PRCTICA No.

4: DETERMINACIN DE LINEALIDAD Y SENSIBILIDAD DEL MTODO ANALTICO PARA RANITIDINA Gutirrez Luna Williams Hernndez Martnez Denisse Mndez Hernndez Mayahuel Rosales Huerta Fernando Prez Gutirrez Rebeca Aurora

OBJETIVO Que el alumno elabore una curva patrn de ranitidina comprimidos orales 300mg en un medio acuoso y determine la sensibilidad, la linealidad as como el lmite de deteccin del mtodo analtico. FUNDAMENTO Los mtodos analticos utilizados para evaluar la calidad de los productos farmacuticos, estn sujetos a varios requisitos de acuerdo, a la normatividad vigente, as como, con otros documentos normativos nacionales e internacionales. Los mtodos analticos de La Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos (FEUM) no requieren ser validados, sino unicamente verificar su aplicabilidad al producto, bajo las condiciones de operacin del laboratorio y en funcin del propsito analtico deseado. El proceso de validacin de los mtodos analticos puede comprender pero no est limitado al estudio de las carctersitcas de desempeo como son: verificacin del sistema, precisin del sistema, linealidad del sistema, especificidad/selectividad del mtodo, exactitud del mtodo, linealidad e intervalo del mtodo, precisin del mtodo, lmite de deteccin del mtodo, lmite de cuantificacin del mtodo, robustez del mtodo y tolerancia del mtodo. Linealidad del sistema Cuando la relacin entre la concentracin y la respuesta del analito (o sus transformaciones matemticas) no es lineal dentro del intervalo de trabajo, dar lugar a inexactitud del mtodo analtico, por lo que, es conveniente verificarlo bajo las condiciones del laboratorio. La linealidad del sistema es la verificacin de que la respuesta analtica y la concentracin del analito(puede ser una sustancia de referencia) se ajustan al

modelo matemtico, en un intervalo de concentraciones pertinentes a la aplicacin analtica. Determinacin. Se debe investigar la relacin concentracin-respuesta en un intervalo que incluya al menos 5 niveles, por triplicado, de la concentracin del analito. El intervalo debe incluir las concentraciones esperadas del analito segn la aplicacin analtica del mtodo. Este concepto generalmente se denomina "curva de calibracin" y es parte esencial de varios mtodos analticos en las determinaciones cuantitativas del analito. Anlisis de datos. Estimar los parmetros del modelo basado en mtodos estadsticos (mnimos cuadrados, mxima verosimilitud, etc.). Deben establecerse criterios de aceptacin para definir la calidad de ajuste al modelo, que como mnimo consideren un efecto significativo del modelo, una magnitud mnima del coeficiente de determinacin o una prueba estadstica de falta de ajuste. Sensibilidad del mtodo La sensibilidad se define como el cambio en la respuesta de un instrumento de medicin dividido por el cambio en el estmulo correspondiente. Es el cambio de la respuesta del instrumental que se corresponde con el cambio de la concentracin del analito. Dentro del rango lineal de un mtodo, si se interpreta la curva de respuesta, la sensibilidad es un parmetro til para calcular y usar la formula de cuantificacin. En algunas ocasiones se usa la sensibilidad para referirse al lmite de deteccin del equipo. Tambin encontramos en las guas ICH a la sensibilidad definida como la pendiente de la curva de calibracin, ya que esta define la razn de cambio de la propiedad medida por unidad de concentracin. Espectroscopa La espectrofotometra es el mtodo de anlisis ptico ms usado en las investigaciones biolgicas. El espectrofotmetro es un instrumento que permite comparar la radiacin absorbida o transmitida por una solucin que contiene una cantidad desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia. Cuando la luz atraviesa una sustancia, parte de la energa es absorbida; la energa radiante no puede producir ningn efecto sin ser absorbida. Para tener esta relacin

se emplea la ley de beer-lambert, que establece que para una misma especie absorbente en una celda de espesor constante, la absorbancia es directamente Limitaciones de la ley de Lambert-Beer Esta ley permite establecer una relacin lineal entre absorbancia y concentraciones de una especie absorbente a una temperatura dada. La representacin de absorbancia frente a concentracin es una recta que pasa por el origen. Sin embargo, se encuentran frecuentes desviaciones con relacin a la proporcionalidad directa entre absorbancias y concentraciones que limitan la aplicacin de la ley. Las principales causas son: La concentracin slo es aplicable a disoluciones diluidas (<10-2 M); en disoluciones concentradas la distancia entre partculas absorbentes es tan pequea que se produce una modificacin en la distribucin de cargas de las mismas, lo que se traduce en una alteracin en la capacidad de absorcin a una longitud de onda determinada. Este efecto se puede eliminar mediante dilucin. Utilizacin de radiacin no monocromtica, puesto que la ley est definida para radiaciones con una sola longitud de onda. Sin embargo, si la calidad del equipo no es buena, se obtienen bandas de radiaciones con un estrecho intervalo de longitudes de onda. Falta de uniformidad de la muestra o especie absorbente, o presencia de impurezas. Desviaciones qumicas, debidas a reacciones del absorbente con el disolvente, como en el caso del dicromato en disoluciones no amortiguadas. Un mtodo analtico, depende del sistema qumico observado y de la calidad de los instrumentos utilizados para observarlo.

Farmacocintica Despus de su administracin oral, la mxima concentracin plasmtica se alcanza dentro de la 2a-3a hora y de 15 minutos cuando es administrado intravenosamente; los alimentos no interfieren con su absorcin, posterior a su administracin oral de 300 mg las concentraciones plasmticas oscilan entre 600-1100 ng/ml, la biodisponibilidad es de 50% y su volumen de distribucin es de 1.2 a 1.8 l/kg. (Volont y cols., 2006)

METODOLOGIA
1. Tomar del polvo equivalente la cantidad equivalente de 50mg de clorhidrato

de ranitidina (Grado SRef) y pasarlos a un matraz volumtrico de 50ml, aforarlo con agua y mezcar. 2. Tomar una alcuota de 10ml de la solucin anterior y llevarlo a un matraz volumtrico de 100ml, aforar con agua y mezclar (esta solucin madre contiene 100 g/ml).
3. Posteriormente se llevaron a cabo diluciones a diferentes concentraciones,

tomando alcuotas de 1, 1.5, 2, 2.5 y 3 mL. Que representaban concentraciones de: 4, 6, 8, 10, 12 g respectivamente, llevando cada una a un volumen de 25ml. 4. Tomando en cuenta informacin analtica que indica la absorcin de energa de la ranitidina a una longitud de onda de 314nm mediante espectrofotometra UV, se procedi a realizar el anlisis de cada concentracin bajo las condiciones sealadas. RESULTADOS

La grafica muestra en el eje de las abscisas, las distintas concentraciones que se elaboraron a partir de la sustancia de Referencia (SRef) de clorhidrato de ranitidina, el eje de las ordenadas corresponden a las absorbancias obtenidas mediante el anlisis de las disoluciones a las concentraciones anteriormente mencionadas a de 314 nm en celdas de cuarzo. El anlisis estadstico aplicado fue regresin lineal, se determin la ecuacin de la recta ajustada (y=0.0916x + 0.0834) y el coeficiente de correlacin (r2=0.9987) DISCUSION Se realiz la curva de calibracin con cinco niveles de concentracin diferentes, tal como se describe en la FEUM para la validacin de mtodos analticos, no se realiz por triplicado por lo que no se pudo determinar reproducibilidad y no se elimina el sesgo de la medicin. De acuerdo a los parmetros para evaluar sensibilidad (Guas ICH) la sensibilidad corresponde a la pendiente (0.0919) y este valor se representa en funcin de las unidades de concentracin, es decir, la sensibilidad obtenida es de 0.0919 g. La linealidad del mtodo se expresa como el

ndice de correlacin entre concentracin y absorbancia, al calcular r2 =0.9987 o expresado en porcentaje 99.87% nos indica que del 100% del cambio en la absorbancia el 99.87% es explicado en trminos de la concentracin de Ranitidina de la solucin analizada y el restante 0.13% (0.0013) es por factores externos a la concentracin; bajo los criterios de aceptacin (<0.005) se considera un mtodo lineal. A pesar de que el valor de r2 en parmetros de desempeo nos establece la selectividad/especificidad del mtodo, no es posible determinarla ya que slo un analito se encontraba en la muestra: la Sustancia de Referencia. El intervalo de concentraciones va de 4 a 12g/mL cuando lo reportado para las concentraciones plasmticas es de 6 a 11 g/mL. CONCLUSION El mtodo propuesto para la cuantificacin de Clorhidrato de Ranitidina a partitr de muestras plasmticas es lineal y sensible, adems se encuentra en el rango que se sabe el intervalo de biodisponibilidad farmacutica de la presentacin de 300mg sin embargo se desconoce su reproducibilidad por falta de datos.

BIBLIOGRAFA Validacin de Mtodos Analiticos, FEUM, Novena Edicin pp 2427-34 ICH: Guidance for Industry Q7A Good Manufacturin Practice Guidance for Active Pharmaceutical Ingredients. Agosto 2001 Volont* M.G.,Snchez L., Pasquale M.E., Gaviria M. Equivalencia farmacutica de comprimidos de 300mg de Ranitidina;. Act. Farm. Bonaerense 25(3):393-400 2006.