I H C QU C GIA TP.

H CH MINH TR NG I H C BCH KHOA

NGUY N TH MINH NGUY T

NGHIN C U TUY N CH N RHODOTORULA C KH NNG SINH T NG H P BETA-CAROTENE TRN MI TR NG BN R N LM TH C N B SUNG CHO G TR NG

Chuyn ngnh: M s chuyn ngnh: Cng ngh Th c ph m v 62.54.02.01 u ng

TM T T LU N N TI N S K THU T

Tp. H Ch Minh, nm 2011

Cng trnh c han thnh t i: Tr ng

i h c Bch Khoa HQG-HCM

Ng i h ng d n khoa h c 1: Ng i h ng d n khoa h c 2:

PGS.TS

ng Th Anh o

TS. Nguy n H u Phc

Ph n bi n Ph n bi n

c l p 1: c l p 2:

PGS.TS Nguy n Th Xun Sm PGS.TS Lu H u Mnh

Ph n bi n 1: Ph n bi n 2: Ph n bi n 3:

PGS.TS Nguy n Thy Hng TS. L nh n PGS.TS Nguy n Ti n Th ng

Lu n n s

c b o v tr c H i

ng ch m lu n n h p t i:

...................................................................................................................... ...................................................................................................................... Vo lc gi ngy thng nm 2011

C th tm hi u lu n n t i th vi n: - Th vi n Khoa h c t ng h p Tp.HCM - Th vi n i h c Bch khoa HQG-HCM

24
[3]. Nguy n Th Minh Nguy t, T ng Khoa, Nguy n H u Phc, ng Th Anh o (2008). So snh hi u qu chi t mu beta-carotene t s ph v t bo Rhodotorula sp.3 trong mi tr ng nui c y bn r n (SSF) b ng cc phng php khc nhau. Ha sinh v sinh h c phn t ph c v Nng, Sinh, Y h c v Cng ngh Th c ph m, Bo co H i ngh Ha sinh Ton Qu c l n th IV, Nh xu t b n Khoa h c K thu t, H N i 2008, trang 370-374. [4]. Nguyen Thi Minh Nguyet, Nguyen Thi Tu Minh, Pham Tan Viet, Nguyen Huu Phuc, Dong Thi Anh Dao (2009). The influence of bioproduct from Rhodotorula sp.CBS10104 on nutrition of lab mice Mus musculusdo. Tuy n t p H i ngh Cng ngh sinh h c Ton qu c Khu v c pha nam 2009, Nh xu t b n Khoa h c v K thu t, trang 805 - 809. [5]. Nguyen Thi Minh Nguyet, Nguyen Huu Phuc, Dong Thi Anh Dao (2009). Using biological product from Rhodotorula sp. CBS. 10104 to increase the content of vitamin A, beta-carotene in the egg yolks. Tuy n t p H i ngh Cng ngh sinh h c Ton qu c Khu v c pha nam 2009, Nh xu t b n Khoa h c v K thu t, trang 810 - 814. [6]. Nguy n Th Minh Nguy t, Nguy n Th T Minh, Nguy n H u Phc (2010). nh h ng c a t ng hm l ng carotenoid trong th c n n nng su t cho tr ng c a g nm 2010, trang 68-74. [7]. Nguyen T.M.Nguyet et al. (2008). Research on producing feedstuffs for laying hens from the culture of solid-state fermentation of red yeast Rhodotorula. World Congrees of Food Science and Technology, Shanghai, China 2008, N0 TS 12-33, pp. 240-241. [8]. Nguyen Thi Minh Nguyet et al. (2008). Research on collecting raw pigment powder enriched beta-carotene from the culture of the solid-state fermentation red yeast Rhodotorula sp.3 on by-products of food industry in Vietnam. World Congrees of Food Science and Technology, Shanghai, China 2008, N0 TS 12-90, pp. 260-262. . T p ch Phn tch Ho, L v Sinh h c, t p 15- s 3 M U ti

1. Tnh c p thi t c a c ng ng

Nhu c u ph i c th c n s ch, an ton,

m b o dinh d ng v s c kho

c i thi n v pht tri n th l c, tr l c c a cc th h ng i Vi t

trong tng lai l m t i h i c p thi t cho ngnh cng ngh th c ph m. Trong kh u ph n th c n c a ng i, ngoi n n t ng tinh b t nh cm, ng, khoai.., l ng m c b n c cung c p ch y u t cc s n ph m v t nui v cy u, c bi t trong l cc s n ph m t u c a th k 21, c tnh nhu c u th c t n c trong ch iv tr ng nh th t, tr ng, s a, rau,

chn nui. Theo s li u th ng k, trong nh ng nm

t ng gi tr gia c m ng gp kho ng 5% GDP c a Vi t Nam. Ti m nng v k v ng ng gp c a ngnh chn nui ny vo vi c cung c p n p ng tiu chu n v cho s pht tri n c a n n kinh t

tng lai l r t l n. Tuy nhin, t i Vi t Nam, gia c m ni chung hay g y u c nui b ng ngu n th c n t nhin s n c thi u ho c khng cn dinh d ng hay b ng ngu n th c n nh p t n c ngoi v i gi cao. Th c n l v n quan tr ng nh t trong chn nui, n quy t

nh tr c ti p c

n nng su t, ch t l ng v gi thnh c a cc s n ph m th t, tr ng, s a,... c p ch t ti n vitamin A, s c t carotenoid cn l ch t ch ng oxi ha sinh h c

bi t, s c t carotenoid l y u t c n ph i c trong th c n. Ngoi tc d ng cung b o v t bo, bu ng tr ng, lm tng nng su t v s n l ng tr ng. Tuy nhin ngu n th c n th c v t d i do t i Vi t Nam nh t m, khoai m, cm, v.v dng trong chn nui gia c m h u nh khng c s c t carotenoid. Do , gia c m b thi u s c t vng nn s c v ch t l ng tr ng km. Trong s cc vi sinh v t c kh nng t ng h p carotenoid th gi ng n m men Rhodotorula c kh nng s n xu t carotenoid trong c beta-carotene ang c nghin c u s n xu t quy m cng nghi p lm ch t mu th c ph m v c dng lm th c n chn nui. khng y u, d sinh b nh t t, gi m t l

2
ti lu n n: Nghin c u tuy n ch n Rhodotorula c kh nng sinh t ng h p beta-carotene trn mi tr ng bn r n lm th c n b sung cho g tr ng c th c hi n nh m t o ra ch ph m sinh h c lm th c n b sung cho g p ng m c tiu trn. Ngoi ra, cc lo i th c ph m t nhin dng cho ti lu n n gi i ng i hi n t i ang r t thi u v c n b sung vitamin A.

23
- Nghin c u s d ng Rhodotorula sp.3 lm ch t mu b sung tr c ti p hay gin ti p vo th c ph m v d c ph m cho ng i. - Nghin c u c i t o gi ng, nng cao cng nghi p m c c a ch ph m khi s n xu t ng th i, kh o st th c gi m t l b sung vo th c n.

nghi m trn gia c m chuyn tr ng v cc v t nui c n s c t nh c la hn, c h i, tm, ...v i quy m l n m l n t ng b c thng m i ha ch ph m. - Nghin c u cc thng s k thu t c n thi t v thi t b s n xu t theo quy a s n ph m t phng th nghi m vo s n xu t cng nghi p. NGHIN C U KHOA H C V CC CNG TRNH LIN QUAN Nghin c u khoa h c t gi i 3 H i thi Sng t o Khoa h c K thu t T nh BR_VT nm 20082009 v i gi i php: Dng ch ph m sinh h c thu nh n t canh tr ng nui c y bn r n Rhodotorula sp. CBS 10104 s n xu t tr ng g ch t l ng cao. Cc cng trnh cng b ng Th Anh o, Nguy n H u Phc (2007). c i m sinh h c v kh nng pht tri n trn mi tr ng bn i, Nh xu t b n Khoa h c T N LU N N CNG B

quy t bi ton l c i t o ngu n th c n cho v t nui v i nguyn li u s n c v r , thng qua nng hm l ng vitamin A trong tr ng, t o ngu n tr ng ch t l ng cao. ng th i, nh gi tnh an ton v hi u qu c a ch ph m, nh nng su t v . ti cn th c hi n nghin c u th nghi m trn chu t v xc 2. N i dung nghin c u c a lu n n - Phn l p v ch n t t nhin cc n m men sinh s c t carotenoid thu c gi ng Rhodotorula c kh nng t ng h p sinh kh i giu beta-carotene theo phng php nui c y bn r n. - Xc nh cc thng s k thu t c a qu trnh nui c y bn r n n m men u nnh c b sung dinh d ng. n nng su t v ch t l ng Rhodotorula trn c ch t g o t m v b cho tr ng c a g, trong xc

ch t l ng tr ng khi dng ch ph m ny b sung vo th c n cho g

- Kh o st nh h ng c a ch ph m sinh h c

[1]. Nguy n Th Minh Nguy t, Nghin c u cc

nh c m i quan h gi a hm l ng

carotenoid t ng trong th c n v nng su t cho tr ng c a g chuyn tr ng. K t qu c a qu trnh nghin c u cho th y tnh u vi t v hi u qu kinh t r nt c a ngu n th c n c t o ra theo phng cch b sung ch ph m sinh h c trn. 3. Nh ng ng gp m i c a lu n n ny - Phn l p v ch n c ch ng n m men thu c gi ng Rhodotorula c kh nng t ng h p carotenoid giu beta-carotene, sinh kh i v phytase theo phng php bn r n.

r n c a m t s n m men Rhodotorula phn l p t i Vi t Nam. Vi n Khoa h c v Cng ngh Vi t Nam, Vi n Sinh h c Nhi t [2]. Nguy n Th Minh Nguy t, nhin v Cng ngh , H N i 2007, trang 270-277. ng Th Anh o, Nguy n H u Phc (2007). Ch n gi ng n m men Rhodotorula c kh nng pht tri n trn mi tr ng g o t m cng v i n m m c Monacus sp. theo phng php nui c y b m t. Vi n Khoa h c v Cng ngh Vi t Nam, Vi n Sinh h c Nhi t i, Nh xu t b n Khoa h c T nhin v Cng ngh , H N i 2007, trang 263-269.

22

3
- T i u thnh ph n dinh d ng v i u ki n nui c y bn r n n m men

1.

tuy n ch n m t ch ng gi ng Rhodotorula sp.3 c kh nng t ng c bi t l beta-carotene v c ho t tnh phytase

Rhodotorula trn c ch t chnh l g o t m v b hm l ng beta-carotene, ln men bn r n. ng th i

u nnh v i hm m c tiu l

h p sinh kh i giu carotenoid 2. xc

xu t quy trnh thu nh n ch ph m

trn mi tr ng nui c y bn r n. nh c i u ki n tch chi t beta-carotene c trong t bo n m men thu c t mi tr ng ln men bn r n (x l thnh t bo theo phng php k t h p L nh ng - R ng - Siu m). 3. xc nh c cc thng s t i u cho qu trnh ln men bn r n n m u nnh nh sau: hm l ng (mg/Kg) cc ch t dinh m = 65%; dy men Rhodotorula sp.3 nh m thu bet-carotene cao trn c ch t g o t m qua h ho c b sung b d ng b sung t i u g m: saccharose = 8700; nit = 8500; phosphor = 3300; lu hunh = 500 v i u ki n nui c y t i u l: l p mi tr ng = 1,5 cm; t l gi ng = 9 x 107 CFU/g MT. 4. Chng ti xy d ng c quy trnh thu nh n ch ph m sinh h c t Rhodotorula sp.3 (g i t t l CR). 5. Qua kh o st tnh an ton c a ch ph m CR, chng ti th nghi m dng CR l lm th c n nui g tr ng cng nghi p Isa Brown. K t thu c cho th y nng su t nh mu c a lng thi n ng k . 6. M i quan h gi a hm l ng carotenoid t ng trong th c n su t tr ng c a g giai o n g cho tr ng c nng su t cao v n
2 2

sinh h c c gi tr dinh d ng cao t n m men Rhodotorula theo phng php - Th nghi m dng ch ph m lm nguyn li u nui g cho k t qu tng nng su t v ch t l ng tr ng. - Tm ra phng trnh bi u di n m i quan h gi a hm l ng carotenoid t ng trong th c n v nng su t cho tr ng c a g chuyn tr ng IsaBrown. * C u trc c a lu n n Lu n n g m ph n m u, 4 chng, danh m c cc cng trnh cng b , b ng khen H i thi sng t o K thu t T nh BR-VT nm 2009 v danh m c ti li u tham kh o. Ton b n i dung lu n n c trnh by trong 100 trang, trong c 40 b ng; 2 s ; 28 hnh, bi u v th ; s d ng 156 ti li u tham kh o v nh km 128 trang ph l c. Ph n l n n i dung c a lu n n c cng b trong cc bi bo khoa h c, gi i php d thi H i thi sng t o K thu t T nh BR_VT nm 2009 v c bo co t i cc h i ngh , h i th o khoa h c t ch c t i Vi t Nam v n c ngoi. Cc cng trnh cng b lu n n. Chng 1: T NG QUAN TI LI U Trong chng ny, chng ti trnh by nh ng ki n th c n n t ng v n m men Rhodotorula cng nh kha phn lo i m tc gi s d ng trong lu n n, k thu t nui c y bn r n v vai tr c a m t s ch t dinh d ng i v i g c ghi cu i tr ng cng nghi p

tr ng c a g c th tng thm 8-10 % (t 83 - 85% cc l th nghi m), cc ch tiu ch t l ng tr ng c, dy v tr ng c c i n nng nh c

i ch ng ln 93 - 95%

, k t c u albumin c a lng tr ng tr ng

cng v i hm l ng beta-carotene v vitamin A trong lng

tr ng. Bn c nh , chng ti i m qua cc cng trnh nghin c u trn th gi i v s c t carotenoid c a n m men Rhodotorula theo k thu t ln men chm v nu r vai tr c a phytase, s c t carotenoid v beta-carotene chuyn tr ng. Chng 2: I T NG - PHNG PHP nh danh n m men 2.1 Phn l p v i v i g

th hi n qua phng trnh y = - 0,0007 x + 0,1842 x + 82,21 (R = 0,9976) v i x l hm l ng carotenoid t ng (mg/Kg), y l nng su t cho tr ng c a g (%). Nhn chung k t qu nghin c u trong lu n n p ng hon ton n i dung v nhi m v . Tuy nhin, chng ti xin pht tri n ti p t c nh sau: ngh m t s h ng nghin c u

4
Theo nh ng thng tin khoa h c trnh by ph n t ng quan chng ti ch n c 64 ngu n phn l p c ngu n g c t b m t hoa l, tri cy, th c ph m, ngu n t v ngu n n c ch y u l y t i TP.HCM, t nh BR-VT v Long An. M i m u chng ti ti n hnh phn l p ng th trn 3 mi tr ng YMPG (Yeast extract- Malt extract- Peptone- Glucose- agar), YPG (Yeast extractPeptone- Glucose- agar) v PGA (Potatoes- Glucose- agar). Ch n v gi l i cc m u vi sinh c hnh thi t bo n m men, c khu n l c t mu kem n (s c t carotenoid). Cn c vo kha phn lo i c a Kreger-van Rij (1984) l n l t ti n hnh th c hi n cc quan st i th , vi th c n thi t cho cng tc nh danh n m men n gi ng (genus) Rhodotorula, sau ti n hnh nhi u ph n ng sinh ha nh danh n loi (species). 2.2 Thu nh n ch ph m sinh h c t n m men Rhodotorula theo k thu t nui c y bn r n ch n ch ng lm ngu n gi ng nghin c u chnh, chng ti ti n hnh nui bn r n (BR) 8 n m men Rhodotorula phn l p c trn mi tr ng c b n. C nh cc i u ki n nui c y ban u nh nhau ch n ra ch ng c kh nng sinh t ng h p beta-carotene cao nh t trn mi tr ng BR lm ngu n gi ng nghin c u chnh. Mi tr ng c b n (mi tr ng t ng h p) ban u cho qu trnh LBR n m men Rhodotorula c thnh ph n g m c ch t v d ng ch t b sung (dung d ch khong v d u c th). chu n b 100 Kg c ch t chng ti s d ng: 45 Kg g o t m; 55 60 lt n c; 3 Kg b u nnh. Sau khi h ha g o, ph i tr n b u nnh l n l t b sung vo 1% dung d ch khong, 1% d u c th (v/w; ml/g). Dung d ch khong c thnh ph n g m NaNO3: 10g; KH2PO4: 2,5g; MgSO4.7H2O: 1,75g; ng saccharose: 30g; n c c t: 1000 ml. * Th nghi m kh o st h dung mi trch ly v phng php ph v t bo Kh o st h dung mi trch ly v ch n phng php x l m u trong i u ki n t bo l n trong cc h t c ch t r n. Cc h dung mi (DM) kh o st c thnh ph n theo t l (% v) nh sau:

21
V i l 4 v l 5, l ng ch ph m s d ng cao nhng hm l ng vitamin A trong lng lin quan tr ng l i th p hn so v i l 3. Hi n t ng ny, theo chng ti, c n c ch h p thu, chuy n ha cc ch t trong c th g v x y ra

c ch tc d ng ng c. Trong hai ch s hm l ng beta-carotene v vitamin A, chng ti u tin l a ch n phng n t o hm l ng vitamin A do y l ngu n vitamin t nhin r t c n cho ng i, gp ph n kh c ph c tnh tr ng thi u vitamin A trong kh u ph n th c n chng ti kh ng ng i. K t h p v i k t qu b ng 3.24, nh t l ch ph m 15% trong thnh ph n th c n c a g t c nh ng k t qu c gi tr

(tng ng v i l 3) l t l t o ra nng su t v ch t l ng tr ng cao nh t. Tm l i, nghin c u c a chng ti nh t cnh nh. Chng ti tuy n ch n c n m men Rhodotorula sp.3. N m men ng la huy n Tn An - T nh Long An, Vi t Nam. B ng cc kh o st

ny c phn l p t l la non, m u l la c l y vo th i i m thng 5 t i th c nghi m, k t qu nghin c u c a lu n n tm c phng php ph v thnh t bo n m men hi u qu trong tr ng h p t bo l n trong cc h t c ch t r n, l phng php x l t bo b ng l nh ng r ng v k t h p v i siu m. K t qu nghin c u ny c th trong cc nghin c u c lin quan nghi m trn g ng d ng x l thnh t bo n LBR vi sinh v t. Cc k t qu th c

tr ng cho th y ch ph m an ton, c tc d ng lm tng ph m n nng su t tr ng c a g.

ch t v nng su t tr ng. Chng ti tm ra phng trnh bi u di n nh h ng c a hm l ng carotenoid t ng trong th c n m t cng trnh no. Chng 4: K T LU N V i cc m c tiu ban c cc k t qu sau: u t ra, sau th i gian nghin c u chng ti t Phng trnh ny c gi tr khoa h c, th c ti n cao v cha c cng b trong

20
beta-carotene nn ho t tr ng. Qua cc thng s kh o st cc ch tiu ph m ch t tr ng, chng ti k t lu n: - Ch n l 3 v i t l ch ph m b sung l 15% l l c thnh ph n th c n h p l, v c i thi n r nt nng su t tr ng, ch t l ng tr ng. - Ch ph m CR an ton v khng Thu nh n tr ng A trong lng
nghi m

5
-DM1 g m acetonitril: 2-propanol: methanol= 85: 10: 5 -DM2 g m acetonitrile: methanol: 2-propanol= 75: 17,5: 7,5 -DM3 g m acetonitrile:2-propanol:ethyl acetate = 40: 40: 20 -DM4 g macetonitrile:methanol:chloroform= 45: 45: 10 -DM5 g m acetone: light petroleum = 75: 25 Kh o st b c sng max (nm) v dng phng php UV-Vis hm l ng beta-carotene (ppm theo CK) tr ng xc nh

ng ch ng oxi ha c a th vng b tr ng i, s t ng n ho t ng km bnh th ng c a ng d n

h p progesterol b ngn c n, d n

c.

* Hm l ng beta-carotene v vitamin A trong lng

cc l vo giai o n cu i c a th nghi m, t c sau 16 tu n b ng 3.25.

tr ng cc l th

th nghi m. Ti n hnh phn tch hm l ng beta-carotene v vitamin tr ng, k t qu th hi n

B ng 3.25 Hm l ng beta-carotene v vitamin A trong lng

L L C L 1 L 2 L 3 L 4 L 5

Hm l ng beta carotene (mg/Kg) 4,49 0,65

d

Hm l ng vitamin A (g %) 468,24 52,48f 551,29 45,66 e 604,35 41,88c 895,26 66,96a 753,34 38,45b 577,01 62,22d
m c = 0,05)

6,37 0,45b 5,51 1,02c 5,64 0,55c 6,33 0,82b 9,05 1,20a

(Cc gi tr trong cng m t c t c s m khc nhau th khc nhau c ngha

B ng 3.25 cho th y tr ng g t cc l th nghi m c hm l ng betacarotene v vitamin A cao hn r nt so v i l C. S khc bi t ny ch ng t g th nghi m h p thu c carotenoid c trong ch ph m. Tuy nhin, hm l ng beta-carotene v vitamin A trong lng tr ng cc l bi n thin khng ng b . Hm l ng vitamin A trong tr ng g l 3 cao nh t trong khi hm l ng beta-carotene trong lng tr ng g l 5 cao nh t.

2.1 S

kh o st v thu nh n ch ph m sinh h c CR

6
Chng ti b tr 21 nghi m th c (NT) ph v thnh t bo g m cc phng php k t h p gi a phng php v t l (nghi n, b t thu tinh, siu m, l nh ng, c p ng, r ng), ha h c (DMSO), sinh h c (t phn, chitinase). Kh o st v ch n ra NT cho kh nng trch ly beta-carotene cao nh t lm phng php x l m u trong cc th nghi m ti p theo. Sau khi ch n c ngu n gi ng, h dung mi trch ly v phng php x l m u t i u chng ti ti n hnh nui c y v kh o st theo s tm t t hnh 2.1. * T i u thnh ph n dinh d ng b sung v i u ki n LBR v i hm m c tiu l hm l ng beta-carotene (ppm theo ch t kh - CK) c trong canh tr ng vo ngy nui c y th 7. Th c hi n cc kh o st s b tm th nghi m t i tm v sau , thi t l p phng n th nghi m v ti n hnh th nghi m theo phng n l p. Dng phng php quy ho ch th c nghi m quay b c hai c a Box-Hunter, v i h s cnh tay n sao = 2 v s th nghi m tm l 7 t i u 4 y u t dinh d ng g m saccharose, nit tm t i u 3 y u t i u ki n xc nh (NaNO3), phosphor (KH2PO4) v lu hunh (MgSO4). Ch n phng php t i u cc y u t ton ph n 23 v i 3 th nghi m nui c y g m cc gi tr t i u. Kh o st kh nng sinh t ng h p sinh kh i theo phng php l c c a Sato v c ng s (1985). Xc m khu n nh hm l ng carotenoid t ng theo m mi tr ng (MT) (%), dy l p MT (cm) v t l gi ng L 5 61,15
0,08
c

19
L 3 62,87 34,94
0,10
a

0,41

33,18 0,58a 32,99 0,97ab 32,71 0,13b

12,33 0,27a 12,29 0,28a 12,18 0,16ab

0,78 0,004a 0,77 0,001a 0,77 0,005b

L 4 61,25
0,30c

34,20 0,30b 34,00 0,38bc

64,64 1,78a 64,07 3,22a 61,90 1,67b

9,97 0,34a 9,99 0,37a 9,78 0,10a

0,39 0,01a 0,38 0,02a 0,38 0,01a

m c = 0,05)

(Cc gi tr trong cng m t c t c s m khc nhau th khc nhau c ngha

(CFU/g MT). Dng cng c Optimizer c a ph n m m Modde 5.0

phng php so mu c a dung d ch trch ly v i thang mu m u K2Cr2O7. Xc nh ho t tnh phytase d a trn nguyn t c phosphate tc d ng v i amonium molydat s t o ra phosphomolybdat c mu vng. Khi kh phosphomolybdat, mu vng s chuy n thnh mu xanh molybdat, hm l ng phosphor c trong m u. 2.3 Kh o st tnh an ton c a ch ph m trn ng v t th nghi m c, 16 ngy tu i, kh i i t ng th nghi m l chu t nh t tr ng, chu t m c a mu s c t l v i

K t qu trnh by b ng 3.24 cho th y: - Kh i l ng tr ng (g/tr ng), t l lng tr ng, mu lng , t l lng tr ng c, ch s Haugh, t l v tr ng, dy v n nh qua cc tu n th nghi m. Cc thng s tng ng c a tr ng g l C th p hn so v i tr ng cc l th nghi m ( m c ngha = 0,05). Cc thng s ny khng tng tuy n tnh theo hm l ng ch ph m s d ng m theo d ng b c hai h s m (parabol p ng c). Trong , gi tr c c i c a cc thng s kh o st h u h t l 3. - Khi tng hm l ng ch ph m t 5 15% th h u h t cc thng s tng d n v t c c i hm l ng 15% (l 3). l 4 v l 5, tuy b sung l ng ch ph m cao nhng h u h t cc thng s kh o st gi m. Nguyn nhn l do s m t cn i gi a cc thnh ph n cung c p nng l ng. Ring i v i l C t t c cc thng s u m c th p. i u ny ch ng t hi u qu c a ch ph m i v i nng su t v ch t l ng tr ng c a g. - Hnh d ng tr ng c ngha quan tr ng trong vi c p tr ng cng nh trong v n chuy n b o qu n tr ng thng ph m. Ch s hnh d ng thch h p th tr ng s c t l d p v th p nh t trong qu trnh b o qu n, v n chuy n, v cho t l p n cao. Quan st tr ng g nh t c l C th y m t s tr ng c hnh d ng khng u, qu di hay qu trn, i khi c ch l i lm. Trong khi , tr ng nh t c t cc l th nghi m ch s hnh d ng tr ng cao. Tr ng l 3 v l 4 r t p, cn i c m t u t, m t u nh n. S khc bi t v hnh d ng c a tr ng l C v cc l th nghi m c th gi i thch d a vo bi u hi n ho t ng co bp c a ng d n tr ng, khi g n th c n c b sung beta-carotene th ho t ng ch ng oxi ha c a th vng t t d n n ho t ng sinh l bnh th ng c a bu ng tr ng. Ng c l i, thnh ph n th c n l C thi u

18
Threonine (%) Isoleucine (%) Tryptophan (%) Calci (%) Phosphor t ng (%) Phosphor hi u d ng (%) Mu i NaCl (%) Aflatoxin (ppb) Linoleic acid (%) Carotenoid (mg/kg) Beta-carotene (mg/kg) 0,76 0,82 0,21 0,55 0,64 0,22 0,60 9,80 4,95 43,77 7,96 0,83 0,92 0,22 0,55 0,62 0,22 0,60 9,20 6,17 78,70 15,93 0,89 1,01 0,23 0,55 0,61 0,21 0,60 8,60 7,40 113,62 23,89 0,95 1,10 0,24 0,54 0,60 0,21 0,59 8,00 8,62 148,55 31,85 1,01 1,19 0,25 0,54 0,58 0,21 0,59 7,40 9,85 183,48 39,82

7
l ng 15 16 g/c th . Chu t th nghi m c chia thnh 4 l, m i l g m 9 c th chu t. Sau 15 ngy th nghi m xc nh t l c th ch t/s ng, cc ch s mu, hm l ng vitamin A v beta-carotene trong huy t thanh, hm l ng Ca, P trong xng v P trong phn c a t ng c th chu t. T l th c n s d ng trong cc l th nghi m nh sau: - L 1: chu t n 100% th c n Vi n Pasteur (l i ch ng - C) - L 2: chu t n th c n g m 75% th c n C + 25% ch ph m CR - L 3: chu t n th c n g m 50% th c n C + 50% ch ph m CR - L 4: chu t n th c n g m 25% th c n C+ 75% ch ph m CR. m s l ng h ng c u, b ch c u theo phng php pha long r i bu ng m Neubaure. Hm l ng Hemoglobin (Hb) xc php so mu trn my Specon. Xc l ng Ca theo phng php chu n m trn nh theo phng nh hm

* Cc ch tiu ph m ch t tr ng Ti n hnh kh o st cc ch tiu ch t l ng tr ng v thu c k t qu trung bnh th hi n nh b ng 3.24. Kh o st nng su t tr ng c a g lin t c trong 12 tu n vo giai o n g c 30 42 tu n tu i cho th y nng su t tr ng trung bnh tng d n t l 1 n l 3, c gi m nh l 4. G l 3 cho nng su t cao nh t (93,74 2,47)% v k n l l 4 (93,08 3,89)%. Tuy nhin s khc bi t ny khng c ngha v m t th ng k. L 5 l ng ch ph m b sung li u r t cao, song kh nng sinh s n c a g l i khng cao, c th do s m t cn i c a thnh ph n th c n. G l C cho nng su t tr ng th p nh t, ch t (83,21 3,42)%.
B ng 3.24 K t qu trung bnh kh o st cc ch tiu ch t l ng tr ng qua cc tu n th nghi m

nh hm l ng beta-carotene v vitamin A ph c v P theo phng php UV-vis. tr ng c giai m c

trong huy t thanh theo phng php c a Easley J.F. (1965). Xc 2.4 Kh o st nh h ng c a ch ph m trn g Cc th nghi m kh o st nh h ng c a ch ph m CR ln g Tu. G th nghi m l gi ng g IsaBrown, b t

ti n hnh t i tr i g c a doanh nghi p t nhn MaiTh y, t nh B R a-Vng u th nghi m khi g o n 26 tu n tu i v k t thc vo 42 tu n tu i. Th c n C l th c n GD26 Star Feed do Cng ty chn nui CP VN cung c p. G th nghi m c chia lm 6 l, m i l 40 con g m 10 chu ng, m i chu ng 4 con. Kh o st cc ch tiu nng su t tr ng, kh i l ng c a g th nghi m tr c khi b t u th nghi m. G l C c n 100% th c n do C c ph i tr n g m: GD26

Klg T l T L tr ng lng l (g) tr ng lng c (%) (%) 60,01 32,74 30,70 L d d C 0,75 0,17
d

T l v (%)

Ch s hnh d ng
0,77 0,001b 0,77 0,003b 0,77 0,01b

Ch s Mu Haugh lng

dy v

11,54 0,22c 11,97 0,34b 12,18 0,31ab

41,21 0,60d 53,48 1,99c 60,38 2,99b

L 1 61,42
0,46c

33,71 0,20c 34,1 0,66b

L 2 61,90
0,27b

0,12 31,81 0,08c 32,63 0,27b

6,80 0,06c 9,30 0,53b 9,74 0,11a

0,26 0,02c 0,34 0,01b 0,38 0,02a

doanh nghi p ph i tr n. Thnh ph n th c n

Star Feed, b p vng xay, t m, cm g o, v s. T l (%) cc thnh ph n thay i theo t ng giai o n tu i. G cc l th nghi m t l 1 n l 5 c n th c n h n h p do chng ti xy d ng. Kh u ph n p ng nhu c u 18% protein, c thnh ph n ph i tr n g m: b p vng, b u nnh, cm g o, ch ph m CR, b t c, b t v s,

8
mu i NaCl. C nh cc thnh ph n cm g o (12% m): 20%, b t c (53% i t l ch ph m CR s th c th c n cho g mi

17
cc l. Dng ph n m m Ultramix tnh nng b ng 3.23 cc l

m): 5%, NaCl: 0,5% v b t v s: 0,5%. Thay d ng trong cc l 1 vng, b nghi m. Sau 4 tu n th nghi m tr ng v xc lng u nnh v

l ng v cng th c c a th c n chng ti thu c b ng 3.23. So snh ba y u t chnh trong th c n dng cho g th nghi m chng ti nh n th y: - V m t nng l ng trao th nghi m khng khc bi t bnh 2893 10 (Kcal/Kg). - V hm l ng protein th trong th c n bi t v l m c ngha = 0,05 v cc l th nghi m khng khc t gi tr trung bnh 18,27 0,35 (% Klg). i ME (Kcal/Kg) trong th c n cung c p m c ngha = 0,05 v ME t gi tr trung

n l 5 l n l t l 5, 10, 15, 20 v 25%. T t l ch ph m xu t thnh ph n th c n ph i tr n cho g cc l th

CR s d ng trong cc l, ti n hnh tnh ton thnh ph n c n ph i tr n c a b p

g quen d n th c n, chng ti ti n hnh thu nh n , t l lng tr ng tr ng c, t l H

nh hi u su t cho tr ng, cc ch tiu v ph m ch t tr ng nh kh i dy v tr ng. Cc ch tiu tr ng c th c hi n t i phng nh hm l ng vitamin A v carotenoid ki m ch ng.

l ng, hnh d ng, ch s Haugh, mu lng ,t l v ,

- V hm l ng carotenoid c s khc nhau ng k gi a cc l th nghi m C. Theo b ng 3.23 chng ti tm c m i quan h gi a hm l ng carotenoid t ng trong th c n v nng su t cho tr ng c a g, quan h ny bi u hi n qua phng trnh y = - 0,0007 x2 + 0,1842 x + 82,21 (R2=0,9976) v i x l hm l ng carotenoid t ng (mg/Kg), y l nng su t cho tr ng c a g (%).
B ng 3.23 Cng th c th c n cho g s d ng trong th nghi m Thnh ph n(% Klg) L 1 L 2 L 3 L 4 B p vng xay 49 46 43 40 B u nnh 20 18 16 14 Ch ph m CR 5 10 15 20 Cm g o 20 20 20 20 B t c 5 5 5 5 B t v s 0,5 0,5 0,5 0,5 NaCl 0,5 0,5 0,5 0,5 T ng c ng 100 100 100 100 Ch t kh (%) 87,11 87,18 87,25 87,32 ME (Kcal/kg) 2903,00 2898,00 2893,00 2888,00 Protein t ng (%) 18,09 18,20 18,31 18,42 Ch t bo t ng (%) 6,86 7,28 7,70 8,12 X th (%) 4,05 4,21 4,37 4,54 Lysine (%) 1,00 1,03 1,07 1,10 Methionine (%) 0,42 0,49 0,57 0,64 Met + Cystine (%) 0,73 0,80 0,87 0,94 L 5 37 12 25 20 5 0,5 0,5 100 87,39 2883,00 18,53 8,54 4,70 1,14 0,71 1.01

th nghi m b mn chn nui chuyn khoa, khoa chn nui th y, Tr ng Nng Lm TP.HCM. Ti n hnh xc trong lng m u tr ng ti

tr ng theo phng php c a AOAC 958.05 v 974.29 v g i n Trung tm s c k H i ng

Chng 3: K T QU NGHIN C U 3.1 Ch n Rhodotorula c kh nng sinh t ng h p betacarotene trn mi tr ng bn r n T 64 m u phn l p ban 10 m u thu n v quan st cc cam n u (trong c 21 m u l; 17 m u hoa, v qu ; t ct; 3 m u n c; 3 m u rc v 10 m u th c ph m), sau khi lm c i m hnh thi t bo d i knh hi n vi, chng ti

tuy n ch n c 17 dng n m men sinh s c t t c mu t vng kem, h ng . Cc n m men ny c k hi u l n l t l MN1, MN2, MN3, MN4, MN5, MN6, MN7, MN8, MN9, MN10, MN11, MN12, MN13, MN14, MN15, MN16 v MN17.
B ng 3.2 K t qu kh o st c i m sinh l v sinh ha c a 8 ch ng Rhodotorula phn l p c

TT Th nghi m th c hi n 1. Nang bo t 2. S ti p h p 3. Gi s i n m

K hi u n m men Rhodotorula phn l p c MN1 MN5 MN7 MN8 MN10 MN12 MN16 MN17 -

16
4 5 6 7 8 9 10 11 12 N t ng s N formol Tinh b t Lipid X t ng Tro t ng Beta-carotene Carotenoid t ng Ho t tnh phytase 3,62 0,02 1,75 0,17 40,43 1,58 13,52 3,02 6,89 0,87 4,73 0,55 180,68 17,58 (ppm theo CK) 804,04 32,12 (ppm theo CK) 87,07 19,02 UI/g ch ph m kh u th p kho ng 7%, sau khi qua x l t 22,60
4. Khu n ty th 5. Bo t b n 6. Urease 7. DBB (diazonium blue B) 8. Pht tri n 200C 9. Pht tri n 300C 10. Pht tri n 370C 11. Ln men glucose 12. Hnh thnh h p ch t tinh b 13. D-glucose 14. D-galactose 15. Lactose 16. Sucrose 17. Maltose 18. Cellobiose 19. D-xylose 20. L-Arabinose 21. D-Trehalose 22. Melezitose 23. Raffinose 24. L-Arabitol 25. Glycerol 26. Melibiose 27. Inositol 28. Potassium nitrate + + + + + + + + + + + + V + +

9
+ + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + -/+ + + + + V + + + + +

Hm l ng protein c a g o t m ban

v LBR n m men Rhodotorula hm l ng protein tng ng k v ngu n nit trong c ch t (g o v b

1,25 (%Klg). K t qu ny ch ng t n m men Rhodotorula chuy n ha c u nnh) v ngu n nit v c b sung (mu i NaNO3) thnh ngu n nit h u c c a t bo d i d ng protein. Nh v y, v phng di n sinh h c, ch ph m thch h p lm ngu n th c n b sung cho dinh d ng v t nui. 3.3 Kh o st tnh an ton c a ch ph m trn chu t Sau th c nghi m kh o st nh h ng c a ch ph m CR trn chu t, chng ti a ra cc k t lu n sau: - T t c cc c th chu t th nghi m u s ng. i u , cho chu t n ch ph m v i li u 250 g/Kg th tr ng lin t c trong 15

Ghi ch: (-): ph n ng m tnh; (+): ph n ng dng tnh; V(-/+): ph n ng y u, khng r.

Ti n hnh th c hi n cc ph n ng sinh l, sinh ha s c t carotenoid phn l p c trn

i v i 17 n m men sinh nh

ngy nhng chu t v n khng ch t v khng c bi u hi n b nh l. ch ng t tnh an ton c a ch ph m. - Cc k t qu trn l c s ban u

tr l i cc cu h i trong vi c

danh nhm cc gi ng n m men t o bo t v khng t o bo t theo kho phn lo i c a Kreger-van Rij (1984). K t qu chng ti ch n c 8 ch ng n m men mang k hi u MN1, MN5, MN7, MN8, MN10, MN12, MN16 v MN17 thu c gi ng Rhodotorula. Chng ti quan st v m t hnh thi t bo, t c pht tri n trn th ch a c a 8 lo i n m men Rhodotorula phn l p c. Ti n hnh kh o st cc c i m sinh l, sinh ha c a cc n m men Rhodotorula phn l p c trn b Test ID32E v trn cc mi tr ng

chng ti ti p t c ti n hnh th c tr ng.

nghi m kh o st nh h ng c a ch ph m CR trn g

3.4 Kh o st nh h ng c a ch ph m trn g T l protein t ng trong th c n nui g tr ng c n p ng m c 18%. S li u ny l c s chng ti xy d ng thnh ph n th c n cho g th nghi m. Sau khi tnh ton, cn i v i u ch nh, chng ti nh n c cng

10
chung th ch a v trong ng nghi m. Cc k t qu c trnh by b ng 3.2. c i m sinh

15
Ton b canh tr ng nui c y BR c s y gian 24 n m thu c ch ph m CR nh hnh 3.11. nhi t 50 1oC trong th i

Quan st cc

c i m hnh thi sinh l t bo, khu n l c v cc

t yu c u a vo b o qu n kho ng 11 12%, chng ti

ha c a cc n m men thu c gi ng Rhodotorula v sau , cn c vo kha nh danh c a Kreger-van Rij, chng ti k t lu n nh sau: - N m men k hi u MN5 l Rh. graminis; - N m men k hi u MN7 l Rh. ingeniosa; - Hai ch ng MN10 v MN17 u l Rh. glutinis nn c k hi u l n l t c s l Rh. glutinis HUI-1 v Rh. glutinis HUI-2; - B n n m men c k hi u MN1, MN8, MN12 v MN16 cha nh danh sp.4 (MN16). C y cng t l gi ng kho ng 2x10 CFU/g MT vo mi tr ng c b n v nui BR 8 n m men Rhodotorula phn l p c trong cng i u ki n. Kh o st kh nng sinh t ng h p beta-carotene c a t ng ch ng vo ngy nui c y th 7. K t qu thu c th hi n K hi u n m men MN1 MN5 MN7 MN8 b ng 3.3. K hi u n m men MN10 MN12 MN16 MN17 Hm l ng betacarotene (ppm CK) 16,70 2,18 c 42,55 3,57 a 5,10 2,06 d 4,42 1,43d
m c = 0,05)
7

n loi nn chng c k hi u l n l t l: Rhodotorula sp.1

Hnh 3.11 Khay ln men bn r n Rhodotorula v ch ph m CR thu c

(MN1), Rhodotorula sp.2 (MN8), Rhodotorula sp.3 (MN12) v Rhodotorula h n ch s t n th t carotenoid do s oxi ha trong qu trnh s y v b o qu n chng ti th c hi n vi c x l canh tr ng sau ln men theo trnh t nh sau: vi bao canh tr ng b ng b t g o (t l b t g o s d ng 5% Klg) r i ti n hnh s y nhi t 50 1oC n m 11 12%. Sau ng gi chn khng trong bao b ghp nhi u l p c kh nng ch n nh sng v tia c c tm, ch ng th m oxi v hi n c cao. B ng k thu t x l vi bao v ng gi trong bao b c c u trc ghp ph c h p nh trn, rt chn khng chng ti h n ch ng th i ch ph m c chi t rt, c s oxi ha c a cc ch t dinh d ng

B ng 3.3 Kh nng sinh t ng h p beta-carotene c a cc lo i n m men Rhodotorula

Hm l ng betacarotene (ppm CK) 14,48 3,81c 27,77 7,03 b 3,98 0,97 d 4,42 1,43d

c trong ch ph m, t l t n th t carotenoid t ng gi m ch cn 8 10%. Ti n hnh phn tch thnh ph n dinh d ng trong ch ph m CR, k t qu thu c trnh by b ng 3.20. Thnh ph n (% Klg) 11,85 0,82 1,2 x 107 CFU/g CK 22,61 1,25
B ng 3.20 K t qu phn tch thnh ph n dinh d ng c a CR

(Cc gi tr c ch s m khc nhau th khc nhau c ngha

Th c nghi m kh o st kh nng sinh t ng h p beta-carotene c a 8 ch ng n m men Rhodotorula phn l p c trnh by b ng 3.3. B ng 3.3 cho th y MN12 l n m men c kh nng sinh t ng h p beta-carotene cao nh t do MN12 c ch n lm ch ng gi ng nghin c u chnh. Bn c nh phng php nh danh d a vo cc c i m sinh l, sinh ha theo kho phn lo i c a Kreger-van Rij (1984) chng ti cng g i m u n m men MN12 n Cng ty

S TT Ch tiu phn tch 1 2 3 m T ng s CFU Protein t ng

14
T ch ng t vi c t i u cc thng s cng ngh trong qu trnh LBR c * Qu trnh sinh t ng h p sinh kh i, phytase, carotenoid t ng v betacarotene theo th i gian Trong cc th nghi m ny, chng ti s d ng k t qu t i u dinh d ng v i u ki n nui c y, l n l t ti n hnh kh o st th i gian LBR. K t qu nh n c cc th sau:
Hnh 3.7; 3.9 th bi u di n kh nng t ng h p sinh kh i; beta-carotene v carotenoid

11
Nam Khoa sau: TTGCTTGCCGGGCTTGCTCGGTTTGCAGGCCAGCATCAGTTTTCTGG GACGGATAATGGCAGTTAGAATGTAGCGTCTCGGCTGTGTTATAGC TTTCTGCTGGATACGTCCGGGGGACTGAGGAACGCAGCGTGCCGTA TGGCGAGGCTTTGGTCCTTTCACGCTTAGGATGCTGGTGGAATGGTT TAAACGACCCGTCTTGAAACACGGACCAAGGAGTA. tng Qua vi c gi i trnh t 28S DNA v tra c u trn blast search, cho k t qu nh hnh 3.5, v i ng 100% v i ch ng Rhodotorula sp. CBS 10104 trong d li u ngn hng NCBI. ng h c sinh t ng h p sinh xc nh tr t t s p x p cc nucleotid, k t qu nh n c nh

ngha r t l n trong th c t s n xu t.

kh i, phytase, carotenoid t ng v beta-carotene c a n m men Rhodotorula theo

Hnh 3.5 K t qu tra c u trnh t 28S DNA c a ch ng MN12

V y trong lu n n ny,

thu n l i cho vi c trnh by chng ti th ng nh t

N m men Rhodotorula t ng h p sinh kh i, carotenoid t ng v beta-carotene khng tng thch nhau. Sinh kh i t bo v carotenoid tc c i vo ngy thu nh n ch th ln men 7 v t i th i i m ny hm l ng beta-carotene ch chi m 20,95 0,96% carotenoid t ng. Chng ti ch n th i gian thch h p ph m sinh h c t n m men Rhodotorula l vo ngy ln men th 7. N m men Rhodotorula do chng ti phn l p c c kh nng t ng h p phytase nn c ngha th c ti n r t l n khi s d ng canh tr ng LBR lm th c n cho g . Khi ch ph m sinh h c thu c t n m men Rhodotorula s c bi t lm tng hm l ng phosphor, ng th i gp ph n lm gi m thi u l ng phosphor trong gip g h p thu t t cc d ng ch t, calci trong xng

g i n m men Rhodotorula sp.3 (MN12) l Rhodotorula. 3.2 Thu nh n ch ph m sinh h c t Rhodotorula (CR) * Phng php ph v thnh t bo n m men V i thnh ph n c ch t chnh nh trnh by ph n phng php, k t qu trch ly betachng ti ch n c h dung mi DM3 g m acetonitrile: 2-propanol: ethyl acetate = 40: 40: 20 (% th tch) l h dung mi hi u qu dng carotene b ng phng php UV-Vis b c sng 454 nm. Dng h dung mi

phn h n ch gy nhi m mi tr ng chn nui.

DM3 kh o st cc phng php ph v t bo khc nhau. Hi n nay, c nhi u cng b khoa h c v phng php thu nh n sinh kh i v tch chi t s c t carotenoid v beta-carotene c a Rhodotorula khi nui c y theo k thu t ln men chm. Nghin c u nui c y Rhodotorula trn mi tr ng r n v ph v t bo n m men c l n trong cc h t c ch t r n l m t nghin c u hon ton m i c a chng ti, cha c c p b t k trong m t cng trnh no. Vi c tch sinh kh i ra kh i c ch t c c u trc x hay h t l r t kh nn

12
m c tiu c a th nghi m ny l tm ra cch ph v thnh t bo c hi u qu cao tch chi t s c t n i bo trong i u ki n t bo n m men Rhodotorula l n trong cc h t c ch t r n. Hm l ng beta-carotene lun c phng thch kh i t bo v i li u l ng cao hn m t cch ng k cc nghi m th c c qua x l t bo b ng sng nhi t siu m. Phng php x l siu m c b sung b t th y tinh cho hi u qu ph v t bo cao hn so v i tr ng h p khng b sung b t th y tinh. v i tinh th to, s c nn khi r ng cc tinh th l nh ng, g n nh a s n c t do c trong m u k t tinh thnh n c ny lm v t bo m nh hn b ng 3.5 cho th y so v i phng php c p ng. Theo k t qu trnh by l ng beta-carotene cao nh t, lm nghi m th c Sau khi xc

13
Y1 max = 238,29 ppm beta-carotene (theo CK) V i cc hm l ng d ng ch t b sung t i u nh sau: saccharose 8700, nit 8500, phosphor 3300 v lu hunh 500 (mg/Kg MT). K t qu kh o st th nghi m nh sau: tm cho bi ton th c nghi m t i u v i 3 y u t m = 60%; i u ki n nui c y dy l p MT = 2cm; t l gi ng = 7x107 CFU/g MT.

Sau khi tnh ton cc h s bj, h s h i qui tj v tra b ng tiu chu n Student, lo i b cc h s khng c ngha, ki m tra s tng thch c a phng trnh h i quy, chng ti nh n c phng trnh h i qui t i u cc y u t nui c y: Y2 = 202,99 + 27,36 x1 + 26,70 x3 - 27,43 x2 x3 Phng trnh h i qui ny cho th y 3 y u t : v t l gi ng (x3) u nh h ng c a n m men Rhodotorula. Trong , thu n cn tng tc kp gi a t l ngh ch. h ng t l thu n, tr m ban m (x1), dy l p MT (x2), n qu trnh sinh t ng h p beta-carotene m v t l gi ng nh h ng t l nh i u ki n

NT13 cho hi u qu tch chi t cao nh t v i th i gian x l m u l i ng n v hm t (108,19 4,58) ppm theo CK. Nh v y, NT13 tng ng v i phng php l nh ng - r ng - siu m c ch n ph v thnh t bo trong cc nghin c u ti p theo. nh c hm l ng saccharose, nit, phosphor v lu hunh nh. Tnh cc h ng s * T i u thnh ph n dinh d ng v i u ki n LBR tm l n l t l 7000; 8000; 3000 v 700 (mg/Kg MT), chng ti th c hi n cc th nghi m v i cc thng s theo ma tr n ho ch bj, h s h i qui tj v tra b ng tiu chu n Student v i p = 0,05, lo i b cc h s khng c ngha, ki m tra s tng thch c a phng trnh h i quy. K t qu chng ti tm c phng trnh c d ng: Y1 = 194,06 +11,18 x2 + 12,30 x3 +17,25 x1 x2 -13,43 x3 x4 -18,11 (x2), phosphor (x3), v lu hunh (x4) u nh h ng x12 Phng trnh h i quy tm c cho th y c 4 y u t saccharose (x1), nit n qu trnh sinh t ng h p beta-carotene c a n m men Rhodotorula. tm hm l ng d ng ch t

dy l p mi tr ng v t l gi ng nh h ng nh h ng nhi u nh t n hm l ng beta-

i u ny hon ton ph h p v i th c t . Trong hai y u t m l y u t

carotene c a n m men. V v y,

tng hm l ng beta-carotene c n tng gi aW thch h p cho n m men pht nh c cc thng s i u

u nh m duy tr gi tr ho t

tri n. T phng trnh h i qui nh n c ta c th xc

i u ki n LBR n m men Rhodotorula theo l thuy t v qua c th

khi n cc thng s trn. Ti n hnh t i u theo phng php tm c c tr b ng cch s d ng cng c Optimizer c a ph n m m Modde 5.0., chng ti nh n c k t qu l: Y2 max = 283,21 ppm beta-carotene (theo CK) V i cc i u ki n nui c y t i u nh sau: m = 65%; dy l p MT = 1,5cm; t l gi ng = 9x107 CFU/g MT. So snh k t qu t i u giai o n ny (Y2 max = 283,21 ppm) v i giai o n u khi ch t i u cc y u t dinh d ng (Y1 max = 238,29 ppm), k t qu cho th y hm l ng beta-carotene tng ln 18,85% so v i khi cha ti n hnh t i u cc y u t i u ki n LBR.

t i u c n b sung v i m c tiu thu c hm l ng beta-carotene cao nh t, chng ti ti n hnh t i u theo phng php tm c c tr . Dng ph n m m Modde 5.0, cng c Optimizer tr c a hm m c tiu y nh sau: th c hin t i u ha, k t qu nh n c gi