DIAGNOSTICO SEROLOGICO

METODOS DIRECTOS
MET ODO S DIR ECTO S

Son aquellos que detectan:

• La presencia de antígenos virales
(técnicas inmunológicas):
• Inmunofluorescencia (ID)
• Inmunoensayos (Radioinmunoensayos
y ELISA)
• Test de Aglutinación en látex.
• El virus como partícula viral
(microscopía electrónica).
 LA PRESENCI A DE
ANTÍ GE NOS VI RAL ES
(TÉ CNIC AS
INM UNOLÓGI CA S)
 1. -
INM UNOFLUORESCENCI A
DIR
• técnicas más ECTA ( ID)
antiguas.
• técnica se puede utilizar para una identificación rápida del
virus directamente.
• Emplea para la confirmación del efecto citopático observado
en cultivos celulares (Ac monoclonales específicos para los
antígenos tempranos inmediatos del CMV)
• Esta técnica requiere sólo 2-4hs
• Sensibilidad del 70-80 % comparada con cultivos celulares
para la identificación de virus Herpes Simple, 80-95% para
VRS y 71% para Influenza A.
• Los Ac monoclonales conjugados con isotiocianato de
fluoresceína pueden utilizarse para identificar:
Virus Respiratorio Sincitial (VRS)
Influenza A y B,
Parainfluenza 1,2 y 3
Adenovirus entre otros,
También subtipificar sp virales como: HSV tipo 1 y 2.
PRINCIPIO BÁSICO DE LA
INMUNOFLUORESCENCIA
DIRECTA
Virus Respiratorio Sincitial
(VRS )

Muestra : lavados nasofaríngeos

Herpes simplex - HSV

Muestra: líquido de vesículas

Influenza B
 2. -TES T DE
AGL UTINAC ION EN
LATE X
• Esta técnica se usa comúnmente para la demostración de
antígenos de rotavirus en materias fecales.
• Ventajas: fácil de realizar, requiere sólo unos minutos y no
necesita equipo, pues se lee a simple vista.
• Desventaja: Rx cruzadas sobre todo con otros Ag en la
muestra y también ocurren interferencias (fenómeno de
prozona, en el que un exceso de Ac no permite la formación
del entramado.)
• Para esta prueba se utilizan partículas de látex son esferas de
poliestireno que se unen fácilmente al fragmento cristalizable
(Fc) de mol. de IgG o IgM, esta última es mucho más eficiente
en aglutinar partículas naturales.
• Los fragmentos de unión del anticuerpo (FAb) quedan
expuestos y son capaces de unirse al antígeno que se
encuentra en la muestra.
Aglutinacion en latex
3.- INMUNOENSAYOS

• Radioinmunoensayo (RIA).
• Inmunoensayo ligado a enzimas
(ELISA o EIA).
Radioinmunoensayos
ELISA
• Aca el Ac se marca con una enzima que puede
ser la fosfatasa alcalina (FA) o la peroxidasa
de rábano (PR)
• Para revelar la Rx se coloca el sustrato sp para
la enzima que es modificado por ésta y
produce un compuesto coloreado.
• FA el sustrato es el paranitrofenilfosfato y PR
es el peróxido de hidrógeno en una solución de
ortofenilendiamina (OPD)
• Para la cuantificación se mide la abs. en una
longitud de onda determinada en un
espectrofotómetro. La abs.será DP. a la
cantidad de Ag descubierto.
• Técnicas se utilizan en el Dx de hepatitis A y
B(Ag S), rotavirus, el agente Norwalk, ADV, el
RSV, parainfluenza, influenza A y B. y VIH (Ag p
24).
 EL VIR US CO MO PARTÍ CU LA
VI RAL
(M ICRO SC OPÍ A ELECTRÓ NIC A)
MICROSCOPÍA
ELECTRÓNICA
• Obs. la morfología de los viriones.
• La limitación , además del costo del
microscopio, es que necesita de una .↑[ ] de
viriones (aprox. 109 partículas virales/ml,
dependiendo del virus) presentes en la
muestra, por ello es poco sensible.
• El ME nos permite obtener resultados (+)
rápidos de muestras de heces de pacientes
con diarrea ya que los causantes pueden ser
Rotavirus, Adenovirus, Coronavirus y
Calicivirus pueden ser visualizados e
identificados.
• También en otras muestras, como líquido
vesicular, biopsia de tejidos, verrugas, orina o
suero es posible obtener resultados positivos,
mediante coloración negativa.
Microscopia Electrónica de virus visualizados en heces de pacientes con diarrea
• A :Adenovirus
• B : Rotavirus