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bacterias en el microscopio, principalmente por la falta de contraste entre ellas y el medio que las rodea. Los colorantes son el medio ms simple de aumentar el contraste. Los colorantes pueden usarse para distinguir entre bacterias diferentes o para revelar algunas estructuras celulares como flagelos, esporas, cpsulas o paredes.
muestras, (coagulacin del protoplasma). Una vez que el frote ha sido fijado, no se producen cambios en el protoplasma de las bacterias al agregar el colorante. En microbiologa la fijacin generalmente se fija con calor, pero tambin pueden usarse sustancias qumicas como formaldehdo, alcoholes y cidos.
afinidad especfica por los componentes de la clula. Algunos colorantes son molculas cargadas positivamente, (cationes) y se combinan con constituyentes celulares cargados negativamente, (cidos nucleicos), ejemplo, azul de metileno y cristal violeta y safranina. Otros colorantes son molculas cargadas negativamente (cationes) y se combinan con los componentes cargados positivamente como las protenas, ejemplo, eosina, fucsina cida y rojo congo.
grupo de colorantes son sustancias liposolubles que se combinan con los materiales lipdicos de la clula. Se usan para revelar gotculas de grasa. Ejemplo: Negro de Sudn B. Algunos colorantes tien mejor si la clula ha sido tratada con un mordiente, que reacciona con los constituyentes celulares alterndolo de tal modo que entonces si puede entrar el colorante, ejemplo, lugol.
Tincin negativa: es un
tipo de tincin a la inversa del proceso usual, las clulas se quedan sin teir, pero se colorea el medio que las rodea. El colorante que se utiliza es opaco y sin ninguna afinidad por los constituyentes celulares, ejemplo la tinta china. Su mayor utilidad radica en que revela las cpsulas.
precipitados o agregados que parecen estructuras celulares autnticas. Tales estructuras se denominan artefactos y se debe ser muy cuidadoso para no confundirlas con estructuras de inters.
La tincin de gram.
Proceso de tincin:
Colorantes: 1. Cristal violeta (1
tincin: Realizar un frote con suficiente material sin llegar a engrosar demasiado la muestra. Fijar el frote con calor.
bacterias puedes dividirse en: Gram positivo Gram negativo Esta diferencia en la coloracin se debe a diferencias constitutivas en la estructura de las paredes celulares.
rigidez a las paredes bacterianas. La pared de las bacterias gram positivo es gruesa y consta de varias capas de peptidoglicano (80 a 90%) y cido teoico. La membrana de la bacteria gram negativo es delgada, con menos peptidoglicano, (10 a 20%), sin cido teoico y algunos fosfolpidos, lipopolisacaridos y protenas.
mientras que los gram negativo si lo hacen. La diferencia esencial est por tanto en su resistencia a la decoloracin. Esta resistencia se debe probablemente al hecho de que en el caso de bacterias gram-negativas, la mezcla de alcohol/acetona es un solvente lipdico y disuelve la membrana exterior de la pared de la clula y tambin puede daar la membrana citoplsmica a la que se une peptidoglicano.
retener el de complejo cristal violeta-yodo y la clula se decolora. Las clulas grampositivo a causa de sus paredes celulares ms espesas (tienen ms peptidoglicano y menos lpido), no son permeables al disolvente ya que ste deshidrata la pared celular y cierra los poros, disminuyendo as el espacio entre las molculas y provocando que el de complejo cristal violeta-yodo quede atrapado.
positivo son todava azules, pero las gram negativo son incoloras. Para poner de manifiesto las clulas gram negativo se utiliza una coloracin de contraste. Habitualmente es un colorante de rojo, como la safranina o la fucsina bsica. Despus de la coloracin de contraste las clulas gram negativo son rojas, mientras que las gram positivo permanecen azules.
Morfologa bacteriana.
La tincin de gram aporta dos ideasorientadoras en la clasificacin de las bacterias: 1. El color: Gram positivo/Gram negativo 2. La forma: cocos, bacilos, cocobacilos Cocos: Bacterias de forma esfrica Bacilos: Bacterias alargadas, en forma de bastn.
La divisin celular
ocurre a lo largo del mismo plano. Diplococos: dos cocos juntos. Estreptococos: 4-20 cocos en cadenas.
ocurre en dos planos distintos: Tetradas. La divisin celular ocurre en tres planos distintos: Agrupacin irregular: estafilococos Agrupacin regular:sarcinas.
Gracias.