Arie a l t l si k SEKRESI INTERLEUKIN-8 (IL-8) DAN HUBUNGANNYA DENGAN TINGKAT KEP ARAHAN PENYAKIT INFEKSI DENGUE * DM W ia d n, NN Ay De , * u S mi h n a i* u wi* Ag s o a * ga Bikmi

F Un dDe p s r* Ba inImuP n a iDaa F Un dRS S n lh Ba in o i a K u n a a, * ga l e y kt lm K u / UP a ga De p s r n aa

emald h n a i y h o o d - i mwia d n@ a o .c .i :
ABS TRACT I NTERLEUKI 8(L- )S N- I 8 ECRETI ON AND RELATI W I THE S ON TH EVERI OFDENGUE I ECTI TY NF ON Elv t n o I 8 wa f u d i ma y vrlifcin icu ed n u ifcin a d rltd t teice s so i n s e ai f Lo s o n n n ia n e t n ld e g e n e t o o n eae o h n ra e f l e s l g a ain Th am o su yi t k o tes ceino I 8a dterlt nwi tes v rt o teds a eta c u e b d n u rd t . e i f td s o n w h e rt f L- n h eai o o o t h e ei fh ie s h t a s d y e g e h y vrln e t nta h s i l e a S n lhh s i lTh r wee58p t nsta da n s dwi d n u h e rh gcfv r a e ia ifci h t o pt i d t a ga o pt . ee r o az a ai t h t ig o e t e g e a mo r a i e e b s d e h o W HO ci ro . Th s s mpe c n ito 38 p t nso DHF g a eI( l)a d 20 p t nso DHF g a eI, I a d I n rt in o e a ls o ss f e ai t f e rd mi n d ai t f e rd I II n V (e ee. S r m wa tk na dte telv l fI 8wa e a n db ELI A meh dwi mir paera e i 450n wa e s v r) eu s a e n h n h e e o L- s x mie y S to t co lt e d r n h m v ln t ( iM eiu Re d r250 . Th d t wa a aiesait al wi n np rmercme s rme tTh rs l s o dta e gh bo re x a e ) e aa s n l tt i l z s c y t o aa ti a u e n. e e ut h we h t h teeweesg iia tdfee c so I 8 lv lb t e h aty p o l (o to)a d s mpe ,a d b t e mi a d s v r h r r infc n ifrn e f L- e e ewe n e l h e pe c nr l n a ls n ewe n l n e ee d p t ns Wec n ld ta ice s o I 8lv l eae t s v rt o d n u vrln e t n ai t. e o cu e h tn ra e f L- e e rltd o e ei f e g e ia ifci . y o Ke wo d : nelu i- , e g eifcin ELI A y r s I tre kn 8 d n u n e t , S o

P ENDAHULUAN De m d n u d n d ma b r aa d n u ma e g e a e m ed rh e g e meu a a p n a i vr se d mi d n g r- e aa r p k n e y kt iu n e s i e aan g r to i d ns bto i. P n a iii ie a k noe e a r ps a u r ps e y ktn ds b b a lh mp t s r tp vr sd n u y n dtlr a oe n a k eoie iu e g e a g iuak n lh y mu Aedes aegypti. Viu d n u s r tp 3 me u a a r s e g e eoie rp k n s r t e y n p l g d mia d n ea h b n a n a eoi a g ai o n n a rt u u g n y p n d n a k s sy n b rt a k nk main1 e g n a u a g ea b h a e t . a I f k i v r s d n u p d ma u i n e s iu e g e a a n sa me g kb ta s aus e tu ma ie ts kii y n n a iak n u t p kr m nfsa i l s a g n b r ais a tr p n a ip l grn a ( d u dif ev ra i naa e y kt ai ig n mil n f n er en tiated f r e il ess) d ma d n u ( , e m eb il l n , e m e g e DD) d ma

b r aa d n u ( ed rh e g e DBD/ gu h den e aemo r agicf er d n rh ev ) a d ma b r aa d n u ds ra rnaa ( gu sh c e m ed rh e g e ietie jtn den e o k syn o DS ) Ga aa kii d ma b r aa d n dr me/ S .2 mb rn l s e m ed rh e n g e b rta tr li p r aa a ,h p t me aid n u ea n aa an ed rh n e ao g l a k b c rnpa ma P o u s stknd na t a is l e o o a ls . r d k i i i a ki s e T o v me u a a h lp n i g d lm p t g n ss d ma r p k n a e tn aa ao e e i e m b r aa d n u .3 ed rh e g e Diekrk nlbhd r 50jt ifk i iu d n p r ia a e i ai ua n e s vr s e g etra i i eu u d nas t pth n4 Di ma S kt u ejd d s lr h u i ei a u . a Ru h a i S n lhs lma5 th n( 9 20 2) ia ak n6 0 a ga ea a u 19 7 0 dd p ta 9 6 k s sDD d n DBD, eb n a p d a lth n 20 2 au a tr a y k a a wa a u 0 (a u r Ap i 237 k s s aa tra ip nn k tn J n ai rl , 9 a u ) tu ejd e ig aa s ktrs p lh k l l a db n ig a p ro e y n e i e uu ai i t ia dn k n eid a g a p 25

S k e i nelu i- , I 8 d nh b n a n ad n a Tig a Ke aa a P n a i I fk i n u e rs I tre kn 8 (L- ) a u u g n y e g n n k t p rh n e y kt n e s De g e DM Wih dan NN AyuDewi, s S mia an i, Agu o

sama tahun sebelumnya.5 Penelitian oleh Mahendra et 6 al.pada bulan April 2001 Maret 2002 didapatkan 1830 pasien DBD, sebanyak 9 kasus datang dengan grade 4, sebanyak 7 diantaranya meninggal (case fatality rate 0,38%). Infeksi virus dengue in vitro pada sel myeloid ataupun sel endotel manusia dilaporkan dapat memicu sekresi berbagai khemokin seperti MIP-1, MIP-1b dan interleukin-8.7 Pasien dengan infeksi dengue akut dilaporkan mengalami peningkatan ekspresi gen khemokin dalam darah perifer. Hal ini diduga berkontribusi pada inflamasi dan patogenesis penyakit, akan tetapi mekanismenya belum jelas. Peningkatan kadar khemokin dalam sirkulasi berkontribusi terhadap patogenesis penyakit dengue.8 Peningkatan kadar interleukin-8 (IL-8) ditemukan pada berbagai infeksi virus termasuk dengue. Peningkatan kadar IL-8 dalam serum dan RNA IL-8 dalam monosit berkaitan dengan peningkatan keparahan demam berdarah dengue. Hal ini menunjukkan bahwa IL-8 kemungkinan memegang peranan penting dalam peningkatan derajat keparahan dan bahkan kematian. Koagulopati intravaskuler yang ditemukan pada demam berdarah dengue kemungkinan juga merupakan efek dari IL-8. Kadar IL-8 lokal yang tinggi juga berkaitan dengan efusi pleura.9 Oleh karena itu perlu dilakukan upaya untuk mencari hubungan antara derajat keparahan infeksi dengue dengan kadar IL-8, sehingga hal ini dapat menjadi indikator yang berguna untuk memperkirakan dampak serius dari infeksi dengue. BAHAN DAN CARA Penelitian ini merupakan studi cross sectional analitik yang dilakukan terhadap penderita infeksi dengue yang dirawat di RS Sanglah. Populasi penelitian adalah penderita infeksi dengue yang dirawat di RS Sanglah Denpasar, yang memenuhi kriteria sebagai berikut: (1) Penderita infeksi dengue yang ditegakkan

berdasarkan kriteria diagnosa kerja DBD menurut WHO tahun 1997 dan hasil serologi dengue positif, (2) Dirawat di RS Sanglah Denpasar dan (3) Bersedia ikut serta dalam penelitian yang dinyatakan dengan informed consent. Perkiraan besar sampel minimal untuk penelitian ini dihitung dengan rumus: z+ z N =2 1-2
2

Dari rumus tersebut diperoleh jumlah sampel minimal yang harus dipenuhi sebesar 58 sampel. Cara pemilihan sampel dilakukan secara konsekutif, di mana semua subyek yang datang dan memenuhi kriteria pemilihan dimasukkan dalam penelitian sampai jumlah sampel yang diperlukan terpenuhi. Data yang diperoleh dari penelitian dianalisa dengan uji nonparametrik menggunakan komputer. Darah kontrol dan pasien sebanyak 2 ml ditampung dalam tabung dan disentrifus dengan kecepatan 3000 rpm selama 15 menit untuk mendapatkan serum. Serum disimpan pada suhu -20oC sebelum dipergunakan. Standard Diluent Buffer sebanyak 50 l dimasukkan ke dalam masing-masing well, kecuali well untuk blanko dibiarkan kosong. Selanjutnya dimasukkan 50 l standar (0; 31,2; 62,5; 250; 1000 pg/mL), 125; 500; serum kontrol dan serum pasien ke well yang sesuai dan ditambahkan 50 l biotinylated anti I -8 Plate ditutup L . dan diinkubasi pada suhu kamar selama 1,5 jam. Cairan di dalam well dibuang dan dicuci sebanyak 4 kali menggunakan washing buffer. Streptavidin-HRP working solution sebanyak 100 l dimasukkan ke dalam masing-masing well kecuali well untuk blanko. Plate ditutup kembali dan diinkubasi pada suhu kamar selama 30 menit. Cairan dibuang dan well dicuci sebanyak 4 26

kali menggunakan washing buffer. Selanjutnya ke dalam semua well ditambahkan 100 l stabiliz chromogen ed dan diinkubasi pada suhu kamar dan tempat gelap selama 30 menit. Untuk menghentikan reaksi, ditambahkan stop solution sebanyak 100 l ke dalam semua well dan dibaca absorbansinya pada panjang gelombang 450 nm. Pengukuran kadar IL-8 dilakukan dengan cara membuat kurva standar kadar IL-8 terlebih dahulu. HASIL Pasien sejumlah 58 orang yang didiagnosa menderita infeksi dengue berdasarkan diagnosa kerja menurut WHO (1997) dan ditunjang hasil serologi dengue positif dijadikan sampel dalam penelitian ini. Sampel tersebut terdiri dari 38 pasien derajat ringan (DBD grade I) dan 20 orang pasien derajat berat (13 pasien DBD grade II, 6 pasien grade III dan 1 pasien grade IV). Orang sehat yang dipergunakan sebagai kontrol negatif sebanyak 30 orang. Darah kontrol dan sampel diambil serumnya dan diukur kadar IL-8 menggunakan metode ELISA. Pada penelitian ini digunakan metode ELISA untuk mengetahui kadar IL-8 dalam serum (kontrol negatif maupun sampel). Plate yang telah dicoated dengan anti IL-8 akan berikatan dengan IL-8 dalam serum dan direaksikan dengan anti IL-8 berlabel biotin yang akan berikatan dengan streptavidin-peroksidase dan selanjutnya ditambahkah kromogen sehingga menghasilkan warna dengan intensitas yang berbeda. Absorbansinya dibaca pada panjang gelombang 450 nm dengan menggunakan microplate reader dan dibuat kurva standar sehingga kadar IL-8 pada kontrol maupun sampel dapat dihitung. Kadar IL-8 pada serum kontrol negatif berkisar antara 0,01 0,14 ng/mL dengan rata-rata 0,02 ng/mL. Pada sampel derajat ringan (DBD grade I), kadar IL-8 berkisar antara 0,03 2,79 ng/mL dengan rata-rata 0,74 ng/mL. Kadar IL-8 pada derajat berat (DBD grade II, III dan IV) berkisar antara 0,02 3,47 ng/mL dan rata-

rata 2,24 ng/mL (tabel 1). Rata-rata kadar IL-8 pada sampel (derajat ringan dan berat) menunjukkan nilai yang lebih tinggi dibandingkan rata-rata kadar IL-8 pada kontrol negatif dan rata-rata kadar IL-8 pada sampel derajat berat lebih tinggi jika dibandingkan dengan ratarata kadar IL-8 pada sampel derajat ringan. Kadar IL-8 dari kontrol, pasien derajat ringan dan berat selanjutnya dianalisa dengan uji non parametrik menggunakan program SPSS 11,5. Kadar IL-8 kontrol negatif, derajat ringan dan berat menunjukkan perbedaan nilai yang signifikan (P<0,05). Perbedaan yang signifikan juga ditunjukkan antara derajat ringan dan berat. Hal ini menggambarkan bahwa peningkatan kadar IL-8 berhubungan dengan tingkat keparahan penyakit infeksi dengue. Tabel 1. Kadar IL-8 pada kontrol negatif dan sampel Kelompok Jumlah IL-8 Kisaran (ng/mL) 0,01- 0,14 0,03-2,79 0,02-3,47 Rerata (ng/mL) 0,02 0,74 2,24

Kontrol negatif Derajat ringan Derajat berat

30 38 20

PEMBAHASAN Infeksi virus dengue yang berat dapat menyebabkan DBD atau DSS, suatu sindrom plasma leakage yang potensial berakibat fatal. Salah satu kejadian selama inflamasi adalah terjadinya vascular leakage yang berhubungan dengan mediator-mediator yang disekresikan oleh sel dalam sirkulasi. Respon imun terhadap inflamasi menyebabkan perkembangan penyakit ke arah berat. Limfosit, monosit dan makrofag, sel mast, sel endotel, sel hepar dan sel dendritik merupakan target virus dengue dan sel-sel tersebut dapat 27

Sekresi Interleukin-8, (IL-8) dan hubungannya dengan Tingkat Keparahan Penyakit Infeksi Dengue DM Wihandani, NN Ayu Dewi, Agus Somia

menghasilkan sitokin setelah terjadinya infeksi virus dengue. Interleukin-8, suatu sitokin dengan efek proinflammatory, memiliki aktivitas chemoattractant, disekresikan oleh berbagai macam tipe sel dan berperan dalam inflamasi, penyembuhan luka, angiogenesis, metastasis dan lymphoid trafficking. Peningkatan kadar IL-8 ditemukan pada pasien dengan infeksi virus dengue yang berat.10,11 Patogenesis infeksi dengue dapat dibagi ke dalam dua kategori yaitu: (1) virus dengue memiliki sifat tertentu, hal ini berkaitan dengan virulensi virus dan serotipe virus dengue, dan (2) manusia yang terinfeksi mengalami suatu proses imunologi yang berakibat kebocoran plasma, perdarahan dan berbagai manifestasi klinik. Pada berbagai penyakit infeksi termasuk infeksi dengue ditemukan peningkatan kadar IL-8. Peningkatan kadar IL-8 dalam serum dan RNA IL-8 dalam monosit berkaitan dengan peningkatan keparahan infeksi dengue. Hal ini menunjukkan bahwa IL-8 kemungkinan memegang peranan penting dalam peningkatan derajat keparahan dan bahkan kematian. Koagulopati intravaskuler yang ditemukan pada demam berdarah dengue kemungkinan juga merupakan efek dari IL-8. Kadar IL-8 lokal yang tinggi juga berkaitan dengan efusi pleura.9 Biffl et al.12 melaporkan bahwa plasma leakage pada kasus DBD berkaitan dengan peningkatan kadar berbagai sitokin dalam plasma. Interleukin-8 meningkatkan permeabilitas sel endotel. Pasien dengan infeksi dengue akut menunjukkan peningkatan kadar khemokin dalam darah atau cairan pleura dan ekspresi gen khemokin dalam peripheral blood mononuclear cells (PBMC). Hal ini diduga memberikan kontribusi terhadap inflamasi dan patogenesis penyakit, meskipun mekanisme induksi khemokin oleh virus dengue tersebut belum dapat dijelaskan.11

KESIMPULAN Kesimpulan penelitian ini adalah terdapat perbedaan kadar IL-8 antara serum kontrol negatif, sampel derajat ringan dan berat yaitu rata-rata kadar IL-8 pada kontrol negatif sebesar 0,02 ng/mL, pada sampel derajat ringan 0,74 ng/mL dan pada derajat berat 2,24 ng/mL. Kadar IL-8 pada kontrol negatif lebih rendah dibandingkan sampel dan pada derajat ringan lebih rendah dibandingkan derajat berat. Perbedaan nilai ini signifikan secara statistik (P<0,05), menunjukkan bahwa peningkatan kadar IL-8 berhubungan dengan tingkat keparahan penyakit infeksi dengue. DAFTAR RUJUKAN 1. Wuryadi S. Isolasi virus dengue dari penderita demam berdarah dengue pada waktu wabah di Jakarta tahun 1988. Cermin Dunia Kedokteran 1990;60:27-30. Soedarmo SP. Demam berdarah dengue. Medika 1995;10(XXI):798-808. Duarte dos Santos CN, Frenkiel MP, Courageot CF, Rocha MC, Vazeille-Falcoz MW, Wien FA, et al. Determination in the envelope E protein and viral RNA helicase NS3 that influence the induction of apoptosis in response to infection with dengue type 1 virus. Virology 2000;274:292-308. Rothman AL. Dengue, defining protective versus pathologic immunity. J Clin Invest 2004;113:946-51. Biran SI, Saraswati R, Parwati T, Kerti D. Dengue fever/dengue hemorrhagic fever at Sanglah Hospital January 1997 April 2002, correlation with rainfall. Dalam Buku Abstrak Kongres Nasional Petri VIII, Perpari V, PKWI V; 19-21 Juli 2002, Malang. Mahendra IB, Parwati T, Biran SI. The epidemiologic study of dengue haemorrhagic 28

2. 3.

4. 5.

6.

fever in adult patient at Sanglah General Hospital. Dalam Buku Abstrak Kongres Nasional Petri VIII, Perpari V, PKWI V; 19-21 Juli 2002, Malang. 7. Chen YC, Wang SY. Activation of terminally differentiated human monocytes/macrophages by dengue virus: productive infection, hierarchical production of innate cytokines and chemokines, and the synergistic effect of lipopolysaccharide. J Virol 2002;76:9877-87. Medin LC, Fitzgerald KA, Rothman AL. Dengue virus nonstructural protein NS5 induces interleukin-8 transcription and secretion. J Virol 2005;11053-61. Chaturvedi UC, R Agarwal EA, Elbishbishi AS, Mustafa. Cytokine cascade in dengue hemorrhagic fever: implications for pathogenesis.

FEMS Immunology and Medical Microbiology 2000;28:183-8. 10. Juffrie M, Van Der Meer GM, Hack CE, Haasnoot K, Sutaryo, Veerman AJP, Thijs LG. Inflammatory mediators in dengue virus infection in children: interleukin-8 and its relationship to neutrophil degranulation. Infection and Immunity 2000;68(2):702-7. Bosch I, Xhaja K, Estevez L, Raines G, Melichar H, Warke RV, et al. Increased production of interleukin-8 in primary human monocytes and in human epithelial and endothelial cell lines after dengue virus challenge. J Virol 2002;76(11):5588-97. Biffl WL, Moore EE, Moore FA, Carl VS, Franciose RJ, Banerjee A. Interleukin-8 increases endothelial permeability independent of neutrophils. J Trauma 1995;39(1):98-103.

11.

8.

9.

12.

J Peny Dalam, V olume 1 Nomor 1 J 0 anuari 2 0 09

J Peny Dalam, V olume 1 Nomor 1 J 0 anuari 2 0 09

J Peny Dalam, V olume 1 Nomor 1 J 0 anuari 2 0 09 J Peny Dalam, V olume 1 Nomor 1 J 0 anuari 2 0 09 J Peny Dalam, V olume 1 Nomor 1 J 0 anuari 2 0 09 J Peny Dalam, V olume 1 Nomor 1 J 0 anuari 2 0 09 J Peny Dalam, V olume 1 Nomor 1 J 0 anuari 2 0 09

J Peny Dalam, V olume 1 Nomor 1 J 0 anuari 2 0 09 J Peny Dalam, V olume 1 Nomor 1 J 0 anuari 2 0 09

J Peny Dalam, V olume 1 Nomor 1 J 0 anuari 2 0 09

J Peny Dalam, V olume 1 Nomor 1 J 0 anuari 2 0 09

J Peny Dalam, V olume 1 Nomor 1 J 0 anuari 2 0 09

J Peny Dalam, V olume 1 Nomor 1 J 0 anuari 2 0 09

Sekresi Interleukin-8, (IL-8) dan hubungannya dengan Tingkat Keparahan Penyakit Infeksi Dengue DM Wihandani, NN Ayu Dewi, Agus Somia

29