qunticos tambm so uma razo para as substncias mudarem de comportamento no nvel nanomtrico, dimenses nas quais se torna praticamente impossvel conhecer exata e simultaneamente a posio e a velocidade de uma partcula entre as outras.
2.1.1. Instrumentos utilizados na avaliao de nanomateriais
2.1.1.1. Microscpio Eletrnico de Varredura (MEV)

A microscopia eletrnica de varredura tem sido muito usada por permitir a visualizao de materiais com aumentos muito superiores aos da microsco20

pia tica. Estes aumentos dependem do material, ficando comumente na faixa de 10000 vezes, mas podendo chegar a 900000 vezes. O MEV usa, a fim de explorar a superfcie da amostra, um feixe de eltrons de pequeno dimetro. Transmite ento o sinal do detector a uma tela catdica. O feixe pode ser guiado pelo analisador, varrendo diversos locais da amostra, por um sistema de bobinas de deflexo. O filamento de tungstnio aquecido a fonte de eltrons mais usada nesta tcnica. Para que seja feito um teste de MEV, a amostra deve ser aderida a um stub, que uma pequena pea metlica que serve de suporte para o material a ser analisado, com esmalte incolor. Deve ser metalizada, e para tal utilizase platina, ouro ou carbono, conforme necessidades especiais de anlise.
2.1.1.2. Espectroscopia de Energia Dispersiva por raios-X (EDS)

O MEV tambm realiza microanlises, baseadas na avaliao da interao de raios-X, produzidos pelo equipamento, com a amostra. Por meio da identificao dos raios-X enviados pela amostra, em interao com o feixe eletrnico, pode-se definir a composio de regies com at 1 m de dimetro.
2.1.1.3. Mastersizer

O instrumento Mastersizer X, da Malvern, identifica materiais com tamanhos entre 0,02 e 2000 micrometros, conforme informaes do fabricante. Utiliza o princpio da difrao da luz para determinar a distribuio do tamanho de partcula. Um feixe de laser enviado em direo amostra lquida a ser analisada. No momento em que o feixe colimado encontra as partculas, parte deste difratada e atravessa lentes, sendo ento focada no detector. O tamanho da partcula e o ngulo de difrao so inversamente proporcionais.
2.1.2. Aplicaes

O avano da tecnologia na direo do universo nanomtrico tem aberto uma srie de oportunidades em diferentes campos da cincia e da tecnologia. Alm de representarem um leque de novas possibilidades, as nanopartculas, por serem muito reativas, podem encontrar-se em baixa concentrao em um material e apresentarem desempenho satisfatrio, sendo assim o preo agregado a produtos nanotecnolgicos consideravelmente baixo. Dentre as aplicaes de nanomateriais em produtos, destacam-se novas drogas, sistema de aplicao de medicamentos drug delivery, terapias medicinais, o desenvolvimento de tecidos celulares sintticos, a miniaturiza21

o de circuitos e dispositivos eletro-eletrnicos e eletro-mecnicos (MENS/ NEMS), desenvolvimento de novos materiais e produtos com caractersticas, propriedades e funcionalidades especficas, sensores, novos processos catalticos, novas fontes de armazenamento e produo de energia.
2.1.3. Segurana

Por ser uma cincia nova, a nanotecnologia inspira ateno especial quanto segurana, uma vez que no h normas oficiais completas sobre seu manuseio. O Instituto Nacional de Segurana e Sade Ocupacional (NIOSH, em ingls), dos Estados Unidos, estabelece, na sua publicao Approaches to Safe Nanotechnology (2006), uma srie de recomendaes que podem vir a se tornar regras de manuseio da nanotecnologia. Uma preocupao relacionada ao uso de artefatos nanotecnolgicos a possvel citotoxicidade (toxicidade de um material em relao s clulas) de nanomateriais. Os assuntos chave de segurana envolvendo o uso de nanopartculas em aplicaes biomdicas relatam principalmente a sua biocompatibilidade com clulas. Pois um material na microescala, que no agride um organismo onde introduzido, na nanoescala pode se tornar um perigo sade, especialmente se tiver dimenses inferiores a 100 nanmetros (ARSENAULT, 2005). Porm, no caso de uma nanopartcula no penetrar a pele, no so relatados riscos sade do usurio de um produto que contenha nanopartculas, uma vez que estas no estariam interagindo diretamente com o organismo humano. Assim, de extrema importncia determinar se uma determinada nanopartcula penetra ou no na pele.
2.1.4. Clula de Franz

A clula de difuso de Franz tornou-se um mtodo popular de estudo da difuso e permeao de substncias atravs da pele. Depois de algum tempo foi tambm utilizada para determinao da liberao in vitro de semi-slidos. A clula de Franz segue o modelo bicompartimental das clulas de difuso, possuindo dois compartimentos, um contendo a substncia a ser analisada (compartimento doador) e outro contendo uma substncia onde a soluo em anlise solvel, separados por uma membrana natural ou sinttica. Para efeitos de avaliao de permeao da pele, os dois compartimentos so separados por um pedao de pele, devidamente limpo. A anlise da composio inicial e da final do compartimento receptor indica qualitativamente e quantitativamente a permeao da pele pela substncia em questo, que depositada sobre a pele, no compartimento de cima.
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2.2. NANOPARTCULAS DE PRATA

A prata o elemento qumico de nmero atmico 47, representado simbolicamente pela sigla Ag. Atravs de muitos estudos, a medicina vem comprovando que a prata tem a capacidade de destruir diversos organismos patognicos como bactrias e fungos, ou seja, esta substncia um eficaz agente antimicrobiano. Isso porque a prata altera o metabolismo destes microrganismos impedindo estes cresam e se desenvolvam acarretando na morte dos mesmos. Devido a este efeito a prata tem sido muito utilizada na rea da sade, com a finalidade de eliminar microrganismos, gerando proteo s infeces causadas por fungos e bactrias. Atualmente muito se tem estudado sobre a ao de nanopartculas de prata impregnadas em tecidos, curativos e instrumentos cirrgicos que protegem doentes de infeces. O tecido impregnado com nanopartculas poderia ser utilizado tanto em tratamento ps-operatrios de qualquer paciente quanto no dia-a-dia de diabticos que frequentemente tem ulceraes nos ps, que podem se tornar um perigo caso o local infeccione. A vantagem das nanopartculas impregnadas que elas ficam presas no tecido, impedidas de adentrarem o organismo humano, alm de se apresentarem em baixa concentrao.
2.3. INFECES

Infeces ocorrem quando um organismo invasor, tambm chamado de infectante, se hospeda em um corpo estranho, denominado infectado, e utiliza dos recursos deste para se multiplicar, alterando a fisiologia normal do hospedeiro, gerando prejuzos. Como consequncia instalao do infectante, o infectado gera a inflamao. Os agentes infectantes, patgenos, podem ser bactrias, fungos, vrus e parasitas, entre outros. Toda infeco gera uma inflamao que a resposta do corpo infeco, como tentativa de eliminar os organismos invasores. Uma infeco definida como a presena de edema (inchao), hiperemia (vermelhido), hiperestesia (dor ao toque), aumento da temperatura no local e, s vezes, perda de funo. A inflamao pode resultar na formao de pus, durante um processo chamado de supurao. Os organismos patgenos, ao penetrarem a pele, aderem s clulas do corpo e muitas vezes liberam toxinas, que prejudicam o funcionamento das clulas vizinhas e at s distantes do local infectado. A infeco hospitalar um dos principais problemas de sade pblica da atualidade e gera como consequncia aumento da morbidade, da mortali23

dade e tambm dos custos relacionados assistncia sade. Em pases como os Estados Unidos da Amrica o prejuzo causado pelas infeces nosocomiais calculado em 2.000.000 dlares/ano, sendo esta a 6 causa de morte, chegando a gerar cerca de 500.000 mortes a cada ano. As infeces hospitalares que ocorrem com maior frequncia so as de feridas cirrgicas, tratos urinrios, tratos respiratrios e circulao sangunea.
2.4. NANOPARTCULAS DE DIXIDO DE ZIRCNIO

O zircnio o 18 elemento mais abundante na crosta terrestre, sendo encontrado principalmente como zirconato, ZrSiO4, e pequenas quantidades de ZrO2, que o dixido de zircnio. Este dixido tem, entre suas molculas, atraes de Van der Waals, resultado de sua apolaridade. As nanopartculas de dixido de zircnio apresentam certas vantagens, tais como granulao uniforme e alta resistncia mecnica. O dixido de zircnio pode ser obtido na escala nano, na qual se observa mudana nas suas propriedades, principalmente no seu ndice de refrao, que passa a ser de 2,165. O alto ndice de refrao do dixido de zircnio faz com que, em um processo de refrao, os raios incidentes sobre esta substncia sofram um grande desvio, sendo que a maioria destes raios sofre reflexo total, retornando ao meio de origem. Sua obteno feita comumente pelo mtodo sol-gel, como faz a empresa Nanum (Av. Jos Cndido da Silveira, n 2100, Cidade Nova Belo Horizonte, Minas Gerais). As nanopartculas de ZrO2 obtidas apresentam rea superficial de 15 m/g; densidade aparente de 0,09 g/cm3 e morfologia esfrica.
2.5. A IMPORTNCIA DA CIRCULAO SANGUNEA

Diversas doenas esto relacionadas a deficincias ou dificuldades na circulao sangunea, diante das quais ativar a circulao local se faz necessrio e at mesmo indispensvel. Entre estas doenas, pode-se citar a arteriosclerose, que o espessamento e endurecimento da parede arterial. Segundo a Sociedade Brasileira de Cirurgia Vascular (SBCV), um tipo de arteriosclerose a aterosclerose, doena que atinge artrias de grande e mdio calibre, como as artrias coronrias, as artrias cartidas e as artrias dos membros inferiores. caracterizada pelo depsito de gordura, clcio e outros elementos na parede das artrias, reduzindo seu calibre e trazendo um dficit sanguneo aos tecidos irrigados por elas. A superfcie interna irregular da artria com arteriosclerose predispe coagulao sangunea neste local, com ocluso arterial aguda trombose

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levando subitamente falta de sangue para todos os tecidos nutridos por aquela artria, que podem entrar em isquemia ou necrose. A arteriosclerose pode levar trombose, que um tipo de embolia, a presena de uma substncia estranha ao sangue caminhando na circulao, levando ocluso parcial ou completa da luz do vaso em algum ponto do sistema circulatrio. No caso da trombose, a embolia causada por cogulo sanguneo. Embolias podem ser gasosas (por exemplo, no caso de ficar oxignio na veia aps uma cirurgia) e lquidas, causadas por gorduras. A embolia gordurosa pode causar morte rpida, devido sua alta capacidade de penetrao em arterolas e capilares, obstruindo a microcirculao. A embolia leva tambm a edemas e isquemia. Por definio, isquemia o fluxo arterial insuficiente para manter as funes normais teciduais, isto , a diminuio de nutrientes (glicose, oxignio, protenas, vitaminas, enzimas, etc.) para os tecidos e o retardo na retirada dos metablitos. Pode ser resumida a doena do tecido. Caso a isquemia evolua sem tratamento, ocorre a morte do tecido, chamada de gangrena. Gangrena necrose (morte celular, de tecido ou de rgo) devido obstruo, ou diminuio do fluxo sanguneo. Estas doenas, na maioria das vezes, ocorrem juntas e o tratamento baseado em compressas de calor no local afetado em estgios iniciais, porm medida que a doena avana podem ocorrer diversas complicaes, culminando, at mesmo, em amputaes, que teriam sido evitadas se houvesse circulao sangunea adequada. Alm de prevenir amputaes, a circulao sangunea essencial nas chances de um reimplante ser bem sucedido. O cirurgio Rames Mattar, especialista em reimplante de mo do Hospital Albert Einstein, citado por Stam (2008), afirma que Sem circulao sangunea os tecidos podem sofrer necrose em at seis horas em temperatura ambiente o que inviabiliza o reimplante.
2.6. CURATIVOS

O uso de curativos, material colocado diretamente sobre uma ferida, quase indispensvel no tratamento destas, uma vez que utilizado a fim de prevenir a contaminao do local doente, evitar infeces, facilitar o processo de cicatrizao, auxiliar o processo de remoo de secrees, promover a hemostasia, aliviar a dor e proteger a ferida. Os curativos que tem ganhado mais destaque na rea mdica so os que afetam o processo de cicatrizao diretamente e os que possuem efeito antimicrobiano. Porm no existe nenhum que agregue estas duas propriedades.
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3. METODOLOGIA A pesquisa iniciou-se em 15 de abril de 2009 e terminou em 14 de outubro do mesmo ano, conforme o caderno de campo. A pesquisa bibliogrfica foi realizada nas bibliotecas da Fundao Liberato, da Unisinos, da Feevale e da PUC, bem como na internet. A produo dos curativos, o teste da clula de Franz e o teste de lavagem, assim como todas as leituras do aparelho Mastersizer foram feitos nos laboratrios de cosmetologia (405) e multiuso (103) da Faculdade de Farmcia da Universidade Federal do Rio Grande do Sul, situada na av. Ipiranga, 2752, Santa Ceclia, Porto Alegre. Estes procedimentos foram feitos pelas integrantes do projeto. Os testes de Microscopia Eletrnica de Varredura foi feito no Centro de Microscopia da UFRGS, situado na rua Felizardo 750, Jardim Botnico. O equipamento foi manuseado pelos profissionais do local, enquanto a preparao das amostras, a definio e a coleta de imagens foi feita pelas integrantes do projeto. O teste de ao antimicrobiana foi feito pelos profissionais do laboratrio do SENAI Estncia Velha- Rua Gregrio de Mattos, 111, Floresta. O teste da ao trmica do curativo foi feito no laboratrio de Biomecnica do Instituto Brasileiro de Tecnologia do Couro, Calado e Artefatos (IBTeC),situado na rua Arax, 750, Bairro Ideal em Novo Hamburgo, sendo manuseado pelas integrantes do projeto.
3.1. PLANO DE PESQUISA

Esta pesquisa tem abordagem qualitativa e objetivo explicativo com delineamento experimental. A pesquisa teve como varivel independente a composio do tecido de rayon comprado. As variveis dependentes foram a ao antimicrobiana, a distribuio e concentrao das nanopartculas no tecido, ao trmica e a capacidade ou no das nanopartculas penetrarem na pele humana. A populao desta pesquisa so as nanopartculas, tanto de dixido de zircnio quanto de prata, encomendadas de empresa especializada. O critrio de excluso foi o tamanho das partculas: caso no estivessem na escala nanomtrica ou estivessem muito abaixo do que ditam as normas de segurana, estas partculas no seriam utilizadas.

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3.2. DESCRIO DAS ETAPAS, TCNICAS E PROCEDIMENTOS UTILIZADOS 3.2.1 Medio do tamanho das nanopartculas

Foram preparadas 10mL de trs solues aquosas: uma contendo apenas partculas de prata, na concentrao de 30g/L; outra, contendo partculas de xido de zircnio e polissorbato 80 (agente tensoativo), na concentrao de 10g/L; e outra contendo tanto prata quanto xido de zircnio, nas mesmas concentraes. As solues foram preparadas em copos de bquer, agitadas com basto de vidro e posteriormente em agitador magntico Multi Stirrer Velp Scientifica na velocidade 5, at obter-se a disperso. As solues foram avaliadas no Mastersizer, colocando-se os 10mL no equipamento e fazendo-se a leitura por nmero, levando-se em considerao o ndice de refrao do xido de zircnio (2,165), do poliestireno (1,59), usado para avaliao da prata, devido ao fato do equipamento no ter a prata no catlogo de ndices de refrao, e do meio dispersante (1,33). Foi avaliado, assim, o tamanho das nanopartculas utilizadas.
3.2.2. Impregnao

Aps a limpeza, os curativos estavam prontos para que fossem impregnados com as nanopartculas. Esta etapa consistiu no preparo da disperso com as nanopartculas, em banhar os curativos na disperso, e na secagem dos curativos. A pesagem dos reagentes foi feita para se obter uma disperso aproximadamente 1% p/v de ZrO2, 3% p/v da emulso com Ag e 1% p/v de polissorbato 80. Foram preparadas duas disperses de 250 mL, atravs do mtodo analtico, e cada uma, em um copo de bquer, recebeu 8 curativos de rayon. Os curativos, mantidos em contato com a disperso foram colocados no agitador magntico Multi Stirrer Velp Scientifica na velocidade 5 e aps 20 minutos foram retirados, colocados sobre um recipiente plstico e ento, foram para secagem em uma cmara climtica a uma temperatura de 45C e sob umidade 30. Ao final de 24 horas os curativos foram retirados da cmara climtica.
3.2.3. Pr-teste de impregnao

O pr- teste foi feito aps a primeira impregnao, buscando averiguar o sucesso da impregnao, se as nanopartculas realmente ficaram no curativo, antes do teste de microscopia. Para esse teste usou-se um curativo de rayon cortado em quatro pedaos que passaram pelo procedimento da impregnao. Estes foram lavados em gua e analisados no equipamento Mastersizer X.
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O procedimento de impregnao foi repetido da mesma maneira, porm com trs solues: uma delas contendo apenas ZrO2; outra, contendo apenas Ag; e uma terceira com ZrO2 e Ag juntos. Desta forma se averiguaria se ambos os compostos ficariam impregnados no curativo, caso estas nanopartculas fossem identificadas na gua que recebeu os curativos impregnados.
3.2.4. Reimpregnao

Aps o primeiro teste de microscopia eletrnica por varredura, mostrouse necessria a reimpregnao de nanopartculas de Ag, que no se mostraram presentes em grande quantidade no tecido analisado na primeira impregnao, porm a disperso continha apenas Ag a 3 % p/v.
3.2.5. Microscopia Eletrnica de Varredura (MEV):

Neste teste foram avaliadas quatro amostras: um pedao de rayon sem nanopartculas (grupo de controle) e pedaos do curativo impregnado. As amostras foram cortadas em crculos de dimetro 1cm e coladas, com esmalte incolor, sobre um stub de alumnio previamente limpo com acetona, de forma que ficaram aderidas ao mesmo. No Centro de Microscopia, foram metalizadas com platina e/ou carbono. Foi feita ento a avaliao da estrutura do curativo, comparada com o rayon puro. Foram tiradas fotos em aumentos de 200, 1000, 5000 e 15000 vezes.
3.2.6. Espectrometria de energia dispersiva de raios X (EDS):

Os mesmos stubs preparados para a microscopia eletrnica de varredura foram utilizados na espectrometria de energia dispersiva, uma vez que ambos os testes so feitos no mesmo equipamento. Uma rea do curativo foi selecionada e o equipamento fez a leitura, avaliando a presena dos elementos na amostra.
3.2.7. Clula de Franz

Neste teste, que busca avaliar se as nanopartculas do curativo em contato com a pele adentrariam o organismo, foram utilizadas seis clulas de difuso de Franz. Trs delas tinham, acima da membrana, um pedao do curativo, enquanto as outras trs no continham curativo, sendo o grupo de controle. O ambiente receptor de todas as clulas foi preenchido com gua ultra pura. A membrana utilizada foi a pele abdominal de porcas, previamente limpa e sem gordura. Foram escolhidos pedaos de pele com espessuras prximas, conforme a tabela:

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Tabela 1: organizao do teste de clula de Franz Clula de Franz 1 2 3 4 5 6 Descrio Grupo de controle Grupo de controle Grupo de controle Com curativo Com curativo Com curativo Espessura da pele 2,32mm 2,3mm 2,34mm 2,26mm 2,4mm 2,08mm

As coletas foram feitas nos tempos de 1h, 2h e 3h, sendo sempre retirada a gua do ambiente receptor de uma das clulas com curativo e de outra do grupo de controle, simultaneamente. Estas amostras foram avaliadas no equipamento Mastersizer, sendo feita a leitura por nmero considerando os ndices de refrao da zircnia (2,165) e do poliestireno (1,59).
3.2.8. Teste de ao da prata

Foram enviados ao SENAI dois pedaos do curativo (com e sem nanopartculas), com as dimenses de 7,5cm por 7,5cm. A ao do curativo quanto a fungos foi analisada com Aspergillus niger; quanto a bactrias, a ao do curativo foi avaliada com Staphylococcus aureus.
3.2.9. Teste de ao trmica do curativo

A propriedade do ZrO2 de refletir raios infravermelhos que nele incidem provenientes de qualquer corpo foi testada aquecendo-se, uniformemente, com lmpadas incandescentes de 60W, uma barra de alumnio. Foram colocados sobre a chapa quente dois curativos: um deles (grupo de controle) contendo apenas rayon; outro ZrO2 e Ag (segunda impregnao). Durante 12min, a barra coberta de curativos foi fotografada a cada 15s com uma cmara termogrfica Eletrophysics modelo PV320T, que atravs de fotos indica a temperatura do local, onde branco o pice de calor e preto o pice de frio, passando intermediariamente por todo o espectro de cores.
3.2.10. Entrevista

Foi elaborada uma entrevista visando analisar a opinio dos profissionais da sade sobre o curativo e sobre sua ao, relacionando-se a tratamentos ps-cirrgicos. A pesquisa, de perguntas fechadas e de simples escolha, foi
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aplicada a uma turma do curso de enfermagem da Universidade do Vale do Rio do Sinos que j cursou a cadeira Adultos II, na qual estuda-se e aplica-se curativos, tendo assim os alunos conhecimento e prtica para avaliar o curativo produzido neste projeto. Os enfermeiros foram questionados quanto aprovao do curativo, e tambm quanto s principais causas de amputao por eles presenciadas, para que fosse possvel averiguar a porcentagem de amputaes que poderiam ter sido evitadas (aquelas que no so causadas por acidentes).
3.2.11. Custo

O custo foi calculado com base no percentual de ZrO2 e Ag que ficaram no tecido, mostrado no aparelho de EDS. Para isso foi considerado o curativo com massa de 1,1395 g e as nanopartculas com custo de 3 reais/grama. Foi levado em considerao o preo do tecido de rayon (R$ 14,28/m) e o preo de mercado da impregnao terceirizada (R$ 0,36/m). 4. RESULTADOS E ANLISE DE DADOS Depois de realizada a metodologia descrita neste relatrio, foram analisados e discutidos os resultados encontrados.
4.1. ANLISE DO TAMANHO DAS NANOPARTCULAS

Os valores encontrados aps a anlise das amostras de gua e ZrO2 e Ag mostraram que o tamanho das partculas dispersas estavam entre 100 nanmetros e 1 micrmetro, ou seja as partculas foram consideradas nanomtricas e adequadas para a impregnao no curativo, pois acima de 100nm dificilmente causam danos ao corpo humano (ARSENAULT et al, 2005). A leitura feita no Mastersizer indicou que as partculas de ZrO2 tinham dimetro mdio de 448 nm e as de Ag tinham dimetro mdio de 119 nm.
4.2. MICROSCOPIA ELETRNICA DE VARREDURA (MEV)

Neste teste, a presena de partculas aderidas superfcie do curativo, no encontradas no grupo de controle (rayon), indicaria que houve impregnao e a disposio das nanopartculas na fibra. A anlise deixou clara a presena de nanopartculas na fibra do tecido, como mostram a figura:

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Figura 1: Resultado da Microscopia Eletrnica de Varredura com aumento de 200 vezes: apenas o tecido;

Figura 2: Resultado da Microscopia Eletrnica de Varredura com aumento de 200 vezes: a) apenas xido de zircnio e prata antes da reimpregnao; b) apenas prata; c) xido de zircnio e prata depois da impregnao.

4.3. ESPECTROMETRIA DE ENERGIA DISPERSIVA DE RAIO-X (EDS)

O procedimento realizado no aparelho EDS mostrou quais os elementos qumicos presentes na amostra de curativo. Se fossem encontrados os elementos e prata e zircnio, elemento que seria encontrado devido ao ZrO2, isso comprovaria que as nanopartculas desejadas estariam impregnadas no curativo. A presena de carbono e de oxignio nas anlises se justifica pela composio das fibras do tecido; slica considerada impureza (poeira); alumnio, quando encontrado, referente composio do stub, onde foi colocada a amostra; na primeira microscopia a metalizao foi feita com platina, o que justifica sua presena enquanto as duas ltimas foram feitas com carbono. Aps a primeira impregnao, a anlise por EDS mostrou que apenas o dixido de zircnio estava aderido s fibras do tecido em quantidade considervel, porm o percentual encontrado no pode ser levado em considerao, uma vez que o aparelho no consegue diferenciar Zr de Pt, ento ele indica se h Zr mas no na quantidade real, como pode ser observado na tabela:

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Tabela 2: concentrao dos compostos na primeira anlise de EDS Elemento Valor (%) C 46,97 O 1,36 Zr 43,52 Ag 0,50 Pt 7,66

Analisando-se o tecido reimpregnado com somente prata, observou-se sua presena, como indica a tabela:
Tabela 3: concentrao dos compostos na anlise de EDS com rayon e prata Elemento Valor (%) C 80,53 O 15,20 Al 1,84 Si 0,25 Ag 2,18

Quanto ao tecido que continha xido de zircnio e foi reimpregnado com prata, foi comprovada a presena de ambas as substncias, conforme a tabela:
Tabela 4: concentrao dos compostos na anlise de EDS no tecido reimpregnad Elemento Valor (%) C 82,12 O 15,34 Al 0,46 Zr 1,26 Ag 0,81

4.4. CLULA DE FRANZ

Nas amostras coletadas nos tempos de 1h, 2h e 3h, avaliadas no equipamento Mastersizer, a presena de nanopartculas indicaria que curativo as havia liberado e que elas penetraram a pele, chegando at a gua. O resultado em todas as seis amostras foi negativo, ou seja, fica provado que as nanopartculas no adentrariam o organismo quando em contato com a pele. Assim, com base na bibliografia consultada, pode-se afirmar que o curativo no apresentaria riscos sade do paciente.
4.5. TESTE DE AO DA PRATA

O SENAI elaborou um laudo do teste, que foi avaliado. A presena de halo de inibio entre o curativo e os micrbios indicaria a ao antimicrobiana da prata. O curativo inibiu totalmente a proliferao da bactria Staphylococcus aureus e parcialmente a proliferao do fungo Aspergillus niger. Como as infeces por bactrias so as mais danosas pele, o resultado foi considerado
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positivo. No entanto, pretende-se aumentar a concentrao de prata no curativo, o que, acredita-se, melhorar seu desempenho quanto a fungos, como mostra a figura 3:

Figura 3: laudo da ao antimicrobiana da prata: a) em relao bactria Staphylococcus aureus (inibio total com formao de halo de inibio); b) em relao ao fungo Aspergillus niger (inibio de 40%).

4.6. TESTE DE AO TRMICA DO CURATIVO

Observando-se as imagens obtidas, pode-se concluir que as temperaturas iniciais para os dois curativos eram as mesmas; aps o perodo do teste, observou-se uma significativa variao na colorao da barra de metal nos seus diferentes pontos: enquanto no grupo de controle a colorao variou de branco a rseo intenso, o da segunda impregnao apresentou a maior parte da sua superfcie ainda branca, o que indica que realmente manteve o calor da barra metlica com muita eficcia, como mostra a figura:

Figura 4: fotos dos curativos com cmara termogrfica: a) no incio da experimentao; b) ao trmino da experimentao.

A anlise de dados de imagens do computador acoplado cmara termogrfica indica que, na situao final, entre o grupo de controle e o curativo de segunda impregnao, houve variao de 2C, o que muito significativo, uma vez que a bibliografia consultada indica que um aumento de 0,5C provoca bom aumento do fluxo sanguneo local.
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4.7. ENTREVISTA

A totalidade dos entrevistados considerou importante a ativao da circulao sangunea na cicatrizao, bem como a inibio da proliferao de bactrias e fungos. Todos os entrevistados afirmaram, ainda, que usariam o curativo impregnado de nanopartculas de ZrO2 e Ag se fossem os responsveis por um tratamento ps-cirrgico, especialmente de amputao e reimplante. Quanto s causas de amputao presenciadas por estes alunos, 61,9% afirmaram que estariam relacionadas diabetes; 23,81% consideraram acidentes de trnsito os principais responsveis; 9,52% indicaram acidentes de trabalho como causadores destas complicaes; 3,17% afirmaram que as amputaes teriam sido realizadas devido a doenas vasculares; e 1,59% seriam causadas pela m formao de membros, como indica o grfico da figura 5:

Figura 5: grfico das respostas dos enfermeiros entrevistados a respeito das causas de amputao por eles presenciadas

4.8. CUSTO

Atravs da anlise de EDS percebeu-se que no curativo reimpregnado o percentual de ZrO2 era de 1,26% e o de Ag era de 0,81%. Logo a massa de ZrO2 contida no mesmo era igual a 0,0144g e a de Ag era igual a 0,0092g. importante lembrar que o curativo tinha dimenses de 7,5 x 15cm. Assim, o custo pra a impregnao das nanopartculas foi de 0,07 reais em 112,5cm de curativo. Considerando o preo do rayon de da impregnao, o custo de 1m do curativo seria de 20,87 reais. 5. CONCLUSO O objetivo principal do projeto foi alcanado. Foi criado um curativo capaz de ativar a circulao sangunea, inibir o risco de infeco por bactrias e reduzir o risco das causadas por fungos. Isso aconteceu devido s propriedades das nanopartculas de ZrO2 e Ag que foram impregnadas com sucesso

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no curativo de rayon. Este feito indito no mundo e, portanto, contribui para que a Amrica Latina esteja cada vez mais inserida no contexto da pesquisa cientfica no mbito da nanotecnologia. Esta insero fundamental no s para a cincia, mas tambm para o desenvolvimento econmico da regio, alm de trazer prestgio internacional interessante ao MERCOSUL. O curativo de rayon, como mostrado no teste de microscopia eletrnica por varredura, continha as nanopartculas das substncias desejadas e estas estavam dispostas uniformemente em toda a fibra do tecido. J o teste de EDS pode comprovar que as substncias observadas no MEV eram realmente ZrO2 e Ag. Ao longo da elaborao do projeto, desenvolveu-se o mtodo mais adequado para a produo do curativo, que consiste em impregnar primeiro as nanopartculas de xido de zircnio e depois as de prata. Este mtodo se mostrou bastante apropriado, pois permite uma distribuio uniforme e proporcional das nanopartculas nas fibras do tecido. Pode-se agora trabalhar na diminuio do pick up, a fim de obter-se um melhor rendimento, podendo-se economizar material e baixar o custo, tomando o cuidado de que as propriedades do curativo continuem as mesmas. O teste de clula de Franz mostrou que o curativo no seria nocivo ao paciente que fizesse uso do mesmo, pois as nanopartculas no passaram pela pele utilizada, logo no penetrariam na pele humana. O laudo do teste de efeito antimicrobiano mostrou que o curativo seria capaz de impedir totalmente a proliferao de bactrias e parcialmente a de fungos, dessa forma assumiria um papel importante na reduo do risco do paciente ter uma infeco no ferimento sobre o qual o curativo fosse aplicado. O teste de aumento da temperatura gerado pelo curativo provou que este seria capaz de aumentar em 2C a temperatura da pele sobre a qual fosse aplicado, o que geraria um significativo aumento do fluxo sanguneo no local. O custo agregado a cada curativo de rayon impregnado com as nanopartculas foi de aproximadamente 7 centavos. Estima-se que um metro quadrado do curativo custaria, em mdia, 20,87 reais. A entrevista realizada com enfermeiros, baseada em suas experincias em hospitais, revelou que todos os entrevistados aplicariam o curativo produzido neste projeto, se responsveis por um tratamento ps-operatrio, uma vez que consideram suas propriedades de extrema importncia. Constatou-se ainda, com a entrevista, que as principais causas de amputao presenciadas
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pelos entrevistados estavam relacionadas diabetes (61,9%) e, portanto, poderiam ter sido evitadas se houvesse circulao sangunea adequada no membro debilitado. Logo, o curativo criado poderia ajudar significativamente no tratamento de doenas microvasculares de maneira geral, bem como tratamentos psoperatrios, uma vez que se provou capaz de ativar a circulao e reduzir muito a chance de infeces. Desta forma a hiptese do projeto foi comprovada e as consequncias do uso do curativo, que acelera o processo de cicatrizao, seriam tambm trazer mais qualidade de vida a quem passa pelos procedimentos cirrgicos ou possuem as doenas citadas. O curativo poderia ainda reduzir a chance de um diabtico passar por uma amputao, ou aumentar a chance de um reimplante ser bem sucedido. Alm disso, com o baixo custo agregado ao curativo devido impregnao das nanopartculas, em comparao com os curativos j existentes, seu uso no se restringiria a uma pequena parcela da populao com melhores recursos financeiros. Este fato tambm diminuiria consideravelmente os gastos brasileiros com este tipo de tratamento e, graas ao livre comrcio e parceria oriundos do Mercosul, tambm reduziria os gastos em sade de todos os pases membros, levando a toda a Amrica Latina novas esperanas da reduo de amputaes e do bom desempenho de reimplantes. O curativo ainda se sobressai sobre os mtodos j existentes para a ativao da circulao sangunea e efeito antimicrobiano uma vez que de fcil aplicao; no ficaria aderido pele (o que provocaria dor); poroso o suficiente para que a pele consiga respirar e para que o exsudato de feridas possa passar. Alm disso, por ser um tecido aplicado externamente, seu uso seria um mtodo no invasivo. A partir de todas as constataes expostas, conclui-se com a presente pesquisa, que a impregnao de nanopartculas de xido de zircnio e de prata permite a produo de um curativo eficaz aos fins a que se prope, chegando como alternativa vivel e de procedncia local ao tratamento de doenas que hoje causam tantos danos regio.

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BIBLIOGRAFIA AIRES, M. de M. (Org.). Fisiologia. Rio de Janeiro: Editora Guanabara Koogan, 1999. ARSENAULT, A.; OZIN, G. Nanochemistry: a chemical approach to nanomaterials. Toronto: Editora RSC Publishing, 2005. BALBINOT, L. F. Termografia na identificao de trigger points miofaciais. Florianpolis: Editora Blucher Acadmica, 2008. MADIGAN; MARTINHO; PARKER. Microbiologia de Brock. 10.ed. So Paulo: Editora Pearson, 2004. p. 551-553. THE ECONOMIC IMPACTS OF DIABETES. International Diabetes Atlas. Blgica: 2009. Disponvel em: <http://www.diabetesatlas.org/content/economic-impacts-diabetes>. Acesso em: 10 nov. 2009.

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Categoria Estudante Universitrio

1 Lugar
NANOSENSORES SERS: AMPLIANDO OS MTODOS DE FEIGL
Autor: Daniel Grasseschi, 22 anos, aluno do 8 semestre do Instituto de Qumica da Universidade de So Paulo (USP) Professor-Orientador: Henrique Eisi Toma, 61 anos Pas: Brasil

NANOSENSORES SERS: AMPLIANDO OS MTODOS DE FEIGL

1. RESUMO Neste trabalho buscou-se o desenvolvimento de novos caminhos para os spot-tests de Feigl, criando ao mesmo tempo novos substratos SERS compostos de nanopartculas de ouro. Por se tratar de uma abordagem original, foi necessrio realizar uma prova de conceito, utilizando a ditizona, um reagente analtico bastante empregado por Feigl, porm imobilizado na superfcie de nanoparticulas esfricas de ouro. Foi feito um estudo minucioso dos sistemas atravs da espectroscopia eletrnica e Raman. 2. INTRODUO Spot tests tornaram-se procedimentos populares em laboratrios e em qumica forense desde o trabalho monumental de Fritz Feigl, abrangendo anlises orgnicas e inorgnicas.[1] Eles so usualmente realizados adicionando um gota de soluo em um papel filtro impregnado com reagentes seletivos ou especficos, capazes de reconhecer os analitos contidos nas amostra. Apesar da rpida evoluo de tcnicas modernas de anlises, os spots tests mantm-se bastante teis, particularmente para a identificao de ons inorgnicos. Embora no seja uma prtica comum, muitos spot tests podem ser acoplados com instrumentaes analticas adequadas, como um espectroscpio Uv-vis de reflectncia, com intuito de aprimorar a avaliao das mudanas de cor e extrair informaes mais detalhadas sobre a natureza das espcies qumicas. Em particular, o limite visual de diluio e identificao pode ser muito expandido com a assistncia de detectores sensveis e instrumentao adequada.
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Hoje em dia, com o advento da nanotecnologia, nanopartculas metlicas tm introduzido, na qumica, novas possibilidades a serem exploradas, como por exemplo, em nanocatlise e nanomateriais, permitindo uma ampla variedade de aplicaes.[2],[9] Em escala nanomtrica as propriedades fsicas e qumicas das molculas so diferentes e podem ser manipuladas com intuito de construir dispositivos inteligentes. Nesse contexto, a abordagem supramolecular contribui para o estudo de espcies organizadas em que molculas e partculas so utilizadas como unidades de montagem, atravs de interaes intermoleculares ou coordenativas, para o desenvolvimento de materiais funcionais.[10],[11] As nanopartculas vm se destacando na composio desses materiais, pois apresentam interessantes propriedades pticas relacionadas com a oscilao dos eltrons superficiais em ressonncia com a radiao eletromagntica.[12] A frequncia de ressonncia desses eltrons superficiais, denominados plasmons, altamente dependente do tamanho e da forma das nanopartculas, uma vez que o dimetro delas muito menor que o comprimento de onda da radiao incidente. Com isso, a simetria das partculas determina como os eltrons superficiais respondem ao campo eltrico da luz como mostram a Figura 1 e a Figura 2.

Figura 1 - Separao de cargas na superfcie das nanopartculas metlicas esfricas, decorrente da incidncia de uma onda eletromagntica.

Deste modo, este efeito promove uma incomum absoro e espalhamento de luz, dando origem a fortes e caractersticas cores de nanopartculas metlicas. A ressonncia plasmnica gera uma forte intensificao do campo eltrico prximo (Es) superfcie da nanopartcula, formando a base da espectroscopia Ramam intensificada de superfcie (SERS). Campos eltricos extremamente altos podem ocorrer em superfcies plasmnicas metlicas, particularmente em alguns pontos descontnuos, como nanoburacos, estruturas enrugadas com escalas nanomtricas. Esses intensos campos eltricos
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so conhecidos como hot spots e respondem, pelo menos em parte, pelo efeito SERS observado para molculas orgnicas adsorvidas em eletrodos de cobre, ouro e prata.13,14

Figura 2 - Separao de cargas na superfcie das nanopartculas em forma de bastes (nanorods), decorrente da incidncia de uma onda eletromagntica.

No caso de nanopartculas plasmnicas, tem sido demonstrado que hot spots so naturalmente gerados atravs de processos de agregao que aumentam as interaes de acoplamento plasmnico. Estudos tericos [15] suportam a concluso de que hot spots so localizados em regies entre duas nanopartcula interagindo onde o campo eltrico fortemente intensificado sob a influncia da ressonncia plasmnica longitudinal. Outro aspecto importante que as espcies metal-adsorbato permitem novas excitaes, como transferncia de carga (TC), transies do nvel de Fermi (E f) para orbital molecular desocupado de mais baixa energia da molcula LUMO), ou do orbital molecular ocupado de mais alta energia (Ef para Ef (Ef HOMO). Quando a excitao est em ressonncia com a transio eletrnica no complexo metal-adsorbato, o espalhamento Raman intensificado por superfcie pode incorporar esse tipo de mecanismo de transferncia de carga metal-molcula, como proposto originalmente por Otto e colaboradores.[16] Raman Ressonante (RR) envolvendo os nveis eletrnicos da molcula adsorvida tambm muito importante. Essa possibilidade referida como SERRS, espalhamento Raman ressonante intensificado por superfcie, e as intensidades espectrais observadas podem ser ligeiramente diferentes daquelas encontradas no espectro Raman original das molculas progenitoras. Recentemente uma viso unificada do efeito SERS vem sendo apresentada por Lombardi e Birke [17] em termos de contribuio de:
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i) A ressonncia plasmnica eletromagntica (EM) em nanopartculas metlicas; ii) A ressonncia de transferncia de carga (TC) na interface metal-molcula; iii)E a ressonncia (RR) dentro da prpria molcula. Quando as trs ressonncias (EM, TC, RR) ocorrem simultaneamente, enormes intensificaes de magnitude, acima de 14 ordens de grandezas, podem ser observadas em um espectro SERS, permitindo ampliar a deteco para o limite de uma nica molcula. Junto com o efeito SERS, as propriedades qumicas das nanopartculas de ouro so extremamente relevantes. Elas esto associadas com a grande porcentagem de tomos superficiais e seus eltrons delocalizados que se comportam como ondas plasmnicas. Visto que os stios de coordenao destes tomos na superfcie esto incompletos, a ligao de espcies doadoras-receptoras, ou de ligantes superfcie da nanopartcula de ouro facilitada, proporcionando uma forte analogia com os complexos metlicos convencionais. Desta forma, a grande afinidade das nanopartculas de ouro por ligantes tiolados tem similaridade com os correspondentes ons metlicos.[10], [11], [18], [19] Isso permite que a abordagem da qumica de coordenao seja aplicada para as nanopartculas de ouro, incluindo a utilizao dos princpios de cidos e bases duros e moles, dando um novo contexto aos clssicos spot tests de Feigl, alm de expandir consideravelmente seus limites de deteco atravs do efeito SERS. 3. OBJETIVOS E JUSTIFICATIVAS Neste trabalho buscou-se o desenvolvimento de novos caminhos para os spot-tests de Feigl, criando ao mesmo tempo novos substratos SERS compostos de nanopartculas de ouro. Sendo uma abordagem original, foi necessrio realizar uma prova de conceito, utilizando a ditizona, um reagente analtico bastante empregado por Feigl, porm imobilizado na superfcie de nanoparticulas esfricas de ouro. Foi feito um estudo minucioso dos sistemas atravs da espectroscopia eletrnica e Raman. A justificativa do trabalho, no mbito da Mercosul, est na importncia dos testes analticos, como forma de controle de qualidade e autenticidade de produtos, incluindo bebidas, alimentos, ensaios fornsicos, principalmente para detectar a adulterao dos mesmos, e tambm como apoio monitorao ambiental, considerando a importncia dos recursos hdricos, minerais e das atividades agro-pecurias existentes, que dependem da disponibilidade
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dos microelementos (Fe, Mn, Co, Cu, Zn, Mo) normalmente adicionados aos fertilizantes e raes. A monitorao ambiental, principalmente de metais pesados, como Hg, Cd, Pb igualmente relevante para a preservao da qualidade de vida da populao. Uma melhoria nesse setor pode significar enormes ganhos de produtividade, e certamente ter impactos comerciais importantes para o Mercosul. Este trabalho tambm se insere na rea criminalstica, onde os spot-tests tm sido consagrados por sua praticidade e eficincia. Por essa razo, optou-se pelo uso de um equipamento porttil, adequado para trabalho de campo, para anlise dos spot-tests em papel. Note-se que nas condies empregadas neste trabalho, os testes visuais j no so perceptveis, ao contrrio dos fortes sinais observados pelo equipamento Raman. Estamos lidando, portanto, com uma outra dimenso dos spot-tests de Feigl. A temtica apresentada est na fronteira da nanotecnologia atual, por utilizar nanopartculas funcionalizadas e lidar com desafios conceituais muito importantes, como os efeitos da ressonncia plasmnica de superfcie e o efeito de intensificao Raman, conhecido como SERS. Ao mesmo tempo, confere uma nova abordagem aos testes introduzidos por Fritz Feigl, que fez do Brasil a sua ptria, e colocou a qumica brasileira como referncia internacional na rea analtica, na metade do sculo passado. 4. PARTE EXPERIMENTAL
4.1. EQUIPAMENTOS E REAGENTES 4.1.1. Espectroscopia Eletrnica

Os espectros eletrnicos e de extino foram obtidos com um espectrofotmetro com detector de rede de diodos da marca Hewlett Packard modelo 8453A para estudos na regio de 190 a 1100 nm, utilizando cubetas de quartzo de duas faces com caminho tico de 1,0 cm.
4.1.2. Espectroscopia Vibracional

Para espectros Raman e SERS foi utilizado um espectrmetro porttil para trabalho em campo, da marca In Photonics com laser de excitao em 785 nm na faixa de 2000 a 350 cm-1, potncia mxima de 250 mW, operando com fibras pticas.

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4.1.3. Reagentes

cido Tetraclorourico 99,9 % (HAuCl4) Sigma Aldrich Citrato de Sdio (Na3C6H5O7.2H2O) Carlo Erba Borohidreto de Sdio (NaBH4) Aldrich Cloreto de Sdio (NaCl) PA ACS Synth cido Clordrico PA ACS (HCl) Synth cido Ntrico 70% PA ACS (HNO3) Synth Hexadecyltrimethylammoniumbrimide (CTAB) Ditizona Aldrich
4.2. PROCEDIMENTOS EXPERIMENTAIS 4.2.1. Sntese de Nanopartculas Esfricas de Ouro

O mtodo introduzido por Turkevitch [20], em 1951, e Frens [21], em 1973, consiste na reduo de HAuCl4 com citrato de sdio em meio aquoso, para o desenvolvimento de nanopartculas lbeis com tamanho variando entre 10 e 100 nm, dependendo da quantidade de citrato de sdio utilizado. Primeiramente, lavou-se toda vidraria com gua rgia (3HCl:1HNO3), de forma a garantir que no houvesse qualquer substncia que pudesse interferir na reduo do ouro. Preparou-se 10 mL de uma soluo 1% de citrato de sdio (Na3C6H5O7.2H2O). Em seguida pesou-se 10 mg de HAuCl4 em um frasco de 25 mL e transferiu-se para um erlenmeyer de 200 mL seco. Ento, foram adicionados 50 mL de gua deionizada, submetendo a soluo a uma vigorosa agitao e aquecimento at ebulio. Adicionou-se rapidamente 2 mL da soluo de citrato de sdio soluo de HAuCl4 sob aquecimento e a soluo ficou incolor, em seguida azul escura, roxa e finalmente vermelha. O aquecimento foi desligado mantendo a agitao por mais 5 minutos, resfriado temperatura ambiente e depois mantido na geladeira temperatura de 18C.

Figura 3: Reao de formao de nanopartculas de ouro estabilizadas por citrato, pelo mtodo de Turkevitch [20].

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O controle do tamanho est intimamente relacionado aos procedimentos de sntese e intensa colorao que apresenta a soluo obtida. Um dos fatores que altera a distribuio de tamanhos das nanopartculas a rapidez de reduo dos sais de Au3+, variando velocidade de adio e o volume de citrato, varia-se a taxa de reduo [12]. de extrema importncia o controle da taxa de adio de citrato, uma vez que a intensidade do sinal Raman esta intimamente ligada banda de absoro eletrnica das nanopartculas, devido ao efeito eletromagntico de intensificao, que por sua vez depende da distribuio de tamanhos das mesmas.
4.2.2 Funcionalizao das nanopartculas esfricas de ouro.

Para funcionalizar a superfcie da nanopartcula misturou-se 1,5 ml de soluo de nanopartcula com 0,5 ml de soluo de ditizona 10-4 mol/L com 100 l de NaCl 1 mol/ L, para promover a agregao das partculas. Com o intuito de estudar a variao do espectro vibracional das nanoparticulas funcionalizadas com ditizona adicionou-se soluo recm preparada quantidades variadas dos sais dos seguintes metais: Cu2+, Mn2+, Ni2+, Hg2+, Co2+, Pb2+ e Zn2+.
4.2.3. Realizao dos SERS Spot Test

Para a realizao dos testes utilizou-se um papel filtro Watson (papel de cromatografia) embebido em soluo de nanopartculas de ouro funcionalizadas com ditizona, como descrito no item anterior. Ao papel foi adicionado 10l de solues de ons metlicos (Cu2+, Mn2+, Ni2+, Hg2+, Co2+, Pb2+ e Zn2+). O espectro SERS de uma regio do papel onde havia, somente nanopartculas de ouro com ditizona, foi comparado com o espectro SERS da regio na qual foram adicionados os 10l de soluo de ons metlicos. 5. RESULTADOS E DISCUSSO
5.1. EFEITO DA INTERAO DA NANOPARTCULA COM A DITIZONA

O efeito SERS consiste na intensificao significativa do espalhamento Raman e foi descoberto durante uma tentativa de estudar espcies adsorvidas em superfcies de eletrodos atravs da espectroscopia Raman [24], podendo ser estendido a outros tipos de superfcies, como por exemplo, nanopartculas de metais nobres, como discutido anteriormente. Dois aspectos esto envolvidos no mecanismo do efeito SERS, o eletromagntico e o molecular [13].
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O modelo eletromagntico diz basicamente que o dipolo da molcula adsorvida na superfcie leva ao surgimento de um dipolo induzido na superfcie metlica, sendo que a soma de ambos geraria um dipolo maior resultante, quando estivessem alinhados normal da superfcie e a resultante seria zero quando estivessem paralelos a superfcie [12]. Essa regra justificaria a observao dos modos normais cuja resultante estivesse na direo normal superfcie de maneira intensificada. O modelo molecular leva em considerao as modificaes na polarizabilidade molecular, geradas pela interao da molcula espalhadora com a superfcie. Essa interao pode se dar pela formao de complexos entre a nanopartcula e a molcula passivante, por ligaes qumicas, ou por interaes eletrostticas. Neste caso, o contato com a superfcie essencial e os espectros obtidos dessa maneira podem divergir daqueles registrados em soluo, seja por mudana em intensidades relativas, meia largura, deslocamentos de frequncias ou mesmo pelo aparecimento de novas bandas [23]. Podemos comprovar o efeito SERS atravs do estudo do espectro Raman da ditizona em soluo aquosa e da ditizona em soluo aquosa de nanopartculas, a intensificao de modos vibracionais e o surgimento de novos modos podem ser comprovados comparando os espectros da figura 4.

Figura 4: Ilustrao comparativa do espectro Raman de uma soluo aquosa de ditizona (10-4 molL-1) (preto) e uma de ditizona contendo nanopartculas de ouro (vermelho) ( exc = 785 nm), nas mesmas condies. O contraste permite ver o efeito da intensificao proporcionado pelas nanopartculas de outro.

5.2. ANLISE DO ESPECTRO RAMAN DA DITIZONA NA SUPERFCIE DA NANOPARTCULA E DOS SERS SPOT TESTES

A ditizona em sua forma neutra um composto anfiprtico, apresentando dois prtons ionisveis, representados com H2Dz. O anion correspondente HDz- e o cido conjugado representado como H3Dz+. tradicionalmente aceito que em soluo aquosa a ditizona existe em equilbrio entre a forma tiol e tiona [1].
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Figura 5: Equilbrio tautomrico entre as formas tiol e tiona da ditizona

Porm estudos de ressonncia magntica nuclear (RMN) mostram que os dois prtons esto em ambientes qumicos equivalentes. Com isso, a ditizona est presente na forma mostrada abaixo [24], [25].

Figura 6: Geometria da molcula de ditizona em meio neutro

Esta forma da ditizona formalmente um cido diprtico, porm o segundo prton no se dissocia em soluo de pH menor que 14. A dissociao do primeiro prton ocasiona na formao de um anion que apresenta uma colorao amarela, HDz- (max = 470 nm). A protonao da ditizona forma um ction, H3Dz+, que em soluo apresenta uma colorao vermelho-violeta, (max = 520 nm) [26].

Figura 7: Representao das formas cido-base da ditizona [28]

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A tabela 1 mostra a possvel atribuio dos picos do espectro Raman da ditizona na superfcie da nanopartcula, figura 4, feita atravs de comparao de dados experimentais e da literatura [26], [30].

Tabela 1: Atribuio dos picos do Espectro Raman da soluo de ditizona, 10-4molL-1. Deslocamento Raman/cm-1 420 514 709 998 1164 1221 1305 1339 1493 1520 1588 Atribuio Estiramento Au-S Estiramento C-S Estiramento C-N Respiro do anel Estiramento C=S Deformao axial C=S, com contribuio da deformao axial C-N Estiramento Ph-NH, anlogo a srie das anilinas Estiramento simtrico N=C-N Estiramento N=N Estiramento assimtrico N=C-N Estiramento C=N + Estiramento C-N

Pode-se notar que as maiores contribuio para o SERS esto associadas com os modos vibracionais das ligaes C=S e C-N, portanto esperado que a ditizona esteja ligada s nanopartculas de ouro atravs dos tomos de enxofre e/ou nitrognio, como mostrado na figura 8.

Figura 8: Ditizona ancorada na nanopartcula de ouro

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Em soluo, tem sido observado que o processo de formao da ligao leva alguns minutos, depois disso o sistema se estabiliza, atingindo um mximo de absoro, (figura 9), e de espalhamento Raman.

Figura 9:Variao, com o tempo, das bandas em 530, 660 e 900 nm da soluo de nanopartculas de ouro com ditizona 10-4 mol/L.

Neste ponto, contudo, a adio de ons metlicos (concentrao inicial = 10 mol L-1) tais como Mn2+, Hg2+, Pb2+, Ni2+, Co2+ e Zn2+, no produz mudana significativa no espectro Raman (Figura 10)
-4

Figura 10: Espectros Raman de soluo aquosa de nanopartculas de ouro com ditizona (10-4 mol L-1) na presena de Ni2+ (10-3 mol L-1).

Presume-se que depois da agregao e estabilizao das nanoparticulas de ouro-ditizona, o reagente orgnico fique preso em regies intersticiais, e a ligao e o acesso de ons metlicos, em condies de diluio, no so favorveis. Contudo se os ons metlicos so adicionados antes do processo de estabilizao, o espectro Raman permanece sensitivo, respondendo s interaes dos ons metlicos com a ditizona, (Figura 11). Por essa razo, os
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aspectos cinticos que controlam o processo de agregao devem ser levados em considerao, no caso de testes SERS analticos em soluo. Consequentemente, embora os testes possam ser feitos antes do processo de agregao se completar, a reprodutibilidade fica comprometida e os efeitos cinticos precisam ser devidamente controlados.

Figura 11: Espectros SERS da interao de nanoesferas de ouro recm tratadas com ditizona (10-3 molL-1 ), em pH 10, na presena de Hg2+ (10-3 molL-1) e Ni2+ (10-3 molL-1), antes de atingir o patamar de estabilizao mostrado na Figura 9.

Resultados melhores so obtidos misturando-se nanopartculas de ourocitrato com ditizona (10-5 molL-1) e impregnando um papel filtro Watson (papel de cromatografia) com essa suspenso. A resposta SERS da ditizona nesse papel impregnado foi muito forte, Figura 12, mascarando os sinais de fundo da matriz. Os sinais Raman observados so similares aqueles obtidos em solues coloidais aquosas, exibindo uma mudana em 1336 cm-1, envolvendo a frequncia vibracional de estiramento da ligao Ph-N. Provavelmente, no papel, a molcula de ditizona adota uma configurao mais plana, mudando a orientao dos anis fenlicos. O sinal Raman em 408 cm-1 se torna mais definida, e pode ser descrito como sendo o pico do estiramento da ligao Au-S.

Figura 12: Espectro eletrnico (direita) e Raman (esquerda) do papel impregnado com ditizona (10-5 mol L-1) (preto) e nanopartculas de ouroditizona, ( exc = 785 nm) (vermelho) mostrando a enorme intensificao do sinal SERS e o perfil de extino das nanopartculas suportadas em celulose.

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Depois de seco, aplicando uma microgota de soluo diluda de ons metlicos (Hg2+, Pb2+, Ni2+, Co2+, Zn2+), notou-se que apenas o on mercrio levou a uma mudana considervel no espectro Raman (Figura 13). Um importante aspecto, neste caso, que as mudanas so sistemticas e reprodutveis, em contraste com aquelas realizadas em suspenses aquosas. A vantagem de realizar testes SERS em papel que os ons metlicos ficam circunscritos apenas na regio da gota, em contraste com a grande diluio observada quando uma gota adicionada em uma soluo de nanopartculas. A competitividade do on metlico com o reagente orgnico ancorado na superfcie da nanopartcula extremamente reduzida devido aos problemas de diluio. Alm disso, no caso dos testes em papel, a concentrao local do on metlico tende a aumentar conforme o solvente evapora.

Figura 13: Resposta SERS do papel impregnado com nanopartculas de ouro-ditizona, depois de ser aplicado 10L de soluo de Hg2+ ( exc = 785nm)

Em um substrato de papel, utilizando concentraes de ons metlicos abaixo de 10-5 mol L-1, apenas os ons Hg+2 so capazes de produzir mudanas significativas no espectro SERS das nanopartculas de ouro-ditizona, como mostra a Figura 13. A depleo observada no sinal Raman, sem mudanas apreciveis nas frequncias, consistente com a substituio das nanopartculas de ouro por ons de mercrio, coordenados a ditizona (Figura 14). No h evidncia da ligao dos ons de mercrio s molculas de ditizona imobilizadas na superfcie da nanopartcula de ouro. Isso explica

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a seletividade observada para ons mercrio(II), uma vez que o mecanismo envolve uma competio direta com as nanopartculas de ouro. O limite de deteco para os SERS spottests com ditizona est prximo a 2L de Hg2+ 10-9 mol L-1, correspondendo a uma massa de 500 femtogramas de mercrio. Obtendo um curva de calibrao, os SERS spot-tests podero ser empregados como um teste quantitativo.

Figura 14: Deslocamento da ditizona pela complexao com ons mercrio (II) em papel e conseqente depleo do efeito SERS

6. CONCLUSO Explorando o efeito SERS atravs do uso de nanopartculas de ouro e ligantes orgnicos usados em anlise forenses pode-se aumentar a sensibilidade e a seletividade dos testes, permitindo alcanar limites de deteco da ordem de pico/femto (10-12/10-15) gramas. Ao reinventar os testes de Feigl, grande parte dos testes forenses e analticos podero ser beneficiados com a introduo de nanopartculas, permitindo a confeco de laudos mais precisos, diminuindo a possibilidade de falsos positivos e permitindo a realizao de um maior nmero de anlises em um curto espao de tempo. 7. AGRADECIMENTOS: Este projeto tem o apoio da FAPESP (bolsa de IC FAPESP 2010/05501-0), do Projeto Temtico 2009/08584-6, do Projeto Universal CNPq 576309/ 2009-3, e da Rede de Nanotecnologia da Petrobrs.

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BIBLIOGRAFIA 1. FEIGL, F.; ANGER, V. Spot Tests in Inorganic Analysis. 6.ed. Amsterdan: Elsevier, 1972. 2. EUSTIS, S.; EL-SAYED, M. A. Chem. Soc. Rev., n. 35, p. 209, 2006. 3. DANIEL, M. C.; ASTRUC, D. Chem. Rev., n. 104, p. 293, 2004. 4. CHON, J. W. M. et al. Adv. Funct. Mater., n. 17, p. 875, 2007. 5. CHEN, M. S.; GOODMAN, D. W. Acc. Chem. Res., n. 39, p. 739, 2006. 6. STEWART, M. E. et al. Chem. Rev., n. 108, p. 494, 2008. 7. ZHAO, J. et al. Acc. Chem. Res., n. 41, p. 1710, 2008. 8. CAMDEN, J. P. et al. Acc. Chem. Res., n. 41, p. 1653, 2008. 9. NOGUEZ, C.; GARZON, I. L. Chem. Soc. Rev., n. 38, p. 757, 2009. 10. ZAMARION, V. M. et al. Inorg. Chem., n. 47, p. 2934, 2008. 11. TOMA, S. H. et al. Eur. J. Inorg. Chem. n. 3356, 2007. 12. ZAMARION, V. M. Estudos e aplicaes de ressonncia plasmnica superficial em nanosondas. 2008. Dissertao (Mestrado) - SERS, So Paulo. 13. AROCA, R., Surface-enhanced vibrational spectroscopy. Chichester: John Wiley & Sons, 2006. p 233. 14. GHOSH, S. K.; PAL, T. Chem. Rev., n. 107, p. 4797, 2007. 15. ARAVIND, P. K.; METIU, H. J. Phys. Chem., n. 86, p. 5076, 1982. 16. OTTO, A. et al. J. Phys., Cond. Matter, n. 4, p. 1143, 1992. 17. LOMBARDI, J. R.; BIRKE, R. L. Acc. Chem. Res., n. 42, p. 734, 2009. 18. TOMA, H. E. et al. J. Braz. Chem. Soc., n. 21, p. 1158, 2010. 19. NUNES, F. S. et al. Inorg. Chem., n. 45, p. 94, 2006. 20. TURKEVICH, J.; STEVENSON, P. C.; HILLIER, J. Disc. Faraday Soc., n. 55, 1951. 21. FRENS, G. Nature, Phys. Sci., n. 241, p. 20, 1973. 22. FLEISCHMANN, M.; HENDRA, P. J.; MCQUILLAN, A. J. Chem Phys, n. 69, p. 4472, 1978. 23. FARIA, D. L. A.; TEMPERINI, M. L. A.; SALA, O. Qum. Nova., v. 22, n. 54, p. 1, 1999.
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Categoria Jovem Pesquisador

1 Lugar
SNTESE DE NANOTUBOS DE CARBONO ATRAVS DO USO DO BAGAO DA CANA-DE-ACAR COMO MATRIA-PRIMA
Autor: Joner Oliveira Alves, 28 anos, aluno de doutorado em engenharia metalrgica e de materiais na Universidade de So Paulo (USP) Pas: Brasil

SNTESE DE NANOTUBOS DE CARBONO ATRAVS DO USO DO BAGAO DA CANA-DE-ACAR COMO MATRIA-PRIMA

Os nanotubos de carbono (CNTs) so materiais que possuem inmeras possibilidades de aplicaes tecnolgicas devido s suas excepcionais propriedades, entretanto o elevado custo de produo deste material um obstculo a ser superado. Este trabalho apresenta uma soluo economicamente e ambientalmente vivel para a produo dos CNTs por meio do uso do bagao da cana-de-acar como matria-prima. A tradicional produo de acar, associada crescente produo de bioetanol, faz da indstria sucroalcooleira um dos principais segmentos da economia dos pases membros do Mercosul. Aproximadamente 225 kg de bagao so gerados para cada tonelada de cana inserida no processo, somente no Brasil cerca de 150 milhes de toneladas deste resduo so geradas a cada ano. A busca por uma matriz energtica menos dependente do petrleo, por parte dos integrantes do Mercosul, tende a aumentar a produo de etanol proveniente da cana, elevando a gerao do bagao. A metodologia proposta cria novas fontes de renda para a indstria do acar, uma vez que os usineiros tm a oportunidade de vender a energia eltrica gerada no processo, ganhar com a emisso de crditos de carbono, economizar com as despesas de despejo do bagao, e ainda comercializar os CNTs (que possuem alto valor de mercado). Os experimentos consistiram no processo de pirlise a 1000C associado a um sistema catalisador visando recuperao dos gases gerados como matria-prima para a sntese dos CNTs. As emisses gasosas foram analisadas por cromatografia e os materiais produzidos foram caracterizados com o emprego de MEV, MET, TGA e espectroscopia Raman. Os resultados
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mostraram que o uso do catalisador resultou na diminuio das emisses gasosas, e que nanotubos de carbono com comprimentos de 10 a 40 m e dimetros entre 20 e 50 nm foram produzidos. Palavras-chave: Nanotubos de carbono, Nanotecnologia, Cana-de-acar, Bioetanol, Energia, Reciclagem. 1. INTRODUO A tradicional produo de acar, associada crescente produo de bioetanol, faz da indstria sucroalcooleira um dos principais segmentos da economia dos pases integrantes do Mercosul. A reduo dos gases do efeito estufa tem sido amplamente discutida devido ao aquecimento global. O emprego do etanol em substituio aos combustveis fsseis considerado uma das principais medidas a serem adotadas, uma vez que estes combustveis so responsveis por 73% da produo de CO2. O interesse pela energia da biomassa tem aumentado consideravelmente em todo o mundo devido necessidade de encontrar recursos renovveis e fontes de energias limpas. O etanol proveniente da biomassa possui potencial para substituir grandes quantidades de combustveis derivados do petrleo (HOOGWIJK et al., 2009; KIM; DALE, 2004). Segundo a IEA (International Energy Agency), a oferta global de biocombustveis ter aumento de 190 mil barris por dia em 2010, atingindo 1,8 milho de barris dirios (IEA, 2010). Os lderes mundiais na produo de etanol so EUA e Brasil, que juntos representam cerca de 90% da produo mundial. A principal matria-prima para o etanol empregada nos EUA o gro de milho, enquanto no Brasil predomina a aplicao da cana-de-acar (KIM; DALE, 2004; KIM; DALE, 2005). A Argentina exporta entre 400 e 700 mil toneladas de acar por ano. Alm disto, este pas tem investido na expanso da produo bioenergtica, uma vez que busca diversificar sua matriz energtica devido elevada dependncia do uso de combustveis fsseis. Diversos rgos so favorveis ao estimulo do uso dos bicombustveis; recentemente, o governo argentino adotou a mistura de 5% de etanol em sua gasolina a partir de 2010 e j cogita elevar este percentual para 7% ou 10% (NASTARI, 2010). Outro pas integrante do Mercosul, o Paraguai, possui uma grande dependncia do petrleo estrangeiro, fator que atrelado a economia predominantemente agrria faz desse pas um forte candidato ao emprego de novas polticas de bioenergia. O governo tem trabalhado neste sentido; atualmente, a mistura

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de 24% de etanol na gasolina compulsria. O emprego de terras subutilizadas para a produo de biomassa torna desnecessrio o desvio de terras usadas para produzir alimentos. A matriz energtica do Uruguai altamente dependente de outros pases, sendo assim, o desenvolvimento de uma poltica voltada para a produo do etanol uma soluo plausvel. Uma das medidas adotadas para desenvolver este segmento foi a criao da Comisso Nacional de Biocombustveis e do Programa Nacional de Bioetanol (Pronabio-E). Outros pases associados ao Mercosul, como a Colmbia, Chile e Peru possuem polticas de incentivo produo de bicombustveis em nveis iniciais, sendo que o uso da cana-de-acar para a produo de etanol representa uma das perspectivas futuras (MASIERO; LOPES, 2008). A fermentao o principal processo empregado na indstria sucroalcooleira, durante esta etapa gerado um resduo conhecido como bagao da cana. Aproximadamente 225 kg deste resduo so gerados para cada 1000 kg de cana inserida no processo (MCKENDRY, 2002). A Figura 1 ilustra a produo da cana-de-acar e o grande volume de bagao gerado aps o processo de produo do bioetanol.

Figura 1. Local de plantio da cana-de-acar e o ptio de armazenamento do bagao em uma indstria de bioetanol (SUGIMOTO, 2010).

As indstrias brasileiras so responsveis por cerca de 50% nas exportaes mundiais de acar, e detm a liderana absoluta na produo de etanol proveniente da cana-de-acar. Segundo a Conab (Companhia Nacional de Abastecimento - Brasil), a produo brasileira de lcool em 2009 foi de aproximadamente 28 bilhes de litros, demandando cerca de 350 milhes de toneladas de cana e gerando cerca de 79 milhes de toneladas de bagao. Os nmeros da gerao deste resduo so ainda maiores quando considerada a cana utilizada na produo de acar. Juntas, as indstrias brasileiras de acar e lcool processaram cerca de 630 milhes de toneladas de cana em 2009, gerando aproximadamente 142 milhes de toneladas de bagao (PORTO et al., 2010). O bagao da cana-de-acar possui contedo energtico de 17 MJ/kg, podendo ser queimado em caldeiras para produzir energia eltrica e vapor, sendo utilizada dentro da prpria planta industrial ou exportada para um sis61

tema de aquecimento urbano, reduzindo a demanda de combustveis fsseis (BAXTER, 2004; KIM; DALE, 2004; MCKENDRY, 2002). A co-gerao de energia por meio da queima do bagao da cana estabelece novas fontes de renda para a indstria sucroalcooleira. Alm de produzir acar e etanol, os usineiros tm a oportunidade de vender energia eltrica e ganhar com a emisso de crditos de carbono sob as regras do Mecanismo de Desenvolvimento Limpo (MDL), crditos estes comercializveis em bolsas de valores (HOOGWIJK et al., 2009). A queima controlada de resduos slidos, visando a produo de energia, tem vantagens como a reduo da quantidade de resduos que entram em aterros sanitrios e a gerao de energia sem o uso de recursos no-renovveis (ALVES et al., 2010a). A decomposio por tratamento trmico de resduos da biomassa para a produo de energia tem sido amplamente discutida, pesquisas mostraram que essa tecnologia economicamente eficiente e produz baixos ndices de poluio (BAXTER, 2004; KIM; DALE, 2004; MCKENDRY, 2002; WANG et al., 2009). Neste trabalho foi utilizado o processo da pirlise, no qual o material decomposto por tratamento trmico com a ausncia de ar. Um catalisador metlico foi introduzido no sistema com o objetivo de uma avaliao da recuperao dos gases gerados no processo para a sntese de nanomateriais e, por conseguinte, uma diminuio das emisses gasosas. A nanotecnologia tem despertado o interesse de diversas reas devido s enormes possibilidades de aplicaes. Os produtos que empregam a nanotecnologia possuem mercado estimado para 2010 de US$11 trilhes, sendo que US$340 bilhes so correspondentes apenas aos nanomateriais, como por exemplo, os catalisadores para automveis, materiais para gravao magntica e componentes para protetores solares (PITKETHLY, 2003). Os nanomateriais so materiais com graus estruturais na ordem de nanmetros (10-9 m), ou seja, de um bilionsimo de metro. Diversos tipos de nanomateriais, como os nanotubos de carbono, nanopartculas metlicas, nanopartculas de xidos de metais de transio, nanoemulses e diferentes tipos de nanocompsitos, deixaram de ser apenas alvos dos laboratrios acadmicos e podem facilmente ser encontrados em produtos comercializados atualmente (ZARBIN, 2007). Dentre os produtos de nanotecnologia, os nanotubos de carbono (CNTs) destacam-se como os mais promissores. Os CNTs foram descobertos por Iijima no incio da dcada de 90, estes materiais so formados por estruturas cilndricas constitudas de tomos de carbono com graus estruturais na
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ordem de nanmetros (IIJIMA, 1991). Os nanotubos de carbono possuem inmeras possibilidades de aplicaes tecnolgicas devido s suas excepcionais propriedades, tais como alta resistncia qumica, resistncia oxidao e temperatura, baixa densidade, transporte eltrico, altssima resistncia mecnica, flexibilidade e resistncia ruptura (BAUGHMAN et al., 2002; SEE; HARRIS, 2007). A Figura 2 apresenta um modelo da estrutura dos nanotubos de carbono.

Figura 2. Desenho esquemtico da estrutura de um nanotubo de carbono (OLIVEIRA, 2010).

Apesar das excelentes propriedades, o uso dos nanotubos de carbono limitado devido ao alto custo de produo. Para reduzir o custo de um produto, duas vias so fundamentais: o barateamento do processo ou a reduo do custo das matrias-primas. Este trabalho apresenta solues nestes dois sentidos, uma metodologia inovadora para a sntese dos nanotubos e a introduo de uma fonte sustentvel e de baixo custo como matria-prima (ALVES et al., 2010b). 2. OBJETIVOS O objetivo geral deste trabalho o emprego de uma nova tecnologia no processo da queima do bagao da cana-de-acar visando, alm da tradicional gerao de energia, uma diminuio das emisses gasosas e produo de nanotubos de carbono. Um esquema ilustrativo dos objetivos especficos deste trabalho separados pelas reas de interesse exibido na Figura 3.

Figura 3. Objetivos especficos do projeto.

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Implementao de uma nova tecnologia totalmente inovadora para a sntese dos Nanotubos de Carbono, um material com inmeras aplicaes tecnolgicas devido s suas excepcionais propriedades.

Diminuio das emisses gasosas geradas durante o processo de queima do bagao de cana atravs do uso de um sistema catalisador. Incentivo a prtica da gerao de energia a partir da biomassa atravs da valorizao do processo com o advento de um novo produto.

Criao de fontes de rendas adicionais para as indstrias do bioetanol atravs da valorizao do bagao da cana-de-acar, da possibilidade de venda de energia e gerao de crditos de carbono. Gerao de energia sustentvel atravs do uso do bagao da cana, uma matria-prima renovvel.

3. MATERIAL E MTODOS A matria-prima empregada neste trabalho foi o bagao da cana-deacar fornecido por uma indstria de bioetanol localizada no Estado de So Paulo (Brasil). O material foi recebido na forma de uma fibra seca (veja Figura 4) tendo sido pulverizada a uma granulometria inferior a 500 m antes de ser utilizado.

Figura 4. Bagao da cana-de-acar como recebido

O bagao da cana apresenta cerca da metade de sua composio na forma de carbono, que o elemento de maior interesse neste trabalho uma vez que este o principal precursor dos nanomateriais a serem formados. A Tabela 1 apresenta a anlise qumica do bagao da cana utilizado.

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Tabela 1 - Anlise qumica do bagao da cana utilizado (em % de peso).

Um cadinho de cermica foi utilizado para inserir 4 gramas do material no sistema. O aparato empregado consiste em dois fornos tubulares em escala laboratorial ligados por um tubo de quartzo (veja Figura 5). Neste trabalho foi empregado o processo de pirlise, no qual o material decomposto por tratamento trmico com a ausncia de gases oxigenados. A temperatura foi mantida constante a 1000C e a atmosfera controlada pelo fluxo de N2.

Figura 5. Desenho do aparato utilizado nos experimentos.

Visando a ausncia de ar, a atmosfera do aparato foi controlada com a adio de nitrognio na entrada do tubo de quartzo. O cadinho inserido no primeiro forno, no qual ocorre o processo de pirlise do material. O efluente da pirlise passa ao segundo forno, onde um filtro com estrutura do tipo colmeia, feito de carbeto de silcio, retm 97% das partculas sub-mcron. Em um segundo momento foi introduzido um catalisador metlico composto de uma tela de malha de ao inoxidvel - tipo 304 (uma liga composta de 67% ferro, 18-20% cromo e 11% nquel), esta tela foi utilizada como recebida (sem pr-tratamentos). Peas de 300 x 100 mm foram enroladas em forma circular com cerca de 40 mm de dimetro e inseridas de forma paralela direo do fluxo de gases no forno secundrio. O esquema demonstrado na Figura 6 fornece um apanhado geral do procedimento realizado. O cadinho inserido no forno primrio (A), os gases gerados pela queima do material atravessam o filtro (B) e entram no segundo forno, no qual a tela metlica (C) reage com os gases e forma o material particulado.

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Figura 6. Desenho esquemtico dos processos de pirlise e catlise: (A) cadinho inserido no forno, (B) filtro retm partculas slidas e (C) gases atingem a tela catalisadora.

As caracterizaes realizadas neste trabalho consistiram em duas frentes, uma anlise dos hidrocarbonetos gasosos gerados e um estudo do material sintetizado. Amostras dos efluentes gasosos foram coletadas na sada do segundo forno e analisadas em um aparelho de cromatografia gasosa modelo HP-6890. Amostras de diferentes regies da tela metlica foram analisadas em um Microscpio Eletrnico de Varredura (MEV) modelo Hitachi 4800, e em dois tipos de Microscpio Eletrnico de Transmisso (MET), um de baixa resoluo (modelo JEOL 1010 tenso de acelerao de 70 kV) e um de alta resoluo (modelo JEOL 2010 tenso de acelerao de 200 kV). Visando uma maior obteno de materiais, os experimentos foram repetidos dez vezes. Aps os experimentos, as telas metlicas foram diludas em uma soluo de etanol, que foi submetida a um sonicador e aquecida, restando apenas um p fino que foi analisado atravs do emprego da Anlise Termogravimtrica (utilizando um TGA modelo HR V5.4A, com fluxo de N2 e rampa de aquecimento de 10 C/min) e da Espectroscopia Raman (utilizando um Micro-Raman RENISHAW). 4. RESULTADOS E DISCUSSO
AVALIAO DAS EMISSES GASOSAS E DA INFLUNCIA DO SISTEMA CATALISADOR

Os hidrocarbonetos leves (LHCs) podem ser definidos como compostos orgnicos com baixo peso molecular e que consistem inteiramente de hidrognio e carbono. Os principais hidrocarbonetos leves gasosos provenientes da queima do bagao consistiram em metano, etileno, acetileno, benzeno e tolueno, sendo que traos de outros compostos tambm foram detectados: etano, propano, propileno, etilacetileno e etilbenzeno (ALVES et al., 2010c).

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Primeiramente, foi realizado um ensaio de pirlise do bagao sem o uso do sistema catalisador, tendo sido registrado um total de LHCs de 4892 g/g. Em seguida, foram realizados trs ensaios com o uso da tela metlica, sendo registrados valores totais de LHCs de 2825, 3078 e 3351 g/g. A Tabela 2 apresenta os valores do aumento de peso da tela catalisadora e as diminuies nas emisses dos LHCs com o uso do sistema catalisador. Atravs da anlise desta tabela possvel afirmar que o emprego da tela ocasionou uma diminuio das emisses dos hidrocarbonetos gasosos, indicando que uma reteno dos hidrocarbonetos ocorreu no sistema de catlise, ou seja, os gases gerados durante a pirlise do bagao da cana sofreram uma reao qumica quando em contato com a tela metlica.
Tabela 2 - Anlise da influncia do sistema catalisador.

Ensaios 1 2 3

Aumento de peso da tela Diminuies nas emisses dos LHCs 133 mg 101 mg 124 mg 2167 g/g 1541 g/g 1814 g/g

O processo de sntese empregado neste trabalho baseado na deposio qumica de vapor (CVD), a qual consiste de reaes de desidrogenao trmica atravs do uso de um catalisador composto de um metal de transio empregado para quebrar os hidrocarbonetos gasosos em carbono e hidrognio (SEE; HARRIS, 2007). Baker et al. (1973) estudaram o crescimento de fibras de carbono atravs da decomposio cataltica de fontes de hidrocarbonetos nas superfcies ativas de metais de transio. Durante esse processo, os hidrocarbonetos so decompostos em carbono e hidrognio, seguido por uma difuso do carbono sobre a superfcie do metal, at a soluo tornar-se saturada. A supersaturao da soluo resulta na precipitao de partculas slidas de carbono na superfcie do metal. Outras pesquisas mostraram que os hidrocarbonetos podem ser utilizados como fontes de carbono na produo de nanotubos de carbono empregando a metodologia CVD (KONG et al., 1998; TIBBETTS, 1983; ZHAO et al., 2006). O metano (CH4) foi o LHC que apresentou a maior concentrao nos experimentos (em torno de 50% do total das emisses), este gs o hidrocarboneto cineticamente mais estvel, sendo o primeiro a sofrer decomposio no processo de pirlise em altas temperaturas (ALVES et al., 2010).
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Kong et al. (1998) investigaram a utilizao do metano como combustvel para produzir nanotubos de carbono via CVD com temperatura de 1000C, sendo que foram produzidos CNTs de alta qualidade. Com base no que foi discutido possvel afirmar que a recuperao dos hidrocarbonetos gasosos, gerados durante a pirlise do bagao da canade-acar como fonte de carbono para a sntese de CNTs via CVD, uma tecnologia vivel.
ANLISE MICROESTRUTURAL DOS MATERIAIS FORMADOS

A microscopia eletrnica de varredura foi utilizada para uma anlise preliminar da formao dos nanomateriais. As Figuras 7-A, 7-B e 7-C apresentam as imagens MEV dos materiais sintetizados a partir do bagao da cana. O emprego da microscopia eletrnica de transmisso possibilitou uma anlise das estruturas dos nanomateriais formados. As Figuras 7-D e 7-E apresentam as imagens obtidas com o MET de baixa resoluo e a Figura 7-F com o MET de alta resoluo.

Figura 7 - Imagens MEV (A, B e C) e MET (D, E, F) dos nanomateriais produzidos.

A Figura 7-A exibe a tela catalisadora ao fundo com as ramificaes dos nanomateriais impregnados na superfcie de um modo no uniforme. Nas Figuras 7-B e 7-C possvel observar uma alta densidade de emaranhados de

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fibras de nanomateriais, que abrangem a malha catalisadora, bem como o elevado comprimento destas fibras (entre 10 e 40 m). A imagem de MET exibida na Figura 7-D aponta a formao de fios longos e de algumas impurezas, provavelmente carbono amorfo. A Figura 7E possibilita uma avaliao da mdia dos dimetros dos materiais sintetizados. Foram produzidos nanomateriais com dimetros entre 20 e 50 nm. Como esperado, as imagens de MET mostraram que os nanomateriais produzidos possuem a forma tubular caracterstica dos nanotubos de carbono. A Figura 7-F possibilita uma anlise da estrutura das paredes dos CNTs produzidos. Foi evidenciada a presena das camadas de grafeno paralelas ao redor de uma cavidade oca. Os CNTs podem ser classificados em nanotubos de carbono de parede simples (NCPS) ou de parede mltiplas (NCPM), sendo que os NCPS so compostos de uma nica folha de grafite na forma de um tubo cilndrico, e os NCPM so formados por um conjunto de nanotubos concntricos (SEE; HARRIS, 2007). Os CNTs produzidos neste trabalho possuem vrias paredes, portanto podem ser classificados como NCPM.
ANLISE TERMOGRAVIMTRICA (TGA)

A anlise termogravimtrica foi utilizada neste trabalho para uma investigao das impurezas presentes no p obtido aps a imerso das telas metlicas na soluo de etanol. A Figura 8 exibe a curva TGA do material produzido.

Figura 8 - Curva TGA do material produzido (rampa de aquecimento de at 1000 C).

O tratamento trmico uma das alternativas para a purificao dos CNTs, uma vez que possveis impurezas degradam-se em temperaturas inferiores do que estes materiais (LOBACH et al., 2002).

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A curva TGA do material produzido apresenta um aumento acelerado na perda de massa aps a temperatura de 800C, tal fato est relacionado decomposio dos nanomateriais. A perda de aproximadamente 13% da massa inicial antes da temperatura atingir 800C indica a presena das impurezas presentes no p recolhido, estas impurezas so constitudas basicamente por carbono amorfo. Portanto, possvel afirmar que aproximadamente 87% do material coletado no sistema catalisador composto por nanotubos de carbonos.
ESPECTROSCOPIA RAMAN

A espectroscopia Raman permite a diferenciao entre as diferentes formas alotrpicas do carbono: nanotubos, grafite ou carbono amorfo. Os CNTs possuem estruturas ordenadas com faixas do espectro Raman bem definidas. Os modos vibracionais tangenciais so responsveis pela banda G, associada a nanotubos perfeitos e com faixa de frequncia prximas a 1.575 cm-1. A banda D, visualizada em torno de 1350 cm-1 atribuda presena de estruturas desordenadas, como nanotubos de carbono defeituosos ou carbono amorfo (DRESSELHAUS et al., 2005; EKLUND et al., 1995).

Figura 9 - Espectro Raman dos materiais produzidos.

A Figura 9 mostra o espectro Raman dos materiais produzidos. A presena das bandas G e D so coerentes com a forma estrutural dos nanotubos de carbono. A banda G possui uma maior intensidade do que a banda D, tal fato indica uma boa proporo de nanotubos perfeitos (DRESSELHAUS et al., 2005; EKLUND et al., 1995).

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5. CONCLUSES A co-gerao de energia por meio da pirlise do bagao da cana-de-acar estabelece novas fontes de renda para a indstria sucroalcooleira, uma vez que os usineiros tm a oportunidade de produzir energia eltrica e ganhar com a emisso de crditos de carbono sob as regras do Mecanismo de Desenvolvimento Limpo (MDL), crditos estes comercializveis em bolsas de valores. A associao do processo de catlise ao de pirlise representa uma soluo inovadora para a diminuio das emisses gasosas e a produo de nanomateriais. O emprego da tela de ao inoxidvel ocasionou uma diminuio das emisses de gases nocivos ao meio ambiente como o metano, hidrocarboneto que apresentou as maiores quedas nas taxas de emisses. Os resultados apontaram que o material coletado no sistema catalisador constitudo por aproximadamente 87% de nanomateriais, sendo que a espectroscopia Raman comprovou que estes materiais possuem estrutura similar aos nanotubos de carbono. Foram produzidas altas densidades de emaranhados de nanotubos de carbono de paredes mltiplas com dimetros de 20 a 50 nm e comprimentos na faixa de 10 a 40 m. Portanto, o uso do bagao da cana-de-acar como matria-prima para a produo de nanotubos de carbono mostrou ser bastante satisfatria e uma rea interessante para investimentos futuros. AGRADECIMENTOS Projeto desenvolvido com a orientao dos professores Jorge Alberto Soares Tenrio (Escola Politcnica Universidade de So Paulo, Brasil) e Yiannis Angelo Levendis (College of Engineering Northeastern University, EUA). Auxlio financeiro concedido pelo CNPq-Brasil (Processo n: 202120/ 2008-2) e CAPES (Edital 04/CII-2008 - Rede Nanobiotec-Brasil).

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Categoria Integrao
1 Lugar
MATERIAIS NANOESTRUTURADOS: SNTESE, ESTUDOS COM LUZ SNCROTRON, PROPRIEDADES E APLICAES
Autor: Aldo Felix Craievich, 71 anos, brasileiro, nascido na Argentina, doutor em fsica; Noem Elisabeth Walse de Reca, 73 anos, argentina, doutora em qumica; Diego Germn Lamas, 43 anos, argentino, doutor em fsica; e Mrcia Carvalho de Abreu Fantini, 54 anos, brasileira, doutora em fsica. Pases: Argentina e Brasil

MATERIAIS NANOESTRUTURADOS: SNTESE, ESTUDOS COM LUZ SNCROTRON, PROPRIEDADES E APLICAES

RESUMO Este trabalho uma reviso das pesquisas realizadas desde 2004, decorrentes de uma colaborao cientfica entre membros do IFUSP, Brasil, e do CINSO, CONICET-CITEFA, Argentina. Trata-se de estudos da estrutura, propriedades e aplicaes de diversos materiais nanoestruturados produzidos no CINSO. Descrevemos os mtodos de sntese para a obteno dos diversos nanomateriais (i) com elevados valores de conduo inica e conduo mista (inica e eletrnica) e (ii) com caractersticas semicondutoras. Apresentamos os estudos das propriedades estruturais realizados mediante vrias tcnicas experimentais, com nfase em mtodos que utilizam a fonte de luz sncrotron do LNLS, Campinas, Brasil. Focalizamos dois aspectos particularmente interessantes: (i) as condies de reteno de fases metaestveis e (ii) as mudanas das propriedades fsicas em funo do tamanho de gro nanocristalino. Finalmente, descrevemos as aplicaes dos nanomateriais estudados em dois dispositivos originais: sensores de gases e clulas a combustvel de xido slido de temperatura intermediria. Nas referncias de cada captulo indicamos com (*) os artigos e as informaes sobre patentes correspondentes aos trabalhos realizados dentro da presente etapa de nossa colaborao. Palavras chave: materiais nanoestruturados, sntese, estrutura, aplicaes, clulas a combustvel, sensores de gases.

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1. SNTESE DE NANOMATERIAIS E TCNICAS DE CARACTERIZAO

1.1. INTRODUO

Os nanomateriais so sistemas que contm partculas de dimenso nanomtrica (10-9m). A nanotecnologia definida como o desenho, fabricao e aplicao de nanoestruturas ou nanomateriais e trata tambm da relao entre as propriedades fsico-qumicas e as dimenses dos nanomateriais [1]. Existe uma razo principal de interesse no desenvolvimento de nanomateriais devido s suas propriedades no usuais que, muitas vezes, geram novas aplicaes surpreendentes. Isto porque ocorre uma variao considervel das propriedades de um material se os cristalitos que o compem atingem dimenses nanomtricas [2-3]. Os cristais em escala nanomtrica tm em geral uma temperatura de fuso muito menor que os cristais micromtricos, possuem parmetros de rede cristalina reduzidos e podem ser sinterizados a temperaturas relativamente baixas. Em nanocermicos, alm disso, algumas fases metaestveis podem ser retidas temperatura ambiente. Por outro lado, materiais ferroeltricos e ferromagnticos podem perder sua ferroeletricidade ou seu ferromagnetismo quando os cristais so reduzidos escala nanomtrica. Em sistemas nanoestruturados, a origem das propriedades no usuais baseia-se em dois fatores: i) a dimenso da partcula similar, ou mesmo menor, que o valor crtico de certos parmetros como o comprimento de onda de de Broglie para o eltron, a distncia necessria para formar um lao de discordncia dislocation loop de Frank-Reed, a espessura da camada de carga espacial, o livre caminho mdio dos eltrons, o tamanho mximo do domnio magntico, etc. e ii) efeitos de superfcie, que dominam a termodinmica das partculas com estrutura nanocristalina, sua reatividade e a morfologia superficial. O primeiro fator conduz, por exemplo, a propriedades eltricas especiais em materiais inicos nanoestruturados, a propriedades eletrnicas, magnticas e pticas particulares e, no caso de nanosemicondutores, possibilidade de aplicao em dispositivos de pontos qunticos quantum-dots. O segundo fator pode fazer com que os nanocristais adotem morfologias distintas s de cristais volumtricos, j que diferentes planos da rede esto presentes na superfcie e afetam de forma diferente a qumica superficial [4] e a atividade cataltica [5]. O objetivo geral deste trabalho conjunto apresentar diversos resultados sobre rotas de sntese, estudos estruturais, especialmente por tcnicas de luz sncrotron, e aplicaes de diversos nanomateriais em sensores de gases e em clulas a combustvel de xido slido.
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1.2. SNTESE DE MATERIAIS NANOESTRUTURADOS

Os materiais nanocermicos sintetizados neste projeto incluem (i) slidos inicos para eletrlitos e materiais para eletrodo (nanops, nanotubos, sistemas mesoporosos) para clulas a combustvel de xido slido (SOFCs) (ver todas as frmulas no original em pdf ) e (ii) nanomateriais semicondutores para aplicaes em sensores de gases e sistemas optoeltricos. Tcnicas de sntese gerais no sero descritas aqui, mas apenas aquelas empregadas neste trabalho, tal como a gelificao-combusto, que foi utilizada para a sntese da maioria dos materiais investigados nesta cooperao. O mtodo de gelificao-combusto baseia-se na formao de um gel e na posterior combusto dos nitratos dos metais selecionados com combustveis orgnicos (glicina, ureia, lisina, acido ctrico, etc.) [10], [11]. O processo de combusto produzido pela reao de oxi-reduo (redox) exotrmica entre os ons nitrato, fortemente oxidantes, e a reduo do combustvel. A liberao de gases desintegra o precursor do gel, sendo o tamanho das nanopartculas finais dependente da velocidade da reao. Empregando o mtodo de gelificao-combusto, foram desenvolvidas diversas rotas de sntese de ps nanocristalinos de vrios xidos mistos, especialmente para a sntese de solues slidas homogneas em composio de ZrO2-CeO2 [11,15-20], ZrO2-Y2O3 [20] e ZrO2-CaO [20], [21]. (ver frmula no original em pdf ) Os combustveis utilizados so glicina, lisina, alanina e arginina. Alm desses materiais, sintetizamos cria dopada com gadolnia para ser usada como eletrlito de IT-SOFCs (Intermediate TemperatureSolid Oxide Fuel Cells) [22], [23]. Mais recentemente, obtivemos nanops e outros materiais de gro fino de ZrO2-Sc2O3, nos quais estudamos as propriedades, a fim de utiliz-los como eletrlitos de IT-SOFCs [24], [26]. Investigamos tambm materiais para catodos, tais como perovskitas de (La;Sr)CoO3 y (Sm;Sr)CoO3 e, nestes casos, obtivemos materiais em forma de nanotubos pela tcnica de molde plstico assistida com microondas empregando membranas de policarbonato [27], [29]. Estes nanotubos foram depositados sobre eletrlitos de cria dopada com samria, a partir de pastas preparadas com solventes comerciais, que foram posteriormente secadas a baixa temperatura e sinterizadas a temperaturas moderadas (1000-1100C), seguindo a tcnica de fast-firing [27]. Obtivemos, assim, um novo tipo de catodo nanoestruturado com nanotubos de La0.6Sr0.4CoO3 de alta porosidade, que exibem baixa resistncia polarizao.
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Estruturas tubulares formadas com nanopartculas de manganitas j haviam sido sintetizadas com sucesso, utilizando a tcnica desenvolvida por Leyva e colaboradores [30,31]. Elas apresentam uma rea especfica muito elevada, razo pela qual sugeriu-se sua utilizao como catodo para SOFCs [32]. Entretanto, as manganitas no so boas candidatas para IT-SOFCs j que no apresentam propriedades eletrocatalticas adequadas para a reduo de oxignio a temperaturas intermedirias [33]. Por esta razo, neste trabalho estudamos o desempenho de cobaltitas. As solues slidas homogneas em composio de ZrO2-CeO2 so adequadas para anodos de SOFCs por suas excelentes propriedades catalticas [11], [20], mas necessrio preparar materiais compostos com metais, como Ni ou Cu, para se obter uma melhor condutividade eletrnica. Dessa forma, como para o caso dos catodos, preparamos pastas com solventes orgnicos partindo de nanops de NiO e da soluo slida de ZrO2-CeO2, que foram depositadas sobre os eletrlitos e posteriormente sinterizadas. O NiO se reduz a Ni na atmosfera redutora do anodo, originando um material composto de alta condutividade eletrnica e excelentes propriedades catalticas para a oxidao de metano. Estes materiais compostos foram empregados como anodos de IT-SOFCs de cmara nica, operadas em misturas de metano e ar [34]. Utilizamos CeO2-ZrO2 por sua convenincia estrutural e boas propriedades eletrocatalticas. Alm disso, a cria apresenta a capacidade de armazenar oxignio, pois o ction de crio pode ser oxidado ou reduzido. Os xidos de crio e de zircnio com uma composio nominal Ce0.9Zr0.1O2 apresentaram excelentes propriedades catalticas [35]. Quanto aos semicondutores nanoestruturados, obtivemos (i) SnO2 por gelificaocombusto [8], [9] e na forma de nanotubos por tcnicas de sol-gel empregando membranas de policarbonato, e (ii) ZnO puro e dopado com Al mediante a transferncia de sis que contm as nanopartculas requeridas pelo mtodo de dip-coating. O ZnO empregado em sensores de gases e em dispositivos optoeletrnicos. O estudo da variao das propriedades pticas que realizamos incluiu a preparao de filmes nanocristalinos partindo de diferentes precursores de ZnO [36], [37]. O ZnO tem aplicaes em equipamentos de emisso ptica em uma faixa ampla de comprimentos de onda. O ZnO dopado com Al possui melhores propriedades de luminescncia em comparao com materiais dopados com elementos de transio [38].

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1.3. PRINCIPAIS TCNICAS EXPERIMENTAIS UTILIZADAS 1.3.1. Difratometria de raios X

Dentre as medidas de caracterizao fsica dos materiais nanocristalinos, a determinao do tamanho mdio de cristalito , usualmente, o primeiro passo em qualquer investigao estrutural. Um dos mtodos mais utilizados para a determinao do tamanho mdio dos nanocristais a difratometria de raios X (XRD, X-Ray Diffraction). Estudando nanomateriais por difrao de raios X, observa-se um alargamento dos picos de Bragg com a diminuio do tamanho, D, dos cristalitos. O dimetro mdio dos cristalitos determinado mediante a equao de Scherrer, D = k /.cos, onde k uma constante (usualmente 0,9), o comprimento de onda do feixe de raios X, a largura do pico de difrao selecionado, medido na metade do seu mximo (FWHM), depois da eliminao dos efeitos instrumentais, e o ngulo do centro de gravidade do pico de Bragg. O comprimento de onda dos feixes de raios X geralmente utilizados em difratmetros clssicos de 0,154 nm (CuK). Valores similares so utilizados quando o difratmetro est associado a uma fonte de luz sncrotron. A equao de Scherrer representa o tratamento mais simples do alargamento de um pico de Bragg e pode ser estendido para incluir o efeito de microdeformaes. Claramente, este mtodo permite determinar o tamanho mdio de cristalito, mas no fornece informao sobre a disperso de tamanhos ou de quo aglomerados esto os nanocristais para formar os gros. possvel tambm associar os mtodos de difrao com fontes de luz sncrotron, de muito alto brillho, o que permite determinar de forma precisa as caractersticas de picos de Bragg, mesmo daqueles de muito baixa intensidade.
1.3.2. Microscopia eletrnica

A Microscopia Eletrnica de Transmisso (TEM, Transmission Electron Microscopy), e mais particularmente de alta resoluo (HRTEM, High Resolution-TEM), o mtodo ideal para determinar o tamanho mdio de partcula ou de cristalito e sua distribuio de tamanhos. Entretanto, a preparao de amostras para TEM pode apresentar dificuldades. A alta magnificao, ou alta resoluo, dos aparelhos de TEM deve-se ao pequeno comprimento de onda efetivo do eltron , dado pela relao de de Broglie: = h/ 2mqV, sendo m e q a massa e a carga do eltron, respectivamente, h a constante de Planck e V a diferena de potencial com que o eltron acelerado no microscpio. Para um microscpio com V=200kV, o comprimento de onda dos eltrons de 0,0062 nm.
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1.3.3. Absoro de raios X (EXAFS)

A tcnica de EXAFS (Extended X-ray Absorption Fine Structure) aplicada ao estudo da estrutura local de materiais cristalinos, nanocristalinos e amorfos. Mediante a tcnica de EXAFS so analisadas as oscilaes no espectro de absoro de raios X que se produzem na faixa de energia acima das bordas de absoro de nveis eletrnicos profundos (K, L, ...) dos tomos que compem o material a ser analisado. As oscilaes no espectro de absoro de raios X so devidas a um efeito de interferncia entre as ondas associadas aos fotoeltrons ejetados pelos tomos e aos fotoeltrons retroespalhados pelos tomos vizinhos. O sinal observado depende do tipo e do nmero de vizinhos que geram o retroespalhamento, e afetado pelo fator de Debye-Waller (associado a desordens atmicas esttica e dinmica). As oscilaes EXAFS no esto relacionadas com a ordem estrutural de longo alcance e so sensveis s configuraes locais no entorno dos tomos centrais. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS (*) Referncias com participantes deste projeto (CINSO-IFUSP), desde o incio da presente etapa de colaborao, em 2004. [1] ROCO, M. C. JOM-J. Minerals, Metals and Materials, n. 54, p. 2, 2002. [2] GLEITER, H. Prog. Mater. Sci., n. 33, p. 223, 1989. [3] GLEITER, H. Acta Mater., n. 48, p. 1, 2000. [4] STARK, J. V. et al. Chem. Mat., n. 8, p. 1904, 1996. [5] SUN, Y.; XIA, Y. Science, n. 298, p. 2176, 2002. [6] LAMAS, D. G.; LASCALEA, G. E.; RECA, N. E. W. de. J. Eur. Ceram. Soc., n. 18, p. 1217, 1998. [7] JUREZ, R. E. et al. J. Eur. Ceram. Soc. n. 20, p. 133, 2000. [8] FRAIGI, L. B.; LAMAS, D. G.; WALSE de RECA, N. E. Mater. Lett., n. 47, p. 262, 2001. [9] FRAIGI, L. B. 2006. Tese (Doutorado em Engenharia) - FI-Universidad de Buenos Aires. [10] LAMAS, D. G. 1999. Tese (Doutorado em Fsica) - FCEyN-Universidad de Buenos Aires.

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[11] (*) LASCALEA, G. 2004. Tesis (Doctoral en Ciencia de Materiais) Inst. Prof. Jorge Sbato- UNSAM, San Martin, Argentina. [12] LAMAS, D. G. et al. Nanostruct. Mat., n. 10, p. 1199, 1998. [13] LAMAS, D. G. et al. In: SAM 97, Buenos Aires, 14-16 May, 1997. Proceed... Buenos Aires: Tandil, 1997. p. 455. [14] BIANCHETTI, M. et al. J. Mat. Res., n. 17, p. 2185, 2002. [15] LAMAS, D. G. et al. J. Mat. Sci. Lett., n. 20, p. 1447, 2001. [16] LASCALEA, G. et al. J. Mat. Lett., n. 58, p. 2456, 2004. [17] (*) LASCALEA, G. et al. Mat. Res. Bull., n. 40, p. 2029, 2005. [18] (*) LAMAS, D. G. et al. Journal of Applied Crystallography, n. 38, p. 867-873, 2005. [19] (*) ACUA, L. M. et al. Powder Diffraction Suppl., v. 23, n. 2, Jun. 2008. [20] (*) FBREGAS, I. O. 2008. Tese (Doutorado em Qumica) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales UBA, Argentina. [21] (*) FBREGAS, I. O. et al. Journal of Applied Crystallography, n. 41, p. 680-689, 2008. [22] FUENTES, R. O.; BAKER, R. T. Int. Journal of Hydrogen Energy, n. 33, p. 3480-3484, 2008. [23] FUENTES, R. O. et al. Journal of Materials Chemistry, n. 18, p. 56895695, 2008. [24] (*) ABDALA, P. M.; KEMPF, R.; LAMAS, D. G. ECS Transactions: Solid Oxide Fuel Cells, n. 7, p. 2197-2205, 2007. [25] (*) ABDALA, P. M. et al. The Journal of Physical Chemistry C, n. 113, p. 18661-18666, 2009. [26] (*) ABDALA, P. M. 2010. Tese (Doutorado em Cincia e Tecnologia de Materiais) - Inst. de Tecn. Jorge Sbato - UNSAM, San Martin, Argentina. [27] (*) BELLINO, M. G. Journal of the American Chemical Society, n. 129, p. 3066-3067, 2007. [28] (*) SACANELL, J.; LAMAS, D. G.; LEYVA, A. G. Physica B, n. 398, 341-343, 2007. [29] (*) SACANELL, J. et al. Journal of Power Sources, n. 195, p. 1786-1792, 2010.
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[30] LEVY, P. et al. Appl. Phys. Lett., n. 83, p. 5247, 2005. [31] LEYVA, A. G. et al. J. Sol. Stat. Chem., n. 177, p. 3949, 2004. [32] HUESO, L.; MATHUR, N. Nature, n. 427, p. 301, 2004. [33] SKINNER, S. J. Int. J. Inorg. Mater., n. 3, p. 113, 2001. [34](*) LAMAS, D. G. et al. ECS Transactions: Solid Oxide Fuel Cells, n. 7, p. 961-970, 2007. [35] (*) LARRONDO, S. A. et al. M. A. Catalysis Today, n. 53, p. 107-108, 2005. [36] BOJORGE, C. D. et al. J. Mat. Sci. Mater. Electron, n. 18, p. 1119, 2007. [37] (*) BOJORGE, C. D. et al. In: SAM-CONAMET, San Nicols, Buenos Aires, Sept. 2007. Proceed... Buenos Aires: [s.n.], 2007. [38] OTAL, E. H. 2009. Tese (Doutorado em Qumica) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales UBA, Argentina.

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2. ESTRUTURA CRISTALINA E RETENO DE FASES METAESTVEIS EM SOLUES SLIDAS NANOESTRUTURADAS BASEADAS EM ZrO2
2.1. ASPECTOS GERAIS

Como vimos na introduo, os materiais nanoestruturados so slidos nos quais as distncias entre defeitos vizinhos (bordas de gro, defeitos pontuais, discordncias, etc.) so da ordem das distncias interatmicas. Devido a este alto grau de desordem, os nanomateriais podem apresentar novas propriedades (eltricas, magnticas, pticas, etc.). Por outro lado, foram estabelecidos mtodos de reteno, inclusive temperatura ambiente, de fases de alta temperatura que no so termodinamicamente estveis e que, em muitos casos, possuem melhores propriedades que as fases estveis conhecidas. A zircnia (dixido de zircnio, ZrO2) em forma nanocristalina desperta um grande interesse tecnolgico devido s suas excelentes propriedades eltricas e mecnicas [1-3]. Estas propriedades esto estreitamente relacionadas com as estruturas cristalinas que esses materiais assumem e com suas transformaes de fases. Apesar desses materiais terem sido muito estudados, ainda existem diversas discrepncias na literatura e questes em aberto, razo pela qual suas propriedades bsicas seguem sendo objeto de intensa investigao.
2.2. ANTECEDENTES

A zircnia pura (sem dopar) apresenta trs tipos de estruturas que dependem da temperatura. temperatura ambiente a fase estvel tem estrutura monoclnica, correspondente ao grupo espacial P21/c. Aproximadamente a 1170C, ela apresenta uma transformao martenstica para a fase tetragonal de grupo espacial P42/nmc, enquanto que a 2370C tem outra transformao para a fase cbica de grupo espacial Fm3m. Esta fase cbica possui uma estrutura tipo fluorita CaF2 (Fig. 2.1), enquanto que a fase tetragonal apresenta os nions O2- apenas deslocados no eixo-c; e o parmetro de rede c levemente maior que o parmetro de rede a (a diferena de 1%, aproximadamente). Este fato faz com que a anlise estrutural seja muito delicada.

Fig. 2.1 Estrutura cristalogrfica tipo fluorita. Os smbolos menores e escuros representam os ctions (em nosso caso Zr4+) e os maiores e claros os oxignios (O2-).

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As fases de alta temperatura tetragonal e cbica podem ser retidas a temperaturas mais baixas, inclusive ambiente, dopando a zircnia com outros xidos, geralmente de metais bivalentes ou trivalentes, que formam solues slidas com a zircnia. Os ctions metlicos adicionados substituem o ction Zr4+ e, por sua menor valncia, geram vacncias na subrede de oxignio, que so responsveis pela conduo inica a alta temperatura atravs dos ons O2-. A faixa de composies de estabilizao das fases tetragonal e/ou cbica estreita, e depende da temperatura e do dopante, sendo Y2O3, Sc2O3, CaO e MgO os mais utilizados. A altas temperaturas, a maioria dos sistemas baseados em zircnia apresentam trs regies no diagrama de equilbrio de fases (i.e., de fases estveis) temperatura vs. composio. A baixas concentraes de dopante estabiliza-se a fase tetragonal, a concentraes intermedirias se encontra uma mistura das fases tetragonal e cbica, e a concentraes mais altas se retm a fase cbica [4]. temperatura ambiente, a fase estvel no a tetragonal, mas a monoclnica. Entretanto, a fase tetragonal pode ser retida em forma metaestvel temperatura ambiente em ps nanocristalinos e em cermicas de gro submicromtrico [5]. importante destacar que os mecanismos de reteno destas fases ainda no esto bem esclarecidos. Os materiais com concentraes intermedirias, que apresentam uma mistura das fases tetragonal e cbica, no so homogneos em composio, j que estas fases tm distintas concentraes de dopante. Entretanto, possvel sintetizar materiais homogneos em composio, que mantm esta propriedade em forma metaestvel. Yashima e colaboradores estudaram a estrutura cristalina de solues slidas homogneas em composio para diversos sistemas como ZrO2-Y2O3 [6,7], ZrO2-Er2O3 [7], ZrO2-Nd2O3 [7], ZrO2-Sm2O3 [7], ZrO2-Y2O3 [7] e ZrO2-CeO2 [8-10], as quais foram preparadas por fuso dos xidos em forno de arco seguida de resfriamento rpido ou por reao de estado slido. Em todos estes sistemas, os autores citados acima reportaram a existncia de trs formas da fase tetragonal, denominadas t, t e t, todas elas pertencentes ao grupo espacial P42/nmc. A forma t a que aparece como a fase tetragonal no diagrama de equilbrio e est restrita ao limite de solubilidade que se prediz neste diagrama. A forma t tem uma solubilidade maior, mas instvel e, no equilbrio, se transforma numa mistura das fases tetragonal t e cbica, como prediz o diagrama de equilbrio de fases. As formas t e t tm um quociente axial c/a > 1,

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mas em ambos os casos os parmetros de rede a e c no atingem diferenas maiores que 1,5%. Para concentraes do dopante ainda maiores foi encontrada uma terceira forma da fase tetragonal, chamada t, com c/a = 1, mas com os nions O2deslocados de suas posies ideais da fluorita (stios 8c do grupo espacial Fm3m) ao longo do eixo c. Nos sistemas ZrO2-Y2O3 e ZrO2-Sc2O3, os limites correspondentes s transies de fase t/t e t/cbica se encontram, aproximadamente, em composies de 9 %molar e 11 %molar, respectivamente [6,7]. No caso do sistema ZrO2-CeO2, o limite t/t ocorre para 60 %molar CeO2, enquanto que o limite t/cbica est entre 80 e 90 %molar CeO2 [10]. A partir destes resultados, vrios autores construram diversos diagramas de fases estveis e metaestveis para solues slidas homogneas em composio de materiais convencionais (ou seja, de gro micromtrico) [8,9,11].
2.3. OBJETIVOS DA COLABORAO CINSO (ARGENTINA) IFUSP (BRASIL) REFERENTE AO ESTUDO DAS PROPRIEDADES DE NANOESTRUTURAS

Nosso aporte ao estudo estrutural deste tipo de materiais de interesse para numerosas aplicaes inclui (i) a determinao das caractersticas cristalogrficas das fases retidas em forma de nanocristais e (ii) a anlise da influncia do tamanho de cristalito nos diagramas de fase. Desde o ano de 2004, membros do Laboratrio de Cristalografa do Instituto de Fsica da Universidade de So Paulo (IFUSP), Brasil, e do CINSO (Centro de Investigaciones en Slidos), CONICET-CITEFA, Argentina, colaboram no estudo da estrutura cristalina temperatura ambiente e a alta temperatura, ordem atmica local e transies de fases de solues slidas nanoestruturadas baseadas em ZrO2 [12-30]. Nossos estudos so realizados atravs de difrao de raios X para ps (XPD, X-ray Powder Diffraction), com radiao convencional de tubo e no LNLS, Campinas, Brasil, utilizando luz sncrotron, bem como mediante o uso de espectroscopia Raman no IQUSP e absoro de raios X (EXAFS, Extended X-ray Absorption Fine Structure). As medidas de EXAFS so tambm realizadas no LNLS. Desta maneira, estudamos a reteno de fases metaestveis t, t e t nestes nanomateriais, considerando especialmente sistemas de interesse em SOFCs, e a influncia do tamanho de cristalito na reteno destas fases. Os sistemas que investigamos nesta cooperao so solues slidas nanoestruturadas de ZrO2-CeO2, ZrO2-Y2O3, ZrO2-CaO e ZrO2-Sc2O3.
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Como mencionamos na seo anterior, os materiais de ZrO2-CeO2 so de interesse por suas excelentes propriedades catalticas para oxidao de hidrocarbonetos e so estudados para aplicao como anodos de SOFCs. Por outro lado, os cermicos de ZrO2-Y2O3, ZrO2-CaO e ZrO2-Sc2O3 tm excelentes propriedades eltricas devido alta condutividade inica, e por isso os estudamos para aplicaes como eletrlitos de SOFCs. Finalmente, no caso de ps nanocristalinos de zircnia pura, investigamos a reteno da fase tetragonal por efeito de tamanho de cristalito e analisamos a ordem atmica local na ausncia de dopantes.
2.4. USO DE TCNICAS EXPERIMENTAIS COM LUZ SNCROTRON NO LNLS

importante mencionar que muito difcil distinguir a fase tetragonal da fase cbica nos sistemas descritos nas sees anteriores a partir de dados de difrao de raios X obtidos em difratmetros convencionais de laboratrio. Isso acontece porque os parmetros de rede, a e c, so muito similares e a difrao de raios X pouco sensvel aos deslocamentos dos nions O2- devido ao seu baixo nmero de eltrons. Em especial, difcil identificar a forma t, que tem quociente axial c/a = 1 e, portanto, no apresenta o desdobramento de picos caracterstico da fase tetragonal, observados nos diagramas de difrao correspondentes s formas t e t, para as quais c/a > 1. Qualitativamente, a nica diferena entre as fases cbica e t (as duas com c/a = 1) a presena de alguns picos de difrao de raios X de muito baixa intensidade, que correspondem a reflexes de Bragg proibidas na estrutura fcc, tipo fluorita, da fase cbica. Estes picos esto relacionados, exclusivamente, com os deslocamentos dos nions O2- e, portanto, so muito difceis de serem detectados com um difratmetro convencional de laboratrio. Essa dificuldade se agrava quando o deslocamento do O2- pequeno como ocorre no caso dos materiais que apresentam a forma t da fase tetragonal e, mais ainda, em materiais nanoestruturados, que apresentam picos de difrao muito largos. O uso de luz sncrotron, que possui uma intensidade muito superior dos tubos de raios X convencionais, nos permite detectar as reflexes fracas mencionadas acima e medir com preciso suas intensidades, a partir das quais se pode determinar as posies dos nions O2- na cela unitria. Por outro lado, o uso de luz sncrotron resultou indispensvel para realizar medidas de absoro de raios X (EXAFS) devido sua alta intensidade e espectro de emisso contnuo.
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2.5. SOLUES SLIDAS NANOESTRUTURADAS DE ZIRCNIA-CRIA

Nos primeiros trabalhos desta cooperao realizamos um estudo cristalogrfico de ps nanocristalinos homogneos em composio de ZrO2-CeO2 sintetizados no CINSO pelo mtodo de gelificao-combusto [13,14,29]. Analisamos estes materiais por difrao de raios X com luz sncrotron, experincias que realizamos utilizando as linhas D10B-XPD e D12A-XRD1 do Laboratrio Nacional de Luz Sncrotron (LNLS, Brasil). Com o uso da luz sncrotron conseguimos distinguir as fases tetragonal e cbica, e determinar com preciso os parmetros de rede e as posies dos oxignios, realizando assim uma caracterizao completa da estrutura cristalogrfica dos nanomateriais analisados. Observamos as mesmas formas metaestveis da fase tetragonal determinadas por Yashima e colaboradores, sendo os limites em composio t/t e t/cbica similares, com algumas diferenas qualitativas de importncia j que no detectamos uma regio de composies bifsicas t+t, observadas por esses autores. Posteriormente, analisamos as propriedades catalticas destes materiais e as correlacionamos com sua estrutura cristalina. Encontramos que os ps nanoestruturados de ZrO2-90 %molar CeO2 de fase cbica so os materiais que tm melhores propriedades catalticas para a oxidao de metano [15]. Atualmente estamos estudando o desempenho destes materiais como anodo de SOFCs formando compostos com Ni, bem como desenvolvendo novos sistemas mesoporosos ordenados com alta rea superficial para aplicaes catalticas.
2.6. SOLUES SLIDAS NANOESTRUTURADAS DE ZIRCNIA-TRIA E ZIRCNIA-CLCIA

Realizamos o estudo de nanomateriais de ZrO2-Y2O3 e ZrO2-CaO com uma metodologia similar descrita na seo anterior e, novamente, encontramos resultados consistentes com os de Yashima e colaboradores [13,19, 22,29]. Os limites em composio t/t e t/cbica so similares aos informados por estes autores e no detectamos mudanas importantes em funo do tamanho de cristalito. Realizamos tambm um estudo detalhado da ordem atmica local nos sistemas ZrO2-Y2O3 e ZrO2-CaO utilizando a tcnica de EXAFS [19,22,29]. Encontramos que a ordem local no concorda com a ordem prevista pela estrutura cristalina da fase tetragonal, amplamente aceita na literatura. Os resultados indicam que existe uma desordem local que poderia ser associada a deslocamentos dos oxignios no apenas na direo do eixo-c, mas tambm

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nas direes dos eixos a e b. Estes deslocamentos no previstos se compensariam na mdia de longo alcance, o que explicaria os resultados observados por difrao de raios X. Este aporte compreenso da ordem atmica local destes materiais importante para entender as propriedades eltricas dos mesmos. Os detalhes destas propriedades formam parte da tese de doutorado de Ismael Fbregas [29].
2.7. SOLUES SLIDAS NANOESTRUTURADAS ZIRCNIA-ESCNDIA

Diferentemente dos sistemas anteriores, os nanomateriais de ZrO2-Sc2O3 apresentam variaes muito importantes em funo do tamanho de cristalito. Este sistema tem grande relevncia tecnolgica como eletrlito de SOFCs por sua alta condutividade inica a alta temperatura, em comparao com os descritos nas sees precedentes, mas a temperaturas inferiores a 550-600C ele apresenta vrias fases de estrutura rombodrica (, e ) de baixa condutividade. Realizamos nossas investigaes por difrao de raios X com luz sncrotron no LNLS, temperatura ambiente e a alta temperatura. A partir dos resultados obtidos, determinamos o diagrama de fases de solues slidas nanoestruturadas com um tamanho de cristalito de aproximadamente 25 nm [21], [23], [30]. Constatamos que o diagrama de fase obtido difere substancialmente do diagrama de equilbrio que determinado para um tamanho de gro micromtrico ou maior j que, reduzindo o tamanho de cristalito, possvel evitar as fases rombodricas de baixa condutividade inica. A Fig. 2.2 mostra uma comparao entre ambos os diagramas de fase. O diagrama de fase para o caso de cristais nanomtricos qualitativamente similar ao de outros sistemas baseados em zircnia; i.e., observa-se a presena das formas tetragonais t e t, e da fase cbica, sem fases rombodricas.

Fig. 2.2: Diagramas de fase do sistema ZrO2-Sc2O3. Esquerda: Diagrama de equilbrio para microcristais [31]. Direita: Diagramas de fase para nanocristais de 25 nm [23], [30].

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Para uma melhor compreenso da influncia do tamanho de cristalito na reteno de fases metaestveis, realizamos um estudo cristalogrfico detalhado de materiais com contedos de Sc2O3 entre 10 e 14% molar e tamanhos de cristalito entre 10 e 100 nm. Encontramos que existe um tamanho de cristalito crtico, de aproximadamente 35 nm, acima do qual aparecem as fases rombodricas de equilbrio [24,26,30]. Estas investigaes esto detalhadas na tese de doutorado de Paula Abdala [30], na qual se inclui tambm a possibilidade de estender estes estudos de ps nanocristalinos para cermicos densos com gros finos. Demonstramos tambm que possvel evitar a formao das fases rombodricas em cermicos densos de ZrO2-Sc2O3 atravs de um efeito combinado de tamanho de gro submicromtrico e tenses intergranulares, o que representa um resultado importante para as aplicaes tecnolgicas destes eletrlitos slidos. Finalmente, investigamos as propriedades eltricas destes materiais cujos resultados formam parte da tese de doutorado de Paula Abdala [30]. Confirmamos que, ao evitar as fases rombodricas, estes cermicos densos de gro fino possuem excelente condutividade inica em toda a faixa de temperaturas de interesse.
2.8. ZIRCNIA NANOESTRUTURADA

importante destacar o estudo que realizamos de ps nanocristalinos de zircnia pura. Neste caso, apesar de no se introduzir dopantes na estrutura, vrios autores demonstraram que possvel reter a fase tetragonal temperatura ambiente, tambm em forma metaestvel, em ps nanocristalinos de tamanho de cristalito inferior a 20 nm. Em vrios trabalhos prvios, tamanhos crticos entre 20 e 30 nm foram reportados. Outros autores afirmaram que tambm se pode reter a fase cbica temperatura ambiente para tamanhos de cristalito extremamente pequenos (<10 nm). Entretanto, nos trabalhos prvios, a fase cbica no foi claramente discriminada da fase tetragonal, j que a identificao de fases foi realizada por difrao de raios X com difratmetros convencionais de laboratrio e, como j se mencionou, muito difcil, nessas condies, distinguir ambas as fases, principalmente em materiais com tamanhos de cristalito to pequenos. Nossas investigaes, realizadas por difrao de raios X com fonte de luz sncrotron em uma configurao de alta intensidade para se obter uma boa estatstica de contagem de ftons, demonstraram que somente possvel reter a fase cbica em nanops de zircnia pura com tamanhos de cristalito

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extremamente pequenos, inferiores a 2,0 nm [12,17,27]. Para tamanhos de cristalito maiores, at 25-30 nm, demonstramos que se retm a fase tetragonal. Por outro lado, determinamos os parmetros cristalogrficos em funo do tamanho de cristalito, observando que tanto o quociente axial c/a como o deslocamento dos oxignios, com respeito s posies na fase cbica, decrescem com a diminuio do tamanho de cristalito [17]. Estas investigaes nos permitiram compreender mais claramente as caractersticas estruturais destes nanomateriais e os mecanismos de reteno da fase tetragonal na ausncia de dopantes. No caso dos nanops de zircnia pura de fase tetragonal, tambm estudamos a influncia do tamanho de cristalito na ordem atmica local destes materiais e tambm os deslocamentos dos oxignios na ausncia de dopantes [25,28]. Obtivemos resultados similares aos mencionados anteriormente para sistemas dopados, o que indica que os oxignios no apenas se posicionam em pontos da rede ao longo do eixo-c, mas tambm deslocam-se em outras direes, diferentemente do que se supunha em estudos cristalogrficos realizados por difrao de raios X convencional. Como mencionamos anteriormente, estas investigaes so importantes para uma melhor compreenso das propriedades dos nanomateriais baseados em ZrO2 de fase tetragonal, que tm numerosas aplicaes tecnolgicas. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS (*) Referncias com participantes deste projeto (CINSO-IFUSP), desde o incio da presente etapa de colaborao, em 2004. [1] NOWOTNY, J. Science of ceramic interfaces II. Amsterdam: Elsevier Science, 1994. [2] LEE, W. E.; RAINFORTH, W. M. Ceramic microstructures: property control by processing. London: Chapman & Hall, 1994. [3] GARVIE, R. C.; HANNINK, R. H. J.; PASCOE, R. T. Nature, n. 258, 703-770, 1975. [4] SCOTT, H.G. J. Mater. Sci. , n. 10, p. 1527-1535, 1975. Parei aqui [5] JUREZ , R. E. et al. Defect and Diffusion Forum, n. 177/178, p. 1-26, 1999. [6] YASHIMA, M. et al. Acta Cryst., n. B50, p. 663-672, 1994.
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[7] YASHIMA, M. et al. J. Phys. Chem. Solids, n. 57, p. 17-24, 1996. [8] YASHIMA, M. et al. J. Am. Ceram. Soc., n. 76, p. 2865-2868, 1993. [9] YASHIMA, M. et al. J. Am. Ceram. Soc., n. 77, p. 1869-1874, 1994. [10] YASHIMA, M. et al. Appl. Phys. Lett., n. 72, p. 182-184, 1998. [11] YASHIMA, M.; KAKIHANA, M.; YOSHIMURA, M. Solid State Ionics, n. 86/88, p. 1131-1149, 1996. [12] (*) LAMAS, D. G. et al. In: CONGRESO CONAMET-SAM, 2004. Actas Buenos Aires: [s.n.], 2004. p. 489-494. [13] (*) LAMAS, D. G. et al. In: CONGRESO CONAMET-SAM, 2004. Actas Buenos Aires: [s.n.], 2004. p. 775-780. [14] (*) LAMAS, D. G. et al. Journal of Applied Crystallography, n. 38, p. 867-873, 2005. [15] (*) LARRONDO, S. et al. Catalysis Today, n. 107/108, p. 53-29, 2005. [16] (*) FBREGAS, I. O. et al. Journal of Physics: Condensed Matter, n. 18, p. 7863-7881, 2006. [17] (*)LAMAS, D. G. et al. Scripta Materialia, n. 55, p. 553-556, 2006. [18] (*)CASANOVA, J. R. et al. Journal of Applied Crystallography, n. 40, p. s147-s152, 2007. [19] (*) FBREGAS, O. et al. Powder Diffraction, n. 23, p. S46-S55, 2008. [20] (*) ACUA, L. M. et al. Powder Diffraction, n. 23, p. S70-S74, 2008. [21] (*) ABDALA, P. M. et al. Powder Diffraction, n. 23, p. S87-S90, 2008. [22] (*) FBREGAS, I. O. et al. Journal of Applied Crystallography, n. 41, p. 680-689, 2008. [23] (*) ABDALA, P. M. et al. The Journal of Physical Chemistry C, n. 113, p. 18661-18666, 2009. [24] (*) ABDALA, P. M. et al. Physical Chemistry Chemical Physics, n. 12, p. 2822-2829, 2010. [25] (*) ACUA, L. M. et al. Journal of Applied Crystallography, n. 43, p. 227-236, 2010. [26] (*) ABDALA, P. M.et al. Journal of Alloys and Compounds, n. 495, p. 561-564, 2010.
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[27] (*) ROSSO, M. 2004. Tese (Bacharelado em Cs. Fsicas) - Facultad de Ciencias Exactas y Naturales - UBA, Buenos Aires. [28] (*) ACUA, L. M. 2005. Tese (Bacharelado em Cincias Fsicas) - Facultad de Ciencias Exactas y Naturales - UBA, Buenos Aires. [29] (*) FBREGAS, I. O. 2008. Tese (Doutorado em Cincias Qumicas) - Facultad de Ciencias Exactas y Naturales - UBA, Buenos Aires. [30] (*) ABDALA, P. M. 2010. Tese (Doutorado em Cincia e Tecnologia, Meno Materiais) - Instituto Sbato, Universidad Nacional de Gral. San Martn-CNEA, San Martn, Argentina. [31] RUH, R. et al. Journal of the American Ceramic Society, n. 60, p. 399403, 1977.

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3. APLICAES DOS MATERIAIS NANOESTRUTURADOS Das vrias aplicaes dos materiais estudados neste projeto conjunto, descreveremos apenas aquelas relacionadas a sensores de gases e a clulas a combustvel de xido slido de temperatura intermediria (IT-SOFCs).
3.1. APLICAES A SENSORES DE GASES CONSTRUDOS COM SEMICONDUTORES NANOESTRUTURADOS 3.1.1. Funcionamento dos sensores

Descreveremos o funcionamento de sensores construdos com xidos semicondutores, por exemplo, SnO2 ou ZnO, que detectam gases por variao da resistncia superficial. O semicondutor cermico reage previamente com o oxignio do ar formando adsorbatos de oxignio (O-, O2-) [1] que recobrem a superfcie do semicondutor e os contornos de gro. Estes adsorbatos reagem com o gs de interesse, por exemplo, monxido de carbono (CO(g)) temperatura de operao (Top). Tipicamente Top da ordem de 300-450 C se o sensor for construdo com material microcristalino. No caso de um xido metlico semicondutor tipo n, a formao dos adsorbatos cria uma regio de carga espacial, ou seja, uma camada cuja superfcie est empobrecida em eltrons, devido transferncia do eltron ao adsorbato: 1/2O2(g) + 2e-= 2O- (adsorb.). A profundidade da regio de carga espacial L funo das caractersticas do recobrimento superficial dos adsorbatos e da concentrao intrnseca de eltrons no volume. Em consequncia, a resistncia de um semicondutor tipo n alta, porque se formam barreiras de potencial conduo eletrnica na superfcie de cada gro e em cada contorno de gro [2]. Se o sensor se expe a um gs redutor (por ex. CO) Top o gs reage com o adsorbato segundo: CO +O- = CO2 + e-. Quando os adsorbatos se consomem em reaes subsequentes estabelecese um novo estado de equilbrio do recobrimento superficial, a barreira de potencial diminui e se produz uma diminuio da resistncia. A variao da resistncia um parmetro de medida do sensor, definida como: = n.e.L, onde n o nmero de cargas, e a carga das espcies mveis e L a variao da largura da regio de carga espacial. Por outro lado, a sensibilidade S definida como: S = Rar /Rar+gs, onde Rar a resistncia no ar e Rar+gs a resistncia em uma mistura de gases que contm o gs redutor. A reatividade dos adsorbatos de oxignio uma funo do tipo de gs redutor e da Top do sensor. No caso do uso destes materiais nos sensores semicondutores de tipo p, os portadores de carga so buracos e
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a resistncia em ar resulta mais baixa. O comportamento deste sensor aparece, ento, inverso ao do sensor construdo com um semicondutor de tipo n.
3.1.2. Construo dos sensores

Construmos tambm sensores de gases com SnO2 micro e nanocristalino. Observamos que a sensibilidade dos sensores que utilizam material nanocristalino resulta entre 30 e 37% mais alta que a de sensores construdos com material microcristalino convencional. A temperatura de operao Top diminui a 180-220C para os primeiros em comparao com a faixa usual para Top de 350-450C em sensores construdos com material microcristalino. Os xidos metlicos semicondutores podem ser usados em sensores puros ou dopados, tendo o material dopado maior seletividade para certos gases [3]. Desenvolvemos tambm sensores para detectar CO(g) [4], VOCs e hidrognio, que utilizam SnO2 nanocristalino. O sensor de SnO2 dopado com ctions trivalentes permitiu melhorar a resposta, j que a concentrao de portadores reduzida e, consequentemente, a profundidade L aumenta. O SnO2 foi sintetizado pelo mtodo de gelificao-combusto.

Fig. 3.1. Resposta de sensor com SnO2 puro.

Fig. 3.2. Sensibilidade em funo da temperatura

O uso de rotas de sntese similares utilizada para os outros sistemas permitiu o aumento do limite de solubilidade do dopante, em uma condio metaestvel, ao mesmo tempo em que se reteve a homogeneidade em composio dos materiais [5], [6]. A Fig. 3.1, mostra a resposta do SnO2 puro e dopado com Al (2 at% e 5 at%) em funo da Top(C) para 200 ppm CO em ar.

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Os sensores com SnO2 dopados com 2%Al (2%AlSnO2) mostraram melhor resposta (Sm >10) em comparao com os dispositivos construdos com SnO2 puro (Sm~8) em toda a faixa de temperatura. A diminuio da temperatura de operao Top do sensor pode ser atribuda a um deslocamento da temperatura caracterstica de formao dos adsorbatos O- por incorporao do Al na rede do SnO2. Os resultados obtidos indicam que o mtodo de gelificao-combusto aumenta a solubilidade do Al em SnO2, em comparao com o mtodo de co-precipitao e, ao mesmo tempo, contribui para reduzir o tamanho de cristalito. Como consequncia das investigaes realizadas, construmos sensores de filmes espessos com SnO2 (micro e nanocristalino) puro e dopado com In2O3 [7]. O sensor construdo com SnO2 nanocristalino dopado mostrou maior sensibilidade (35-37%) comparada de sensores montados com SnO2 microcristalino dopado. Observamos o mesmo efeito sobre a sensibilidade em outro sensor de filme espesso que detecta 5ppm de H2 em ar [8] construdo com SnO2 puro com tamanho de cristalito de 1-2 nm, sendo os ps nanocristalinos sintetizados por um mtodo original. A Fig. 3.2 mostra a sensibilidade do sensor de H2 em funo da temperatura de operao Top. A maior sensibilidade se observa para Top ~180200C. Para se obter uma Top menor neste sensor, comparada dos sensores comerciais (350-450C), o substrato convencional de AlSiMg com aquecedor e terminais sobre faces opostas foi substitudo por uma lmina (wafer) de Si recoberta por N4Si. Com tcnicas para preparao de MEMS (Micro-Electro-Mechanical Systems) desenvolvidas em CITEFA [9] construiu-se um sistema de comutao que mede, alternativamente, a Top e a resistividade (parmetro de medida do sensor).
3.1.3. Comentrios

Atualmente esto sendo estudadas a sntese e as propriedades de nanotubos de SnO2 e de diferentes nanomorfologias em ZnO (nanofitas e nanofios) para utilizao em sensores de gases. Esses dispositivos podero atingir uma sensibilidade ainda maior que a observada at o momento, dado que a absoro dos gases aumenta notavelmente com estas morfologias de maior densidade de superfcie exposta. Esses materiais so depositados sobre os substratos de Si nitretado mencionados anteriormente [9].

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3.2. MATERIAIS NANOESTRUTURADOS PARA CLULAS A COMBUSTVEL DE XIDO SLIDO DE TEMPERATURA INTERMEDIRIA (IT-SOFCS)

As clulas a combustvel so dispositivos eletroqumicos que convertem a energia qumica dos combustveis (H2, CH4, gs natural, biogs, etc.) em energia eltrica. Apresentam como vantagens sua alta eficincia de converso e baixa emisso de gases de efeito estufa. Dentro desta rea, as clulas de membrana trocadora de prtons (PEMFC, Proton-Exchange Membranebased Fuel Cells) e as de xido slido (SOFCs) mereceram maior ateno, tanto no que se refere investigao cientfica como a desenvolvimento tecnolgico. importante destacar que as PEMFCs se encontram atualmente disponveis no mercado, enquanto que as SOFCs ainda no entraram em etapa de pr-comercializao, razo pela qual, neste caso, necessrio realizar investigao cientfica e desenvolvimento tecnolgico adicionais. A principal razo pela qual existe um enorme interesse no desenvolvimento das SOFCs sua grande flexibilidade na escolha do combustvel: as clulas PEMFCs requerem H2 de alta pureza enquanto que as SOFCs podem operar com H2 no purificado e hidrocarbonetos (CH4, gs natural, biogs, etc.). Alm disso, as SOFCs apresentam outras vantagens importantes com respeito s PEMFCs: no usam catalisadores de metais preciosos, tm maior resistncia contaminao com compostos de enxofre (contaminao tpica em gs natural) e tm melhores propriedades mecnicas. A dificuldade que se tem com as SOFCs convencionais sua elevada temperatura de operao, o que exige o uso de materiais de interconexo muito caros. Tambm, podem ocorrer reaes qumicas ou interdifuso nas interfaces, rupturas por diferenas nos coeficientes de dilatao dos componentes, degradao por ciclagem trmica, etc. . Portanto, um passo fundamental para que as SOFCs ingressem na etapa de prcomercializao seria reduzir a temperatura de operao. Por isso necessrio desenvolver novos materiais para eletrlito, catodo e anodo de altas eficincias. As SOFCs de menor temperatura de operao so conhecidas como SOFCs de temperatura intermediria (IT-SOFCs). Basicamente, os processos que ocorrem nas SOFCs so a reduo de O2(g) a O2- no catodo, o transporte de ons O2- atravs do eletrlito slido e a reao destes ons com o combustvel no anodo (ver Fig. 3.3). Nesta cooperao nos concentramos no estudo de novas morfologias que permitam alcanar um melhor desempenho dos diversos materiais investigados. Em especial avaliamos as vantagens destes nanomateriais para seu uso
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Fig. 3.3: Esquema de uma clula a combustvel de xido slido construda com materiais convencionais para alta temperatura.

em dispositivos associados a tecnologias para gerao limpa e eficiente de energia. A utilizao de nanomateriais em SOFCs foi, at o presente, pouco explorada, provavelmente porque a alta temperatura de trabalho em que geralmente operam estas clulas, 900-1000C, provocaria um importante crescimento dos gros nos materiais que a compem. Entretanto, o uso de nanomateriais factvel em IT-SOFCs, que operam a 500-700C. Este novo conceito aqui proposto est sendo atualmente intensamente explorado em nossa cooperao.
3.2.1. Eletrlitos slidos nanoestruturados de alta condutividade

Investigaes recentes realizadas no CINSO demonstraram que os eletrlitos slidos nanoestruturados exibem um importante aumento de condutividade inica em comparao com materiais microcristalinos. Como exemplo, destacam-se os estudos sobre eletrlitos nanoestruturados de cria (CeO2) dopada [13-15] e cermicos de gros finos de ZrO2Sc2O3 [16,17], que mostraram a importncia do transporte paralelo por contorno de gros. Este resultado importante para aplicaes, uma vez que poder melhorar o desempenho do eletrlito e, portanto, da clula a combustvel. No caso dos cermicos de ZrO2-Sc2O3, estudamos as propriedades correspondentes a composies que apresentam as fases de alta condutividade inica tetragonal e/ou cbica, para evitar a presena das fases monoclnica e rombodrica, que tm propriedades eltricas muito pobres, como j foi mencionado em seo anterior.
3.2.2. Eletrodos (catodos o anodos) para IT-SOFCs baseados em condutores mistos nanoestruturados de alta rea especfica

Recentemente, investigadores do CINSO propuseram o estudo de catodos para IT-SOFCs baseados em condutores mistos nanoestruturados de alta rea especfica. Neste caso espera-se que as reaes de eletrodo sejam ainda mais eficientes, uma vez que a rea de reao maior. Para avaliar esta proposta, preparamos estruturas tubulares formadas por nanopartculas de cobaltitas de La e Sr (perovskitas com uma composio de La0.6Sr0.4CoO3) mediante sntese por molde plstico assistida com microondas, que foram

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utilizadas para construir uma nova arquitetura, altamente porosa, para catodos nanoestruturados de IT-SOFCs. Os resultados obtidos confirmaram o comportamento esperado: os catodos nanoestruturados mostraram um desempenho muito superior ao de catodos convencionais microscristalinos, apresentando uma resistncia muito baixa de polarizao [15], [18], [20]. Nossas ltimas investigaes permitiram demonstrar que, alm do aumento da rea de reao, nos condutores mistos nanoestruturados se produz um aumento da difusividade dos ons O2- com a reduo do tamanho de gro, fenmeno similar ao descrito anteriormente para os eletrlitos [20].
3.2.3. Reteno de fases metaestveis em nanomateriais cermicos baseados em ZrO2 para eletrlitos ou anodos de SOFCs

Como vimos no captulo 2, em solues slidas nanoestruturadas baseadas em ZrO2 pode-se reter fases metaestveis de alta condutividade inica para uso como eletrlito de SOFCs (sistemas ZrO2-Sc2O3, ZrO2-Y2O3 e ZrO2-CaO) ou de excelentes propriedades catalticas para oxidao de CH4 (sistema ZrO2-CeO2) que podem ser utilizadas no anodo destes dispositivos. As propriedades dos materiais mencionados foram investigadas nas teses de doutorado de Ismael Fbregas [21] e Paula Abdala [17].
3.2.4. Comentrios

Atualmente estamos avaliando os nanomateriais utilizados nas trs linhas de investigao descritas nas sees anteriores, em condies de operao como parte de dispositivos de prova de clulas a combustvel de pequenas dimenses e baixa potncia. Os materiais so ensaiados com distintos combustveis e condies de trabalho a fim de se determinar os parmetros timos de operao. Em todos os casos, os nanomateriais operam a temperaturas moderadas para evitar o crescimento das partculas. Desta maneira as nanoestruturas desenvolvidas para os distintos componentes das clulas a combustvel so preservadas. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS (*) Referncias com participantes deste projeto (CINSO-IFUSP), desde o incio da presente etapa de colaborao, em 2004. [1] YAMAZOE, N. et al. Surf. Sci., n. 86, p. 335, 1979. [2] SHIMIZU, Y.; EGSHIRA, M. MRS Bulletin, v. 24, n. 6, p. 18, 1999. [3] XU, C. et al. Sens. & Actuators, n. B 3, p. 147, 1991.
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[4] (*) CABEZAS, M. et al. Solicitao de Patente da R.A. 2010. (em andamento). [5] LAMAS, D. G. ; WALSE DE RECA, N. E. J. Mat. Sci., n. 35, p. 55635567, 2000. [6] LAMAS, D. G. et al. Mat. Chem., n. 13, p. 904-910, 2003. [7] (*) BIANCHETTI, M. F. et al. Solicitao de Patente da R.A. 2010. (em andamento). [8] (*) BIANCHETTI, M. F.; WALSE DE RECA, N. E. Application for A.R. Patentes de Mtodo de Sntese (MNS) e Construo de Sensor de H2. 2010. (solicitaes em andamento). [9] (*) ALANIZ, L. T.; ARRIETA, C. L.; BIANCHETTI, M. F.; GILLARI, C. A.; GIMNEZ, J. F.; LACOMI, H. A.; VALERIO, F.; WALSE DE RECA, N. E. Patente de Inveno de R.A: Ner. P- 070105987. Concedida em: 28 dez. 2007. [10] NOWOTNY, J. Science of Ceramic Interfaces II. Amsterdam: Elsevier Science, 1994. [11] LEE, W. E.; RAINFORTH, W. M. Ceramic Microstructures: property control by processing. London: Chapman & Hall, 1994. [12] GARVIE, R. C.; HANNINK, R. H. J.; PASCOE, R. T. Nature, n. 258, p. 703-704, 1975. [13] (*) BELLINO, M.G.; LAMAS, D. G.; WALSE DE RECA, N. E. Advanced Functional Materials, n. 16, p. 107-113, 2006. [14] (*) BELLINO, M.G.; LAMAS, D. G.; WALSE DE RECA, N. E. Advanced Materials, n. 18, p. 3005-3009, 2006. [15] (*) BELLINO, M.G. 2007. Tese (Doutorado em Cs. Fsicas) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales - UBA, Buenos Aires. [16] ABDALA, P.M.; CUSTO, G. S.; LAMAS, D.G. Journal of Power Sources, n. 195, 3402-3406, 2010. [17] (*) ABDALA, P.M. 2010. Tese (Doutorado em Cincia e Tecnologia, Meno Materiais) - Instituto Sbato, Universidad Nacional de Gral. San Martn-CNEA, San Martn, Argentina. [18] (*) BELLINO, M. G. et al. Journal of the American Chemical Society, n. 129, p. 3066-3067, 2007.
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[19] (*) SACANELL, J. et al. Physica B, n. 398, p. 341-343, 2007. [20] (*) SACANELL, J. et al. Journal of Power Sources, n. 195, p. 1786-1792, 2010. [21] (*) FBREGAS, I. O. 2008. Tese (Doutorado em Cs. Qumicas) - Facultad de Ciencias Exactas y Naturales - UBA, Buenos Aires. 4. CONSIDERAES FINAIS Relatamos neste trabalho as pesquisas realizadas desde 2004 no mbito de uma estreita cooperao internacional CINSO (Argentina)-IFUSP (Brasil), visando a obteno de novos materiais nanoestruturados com propriedades no usuais e adequados para sua utilizao em dispositivos sensores e ITSOFCs. Ao longo do trabalho todas as etapas de pesquisa cientfica e de desenvolvimento tecnolgico foram percorridas: (i) partimos da preparao de nanomateriais mediante novos processos de sntese, (ii) estudamos os mesmos utilizando modernos mtodos experimentais, (iii) elaboramos modelos estruturais que elucidaram vrias questes em aberto na literatura cientfica, e finalmente (iv) testamos com sucesso esses novos materiais desenvolvidos em vrios dispositivos-modelos. O trabalho realizado deu origem a um elevado nmero de artigos cientficos publicados em revistas indexadas de circulao internacional, e a vrias patentes e teses de doutorado, todos eles mencionados nas referncias dos captulos 1, 2 e 3. As concluses desta pesquisa nos permitiro no futuro (i) construir novos dispositivos com desempenho otimizado baseados no uso de novos nanomateriais, e (ii) desenvolver novos temas de pesquisa, que j comeamos a explorar, tal como a sntese de materiais porosos nanoestruturados, a base de zircnia, de alta rea superficial. Diversas agncias de fomento nos forneceram generosos apoios financeiros atravs dos acordos de cooperao CAPES-SECyT (2003-2004), CNPq-CONICET (2005-2006), CAPES-MinCyT (2007-2008), Centro Latinoamericano de Fsica (2006, 2008, 2009 e 2010) e Programa PROSUL do CNPq (2006-2008 e 2009-2011). Agradecemos ao Laboratrio Nacional de Luz Sncrotron (LNLS), Campinas, Brasil, por haver permitido o uso das linhas de luz XPD, XAFS e SAXS durante todo o desenvolvimento das investigaes descritas neste trabalho.
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Categoria Iniciao Cientfica

Meno Honrosa
MODIFICACIN DE BENTONITA PARA LA OBTENCIN DE NANOARCILLAS, Y SU UTILIZACIN EN UN POLMERO BIODEGRADABLE SINTETIZADO A PARTIR DEL CIDO L(+)LCTICO POLICONDENSADO
Autor: Brian Samir Gins Bejarano, 18 anos, aluno do 2 curso do Colgio Iberoamericano Professora-Orientadora: Fanny Elizabeth Florentn Ramos de Gonzlez, 43 anos Pas: Paraguai

MODIFICACIN DE BENTONITA PARA LA OBTENCIN DE NANOARCILLAS, Y SU UTILIZACIN EN UN POLMERO BIODEGRADABLE SINTETIZADO A PARTIR DEL CIDO L(+)LCTICO POLICONDENSADO
Brian Gins Bejarano

RESUMEN En la investigacin se ha diseado un mecanismo para la modificacin de la bentonita, que es una arcilla natural compuesta mayoritariamente por montmorillonita, para su aprovechamiento como nanoarcilla til como refuerzo en la matriz polimrica del cido polilctico, que es obtenido por medio de una policondensacin y catalizacin con zinc metlico de alta pureza del cido L(+)Lctico, que es sintetizado en la fermentacin natural de la fcula de la mandioca. El proceso consiste en la modificacin de la bentonita sdica en una solucin de agua desmineralizada y alcohol etlico, utilizando un compuesto de amonio cuaternario como catalizador de transferencia de fase para aumentar la solubilidad de los compuestos en solventes orgnicos, con el objeto de facilitar el uso de las nanoarcillas en matrices polimricas. El intercambio de cationes inorgnicos por iones de amonio orgnicos permite al filosilicato hidroflico que sea mayormente organoflico, y consecuentemente, ms compatible con el cido polilctico, que es un polmero orgnico. El cido polilctico es biodegradable, termoplstico y un polister natural. En la investigacin es realizada una caracterizacin mecnica y nuclear, con lo que se comprueban los beneficios directos de utilizar las nanoarcillas, presentando un mejoramiento de la resistencia del 25% del cido polilctico nanocompuesto, con lo que se optimiza su capacidad de aplicacin como sustituyente de los plsticos derivados del petrleo.

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La nanoarcilla presenta un campo de aplicacin muy extenso, y es una iniciativa conveniente para el desarrollo de nanocompuestos que optimicen las caractersticas de resistencia, absorcin de humedad y capacidad ignfuga de los polmeros biodegradables. INTRODUCCIN Las nanoarcillas son nanopartculas de silicatos, obtenidas a partir del procesamiento de las organoarcillas que son consideradas como nanomateriales naturales, pero que precisan una modificacin empleando un surfactante de compuesto de amonio cuaternario, para alcanzar una adecuada integracin con matrices polimricas, para lo que se presenta la necesidad de efectuar un intercambio de cationes inorgnicos por iones de amonio orgnicos, que permita que el filosilicato hidroflico sea mayormente organoflico, y consecuentemente ms compatible con el polmero biodegradable. En la presente investigacin se efecta una metodologa para la modificacin de la bentonita sdica, que en su composicin estructural posee una cantidad considerable de montmorillonita, que es un hidroxisilicato de magnesio y aluminio, que presenta las caractersticas elementales para su empleo como un nanorefuerzo. El cido L-(+)-lctico es el obtenido por medio de la fermentacin del almidn, que consiste en una biotransformacin llevada a cabo por bacterias naturales. Dicho cido es posteriormente policondensado, y catalizado con cinc metlico de alta pureza, para producir el cido polilctico, que es un polmero biodegradable, termoplstico, y polister aliftico, utilizable en la realizacin de distintos productos de uso masivo, tales como las bolsas de plstico, los paquetes, etc. La abundancia de la bentonita y fcula de mandioca en pases sudamericanos, como Argentina, Brasil y Chile, evidencian la existencia de una materia aprovechable en el escenario regional, para el mejoramiento de materiales polimricos biodegradables nanocompuestos. OBJETIVO Desarrollar nanoarcillas, modificando organoarcillas de la bentonita sdica natural, con la utilizacin de un surfactante de amonio cuaternario, para su aprovechamiento como nanorefuerzo del polmero biodegradable cido polilctico.

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JUSTIFICACIN En la actualidad se presenta el desafo de disminuir la contaminacin ambiental causada por los productos derivados del petrleo, que es el principal recurso para la realizacin de materiales polimricos de alto consumo en la regin, los cuales terminan constituyendo distintos detrimentos a la naturaleza, ya que no son sustancias que puedan descomponerse fcilmente en elementos qumicos naturales por la sola accin de agentes biolgicos, sino que permanecen en el ambiente contaminando constantemente. Ante dicha problemtica surgen los polmeros biodegradables como opciones efectivas, aunque sus caractersticas y propiedades bsicas, en la mayora de los productos, no son las ms adecuadas, por lo que es necesario plantear la utilizacin de la nanotecnologa para mejorar (en sus caractersticas mecnicas, fiscas, y qumicas) dichos polmeros naturales, y de esa forma contribuir a disminuir el progreso del cambio climtico en el mundo, desde Sudamrica. IMPORTANCIA DEL ESTUDIO NANOTECNOLGICO EN SUDAMRICA La nanotecnologa posee un maysculo impacto en los procesos industriales de los pases, y por consecuente, en el desarrollo econmico y social, ya que permite la manipulacin de la materia a nano escala, lo que a la vez es provechoso para mejorar los productos y los procesos de fabricacin. As como permite la implementacin de nuevos mecanismos en la medicina, en la disciplina que se denomina nanomedicina. El desarrollo de nanocompuestos polimricos biodegradables es una opcin hacedera para la fabricacin de envases y bolsas que son bastante utilizadas en la vida cotidiana. Las empresas tradicionales pueden obtener un beneficio directo de la nanotecnologa para mejorar su competitividad en los sectores tradicionales, como el textil, el de construccin, el de industria qumica, etc., pues facilita la optimizacin de los procesos productivos. En el Mercosur es necesario promover la creacin de Programas de Acceso a la nanotecnologa, que ayude a las empresas a introducirse a las posibilidades que representa la nanomanipulacin.

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DESCRIPCIN DE MATERIALES Bentonita La bentonita posee una importante implicancia industrial a causa de sus propiedades fsico-qumicas, las cuales responden a distintas propiedades que son tenidas en cuenta en la seleccin de la bentonita adecuada, y dichas caractersticas son: El tamao de sus partculas (inferiores a 2 nm), Su morfologa laminar, Las sustituciones isomrficas, que propician la presencia de carga en las lminas con cationes dbilmente ligados en el espacio interlaminar. La bentonita empleada est constituida principalmente por montmorillonita, la cual est compuesta por capas estratificadas. El anlisis qumico de la bentonita empleado en la presente investigacin posee la siguiente caracterizacin qumica: Qumico SiO2 Al2O3 Fe2O3 Na2O CaO MgO Porcentaje 57 17,06 5,20 1,77 1,02 0,96

Compuesto de amonio cuaternario

El compuesto de amonio cuaternario consiste en una mezcla de cloruros de alquil-dimetil-bencil-amonio de frmula general:

Grfico 1: Frmula general del compuesto empleado para la modificacin de la organoarcilla

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El largo radical alqulico comprende los miembros pares de 12 hasta 18 tomos de carbono. La modificacin del espacio intercapas de las organoarcillas consiste en el intercambio catinico con iones de compuestos de amonio cuaternarios que contienen alquil, pridil, fenil y bencil. Los cationes cuaternarios de amonio son iones poliatmicos, cargados positivamente, de la estructura NR4 +, y se encuentran constantemente cargados, independientemente del pH.
cido lctico

El cido lctico, tambin conocido por su nomenclatura tcnica como cido 2-hidroxi-propanoico o cido -hidroxi-propanoico, es un compuesto qumico que interviene en diversos procesos bioqumicos. Es un cido carboxlico, con un grupo hidroxilo en el carbono adyacente al grupo carboxilo, lo que lo convierte en un cido -hidroxlico (AHA) de frmula H3CCH(OH)-COOH (C3H6O3). El cido lctico es quiral, por lo que se pueden encontrar dos enantimeros (ismeros pticos). Uno es el dextrgiro cido D-(-)-lctico o d-cido lctico (en este caso, el cido (R)-lctico]]; el otro es el levgiro cido L-(+)-lctico o l-cido lctico (en este caso, cido (S)-lctico). Para esta investigacin es utilizado el cido L-(+)-lctico, que es el obtenido Grfico 2: Frmula del cido lctico por medio de la fermentacin del almidn. La fermentacin del cido lctico es llevada a cabo por bacterias naturales, cuya actividad se desarrolla en ausencia de oxgeno -anaerobiosis-, y consiste en la transformacin de los azcares presentes en la fcula de mandioca en cido lctico. La fcula1 de la mandioca es empleada Grfico 3: Representacin del como sustrato en el proceso de fermenta- cido lctico cin para la obtencin del cido lctico,
1. El almidn es un polisacrido de reserva alimenticia predominante en las plantas, constituido por amilosa y amilopectina.

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teniendo en cuenta la amplia disponibilidad del mismo en el escenario regional. La cepa utilizada para la fermentacin del cido lctico es proveniente del estado natural de la fcula de la mandioca y del agua. La biotransformacin consiste en la utilizacin de un birreactor horizontal, que procesa el almidn de mandioca, estando en el medio presente (NH4)2SO4 como fuente de nitrgeno y CaCO3 como regulador de pH para ajustar el pH inicial a 6. Para la extraccin del cido de la materia slida biotransformada se utiliza la tcnica de centrifugacin. Las condiciones de fermentacin son de 40C durante 36 h. de forma discontinua, con lo que se produce de 4,72 a 10,05 g l-1, y cuyo mtodo descripto especficamente se encuentra en el trabajo Direct fermentative production of lactic acid on cassava and other starch substrates, de W. Xiaodong.
cido polilctico

El cido lctico o PLA es un polmero, biodegradable, termoplstico, y polister aliftico procedente de la policondensacin del cido lctico en presencia de un catalizador. El PLA tiene una cristalinidad del orden del 37%, una temperatura de transicin vtrea entre 60-65 C, una temperatura de fusin entre 173-178 C, y un mdulo de elasticidad entre 2.7-16 GPa. El cido polilctico se puede procesar como la mayora de los termoplsticos. El PLA se utiliza actualmente en una serie de aplicaciones biomdicas, as como se lo utiliza como un bioplstico bastante til para el envasado de alimentos, la realizacin de vajillas desechables, bolsas de abono, en forma de fibras y productos textiles. Adems posee bastante potencial de uso en tapicera, Grfico 4: Unidad estructural del cido polilctico toldos y productos desechables. El PLAS es una alternativa sostenible a los productos derivados de petroqumicos, ya que resulta de la fermentacin de productos agrcolas, y se degrada sencillamente en agua y xido de carbono. METODOLOGA Y MARCO EXPERIMENTAL Obtencin de la arcilla Bentonita La bentonita sdica fue obtenida en grado comercial, considerando el procesamiento previo de purificacin del mineral. El producto es procedente de Argentina, y posee una superficie especfica2 de 250 m2/g, y una capaci110

dad de intercambio catinico de 180 meq/100 g, lo que evidencia sus condiciones para ser empleada en el desarrollo de las nanoarcillas modificadas. Una vez adquirida la bentonita, es almacenada en un receptculo hermtico para evitar el contacto con la humedad, conociendo su alta capacidad de absorcin de agua.
Modificacin de las organoarcillas

El mecanismo para la modificacin de las organoarcillas se encuentra basado en dos investigaciones cientficas de Lee J. Y. y Nigam Vineeta, consistente en el intercambio catinico. La frmula ha sido adaptada a las necesidades fsico-qumicas de la bentonita, y ha sido optimizada a los efectos de disminuir los costos de produccin, haciendo ms accesible su futura aplicacin industrial. El procedimiento expresado es el resultado de la optimizacin realizada en el contexto de la presente investigacin. El procedimiento consiste en la preparacin de 500 ml de una solucin de 80% agua y 20% alcohol etlico en un vaso de precipitados, lo cual es posteriormente calentado con un mechero Bunsen, hasta alcanzar una temperatura de 60 C, lo que es monitoreado con un termmetro. Una vez que la solucin se encuentra preparada, es agregado 20 g de bentonita sdica y procesada en un agitador magntico a 250 rpm por 1 hora y media. Paralelamente es preparada en un vaso de precipitados una solucin de 200 ml de agua desmineralizada y 15 gramos del Cloruro de Benzalconio, agitados manualmente hasta lograr una adecuada homogenizacin. Una vez que termina el procesamiento de la bentonita, el resultante es mezclado con la solucin de cloruro de Benzalconio manualmente, y es luego introducido a un agitador magntico por 8 horas. Para eliminar el agua sobrenadante y lavar las muestras, se prepara una solucin de 100 ml de agua desmineralizada y 100 ml de alcohol etlico que es agregado a la solucin de bentonita, que luego es centrifugada a 2000 rpm durante 10 minutos. La solucin hmeda resultante es secada en un horno a 180 C durante 5 minutos, buscando solamente la evaporacin de la materia lquida, evitando el contacto de las organoarcillas con temperaturas muy elevadas por mucho tiempo. Las nanoarcillas modificadas son despus dejadas en reposo por 48 horas en un recipiente hermticamente cerrado.
2. La superficie especfica es el rea de la superficie externa sumado el rea de la superficie interna de las partculas que constituyen la arcilla.

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Despus las nanoarcillas modificadas son introducidas en un mortero para triturarlas hasta lograr unos finos polvos. Dicho procedimiento es realizado para facilitar la disolucin de las organoarcillas en las soluciones de cido polilctico, ya que su disposicin final en la matriz polimrica no est subordinada al tamao de sus partculas resultante del pulverizado, sino que a su capacidad de integrase al polmero, lo que depende de la estructura natural de las organoarcillas y la modificacin con el cloruro de Benzalconio.
Produccin biotecnolgica del cido polilctico

Mediante policondensacin con un catalizador de cinc metlico es obtenido el cido polilctico, empleando el cido lctico. Se emplean 500 ml de cido L-lctico, producido a partir del almidn de la mandioca, dentro de un Erlenmeyer de 1 l. Como catalizador de la policondensacin se utiliza 15 gramos de zinc metlico puro, que es un compuesto organometlico. Primeramente se trata de eliminar el agua de la solucin mediante la condensacin directa del cido lctico que es calentado gradualmente (15 C por minuto) hasta llegar a los 180C, disponiendo de un mechero Bunsen para el efecto. El vapor generado es condensado para posteriores verificaciones, as como para evitar la excesiva emisin de vapores. Al llegar a la temperatura de 180C, es agregado el zinc metlico, el cual es mezclado hasta lograr su total dispersin, y despus se agregan los 20 g de la nanoarcilla modificada disuelta en solvente de alcohol etlico, para lo que se utiliza el agitador magntico por 2 minutos. Una vez agregado el catalizador, la solucin es nuevamente expuesta al calor del mechero de bunsen durante 20 minutos a la temperatura citada, y posteriormente es reducida a 60 C por un total de 8 horas. Al culminar la policondensacin, la solucin es retirada del fuego, y es almacenada en un mdulo de metal para su enfriamiento natural por 10 horas, a temperatura ambiente, y presin atmosfrica normal. El lquido resultante de la condensacin es guardado en un recipiente hermtico.
Desarrollo del nanocompuesto Mezcla de polmero con nanoarcilla

Se utilizan 15 g de nanoarcilla modificada y 200 g del polmero cido polilctico.

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La nanoarcilla es disuelta con disolvente orgnico, utilizando en ste caso 5 ml de alcohol etlico, que es mezclado manualmente con la nanoarcilla hasta alcanzar una sustancia de aspecto gelatinoso, que es verificado por microscopio para verificar que no se encuentren granos de tamaos considerables. Se funde el cido polilctico, introduciendo la cantidad de 200 g en un Erlenmeyer de 1 l, que es luego sometido al calor del mechero Bunsen, a una temperatura de 120 C constantemente, hasta lograr la fundicin homognea del mismo. Posteriormente es agregada, de forma paulatina, la nanoarcilla disuelta a la solucin de cido polilctico fundido, mezclando manualmente por 5 minutos. Despus, el resultante, es procesado con una extrusora de doble husillo. El polmero nanoreforzado es materializado con la extrusora en forma de cubos pequeos, que son mantenidos sobre una superficie metlica por 5 horas para permitir la estabilidad del polmero. El tiempo de residencia ha sido calculado entre 3 y 5 minutos, siendo el perfil de temperatura 120 C, permitiendo aumentar a los efectos de observar mayores resultados, pudiendo llegar hasta los 195 C, y la velocidad de giro de los husillos de 80 rpm. El material extruido es luego inyectado utilizando una inyectora con capacidad de cierre de 90 T, en un molde especial. Determinadas probetas son tratadas trmicamente para aumentar los resultados. Segn Kawai, en la investigacin Crystallization and melting behavior of poly (L-lactic acid), la velocidad de crecimiento de las esferulitas en el PLA demuestra dos mximos en aproximadamente 100C y 125C, por lo que para obtener un grado mayor de cristalinidad, el proceso es llevado a cabo a 120 C.
Anlisis de Fluorescencia de rayos X dispersiva en energa (FRXDE)

La espectroscopia de FRXDE es ampliamente usada en anlisis cualitativos y cuantitativos de muestras ambientales, geolgicas, biolgicas, industriales, etc. La FRXDE es empleada como un anlisis qumico elemental, tanto cualitativo como cuantitativo, de los elementos comprendidos entre el Potasio al Itrio (Lneas K) y del bario al uranio (Lneas L). Se prepara una muestra de 10 g de nanoarcilla, que es enviada a la Universidad Nacional, a la Comisin Nacional de Energa Atmica, para la realizacin del experimento.

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Resistencia mecnica

Se mide la resistencia mecnica del cido polilctico Nanocompuesto con nanoarcilla, entendiendo a resistencia como el elemento que define la capacidad para resistir esfuerzos y fuerzas aplicadas al PLA sin que llegue a romperse. Se preparan probetas siguiendo la norma ISO de nmero 527/1997, y se realiza la experimentacin utilizando una mquina de ensayos universal, la cual posee una clula de carga de 25kN. Las condiciones del ensayo es la velocidad de movimiento de mordazas de 10mm/min, presin atmosfrica normal y temperatura ambiente. ANLISIS DE RESULTADOS Obtencin de la arcilla Bentonita. La arcilla conseguida presenta los caracteres especficos que son precisados para el trabajo, ya que presenta unos polvos bastantes reducidos, segn se ha observado por medio del microscopio. El principal filosilicato presente en la nanoarcilla es la montmorillonita, que es un hidroxisilicato de magnesio y aluminio, y de frmula qumica (Al1,67Mg0,33)[(OH)2Si4O10] Na0,33(H2O)n. Modificacin de las organoarcillas La modificacin de las organoarcillas con la sal de amonio cuaternario produce una nanoarcilla. Las organoarcillas son nanoarcillas naturales por su condicin estructural, aunque la modificacin es un proceso importante para mejorar los resultados en la interaccin nanoarcilla-cido polilctico. Los silicatos intercalados o estratificados, son los nanoelementos inorgnicos empleados para la preparacin de los nanocompuestos de arcilla, ya que su estructura cristalina consiste en dos capas bimensionales, en la cual una lmina octadrica central se encuentra unida por los extremos a dos tetraedro externos de slice, de forma que los iones oxigeno tambin pertenecen a las lminas del tetraedro. El espesor de la capa es de aproximadamente 1nm, y las dimensiones laterales de dichas capas varan desde 30nm a varias micras. Las capas se organizan formando apilamientos con un espaciado regular entre ellas conocido como intercapas o galeras como es representado en el siguiente grfico:

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Grfico 5: Estructura de los filosilicatos

El amonio cuaternario es usado como catalizador de transferencia de fase para aumentar la solubilidad de los compuestos en solventes orgnicos, facilitando el uso de las nanoarcillas en matrices polimricas. El amonio cuaternario empleado para la modificacin de las organoarcillas naturales es el cloruro de Benzalconio. Es sabido que los cationes de metal alcalino presentes en la estructura de la bentonita se sustituyen fcilmente por cationes orgnicos de amonio, funcionalizando la superficie del aluminosilicato. El intercambio de cationes inorgnicos por iones de amonio orgnicos permite al filosilicato hidroflico que sea mayormente organoflico, y consecuentemente, ms compatible con el cido polilctico, que es un polmero orgnico. Aunque tambin tiene un efecto en el aumento de la separacin entre lminas, facilitando de ese modo el ingreso del polmero. Para el desarrollo de las nanoarcillas es sumamente importante la capacidad de intercambio catinico (CIC), que es una propiedad que hace referencia a la capacidad de cambiar los iones fijados en la superficie exterior de la arcilla o en los espacios interlaminares. La CIC se define como la suma de todos los cationes de cambio que un mineral puede absorber, y es equivalente a la medida del total de cargas negativas del mineral. La bentonita es una nanoarcilla natural, teniendo en cuenta su composicin estructural, aunque sus caractersticas hidroflicas no permiten una inte115

raccin adecuada con el polmero, adems de que las lminas de arcilla se atraen por las fuerzas electrostticas de los cationes, por lo que para obtener una dispersin de silicatos en el cido lctico, es sumamente necesaria la utilizacin de agentes de acoplamiento, que son fundamentalmente molculas establecidas por una funcin hidroflica y otra organoflica, lo cual es logrado con una reaccin de intercambio con surfactantes catinicos, empleando en esta investigacin el cloruro de Benzalconio.
Produccin biotecnolgica del cido polilctico

El cido lctico, al ser pilicondensado y catalizado con el zinc metlico de alta pureza, produce el cido polilctico. En el grfico 6 puede observarse el proceso de transformacin del cido lctico a cido polilctico, que ya es un polmero.
Desarrollo del nanocompuesto Mezcla de polmero con nanoarcilla

Grfico 6: De dmero cclico del cido lctico a cido polilctico

La intercalacin del polmero y la nanoarcillas por mezclado fsico es realizada con la matriz polimrica en estado fundido, con lo que se logra que las superficies de las lminas sean compatibles con el cido polilctico, ya que el polmero puede ingresar dentro del espacio entre las lminas y constituir un nanocompuesto exfoliado o intercalado. Lo interesante de este mtodo es que demuestra la facilidad de utilizar la nanoarcilla en distintas formulaciones de polmeros, ya que no es necesaria su adicin en el proceso de constitucin de los monmeros, sino que es accesible fundir el cido polilctico, y agregar despus la nanoarcilla, que se encuentra disuelta con un disolvente de alcohol etlico. La utilizacin del disolvente con la nanoarcilla modificada genera una sustancia gelatinosa, que es ms sencilla de integrar al polmero. La integracin de la nanoarcilla con el polmero es ilustrada en el grfico 7. Es posible obtener tres tipos de compuestos utilizando el cido polilctico
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y la arcilla cuando se asocian. El resultante depende de la miscibilidad de los componentes, de tanto la arcilla, la matriz polimrica y el catin orgnico.

Grfico 7: Proceso de intercalacin

Si el polmero no se intercala entre las placas de la nanoarcilla, se obtiene un compuesto de dos fases, como lo ilustra la siguiente imagen:

Adems existen otros dos tipos de nanocompuestos. Pocas cadenas del polmero son intercaladas entre las lminas de la arcilla lo que genera una morfologa ordenada, alternando cadenas de cido polilctico y lminas inorgnicas, tal como se expresa en la subsecuente ilustracin:

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Las lminas que son total y uniformemente dispersadas en la matriz polimrica, poseen una estructura exfoliada, como lo indica esta imagen: La extrusin es un procedimiento bastante empleado para la formacin de materiales plsticos, ya que asegura la plastificacin del material, y el mezclado del polmero con la nanoarcilla. La utilizacin de una extrusora de doble husillo permite elevar el nivel de cizalladura que mejora la intercalacin del polmero entre las placas de arcilla. Al culminar el proceso, el cido polilctico se presenta en forma de grnulos, que se enfran naturalmente, y despus se almacenan.
Anlisis de Fluorescencia de rayos X dispersiva en energa (FRXDE)

El anlisis de fluorescencia de rayos X dispersiva en energa demuestra la existencia de los elementos comunes de la montmorillonita, tales como Na, Ca, Al, Mg, Si, entre otros. El anlisis es de carcter cualitativo, por lo que se trata de una caracterizacin primaria, a nivel nuclear.
Resistencia mecnica

Los ensayos a nivel de traccin han verificado las propiedades mecnicas bsicas del polmero nanocompuesto con relacin a un polmero sin agregados. Las probetas de cido polilctico con adicin de organoarcillas evidenciaron que tienen una resistencia mayor al 25% (en promedio general) con respecto al cido polilctico sin nanoarcillas. Se obtienen nanocompuestos de estructura mixta, que se enmarcan en las regulaciones internacionales, por lo que se verifica que las interacciones entre el polmero - in modificador y superficie de arcilla-in modificador son positivas, y estn en el rango necesario para considerar a las nanoarcillas como opciones para las matrices polimricas, otorgando mayor resistencia a la traccin. Segn la bibliografa, adems las nanoarcillas aumentan la resistencia a la humedad de los materiales polimricos, as como transfieren un determinado porcentaje de capacidad ignfuga, sin comprometer la termoplasticidad propia de los mismos.

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APLICACIN INDUSTRIAL
Perspectivas de industrializacin en el Mercosur

Los procesos involucrados en la realizacin de la organoarcilla son bastante simples, y han sido optimizados para su futura industrializacin, por lo que se ha buscado con esta investigacin la utilizacin de materias primas existentes en la regin. La bentonita se encuentra en bastantes pases sudamericanos, entre los que resaltan Argentina, Chile y Brasil, con lo que se dibuja un buen horizonte de aplicacin directa de los mecanismos expresados para la modificacin de la organoarcilla. El cido lctico, que es un derivado de la fermentacin de recursos como la fcula de la mandioca, posee distintas formas de polimerizacin, en esta investigacin se ha empleado la policondensacin considerando su accesibilidad, aunque a nivel industrial tambin se pueden aplicar otros mtodos ms productivos. Es posible industrializar la realizacin del polmero biodegradable nanocompuesto, o solamente la modificacin de la bentonita para su transformacin en nanoarcilla para su empleo en otras matrices polimricas. Impacto social y ambiental El polmero biodegradable nanocompuesto es un material que puede sustituir a otros derivados del petrleo, los cuales causan bastantes detrimentos al medio ambiente, y ante la necesidad de plantear acciones estratgicas en beneficio a frenar el cambio climtico, representando la opcin del cido polilctico nanocompuesto con 7,5% de nanoarcilla una contribucin relevante, pues est constituido por materia prima natural, abundante en pases del Mercosur, y regenerables en el caso de la fcula de la mandioca. La aplicacin directa del polmero nanocompuesto es en la realizacin de bolsas biodegradables. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES La bentonita, cuyas partculas son inferiores a 2 nm, se encuentra compuesta principalmente por montmorillonita, y es una organoarcilla natural, que al ser modificada con la presencia de un surfactante, genera una nanoarcilla adecuada para su incorporacin a matrices polimricas biodegradables. En la investigacin se ha comprobado que el proceso de modificacin consiste en procesar la bentonita sdica en una solucin de agua desmineralizada y alcohol etlico, la cual es calentada hasta alcanzar una temperatura de
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60 C, y es posteriormente sometida a un agitador magntico a 250 rpm por 1 hora y media. Despus es agregado un compuesto de amonio cuaternario, que es previamente desledo en agua mineral. La solucin es sometida a un agitador magntico por 8 horas. El resultante es lavado con agua desmineralizada y alcohol etlico, que son agregados a la solucin de bentonita. Luego la solucin es centrifugada a 2000 rpm durante 10 minutos para la separacin de las nanoarcillas de los disolventes. La solucin hmeda resultante es secada en un horno a 180C durante 5 minutos, despus las nanoarcillas son almacenadas hermticamente. El amonio cuaternario es usado como catalizador de transferencia de fase para aumentar la solubilidad de los compuestos en solventes orgnicos, facilitando el uso de las nanoarcillas en matrices polimricas. El intercambio de cationes inorgnicos por iones de amonio orgnicos permite al filosilicato hidroflico que sea mayormente organoflico, y consecuentemente, ms compatible con el cido polilctico, que es un polmero orgnico. El cido lctico, que es sintetizado por medio de la fermentacin del almidn llevado a cabo por bacterias naturales, al ser pilicondensado y catalizado con el zinc metlico de alta pureza, produce el cido polilctico, que es un polmero biodegradable, termoplstico, y polister aliftico natural. La intercalacin del polmero y la nanoarcillas por mezclado fsico es realizada con la matriz polimrica en estado fundido, con lo que se logra que las superficies de las lminas sean compatibles con el cido polilctico, ya que el polmero puede ingresar dentro del espacio entre las lminas y constituir un nanocompuesto exfoliado o intercalado, con la adicin de 7,5 % de nanoarcillas con relacin a la cantidad de polmero biodegradable. En cuanto a la caracterizacin mecnica, las probetas de cido polilctico con adicin de nanoarcillas evidenciaron que poseen una resistencia mayor al 25% (en promedio general) con respecto al cido polilctico sin nanoarcillas. El cido polilctico puede ser empleado como materia prima para la fabricacin de bolsas y envases de mucha demanda a nivel social, preservando su biodegradabilidad, por lo que la optimizacin de sus capacidades es trascendental para aumentar su aplicacin como sustituyente de los derivados del petrleo. La nanoarcilla presenta un campo de aplicacin muy extenso, y por su condicin de producto natural y abundante en el Mercosur, es una iniciativa conveniente para el desarrollo de nanocompuestos que optimicen las caractersticas de resistencia, absorcin de humedad y capacidad ignfuga de los polmeros biodegradables, contribuyendo a la vez con el medio ambiente, ya que viabiliza el mejoramiento de las tecnologas verdes.
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Categoria Estudante Universitrio

Meno Honrosa
PONTOS QUNTICOS DE CDTE/CDS: UMA NOVA FERRAMENTA BIOFOTNICA NA INVESTIGAO DE ANTGENOS ERITROCITRIOS
Autor: Paulo Euzbio Cabral Filho, 22 anos, aluno do 6 semestre do curso de biomedicina da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) Professora-Orientadora: Adriana Fontes, 35 anos Pas: Brasil

PONTOS QUNTICOS DE CDTE/CDS: UMA NOVA FERRAMENTA BIOFOTNICA NA INVESTIGAO DE ANTGENOS ERITROCITRIOS

RESUMO Pontos qunticos, ou quantum dots (QDs), so nanocristais de semicondutores que constituem uma nova classe de marcadores fluorescentes. Comparados aos corantes orgnicos, os QDs apresentam uma excepcional resistncia fotodegradao e alta intensidade de fluorescncia. Os QDs podem ser aplicados em tcnicas e metodologias inovadoras, que complementam as anlises moleculares para contribuir em uma maior eficincia nos exames imunohematolgicos. Nos eritrcitos h cerca de 207 antgenos associados a 30 grupos sanguneos. A correta fenotipagem destes antgenos importante para transfuso sangunea e transplante de rgos. Alm disso, os QDs ainda podem ajudar a mapear e investigar a distribuio espacial dos antgenos nas clulas sanguneas. Neste trabalho, objetivou-se utilizar QDs de CdTe/CdS funcionalizados com (cido mercaptopropinico) AMP, bioconjugados ao anticorpo anti-A, para imunomarcao de antgenos eritroci+ trios A . Aps ajuste do pH da suspenso, os QDs foram bioconjugados ao + + anti-A temperatura ambiente e incubados com os eritrcitos A e O . As anlises foram feitas por microscopia de fluorescncia e citometria de fluxo, e a caracterizao ptica dos QDs foi obtida, por espectros de absoro e emisso, j a estrutural, por Difrao de Raio X e Microscopia Eletrnica de Transmisso. A bioconjugao foi confirmada por fluoroimunoensaio em placas ELISA. Os espectros de emisso e de absoro apresentaram o mesmo perfil antes e aps a bioconjugao e os anticorpos continuaram funcionais. A citometria identificou 35% dos eritrcitos A+ marcados, enquanto os eri+ trcitos O (controle) no apresentaram marcao, confirmando os resultados obtidos na microscopia. As caracterizaes estruturais confirmaram o
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tamanho nanomtrico e a estrutura cristalina desses nanocristais. Os QDs podem ser bioconjugados com outros anticorpos e podem tornar-se uma ferramenta precisa, de baixo custo para utilizao como marcador fluorescente em imunodiagnsticos nos bancos de sangue auxiliando e agilizando as transfuses sanguneas. 1. INTRODUO Desde o aparecimento do microscpio, por volta de 1500, grandes avanos na rea biomdica esto associados com a capacidade de se obter e melhorar imagens. Dentre as microscopias mais utilizadas atualmente est a microscopia por fluorescncia, que tem como principal vantagem a sua alta intensidade permitindo a aquisio de imagens praticamente em tempo real. Sua especificidade (bio)qumica advm da afinidade existente entre marcadores fluorescentes e as macromolculas no objeto de estudo. Na maioria dos casos, esses marcadores fluorescentes so corantes orgnicos citotxicos que sofrem rpida fotodegradao. Alm da microscopia, existem outras tcnicas importantes na rea biomdica, as quais tambm utilizam marcadores fluorescentes, entre elas esto a citometria de fluxo e os ensaios de imunofluorescncia. Novos mtodos de anlise envolvendo nanocristais fluorescentes de semicondutores (pontos qunticos ou quantum dots -QDs) como marcadores vm cada vez mais sendo utilizados em Cincias da Vida. Isso ocorre devido ao fato dos QDs apresentarem considerveis vantagens em relao aos marcadores convencionais (principalmente os corantes orgnicos) de marcao celular e diagnstico, tais como: (1) um nico laser pode excitar a luminescncia das nanopartculas, que podem emitir em diferentes regies do espectro variando-se apenas o tamanho da partcula (molculas orgnicas exigem mais de uma fonte de luz de excitao) (2) baixa citotoxidade (3) o efeito de fotodegradao da luminescncia cerca de 100 vezes menor nos QDs do que nos corantes orgnicos (isso permite que amostras sejam expostas luz, as imagens sejam obtidas com maior intensidade de luminescncia e que estudos de processos em funo do tempo possam ser realizados) (4) o material biolgico a ser analisado no necessita fixao, podendo ser marcado em cultura, por exemplo, e (5) os QDs so eletrodensos, permitindo localizao sub-celular das nanopartculas por microscopia eletrnica de transmisso (SUKHANOVA, 2008; MEDINTZ, 2005, MICHALET, 2005).

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Os QDs so nanopartculas de escala nanomtrica tendo dimetros na ordem de 1 a 10 nm (nanmetros) (1 nm = 10-9 m). Estes so constitudos de poucas centenas a poucos milhares de tomos, exibindo propriedades pticas que so marcadamente diferentes quando comparadas as dos mesmos cristais em escala macroscpica bulk (SANTOS, 2008; MICHALET, 2008). Os QDs podem ser feitos de vrios tipos de materiais semicondutores e so referidos como sendo nanocristais dos tipos: II -VI, III -V ou IV -VI, baseado em combinao de elementos pertencentes aos grupos da tabela peridica (SUKHANOVA, 2008). Por exemplo, nanocristais de CdTe (Telureto de Cdmio), onde o Cdmio pertencente ao grupo II e o Telrio ao grupo VI da tabela peridica dos elementos qumicos. Quando recebem energia externa, por meio de ftons de radiao eletromagntica, por exemplo, os eltrons da banda de valncia (BV), a qual apresenta menor energia, passam para a banda de conduo (BC), de maior energia, gerando um par eltron-buraco, tambm chamado de xciton, assim como mostra a Figura 1.
+ Figura 1 Esquema de formao de um xciton, h representa o buraco gerado na banda de valncia, pela excitao do eltron e e hv a energia de um fton excitando a amostra, onde; E = hv. ( Fonte: CHAVES, 2006).

A recombinao dos eltrons excitados na BC com os buracos na BV d origem a emisso caracterstica destes materiais tanto em regime macroscpico quanto nanoestruturados. Porm, neste ltimo regime de tamanho, os eltrons e buracos sofrem um forte confinamento quntico, modificando as propriedades pticas desses materiais. Quando a partcula est sob efeito de confinamento quntico, em trs dimenses, chamada de quantum dot e controlando-se o tamanho desta, pode-se conseguir a sintonizao do comprimento de onda de emisso. Isto ocorre devido ao fato de que as diferenas entre os estados energticos da BV e da BC (Energia do band gap ou Eg) variam de acordo com o tamanho da nanopartcula para um mesmo material. Assim, quanto menor a partcula de um dado semicondutor, maior a diferena de energia entre os estados da BV e BC, ou seja, maior a Eg (Figura 2). Desta forma, partculas menores tendem a emitir em regies prximas ao azul, enquanto as maiores devem apresentar luminescncia em regies mais prximas ao vermelho (CHAVES, 2006).

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Figura 2 Reduo do tamanho de partculas semicondutoras dentro do regime de confinamento qu ntico comparando os quantum dots ao bulk (cristal macroscpico) do mesmo material (CHAVES, 2006).

Portanto, essas novas caractersticas, que materiais (j bem conhecidos na escala macroscpica) adquirem quando escalonados nanometricamente, que os fazem ter grande potencial de aplicaes em diferentes reas da pesquisa desde a microeletrnica s Cincias da Vida. Isso se deve principalmente s novas propriedades pticas que so alcanadas controlando o tamanho desses nanomateriais (SANTOS, 2008). Foi publicado em 1982 por Henglein e colaboradores um dos primeiros trabalhos sobre sntese e caracterizaes pticas de QDs de Sulfeto de Cdmio (CdS) e co-colides de Sulfeto de Cdmio e Zinco (CdS-ZnS) (HENGLEIN, 1982). No entanto, somente em 1998 que surgem os primeiros trabalhos nos quais essa classe de material comea a ser utilizada para fins de marcao em sistemas biolgicos (ALIVISATOS, 1998; CHAN, 1998). A partir desse momento, um grande nmero de aplicaes vem surgindo, essas aplicaes vo desde o diagnstico ptico (FARIAS, 2006) at o estudo de difuso de receptores de membrana neuronal (DAHAN, 2003). Para um bom desempenho como marcadores (e competio comercial com os corantes), os QDs tm sido sintetizados com o objetivo de otimizar a sua luminescncia e sua estabilidade qumica em meio aquoso. A reduo do volume da partcula resulta num aumento da relao rea/volume, no entanto a elevada rea superficial aumenta a contribuio dos defeitos de superfcie dos nanocristais (tomos da superfcie do cristal que tm ligaes no compartilhadas) resultando no decrscimo da eficincia da emisso de luz pelas nanopartculas. Isso ocorre devido aos defeitos que levam a forma128

o de nveis intermedirios entre a banda de valncia e a banda de conduo, e ao invs do eltron ir diretamente da banda de conduo para a banda de valncia, ele vai perdendo energia aos poucos nesses nveis intermedirios, levando a uma baixa eficincia de luminescncia. Uma maneira de contornar esses problemas crescer uma casca (camada de passivao) de umas poucas camadas de tomos de um material com um Eg maior que o caroo (ncleo da nanopartcula). Esse processo da formao da casca denominado passivao e as partculas resultantes apresentam uma estrutura fsica do tipo core/shell (caroo/casca). Estes processos resultam numa nanoestrutura complexa composta de vrias camadas, como pode ser visto na Figura 3, onde: o ncleo o corao da nanopartcula (NP) e determina sua emisso, a camada de passivao determina a intensidade da emisso e a fotoestabilidade e, por fim, a camada orgnica, funcionalizante, mais externa, determina a sua estabilidade qumica e o grau de funcionalidade em relao marcao do sistema biolgico de interesse. Podem ser efetuadas tambm, funcionalizaes mais complexas com substncias presentes nos sistemas biolgicos, chamadas de bioconjugaes, como por exemplo, albumina e imunoglobulinas.

Camada de Passivao

Biomolcula Biomolcula ol

(Acar, DNA, Protena, Anticorpos, etc)

Figura 3 Esquema de um nanocristal de semicondutor (QD) funcionalizado quimicamente para sua utilizao como marcadores, onde NP o ncleo do nanocristal.

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Este fato possibilita, por exemplo, a marcao de antgenos especficos, como os do sistema ABO utilizando-se QDs bioconjugados a anticorpos ou imunoglobulinas (Figura 4). Outro tipo de QD, o CdS/Cd(OH)2, por exemplo, j foi aplicado no estudo de antgenos eritrocitrios (FARIAS, 2005; LIRA, 2010).

Figura 4 Esquerda: esquema mostrando a bioconjugao especfica de QDs de CdTe/CdS AMP com anticorpo anti-A. Direita: QDs de CdTe/CdS com anticorpo anti-A interagindo com a membrana de eritrcitos que contm antgeno A. (Adaptado de FARIAS, 2005).

Nos eritrcitos h aproximadamente 308 antgenos, onde cerca de 207 deles esto associados a 30 grupos sanguneos. A tcnica mais usualmente empregada para a imunofenotipagem de alguns desses antgenos normalmente baseada em reaes de hemoaglutinao utilizando anticorpos. Esses antgenos so importantes, pois sua classificao pr-requisito para transfuses sanguneas, e at mesmo para transplantes de rgos devido distribuio destes antgenos em vrias clulas do corpo. Transfuses de sangue, com antgenos diferentes aos dos pacientes, podem levar a srias reaes imunolgicas chamadas de incidentes transfusionais, que so agravos ocorridos durante ou aps a transfuso sangunea, podendo levar at mesmo o paciente a bito (LUDWIG; ZILLY, 2007). Apesar dos anticorpos monoclonais anti-A e/ou anti-B reconhecerem e aglutinarem a maioria dos grupos do sistema ABO, a determinao daqueles que apresentam baixa expresso de antgenos laboratorialmente trabalhosa, tendo que algumas vezes utilizar protocolos com vrias etapas e tambm biologia molecular. Alm disso, nos subgrupos ou variantes, h uma distino na quantidade e possivelmente no padro de distribuio de antgenos A, B ou O (H) nos eritrcitos, sendo que o grupo A o que apresenta a maior + + variao de subgrupos (A2 , A2B , ...) (BATISSOCO; NOVARETTI, 2003).
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Por essas razes, as metodologias alternativas, que possam ser estendidas para vrios subgrupos sanguneos e que auxiliem as tcnicas de biologia molecular, estaro sempre em foco para determinar expresses desses antgenos eritrocitrios e minimizar os erros transfusionais. Tcnicas baseadas em fluorescncia (tais como a citometria e microscopia de fluorescncia, normalmente disponveis no banco de sangue) tm demonstrado serem ferramentas teis para esta finalidade por possibilitar a anlise de padres e perfis de intensidade caractersticos de tipos celulares marcados com fluorforos. Estas so ento algumas das motivaes para a realizao deste trabalho que une a sensibilidade de deteco da fluorescncia com as vantagens fotofsicas dos pontos qunticos bioconjugados ao anticorpo anti-A para investigao de antgenos eritrocitrios. 2. OBJETIVOS Dentro do contexto apresentado na Introduo, o presente trabalho tem os seguintes objetivos:
2.1. OBJETIVO GERAL

Imunomarcao de antgenos eritrocitrios do tipo A com pontos qunticos do tipo CdTe/CdS estabilizados e funcionalizados com cido mercaptopropinico (AMP) e bioconjugados aos anticorpos anti-A para imunofenotipagem do sistema ABO usando microscopia de fluorescncia, alm da quantificao por citometria de fluxo como metodologias de avaliao.
2.2. OBJETIVOS ESPECFICOS

Sintetizar e caracterizar opticamente e estruturalmente os nanocristais; Bioconjugar os nanocristais ao anticorpo anti-A; Confirmar a bioconjugao dos nanocristais ao anticorpo anti-A por fluoroimunoensaio; Caracterizar opticamente os bioconjugados; Imunomarcar os eritrcitos do tipo A; Usar a microscopia de fluorescncia para avaliar qualitativamente a imunomarcao do bioconjugado aos eritrcitos; Quantificar as clulas marcadas por citometria de fluxo.

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3. MATERIAIS E MTODOS
3.1. SNTESE, PASSIVAO E FUNCIONALIZAO DOS QDS DE CDTE/CDS

Os QDs foram sintetizados em meio aquoso utilizando como precursores para formao das nanopartculas o Cd(ClO4)2 (Perclorato de Cdmio) e o (Te-2) Telrio reduzido. A reao se procede na presena de AMP (cido mercaptopropinico), o qual o agente estabilizante da reao. Para preparao das nanopartculas o Cd(ClO4)2 foi misturado com o AMP e posteriormente pH foi ajustado para 10,5. Esse sistema se manteve em atmosfera inerte de Argnio. Uma nova soluo aquosa, contendo ons Te-2 reduzidos atravs do Boridreto de Sdio (NaBH4) a partir do Telrio metlico (Te0) foram adicionados ficando, ento, todo sistema sob refluxo a 95 C. Alm de estabilizante, AMP tambm age como funcionalizante dessas nanoestruturas e a proporo molar utilizada para a sntese foi: Cd:Te:AMP = 2:1:2,4 (LIRA, 2010; MENEZES, 2005). As etapas desta sntese podem ser observadas na Figura 5, a qual resulta em nanopartculas de CdTe passivadas com CdS e funcionalizadas com o AMP.

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Figura 5 Esquema da sntese do CdTe/CdS.

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3.2. CARACTERIZAO PTICA E ESTRUTURAL DOS QDS:

Aps as etapas descritas acima, fez-se, ento, a caracterizao ptica dos QDs utilizando espectroscopia eletrnica de absoro e emisso das amostras descritas. Essa caracterizao importante para se avaliar a qualidade ptica dos QDs bem como para saber em que comprimento de onda est sua fluorescncia para utilizao na marcao dos sistemas biolgicos de interesse, alm da escolha dos equipamentos para anlise, os quais devem conter os filtros correspondentes aos comprimentos de onda da emisso e/ou excitao. As medidas para caracterizao ptica das nanopartculas foram realizadas utilizando o instrumento UV/VIS Spectrophotometer, Perkin-Elmer modelo Lambda6, e o espectrofotmetro Ocean Optics modelo HR4000 utilizando a gua ultra pura como referncia. A caracterizao estrutural foi feita por meio da anlise da difrao do Raio X em p (DRX). Os difratogramas foram realizados no difratmetro da Siemens Nixford D5000 digital (com biblioteca cristalogrfica), com radiao incidente K (Cu) = 1,542 , voltagem de 40 KV e corrente de 40 mV. A preparao da amostra se procedeu com a precipitao dos nanocristais utilizando isopropanol com o auxilio da centrifugao, e posteriormente o precipitado foi colocado na parte fosca de uma lmina de microscopia deixando-se secar lentamente.
3.3. BIOCONJUGAO DO CDTE/CDS -AMP COM O ANTI-A E MARCAO DE HEMCIAS COM OS NANOCRISTAIS BIOCONJUGADOS

Os QDs de CdTe/CdS funcionalizados com AMP, aps o ajuste do pH para o fisiolgico foram incubados com o anticorpo monoclonal anti-A (DiaMed Minas Gerais Brasil), por 2 horas temperatura ambiente, para ocorrer a bioconjugao por processo de adsoro. As hemcias A e O, obtidas do banco de sangue, foram suspensas a 5% em soluo fisiolgica 0,9%. Para a marcao das hemcias incubou-se os QDs bioconjugados com as hemcias suspensas por 1 hora a 37 C. As hemcias O foram o controle negativo do experimento por no possurem antgenos A em sua membrana, no havendo, portanto possibilidade de marcao via Anti-A. importante ressaltar que os anticorpos utilizados nos experimentos so os mesmos utilizados nos bancos de sangue para identificao dos tipos sanguneos por hemoaglutinao. Este trabalho est vinculado ao projeto de pesquisa aprovado pelo Comit de tica em Pesquisa do HEMOPE com Parecer final N003/09 homologado e APROVADO em reunio do mesmo comit no dia 04/03/2009, em
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cumprimento aos dispositivos da resoluo 196/96 e complementares do CNS -MS (Conselho Nacional de Sade do Ministrio da Sade - Brasil). As clulas foram analisadas no microscpio de fluorescncia confocal (equipamento da Leica SPII-AOBS), j a citometria foi feita no equipamento FACSCalibur (Becton Dickinson, San Jose, CA, USA). O software utilizado para o tratamento dos dados citomtricos foi o Cell Pro (Cell Quest Software, Becton Dickinson immunocytometry system, San Jose, CA, USA). As anlises foram realizadas com aquisio de 10.000 eventos por segundo. Na Figura 6 (A) pode ser identificado um grfico citomtrico (citograma ou dot plot) caracterizando as populaes celulares com ou sem fluorescncia (quadrante negativo) e a Figura 6 (B) a separao dos filtros de emisso dependendo do comprimento de onda.
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Figura 6 Em (A) dot plots mostrando em seus quatro quadrantes a positividade e negatividade de marcao para dois antgenos celulares em filtros FL1 e FL2 (verde e laranja, respectivamente) (GIVAN, 2001, adaptada); e em (B) representao dos filtros de emisso do citmetro dependentes do comprimento de onda. (Adaptado de SALES-NETO, 2009).

Apesar do alto custo e da necessidade de tcnicos especializados para realizao da avaliao citofluoromtrica, esta tcnica tem sido aplicada em diversos projetos cientficos relacionados a anlises no Brasil (NAKAGE, 2005) e padro ouro para diversas reaes imunofenotpicas como, por exemplo, para investigao de subtipos de leucemia mielide aguda utilizando corantes orgnicos associados a anticorpos especficos. Em adio, a citometria permite um rastreamento rpido de um grande nmero de clulas, e por esta tcnica, um nmero pequeno de clulas defeituosas pode ser detectado entre um grande nmero de clulas normais (GUILHERME, 2008).
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3.4. FLUOROIMUNOENSAIO

Como a funcionalizao e bioconjugao adequadas dos QDs com molculas orgnicas ainda se constitui um desafio, a bioconjugao foi confirmada por experincias inovadoras realizadas por fluoroimunoensaio em placas da Optiplate F HB, pretas, de poliestireno, com 96 poos da PerkinElmer, as mesmas utilizadas para o ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay), onde as protenas tem afinidade pelo poliestireno e ficam aderidas placa aps incubao por 2 horas a 37 C. As amostras utilizadas foram separadas nos seguintes sistemas: (1) anticorpo anti-A diludo em salina na mesma proporo utilizada no bioconjugado sendo, portanto, o controle; (2) QD diludo em gua ultra pura aps o ajuste do pH (controle); e (3) como amostra teste utilizando o bioconjugado QD/anti-A. Os experimentos foram realizados em triplicata para confirmao dos resultados e aps sucessivas lavagens a leitura foi feita no equipamento Wallac 1420 com o software VICTOR 2 HR4000. 4. RESULTADOS E DISCUSSES
4.1. CARACTERIZAO PTICA DOS QDS

As suspenses foram analisadas por espectroscopia de absoro eletrnica na regio do ultravioleta-visvel. Atravs desta tcnica podemos verificar a qualidade das suspenses coloidais com relao sua homogeneidade e estimar o dimetro dos nanocristais suspensos. A Figura 7 mostra o padro de absoro e emisso da suspenso de CdTe/CdS -AMP em meio aquoso. Tomando como base o primeiro mximo de absoro em 470 nm, essas nanopartculas apresentam aproximadamente um dimetro de 2,3 nm (ROGHACH, 2007) e, alm disso, podemos estimar o nmero de partculas para esses QDs. Atravs desta metodologia sinttica foi estimada uma concentrao de aproximadamente 1021 partculas/ml, dados obtidos a partir da frmula da concentrao (YU, 2003).

Figura 7 Espectro de absoro e emisso de nanopartculas de CdTe/CdS AMP.

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Figura 8 Suspenso de QDs de CdTe/CdS. A amostra recm sintetizada excitada por luz ultravioleta em comprimento de onda de 365 nm.

Aps a etapa de bioconjugao dos nanocristais de CdTe/CdS -AMP com o anticorpo monoclonal anti-A, observa-se que os espectros de emisso e absoro (Figura 9) mostram-se similares aos da amostra antes da bioconjugao (Figura 7), sugerindo que as propriedades pticas e o tamanho dos QDs permaneceram inalterados.

Figura 9 Espectros dos QDs bioconjugados. Na imagem podemos observar o espectro de absoro e o espectro de emisso da suspenso de CdTe/CdS -AMP bioconjugados com o anticorpo monoclonal anti-A.

De uma forma geral, a posio do pico mximo (em comprimento de onda) no espectro de emisso est relacionada estrutura eletrnica do semicondutor, ao tamanho das partculas e aos defeitos de superfcie do nanocristal. Quando se tem uma nanopartcula livre de defeitos, quanto maior a partcula mais para o vermelho sua emisso. J os valores das intensidades dos picos e a largura do espectro de emisso revelam os defeitos de superfcie e as impurezas. A obteno dos espectros, tanto de absoro como de emisso, se torna importante, pois nos informa caractersticas como a homogeneidade das populaes de nanopartculas envolvidas no processo de luminescncia. importante tambm, com relao ao equipamento de aquisio de imagem, saber qual o melhor valor do comprimento de onda para
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absoro e excitao da fluorescncia, bem como onde est o valor do mximo de emisso.
4.2. CARACTERIZAO ESTRUTURAL DOS QDS POR DIFRAO DE RAIO X

No difratograma de Raios-X de CdTe/CdS-AMP apresentado na Figura 10, observou-se um grande alargamento dos picos, indicando um regime de dimenso nanomtrico. O pico de maior intensidade foi visualizado na regio 2 = 27, evidenciando a estrutura caracterstica dos nanocristais de CdTe, Cbica Blenda de Zinco, atravs da anlise de todos os picos mais intensos exibidos no difratograma, em concordncia com trabalhos j relatados e com a biblioteca cristalogrfica JCPDS N 75 2086.

Figura 10 Difratograma de Raios-X de CdTe/CdS-AMP.

Para clculo do tamanho mdio das partculas sintetizadas utilizou-se a frmula de Scherrer (CHAVES, 2006): Onde: d = dimetro das nanopartculas em (nm) = comprimento de onda utilizado pelo equipamento ( = 0,1542 nm) B = largura de linha a meia altura do pico de difrao de maior intensidade (em radianos) = ngulo de incidncia do feixe de raio-X no pico mais intenso do difratograma Encontramos, portanto, um tamanho mdio de aproximadamente 2,3 nm. A caracterizao estrutural e ptica confirmaram o tamanho nanomtrico para estes materiais.
4.3. CONFIRMAO DA BIOCONJUGAO POR FLUOROIMUNOENSAIO

Para a excitao dos poos foi usado o filtro F480 que permite a passagem de uma banda total de 31 nm em torno do mximo (465 a 496 nm), j para a leitura foi utilizado o filtro de emisso F535 que permite a passagem de uma banda total de 25 nm em torno do mximo (523 a 548 nm). Dada a largura de banda da emisso do CdTe, uma boa faixa do espectro ainda detectada por esse filtro F535.
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Os QDs de CdTe/CdS-AMP, por no possurem afinidade com a placa de poliestireno, so removidos durante as lavagens no apresentando fluorescncia considervel. J a amostra controle, que s possui anticorpo antiA, fica toda aderida a placa, porm no possui propriedades fluorescentes. Os valores que esto na tabela 1, referentes aos QDs sozinhos e ao anti-A sozinho, esto relacionados a rudos de deteco do equipamento. Quando os QDs ficam realmente ligados ao anticorpo, eles no so removidos nas lavagens, visto que os anticorpos, por serem protenas, ficaro ligados placa, assim a leitura ser positiva quando esses poos forem excitados pela luz, como pode ser visto na Tabela 1. Isso confirma que houve bioconjugao do QD com a biomolcula (anticorpo) de interesse. Os resultados so apresentados pela mdia da leitura de trs poos. importante ressaltar que os controles apresentaram valores muito prximos da leitura da fluorescncia de poos vazios, confirmando que essas leituras esto relacionadas a rudos do equipamento.

Tabela 1 Resultados do fluoroimunoensaio em placas de poliestireno. O sinal alto para QDs/anti-A apresenta que os QDs foram bioconjugados com sucesso ao anticorpo anti-A. (Valores representados pela mdia das trs medidas; a. u.: unidades arbitrrias).

4.4. MARCAO DAS CLULAS 4.4.1. Imagens de Microscopia de Fluorescncia

As imagens foram obtidas utilizando microscopia de fluorescncia confocal (Figura 12), para avaliar qualitativamente o padro de marcao, visto que uma tcnica mais sensvel de anlise da fluorescncia quando comparada com a microscopia convencional, onde a primeira utiliza lasers excitando a amostra para obteno da fluorescncia e fotomultiplicadoras para deteco (ao invs de cmeras), alm de selecionar um plano focal mais restrito possibilitando melhor padro de qualidade de imagem, enquanto a segunda tcnica utiliza luz. Na Figura 12 (A) observamos as hemcias A marcadas quando a amostra foi excitada em 488 nm e a emisso correspondente ao QDs na regio do verde. Na Figura 12 (B) tem-se a sobreposio das imagens do contraste de fase com a Figura 12 (A) para observar o padro de marcao das hemcias. Vale ressaltar que para as hemcias O no foi detectada nenhuma fluorescncia, como era esperado, pois so o controle negativo do experimento.
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4.4.2. Quantificao das clulas marcadas por citometria de fluxo:

Para quantificar as clulas marcadas especificamente com o CdTe/CdS AMP-anti-A foi feito um ensaio no citmetro de fluxo (Figura 13). Em (A) podemos identificar que a populao de hemcias A suspensas a 5% (padro) sem QDs ficaram delimitadas no primeiro quadrante (mostrando que no h sinal de fluorescncia), tendo um total de clulas de 99,91%; em (B) 98,05% no foram marcados, indicando que no h marcao inespecfica entre o QD e as clulas. J em (C) pode-se identificar a evidente marcao no filtro FL1 (emisso no verde) de 33,7% das clulas quando o QD foi bioconjugado ao anticorpo anti-A. No entanto, em (D) as hemcias O com QD-anti-A apresentaram 99,5% de clulas no marcadas, sendo o controle negativo do experimento por no possurem antgenos A na superfcie das hemcias.

Figura 13 Dot plots de hemcias A e O: (A) clulas no marcadas; (B) hemcias com QDs no marcadas; (C) Hemcias A marcadas com QD-anti-A e (D) hemcias O usadas como controle do experimento.

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Os resultados das marcaes apresentados foram re-produtveis, visto que as du- plicatas e as anlises por mi-croscopias de fluorescncia e citometria de fluxo foram semelhantes, porm precisam de aprimoramento e melhoramento das tcnicas de bioconjugao e incubao, pois nem todas as hemcias A esto sendo marcadas. Esses achados podem ocorrer devido ao processo de bioconjugao ainda em testes de concentraes e/ou propores do nmero de anticorpos para o nmero de clulas. Para tanto, a tcnica de bioconjugao empregada, a adsoro, pode ser melhorada por ajustes do pH da suspenso, da temperatura, dentre outros fatores externos que podem melhorar a eficincia da ligao entre o anticorpo e o QD. Alm disso, no se sabe se alguns QDs esto se ligando ao anticorpo, atravs da poro Fab (poro ativa e ligante do antgeno), o que minimiza o potencial de ligao dos mesmos aos antgenos especficos, e impedem a ligao de todos os anticorpos em todas as hemcias fazendo com que nem todas as clulas apresentem marcao. Porm, estes estudos iniciais tm demonstrado o uso da nanotecnologia como promissora para investigaes relacionadas a imunofenotipagem eritrocitria. De acordo com dados da literatura, assim como os apresentados em nota tcnica do Bangs Laboratories, o mecanismo de adsoro baseado em ligaes hidrofbicas por foras de Van der Waals. Alm disso, a mesma nota descreve que quando se tem grupos tiol disponveis, como o caso do CdTe/CdS-AMP utilizado neste trabalho, a adsoro se dar no s por foras de Van der Waals, mas tambm por foras inicas. O trabalho de Shi e colaboradores tambm levanta esse ponto relacionado s foras inicas (SHI, 2009). Alm do pH, o uso de quantidade de imunoglobulinas em excesso na adsoro pode otimizar a orientao destas molculas favorecendo a adsoro do anticorpo pela poro Fc (poro constante), o que seria ideal, pois possivelmente no haver inativao da imunoglobulina. Alm disso, o uso de solues contendo NaCl (cloreto de sdio) em concentraes prximas a 0,15 M para diluio do QD, tambm poder favorecer o processo de adsoro. 5. CONCLUSES E PERSPECTIVAS A sntese dos QDs utilizados nesse experimento foi feita com sucesso assim como a caracterizao ptica dos QDs. Alm disso, o sistema nanoestruturado estudado se mostrou eficiente na marcao especfica dos eritrcitos A. Alm de mostrar que, apesar do uso de funcionalizadores e/ou
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bioconjugadores, as nanopartculas continuam eficientes e compatveis com os equipamentos convencionais para anlise, e que sua fluorescncia praticamente no alterada. Pelos resultados das marcaes obtidas, possvel que os QDs se liguem a vrios outros anticorpos e o protocolo seja extrapolado para outros antgenos de deteco mais laboriosa podendo tornar-se potenciais ferramentas de baixo custo em diagnstico imunohematolgicos para antgenos de baixa expresso, os quais no manifestam reaes de hemoaglutinao, porm desenvolvem incidentes transfusionais, bem como investigar distribuio de antgenos nas clulas de subgrupos sanguneos. Apesar de os equipamentos serem de alto custo, ainda assim, a tcnica considerada de baixo custo, visto que os equipamentos j so utilizados na rotina dos bancos de sangue na imunofenotipagem leucocitria (citmetro de fluxo) e as nanopartculas so sintetizadas em meio aquoso, e se tratando de escala nanomtrica, pouca quantidade de reagente necessria. Este trabalho demonstra grande potencial de inovao tecnolgica, principalmente porque a anlise dos grupos sanguneos e tambm dos sub+ grupos sanguneos (A2 , A3B+, etc) poder complementar os dados da literatura e ajudar os bancos de sangue dos pases do Mercosul. Isso se deve pelo fato da manipulao dos QDs ser fcil e mais rpida quando comparada com as tcnicas de biologia molecular, e ser mais sensvel quando comparada com as reaes de hemoaglutinaes, usualmente utilizadas para a identificao dos grupos sanguneos nos bancos de sangue, especialmente quando se trata da investigao de subgrupos. AGRADECIMENTOS Os autores so gratos a FACEPE, CNPq, CAPES, LOREAL, PHILIPS, Academia Brasileira de Cincias, INCT de Fotnica, CPqAM/FIOCRUZ, HEMOPE, UFPE, UNICAMP e a todos que contriburam para o desenvolvimento deste trabalho.

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Categoria Joven Pesquisador

Meno Honrosa
ENCAPSULACION DEL FRMACO ANTIRRETROVIRAL EFAVIRENZ EN NANOTRANSPORTADORES POLIMRICOS PARA LA OPTIMIZACIN DE LA FARMACOTERAPIA DEL VIRUS DE LA INMUNODEFICIENCIA HUMANA EN PACIENTES PEDITRICOS
Autor: Diego Andres Chiappetta, 35 anos, doutor em tecnologia farmacutica Pas: Argentina

RESUMEN La infeccin peditrica por VIH es baja en los pases desarrollados y el 90% de los pacientes peditricos con VIH viven en pases en desarrollo. Aproximadamente el 90% de los nios VIH-positivos no tienen acceso a los frmacos antirretrovirales (ARVs). Sin tratamiento, el 50% de los pacientes muere antes de los 2 aos de edad. Efavirenz (EFV, solubilidad acuosa ~4g/ml, 40-45% de biodisponibilidad), un inhibidor de la transcriptasa reversa no nucleosdicos (NNRTI), es un ARV de primera eleccin en el tratamiento peditrico. Para asegurar concentraciones plasmticas teraputicas, EFV se administra en dosis relativamente altas. EFV en solucin acuosa irrita la mucosa oral, produciendo un sndrome de quemazn en la boca (BMS). El presente trabajo describe el desarrollo de una formulacin acuosa de EFV concentrada (20mg/ml, 2%) para un manejo ms adecuado de la terapia peditrica contra el VIH. Las formulaciones presentaron una alta estabilidad fisicoqumica en el tiempo en condiciones de almacenamiento normales. Los ensayos de liberacin in vitro de EFV mostraron un efecto de liberacin inmediata (2 h) y luego una cintica de orden cero (entre 2 y 24 h). Por ltimo, las pruebas de sabor realizadas en voluntarios sanos adultos indican que la combinacin de sabores y edulcorantes empleados reducen la intensidad del BMS y acortan su duracin de manera significativa. Estos resultados indican que la estrategia nanotecnolgica propuesta (rentable y escalable) podra permitir una administracin ms conveniente y ser ajustada a dosis ms bajas de EFV. Debido a un mejor perfil farmacocintico, esto dara lugar a niveles plasmticos similares a aquellos obtenidos con dosis ms altas desde formas slidas o desde la solucin aceitosa. En este contexto, podemos pensar en una reduccin del costo del tratamiento. Esto podra mejorar el acceso de los pacientes peditricos con menos recursos a los medicamentos en pases pobres. 1. INTRODUCCIN El ltimo informe sobre la situacin del Virus de Inmunodeficiencia Humana (VIH)/Sndrome de Inmunodefiencia Adquirida (SIDA) indica que, actualmente, viven 40 millones de pacientes infectados (AIDS EPIDEMIC UPDATE, 2007). Aproximadamente 2,5 millones son nios menores de 15 aos. Este grupo demuestra una mortalidad especialmente elevada y representa una poblacin de alto riesgo (AIDS EPIDEMIC UPDATE, 2007). La terapia antirretroviral de alta actividad (en ingls HAART) fue
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introducida en 1996 y ha extendido la expectativa de vida de los pacientes infectados a ms de una dcada (PANEL OF CLINICAL PRACTICES FOR TREATMENT OF HIV INFECTION, 2001; UNAIDS/WHO AIDS EPIDEMIC, 2009; SHAH, 2007). Las dosis de frmaco antirretroviral (ARV) utilizadas son altas y los complicados regmenes de administracin afectan notablemente la calidad de vida de los pacientes. De acuerdo a investigaciones epidemiolgicas, niveles de adherencia inferiores al 95% pueden reducir las chances de xito teraputico en aproximadamente el 50% (ANDREWS; FRIEDLAND, 2000). El VIH peditrico ha sido eliminado en los pases desarrollados mediante la reduccin del denominado contagio-de-madre-a-feto y a travs de la leche materna en lactantes (MSF, 2009). Por el contrario, en los pases en vas de desarrollo, la situacin es dramticamente diferente, donde ms del 90% de los nios infectados no tienen acceso a la medicacin. El HAART peditrico representa un desafo teraputico ya que de los 25 frmacos aprobados para uso en adultos, slo 12 lo estn para nios (GIAQUINTO et al., 2008). Adems, los frmacos de uso en adultos slo se encuentran disponibles en formulacin slida (BROWN, 2007). Para permitir el ajuste de dosis por peso corporal y la fcil deglucin, las formulaciones slidas deben ser manipuladas y procesadas para la preparacin de formas magistrales (STANDING; TULEU, 2005). Cada ao, aproximadamente 40 millones de nios reciben medicamentos sin licencia en Europa (EC-EI, 2008; CONROY, 2003). Estas formulaciones han despertado serios cuestionamientos respecto de la calidad, seguridad y eficacia (CHOONARA; CONROY, 2002; NUNN; WILLIAMS, 2005; EILEEN KAIRUZ et al., 2007). Estas limitaciones son an ms notables en pases con una pobre infraestructura en salud. Adems, inconvenientes organolpticos que llevan a la reduccin en la adhesin a los regmenes teraputicos son a veces descuidados (VAN DYKE et al., 2002). En ciertos casos, se ha detectado una disminucin en la biodisponibilidad de la droga cuando es administrada en su formulacin slida (MUELLER et al., 1998). Este fenmeno se debe a la adsorcin de frmaco a diferentes excipientes de la misma. Sin embargo, cuando no se dispone de una formulacin lquida comercial, las formulaciones magistrales constituyen la nica alternativa para el tratamiento de neonatos y nios infectados con el VIH (COMMITTEE ON PEDIATRIC AIDS, 2007). La ltima Asamblea Mundial de la Salud (WHA) reconoci de manera explcita el derecho de los nios a acceder a medicamentos seguros, efectivos y proba-

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dos, y aprob la resolucin Best medicines for children (WHO/MAKE MEDICINES CHILD SIZE, 2009), lanzando la campaa mundial Make medicines child size (WHO/MAKE MEDICINES CHILD SIZE, 2009). Efavirenz (EFV, Sustiva, Esquema 1) pertenece al grupo de los inhibidores de transcriptasa reversa no nucleosdicos y se encuentra clasificado en la Clase II del Sistema de Clasificacin Biofarmacutico (BCS) (LINDENBERG et al., 2004). Efavirenz es un frmaco de primera lnea en el tratamiento antirretroviral de pacientes adultos (GAZZARD, 2006) y peditricos (BARRUECO et al., 2005; WINTERGERST et al., 2008). La baja solubilidad acuosa del frmaco (4 g/ml) limita su absorcin en el tracto gastrointestinal (RABEL et al., 2001; GAO et al., 2007). As, la biodisponibilidad oral es aproximadamente 40-45% y la alta variabilidad inter-individual observada demanda el monitoreo de los niveles alcanzados en plasma (CSAJKA et al., 2003; AARNOUTSE et al., 2003). La dosis utilizada en pacientes peditricos est entre 200 y 600 mg/da (SOSNIK et al., 2009). En EEUU se ha desarrollado una solucin oleosa de efavirenz a base de triglicridos de cadena media (STARR et al., 2002; BAHAL et al., 2003). Dicha formulacin no est comercialmente disponible en nuestro pas (no existe registro en la ANMAT) y algunos pacientes reciben dicha medicacin mediante su importacin bajo la categora de uso compasivo. Sin embargo, esta solucin presenta desventajas notables como ser una biodisponibilidad oral inferior a la forma farmacutica slida y una mayor variabilidad interindividual. Esto se debe a la baja solubilidad del vehculo oleoso en el fluido gastrointestinal. Adems, es de esperar que la ingesta de grandes volmenes de vehculos oleosos (>20 ml en nios de 14 aos) podra producir una diarrea profusa. Este efecto adverso impactara de manera crucial en la calidad de vida del paciente y puede provocar una cada en los niveles de aceptacin y adherencia. Por otro lado, efavirenz solubilizado en medio acuoso irrita la mucosa oral (Burning Mouth Syndrome o BMS) (BORRAS-BLASCO et al., 2006). Este fenmeno es una sensacin de quemazn que no se debe a la presencia de heridas especficas y es otra causa de interrupcin del tratamiento (MARCELLIN et al., 2008).

Esquema 1. Estructura qumica de efavirenz

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La disponibilidad de formulaciones lquidas constituye un eslabn esencial en la farmacoterapia peditrica; los nios menores a 7 aos comnmente no son capaces de tragar medicamentos slidos (YEUNG; WONG, 2005). As, el desarrollo de formulaciones lquidas disponibles comercialmente que optimicen la biodisponibilidad oral y reduzcan la variabilidad inter-individual aparece como un desafo de alta relevancia clnica en el tratamiento de esta enfermedad. La prevalencia de la enfermedad es extremadamente alta en pases pobres (SMART, 2005) donde el desarrollo de medicamentos antirretrovirales escalables y con menor costo de produccin puede representar la barrera entre el acceso o no de los pacientes a la medicacin adecuada (CHIAPPETTA et al., 2009; SOSNIK et al., 2008); la administracin de menores dosis que son absorbidas ms efectivamente en el tracto gastrointestinal representara una mejora sustancial en la accesibilidad de ms pacientes a efavirenz. La nanotecnologa puede proveer de herramientas nicas para optimizar la farmacoterapia de VIH. En general, se observa una buena correlacin entre el aumento de la solubilidad acuosa y el aumento de la biodisponibilidad oral de los frmacos de Clase II. La inclusin en el ncleo hidrofbico de micelas polimricas constituye una estrategia nanotecnolgica muy verstil para aumentar la solubilidad en agua de drogas poco hidrosolubles (CHIAPPETTA; SOSNIK, 2008). Las micelas polimricas se obtienen mediante el auto-ensamblado de polmeros anfiflicos en medio acuoso y la generacin de una estructura nanoscpica que comprende un ncleo (core) hidrofbico y una corona (shell) hidroflica. Dicha estructura nica dota a las micelas polimricas de una notable capacidad solubilizante. As, las molculas insolubles pueden alojarse en el ncleo de la micela, con lo que su solubilidad aparente en agua puede llegar a superar en varios rdenes de magnitud su solubilidad intrnseca en un medio acuoso libre de micelas. As, se logran mantener en solucin molculas de frmaco que, de otra manera, seran prcticamente insolubles en medio acuoso. Los materiales formadores de micelas polimricas ms extensamente estudiados son los copolmeros de poli(xido de etileno) y poli(xido de propileno) (PEO-PPO) (CHIAPPETTA; SOSNIK, 2008). Los segmentos de PEO y PPO constituyen el componente hidroflico e hidrofbico, respectivamente. Existen dos familas comercialmente disponibles: (i) los tribloques lineales PEOPPOPEO o poloxmeros (Pluronic) (Esquema 2A) y (ii) las poloxaminas ramificadas (Tetronic) (Esquema 2B). Una ventaja notable de estos copolmeros es que

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algunos han sido aprobados por FDA y EMEA para su uso como excipientes farmacuticos y en dispositivos mdicos (REEVE, 1997; BROMBERG; RON, 1998; SUBBARAMAN et al., 2006).

Esquema 2. Estructura general de los poloxmeros (A) y las poloxaminas (B).

Nuestro grupo de investigacin estudia diferentes aproximaciones nanotecnolgicas para optimizar las propiedades biofarmacuticas de frmacos utilizados en el tratamiento de VIH/SIDA. Contrariamente al cncer, una enfermedad que afecta tanto a personas de pases en desarrollo como de los pases desarrollados, la prevalencia de VIH es extremadamente mayor en aquellos pases con carencia de recursos y con acceso limitado a tecnologas ms sofisticadas (y en consecuencia mas costosas) (SMART, 2005). Por ello, existe la necesidad del desarrollo escalable a nivel industrial de medicinas antirretrovirales y de costo razonable, que mejoren las caractersticas de las formulaciones del arte previo y que sean accesibles a todos los pacientes, sin importar su situacin socioeconmica (CHIAPPETTA et al., 2009). As, para permitir el escalado de la formulacin econmicamente viable y asegurar el acceso de todos los pacientes, independientemente de su estatus socioeconmico, es imprescindible que los copolmeros utilizados sean de fcil acceso comercial. Desde el punto de vista tecnolgico-farmacutico, el hecho de que los derivados de PEO-PPO hayan sido aprobados por diferentes entes regulatorios internacionales y que se encuentren en el mercado en una amplia variedad de pesos moleculares y de balances hidrofbico/hidroflico, constituye una ventaja destacable por sobre todos los otros polmeros en etapas de estudio experimental, fundamentalmente limitados al mbito acadmico. As, su utilizacin permitira, en el caso de desarrollar un producto farmacutico, acortar y agilizar el proceso de aprobacin por los organismos regulatorios nacionales. Asimismo, en una instancia previa, permitira una

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evaluacin favorable del comit de tica mdica para llevar adelante estudios clnicos. El presente estudio explor la solubilizacin de efavirenz en diferentes micelas polimricas de PEO-PPO para el desarrollo posterior de una formulacin acuosa de alta concentracin de frmaco soluble (20 mg/ml). Los estudios preclnicos comparativos del perfil farmacocintico del frmaco en el sistema micelar y en una suspensin extempornea y una solucin oleosa demostraron el aumento significativo de la biodisponibilidad oral y sustenta el uso de esta estrategia para el desarrollo de una solucin oral acuosa concentrada, estable y econmica para el tratamiento peditrico de la infeccin. 2. MATERIALES Y MTODOS
2.1. MATERIALES

Los poloxmeros Pluronic F68 (Peso molecular 8,6 kDa), F108 (Peso molecular 14,8 kDa) y F127 (Peso molecular 12,6 kDa) y poloxaminas Tetronic 1107 (T1107, Peso molecular 15 kDa) y 1307 (T1307, Peso molecular 18 kDa) fueron donadas por BASF (NJ, USA). Efavirenz (Laboratorio Farmacutico Richmond, Buenos Aires, Argentina), Na2HPO4, cido ctrico, KCl, NaOH, HCl y dems solventes utilizados fueron de grado analtico.
2.2. PREPARACIN DE MICELAS DE COPOLMEROS DEL TIPO PEO-PPO

Se elaboraron micelas polimricas (1 a 17% p/v, dependiendo del polmero) disolviendo la cantidad requerida de polmero en un buffer fosfatocitrato a pH 5,0 a 4oC y equilibrando el sistema a 23oC, al menos 24 horas antes de su uso.
2.3. SOLUBILIZACIN DE EFAVIRENZ EN MICELAS POLIMRICAS

Efavirenz fue agregado en exceso (~50 mg/ml) a los sistemas micelares (3 ml, solucin de polmero) en viales de vidrio de 10 ml. Las muestras se agitaron 48 horas en un agitador horizontal con control de temperatura, manteniendo esta ltima a 23oC. Para remover el exceso de droga, las suspensiones se filtraron a travs de filtros clarificadores (0,45 m, con membrana de celulosa) y luego fueron secadas en estufa de vaco, a temperatura ambiente. Los especmenes secos se re-disolvieron en metanol y la concentracin se ajust de acuerdo a lo requerido. Las concentraciones de efavirenz se determinaron por espectrofotometra UV ( = 247 nm), a 23oC. Los factores de solubilidad (fs) se calcularon de acuerdo con la ecuacin
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fs = Sa/Swater Donde Sa y Swater son, respectivamente, la solubilidad aparente de efavirenz en los diferentes sistemas micelares, y la solubilidad intrnseca de la droga en un medio acuoso libre de polmeros, determinadas experimentalmente a pH 5,0 (4 g/ml). La titulacin del frmaco en las formulaciones fue llevada a cabo mediante HPLC.
2.4. PREPARACIN DE FORMULACIONES ACUOSAS DE EFAVIRENZ ENCAPSULADO EN MICELAS POLIMRICAS

Se prepararon tres formulaciones utilizando un poloxmero (Pluronic F127) y dos poloxaminas (Tetronic 904 y 1307). Las formulaciones al 2% de efavirenz (20 mg/ml) contienen: polmero 10%, benzoato de sodio 0,2%, ciclamato de sodio 0,15%, acesulfamo de potasio 0,3%, sorbitol 5%, glicerol 6% y buffer fosfato-citrato pH 5 c.s.p. 100 ml. El polmero se solubiliz en un buffer de pH 5 a 4 C durante 24 horas. Una vez solubilizado el polmero, se incorpor la droga al sistema micelar y finalmente los excipientes.
2.5. ESTABILIDAD FSICA DE LAS FORMULACIONES

Para el estudio de la estabilidad fsica en el tiempo de las micelas conteniendo efavirenz, las muestras fueron almacenadas durante diferentes perodos de tiempo a temperatura ambiente (24oC), y la concentracin de droga fue monitoreada mediante HPLC.
2.6. ESTABILIDAD FSICA DE LAS FORMULACIONES EN DILUCIN

Formulaciones conteniendo efavirenz fueron diluidas (1/10, 1/50 y 1/75) en condiciones que asemejan las del estmago (HCl 0,1N, pH 1,5) e incubadas a 37oC. La concentracin de droga fue monitoreada en el tiempo mediante HPLC. Como control se utilizaron soluciones de droga sin polmero.
2.7. ESTUDIOS DE LIBERACIN DESDE SISTEMAS MICELARES IN VITRO

Para evaluar la liberacin de droga desde las formulaciones, se diluyeron sistemas conteniendo efavirenz (1/10, 1/50 and 1/75) en un buffer (pH 5,0). Las muestras (50 ml) fueron colocadas en membranas de dilisis (tubuladura de celulosa regenerada, MWCO = 3500), inmersas en buffer que asemeja al medio intestinal (pH 6,8, 900 ml) y la concentracin de droga en la solucin interna fue monitoreada durante el tiempo mediante UV, a 37oC. El medio de liberacin fue reemplazado cada 6 horas por medio fresco. Se compar la liberacin con la de una solucin oleosa de igual concentracin de efavirenz.
153

2.8. ESTUDIOS DE LIBERACIN DESDE SISTEMAS MICELARES IN VITRO EN CONDICIONES DE TOMA

Para simular la liberacin de frmaco en el organismo tambin se estudi la liberacin en un medio acuoso de pH smil gstrico (HCl 0,1N, pH 1,5, 900 ml) durante las dos primeras horas, para luego cambiar cada 4 horas por un medio smil intestinal (pH 6,8, 900 ml) a 37 C.
2.9. ENSAYOS DE SABOR DE LA FORMULACIN ACUOSA DE EFV

El ensayo de sabor de la formulacin se llev a cabo en voluntarios sanos y se lo compar con el de una solucin acuosa de efavirenz en micelas polimricas sin esencias y saborizantes. Para ello, 500 l de la formulacin fueron retenidos en el centro de la lengua durante 10 segundos. Luego, se midieron los siguientes parmetros: (i) tiempo de aparicin de la quemazn, (ii) intensidad de la quemazn (iii) duracin de la quemazn. A la intensidad se le asign un puntaje de acuerdo a una escala numrica entre 0 y 4 donde: 0 es sabor quemazn no detectable; 1 detectable; 2 leve; 3 moderado y 4 fuerte.
2.10. ESTUDIOS FRMACOCINTICOS IN VIVO

La biodisponibilidad comparativa de la formulacin fue estudiada en ratas Wistar Macho (220-250 g). La administracin por va oral se realiz mediante la introduccin cuidadosa de un trocar en el esfago del animal conciente. Se administr efavirenz (40 mg/kg) en las distintas formulaciones bajo estudio (todas de concentracin 20 mg/ml): (i) formulacin a base de micelas, (ii) suspensin extempornea y (iii) solucin en triglicrido de cadena media (Miglyol 812). El volumen en cada una de las aplicaciones fue de 0,2 ml/kg de peso del animal. Se tomaron muestras de sangre (alrededor de 70 l) de la vena de la cola de la rata a tiempos estipulados previamente para caracterizar el perfil de concentraciones plasmticas en funcin del tiempo. Los tiempos de muestreo seleccionados fueron 0,5; 1; 1,5; 2; 3; 4; 5; 6; 8 y 24 horas. Las muestras plasmticas fueron centrifugadas, separndose el suero para la determinacin analtica de las concentraciones plasmticas de efavirenz. Para la cuantificacin de efavirenz en muestras de suero, se realiz la desproteinizacin del mismo con acetonitrilo en una proporcin 2:1 con respecto al suero y la concentracin se determin por HPLC con detector UV (248 nm). El mtodo analtico fue validado en un rango de concentraciones de 20 hasta 5000 ng/ml. El anlisis farmacocintico de los niveles plasmticos de efavirenz fue realizado mediante el programa computacional TOPFIT ajustando los datos a un modelo no-compartamental con absor-

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cin por va oral. Los siguientes parmetros farmacocinticos fueron estimados para cada formulacin: (i) rea bajo la curva (AUC0-24), (ii) concentracin plasmtica mxima (Cmx) y (iii) tiempo a Cmx. Los parmetros fueron log-transformados mediante anlisis estadstico para reducir la heterogenicidad de la varianza y comparados por ANOVA y el Test de Bonferroni (GraphPad Prism version 5.02 for Windows, GraphPad Software, San Diego, California, CA). La significancia estadstica se defini como P < 0,05. La variabilidad interindividual de los parmetros farmacocinticos fue determinada mediante la comparacin del coeficiente de variacin (CV%).
2.11. MTODO CROMATOGRFICO PARA LA CUANTIFICACIN DE EFV

Los niveles de EFV en los ensayos de estabilidad y en las muestras plasmticas fueron cuantificados por cromatografa lquida de alta precisin (HPLC) con deteccin ultravioleta (UVIS 204, Linear Instruments, Reno, USA) a 248 nm. Se utiliz una columna Phenomenex ODS, C18, 250mm/ 4,6 mm (LUNA). La fase mvil se prepar de la siguiene manera: agua destilada: acetonitrilo:trietilamina (60:40:0,2; pH 3) y se mantuvo a un flujo de 1,4 ml/min. El mtodo analtico para la cuantificacion fue validado en el rango de 20 y 5000 ng/ml. 3. RESULTADOS Y DISCUSIN
3.1. SOLUBILIZACIN DE EFAVIRENZ EN MICELAS POLIMRICAS DE PEO-PPO

El primer objetivo del presente trabajo fue explorar la solubilidad del frmaco en micelas polimricas de diferentes poloxmeros y poloxaminas. A concentraciones inferiores a la Concentracin Micelar Crtica (CMC), la capacidad de solubilizacin de frmacos hidrofbicos por parte de estos copolmeros es muy limitada (DONG et al., 2004). Debido a ello, se utilizaron concentraciones superiores (Tabla 1) (ALEXANDRIDIS et al., 1994; FERNANDEZ-TARRIO et al., 2008; ALEXANDRIDIS; HATTON, 1995; NAKASHIMA, 1994).

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Tabla 1.Valores de CMC de diferentes copolmeros de PEO-PPO. Polmero Pluronic F68 Pluronic F108 Pluronic F127 Tetronic 1107 CMC25oC (% w/v)* ~10 4,0 0,5 1,0

Ref.
NAKASHIMA, 1994 ALEXANDRIDIS et al., 1994 ALEXANDRIDIS & HATTON, 1995 CHIAPPETTA et al., 2008; GONZALEZ-LOPEZ et al., 2008 GONZALEZ-LOPEZ et al., 2008; FERNANDEZ-TARRIO et al., 2008

Tetronic 1307

1,0

*Concentraciones de polmero en g/100 ml

La solubilidad aparente de efavirenz en los diferentes copolmeros es presentada en la Tabla 2. Se observaron aumentos dramticos de la solubilidad, especialmente con el poloxmero F127 y las poloxaminas T1107 y T1307. En general, el aumento de la concentracin de copolmero result en el aumento gradual de la capacidad solubilizante (Figura 1). En el caso de los poloxmeros F68 y F108, se observ una menor capacidad solubilizante.

Figura 1. Sa de efavirenz versus concentracin de copolmero de diferentes derivados de PEO-PPO.

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Este fenmeno se debi a que estos copolmeros presentan valores de CMC mayores (3 y 10% para F108 y F68, respectivamente) y por ello a bajas concentraciones no se encuentran formando micelas, sino agregados unimoleculares conocidos con el nombre de unmeros.
Tabla 2. Solubilidad aparente (Sa) de efavirenz en diferentes sistemas micelares Copolmero HLB* 1% T1107 3% 5% Sa (mg/ml) (D.E.) 7% 10% 12% 15% 17% -

0,25 2,27 4,80 8,00 19,48 18-23 (0,04) (0,03) (0,17) (0,14) (1,37) 0,68 3,64 6,16 9,39 19,00 (0,09) (0,28) (0,07) (0,07) (2,34)

T1307

> 24

F68

> 24

0,02 0,06 0,09 0,64 2,90 6,32 10,13 (0,02) (0,00) (0,02) (0,07) (0,42) (0,23) (0,30) 2,09 3,56 5,61 9,06 (0,26) (0,43) (0,35) (1,08) -

F108 F127

> 24

1,70 5,30 8,89 12,80 21,46 18-23 (0,02) (0,13) (0,32) (0,82) (0,46)

*Provisto por BASF.

Los factores de solubilidad (fs) se muestran en la Tabla 3. Por otro lado, por encima de la CMC (~10%), F68 mostr el aumento pronunciado de la solubilizacin del frmaco. Los valores de Sa para soluciones 12 y 17% de F68 fueron 2,90 (fs = 725) and 10,13 mg/ml (fs = 2533), respectivamente. Para Pluronic F108, el punto de inflexion se observ a una concentracin menor (~3%) (Figura 1). Los copolmeros con mayor contenido relativo de PPO mostraron valores ms bajos de CMC y en consecuencia fueron efectivos a menores concentraciones, incluso al 1%. Por ejemplo, los valores de Sa fueron 0,25 (fs = 63), 0,68 (fs = 170) y 1,70 mg/ml (fs = 425) para sistemas al 1% de T1107, T1307 y F127, respectivamente. Luego, el aumento a 3% result en valores de S a de 2,27 (f s = 568), 3,64 (f s = 910) y 5,30 mg/ml (f s = 1325). Finalmente, soluciones al 10% mostraron valores de Sa de 19,5 (fs = 4870), 19,0 (fs = 4750) y 21,5 mg/ml (fs = 5365), respectivamente (Tabla 3), representando cargas de frmaco de hasta el 22 % en peso total.
157

Tabla 3. Factores de solubilidad de efavirenz (s) en sistemas micelares, a pH 5

Polmero
1% T1107 T1307 F68 F108 F127 63 170 425

Factor de solubilidad de efavirenz (s)

3% 568 910 5 523 1325 5% 1200 1540 15 890 2223 7% 2000 2348 23 1403 3200 10% 4870 4750 160 2265 5365 12% 725 15% 1580 17% 2533 -

La caracterizacin de las micelas cargadas con efavirenz se llev a cabo mediante dos tcnicas complementarias, difraccin de lz lser (DLS) y microscopa electrnica de transmisin (TEM). Los resultados de DLS son ejemplificados para sistemas de F127 y T1307 al 10% (Figura 2). El tamao de las micelas polimricas libres de frmaco se encuentra en general en el rango entre 5 y 10 nm. La incorporacin de frmaco dentro del ncleo micelar result en la expansin de la micela y el aumento del tamao a valores de hasta 25-30 nm. La presencia de una segunda poblacin de agregados de menor tamao (5-7 nm) indicara que parte de las micelas conserv su tamao. La morfologa fue estudiada por TEM. Los resultados de TEM son ejemplificados con T1307 (10%) en la Figura 3.

Figura 2. Tamao y distribucin de tamaos de micelas de F127 y T1307 al 10% cargadas con efavirenz

158

Figura 3. Micrografas TEM de micelas de T1307 (10%) cargadas con efavirenz. A) Barra = 100 nm y B) Barra = 50 nm.

3.2. DESARROLLO DE LA FORMULACIN

El objetivo central del presente trabajo es el desarrollo de una formulacin concentrada de efavirenz que demuestre estabilidad fisicoqumica y que resulte en el aumento significativo de la biodisponibilidad oral y que adems presente propiedades organolpticas mejoradas. Las esencias de mentol y cereza fueron previamente descriptas como efectivos enmascaradores de sabor picante (SOHI et al., 2004). Adems, el efecto refrescante del mentol calma irritaciones de la mucosa bucal (HUSSEIN; BARCELON, 1991). Un efecto beneficioso similar fue reportado para edulcorantes como sorbitol y acesulfame (SCHIFFMAN et al., 1994). Una vez desarrolladas, las formulaciones, fueron caracterizadas exhaustivamente respecto de la estabilidad fisicoqumica y las propiedades organolpticas.
3.3. ESTABILIDAD FISICOQUMICA DE LAS FORMULACIONES

Dos mecanismos podran afectar la estabilidad de la formulacin: (i) la desagregacin de las micelas y la precipitacin del frmaco y (ii) la hidrlisis de efavirenz. Tanto los poloxmeros como las poloxaminas demuestran un comportamiento dependiente de la temperatura; cuanto menor es la temperatura, mayor es la CMC. Asi, el enfriamiento de la formulacin en condiciones de almacenamiento no controladas podra provocar fenmenos de inestabilidad fsica. A 4o C (una condicin altamente desfavorable que induce la desagregacin micelar), la formulacin a base de F127 demostr alta estabilidad. La concentracin de efavirenz fue 92% de la inicial despus de 1 mes de incubacin en la heladera. Las formulaciones a base de poloxaminas fueron menos estables, observndose la aparicin gradual de un precipitado cristalino. El anlisis espectroscpico y cromatogrfico del precipitado permiti indentificar a efavirenz y confirmar la inestabilidad fsica del sistema de poloxamina en estas condiciones. A temperatura ambiente (24o C), todas las formulaciones demostraron ttulos de efavirenz superiores a 90159

95% despus de un mes de incubacin. Adems, el anlisis cromatogrfico de todas las formulaciones permiti confirmar la ausencia de productos de degradacin de efavirenz y la estabilidad qumica del frmaco bajo estas condiciones (Figura 4).

Figura 4. Estabilidad fisicoqumica de formulaciones de efavirenz. A) Aspecto de las formulaciones despus de 28 das a (a) 24 C y (b) 4 C. B) Termograma de efavirenz y del precipitado cristalino aislado de una formulacin efavirenz/T1307 al da 28. E) Micrografas de microscopa ptica de (a) efavirenz original y (b) precipitado de una formulacin. D) Cromatogramas de HPLC de la formulacin a base de poloxmero F127 a (a) da 0 y (b) 4oC y (c) 24oC despus de 28 das. E) Cromatogramas de HPLC de la formulacin a base de poloxmero T904 a (a) da 0 y (b) 4oC y (c) 24oC despus de 28 das.

160

3.4. ESTABILIDAD FISICOQUMICA DE LAA FORMULACIONES EN CONDICIONES DE DILUCIN

Las formulaciones de efavirenz a base de micelas polimricas fueron diseadas para la administracin oral. Por ello, nos interes evaluar el comportamiento de las mismas en condiciones smil gtricas; la mezcla de la formulacin con el medio gstrico tiene dos efectos de consideracin: (i) la dilucin que puede provocar inestabilidad fsica por la desagregacin micelar y (ii) la acidificacin que puede provocar inestabilidad qumica por la hidrlisis de efavirenz. Cualquiera de ellas podra afectar la concentracin efectiva de frmaco para su aborcin en intestino y finalmente la biodisponibilidad oral. Se considera que los frmacos son diluidos en el volumen gstrico total (~600 ml) (BECKERS et al., 1988). Considerando volmenes de administracin entre 10 y 30 ml, formulaciones a base de F127 y T1307 fueron diludas (1/10, 1/50 y 1/75) e incubadas durante dos semanas a 37oC. La concentracin de frmaco se mantuvo inalterada durante el perodo de estudio en niveles superiores al 98%. Adems, es remarcable que el efavirenz no sufri hidrlisis durante el tiempo del ensayo. As, las formulaciones se mantendran estables fisicoqumicamente en el estmago. Esta alta estabilidad en dilucin tambin permitira eventualmente su dilucin en bebidas para su ingesta.
3.5. Ensayos de sabor. El mejoramiemto de las propiedades organolpticas y la minimizacin del BMS fue un objetivo central del trabajo; BMS est asociado ntimamente a la interrupcin del tratamiento. El Pluronic F127 ha sido aprobado por la Food and Drug Administration y est disponible comercialmente en calidad Farmacopea de EEUU. Adems, las formulaciones a base de este copolmero han demostrado la mayor estabilidad fisicoqumica de todos los sistemas investigados. En este contexto, una formulacin 2% de efavirenz conteniendo 10% de F127 y un sistema similar sin esencias y edulcorantes fue evaluada en ensayos de sabor por voluntarios adultos sanos. Los resultados se presentan en la Tabla 4. La combinacin de esencias de mentol y cereza con sorbitol y acesulfame permitieron mejorar de manera notable el sabor de la formulacin, resultando en tres efectos beneficiosos: (i) postergacin de la aparicin del BMS de 45 segundos a 2,2 minutos, (ii) reduccin de la intensidad del fenmeno de 4 (BMS fuerte) a 2,6 (leve a moderado) y (iii) acortamiento de la duracin de 53 a 36 minutos. En diluciones 1/5 y 1/10 en agua mineral, el agregado de excipientes de sabor redujo la intensidad de moderada a leve y de leve a niveles detectables,

161

respectivamente, y la duracin de 38 a 24 minutos. La deglucin de una cucharada de t (5 ml) de jalea de uva inmediatamente despus del contacto de la muestra con la mucosa bucal tiene un efecto favorable y acorta el tiempo de duracin de la quemazn a 15 minutos. Un efecto similar se observ tras la ingesta de 50 ml de leche chocolatada.
Tabla 4. Ensayos de sabor de una formulacin a base de F127 y su contraparte sin el agregado de esencias y edulcorantes en voluntarios adultos sanos (n = 5). Escala de BMS: 0, no detectable; 1, detectable; 2, leve; 3, moderado; 4, fuerte. Muestra (20 mg/ml) Blanco Muestras originales Jalea de uva (5 ml) Leche chocolatada (50 ml) Dilucin 1/5 Agua Micelas** Formulacin Micelas** Formulacin Micelas** Formulacin Micelas** Formulacin Micelas** Dilucin 1/10 Formulacin Aparicin de BMS (min) 0,65 2,20 0,73 2,49 0,57 6,00 0,79 2,30 0,67 5,05 Intensidad de BMS* 0 3,60 2,60 3,75 2,20 2,80 1,00 2,75 1,60 2,20 1,00 Duracin de BMS (min) 58,0 36,2 23,0 16,8 34,4 19,0* 32,8 23,2 32,8 24,0

*Nota: Dos voluntarios reportaron la ausencia de BMS despus de la ingesta de la formulacin seguida de leche chocolatada (el score de intensidad fue 0). **Micelas cargadas con efavirenz sin esencias ni edulcorantes.

3.6. ENSAYOS FARMACOCINTICOS

Las diferentes muestras de efavirenz en Pluronic F127, suspensin y solucin oleosa, todas con concentracin de frmaco 20 mg/ml, fueron administradas por va oral en ratas (40 g/kg) y la concentracin plasmtica determinada a diferentes tiempos. Las curvas de concentracin plasmtica de la formulacin en funcin del tiempo versus la suspensin y la solucin oleosa se presentan en la Figura 5. Los parmetros farmacocinticos se presentan en la Tabla 5. La Cmx aumenta de 1526 ng/ml en la suspensin y
162

1789 g/ml en la solucin oleosa a 2863 ng/ml en la formulacin de la presente invencin, representando aumentos de 87,6 y 60%, respectivamente. La biodisponibilidad tambin muestra un aumento pronunciado; el AUC aumenta de 15,1 mg/ml/h con la suspensin y 12,6 mg/ml/h con la solucin oleosa a 23,5 mg/ml/h con la formulacin a base de micelas (significa aumentos de 55,6 y 86,5%, respectivamente, en la biodisponibilidad). Adems, nuestros resultados confirmaron la menor biodisponibilidad de la solucin oleosa respecto de la suspensin. Finalmente, se observa un descenso del CV% de la Cmx y el AUC de 42,2 y 62,2% para la suspensin y 39,1 y 50,2% para la solucin oleosa a 29,8 y al 29,4% para la formulacin, respectivamente.

Figura 5. Perfiles plasmticos de efavirenz luego de la administracin oral de una formulacin micelar de F127 al 10%, una suspensin extempornea y una solucin en triglicrido de cadena media. Dosis = 40 mg/kg dosis (n = 10).

Tabla 5. Parmetros frmacocinticos luego de administracin oral de la formulacin a base de Pluronic F127 y de una suspensin y una solucin oleosa. Formulacin Parmetro Promedio CV % Promedio CV % Valor P Promedio CV% Valor P Cmx (ng/ml) Tmx (horas) 2863* 2,85 28,3 40,5 37,1 1526* 2,38 15,1** 42,2 50,0 55,2 0,002 0,050 1789* 2,42 12,6** 61,4 53,0 49,0 0,040 0,018 Suspensin Solucin oleosa

AUC (mg/ml/h) 23,5**

*Cmax de formulacin micelar es significativamente mayor que la suspension y la solucin oleosa. **AUC de formulacin micelar es significativamente mayor que la suspension y la solucin oleosa.

163

4. CONCLUSIONES La nanotecnologa se ha convertido en una herramienta sumamente til para disear medicamentos ms efectivos. Sin embargo, al contrario de lo que ocurre en cncer que no reconoce lmites fsicos o socioeconmicos, VIH/SIDA demuestra una incidencia mayor en poblaciones pobres de pases en vas de desarrollo. Por ello, existe poco inters de la industria farmacutica de invertir recursos en la mejora de la farmacoterapia de esta epidemia. Si bien la nanotecnologa aparece como menos accesible debido a mayores costos de produccin, el desafo cientfico y tico es implementarlas a costos razonables. La contribucin puede ser desde el mejoramiento de las propiedades organolpticas y aspectos tecnolgicos y hasta el diseo de sistemas de liberacin ms sofisticados que permitan direccionar el frmaco a reservorios celulares y anatmicos especficos. Los pacientes peditricos constituyen un grupo de alto riesgo. Ms del 90% de estos pacientes se encuentran en la regin sub-sahariana del continente africano. En este contexto, es sorprendente que la nica formulacin lquida de efavirenz, un frmaco de primera lnea con baja biodisponibilidad oral, no est disponible a todos los pacientes (no hay registro en ANMAT de esta formulacin). Adems, esta formulacin oleosa demuestra biodisponibilidad oral inferior a la forma slida y alta variabilidad inter-individual. Por otro lado, la administracin de altas cantidades de aceite puede provocar trastornos gastrointestinales que pueden afectar la aceptacin y adherencia al tratamiento. As, la nica opcin es la preparacin de una formulacin magistral. La encapsulacin de efavirenz en micelas polimricas permiti aumentar la solubilidad del frmaco ms de 5000 veces y preparar una formulacin acuosa concentrada del frmaco (20 mg/ml). Esta formulacin es compatible con la administracin de las dosis comnmente utilizadas (200 a 600 mg/da). Las ventajas ms destacables de los copolmeros usados son (i) disponibilidad comercial en un amplio espectro de pesos moleculares y composiciones relativas y (ii) aprobacin de varios derivados por la FDA (EEUU) y EMEA (Europa) para uso en productos farmacuticos y dispositivos mdicos. La formulacin elegida para ensayos de sabor y evaluacin preclnica demostr alta estabilidad fisicoqumica y una mejora sustancial de las propiedades organolpticas. Finalmente, los ensayos preclnicos evidenciaron un aumento significativo de la biodisponibilidad oral y una cada importante de la variabilidad inter-individual.

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MUELLER, B.U.; SLEASMAN, J.; NELSON JR, R.P.; SMITH, S.; DEUTSCH, P.J.; JU, W.; STEINBERG, S.M.; BALIS, F.M.; JAROSINSKI, P.F.; BROUWERS, P.; MISTRY, G.; WINCHELL, G.; ZWERSKI, S.; SEI, S.; WOOD, L.V.; ZEICHNER, S.; PIZZO, P.A. A phase I/II Study of the protease inhibitor indinavir in children with HIV infection. Pediatrics. v. 102, p. 101-109, 1998. NAKASHIMA, K.; ANZAI, T.; FUJIMOTO, Y. Fluorescence studies on the properties of a Pluronic F68 micelle. Langmuir. v. 10, p. 658-661, 1994. NUNN, T.; WILLIAMS, J. Formulation of medicines for children. Br. J. Clin. Pharmacol. v. 59, p. 674-676, 2005. PANEL OF CLINICAL PRACTICES FOR TREATMENT OF HIV INFECTION. Pan. Am. J. Public Health, v. 10, p. 426-435, 2001. RABEL, S.R.; SUN, S.; MAURIN, M.B. Electronic and resonance effects on the ionization of structural analogues of efavirenz. AAPS PharmSciTech v. 3, article 28, 2001. REEVE, L. In: Handbook of Biodegradble Polymers (Drug Targeting and Delivery, vol. 7), 1st ed. Domb, A.; Kost, Y.; Wiseman D. Eds., Harwood Academic Publishers: London, Great Britain, 1997. SCHIFFMAN, S.S.; GATLIN, L.A.; SATTELY-MILLER, E.A.; GRAHAM, B.G.; HEIMAN, S.A.; STAGNER, W.C.; ERICKSON, R.P. The effect of sweeteners on bitter taste in young and elderly subjects. Brain Res. Bull. v. 35, p. 189-204, 1994. SHAH, C.A. Adherence to high activity antiretroviral therapy (HAART) in pediatric patients infected with HIV: Issues and interventions. Indian J. Pediatr. v. 74, p. 55-60, 2007. SMART, T. Children with HIV are being left behind in the rollout of antiretroviral therapy. HIV & AIDS Treatment in Practice HATIP #40, January 28th, 2005. SOHI, H.; SULTANA, Y.; KHAR, R.K. Taste masking technologies in oral pharmaceuticals: recent developments and approaches. Drug Dev. Ind. Pharm. v. 30, p. 429-448, 2004. SOSNIK, A.; CARCABOSO, A.M.; CHIAPPETTA, D.A. Polymeric Nanocarriers: New endeavors for the optimization of the technological aspects of drugs. Recent Pat. Biomed. Eng. v. 1, p. 43-59, 2008.

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NOTA SOBRE OS AUTORES

CATEGORIA INICIAO CIENTFICA 1 LUGAR Gabriela Schaab da Silva (autora do trabalho), 18 anos, brasileira, aluna do Ensino Mdio e Tcnico em Qumica na Fundao Escola Tcnica Liberato Salzano Vieira da Cunha de Novo Hamburgo (RS), com trmino em 2011. Conhecimentos avanados em ingls e intermedirios em espanhol e alemo. Experincia no exterior (Irlanda em 2009, Uruguai em 2002 e Alemanha em 2000). Elaborao de projetos de pesquisa nas reas de Meio Ambiente, Bioqumica e Nanotecnologia, de 2007 a 2010, com duas participaes na FEBRACE (SP- Brasil), duas participaes na MOSTRATEC (NH- Brasil), uma participao na MILSET (MA- Brasil) e uma participao na INTEL ISEF (CA- Estados Unidos). Projeto premiado na rea da sade (2010). Kawoana Trautman Vianna (autora do trabalho), 18 anos, brasileira, aluna do Ensino Mdio e Tcnico em Qumica na Fundao Escola Tcnica Liberato Salzano Vieira da Cunha de Novo Hamburgo (RS), com trmino em 2011. Conhecimento intermedirio em ingls. Participao na Olimpada de Qumica do Rio Grande do Sul (2007 8 Lugar do RS) e do Brasil (2008). Elaborao de projetos de pesquisa nas reas de Meio Ambiente, Bioqumica e Nanotecnologia, de 2007 a 2010, com duas participaes na FEBRACE (SP- Brasil), trs participaes na MOSTRATEC (NH- Brasil), uma participao na MILSET (MA- Brasil) e uma participao na INTEL ISEF (CA- Estados Unidos). Projeto premiado na rea da sade (2010). Slvia Stanisuaski Guterres (Professora-orientadora do trabalho), 49 anos, brasileira, possui graduao em Faculdade de Farmcia pela Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS-1985), mestrado em Programa de Ps Graduao Cincias Farmacuticas pela UFRGS (1990) e doutorado em Facult de Pharmacie Universite de Paris XI (Paris-Sud) (1995). Atual-

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mente professor associado III da UFRGS, atua na rea de nanobiotecnologia e tecnologia farmacutica, tem artigos e patentes publicados no tema e orientou vrios mestres e doutores. a Coordenadora de Rede Nanocosmticos (CNPq/MCT-2005), membro do Conselho Superior do Centro de Microscopia da UFRGS, do Centro de Nanocincia da UFRGS (Cnano) e coordenadora da Rede Nanotecnologia Farmacutica da CAPES. CATEGORIA ESTUDANTE UNIVERSITRIO 1 LUGAR Daniel Grasseschi (autor do trabalho), 22 anos, brasileiro, aluno do 8 semestre do curso de Bacharelado em Qumica da Universidade de So Paulo (USP). Participa do projeto de pesquisa de desenvolvimento de sensores SERS utilizando nanorods metlicos. Henrique Eisi Toma (Professor-orientador do trabalho), 61 anos, brasileiro, Professor Titular e Coordenador do Laboratrio de Nanotecnologia Molecular da USP. Qumico pela Universidade de So Paulo (USP), doutorou-se em 1974 e fez pos-doutorado na CALTECH. Foi Chefe do Departamento de Qumica da USP e Pesquisador 1A do CNPq. Publicou 300 artigos cientficos, com 5.000 citaes (h = 34). Autor de 7 livros, orientou 57 mestrados e doutorados. Recebeu 15 prmios nacionais e internacionais, incluindo o TWAS Chemistry Prize, Guggenheim Award 1999, Fritz-Feigl 2001, Gr-Cruz da Ordem Nacional do Merito Cientfico 2006. Membro da Academia Brasileira de Cincias e do Third World Academy of Sciences (TWAS). CATEGORIA JOVEM PESQUISADOR 1 LUGAR Joner Oliveira Alves, 28 anos, brasileiro, Bacharel em Fsica e Mestre em Engenharia de Materiais pela Universidade Federal de Ouro Preto (UFOP). Atuou como professor no Instituto Federal de Minas Gerais (IFMG), no campus Ouro Preto, e como pesquisador visitante na Northeastern University (Boston, EUA). Atualmente Doutorando em Engenharia Metalrgica e de Materiais na Universidade de So Paulo (USP) e Pesquisador pleno da ArcelorMittal Inox Brasil. Possui experincia em ensino e pesquisa, sendo suas principais reas de interesse: nanotecnologia, siderurgia e tratamento de resduos.

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CATEGORIA INTEGRAO 1 LUGAR Aldo Felix Craievich, 71 anos, brasileiro, nascido na Argentina, Bacharel (1964) e Doutor (1969) em Fsica pelo Instituto Balseiro da Universidad Nacional de Cuyo, localizada em Bariloche/Argentina, com tese de doutorado realizada na Universit Paris-Sud, Frana (1966-69). Desenvolve pesquisas sobre propriedades estruturais de nanomateriais utilizando principalmente tcnicas de espalhamento e absoro de raios X, havendo publicado cerca de 250 artigos que receberam aproximadamente 2500 citaes. Foi Diretor e Chefe do Departamento Cientfico do Laboratrio Nacional de Luz Sncrotron (LNLS) do CNPq, Campinas-SP (1987-97), e Chefe do Departamento de Fsica Aplicada (2002-06) e Presidente da Comisso de Pesquisa (2007-08) do Instituto de Fsica da Universidade de So Paulo (USP). Desde 1980 Membro Titular da Academia de Cincias do Estado de So Paulo e, desde 1990, possui Bolsa de Produtividade em Pesquisa do CNPq em Nvel 1A. Noem Elisabeth Walse de Reca, 73 aos, argentina, Doctora en Qumica de la Universidad de Buenos Aires, 1966, se especializ en Ciencia de Materiales en Technische Hochschule-Mnchen (Alemania), Centre d Etudes Nucleaires de Saclay (Francia) y Universit d Orsay (Francia). Directora del Centro de INvestigaciones en SOlidos (CINSO) CONICET-CITEFA e Investigador Superior del CONICET. Desde 2007: Acadmica Correspondiente, Academia Nacional de Ciencias Exactas, Fsicas y Naturales. Public aproximadamente 300 trabajos cientficos en revistas argentinas e internacionales, obtuvo 16 patentes de invencin. Ha dirigido 33 tesis de grado y doctorado y numerosos trabajos de becarios. Su rea de investigacin actual abarca: Materiales Nanoestructurados: Sntesis, Caracterizacin y Aplicaciones (Sensores de Gases y Celdas de Combustible) y Semiconductores monocristalinos para deteccin de radiaciones infrarroja, gama y X. Ha recibido numerosos premios por su trabajo cientfico. Diego Germn Lamas, 43 aos, argentino, investigador independiente de CONICET, investigador principal de CITEDEF (actualmente con licencia) y recientemente se incorpor a la Universidad Nacional del Comahue como profesor asociado. Se licenci en Fsica en 1992 y se doctor en 1999 en la Universidad de Buenos Aires. En 1993 ingres al Centro de Investigaciones en Slidos, CONICET-CITEDEF, donde realiz las investigaciones de su tesis de doctorado y desde el ao 2001 dirigi el rea de nanomateriales para

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celdas de combustible de xido slido. Public 66 trabajos en revistas internacionales y dirigi 4 tesis de doctorado y 4 de grado. En 2005 recibi el Premio Houssay de la SECyT y en 2007 el Premio Schumacher de la Academia Nacional de Ciencias Exactas, Fsicas y Naturales. Marcia Carvalho de Abreu Fantini, 54 anos, brasileira, Doutora em Fsica pelo IFGW-UNICAMP, Campinas, Brasil, em 1985. De 1987 a 1989 realizou ps-doutorado no Department of Physics do Brooklyn College da CUNY, NY, EUA. Desde 1989 professora do IF-USP, So Paulo, Brasil. Obteve os ttulos de Livre-Docente em 1995 e de Titular em 2008. Trabalha na investigao das propriedades morfolgicas e estruturais de materiais utilizando raios X. Publicou 94 artigos em revistas cientficas e uma patente internacional. Orientou 28 estudantes. No projeto de colaborao entre IFUSP e CINSO-CONICETCITEFA trabalhou com a tcnica de EXAFS para a elaborao de modelos estruturais. CATEGORIA INICIAO CIENTFICA MENO HONROSA Brian Samir Gins Bejarano (autor del trabajo), 18 aos, paraguayo, estudiante del 2do. Curso del Colegio Iberoamericano; presidente del Club de Ciencias Galileo Galilei y de la Academia Literaria ALSPV; Secretario General de la R.E.A.L.; Miembro de la CONADEH; Escritor del Centro Astronmico Bicentenario; Ganador del 1er. Puesto del Premio Mercosur de Ciencia y Tecnologa 2009 - Categora Iniciacin Cientfica; Premio Juvenil de Ciencias Pierre et Marie Curie; Paraguayo Sobresaliente del Ao 2009 por el diario ltima Hora; Miembro de la Coordinacin del Plan Nacional de Lectura; Miembro de la Comisin de Jvenes Emprendedores de la UIP; Investigador con varios trabajos cientficos realizados. Fanny Elizabeth Florentn de Gonzalez (profesora-orientadora), 43 aos, paraguaya, de profesin Qumica Analtica, es egresada de la Universidad Nacional de Asuncin, en la Facultad de Qumica, y habilitada para la Docencia del Instituto Superior de Educacin (I.S.E.). Ejerce la docencia en el Colegio Iberoamericano en las ctedras de Ciencias de la Naturaleza, Salud, y Qumica; adems, es profesora en el Colegio Nacional San Vicente de Pal, Colegio Nacional Vicepresidente Snchez, y en la Universidad Iberoamericana. Asimismo, es asesora del Club de Ciencias Galileo Galilei del Colegio Iberoamericano.

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CATEGORIA ESTUDANTE UNIVERSITRIO MENO HONROSA Paulo Euzbio Cabral Filho (autor do trabalho), 22 anos, brasileiro, graduando do 6 semestre do curso de Biomedicina pela Universidade Federal de Pernambuco (UFPE), onde exerce atividades de monitoria, extenso e pesquisa. Atualmente aluno de iniciao cientfica do PIBIC/FACEPE/ CNPq desenvolvendo, na UFPE, o projeto intitulado: Nanocristais Fluorescentes de Semicondutores para Caracterizao de Sistemas Biolgicos Imunomarcao de Antgenos Eritrocitrios A. Participa dos grupos de pesquisas Nanoestruturas e Interfaces Biolgicas e ptica Biomdica. Trabalha na rea de biofotnica com microscopia de fluorescncia e pontos qunticos para aplicaes biolgicas sob a orientao da professora Adriana Fontes e co-orientaes de Beate S. Santos e Patrcia M. A. Farias. Adriana Fontes (Professora-orientadora do trabalho), 35 anos, brasileira, possui bacharelado (1996), mestrado (2000) e doutorado (2004) em Fsica pela Universidade Estadual de Campinas. Atualmente professora adjunta da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE), onde exerce atividades de ensino e pesquisa e orienta alunos de graduao, mestrado e doutorado. bolsista de produtividade em pesquisa nvel 2 do CNPq e jovem membro afiliado da Academia Brasileira de Cincias. Recebeu o Grant Lreal em Cincias Fsicas em 2008 para jovens mulheres da Cincia, uma iniciativa da ABC, Lreal e UNESCO. Trabalha na rea de biofotnica utilizando pinas pticas, microscopias, espectroscopias e pontos qunticos para investigao de sistemas biolgicos. co-lder do grupo de ptica Biomdica. membro do grupo de pesquisa em Nanoestruturas e Interfaces Biolgicas, onde desenvolve projetos em conjunto com Beate S. Santos e Patrcia M. A. Farias. CATEGORIA JOVEM PESQUISADOR MENO HONROSA Diego Andres Chiappetta, 35 aos, argentino, se gradu de Farmacutico en la Facultad de Farmacia y Bioqumica de la Universidad de Buenos Aires (UBA) en 2001, donde obtuvo tambin el ttulo de Doctor de la Universidad de Buenos Aires en 2006. Actualmente es Profesor Adjunto en la Ctedra de Farmacotecnia I de la Facultad de Farmacia y Bioqumica de la UBA e Investigador Asistente del CONICET. Hasta el momento ha publicado 30 trabajos en revistas nacionales e internacionales y presentado 40 trabajos en Congresos nacionales e internacionales. Ha dictado varios seminarios en mbitos acadmicos o de reuniones cientficas y participa en proyectos vinculados con la Nanotecnologa Farmacutica.

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NOTA SOBRE OS MEMBROS DA COMISSO DE AVALIAO

Professor Ary Mergulho Filho, UNESCO/Brasil, Presidente da Comisso de Avaliao Brasileiro com mestrado em Cincias pelo Instituto Tecnolgico da Aeronutica (ITA). Atuou como empresrio e consultor de empresas. Orientou mais de sessenta trabalhos acadmicos de graduao em 19 anos como professor universitrio. Na esfera pblica, atuou no Conselho de Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico (CNPq) e no Ministrio da Cincia e Tecnologia na formulao e implantao de polticas para o setor. Atualmente Oficial de Cincia e Tecnologia da UNESCO no Brasil. Professor Guillermo R. Castro, Representante da RECyT/Argentina Argentino, Licenciado en Ciencias Qumicas de la Universidad de Buenos Aires, Doctor de la Universidad de Buenos Aires en el rea de Ciencias Qumicas. Becario de la Fundacin PEW (EE.UU.); Director del Laboratorio de Nanobiomateriales, CINDEFI (Argentina). Prof. Adjunto de la Facultad de Ciencias Exactas de la Universidad Nacional de La Plata (Argentina); Adjunct Professor, Department of Biomedical Engineering, Tufts University (EE.UU.), Investigador CONICET (Argentina). Represent a la Fundacin Argentina de Nanotecnologa en la Comisin. Professor Joel Camargo Rubim, Representante da RECyT/Brasil Brasileiro com doutorado em Qumica pela USP, com ps-doutorado na Universidade de Dsseldorf (Alemanha) como bolsista da Fundao Alexander von Humboldt. Foi Professor do Instituto de Qumica da USP (19831998), onde obteve o ttulo de Professor Livre Docente (1993). Desde 1998 Professor do Instituto de Qumica da Universidade de Braslia, onde coordena o Laboratrio de Materiais e Combustveis (LMC). Pesquisador 1B do CNPq.
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Professor Juliano Chaker, Representante da RECyT/Brasil Brasileiro, Qumico com doutorado na rea de Cincia de Materiais e FsicoQumica, pela Universidade de Paris XI e Universidade Estadual Paulista UNESP. Atua na rea de nanotecnologia, com nfase em sntese e elaborao de materiais multifuncionais e tcnicas avanadas de caracterizao por radiao Sncrotron. Tem interao efetiva com renomados grupos de pesquisa no pas e no exterior e conta com publicaes em revistas de alto ndice de impacto. Desenvolve projetos com temas envolvendo a polmeros orgnicoinorgnicos para liberao controlada de frmacos, membranas PEM para clulas combustvel e nanopartculas antitumorais para terapia do cncer.

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