EasyLyse Erythrocyte-Lysing Reagent Kd S2364

Pouit In vitro diagnostikum. EasyLyse se pouv pi prtokov cytometrii. EasyLyse je pufrovan inidlo pro lzu ervench krvinek s obsahem chloridu amonnho. vod EasyLyse umouje plnou a jemnou lzu erytrocyt po imunofluorescennm znaen bunk z pln krve, pupenkov krve nebo leukoferetickch vzork ped prtokovou cytometrickou analzou (1). Dky vhodnm optickm vlastnostem inidla EasyLyse nen teba u vtiny vzork odstraovat centrifugac zbytky ervench krvinek, take se inidlo hod pro pouit s barvicmi postupy, kter obsahuj i kter neobsahuj promvn. Reagens neobsahuje fixativum. EasyLyse se dodv v 6 lahvikch, piem kad obsahuje 5 mL 20 x koncentrovanho roztoku. Jedna lahvika sta na 50 test (pi 2 mL zednho inidla na jeden test). Uchovvejte nezedn inidlo pi teplot 28 C. Nepouvejte po uplynut data expirace, kter je uvedeno na lahvice. Po oteven je inidlo pi 28 C stabiln po dobu ty msc. Pokud inidlo nepouvte, udrujte ndobku pevn uzavenou, protoe kontakt se vzduchem me zkrtit dobu pouitelnosti. Po zedn je produkt stabiln po dobu 20 dn, pokud je uchovvn pi teplotch mezi 2 C a 25 C. Je-li inidlo uchovvno v jinch ne uvedench podmnkch, mus je uivatel provit. POZNMKA: Bhem uchovvn me vzrst pH inidla, co me ovlivnit polohu bunk v grafu FSC/SSC. pH zednho inidla m bt mezi 7,0 a 7,4. Pokud je pH vy ne 7,4, mlo by bt upraveno na hodnotu 7,2 pidnm 0,2 mol/L KHCO3. Upozornn 1. Pouze pro profesionln uivatele. 2. Tento vrobek obsahuje azid sodn (NaN3), chemiklii, kter je v istm stavu vysoce toxick. V koncentracch, v nich se azid sodn nachz v produktu, nen klasifikovn jako nebezpen, me vak reagovat s olovnmi a mdnmi armaturami a vytvet vysoce vbun koncentrace kovovch azid. Pi likvidaci splchnte velkm mnostvm vody, abyste zabrnili nahromadn kovovch azid v armaturch. 3. Tento produkt obsahuje 16% chlorid amonn. V koncentracch obsaench ve vrobku nen nutn oznaovat chlorid amonn jako nebezpen materil. Bezpenostn list je profesionlnm uivatelm k dispozici na podn. niky Je-li pouita ltka EasyLyse v protokolu lza a promvn, lymfocyty mohou tvoit agregty, nazvan rovn niky s krevnmi destikami a monocyty. Agregty vykazuj vy pm (FSC) a bon (SSC) svteln rozptyl, ne suspenze jednotlivch bunk. Jestlie je rozlien FSC/SSC aplikovno bhem analzy dat, agregovan buky unikaj z brny (2). ada parametr tkajcch se mnostv agregt je popsna Gratama et al. (2). Zkoumali jsme tento fenomm dle a zjistili jsme, e pouit lyzujcho reagens bez fixativa v postupu lza a promvn me zpsobovat tento fenomn niku. Doporuuje se pout EasyLyse v protokolu bez promvn, aby se zamezilo agregaci bunk.

Dodan inidlo

Uchovvn

Obrzek 1. Pklad fenomnu niku. Normln krev je zabarvena Anti-CD3/FITC (DakoCytomation kd . F0818), lyzovan EasyLyse a centrifugovan dvakrt. Nktr CD3 pozitivn buky zmnily sv vlastnosti FSC a SSC, protoe vytvoily agregty s aktivnmi monocyty a granulocyty. Je-li brna nastavena kolem brny lymfocyt, tyto pozitivn ppady by unikly.

(108316-003)

S2364/CZ/TIA/08.12.04 str.1/2

DakoCytomation Denmark A/S Produktionsvej 42 DK-2600 Glostrup Denmark Tel. +45 44 85 95 00 Fax +45 44 85 95 95 CVR No. 33 21 13 17

Obrzek 2. Bodov diagram ukazuje vzorek krve zabarven Anti-CD3/FITC a lyzovan EasyLyse bez centrifuganho kroku. Nejsou pozorovny dn niky. POSTUP PRO LZU Postup Lza mus bt provdna pi pokojov teplot. 1. 2. 3. Zete poadovan mnostv S2364 v pomru 1+19 deionizovanou vodou1 pokojov teploty. Jinak je mon smchat obsah jedn lahviky (5 mL) S2364 s 95 mL deionizovan vody pokojov teploty. Pokud mte v myslu znait buky, ped lzou inkubujte vzorek2 s protiltkou konjugovanou s fluorochromem. Bezprostedn po inkubaci s protiltkou pidejte ke 100 L testovanho vzorku (napklad krev) 2 mL zednho inidla rozkldajcho erytrocyty a ihned zamchejte.

Pokraujte bu st A: Postup pro lzu bez promvn, nebo st B: Postup pro lzu s promvnm. A: Postup pro lzu bez promvn 4. Inkubujte vzorek s inidlem rozkldajcm erytrocyty po dobu 10-15 minut pi pokojov teplot a pak vzorek analyzujte na prtokovm cytometru3. Pokud vzorek nebude analyzovn bhem 45 minut, ml by bt umstn na led a testovn bhem 2 hodin.

B: Postup pro lzu s promvnm 4. 5. 6. 7. 8. 9. Inkubujte vzorek s inidlem rozkldajcm erytrocyty po dobu 15 minut pi pokojov teplot. Centrifugujte vzorek pi 300 g po dobu 5 minut a pak odstrate supernatant. Promyjte vzorek ve 2 mL fosftem pufrovanho fyziologickho roztoku (PBS). Opakujte krok 5. Pidejte ke vzorku vhodn mnostv PBS. Analyzujte vzorek na prtokovm cytometru3.

Poznmky k postupu: 1. 2. 3. Reference 1. Pro edn pouijte deionizovanou vodu, nikoli vodu z kohoutku. Voda z kohoutku a inidlo rozkldajc erytrocyty nejsou vzjemn kompatibiln. Doporuenm antikoagulanm inidlem je EDTA. Heparin a citrt lze rovn pout, ale nkdy po nich zstv vce zbytk. Doporuuje se spolu se vzorkem od pacienta zpracovvat normln testovac vzorek pro oven, e proces lzy (rozkladu erytrocyt) byl proveden sprvn. Muirhead KA, Wallace PK, Schmitt TC, Frescatore RL, Franco JA, Horan PK. Methodological considerations for implementation of lymphocyte subset analysis in a clinical reference laboratory. Clinical Cytometry. Ann NY Acad Sci 1986;468:113-27. Gratama JW, van der Linden R, van der Holt B, Bolhuis RLH, vand de Winkel JGJ. Analysis of factors contributing to the formation of mononuclear cell aggregates (Escapees) in flow cytometric immunophenotyping. Cytometry 1997;29:250-60.

2.

Vysvtlivky k symbolm Katalogov slo In vitro diagnostick zdravotnick prostedek Viz nvod k pouit Teplota skladovn slo are Pouiteln do

Vrobce

(108316-003)

S2364/CZ/TIA/08.12.04 str.2/2

DakoCytomation Denmark A/S Produktionsvej 42 DK-2600 Glostrup Denmark Tel. +45 44 85 95 00 Fax +45 44 85 95 95 CVR No. 33 21 13 17