Aplicaciones de la Biología

Molecular
Uso de Primers degenerados y “Guessmer” para identificación
de secuencias de genes a partir de proteínas
 Primers degenerados basados en
la secuencia de aa de urato oxidasa

Fragmentos de
ADN hechos por
PCR
cADN de una hebra
obtenido de mARN de hígado Seleccionar Fragmentos
de cerdo de tamaño determinado
(100 bp)

Clonamiento de Urato
oxidasa usando PCR y
primers degenerados
Ligar a vector
de clonamiento

Uso de las técnicas Transformar

Ecoli

combinadas para
identificar el gen de
la urato oxidasa Buscar colonias por
hibridización con
guessmer primer interno
Aislar plásmido
desde positivas Secuencia de primer para PCR

Inserto conteniendo la
secuencia codificadora para
urato oxidasa

Secuencia de primer para PCR

Usar inserto como probe para

revisar la lirbrería de cADN

Clon conteniendo la
secuencia completa de
urato oxidasa
Identificación de genes activados por suero
Screening de librerías de expresión con anticuerpos
 Diseño de probes
Sondas y librerías de sustracción
para aislar ADN específicos

Células T Células B

Aislar ARN poli (A) Aislar ARN poli (A)

Sintetizar cADN usando
ARN específico primers oligo (dT)
para receptor de
célula T

Remover el ARN por hidrólisis alcalina

Alinear exceso de ARN de células B

con c ADN de células T

cADN específico
para receptor de
célula T

Cromatografía en
hidroxiapatita

Eluir ADN
monocatenario

Probe de sustracción Preparar librería de

sustracción
Clonamiento del receptor de
eritropoyetina
Clonamiento del Receptor CD2
Mutaciones
Mutaciones
Mutaciones