Prof: Luisaurys Daz RoaJI'IC\ .

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UNIVERSIDAD PEDAGOGICA EXPERIMENTAL LIBERTADOR INSTITUTO PEDAGOGICO LUIS BELTRAN PRIETO FIGUEROA
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS NATURALES

BIOQUIMICA

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Lapso: 1 - 2010
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Seccin: 56I0I

REPORTE DE ACTIVIDADES DE LABORATORIO

PRACTICA N" 2: REACCIONES DE CARACTERIZACION DE CARBOHIDRATOS

Responda con su equipo de trabajo a los siguientes planteamientos. Debe ser 10 ms claro y conciso,

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Material elaborado por: prof. Henry Pacheco/Luisaurys Daz Roa

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FERMENTACIN DE LOS AZUCARES La fermentacin alcohlica (denominada tambin como fermentacin del etanol o incluso fermentacin etlica) es un proceso biolgico de fermentacin en plena ausencia de aire (oxgeno - O2), originado por la actividad de algunos microorganismos que procesan los hidrato s de carbono (por regla general azcares: como pueden ser por ejemplo la glucosa, la fructosa, la sacarosa, el almidn, etc.) para obtener como productos finales: un alcohol en forma de etanol (cuya frmula qumica es: CH3-CH2-OH11dixido de carbono (C02) en forma de gas y unas molculas de ATP que consumen los propios microorganismos en su metabolismo celular energtico anaerbico. El etanol resultante se emplea en la elaboracin de algunas bebidas alcohlicas, tales como el vino, la cerveza, la sidra, el cava, etc.' Aunque en la actualidad se empieza a sintetizar tambin etanol mediante la fermentacin a nivel industrial a gran escala para ser empleado como biocombustible? 3 La fermentacin alcohlica tiene como finalidad biolgica proporcionar energa anaerbica a los microorganismos unicelulares (levaduras) en ausencia de oxgeno para ello disocian las molculas de glucosa y obtienen la energa necesaria para sobrevivir, produciendo el alcohol y CO2 como desechos consecuencia de la fermentacin. Las levaduras y bacterias causantes de este fenmeno son microorganismos muy habituales en las frutas y cereales y contribuyen en gran medida al sabor de los.productos. fermentados (vase Evaluacin sensorial)." Una de las principales caractersticas de estos microorganismos es que viven en ambientes completamente carentes de oxgeno (02), mxime durante la reaccin qumica, por esta razn se dice que la fermentacin alcohlica es un proceso anaerbico.

UNIVERSIDAD

PEDAGOGICA EXPERIMENTAL

LIBERTADOR

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REACCIONES

INSTITUTO PEDAGOGICO DEPARTAMENTO

DE BARQUISIMETO

"DR. LUIS BELTRAN PRIETO FIGUEROA"

DE CIENCIAS NATURALES PROF: LUISAURYS

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DIAZ ROA.

Curso: Bioqumica.

DE CARACTERIZACION

DE CARBOHIDRATOS

Los carbohidratos son un grupo de compuestos cuyo rango de pesos moleculares oscila desde menos de 100 hasta mas de un milln. Casi todos ellos contienen grupos derivados de las funciones aldehidos o cetonas. Los compuestos mas pequeos, que contienen de 3 a 9 tomos de carbono, poseyendo al menos un grupo derivado de la funcin carbonlica se conocen como monosacridos: Hexosas (glucosa, fructosa, galactosa, manosa); Pentosas (arabinosa, xilosa, rbosa). Los compuestos superiores se forman por condensacin de los mas pequeos a travs de uniones acetal, oscilando su rango desde los dmeros: disacridos (Iactosa, maltosa, sacarosa) hasta los polmeros que contienen muchos miles de unidades de monosacridos: polisacridos (celulosa, glucgeno, almidn, inulina). Se conocen polmeros que contienen un slo tipo de monmero (homopolisacrido) y otros que poseen varias clases de ellos (heteropolisacridos). Los carbohidratos contienen carbono, nitrgeno, la naturaleza contienen fsforo, azufre y/o nitrgeno. hidrgeno, oxgeno pero muchos de los que existen en

La definicin de carbohidratos como polihidroxialdehidos o cetonas o compuestos derivados de ellos es bastante aceptable pero hace hincapie en el contenido carbonlico de los carbohidratos, que no suele estar explicito en la mayor parte de los compuestos existentes en la naturaleza. La mayora de los compuestos naturales son polihidroxihemiacetales, por lo que sera mas aceptable una definicin basada en este hecho. hemiacetales, acetales o cetales

A continuacin se presenta el fundamento qumico de las reacciones a utilizar en el reconocimiento de carbohidratos, as mismo, al final de la guia, se presenta el flujograma a seguir para la caracterizacin de los carbohidratos. CON FENILHIDRACINA .' " Todos los compuestos que poseen grupos a-oxhidrilo y carboni!o reaccionan con la fenilhidracina para formar osazonas. La reaccin se inicia con la condensacin del grupo carbonilo con la fenilhidracina seguida de la oxidacin del grupo a-oxhidrilo a grupo carbonilo, el cual condensa otro molcula de fenilhidracina en exceso de ella. Todos los azucares reductores forman osazonas con la fenihidracina. La formacin de osazonas destruye la configuracin del primer y segundo tomo de carbono, por lo tanto, aquellos azucares que varan solamente en la configuracin de stos carbonos formarn la misma osazona. Las osazonas tienen formas cristalinas caracteristicas que permiten desarrollar un mtodo para identificar el azucar del cual la osazona se origina. Adems, las osazonas de los diferentes azucares difieren en el tiempo de formacin de ah que la observacin del tiempo de obtencin de los cristales d una informacin acerca del azucar en estudio, especialmente si los azucares forman la misma osazona. Para una cantidad dada de carbohidrato (0,2 g.) los tiempos de formacin de las osazonas de los siguientes azucares son: glucosa 4 a 5 min.; fructosa de 1 a 1% mino La reaccin puede esquematizarse de la siguiente manera: 1.- REACCION

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-C=N-NH-Q H-C-OH R fenilhidrazona +

H-C-OH
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H-C=N-NH-Q C=N-NH-Q

R
osazonas

11.FERMENTACION DE LOS AZUCARES (Prueba microbiolgica) Ciertas levaduras y bacterias tienen la propiedad de descomponer a los monosacridos con produccin de diversas sustancias como alcohol, cido lctico, glicerol, etc. La levadura de cerveza transforma a la glucosa casi exclusivamente en alcohol y anhidrido carbnico. Para el experimento se utiliza un tubo en forma de U graduado, conocido como aparato de Einhorn el cual permite registrar valores en el proceso de fermentacin.

111.FORMACION DEL ACIDO MUCICO (Accin del HN03) El cido ntrico debido a su fuerte poder oxidante, produce cidos dicarboxiicos denominados cidos aldricos o sacricos. El producto de oxidacin de la galactosa es el cido de nombre D-galactosacrico conocido como cido mcico. A pesar de que el cido mcico contiene cuatro tomos de carbono asimtrico, es pticamente inactivo, debido a que la mita de la molcula es la imagen especular de la otra mitad (compensacin interna). De los cidos sacricos, el cido mcico es el menos soluble en solucines acuosas de cidos. Esta caracterstica facilita la identificacin de la galactosa de compuestos que la posean.

111.REACCION DE MOLlSH Es una prueba cualitativa para carbohidratos. El reactivo esta constituido por a-naftol al 5% en alcohol. La reaccin esta basada en la accin hidroltica y deshidratante del H2S04 sobre los carbohidratos. En esta prueba, un cido fuerte (H2S04, HCI, HN03) cataliza la hidrlisis de cualquier enlace glicosidico presente en la muestra y su deshidratacin a furfural si la muestra contiene pentosa o hidroximetil furfural si contiene hexosas. Los oligosacridos y polisacridos se hidrolizan primero a monosacridos produciendo luego la reaccin positiva. Estos furfurales se condensan con el a-naftol produciendo un color violeta rojizo en la superficie de separacin de los lquidos. Otra coloracin indica reaccin no positiva.

IV.- REACCION CON YODO La solucin de lugol (Yodo en solucin de yoduro de potasio) se utiliza para distinguir los polisacridos. El almidn, esta constituido por la umon de numerosas molculas de glucosa que forman dos sustancias, la amilopectina y la amilosa. La amilopectina, esta formada por molculas muy ramificadas de maltosa polimerizada y en la amilosa stas se unen en forma lineal. Los complejos formados por el yodo con el almidn producen una coloracin azul intenso que desaparece por calentamiento y reaparece al enfriarse. No debe calentarse demasiado para hacer desaparecer la coloracin pus si el yodo presente se volatiliza la coloracin no reaparecer. La reaccin del yodo parece depender de su adsorcin por las particulas coloidales del almidn y de la presencia en las mismas de estructuras piranosas. Estas observaciones muestran que la unin con el yodo es muy dbil y que el yodo combinado con el polisacrido todava no se ha reducido. V.- REACCION DE BENEDICT El reactivo de Feheling puede ser reemplazado por el reactivo de Benedict cualitativo el cual esta constituido por sulfato de cobre cristalizado, citrato de sodio y carbonato de sodio anhidro Fundamentalmente la reaccin de Benedict se basa en la formacin de una solucin alcalina donde el citrato de sodio produce un complejo soluble con el in Cu+2 y evita que ste precipite bajo la forma de Cu(OHh. Las propiedades reductoras de los azucares dependen de la presencia de grupos aldehidos o cetonas reales o potenciales. Al calentar ciertas soluciones de azucares en presencia de determinados iones metlicos, el grupo carbonilo se oxida y el in metlico se reduce. La capacidad de un azucar para reducir los reactivos alcalinos depende de la disponibilidad de un grupo aldehido o cetona capaz de enolizarse. En el caso de un di o polisacrido, estos poseen enlaces glucosdicos que suponen unin entre tales grupos, por lo cual no quedan grupos reductores sobre el azucar, tal como en la sacarosa, trehalosa, inulina, glucgeno, almidn, etc. En condiciones standarizadas la reduccin de in Cu+2 puede constituir una medicin cuantitativa del azucar reductor. El precipitado rojo ladrillo producido se debe a la presencia del CU20. El proceso de la reaccin puede esquematizarse de la siguiente manera Azucar+ Solucin ---> Formacin de + Cu+2_> alcalina enedioles (poder reductor) (complejo cprico de citrato en sol.) Cu+2 + OH' --> Cu(OHh --> CU20 (precipitado rojo ladrillo) VI.-REACCION DE BARFOED El reactivo de Barfoed esta constituido por: solucin ligeramente acidulada con cido actico glacial y acetato de cobre cristalizado. Esta prueba consiste en la accin reductora de los azucares en solucin debilmente cida. El in cprico (Cu+2)se reduce a xido cuproso. Esta reaccin la producen mas facilmente los monosacaridos que los demas hidratos de carbono reductores por tal motivo esta prueba nos permite diferenciar monosacridos de disacridos. Es necesario tener presente que la reduccin se lleva a cabo en medio cido.

VII.- REACCION DEL ACIDO FOSFORICO Esta prueba es especfica para la identificacin de levulosa (fructosa). Cualquier carbohidrato que la contenga d tambin positiva la reaccin al hidrolizarse. Una coloracin amarilla indica la presencia de fructosa (Ievulosa). VlII.- REACCION DE BIAL (Prueba de Orcinol) El reactivo de Sial esta constituido por orcinol disuelto en cido clorhdrico con algunas gotas de solucin de cloruro frrico. Cuando se hace reaccionar con una pentosa se producir una coloracin azul verdosa en presencia de n-butanol, considerndose positiva la reaccin. En el caso de las hexosas se obtiene una coloracin pardo amarillenta. VlII.- REACCION DE SELlWANOFF (Prueba de resorcinol) El reactivo esta constituido por resorcina y cido clorhdrico. La reaccin positiva se manifiesta por ia aparicin de una solucin de color rojo y la formacin de un precipitado rojo castao. Se admite que esta reaccin se produce por condensacin de un derivado furfrico obtenido por la accin del cido clorhidrico sobre la cetosa con el resorcinol que contiene el reactivo. La reaccin es negativa para aldosas y positiva para cetosas. IX.- REACCION DE TAUBER (Prueba de ortololuidina) El reactivo esta constituido por bencidina al 4% en cido actico glacial. En presencia de pentosas aparece un color rojo cereza estable. La reaccin es positiva tambin con nucletidos.

LDR..mircoles, 01 de agosto de 2007.