第六章

第六章 理化因素对微 生物的影响

理化因素对微生物的影响
6.3 灭菌与消毒
• 双面刃： 有益
微生物生长繁殖
有害

• 食品和 工农 业产品 的霉腐 变质

• 实验室 中微 生物或 细胞培 养的污染
• 培养基 或生 化试剂 的染菌
• 工业发 酵中 的杂菌 污染或 噬菌体污
染
• 人、动 、植 物疾病
微生物生长的控制方法

历史悠 久：
• Pasteur 将肉汤煮沸否
定微生物自生学 说
• 1881 ， Koch 应用灭
菌的马铃薯条和 无菌
水分离培养致病 菌
Robert Koch
6.3.1 种种控制措 施

杀菌
彻底 杀灭 － 灭菌
杀灭 溶菌
部分 杀灭 － 消毒
控制 害菌
抑制 霉腐 微生物 － 防
抑制
腐
抑制 宿主 体内的 病原 菌－ 化
疗
掌握 几个基 本概 念
一、灭菌

• 定义：
指利用物理或化 学因子，使 物体内外
部 一切 微生物 永久性 丧失生活力。
营养体
芽孢
To be or not to
孢子 be?
等等
一、灭菌

• 定义：
指利用物理或化 学因子，使 物体内外
部 一切 微生物 永久性 丧失生活力。

杀 溶
菌 菌

例如各 种高温 灭菌 措施、 辐射 灭菌等

二、消毒

• 指一种采用较温 和的理化因 素，仅杀

死物体表面或内 部一部分对 人体有害
的 病原菌 ，而对被消毒的 物体基本无
害 的措施。
例如： 对皮肤 、水 果、饮 用水 的药剂 消毒
；
对啤酒 、牛奶 、果 汁、酱 油的
巴氏消 毒
三、防腐

• 指利用某些理化 因子，使物 体内外的

微生物处于不生 长繁殖但又 未死亡的
状态
• 防腐措施很多， 原理各异：
– 低温
– 缺氧
– 干燥
– 高渗
– 高酸 度
– 防腐 剂
四、化疗

• 指利用某些具有 选择毒性的 化学药物

或抗生素，来抑 制宿主体内 病源微生
物的生长繁殖， 从而治疗疾 病。
例如， 各种抗 生素 、中草 药中 的有效 成分
 灭菌、消毒 、防腐、化 疗的比较
灭菌 消毒 防腐 化疗

处理因素 强理化因素 温和理化因素 理化因素 化学治疗剂

体表，酒、乳
处理对象 物体内外 内外 宿主体内
等

微生物类型 一切 有关病原菌 一切 有关病原菌

作用 杀死 杀死或抑制 抑制或杀死 抑制或杀死

冷藏、干燥
湿热灭菌、 75 ％酒精消毒 、糖渍、腌 抗生素、磺胺
实例
辐射灭菌等 巴氏消毒 制、缺氧、 药、中药等
防腐剂
6.3.2 常用的灭菌方法

• 加热灭菌
• 辐射灭菌
• 过滤除菌
 一、加热灭菌（消毒）

干热灭菌法 火焰灭菌法
干燥加热空气灭菌法
高温灭菌 LTH 法
氏消毒法 HTST 法

（消毒） 常压下 煮沸
毒法
湿热灭菌法 间歇灭菌法

常规加压灭菌法
1 。干热灭菌

1 ）烧灼 法
主要用 于接种用 具、金属小 工具、试管
口的灭菌
1 。干热灭菌

2 ）干 烤灭菌
玻璃 器皿 、陶瓷 制品 的灭菌
。
在烘 箱内 利用热 空气 灭菌。
空气 温度 150~170oC ，维持
1~2h 。
<180oC ，以 防棉 塞或包 装纸
烤焦 燃烧 。
液体 样品 、培养 基灭 菌不适
用
 2 。湿热灭菌（消毒）

• 利用 热蒸汽灭菌 。效果好于 干热灭菌。 广

泛应 用于 培养基 、发酵设备 的灭菌。
• 原因 ：
– 水蒸汽 具有更 强的 穿透力 （ p151 ，表 6-8 ）
– 水蒸气 冷凝放 出大 量热量 ，缩 短灭菌 时间 （ 6-
7）
– 蛋白质 含水量 越高 ，凝固 温度 越低； 湿热 更易
打断蛋 白质氢 键， 使其变 性凝 固（ 6-9 ）
2 。湿热灭菌（消毒）

• 巴氏消毒法
– 法国微 生物学 家巴 斯德
– 中温消 毒
– 用于牛 奶、酿 造酒 、酱油 、醋 与食品 的
消毒
– 优点： 杀死无 芽孢 的病原 菌， 同时保 持
食品营 养与风 味
– LTH 、 HTST
• 低温维持法（ LTH ）
63oC 保持 30min
• 高温瞬时法（ HTST ）
72oC 保持 15s
• 超高温巴斯德灭 菌法
采用流 动连续 操作 系统， 140oC 左右 3 ～
4s ，急剧 冷却至 75oC ，然后均 质化 后冷却
至 20oC
2 。湿热灭菌（消毒）

• 煮沸消毒法
沸水维持 15min 以上，可杀 死细菌、
真菌的营养细胞 ，但不能杀 死全部细
菌芽孢和真菌孢 子。
延长煮沸时间， 加入 1 ％ Na2CO3 或
2 ％～ 5 ％石炭酸提 高消毒力。
常用于餐具、衣 物、饮用水 的消毒
2 。湿热灭菌

• 间歇灭菌法
80 ～ 100oC 蒸煮 15 ～ 60min ，杀灭营
养体；室温搁置 过夜，使残 存芽孢萌
发；
重复 3 次以上 ，可在较低 温度达到彻
底灭菌的效果
2 。湿热灭菌

• 高压蒸汽灭菌
– 121oC ， 15 ～ 30min
– 115oC ， 35min
影响高压蒸汽灭菌效果的因素

• 灭菌物体的含菌 量
• 灭菌锅内空气的 排除程度
• 灭菌物体的 pH 值
• 灭菌对象的体积
• 加热与散热的速 度
2 。湿热灭菌

• 连续加压蒸汽灭 菌法
高温瞬 时： 135 ～ 140oC ， 5 ～ 15s
高效率 ；自动 化操 作，减 少人 工
• 高温对培养基的 不利影响 ：
形成 沉淀物 （有机沉淀 物如多肽
类，无机沉淀物 如磷酸盐） ；破坏 营
养；提高 色泽（ 褐变如产生 氨基糖
等）； 改变 培养基的 pH 值； 降低 培
养基的浓度
二、辐射灭菌
• 紫外线 （ X 射线， γ 射线）
• 原理：
– 胸腺嘧啶二聚体，干扰
胸腺嘧啶二聚体 DNA 复制和蛋白质合成
，造成微生物死亡。如果剂量不足或时间不足
，则造成变异。
– 紫外线诱导环境产生有害变化，如空气中臭氧
，水中过氧化氢，培养基中过氧化物等，毒害
作用。
• 与菌种、菌龄有关
• 穿透力弱，因而常用于空气、水、表面消
毒
• 1w/m2 ， 20 ～ 30min 空气消毒；若湿度增
加，则增大剂量
 三、过滤除菌

• 用于 加热会改
变理 化性质的
物质 的除菌
• 微孔 滤膜，孔
径依 据要截留
微生 物的大小
而定 。如
0.25um ，细菌
。
三、过滤除菌

• 含酶或维生素的 溶液的除菌
• 无菌空气
• 啤酒生产
6.3.3 常用的消毒方法

• 理想消毒剂的特 性（了解）
• 消毒剂分类 ：
– 酸碱类 物质 ：石灰 1 ： 4 或 1 ： 8 ，消毒 排泄物
及地面 ；醋 酸加热 蒸发 空气 消毒； 苯甲 酸、山
梨酸和 丙酸 ，食品 防腐 剂
– 重金属 类： HgCl2 （升汞 ）， 1 ： 500 ～ 1 ：
2000 消毒或 0.1% 溶液消毒 人手 或器皿 ；
CuSO4 ，抑制 真菌和 藻类 ，游泳 池消 毒； 农业
波尔多 液（ CuSO4 ＋石 灰水 ），果 树喷 施，防
止病害 。
6.3.3 常用的消毒方法

• 消毒剂分类 ：
– 氧化剂 ：高 锰酸钾 ；过 氧化 氢；氯 ；过 氧乙酸
– 有机化 合物 ：酚； 醇类 （ 70 ％～ 75 ％乙醇）
；甲醛 ；表 面活性 剂（ 季铵 盐）
6.3.4 影响灭菌与消毒的因素

• 不同的 微生 物对热 的抵 抗力 和对消 毒剂 的敏感 性

不同
• 灭菌处 理剂 量对微 生物 的影 响
• 微生物 污染 程度对 灭菌 的营 养
• 温度的 影响
• 湿度的 影响
• 酸碱度 的影 响
• 依附介 质对 灭菌的 影响
• 穿透条 件的 影响
• 氧的影 响
6.3.4 化学治疗剂

• 能直接干扰病原 微生物的生 长繁殖并

可用于治疗感染 性疾病的化 学药物
• 选择毒性
• 分类：
– 抗代谢 物：微 生物 与人类 代谢 途径差 异
，如磺 胺药， 微生 物利用 PABA 合成 叶
酸，磺 胺竞争 抑制 ；人体 不合 成叶酸 ，
不受抑 制。
– 抗生素 类
抗生素

• 不同抗生素作用 机理不同
– 抑制细 胞壁、 改变 膜通透 性、 抑制蛋 白
质合成 或核酸 合成
• 用途：
– 临床治 疗
– 发酵工 业控制 杂菌 污染
– 遗传育 种的筛 选标 记