UNIVERSIDADE FEDERAL DE ALAGOAS-UFAL INSTITUTO DE QUMICA E BIOTECNOLOGIA IQB QUMICA ANALTICA INSTRUMENTAL

CROMATOGRAFIA

Equipe:

Lucas Luis Henrique Aglaupe Maria Joclia Karol

DEFINIO
Cromatografia um mtodo fsico-qumico de separao de componentes de mistura, realizada atravs da distribuio desses componentes em duas fases, que esto em contato ntimo. Uma das fases permanece estacionria, enquanto a outra se move atravs dela.

CROMATROGRAFIA Chrom + Graphe Cor Escreve

ALGUNS TERMOS TCNICOS

Dissolvente:

Substncia ou mistura de substncias que constituem a fase mvel Origem: Onde se aplica a amostra Fase mvel (Eluente): a fase que se move. Fase estacionria: a fase fixa (geralmente utiliza-se slica gel). Eluio: processo de passagem da fase mvel atravs da fase estacionria

DEFINIO

o grfico que traduz os resultados da anlise cromatogrfica, possibilitando assim a identificao dos componentes da mistura.

TROCA INICA
A cromatografia de troca inica, que geralmente chamada de cromatografia inica, refere-se a mtodos modernos e eficientes de separao e determinao de ons com base em resinas trocadoras de ons. Foi desenvolvida em meados dos anos 1970, quando foi mostrado que misturas de ction e nion podem ser facilmente resolvidas em colunas de HPLC com resinas trocadoras de ction e nions como fases estacionrias. Nesta poca, a deteco era feita por medidas de condutividade. Atualmente, outros detectores esto disponveis p/ a cromatografia inica.

O MECANISMO DE CROMATOGRAFIA

Na cromatografia por troca inica, a fase estacionria altamente carregada, e solutos com cargas de sinais contrrios a esta so seletivamente adsorvidos da fase mvel. A separao de materiais por cromatografia por troca inica est baseada na adsoro reversvel e diferencial dos ons da fase mvel pelo grupo trocador da matriz. A diferena de afinidade entre os ons da fase mvel e a matriz devido a diferenas de carga, sendo possvel control-la utilizando fatores como o pH e a fora inica

A MATRIZ
A matriz de um trocador constituda de um material poroso, natural ou sinttico, inerte, insolvel em gua e em solventes orgnicos, apresentando ligaes covalentes a grupos trocadores inicos. A matriz pode ser: Quanto ao material: Inorgnicas e orgnicas Naturais ou sintticas Dependendo do grupo trocador ligado covalentemente matriz, os trocadores inicos so classificados em: aninicos(trocam nions) e catinicos(trocam ctions).

PROPRIEDADES DE TROCADORES INICOS

Seletividade A seletividade de um trocador aumenta com o incremento do grau das ligaes cruzadas da matriz. ons com carga elevada so ligados mais fortemente ao trocador que ons de baixa carga, nas mesmas concentraes ons com a mesma carga, porm com diferentes tamanhos em soluo, tem graus de afinidade diferentes.

APLICAES

A cromatografia por troca inica apresenta amplas aplicaes analticas e preparativas em laboratrios de pesquisa das universidades, centros de pesquisa e nas industrias. Em qumica analtica, esse tipo de cromatografia usado na anlise de elementos geralmente complexados, na anlise de ons ou na sua eliminao, quando estes interferem na dosagem de uma determinada substncia, ou ainda na separao de misturas de compostos carregados.

CROMATOGRAFIA POR INTERAO HIDROFBICA (CIH):

Desenvolvida nos anos 70; Baseia-se nas interaes hidrofbicas dos ligantes localizados na fase estacionria com as regies hidrofbicas de biomolculas; Utilizada na separao de protenas, atravs do uso de agarose modificada;

Emprego ideal na fase de captura de biomolculas ou na etapa de purificao intermediria;

Cromatografia por Interao Hidrofbica (CIH):

Matriz cromatogrfica levemente enriquecida com grupos fenila ou octila; Aumento da adsoro, devido a elevao do teor de sal na fase mvel; Alcance da eluio, atravs da reduo da concentrao do sal presente no eluente;

Para a adsoro, necessria a presena de sais kosmotrpicos;

Cromatografia por Interao hidrofbica (CIH):

Quanto mais hidrofbico for o constituinte, maior ser a fora da ligao coluna; Hidrofobicidade de protenas x hidrofobicidade de aminocidos; Fatores que afetam o processo de CIH: tipo de ligante, tipo e concentrao de sal, pH, temperatura e aditivos;

Ligantes mais utilizados: alcanos de cadeia linear. Tambm so usados como ligantes, o fenil e outros compostos aromticos.

Cromatografia de afinidade

O que ? Cromatografia de afinidade uma tcnica que utiliza propriedades fsicoqumicas para separao dos componentes de uma mistura protica.

Como funciona?

Consiste na separao de protenas de uma mistura e dividida em duas fases:uma estacionria, aonde a protena a se analisar se liga a polmeros com ligantes especficos contidos na parede do tubo; e outra, aonde h a eluio das protenas indesejadas restando somente aquela a ser estudada.

Fase Estacionria

Na fase estacionria, a protena de interesse se liga ao composto contido no tubo. Por exemplo: numa mistura de protenas A, B, C e D, desejamos estudar a protena A, que se liga facilmente com glicose. Portanto, a parede do tubo aonde essa mistura ser despejada conter glicose, que logo atrair a protena A para si, conseqentemente separando-a das demais, que sero filtradas do tubo.

Eluio

Aps restar no tubo apenas os ligante com as protenas de interesse, despejado no tubo uma soluo contendo os mesmos ligantes contidos na parede do tubo ou reagente desnaturantes (uria, guanidina,etc) desprendendo a protena da parede do tubo. No exemplo, adicionado uma soluo de resduos de glicose que fazem com que a protena A se desprenda da parede do tubo,sendo despejada, em meio a soluo, em outro tubo para estudo.

Cromatografia de papel

O que ?

uma tcnica de partio, utiliza dois lquidos, ou misturas de lquidos, um atuando como fase mvel (eluente) e outro, suportado sobre papel, atuando como fase estacionria. Ocorre a reteno das substncias devido s diferentes afinidades para com as fases estacionria e mvel. Utiliza-se papel normal ou papel de filtro (mais utilizado) como suporte da fase estacionria.

Aplicaes
utilizada para a separao e identificao das substncias ou componentes da mistura, a migrao diferencial sobre a superfcie de um papel de filtro de qualidade especial ; Separar substncias muito polares.