Universidad Nacional Autnoma de Mxico Escuela Nacional Preparatoria 2 Erasmo Castellanos Quinto

Prctica de laboratorio

INTEGRANTES: y y y y y y Alcocer Ramrez Andrea. Barranco Garca Luis Enrique. Cruz Reyes Miguel ngel. Prieto Herrera Antonio. Ramrez Reyes Daniel de Jess Reyes Velzquez Bruno David

GRUPO: 604

MATERIA: Biologa V

Reaccin del Agua oxigenada y catalasa del hgado de pollo 2 H2O2

catalasa

H2O + 2 O2

FECHA DE ENTREGA: 23 de Noviembre de 2011

Clculo de la velocidad de reaccin del agua oxigenada y la catalasa del hgado de pollo a partir del O2 liberado INTRODUCCIN: El desarrollo de esta prctica tiene dos partes, la primera comprende el diseo y elaboracin de un dispositivo capaz de medir el oxgeno liberado por la reaccin del agua oxigenada y el hgado de pollo, (explicada ms adelante) y la segunda parte es donde se llevan a cabo las mediciones de la reaccin, repetida por cuatro veces y calcular la velocidad de reaccin. Por lo tanto comenzaremos por darle un sustento terico a nuestro dispositivo. Otro aparato, el cul nosotros utilizaremos para medir la cantidad de oxgeno, es el manmetro de tubo abierto. Conocemos que la presin absoluta es igual a la suma de la presin baromtrica y la presin atmosfrica. Conviene puntualizar que la presin baromtrica no siempre es mayor que la presin atmosfrica. Una presin baromtrica negativa indica que la presin menor que la atmosfrica o que la vaco parcial. Por ello veremos que hay algunos instrumentos para medir la presin. La presin atmosfrica se mide con un barmetro. Un barmetro de mercurio es esencialmente un tubo de metal que ha sido introducido en un recipiente con mercurio. Parte del mercurio sale del tubo, pero la presin del aire sobre la superficie del recipiente de mercurio soporta una columna de mercurio. (Wilson J. 1990) Es un tubo en forma de U, (Figura 1) que contiene un lquido, generalmente mercurio o agua segn la magnitud de la presin que va a ser medida. Cuando ambos extremos del tubo estn abiertos a la atmsfera, los niveles del lquido se encuentran a una misma altura. (Wilson J. 1990) Cuando un extremo est conectado a un recipiente de gas de bajo presin, el lquido aumentar de nivel en el otro brazo hasta que las presiones queden igualadas. (Wilson J. 1990). Un manmetro cerrado tambin se muestra en la figura. (Wilson J. 1990)

Figura 1. En la imagen se puede apreciar un manmetro en forma de U, este manmetro nos ayudar ms que a medir la presin a medir la cantidad de O2 liberado, gracias a la altura (Wilson J. 1990) Gracias a la altura que se muestra en la seccin 2 (Figura 1) podremos calcular la cantidad de oxgeno, ya que desplazar el liquido, que en esta ocasin como est a baja presin ser agua Pasando a la parte que corresponde a la reaccin, comenzaremos por definir algunos conceptos: Las enzimas son mediadoras del metabolismo encargadas prcticamente de toda reaccin que transcurra en una clula; sin ellas las reacciones metablicas ocurriran tan lentamente que serian imperceptibles. Poseen una extraordinaria potencia cataltica. Por otro lado un catalizador es una sustancia que aumenta la rapidez o velocidad de una reaccin qumica, la misma en el proceso global. La mayor parte de los catalizadores biolgicos son protenas, en este caso las enzimas. . La sustancia sobre la que acta una enzima se denomina sustrato de enzima. En esta ocasin trabajaremos con la catalasa. (Melo V. y Cuamatzi O. 2004) Descomposicin del perxido de hidrgeno (agua oxigenada) 2H2O2 H2O + 2O2

Esta reaccin, aunque fuertemente favorecida termodinmicamente, es muy lenta, a menos que sea catalizada. Un agente catalizador para esta reaccin podra ser el agregar la protena hemoglobina, que contiene hierro, es an ms eficaz para aumentar la velocidad de esta reaccin. (Melo V. y Cuamatzi O. 2004) La catalasa aumenta la velocidad de la descomposicin del perxido de hidrogeno sin catalizar aproximadamente 1000 millones de veces. (Melo V. y Cuamatzi O. 2004). Hay dos hechos importantes que conviene resaltar: en primer lugar un catalizador verdadero aunque participa en el proceso de la reaccin, no se modifica por esta. As por ejemplo, tras catalizar la descomposicin de una molcula de H2O2, la catalasa vuelve al mismo estado que antes. En segundo lugar, los catalizadores modifican la velocidad de los procesos, pero no afectan la posicin de equilibrio de esta reaccin. (Melo V. y Cuamatzi O. 2004) La actividad cataltica de la catalasa es extraordinaria. El valor del cociente Kcat/KM+ es de 4x107 M-1 s-1, el cual lo sita en un grupo de enzimas de lite que han conseguido la perfeccin cintica (Stryer L. 1995) JUSTIFICACIN: La presente prctica parte de la importancia de comprobar la importancia de los catalizadores en la velocidad de reaccin. Lo anterior sustentado por el hecho de que: sin un catalizador, una reaccin podra tardar demasiado tiempo en llevarse a cabo y en el caso de la clula, no es viable tardarse demasiado en ejecutar la reaccin encomendada. Luego si la clula no puede tardarse tanto tiempo en ejecutar una reaccin, se pretende dar a conocer la velocidad con la que se lleva a cabo dicha reaccin, ms an, pretende a graficarse dicha reaccin. Desde luego para realizar lo anterior debemos inventar un dispositivo que nos permita medir la cantidad de oxgeno liberado al agregar agua oxigenada al hgado de pollo. Finalmente pretendemos demostrar que los resultados a obtenerse, deben ser visibles ante nuestros ojos (no a nivel celular) y que en efecto la velocidad de reaccin debe elevarse millones de veces para que lo anterior pueda suceder.
4

HIPTESIS. y 1 Hiptesis Se prev que al agregar el agua oxigenada al hgado, el volumen desplazado de agua se efectu en una forma exponencial. Lo anterior fundamentado en el hecho de que a los ltimos segundos de reaccin, se habrn sumado el volumen de los anteriores, y estos a su vez irn incrementando de acuerdo al volumen de oxgeno desprendido de la reaccin, ya que consideramos este ltimo ser exponencial en relacin con el tiempo. y 2 Hiptesis Tomando en cuenta que el oxgeno desprendido ser directamente proporcional con el tiempo, se prev que durante cierto lapso de tiempo se desprenda una cierta cantidad de gas y por tal en un lapso de tiempo similar, debe desprenderse la misma cantidad de gas que en el primer periodo de tiempo. OBJETIVOS: y Diseo y elaboracin de un dispositivo capaz de medir la cantidad de oxgeno liberado durante la reaccin de la catalasa y el agua oxigenada. Calcular de la velocidad de reaccin del agua oxigenada y la catalasa del hgado de pollo a partir del O2 liberado

METODOLOGA: 1. Diseo del dispositivo

Figura 2. En esta imagen se muestra el diseo del dispositivo, retomando lo visto en la introduccin 2. Breve explicacin del dispositivo El presente dispositivo, es un manmetro en forma de U, este manmetro nos ayudar ms que a medir la presin a medir la cantidad de O2 liberado, el oxgeno va a medirse de gracias a la altura a la que sea desplazado el lquido.

3.- Elaboracin del dispositivo 1. Hacer dos perforaciones en la tapa del frasco, de un dimetro igual al de los tubos de goma y de la manguera. 2. Para realizar la vlvula de escape se debe colocar una trozo de manguera unido a la parte superior del gotero (parte de goma), ste actuar como sellador hermtico. 3. Introducir la vlvula de escape en un orificio. Sellar con silicn el contorno del orificio sobrante 4. Sujetar la manguera en forma de que quede como una U 5. Llenar una porcin de la manguera con el lquido coloreado (agua con caf) hasta la marca cero. 6. Graduar un extremo de la manguera en cm. tomando el cero donde termina el lquido coloreado (agua con caf). 7. Introducir la manguera en el orificio. Sellar con silicn el contorno del orificio sobrante 3. Uso del dispositivo para tomar medidas 1. Se revisa que el dispositivo se encentre en buenas condiciones, es decir, que no tenga fugas. 2. Abrir la tapa del dispositivo (frasco) e introducirle la mitad de un hgado y machacarlo. Despus cerrar nuevamente el dispositivo. 3. En la manguera graduada en centmetros se introducir aproximadamente 1.5 ml de agua con caf. 4. En el dispositivo se encuentran la vlvula de paso. A travs de la vlvula de paso introducir el agua oxigenada al interior del dispositivo, posterior a esto, inmediatamente cerrar la vlvula de paso con un tapn de gotero para no permitir que el oxigeno se escape. 5. A continuacin de a ver cerrado la vlvula de paso; con un cronometro tomar las mediciones con respecto al tiempo (no a la altura). 6. Hacer este procedimiento por cuadriplicado 7. Anotar los resultados.

RESULTADOS: A continuacin, se muestran los resultados (tablas 1-4) obtenidos en cuatro pruebas del dispositivo elaborado para la cuantificacin del oxgeno liberado en la reaccin de la catalasa sobre el agua oxigenada.

Tabla 1. Primer prueba, est dada en centmetros debido a la medicin tomada del dispositivo Prueba 1: 1.7ml. de H2o2 Tiempo (seg.) 10 20 30 40 Altura (cm.) 8 16 23 31

Tabla 2. Segunda prueba, est dada en centmetros debido a la medicin tomada del dispositivo Prueba 2: 1.8ml. de H2o2 Tiempo (seg.) 3 6 9 12 Altura (cm.) 3 5.5 8 10

Tabla 3. Tercer prueba, est dada en centmetros debido a la medicin tomada del dispositivo Prueba 3: 1.5ml. de H2o2 Tiempo (seg.) 2 4 6 8 Altura (cm.) 1 3.5 4 5.5

Tabla 4. Cuarta prueba, est dada en centmetros debido a la medicin tomada del dispositivo Prueba 4: 1.6ml. de H2o2 Tiempo (seg.) 5 10 15 20 Clculo de la cantidad de oxgeno. Con los datos de las tablas (Tablas 1-4) de altura en centimetros y con el rea de nuestra manguera, se determinara los cm3 de O2 de la reaccin. Si el dimetro de la manguera es igual a 0.4 cm. , el radio de la manguera ser igual a 0.2 cm. y el rea de la manguera ser de 0.125 cm2, con est valor se multiplica a las alturas obteniendo el volumen en cm3 (Tablas 5-8). Altura (cm.) 4.5 7 11.5 15

Tabla 1. En esta tabla se muestran los valores ya convertidos a cm3 de la primera prueba Prueba 1: 1.7ml. de H2o2 Tiempo (seg.) 10 20 30 40 Volumen (cm3.) 1 2 2.875 3.875

Tabla 2. En esta tabla se muestran los valores ya convertidos a cm3 de la segunda prueba Prueba 2: 1.8ml. de H2o2 Tiempo (seg.) 3 6 9 12 Volumen (cm3.) 0.375 0.6875 1 1.25

Tabla 3. En esta tabla se muestran los valores ya convertidos a cm3 de la tercera prueba Prueba 3: 1.5ml. de H2o2 Tiempo (seg.) 2 4 6 8 Volumen (cm3.) 0.125 0.4375 0.5 0.6875

10

Tabla 4. En esta tabla se muestran los valores ya convertidos a cm3 de la ltima prueba Prueba 4: 1.6ml. de H2o2 Tiempo (seg.) 5 10 15 20 Volumen (cm3.) 0.5625 0.875 1.4375 1.875

Los valores (Tablas 5-8) anteriores se muestran a continuacin (Figura 3-6):

Prueba 1
Altura 40 20 0 0 10 20 30 40 50

Tiempo

Figura 3. En esta grfica se colocan los valores de la prueba 1 (altura, tiempo).

Prueba 2
20 10 0 0 5 Tiempo 10 15 Altura

Figura 4. En esta grfica se colocan los valores de la prueba 2 (altura, tiempo).

11

Prueba 3
Altura 10 5 0 0 2 4 Tiempo 6 8 10

Figura 5. En esta grfica se colocan los valores de la prueba 3 (altura, tiempo).

Prueba 4
Altura 20 10 0 0 5 10 15 20 25

Tiempo

Figura 6. En esta grfica se colocan los valores de la prueba 4 (altura, tiempo). Usando las herramientas de Excel, referentes a los grficos, se puede determinar la ecuacin de la recta de que se ajuste a los puntos, est se basa en la tcnica de Estadstica, de los mnimos cuadrados. Establece que con las siguientes formlas se puede determinar la pendiente y la ordenada al origen de la recta, donde, N = nmero de pares de datos y = sumatoria

Gracias a esto podemos fcilmente determinar una lnea recta cercana a tocar todos los puntos (Figuras 7-10):

12

Prueba 1
Altura 40 20 0 0 10 20 30

y = 0.76x + 0.5

40

50

Tiempo

Figura 7. Grfica de prueba 1 Se visualiza en la Figura 7 que m=0.76 por lo que la velocidad de reaccin es 0.76cm3/s y una R2 cercana a uno, nos indica un margen de error mnimo al trazar la recta.

Prueba 2
Altura 20 10 0 0 5 Tiempo

y = 0.7833x + 0.75

10

15

Figura 8. Grfica de prueba 2 Se visualiza en la Figura 8 que m=0.7833, por lo que la velocidad de reaccin es 0.7833cm3/s y una R2 cercana a uno, nos indica un margen de error mnimo al trazar la recta.

13

Prueba 3
10 5 0 0 2 4 6 8 Altura

y = 0.7x

10

Tiempo

Figura 9. Grfica de prueba 3 Se visualiza en la Figura 9 que m=0.7, por lo que la velocidad de reaccin es 0.7cm3/s y una R2 cercana a uno, nos indica un margen de error mnimo al trazar la recta.

Prueba 4
Altura 20 10 0 0 5 10 15

y = 0.72x + 0.5 R = 0.9893

20

25

Tiempo

Figura 10. Grfica de prueba 4 Se visualiza en la Figura 10 que m=0.72, por lo que la velocidad de reaccin es 0.72cm3/s y una R2 cercana a uno, nos indica un margen de error mnimo al trazar la recta. Clculo de la velocidad de reaccin. Con los datos de las pendientes de las rectas de nuestras grficas, podemos determinar la velocidad de la reaccin ya que: VelocidadReaccin = m (pendiente de la recta)

14

Con lo que obtenemos los datos de la siguiente tabla y con esto podemos compararlos. Tabla 9 Comparacin de las pendientes Velocidad de Reaccin Prueba 1 2 3 4 Valor Pendiente 0.76 0.78 0.7 0.72

En esta tabla (Tabla 9) se muestran los valores de la pendiente de cada una de las pruebas y por lo tanto tambin pasa a ser la velocidad de reaccin debido a lo anterior explicado DISCUSIN: En los resultados puede observarse claramente que el aumento de volumen fue en la mayora de las pruebas constante, no hay grfica alguna en la cual el volumen desplazado de agua haya sido exponencial. Lo anterior demuestra que: cuando un extremo est conectado a un recipiente de gas de baja presin, el lquido aumentar de nivel en el otro brazo hasta que las presiones queden igualadas. (Wilson J. 1990). La reacciones anteriores slo pudieron llevarse a cabo con un catalizador que nos mostr la velocidad de la reaccin a una velocidad prodigiosa, la catalasa aumenta la velocidad de la descomposicin del perxido de hidrogeno sin catalizar aproximadamente 1000 millones de veces. (Melo V. y Cuamatzi O. 2004). En los resultados, tambin puede comprobarse que los catalizadores modifican la velocidad de los procesos, pero no afectan la posicin de equilibrio de esta reaccin. (Melo V. y Cuamatzi O. 2004). En caso de ocurrir lo contrario los

15

resultados estaran an ms distantes los unos de los otros por la diferencia en la cantidad de H2O2 agregada en las diferentes pruebas realizadas. Como se pude observar en la tabla final de resultados velocidad de reaccin, podemos observar que en las cuatro pruebas, la velocidad de reaccin estuvo muy cercana a 0.7, con lo cual puede inferirse que el dispositivo tena un margen de error mnimo, de lo contrario los resultados hubieran arrojado valores muy distantes entre s. Las pequeas diferencias presentadas en los resultados, pueden deberse a errores humanos, tal como no sellar rpidamente la manguera donde se introdujo el agua oxigenada. La cantidad de agua oxigenada puede hacer variar la velocidad de reaccin, es decir que la velocidad de reaccin es directamente proporcional a la cantidad de agua oxigenada y la cantidad de catalasa. Finalmente, se compr que la segunda hiptesis fue correcta, ya que la cantidad de oxgeno liberada durante la reaccin permaneci constante y nunca increment de forma exponencial como se pensaba en la primera hiptesis. CONCLUSIONES: La catalasa es una enzima que acta sobre el perxido de hidrgeno (H2O2 agua oxigenada) descomponindolo en H2O + O2, con desprendimiento de energa en forma de calor, en esta reaccin, como lo vimos en clase es una reaccin irreversible en donde uno de los productos se desprende de la reaccin en este caso el oxigeno, cuando la enzima entra en contacto con el perxido de hidrogeno, convierte el perxido de hidrogeno (H2O2) en agua (H2O) y el gas oxigeno (O2). Esta enzima est presente en todos los tejidos animales y vegetales. Las burbujas formadas que son oxigeno puro se crea debido a esta enzima. Por lo tanto, y relacionado con lo que vimos en clase, la velocidad de descomposicin del agua oxigenada puede medirse segn la cantidad de oxgeno que se desprende. En una reaccin la energa de los reactivos y productos es siempre la misma, pero la energa de activacin puede disminuir si un catalizador
16

proporciona un camino alternativo para que proceda la reaccin. Lo que provoc el hgado, tanto en nuestro experimento extraescolar y en el perteneciente a esta prctica, fue que aumento la velocidad porque hace que la reaccin ocurra mediante un mecanismo que requiere una energa de activacin menor. La catalasa y la mayora de las enzimas son protenas, caracterizadas por su estructura molecular tridimensional. La actividad de las enzimas depende de esta estructura, en la cual hay una zona en la que se inserta una molcula del reactivo (o sustrato) de manera ajustada y especfica, como puede hacerlo una llave en la cerradura como ocurre en el modelo de la llave- cerradura. La unin del sustrato a la enzima desencadena la reaccin qumica, se liberan los productos y el sitio de unin queda libre nuevamente para captar otra molcula de sustrato y continuar la reaccin. AUTOEVALUACIN: Integrantes Participacin (prctica) y Alcocer Ramrez Andrea y Barranco Garca Luis Enrique y Cruz Reyes Miguel ngel y Prieto Herrera Antonio y Ramrez Reyes Daniel de Jess y Reyes Velzquez Bruno David 10 10 10 10 10 10 10 6 6 8 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 Material (prctica) 10 Participacin (informe) 10 Informacin (bsqueda) 10 10 Total

17

BIBLIOGRAFIA: y Bahinski, R (1991) Bioqumica, Adison Wesley Longman, Mxico, pp. 174222 y Baker, JW. Y Allen, GE. 1973. Materia, energa y vida, Fondo educativo interamericano, Mxico y y Stryer L. 1995 Bioqumica cuarta edicin Revert, Espaa pp. 554 Melo V. y Cuamatzi O. 2004, Bioqumica de los procesos metablicos Revert S.A. UAM, Mxico, pp. 95-112. y Wilson J. 1990, Fsica con aplicaciones McGraw-Hill, Mxico, pp. 318321.

18