FARMACOPIA BRASILEIRA

QuARTA EDIO

Parte I

FARMACOPIA BRASILEIRA
QUARTA EDIO

Parte I

ATHENEU mITORA SO PAULO LmA

Rua Marcom. 131 - 2? andar 01047 - So Paulo - SP

1_

Aprova a Parte I da Quarta Edio da Farmacopia Brasileira - Generalidades e Mtodos de Anlise - e d outras providncias. o PRESIDENTE DA REPBLICA, usando das atribuies que lhe confere o art. 81, item 11I, da Constituio,
DECRETA:

Art. I? Fica aprovada a Parte I da Quarta Edio da Farmacopia Brasileira - Generalidades e Mtodos de Anlise - que a este acompanha, elaborada pela Comisso Permanente de Reviso da Farmacopia, do Conselho Nacional de Sade. Pargrafo nico. delegada ao Ministro de Estado da Sade competncia para aprovar a Parte 11da Farmacopia Brasileira - monografias - sob a forma de fascculos. Art. 2? Na elaborao de medicamentos e insumos farmacuticos sero observadas as normas e condies estabelecidas pela Farmacopia Brasileira e seus fascculos. Pargrafo nico. O frmaco ou adjuvante de fabricao no includo na Quarta Edio da Farmacopia Brasileira ser analisado na forma prevista em outros cdigos oficiais. Art.3? Incumbe ao Ministrio da Sade, por meio da Comisso Permanente de Reviso da Farmacopia Brasileira, manter constante atualizao das monografias, bem assim promover novas edies ou propor alteraes edio vigente da Farmacopia Brasileira. Art. 4? As drogarias e farmcias, os estabelecimentos de ensino de medicina, farmcia, odontologia e veterinria, os rgos de fiscalizao e controle de qualidade de medicamentos, os laboratrios industriais e os estabelecimentos congneres, so.obrigados a manter exemplar atualizados da Farmacopia Brasileira. Art. S? vedada a impresso, distribuio, reproduo ou venda da Farmacopia Brasileira, sem a prvia e expressa autorizao do Ministrio da Sade. . Art. 6? Este Decreto entra em vigor na data de sua publicao. Art. 7? Revogam-se as disposies em contrrio. Braslia, 30 de agosto de 1988; 167? da Independncia e l00? da Repblica.
JOS SARNEY

Lu{z Car/os Borges da Silve;ra

A Comisso Permanente de Reviso da Farmacopia Brasileira formaliza agradecimentos Orga nizao PanArnericaoa da Sade - OPAS, particularmente aos Ors. Marcelo Jorge Vernengo e Goy Enrique Navas, e li. Comisso da Farmacopia Europia, na pessoa do Or. PeterJosef Schorn, pelo apoio recebido no decorrer da elaborao desta obra.

I""'

Em decorrncia da nova sistemtica de apresentao da Farmacopia Brasileira adotada nesta edio, os textos da Parte I constituem-se em recomendaes oficiais para todas as mo~ografias publicadas a partir de janeiro de 1989.

CONTEDO
I. PREFAcIO 11. HISTRICO

m. COMISSO
RADORES

PERMANENTE

DE REVISO DA FARMACOPIA

BRASILEIRA E COLABO-

IV. GENERALIDADES V. MTODOS DE ANLISE V.1. PROCEDIMENTOS TCNICOS APLICADOS A MEDICAMENTOS V.I.I. Determinalo de peso em formas farmac8uticas V.I.2. Determinalo de volume em formas farmac@uticas V.1."3. Determinalo de resistencia mecnica em comprimidos V.1.3.1. Dureza V.I.3.2. Friabilidade V.I.4. Testes de desintearalo V.I.4.I. DeterminaAo do tempo de desintegralo para comprimidos e cpsulas V.I.4.2. Determinalo do tempo de desintegralo desuposit6rios, 6vulos e comprimidos vaginais V.1.5. DeterminaAo do tempo de dissolulo para comprimidos e cpsulas V.2. MTODOS FSICOS E FSICO-QuMICOS V.2.I. Determinalo da massa V.2.2. DeterminaAo da temperatura e faixa de fuslo V.2.3. Determinalo da temperatura de ebulilo e faixa de destilalo V.2.4. Determinalo da temperatura de congelamento V.2.5. Determinalo da densidade de massa e densidade relativa V.2.6. Determinalo do indice de refralo V.2.7. Determinalo da viscosidade V.2.S. Determinalo do poder rotat6rio e do poder rotat6rio especfico V.2.9. Determinalo da perda por dessecalo V.2.IO. Determinalo de cinzas sulfatadas (residuo por incineralo) V.2.I1. Determinalo da granulometria dos ps V.2.I2. Cor de liquidas V.2.I3. Espectrofotometria de absorlo atmica V.2.I4. Espectrofotometria de absorlo no uItravioleta, visiveI e infravermelho V.2.15. Espectrofotometria de fluoresC@ncia V.2.16. Turbidimetria e nefelometria V.2.17. Cromatografia

V.2.17 .1. Cromatografia em camada delgada V.2.17 .2. Cromatografia em papel V.2.I7.3. Cromatografia em coluna V.2.17.4. Cromatografia liquida de alta presso V.2.17.S. Cromatografia a gs V.2.17.6. Material para cromatografia V.2.I8. Polarografia V.2.I9. Determinao do pH V.2.2O. Determinao de gua V.2.2O.1. Mtodo volumtrico V.2.20.2. Mtodo da destilao azeotr6pica V.2.2O.3. Mtodo gravimtrico V.2.2I. Anlise de solubilidade por fases V.2.22. Eletroforese V.3. MTODOS QUMICOS V.3. I. Reaes de identificao V.3.1.1. Ions, gmpos e funes - Acetato - Acetila - Alcal6ide - Alumnio, on - Amina aromtica primria - Amnia e amina a1iftica volitil - Amnio, on - Antimnio(IlI), on - Arsnio - Barbitrico sem substituinte no nitroa&nio - Brio, on - Benzoato - Bicarbonato - Bismuto, on - Bissulfito - Barato - Brometo - Clcio, on - Carbonato - Chumbo, on - Cianeto - Citrato - Clorato - Cloreto - Cobre(II), on - ster - Ferro - Frrico, on - Ferroso, on - Fosfato (ou ortofosfato) - Hipofosfito - Iodeto - Lactato - Ltio, on - Magnsio, on - Mercro - Mercrio(lI), on - Mercrio(I), on - Nitrato

- Nitrito - Oxalato - Permanganato - Perxido - Potssio, ion - Prata, on - Salicilato -S6dio, on - Succinato - Sulfato - Sulfito - Tartarato - Tiocianato - Tiossulfato - Xantina -Zinco, ie~ V.3.1.2. Identificao de esterides por cromatografia em camada delgada V.3.1.3. Pesquisa de esterides estranhos por cromatografUl em camada delgada V.3.1.4. Pesquisa de substncias relacionadas a sulfonamidas por cromatografia em camada delgada V.3.1.5. ldentificaJo de fenotiazinas por cromatografia em camada delgada V.3.1.6. Pesquisa de impurezas reJacionadas a fenotiazinas por cromatografUl em camada delgada V.3.2. Ensaios-limite para impurezas inorgAnicas V.3.2.1. Ensaio-limite para c1oretos V.3.2.2. Ensaio-limite para sulfatos V.3.2.3. Ensaio-limite para metais pesados V.3.2.4. Ensaio-limite para ferro V.3.2.S. Ensaio-limite para arsnio V.3.2.6. Ensaio-limite para amnia V.3.3. Determinaes em gorduras e leos V.3.3.1. DeterminalO da densidade relativa V.3.3.2. Determinao da temperatura de fuso V.3.3.3. Determinao da temperatura de solidificalo V.3.3.4. Determinao do ndice de refralo V.3.3.S. Determinalo do poder rotat6rio V.3.3.6. Determinao de gua e sedimentos V.3.3.7. Determinao do indice de acidez V.3.3.8. Determinalo do ndice de saponificalo V.3.3.9. Determinalo do ndice de steres V.3.3.10. Determinao do indice de iodo V.3. 3.11. Determinalo do indice de per6xidos V.3.3.12. Determinalo do ndice de hidroxila V.3.3.13. Determinao do ndice de acetila V.3.3.14. Determinalo de matria insaponificvel V.3.4. Ensaios y ~.4.1. Titulaes por diazotalo V.3.4.2. Determinao de nitrognio pelo mtodo de Kjeldahl V.3.4.2.1. Macrodetermnalo (Mtodo I) V.3.4.2.2. Semi-microdeterminao (Mtodo 11) V.3.4.3. Mtodo de combusto em frasco de oxignio V.3.4.4. Titulaes complexomtricas - Aluminio - Bismuto - Clcio -Chumbo - Magnsio

- Zinco V.3.4.5. TitulaOes em meio no-aquoso - Titulao de substncias de carter bsico - Titulao de sais de cidos halogenados - Titulao de substncias de carter cido V.3.4.6. Determinao da metoxila V.3.4.7. Determinao do dixido de enxofre V.3.4.8. Determinao do lcool - V.3.4.8.1. Mtodo por destilao - V.3.4.8.2. Mtodo por cromatografia a gs V.3.4.9. Anlise de aminocidos V.4. MTODOS DE FARMACOGNOSIA V.4.1. Preparo de material vegetal para observao e estudos histolgicos V.4.2. Mtodos de anlise de drogas vegetais V.4.2.1. Amostragem V.4.2.2. Determinao de material estranho V.4.2.3. Determinao de gua V.4.2.4. Determinao de cinzas totais V.4.2.5. Determinao de cinzas insolveis em cido V.4.2.6. Determinao de leos essenciais V.4.2.7. Determinao de leos fixos V.4.2.8. Determinao do cineol V.4.2.9. Determinallo do indice de espuma V.4.2.10. Determinao de substncias extraiveis por lcool V.5. MTODOS BIOLGICOS V.5.1. Testes de segurana biolgica V.S.I.1. Esterilidade V.S.1.2. Pirog!nios V.5.1.3. Toxicidade V.S.1.4. Substncias vasodepressoras V.S.1.5. Histaniina V.S.1.6. Contagem de microrganismos viveis em produtos que no necessitam cumprir com o teste de esterilidade V.5.1. 7. Mtodo geral para pesquisa e identificao de patgenos V.S.l.7.l. Enriquecimento nlo-seletivo - Substncias solveis em gua - Substncias oleosas misclveis em gua - Substncias solveis em miristato de isopropila - Pomadas e cremes lDsolveis em miristato de isoproplla - Gelatina - Substncias insolveis ou parcialmente solveis em gua V.S.1.7.2 Fase seletiva e testes de confmnalo

- Pseudomonas aeruginosa - Staphylococcus aureus - Salmonella sp.

- Escherichill coli
V.S.1.7.3. Descrio dos meios de cultura e reagentes V.S.1.7.4. Esterilizao e acondicionamento dos meios de cultura V.5.1.7.5. Capacidade seletiva e nutritiva dos meios de cultura e validao do teste para pesquisa e identificaO de patgenos V.S.1.8. Substncias pressoras V.S.2. Ensaios V.S.2.1. Ensaio biolgico de oxitocina - Mtodo A: hipotenso arterial em frango - Mtodo B: contrao do tero de rata in vitro V.S.2.2. Ensaio biolgico de corticotroflna

- Mtodo A: subcutneo - Mtodo B: intravenoso V.S.2.3. Ensaio biolgico de insulina - Mtodo A: convulso em camundongos - Mtodo B: glicose sangUnea em coelhos - Mtodo C: glicose sanginea em camundongos V.S.2A. Durao do efeito da insulina V.S.2.S. Ensaio biolgico de glucagon V.5.2.6. Ensaio biolgico da heparina V.5.2.7. Ensaio biolgico de sulfato de protamina V.5.2.8. Ensaio biolgico de gonadotrofina srica V.5.2.9. Ensaio biolgico de gonadotrofma corinica V.5.2.1O. Ensaio biolgico de gonadorelina V.5.2.11. Ensaio biolgico de menotrofma V.S.2.12. Ensaio biolgico de digital V.5.2.B. Ensaio biolgico de vasopressina V.5.2.14. Ensaio biolgico de lipressina V.5.2.IS. Ensaio biolgico de felipressina V.5.2.16. Ensaio biolgico de somatotrofina - Mtodo A: aumento de peso corporal - Mtodo B: mtodo da tbia V.5.2.17. Ensaio microbiolgico de antibiticos V.S.2.17.I. Ensaio microbiolgico por difuso em gar V.5.2.17.2. Ensaio microbiolgico por turbidimetria VI. PROCEDIMENTOS ESTATSTICOS APLICVEIS AOS ENSAIOS BIOLGICOS VI.I. GLOSSRIO DE SMBOLOS VI.2. FUNDAMENTOS VI.3. VALORES ABERRANTES VIA. ENSAIOS DIRETOS VI.5. ENSAIOS INDIRETOS QUANTITATIVOS VI.5.l. Tipos de delineamento VI.5.2. Anlise de varincia VI.5.3. Testes de validade VI.S.4. Estimativa da potncia e limites de confiana VI.6. MDIAS MVEIS VI.7. ENSAIOS INDIRETOS "TUDO OU NADA" VI.8. COMBINAO DE ESTIMATIVAS DE POTeNCIA VI.8.1. Potncia mdia ponderada e limites de confiana VI.9. TABELAS ESTATSTICAS VI.lO. EXEMPLOS DE ENSAIOS ESTATSTICOS VI.IO.I. Exemplo de ensaio direto VI. 10.2. Exemplos de ensaios indiretos quantitativos VI.IO.3. Exemplo de ensaio indireto "tudo ou nada" VI.lOA. Exemplo de combinalo de estimativas de potncia VII. RADlOFRMACOS VIII. PRODUO DE DISCOS E METODOLOGIA PARA TESTE DE SENSIBILIDADE AOS ANTI BACTERIANOS VIII.I. PRODUO DE DISCOS VIII.2. CONTROLE DOS DISCOS IX. RECIPIENTES E MATERIAIS EMPREGADOS NA SUA FABRICAO IX.I. MATERIAIS EMPREGADOS NA FABRICAO DE RECIPIENTES IX.I.I. Material plstico - Mtodos gerais de anlise de materiais plsticos - Limpidez e grau de opalescncia de solues - Ensaio por combusto em atmosfera de oxignio

IX .1.1.1. Materiais plsticos base de doreto de polivinila (PVC) IX.I.I.2. Poliolefmas IX.1.1.2.1. Polietileno de baixa densidade IX.1.1.2.2. Polietileno de alta densidade IX.1.1.2.3. Polipropileno IX. 1. 1.2.4. Poliestireno IX.1.1.2.S. Poliestireno opaco IX.2. RECIPIENTES IX.2.1. Recipientes de vidro IX.2.2. Recipientes de material plstico IX.2.2.1. Recipientes de material plstico para solues injetveis aquosas IX.2.2.1.1. Recipientes base de cloreto de polivinila IX.2.2.2. Recipientes de material plstico para sangue e produtos do sangue IX.2.2.2.1. Recipiente base de cloreto de polivinila para sangue e produtos do sangue, contendo ou no soluo anticoagulante X. MTODOS DE PREPARAO X.I. MTODOS DE ESTERILIZAO X.1.1. Mtodos fsicos X.I.I.I. Esterilizao pelo calor X.1.1.2. Esterilizao por radiao X.1.1. 3. Esterilizao por filtrao X.1.2. Mtodo qumico X.1.2.1. Esterilizao pelo xido de etileno X.2. INDICADORES BIOLGICOS XI. SUBSTNCIAS CORANTES XII.REAGENTES XII. I. INDICADORES XIl.2. REAGENTES E SOLUES REAGENTES XII.3. SOLUES VOLUMTRICAS XII.4. TAMPES XIIII. ANEXOS XlII.1. METODOLOGIA PARA O TESTE DE SENSIBILIDADE AOS ANTIBACTERIANOS (ANTIBIOGRAMA) XIlI.2. ANIMAIS DE LABORATRIO XII1.2.I. Condies sanitrias XIII.2.2. Ambiente XIII.2.3. Nutrio XIII.2.4. Gentica XIII.2.S. tica XIII.3. NOMES, SMBOLOS E MASSAS ATMICAS XlII.4. UNIDADES DO SISTEMA INTERNACIONAL (SI) USADAS NA FARMACOPIA E EQUIV AL~NCIA COM OUTRAS UNIDADES XIII.S. MICRORGANISMOS EMPREGADOS EM TESTES E ENSAIOS

Dando cumprimento s disposies do Decreto Federal n!? 78.840, de 25/11/1976, a nova edio da Farmacopia Brasileira vem ao encontro dos desejos da comunidade tcnico-cientfica brasileira, manifestamente interessada na reviso da edio anterior. A Comisso Permanente de Reviso da Farmacopia Brasileira, constituda pela Portaria n!? 151/82 do Exmo. Ministro da Sade, s pde realizar seu trabalho graas ao apoio decisivo da Secretaria Nacional de Vigilncia Sanitria - SNVS - do Ministrio da Sade. Acordos e convnios celebrados entre a SNVS, a Central de Medicamentos - CEME - do Ministrio da Previdncia e Assistncia Social- MPAS ~ e o Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico - CNPq -, asseguraram Comisso recursos f"manceiros indispensveis, incluindo bolsas de estudos para execuo dos trabalhos. A elaborao das monografias foi confiada a profissionais com efetiva experincia no assunto; estas monografias foram revisadas por outros profissionais do mesmo campo de atividade. Apesar disto, eventuais imperfeies, erros ou omisses so de responsabilidade exclusiva da Comisso Permanente de Reviso da Farmacopia Brasileira, a quem coube a aprovao do texto final. A 4~ Edio da Farmacopia Brasileira marca o incio de nova era. Trata-se de edio na qual se adota novo sistema de apresentao. O rpido avano da tecnologia e a crescente complexidade das substncias medicinais determinam a necessidade de freqentes revises da farmacopia. Para facilitar estas revises e possibilitar introduo de novas monografias e mtodos de anlise necessrios, a Comisso adotou esta nova forma de apresentao. O presente volume constitui a Parte I da Farmacopia e compreende as generalidades e os mtodos gerais de anlise. A Parte 11 ser constituda de monografias de matrias-primas e especialidades fannacuticas, publicadas em fascculos. Um ndice indicar o ttulo das monografias, seus nmeros de referncia e a data para sua entrada em vigor. A Farmacopia Brasileira em sua 4l!- edio tem vigncia em todo o Territrio Nacional. ,A nomenclatura, os mtodos de identificao e anlise e todos os demais dados nela contidos prevalecem sobre quaisquer outros assinalados em cdigos farmacuticos diversos. Nos casos omissos, podem ser utili zados a Farmacopia Internacional, a Farmacopia Europia e outros cdigos farmacuticos em suas ltimas edies. As monografias da Farmacopia Brasileira 4l!- edio estabelecem parmetros que o produto dever satisfazer a qualquer tempo durante seu perodo de uso e no para serem interpretados somente como especificaes para liberao por parte do fabricante. A no incluso de um frmaco ou adjuvante de fabricao na 4l!-edio da Farmacopia Brasileira no dispensa estas substncias de anlise segundo outros cdigos oficiais; assim como a presena de impureza no descrita especificamente na Farmacopia no significa que a substncia pode ser usada pelo simples fato de a Farmacopia no a especificar. Nestes casos, a deciso deve ser tomada com base no bom senso tcnico e nas boas prticas de fabricao. A Farmacopia obra para profissionais devidamente qualificados e treinados. Por este motivo, n[o fomece explicaes didticas, apresentando as monografias com redao clara, sucinta e desprovidas de mincias julgadas desnecessrias pela Comisso. A Comisso Permanente de Reviso da Farmacopia Brasileira toma pblicos seus agradecimentos a todos aqueles que colaboraram no preparo desta edio e, em especial, ao Conselho Federal de Farmcia pelo apoio que possibilitou a publicao oficial da F. Bras. N.

Normas Nacionais extrafannacopicas deveria obter previamente aprovalo da Comisslo Permanente de Revido da Fannacopia Brasileira do Conselho Nacional de Sade.

11. HISTRICO

"So de natureza efmera os livros desta ordem, destinados a espelharem um dos lados da farmacologia, cincia que vai perco"er atualmente a fase mais acelerada da sua evoluo'~ SOUZA MARTINS, in Relatrio de Introduo da ~ edio da Farmacopia Portuguesa, 1876.

o vocbulo farmacopia provm da aglutina'o de dois termos gregos, a saber, q,&plJ,aK.oII = medicamento ou veneno, e trOtOr = fabricante e fabricao. As farmacopias constituem cdigos farmacuticos oficiais ou oficialmente adotados, nos quais se estabelecem a identificao, os padres de qualidade e os mtodos de anlise dos frmacos em uso. Existentes desde o sculo I1I, os primeiros compndios eram de carter regional, pois os frmacos de ento eram provenientes de rgos de animais, de minerais e, sobretudo, da flora local e nativa. Alguns chegaram a ser oficializados, embora em carter regional, como, por exemplo, o formulrio da Escola de Salemo - Regimen Sanitatis, de 1066, adotado em 1240 por Frederico lI, Rei das Duas Siclias. As tentativas empreendidas individualmente por diversos autores no sentido de unificar a descrio e identificao dos frmacos mais importantes datam do final do sculo XVII, e do sculo XVIII. Entre outras obras, merecem citao a Pharmacopeia Internationalis de Lmery (1690), as farmacopias de James (1747), de De Quincy (1758), de Triller (1764) e, especialmente, a Pharmacopeia Universalis, de Jourdan (1828), que compilava dados de quase 50 farmacopias e compndios diferentes. Nenhum destes trabalhos, entretanto, possua carter oficial. As farmacopias nacionais, de carter oficial e adoo obrigatria, comeam a surgir no final do sculo XVIII e incio do sculo XIX. Assim, foram publicadas as primeiras edies das farmacopias, portuguesa (1794), holandesa (1805), francesa (1818) e americana (1820). O Brasil Colnia adotava a Pharmacopia Geral para o Reino e Domnios de Portugal, de 1794, cuja autoria atribuda a Francisco Tavares, professor da Universidade de Coimbra. Coma Independncia, volta-se o Brasil orientafo cultural francesa e, no campo da Farmcia, o Codex Medicamentarius francs adquire fora legal. O Regulamento da Junta de Higil!ne Pblica, mandado executar pelo Decreto n9828 de 29/09/1851, sem especificar qual a farmacopia a ser cumprida, estabelece lista de livros que as farmcias deveriam possuir, cons-

tando dela, entre outros, a FtDmacopia Portuguesa de 1794, o Codex Francs e o Cdigo Farmadutico Lusitano, da autoria de Agostinho Albano da Silveira Pinto, cuja primeira edio foi publicada em 1835 e hoje considerada como a 2~ edifo da Farmacopia Portuguesa. J o Decreto n9 8.387 de 19/01/1882 estabelece textalmente: "para a preparao dos remdios oficiais seguir-se- a farmacopia francesa, at que esteja composta uma farmacopia brasileira ... ", situa'o esta que iria perdurar at 1926, quando o Decreto n917.509 de 04/11/1926 aprovou a primeira Farmacopia Brasileira, de autoria de Rodolpho Albino Dias da Silva, tomada obrigatria a partir de 15 de agosto de 1929. A primeira edio da Farmacopia Brasileira ombreava com as farmacopias da poca, dos pases mais desenvolvidos, revelando-se notvel pela precis'o das monografias e, sobretudo, pelo grande nmero de incluses de frmacos obtidos da flora brasileira, no existentes em nenhuma outra farmacopia. A constante evoluo da farmacologia, a introdu'o de novos frmacos na teraputica, o surgimento de novos mtodos de anlise, mais modernos e precisos, e a necessidade de especificaes atualizadas para o controle de matriaprima e produtos farmacuticos so fatores fundamentais determinantes da obsolescncia dos cdigos farmacuticos e da necessidade de revislos e atualiz-Ios periodicamente. O Decreto que aprovou a primeira edi'o da Farmacopia Brasileira foi omisso quanto s revises; assim, a segunda edill'o veio luz quase 30 anos aps a primeira e representou cinco anos de trabalho de dez subcomisses especializadas. A 2~ edi'o incorporou as aquisies decorrentes da prpria atualiza'o da farmacologia. Nll'o conseguiu, contudo, ser mais rica e precisa do que a primeira edio, fruto de um s6 autor. O Decreto Federal n9 45.502 de 27/02/1959, ao aprovar a 2~ edio da Farmacopia Brasileira, fixou sua revsio a cada dez anos. Infelizmente, empecilhos diversos nll'o permitiram o cumprimento desse Decreto. Mais de 15 anos decorreram, at que se cogitasse de uma nova edio. Assim que, em 25 de novembro de 1976, foi

oficializada, pelo Decreto n<J78.840, a terceira edifo da Farmacopia Brasileira. O mesmo Decreto fixou em cinco anos o prazo para sua reviso. Realizada em tempo determinado e muito curto, tarefa possvel de levar a termo somente graas ao apoio do Conselho Federal de Farmcia, a obra despertou sensveismanifestaes da comunidade tcnico-cientfica, a recomendarem rpida revislio do seu texto, independente do dispositivolegal.

Assim, a 4~ edio surge com algum atraso. Procurou-se, nesta edia:o, sanar as deficincias da anterior. Procurou-se, tambm, adotar mtodos modernos de anlise, compatveis, porm, com a realidade nacional. A publicao desta parte e a ado'o de urna nova sistemtica de apresentao que possibilita sua contnua atualizao atravs de revises permanentes so as metas prioritrias que a Comissfo Permanente de Revisoda Farmacopia Brasileirase prope alcanar.

111. COMISSO PERMANENTE DE REVISO DA FARMACOPIA BRASILEIRA

PORTARIA MINISTERIAL N.o 333 DE 31.05.88, PUBLICA DA NO DIRIO OFICIAL DA REPBLICA FEDERATIVA DO BRASIL DE 01.06.1988, E PORTARIA MINISTERIAL N~ 353 DE 09.06.1988.

JOO GILVAN ROCHA Prof. Dr., Faculdade de ClncII M~cas da Universidade Federal de Sergipe Conselho Nacional de Sade Minist&io da Sade Brasllia, D.F.

PRESIDENlE SUBSTITUTO CELSO FIGUEIREDO BITTENCOURT Prof. Dr Curso de Farmcia e Bioqumica da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria. RS

ANDREJUS KOROLKOV AS Prof. Dr., Faculdade de Cincias Farmacuticas da Universidade de Sio Paul Sio Paulo. SP ClPRIANO CARDOSO FILHO Farmacutico. Produtos Roche Qumicos e Farmacuticos S.A. Rio de Janeiro. RJ ELFRIDES EV A S. SCHAPOV AL Pro~ ~, Faculdade de Farmcia da Universidade Federal do Rio Grande do Sul Porto Alegre. RS GERALDO FENERICH Farmacutico, Central de Medicamentos Ministrio da Sade Braslia. DF NIKOLAI SHARAPIN Prof., Dr., Instituto de Qumica da Universidade Federal Fluminense Niteroi. RJ SUZANA MACHADO DE A'VILA Fumacutica, Secretaria Nacional de A911esBsicas da Sade Ministrio da Sade Braslia. DF

ANGELO JOst COLOMBO Prof. Dr., .Faculdade de Cincias Farmacuticas da Universidade de 810 Paulo Sio Paulo. SP EDUARDO AUGUSTO MOREIRA Prof. Dr., Curso de Farmcia da Universidade Federal do Paran Curitiba. PR EUA ANDERS SAAD Farmacutica, Degussa S.A. SIo Paulo. SP

Jos:t ALEIXO PRA TES E SILVA Prof. Dr Curso de Farmcia da Universidade Federal do Rio Grande do Norte Natal RN SEBASTIO BAETA HENRIQUE Prof. Dr., Instituto Butantan Sio Paulo. SP

THEREZINHA C. BARBOSA TOMASSINI Pro~ ~, Faculdade de Farmkia da Universidade Federal do Rio de Janeiro Rio de Janeiro. RJ

ACYR RODRIGUES DO PRADO Mdico, Central de Medicamentos Ministrio da Sade Braslia, DF. ADELA ROSENKRANZ Professora da Escola Paulista de Medicina, Consultora da Organizao Pan-Americana da Sade - OPAS So Paulo, SP. ADlLSON CADONHA FlIlII1acutico, Upjohn Produtos Farmacuticos Ltda. So Paulo, SP. ALEXANDRE PINTO CORRADO Professor da Faculdade de Medicina de Ribeiro Preto Universidade de So Paulo Ribeiro Preto, SP. ALFREDO KARL MASLOWSKY Qumico, Biogalnica Qumica e Farmacutica Ltda. So Paulo, SP. LVARO NORONHA DA COSTA Farmacutico, Indstria Qumica e Farmacutica Schering S.A. Rio de Janeiro, RJ. AMAURY CARON DOS ANJOS Professor do Curso de Farmcia da Universidade Federal do Paran Curitiba, PR. ANA BEATRIZ DA SILVA Engenheira-Qumica, Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Sade/FIOCRUZ Rio de Janeiro, RJ. ANA MARIA BERGOLD Professora da Faculdade de Farmcia da Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Bolsista do Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico - CNPq Porto Alegre, RS. ANA MARIA DA PENHA BRAGUIMPELLIN Farmacutica, Boehringer &; Cia. Ltda. So Paulo, SP. ANDRt ROSEIRA DE MATOS Farmacutico, Cirumdica S.A., Produtos Mdicos-Cirrgicos So Paulo, SP. ANDREJUS KOROLKOVAS Professor da Faculdade de Cincias Farmacuticas da Universidade de So Paulo So Paulo, SP.

ANGELO JOSeCOLOMBO Professor da Faculdade de Cincias Farmacuticas da Universidade de So Paulo So Paulo, SP. ANTONIO CARLOS ZANlNI Professor da Faculdade de Medicina da Universidade de So Paulo Sio Paulo, SP. ANTONIO EUGeNIO CASTRO CARDOSO DE ALMElDA Farmacutico, Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Sade/FIOCRUZ Rio de' Janeiro, RJ. ANTONIO PAIVA Professor da Escola Paulista de Medicina So Paulo, SP. ANTONIO ROBERTO TEIXEIRA Mdico, Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Sade/FIOCRUZ Rio de Janeiro, RJ. ARNOLD H. BECKETT Professor, Chelsea CoUege, Universidade de Londres. Consultor da Organizao Pan-Americana da Sade - OPAS Londres, Inglaterra. ARON JURKIEWlCZ Professor da Escola Paulista de Medicina So Paulo, SP. AUGUSTO VILSON BORTOLUZZI Professor do Curso de Farmcia e Bioqumica da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria, RS. BARTYRA DE CASTRO AREZZO Comissio Nacional de Energia Nuclear Rio de Janeiro, RJ. BEATRIZ RIGON Ncleo de Processamento de Dados Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria, RS. BRUNO CARLOS DE ALMElDA CUNHA Professor da Faculdade de Cincias Farmacuticas da Universidade de Sio Paulo Sio Paulo, SP. CEcILIA ELENA FlGUEIREOO OGNIBENE Farmacutica, Sanrisil S.A. So Paulo, SP.

COMISSO PERMANENTE DE REVISO DA FARMACOPeIA BRASILEIRA E COLABORADORES

CLIA COLI Professora da Faculdade de Cincias Farmacuticas da Universidade de So Paulo So Paulo, SP. CELINA XAVIER DE MENDONA Farmacutica, Bolsista do Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnol6gico - CNPq So Paulo, SP. CELSO FIGUEIREDO BITIENCOURT Professor do Curso de Farmcia e Bioqumica da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria. RS. CLARISSE CAVICCHIA Farmacutica, Upjohn Produtos Farmacuticos Ltda. So Paulo, SP. CLUDIA GONALVES TORRES DE OLIVEIRA Professora do Instituto de Qumica da Universidade Federal Fluminense Niteroi, RJ. CLEODORO WALTER Ncleo de Processamento de Dados Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria, RS DECIO MELHEM Professor da Faculdade de Cincias Farmacuticas da Universidade de So Paulo So Paulo, SP. DERBLAY GALV O Professor, Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnol6gico - CNPq Braslia, DF. DOMINGOS CORR~A Qumico, Biogalnica Qumica e Farmacutica Ltda. So Paulo, SP. EDUARDO AUGUSTO MOREIRA Professor do CoIso de Farmcia da Universidade Federal do Paran Curitiba, PR. EDUARDO JOS CENTENO DE CASTRO Professor da Faculdade de Farmcia da Universidade Federal do Rio Grande do Sul Porto Alegre, RS. ELFRIDES EVA S. SCHAPOVAL Professora da Faculdade de Farmcia da Universidade Federal do Rio Grande do Sul Porto Alegre, RS. ELFRIEDE MARIANNE BACCHI Professora da Faculdade de Cincias Farmacuticas da Universidade de So Paulo So Paulo, SP. F. BRAS. IV, 1988

ELlANE DE VARES CAO Farmacutica, Bolsista do Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnol6gico - CNPq Niter6i, RJ. ELIZABETH IGNE FERREIRA Professora da Faculdade de Cincias Farmacuticas da Universidade de So Paulo So Paulo, SP. ELOIR PAULO SCHENKEL Professor da Faculdade de Farmcia da Universidade Federal do Rio Grande do Sul Porto Alegre, RS. EUA ANDERS SAAD Farmacutica, Degussa S.A. Sio Paulo, SP. FERNANDO DE OLIVEIRA Professor da Faculdade de Cincias Farmacuticas da Universidade de So Paulo So Paulo, SP. FRANCO MARIA LAJOLO Professor da Faculdade de Cincias Farmacuticas da Universidade de So Paulo So Paulo, SP. GALBA MORANELLI DE ALMEIDA Professor da Faculdade de Farmcia da Universidade Federal de Minas Gerais Belo Horizonte, MG. GEORGE GONZLES ORTEGA Professor do Curso de Farmcia e Bioqumica da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria, RS. GERALDO FENERICH Farmacutico, Central de Medicamentos - Ministrio da Sade Braslia, DF. GERCY SEVERO ALVES Professor do Curso de Farmcia e Bioqumica da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria, RS. GERMINIO NAZZARIO Qumico, Instituto Adolfo Lutz So Paulo, SP. GILBERTO ANTONIO ASSIS BRASIL E SILVA Professor da Faculdade de Farmcia da Universidade Federal do Rio Grande do Sul Porto Alegre, RS. GILSON DE FREITAS VIElRA Farmacutico, Glaxo do Brasil S.A. Rio de Janeiro, RJ.

COMISSO PERMANENTE DE REVISO DA FARMACOpelA BRASILEIRA E COLABORADORES

GOY ENRIQUE NAVAS Farmacutico, Consultor da Organizao Pan-Americana da Sade - OPAS Rio de Janeiro, RJ. GRANVILLE GARCIA DE OLIVEIRA Mdico, Central de Medicamentos - Ministrio da Sade Brastlia, DF. GNTER HOXTER Professor da Faculdade de Cincias Farmacuticas da Universidade de So Paulo So Paulo, SP. HANNA A. ROrnSCHILD Professor da Escola Paulista de Medicina So Paulo, SP. HECTOR ARALDI Farmacutico, Consultor da Organizao Pan-Americana da Sade - OPAS Buenos Aires, Argentina. HLIO JOSe BERTUZZI Professor da Diviso de Farmcia do Hospital Universitrio da Universidade de So Paulo So Paulo, SP. HeLIO MORRONE COSENTINO Fsico, Sanrisil S.A. So Paulo, SP. IDA CARAMICO SOARES Professora da Faculdade de Cincias Farmacuticas da Universidade de So Paulo So Paulo, SP. ITACY PEREIRA TORQUlLHO Farmacutico, Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Sade/FIOCRUZ Rio de Janeiro, RJ. IVONE BAREICHA Professora do Instituto de Cincias Biolgicas da Universidade Federal de Minas Gerais Belo Horizonte, MG. IVONE CARVALHO Professora da Faculdade de Cincias Farmacuticas da Universidade de So Paulo Ribeiro Preto, SP IVONE SARTOR Professora da Faculdade de Farmcia da Universidade Federal do Rio Grande do Sul Porto Alegre. RS. IVONETE BATISTA DE ARAJO Professora do Curso de Farmcia da Universidade Federal do Rio Grande do Norte Bolsista do Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico - CNPq Natal, RN. JAMILZAMUR Professor da Faculdade de Cincias Farmacuticas da Universidade de So Paulo So Paulo, SP.

JOO BATISTA DOMINGUES Professor da Faculdade de Cincias Farmacuticas da Universidade de So Paulo So Paulo, SP. JOO HAIKAL HELOU Professor da Faculdade de Cincias Farmacuticas da Universidade de So Paulo So Paulo, SP. JOSe ABRAHO NETO Farmacutico, Bolsista do Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico - CNPq So Paulo, SP. JOS ALEIXO PRATES E SILVA Professor do Curso de Farmcia Federal do Rio Grande do Norte Natal, RN.

da Universidade

JOS~ APARItIO BRITTES FUNCK Professor do Curso de Farmcia e Bioqumica da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria, RS. JOSe PEDRO SALGADO EGREJA Farmacutico, Byk-Procienx Indstria Farmacutica Ltda. So Paulo, SP. JOse XlMENES Farmacutico, Cefar Farmacodiagnstica So Paulo, SP. JOSINO COSTA MOREIRA Farmacutico, Instituto Nacional Qualidade em Sade/FIOCRUZ Rio de Janeiro, RJ. LAERTE KAWANCHI Farmacutico, Byk-Procienx Indstria Farmacutica Ltda. So Paulo, SP. LAURA MARIA ESPINOSA RAMOS Farmacutica, Boehringer & Cia Ltda. So Paulo, SP. LAUREN ROSA CROSSETI VAUCHER Professora do Curso de Farmcia e Bioqumica da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria, RS. LAURO DOMINGOS MORETTO Professor da Faculdade de Cincias Farmacuticas da Universidade de So Paulo Farmacutico, Boehringer & Cia. Ltda. So Paulo, SP. LA GUSMO CHlAPINI Professora da Faculdade de Farmcia da Universidade Federal do Rio Grande do Sul Bolsista do ConselhO Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico - CNPq Porto Alegre, RS.

Ltda.

de Controle

de

COMISSO PERMANENTE DE REVISO DA FARMACOpeIA BRASILEIRA E COLABORADORES

LEILA MACEDO ODA Qumica, Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Sadel FIOCRUZ Rio de Janeiro, RJ. LEOBERTOCOSTATAVARES Farmacutico So Paulo, SP. LIANE LEIPNITZ ENE Professora da Faculdade de Farmcia da Universidade Federal do Rio Grande do Sul Bolsista do Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico - CNPq Porto Alegre, RS. LIGIA MARIA MOREIRA DE CAMPOS Professora da Faculdade de Farmcia da Universidade Federal de Minas Gerais Belo Horizonte, MG. LILIAN BASSANI Farmacutica, Bolsista do Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico - CNPq Santa Maria, RS. LORELAMB Farmacutica, Bolsista do Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico - CNPq Curitiba, PR. LCIA DE ARAJO COSTA Professora do Curso de Farmcia da Universidade Federal do Rio Grande do Norte Bolsista do Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico - CNPq Natal, RN. LCIA EIKO ABE Farmacutica, Bolsista do Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico - CNPq So Paulo, SP. LCIA EMY TEIXEIRA DOS SANTOS Professora da Faculdade de Farmcia da Universidade Federal de Minas Gerais Belo Horizonte, MG. LUCY BRENNER RAMOS Professora do Instituto de Cincias e Tecnologia de Alimentos da Universidade Federal do Rio Grande do Sul Porto Alegre, RS. LUIZ ALBERTO MASCHIETTO Farmacutico, Biogalnica Qumica e Farmacutica Ltda. So Paulo, SP. LVIZ ANTONIO GIOIELLI Professor da Faculdade de Cincias Farmacuticas da Universidade de So Paulo So Paulo, SP

LVIZ BAUER t Professor da Faculdade de Farmcia da Universidade do Rio Grande' do Sul Porto Alegre, RS. LVIZ EDUARDO CHAVES CAIADO Farmacutico, Bolsista do Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico - CNPq Rio de Janeiro, RJ. LUIZ FELIPE MOREIRA LIMA Mdico, Fundafo Oswaldo Cruz Rio de Janeiro, RJ. LUIZ FLVIO DE FREITAS LEITE Farmacutico, Biobrs Bioqulmica do Brasil S. Montes Claros, MG. LVIZ MANOEL SCAVAZZA Professor do Curso de Farmcia da Universidade Federal do Paran Curitiba, PR. LVIZ RODRIGUES AGUAXO Mdico Veterinrio, Consultor da Organizao Pl&II-Americanada Sade - OPAS Rio de Janeiro, RJ. MARA LANE CARDOSO Farmacutica, Bolsista do Conselho Nacional de Desenvolvimento Cienuiico e Tecnolgico - CNPq Santa Maria, RS. MARCELO JORGEVERNENGO Qumico, Consultor da Organizao Pan-Americana da Sade - OPAS Rio de Janeiro, RJ. MARCO ANTONIO ALMEIDA Farmacutico, Biobrs Bioqumica do Brasil S.A. Montes Claros, MG. MARCO ANTONIO DEXHEIMER Professor da Faculdade de Farmcia da Universidade Federal do Rio Grande do Sul Porto Alegre, RS. MARCO AU~LIO XAVIER Farmacutico, Biobrs Bioqumica do Brasil S.A. Montes Claros, MG. MARGARETE REGINATTO GIACOMINI Farmacutica, Curso de Farmcia e Bioqumica da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria, RS. MARGARETE TRINDADE HAHN Farmacutica, Bolsista do Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico - CNPq Santa Maria, RS. MARGARETH LINDE ATHA YDE Farmacutica, Secretaria Nacional de Vigilncia Sanitria - Ministrio da Sade Braslia, DF.

COMISSO PERMANENTE DE REVISO DA FARMACOP~IA BRASILEIRA E COLABORADORES

MARIA AMLIA RARATA DA SILVEIRA Professora da Faculdade de Cincias Farmacuticas da Universidade de So Paulo So Paulo, SP. MARIA DE FTIMA DANT AS Farmacutica, Universidade Federal do Rio Grande do Norte Natal, RN. MARIA ELIZABETH DE VII.A DALMORA Professora do Curso de Farmda e Bioqumica da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria, RS. MARIA GISELA PIROS Farmacutica, Majer Meyer S.A. Indstrias Farmacuticas So Paulo, SP. MARIA INtS ROCHA MIRITELLO SANTORO Professora da Faculdade de Cincias Farmacuticas da Universidade de Sfo Paulo So Paulo, SP. MARIA LCIA NOSSAR SIMOES DE DALGO Professora do Instituto de Qumica da Universidade Federal Fluminense Bolsista do Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico - CNPq Niteri, RJ. MARIA LUlZA CRUZ Farmacutica So Paulo, SP. MARIA TEREZA ALVES RODRIGUES Farmacutica, Instituto Butantan So Paulo, SP MARIA TEREZA FARIA PIRES DE MELO Qumica Industrial, Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Sade/FIOCRUZ Rio de Janeiro, RJ. MARILENE PEREIRA BASTOS CENEVIVA t Professora da Faculdade de Cincias Farmacuticas da Universidade de Sfo Paulo So Paulo, SP. MARfi.IA APPEL DE MATIOS BORTOLUZZI Professora do Curso de Farmcia e Bioqumica da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria, RS. MARItIA MARTINS NISHIKAWA Biomdica, Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Sade/FIOCRUZ Rio de Janeiro, RJ. MRIO GERALDO KRISTELLER Qumico, Biogalnica Qumica e Farmacutica Ltda. So Paulo, SP.

MRIO MUNIZ LANNES Professor da Faculdade de Farmcia da Universidade Federal Fluminense Niteri, RJ. MARTHA DE LUCA Professora da Faculdade de Farmcia da Universidade Federal Fluminense Bolsista do Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico - CNPq Niteri, RJ. MAURICIO MARTINS DO CARMO Farmacutico, Bolsista do Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico - CNPq So Paulo, SP. MICHAEL SIMON NOTHENBERG Professor da Faculdade de Cincias Farmacuticas da Universidade de So Paulo Sfo Paulo, SP. MILTON LEONCIO BRAZZACH Professor da Diviso de Farmcia do Hospital Universitrio da Universidade de Sfo'Paulo So Paulo, SP. MIRIAN TERESINHA KNORST Farmautica, Bolsista do Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico - CNPq Santa Maria, RS. NARA RITA DEITOS Educadora Especial Santa Maria, RS. NELCI FENALTII HOEHR Professora do Curso de Cincias Farmacuticas da Faculdade de Cincias Mdicas da Pontifcia Universidade Catlica Campinas, SP. NILTON BEZERRA DO VALE Professor do Curso de Biologia da Universidade Federal do Rio Grande do Norte Natal, RN.

NIKOLAI SHARAPIN Professor do Instituto de Qumica da Universidade Federal Fluminense Niteri, RJ. OLINDA SUZUKI Farmacutica, Byk Procienx Indstria Farmacutica ltda. So Paulo, SP. OSCAR VIL LAA DE MELO t Professor da Faculdade de Farmcia da Universidade Federal de Pernambuco Recife, PE.

COMISSO PERMANENTE DE REVISO DA FARMACOP~IA BRASILEIRA E COLABORADORES

PAOLO BARTOLINI Qumico, Instituto de Pesquisas Energticas e Nucleares da Universidade de So Paulo So Paulo, SP. PAULO ANTONIO RODRIGUES Farmacutico, Biogalnica Qumica e Farmacutica Ltda. So Paulo, SP. PAULO CEZAR SANDER Professor do Curso de Farmcia da Universidade Federal do Paran Curitiba, PR.

RONALDO NOGUEIRA DE MORAES PITOMBO Professor da Faculdade de Cincias Farmacuticas da Universidade de So Paulo So Paulo, SP.

RUBENSLEONART Bilogo, Bolsista do Conselho Nacional de Desenvolvimento' Cientfico e Tecnolgico - CNPq Curitiba, PR. RUTH WIEDMANN VELLOSO Professora do Instituto de Cincias e Tecnologia de Alimentos da Universidade Federal do Rio Grande do Sul Porto Alegre, RS. RUY MASSAKAZO YOSHINAGA Farmacutico, Fontoura-Wyeth S.A. So Bemardo do Campo, SP. SALVADOR ALVES PEREIRA Professor da Faculdade de Farmcia da Universidade Federal Fluminense Niteri, RJ. S~RJIO LUIZ DALMORA Professor do Curso de Farmcia e Bioqumica da Universidade de Santa Maria Santa Maria, RS. SIGURD WALTER BACH Professor do Curso de Farmcia da Universidade Federal do Paran Curitiba, PR. SILVANA FERREIRA VACCARI Mdica Veterinria da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria, RS SILVIA STORPIR TIS Farmacutica, Bolsista do Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnol6gico - CNPq So Paulo, SP.

PEDRO ROS PETROVICK Professor da Faculdade de Farmcia da Universidade Federal do Rio Grande do Sul Porto Alegre, RS. PETER J. SCHORN Farmacutico, Consultor da Organizao PanAmericana da Sade - OPAS Strasbourg, Frana REINALDO SPITZNER Professor do Curso de Farmcia da Universidade Federal do Paran Curitiba, PR. RENATO BARUFFALDI Professor da Faculdade de Cincias Farmacuticas da Universidade de Slo Paulo So Paulo, SP. RENIKRANBECK Professor do Curso de Farmcia da Universidade Federal do Paran Curitiba, PR. RICARDO SCHUCH Professor da Faculdade de Cincias Farmcuticas da Universidade de So Paulo So Paulo, SP. ROBERTO EDUARDO MORTEO Professor da Faculdade de Farmcia da Universidade Federal Fluminense Niteri, RJ. ROBERTO PELLEGRINI Farmacutico, Upjohn Produtos Farmacuticos Ltda. So Paulo, SP. ROBERTO RITTNER NETO Professor do Instituto de Qumica da Universidade de Campinas Campinas, SP. RONALDO ALVES SILVEIRA Farmacutico, Bayer do Brasil S.A. So Paulo, SP.

SIMONE GONALVES CARDOSO Farmacutica da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria, RS

SONIA MARIA FERREIRA SIMAS SANTOS Biloga, Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Sade!FIOCRUZ Rio de Janeiro, RJ.

TAKAKO SAlTO Professora da Faculdade de Cincias Farmacuticas da Universidade de So Paulo So Paulo, SP.

COMISSO PERMANENTE DE REVISO DA FARMACOP~IA BRASILEIRA E COLABORADORES

T ARCISIO JOSf PALHANO Professor do Curso de Fanncia da Universidade Federal do Rio Grande do Norte Bolsista do Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico - CNPq Natal, RN THERESA CHRISTINA VESSONI PENNA Professora da Faculdade de Cincias Farmacuticas da Universidade de So Paulo So Paulo, SP. TOSHlO HARAGUCHI Professor do Curso de Cincias Farmacuticas da Faculdade de Cincias Mdicas da Pontifcia Universidade Catlica Campinas, SP. TOMS D. ARIAS Fannacutico, Consultor da Organizao Pan.iAmericana da Sade - OPAS Cidade do Panam, Panam.

TOMOE NAKASHIMA Professora do Curso de Farmcia da Universidade Federal do Paran Curitiba, PR.

VENI MARIA FELLI NAKASONE Professora da Faculdade de Cincias Farmacuticas da Unive.nidade de So Paulo So Paulo, SP.

VIKTORIA TUTUNDJlAN Engenheira-qumica, Boehringer & Cia. LIda. So Paulo, SP.

lEU ISABEL ROESSLER Especialista em assuntos educacionais, Ministrio da Cincia e Tecnologia Braslia, DF.

IV. OENBRAUDADBS

IV. GENERALIDADES

l1TIJLO
ttulo completo desta obra "Farmacopia da Repblica Federativa do Brasil, quarta edio". Sua denominao pode ser abreviada para "Farmacopia Brasileira, 4~ edio", ou "F. Bras. IV".

Em casos excepcionais, nomes muito difundi dos, porm diferentes dos adotados pela Denominao Comum Brasileira para Frmacos, podem ser citados como "outra denominao".

NOME QutMlCO

Farmacopico

O nome qumico de substncia farmacopica est de acordo com a nomenclatura preconizada pela Unio Internacional de Qumica Pura e Aplicada.
FORMULA QUlMlCA

A expresso fannacopico substitui as expresses oficial e oficinal, utilizadas em edies anteriores, equivalendo-se as trs expresses para todos os efeitos.

Substncia ativa, droga, insumo farmacutico ou matria-prima empregada para modificar ou explorar sistemas fisiolgicos ou estados patolgicos em benefcio da pessoa qual se administra.

Quando a substncia farmacopica possui composio qumica defmida, a sua frmula bruta e massa molecular constam da monografia. No caso de substncias orgnicas de composio qumica defmida, estes dados so acrescidos da respectiva frmula estrutural.

MASSA ATMICA RELATIVA

Produto elaborado, juntamente profiltica, diagnstico.

farmacutico, tecnicamente obtido ou que contm um ou mais frmacos com outras substncias, com fmalidade curativa, paliativa ou para fins de

As ~ atmicas relativas usadas para o clculo de pesos moleculares so as constantes da Tabela de Massas Atmicas Relativas publicada em 1979 pela Unio Internacional de Qumica Pura e Aplicada e baseada na massa do carbono 12.

UNIDADES DE MEDIDA

Mediamento inscrito na 4~ edio da Farmacopia Brasileira.

Medicamento

magistral

Medicamento, preparado na farmcia, cuja prescrio estabelece a composio, a forma farmacutica e a posologia.

So adotadas nesta Farmacopia as unidades constantes do Sistema Internacional de Unidades (SI), em conformidade com o Decreto Federal nC?81.621, de 03 de maio de 1978. Excepcionalmente so utilizadas outras unidades de uso somente na prtica farmacutica. As unidades e fraes do sistema mtrico decimal, baseadas no Sistema Internacional de Unidades (Sij, utilizadas na F. Bras. IV, so representadas pelas seguintes abreviaes:

NOMENCLATURA

Os ttulos das monografias obedecem Deno minao Comum Brasileira para Frmacos, esta belecida com base nas recomendaes da Orga nizao Mundial da Sade. Os subttulos so em latim.

metro decmetro centmetro milmetro micrometro* nanmetro**

m dm em mm
Ilm

= =
=

nm

10- 1 m 1Q-2m 10- 3 m 1Q-6m 10-9m

* ou mcron ** ou milirncron

DE VOLUME

litro decilitro mililitro microlitro

- 1 - dI - rol - J,Ll

10-11 10-31 10-61

DA MASSA

quilograma grama decigrama centigrama miligrama micrograma** nanograma picograma fentograma attograma

_ -

kg g = dg = cg = mg = J.L8 = ng = pg = fg = ag =

1O-3kg 10-1 g 1O-2g 1O-3g 1O-6g 1O-9g 1O-12g 10-15 g 10- 111 g

a possibilidade de produzi-Ia por outros mtodos. Qualquer que seja o mtodo utilizado, o produto fmal deve corresponder s especificaes da Farmacopia. Na fabricao de produtos injetveis, comprimidos, cpsulas e outras preparaes farrnacopicas, permitido o uso. de substncias adjuvantes, descritas nas monografias e adicionadas com finalidade especfica. Estas substncias adjuvantes devem ser incuas e no devem ter influncia adversa sobre a eficcia teraputica da substncia ativa contida na preparao nem interferir com ensaios e determinaes.
DESCRIO DE SUBSTNCIA

* **

As expresses massa e peso so adotadas indistintamente nesta Farmacopia. Nas prescries e referncias relativas a doses teraputicas, /Jo g equivale a "mcg" ou 'Y~ma). DE RADIATIVIDADE

As informaes referentes descrio de uma substncia so genricas e destinam-se avaliao preliminar da integridade da mesma. A descrio, por si, no indicativa da pureza, devendo ser associada a outros testes farrnacopicos para assegurar que a substncia esteja de acordo com a monografia.
SOLUBIUDADE

becquerel

Bq Ci mCi J,LCi GBq MBq kBq

curie milicurie microcurie gigabecquerel megabecquerelquilobecquere1-

= = = = =

1 desintegrao nuclear por segundo 3,7 x 1010 Bq 3,7 x 107 Bq 3,7 x 104 Bq 27,027 mCi 27,027 J,LCi 27,027 nCi

PROCESSOS DE FABRICAO

A solubilidade indicada no deve ser tomada no sentido estrito de constante fsica, mas como simples informao. As indicaes sobre a solubilidade referemse s determinaes feitas temperatura de 25C. A nlo ser que a monografia especifique diferentemente, a expresso soIrente refere-se gua. ) A expresso partes refere-se dissoluo de 1 g de um slido ou 1 rol de um lquido no nmero de mililitros do solvente estabelecido no nmero

A Farmacopia no fornece detalhes dos processos de fabricao de substncias qumicas. A indicao de que uma substncia pode ser produzida por um mtodo determinado no exclui

deportes.
As solubilidades aproximadas constantes nas monografias so designadas por termo descritivo, cujo significado figura na tabela abaixo.

Muito solvel Facilmente solvel Solvel ligeiramente solvel Pouco solvel Muito pouco solvel Praticamente insolvel ou insolvel

Menos de 1 parte De 1 a 10 partes De 10 a 30 partes De 30 a 100 partes De 100 a 1 000 partes De 1 000 a 10 000 partes Mais de 10 000 partes

REAES

DE IDENTIFICAO

So reaes usadas no auxlio da caracterizao de uma substncia. Embora especficos, s sero suficientes para estabelecer ou confirmar a identidade da substncia qUando considerados em conjunto com outros testes e especificaes constantes da monografia.

DENSIDADE DENSIDADE

DE MASSA E RELA llV A

A densidade de massa (P) a massa de uma unidade de volume de uma substncia. expressa em unidades de massa por volume. A densidade relativa usualmente adotada (d:)

 defmida como a relao entre a massa de uma substncia ao ar a 20C e a massa de igual volume de gua na mesma temperatura.
DETERMINAO DE GUA E PERDA POR DESSECAO

Usa-se geralmente a expresso determinao de gua ou determinao de uudade quando se determina, em condies especificadas, a gua de hidratao ou a gua de adsoro de uma substncia. A expresso perda por dessecao referese geralmente perda em massa, por secagem, em condies especificadas, de gua e outros componentes residuais volteis.
IMPUREZAS

Precipitado - a formao de depsito quando partculas em suspenso so deixadas em repouso por 15 minutos. Lquido incolor - aquele cuja tonalidade no ultrapassa a das solues padro para a determinao de limite de impurezas. O ensaio deve ser comparativo e realizado em colunas lquidas de 10 cm de altura, contidas em tubos de vidro de fundo chato, incolores e transparentes, sobre fundo branco.
ACIDEZ E ALCALINIDADE: ENSAIOS RPIDOS

Os testes descritos nas monografias liutam as impurezas a quantidades tais que assegurem qualidade ao frmaco. O fato de os ensaios no inclurem uma impureza pouco freqente no significa que esta possa ser tolerada.
REAOES QufMICAS E LIMPIDEZ DE SOLUOES

A no ser que a monografia especifique diferentemente, as reaes qumicas so feitas em tubos de ensaio de aproximadamente 15.mm de dimetro interno. Utilizam-se 5 rn1 do lquido ou soluo a exanDar, adicionando-se trs gotas de reagente ou de cada reagente. O exame do contedo do tubo de ensaio deve ser feito sobre toda a camada lquida, observando de cima para baixo, aps cinco minutos de repouso. Soluo Impida - aquela que apresenta turvao menor que a de uma suspenso de caulim a 0,0005% (pN) em gua e cujas partculas tm, em mdia, dimetro inferior a 20 11m. No se considera sinal de turvao qualquer resduo bvio de material fdtrante (fiapos). Opalescncia - turvao equivalente, no m ximo, produzida pela adio de 5 mI da diluio de 1 ml de cido clordrico 0,01 M em 99 rn1 de gua, a 0,5 m1 de nitrato de prata 0,01 M. A observao deve ser feita sobre fundo preto, com luz incidente, cinco minutos aps adio do nitrato de prata. Leve turvao - aquel.a equivalente, no mximo, que se produz quando se adicionam 5 rn1 da diluio de 2 m1 de cido clordrico 0,01 M em 98 ml de gua a 0,5 m1 de nitrato de prata 0,1 M. A observao deve ser feita como no caso precedente. Turvao - a equivalente, no mximo, que se produz quando se adicionam 5 m1 da diluio de 4 ml de cido clordrico 0,01 M em 96 ml de gua a 0,5 m1 de nitrato de prata 0,1 M. A observao deve ser feita como nos casos precedentes.

Uma soluo considerada neutra quando nlo modifica a cor dos papis azul e vermelho de tornassol, ou quando o papel indicador universal adquire as cores da escala neutra, ou quando 1 rn1 da mesma soluo se cora de verde com uma gota de azul de bromotimoI SI (pH 7,0). l! considerada cida quando cora em vermelho o papel azul de tornassol ou 1 ml se cora de amarelo por uma gota de vermelho de fenol SI (pH 1,0 a 6,6). ~ considerada fracamente cida quando cora levemente de vermelho o papel azul de tornassoI ou 1 m1 se cora de alaranjado por uma gota de vermelho de metila SI (pH 4,0 a 6,6). l! considerada fortemente cida quando cora de azul o papel de vermelho de congo ou 1 rn1 se cora de vermelho pela adio de uma gota de alaranjado de metHa SI (pH 1,0 a 4,0). l! considerada alcalina quando cora de azul o papel vermelho de tornassol ou 1 ml se cora de azul por uma gota de azul de bromotimol SI (pH 7,6 a 13,0). l! considerada fracamente alcalina quando cora de azul o papel vermelho de tornassol ou 1 ml se cora de rosa por uma gota de vermelho de cresol SI (pH 7,6 a 8,8). l! consideradll fortemente alcalina quando se cora de azul por uma gota de timolftalena SI (pH 9,3 a 10,5) ou de vermelho por uma gota de fenolftalena SI (pH 10,0 a 13,0).
REAGENTES, INDICADORES, SOLUOES REAGENTES, SOLUOES INDICADORAS, SOLUOES COLORIMI!TRICAS E SOLUOES VOLUMI!TRICAS

Reagentes - so substncias utilizadas em testes, reaes, ensaios e doseamentos farmacopicos quer como tais, quer em solues. Indicadores - so substncias utilizadas nos ensaios farmacopicos para determinar o ponto final de uma reao qumica, avaliar a concen trao hidrogeninica ou assinalar uma mudana de pH desejada. Solues reagentes - so solues de reagentes em solventes especficos e concentraes defmidas. So designadas por "SR".

Solues indicadoras - so solues de indica dores em solventes especficos e concentraes defmidas. So designadas por "SI". Solues colorimtricas - so solues utilizadas na preparafo de padres colorimtricos para fms de comparao. So indicadas por "SC". Solues volumtricas - so solues de reagentes de concentrafo conhecida, destinadas ao uso em determinaes quantitativas. Na F. Bras. IV as concentraes das solues volumtricas so expressas em molaridade. So indicadas por "SV". Soluio molar - a soluo que contm uma molcula-grama da substncia em I 000 ml da soluo. Os mltiplos e submltiplos da soluo molar tambm so designados por nmeros inteiros ou fraes decimais como: 2M; 0,5 M; 0,1

fia especifique outra temperatura.

As expresses

gua quente e gua muito quente indicam tempera

turas aproximadas entre 60 e 700C e entre 85 e 95 c, respectivamente. Banho a vapor significa exposio ao vapor fluente ou outra foima de calor, correspondendo em temperatura do vapor fluente.
PRESSO REDUZIDA

A nlo ser que a monografia especifique diferentemente, a expresso presso reduzida significa presso menor que 6,7 kPa (aproximadamente 50 mm de mercrio). Quando a monografia especificar dessecailo presso reduzida sobre agente dessecante, a operao deve ser feita presso reduzida em dessecador ou outro apare lho adequado.
DESSECADO R

Mete.
APARELHOS VOLUMtTRlCOS

Os aparelhos volumtricos so empregados nas medidas de volume nos testes, ensaios e dosea mentos farmacopicos e devem ser aferidos temperatura padro de 25C. Se o aparelho volumtrico no for aferido a 25C, as solues devem ser aferidas temperatura de aferio indicada no aparelho. Nas medies de volume, o nvel inferior do menisco do lquido contido nos aparelhos volumtricos deve aflorar o trao de aferio. Nos casos de lquidos fortemente corados usa-se como referncia a borda superior do menisco. Os aparelhos volumtricos para a transfer~ncia de lquidos (pipetas ou buretas), em virtude de terem sido aferidos com gua s podero fornecer exatamente o volume indicado quando os lquidos a medir tiverem aproximadamente a viscosidade, a tenso superficial e a densidade da gua.
TEMPERAnJRA

Compreende-se por dessecador um recipiente perfeitamente fechado, de formato e dimenses adequadas para manter atmosfera de baixo teor de umidade por meio de agentes desse cantes nele introduzidos, tais como slica-gel, cloreto 'de clcio anidro, pentxido de f6sforo, cido sulfrico, dentre outros. Dessecador presso reduzida o que permite manter atmosfera de baixa umidade presso reduzida a no mais que 6,7 kPa (aproximadamente 50 mm de mercrio), ou presso indicada na monografia.
MEDIDAS DE PRESSO

A menos que a monografia especifique diferentemente, todas as temperaturas constantes da F. Bras. IV so expressas na escala Celsius e todas as medidas slo feitas a 25C.
GUA

A expresso pascal (Pa) usada para medidas de presso como a arterial, a atmosfrica ou a in terna de um aparelho, refere-se a uso de manmetros ou barmetros calibrados em relao press'o exercida pela fora de 1 newton uni formemente distribuda sobre uma superfcie plana de 1 m2 de rea perpendicular direo da fora; 1 pascal equivale a 7,5 x 10-3 mm de mercrio.
PREPARAO DE SOLUOES

A menos que a monografia especifique diferentemente, todas as solues em testes, reaes e ensaios so preparadas com gua purificada.
ODOR

A gua mencionada nos testes, reaes e ensaios gua purificada. Para preparaes injetveis deve ser utilizada gua para injees, descrita na monografia. Quando for prescrito o uso de gua isenta de dixido de carbono, utilizar gua purifica da, fervida vigorosamente pelo menos cinco minutos e protegida do ar atmosfrico durante o resfria mento e armazenagem.
BANHO-MARIA E BANHO A VAPOR

As expresses inodora, praticamente inodora, leve odor caracter{stico, ou variao das mesmas, so usadas examinando-se a amostra aps expo sio ao ar por 15 minutos, quando se trata de embalagens de at 25 g recmabertas. No caso de embalagens maiores, transferir amostras de cerca de 25 g para cpsula de 100 ml de capacidade. A caracterizao do odor apenas descritiva e nfo pode ser considerada como padro de pureza, exceto em casos em que um odor particular nfo seja permitido pela monografia.

A expressfo banho-mana significa o uso de um banho de gua fervente, a no ser que a monogra-

PROVA EM BRANCO

As expresses executar branco paralelo ou fazer prova em branco ou efetuar ensaio em branco significam repetir a detenninao em condies idnticas e com quantidades idnticas de reagentes, omitindose, apenas, a substncia em exame.
DESSECAO ATe PESO CONSTANTE

no maior que 2,05; 0,20 indica valor no menor que 0,195 e no maior que 0,205. Os limites de tolerncia, expressos numeri' camente por um valor mximo e mnimo, indicam a pureza de uma substncia farmacopica. Estes valores podem ser expressos em porcentagem ou nmeros absolutos. A faixa da variao deve ser estritamente observada, no sendo tolerados valores fora dos limites mximo e mnimo.
CONSERVAO

Esta expresso significa que a secagem deve prosseguir at que duas pesagens consecutivas no difiram em mais de 0,5 mg por grama da substncia em exame, sendo que a segunda pesagem deve ser efetuada aps uma hora de secagem adicional nas condies especificadas.
INCINERAO ATe PESO CONSTANTE

Esta expresso significa que a incinerao deve prosseguir a 800 oC 25 c (a menos que a mono grafia especifique diferentemente) at que duas pesagens consecutivas no difiram em mais de 0,5 mg por grama da substncia em exame, sendo que a segunda pesagem deve ser efetuada aps 15 minutos de incinerao adicional.
PORCENTAGENS

As substncias farmacopicas devem ser conservadas sob condies tais que evitem sua contami naio ou deterioraio. As condies de conservao de substncias farmacopicas figuram nas respectivas monografias. Proteger da luz significa que a substncia deve ser conservada em recipiente opaco ou capaz de impedir a aio da luz. Proteger da poeira significa que a substncia deve ser mantida em frasco arrolhado e munido de capuz protetor. Quando a monografia defme as condies de temperatura na qual o frmaco deve ser conser vado, so utilizados os seguintes termos: em conFlador - em temperatura entre OOCe entre 2 c e

As concentraes em porcentagem so expressas como segue:

-20C.
em refrigerador - em temperatura

8C; Por cento p/p (peso em peso) ou % (P/p) expressa o nmero 100 g de mistura. de g de componentes em

Por cento p/V (peso em volume) ou % (P/v) - expressa o nmero de g de um componente em 100 m1 da soluo. Por cento V/V (volume em volume) ou % (V/V) - expressa o nmero de m1 de um componente em 100 m1 de soluo. Por cento V/p (volume em peso) ou % (V /p) expressa o nmero de rol de um componente em 100 g da mistura.
A expresso por cento usada sem outra atri blriO significa: para mistura de slidos e semi slidos, por cento p/p; para solues ou suspenses ~e slidos em lquidos, por cento p/V; para solues de lquidos, por cento V/V; para solues de gases em lquidos, por cento p/V; para expressar teor de leos essenciais em drogas vegetais, por cento V/p.
INTERPRETAO DA PRECISO DOS DADOS NUMeRICOS E LIMITES DE TOLERNCIA

local fresco - ambiente cuja temperatura permanece entre 8 c e 15 C; local frio - o ambiente cuja temperatura no excede 8C. A menos que a monografia especifique diferente mente, quando um frmaco necessita ser conser vado em local fresco, o mesmo pode ser conservado em refrigerador. Temperatura ambiente - a temperatura nor malmente existente em um local de trabalho; entre 15 c e 30 oCo Local quente - o ambiente cuja temperatura permanece entre 30 c e 40 oCo Calor excessivo - indica temperaturas acima de 4OC. Quando a monografia no especificar condies de conservao, estas incluem proteo contra a umidade, congelamento e calor excessivo.
MATERIAL DE ACONDICIONAMENTO E EMBALAGEM

A preciso desejada nos testes, reaes e ensaios farmacopicos indicada pelo nmero de decio mais que se apresenta no texto. Por exemplo, 20 indica valor no menor que 19,5 e no maior que 20,5; 2,0 indica valor no menor que 1,95 e

Compreende-se por material de acondiciona mento e embalagem o recipiente, envoltrio, invlucro ou qualquer outra forma de proteo, removvel ou nio, destinado a envasar, proteger, manter, cobrir ou empacotar, especificamente ou no, matrias-primas, reagentes e medicamentos.

Substncias adjuvantes, tais como, conservantes, estabilizantes, diluentes, desagregantes, Recipiente bem fechado - aquele que protege aglutinantes, deslizantes, anti-aderentes, entre o seu contedo de perdas e contaminao por outras, so aquelas empregadas para preparar a slidos estranhos, nas condies usuais de mani- forma farmacutica. Essas substncias devem ser pulao, transporte, armazenageme distribuio. incuas nas quantidades adicionadas e nio devem Recipiente perfeitamente fechado - aquele prejudicar a eficcia teraputica do medicamento. que protege seu contedo de perdas e de contamiA presena de tais substncias e a proporio nao por slidos, lquidos e vapores estranhos, adicionada devem ser claramente indicadas nos eflorescncia, deliqescncia ou evaporaio nas rtulos dos recipientes em que o produto entrecondies usuais de manipulao, distribuiio, gue para consumo. armazenageme transporte. A no ser que haja contra-indicao expressa, o Recipiente hermtico - aquele impermevel ar dos recipientes pode ser substitudo por dixido ao ar ou qualquer outro gs, nas condies usuais de carbono ou nitrognio. de manipulao, transporte, armazenagem e distribuio. CORANTES Cilindro de gs - recipiente metlico perfeiNas preparaClesfarmacuticas tolerada a pretamente fechado, de paredes resistentes, destinado sena de substncias corantes enumeradas em XI. a conter gs sob presso, obturado por vlvula regulvel, capaz de manter a sada do gs em AO, USO E DOSES vazo determinada. Recipiente para dose nica - o recipiente So as constantes do relatrio para registro hermtico e que contm determinada quantidade do produto no rglo sanitrio, atualizadas medo medicamento destinada a ser administrada de diante reviso bibliogrfica internacional, quando uma s vez, o qual, uma vez aberto, no poder ser for o caso. fechado com garantia de esterilidade. Quando indicadas nas monografias, as doses Recipiente para doses mltiplas - o recipiente representam a quantidade do medicamento usualhermtico que permite a retirada de pores mente prescrita para pacientes adultos. O mdico, sucessivas de seu contedo, sem modificar a a seu critrio e sob sua exclusiva responsabilidade, concentraio, a pureza e a esterilidade da poro poder variar as quantidades e a freqncia de remanescente. administrao de qualquer medicamento. Entretanto, a prescrilio de doses muito superiores s ROnJLAGEM usuais obriga o farmacutico a confirmar, com o mdico emissor da receita, as doses estabelecidas. Rtulo a identificaoimpressaou litografada, bem como dizeres pintados ou gravados a fogo, presso ou decalque aplicados diretamente sobre DOSES E MEDIDAS APROXIMADAS recipientes, vasilhames, invlucros, envoltrios ou Na falta de dispositivos de medidas apropriadas qualquer outro material de acondicionamento. Os (dosadores, colheres-medida etc.), para a dispenrtulos terio dimenses necessrias fcil leitura sao de medicamentos podem ser utilizadas e serio redigidos de modo a facilitar o entendi- medidas aproximadas. So, geralmente, unidades mento ao consumidor. para uso domstico, com freqncia adotadas A confeci'o dos rtulos dever obedecer s para informar ao paciente a medida da dose.

Material de acondicionamento propriamente dito o que est em contato direto com seu contedo durante todo o tempo. Considera-se material de acondicionamento ampola, bisnaga, envelope, estojo, flaconete, frasco de vidro ou de plstico, frasco-ampola, cartucho, lata, pote, saco de papel e outros. Embalagem a que se destina total proteo do material de acondicionamento nas condies usuais de transporte, armazenagem e distribuiio. Considera-se embalagem: caixas de papelo, cartolina, madeira ou material plstico ou estojo de cartolina e outros. N'o deve haver qualquer interao, entre o material de acondicionamento e o seu contedo, capaz de alterar a concentrao, a qualidade ou a pureza do material acondicionado. As condies de acondicionamento so descritas nas monografias, utilizando-se os termos abaixo:

normas vigentes do rgo federal de Vigilncia Sanitria.

PRAZO DE VALIDADE

O prazo de validade limita o tempo durante o qual o produto poder ser usado. Os produtos devero indicar nos rtulos, quando tecnicamente possvel, e embalagens a data do trmino do prazo de validade. Esta data identifica o tempo durante o qual o frmaco estar de acordo com as exigncias da monografia farmacopica, quando mantido sob as condies de conservaio indicadas. Quando o prazo de validade for indicado apenas pelo ms e ano, entende-se como vencimento do prazo o ltimo dia desse ms.
SUBSTNCIAS ADnIV ANTES

Tais medidas tm a seguinte indicao de capacidade: Colher das de ch . . . . . . . . . . . . Colher das de sobremesa Colherdasdesopa

,presentando teor de princPios ativos e resduo seco prescritos na monografia.

EXTRATOS SECOS

Ia m1
15ml

5 m1

As doses menores que 5 ml costumam ser administradas em fraes da colher de ch ou em gotas.

PADROES E SUBSTNCIAS DE REFER.eNCIA

So preparaes slidas, pulverulentas ou granuladas obtidas por evaporao de extratos de drogas medicamentosas, adicionadas ou nlo de adjuvantes, apresentando teor de princpios ativos indicados na respectiva monografia.
ELlXIRES

Serio adotados padres e substncias de referncia estabelecidos pela Organizaio Mundial da Sade, pela Farmacopia Internacional, pela Farmacopia Europia e outras Farmacopias de maior expresso tcnica, at que padres desenvolvidos por entidades nacionais, aps estudos colaborativos, venham a receber aprovao e oficaliza'o pela Comisso Permanente de Reviso da Farmacopia Brasileira. Os padres primrios para Espectrofotometria de Absoro Atmica foram listados atravs da denominalo do metal, seguido da sigla SRA (Solu'o Reagente para Absorio Atmica).
PRECISO DOS ENSAIOS BIOLGICOS

So preparaes lquidas, lmpidas, hidroal colicas, apresentando teor alcolico na faixa de 20a 50%. Os elixires silo preparados por dissolu'o simples e devem ser envasados em frascos de cr mbar e mantidos em lugar fresco e ao abrigo da luz.
XAROPES

So solues aquosas concentradas de sacarose ou outros acares. Quando no se destinam ao consumo imediato, devem ser adicionados de conservadores antimicrobianos autorizados.
TINTURAS

Os resultados dos ensaios biolgicos sio expressos como potncia mdia estimada e os limites de confiana para uma probabilidade de erro determinada. As especificaes para as estimativas de potncia e para os limites de confiana aceitveis do indicadas em cada monografia. A probabilidade de erro utilizada p = 0,05, a menos que outra probabilidade seja referida na monografia.
EXTRATOS

So preparaes alcolicas ou hidroalc06licas resultantes da extrallo de drogas vegetais ou animais ou da diluio dos respectivos extratos. So classificadas em simples e compostas, conforme preparadas com uma ou mais matrias-primas. Exceto quando prescrito diferentemente, Ia ml de tintura simples correspondem a I g de droga seca.
LOOES

So preparaes lquidas, slidas ou semis6lidas obtidas pela extra'o de drogiu vegetais ou animais, frescas ou secas, por meio de lquido extrator adequado, seguida de sua evapora'o total ou parcial e ajuste do concentrado a padro previamente estabelecido.
EXTRATOS FLUIDOS

So prepara~es lquidas aquosas ou hidroalcolicas destinadas ao uso externo atravs de aplicaes sobre a pele.
EsplRITOS

So prepara~es lquidas extrativas obtidas de drogas vegetais ou animais por extra'o com lquido apropriado ou por dissolu'o do extrato seco correspondente. Devem apresentar teor de princpios ativos e resduo seco prescritos na monografia.
EXTRATOS MOLES

So preparaes lquidas alcolicas ou hidroalco6licas, contendo princpios aromticos ou medicamentosos e classificados em simples e compostos. Os espritos so obtidos pela dissolu'o de substncias aromticas no lcool, geralmente na propor'o de 5% (p/V).
GUAS AROMA ncAS

Sio preparaes semi-slidas obtidas por evapora'o parcial de extratos de drogas vegetais ou animais, adicionadas ou nio de adjuvantes e

So solues saturadas de leos essenciais ou outras substncias aromticas em gua. Possuem odor caracterstico das drogas com as quais so preparadas, recebendo tambm o nome das mesmas.

EMuLSOES

COMPRIMIDOS

Silo preparaes farmacuticas obtidas pela dispersio d~ duas fases lquidas imiscveis ou praticamente i11Scveis.De acordo com a hdrofilia ou lipofilia da fase dispersante classificam-se os sistemas em leo em gua (01 A) ou gua em leo (AIO). Quando do para uso injetvel, devem atender s exigncias de esterilidade (V.5.1.1) e pirognios

So formas farmacuticas slidas obtidas por compresso. Esta forma farmacutica deve atender s exigncias de desintegrao (V.1.4.1), dissoluo (V. 1.5), dureza (V.1.3.1) e friabilidade (V.1.3.2) descritas nos mtodos gerais e previstas nas monografias especficas.
PREPRAOES TPICAS SEMI.sLlDAS

(V.S.1.2).
SUSPENSES

Sio preparaes farmacuticas obtidas pela dispersio de uma fase slida insolvel ou prati camente insolvel em uma fase lquida. Quando se destinam a uso injetvel, as suspensOes devem satisfazer s exigncias de esterilidade (V.S.U) e no apresentar partculas maiores que 100 rDJ.l.
CPSULAS

Preparaes tpicas sem-slidas so aquelas previstas para aplicao na pele ou em certas mucosas para ao local ou penetrao percutnea de medicamentos, ou ainda por sua ao emoliente ou protetora. As preparaes destinadas ao uso oftlmico, ao tratamento de feridas ou aplicao sobre leses extensas da pele devem satisfazer s exigncias do teste de esterilidade

(V.S.U).
Distinguem-se semi-slidas : Pomadas Cremes Gis Pastas. 4 categorias de preparaes

So formas farmacuticas slidas que encerram o frmaco em envlucro mais ou menos elstico. O envlucro pode ser constitudo de amido ou de gelatina. As cpsulas devem atender s exigncias de varialo de peso, tempo de desintegralo e teor de princpios ativos descritos na monografia.
SUPOsITORlOS

Pomadas Pomadas so preparaes tpicas constitudas de base monofsica na qual podem estar dispersas substncias slidas ou lquid.as. Cremes So preparaes plsticas obtidas pela disperso de duas fases lquidas no miscveis ou praticamente imiscveis. Gis Gis do preparaes farmacuticas constitudas por uma disperso bicoerente de fase slida em fase lquida. Gis hdrofbicos consistem usualmente de parafma lquida com polietileno ou leos gordurosos com slica coloidal ou sabes de alumnio ou zinco. Gis hdrofl1icos so preparaes obtidas pela incorporao de agentes gelificantes - tragacanta, amido, derivados de celulose, polmeros carboxi vinlicos e silicatos duplos de magnsio e alumnio - gua, glicerol ou propilenoglicol. Pa$t8s Pastas so pomadas contendo dade de slidos em dispersio.
INJETVEIS

So preparaes farmacuticas slidas com formato adequado para introduo no reto. Devem fundir temperatura do organismo ou dispersar em meio aquoso. Os supositrios devem atender s exigncias contidas nas monografias especificadas, bem como ao teste de desintegrao (V. 1.4.2).
VULOS

So preparaes farmacuticas slidas, com formato adequado, para aplicao vaginal. Devem dispersar ou fundir temperatura do organismo. Estas preparaes devem atender o teste de desintegrao (V. 1.4.2).
coIJRlOS

Slo preparaes farmacuticas lquidas destinadas aplicao sobre a mucosa ocular. Devem atender s exigncias especificadas nas respectivas monografias. Devem satisfazer s exigncias de esterilidade (V.S.1.1).
MEDICAMENTOS PRESSURlZADOS

grande quanti

So medicamentos mantidos sob pressio em frasco e sistema de aplicao apropriados. Devem atender s exigncias das respectivas monografias.

Injetveis so preparaeles estreis destinadas administrao parenteral, apresentadas como solu-

es, suspenses, ou emulses. Devem atender as exigncias de volume (V .1.2), esterilidade (V .5.1.1) e pirognios (V.5.1.2). Velculos aquosos Usase geralmente gua para lnJeao como veculo para injetveis aquosos. Solues de cloreto de sdio 0\1 soluo de Ringer ou outras solues adequadas, preparadas com gua para injeo, podem ser usadas em parte ou totalmente ao invs de somente gua para injeo, a menos que a monografia especifique de outra forma. Todos os veculos aquosos devem satisfazer s exigncias especificadas nas provas de pirognios (V.5.1.2) e esterilidade (V.5.1.1). Ve(culos n6o-aquosos Veculos noaquosos utilizados parcial ou totalmente na obteno de preparaes injetveis podem ser miscveis ou no miscveis com a gua. Entre os veculos miscveis com a gua, os mais usados so os poli lcoois e os polmeros do xido de etileno. Entre os imiscveis com a gua, os mais usados so os leos fIXOSde origem vegetal e os mono e diglicerdeos de cidos graxos. Os leos fIXOSso inodoros ou quase inodoros e seu odor e sabor no devem lembrar os de rano. Devem satisfazer s exigncias especificadas nas monografias e apresentar as caractersticas a seguir: a) teste de resfriamento - Transferir quantidade de leo fIXO, previamente dessecado a 105 c por duas horas e resfriado temperatura ambiente em dessecador contendo slica-gel, para recipiente de vidro incolor cilndrico, com dimetro interno de aproximadamente 25 mm. Fechar o recipiente e mergulhar durante quatro horas em gua mantida a 10 oCo O lquido deve permanecer suficiente mente claro, para que possa facilmente ser vista uma linha negra de 0,5 mm de espessqra, quando mantida verticalmente atrs do cilindro e contra fundo branco; b) ndice de saponificao - Entre 185 e 200 (V.3.3.8); c) ndice de iodo - Entre 79 e 128 (V.3.3.10); d) substncias insaponiflCveis - Refluxar em banho-maria 10 ml do leo com 15 ml ~ hidr xido de sdio (l: 16) e 30 ml de lcool etlico, agitando ocasionalmente at que a mistura se torne clara. Transferir a soluo para cpsula de porcelana, evaporar o lcool etlico em banho-maria e misturar o resduo com 100 ml de gua. Deve resultar soluo clara; e) cidos graxos livres - Os cidos graxos livres em 10 g do leo devem consumir, no mximo, 2 ml de hidrxido de s6dio 0,02 M; Os mono ou diglicerdeos sintticos de cidos graxos devem obedecer s seguintes exigncias:

a) so lquidos e permanecem claros quando resfriados aIO c, b) ndice de iodo - no maior que 140 (V. 3.3.10). Os veculos no-aquosos devem ser selecionados com especial cuidado, pois no podem ser irritantes, txicos ou sensibilizantes e no devem interferir na eficcia teraputica da preparao. Substncias adjuvantes Adjuvantes so substncias com finalidades especficas adicionadas s preparaes injetveis. Estas substncias devem ser selecionadas tendo em vista o aumento da estabilidade do produto, nlo interferncia na eficcia teraputica nem no doseamento do princpio ativo, tampouco causar toxicidade na quantidade administrada ao paciente. Dentre tais substncias incluemse os solubilizantes, os antioxidantes, os agentes quelantes, os tampes, os agentes antibacterianos, os agentes antifngicos, os agentes anti-espumantes e outros, quando especificados nas monograflBs. No permitida a adilo de substncias corantes. So os seguintes os limites mximos para alguns adjuvantes, a menos que a monografia especifique de outra forma: a) para agentes contendo mercrio ou compostos tensoativos catinicos - 0,01 %; b) para agentes do tipo clorobutanol, cresol e fenol- 0,5%; c) para dixido de enxofre, ou quantidade equivalente de sulfito, bissulfito ou metabissulfito de potssio ou sdio - 0,2%. Recipientes para injetveis Os recipientes para preparaes injetveis devem ser fabricados com materiais que no provoquem interao com o contedo e possuam transparncia suficiente para permitir inspeo visual. As tampas, quando usadas, tampouco podem influir na composio ou na conservao do medicamento, oferecendo perfeita vedao, mesmo aps perfuradas vrias vezes. Os recipientes para preparaes injetveis so classificados em: Recipientes para dose nica; Recipientes para dose mltipla; Recipientes para perfuso. Os recipientes para dose nica, ampolas e cartuchos de uso odontolgico, so frascos de vidro ou de material plstico adequado, fechados pela fusio do vidro ou com a utilizaio de oprculos fIXOSou mveis. O contedo s deve ser utilizado em uma nica dose, nio podendo ser reaproveitado.

Os recipientes para dose mltipla do frascos de vidro de paredes resistentes que, aps cheios com prepara~s lquidas ou com slidos para serem dissolvidos ou suspensos, do selados com tampa de outro material. O contedo destes frascos pode ser removido para alministralo em uma nica ou em vias doses. Os recipientes para perfuslo do fra;scoscom mais de SO ni1 de capacidade, podendo atingir 1 000 m1, selados com tampa de outro material ou 010, fabricados de vidro ou de plstico. Os medicamentos envasados nestes tipos de recipientes devem ser administrados em uma nica vez, com a utilizalo de equipos est6reis, e 010 podem conter .,entes bacteriadas ou antifngicos. O uso de outros tipos de adjuvantes deve ser considerado cuidadosamente.

Controle de volume em recipientel Proceder como descrito em V.1.2. Determinalo de volume em produtos com dose 1tnica e injetveis. Esttlrilidllde As preparaoes injetves devem satisfazer li exJgfncias especit1cadas na monografia para o Te,te de e,terilidade (V.S .1.1). Piroglnios As preparaoes injetveis devem satisfazer s exisncias especificadas na monografia para o Te,te de p;,oginio, (V.S .1.2).

V. MTODOS DE ANLISE

v.t.

PROCEDIMENTOS TCNICOS APLICADOS A MEDICAMENTOS

V.l.l. DETERMINAO DE PESO EM FORMAS FARMAC~UTICAS

GENERALIDADES

Efetua-se a determinao de peso em produtos com dose individual e outras formas de apresentao, acondicionados em recipientes de doses mltiplas. As pesagens so feitas em balanas de sensibilidade adequada. Produtos com dose individual A dose individual depende do tamanho ou da quantidade de formas de apresentao. Mediante a determinao do peso individual obtm-se a informao sobre a homogeneidade por unidade. Produtos com doses mltiplas Em contraposio aos produtos com dose individual, as divergncias de peso do contedo so determinadas a partir da quantidade nominal de enchimento. Deste modo obtm-se informaes sobre a homogeneidade do envase.
COMPRIMIDOS

em relao ao peso mdio, conforme indicado na tabela. Se uma ou mais cpsulas estiverem fora dos limites indicados, pesar individualmente 20 unida des, remover o contedo de cada uma e pesar novamente. Determinar o peso mdio do contedo pela diferena dos valores individuais obtidos entre a cpsula cheia e a vazia. Pode-se tolerar, no mximo, duas unidades fora dos limites especificados na tabela, em relao ao'peso mdio, porm nenhuma poder estar acima ou abaixo do dobro das porcentagens indicadas. Se mais que duas, porm no mais que seis, cpsulas, estiverem com variao entre uma e duas vezes o ndice da tabela, em relao ao peso mdio determinar o peso do contedo .em mais 40 unidades e calcular o peso mdio das 60. Determinar as diferenas, em relao' ao novo peso mdio. Pode-se tolerar, no mximo,. 6 uni dades em 60 cpsulas cuja diferena 'excei:la os limites da tabela, em relao ao peso mdio, porm nenhuma cuja diferena exceda o dobro dos mesmos.
CPSULAS MOLES

Pesar individualmente 20 comprimidos e determinar o peso mdio. Podese tolerar no mais que duas unidades fora dos limites especificados na tabela, em relao ao peso mdio, porm nenhuma poder estar acima ou abaixo do dobro das porcentagens indicadas.
DRGEAS

Proceder como descrito sob o item cpsulas duras, utilizando 'a seguinte tcnica para remoo do contedo: - cortar as cpsulas previamente pesadas e lavlas com auxl1io de ter et11ico ou outrO solvente adequado. Deixar em repouso temperatura ambiente at completa evaporao do solvente e - seguir os conceitos de variao de peso estabelecidos para cpsulas duras.
SUPOSITORlOS E OVULOS

Pesar individualmente 20 drgeas e determinar o peso mdio. Pode-se tolerar no mais que cinco unidades fora dos limites especificados na Tabela I, em relao ao peso mdio, porm nenhuma poder estar acima ou abaixo do dobro das porcentagens indicadas.
CPSULAS DURAS

Pesar individualmente 20 cpsulas e determinar o peso mdio. Pode-se tolerar variao dos pesos individuais

Pesar individualmente 20 supositrios ou vulos e determinar o peso mdio. Pode-se tolerar no mais que duas unidades fora dos limites especificados na tabela, em relao ao peso mdio, porm nenhuma poder estar acima ou abaixo do dobro das porcentagens indicadas.

Formas farmacluticas

Paso mdio ou valor nominal declarado

Limites de varill60

Comprimidos, ncleos para drgeas, comprimidos efervescentes, comprimidos subllnguais, comprimidos vaginais e pastilhas Drgeas e comprimidos vestidos re-

at 80,0 mg entre

10,0% 7,5% 5,0% 15,0% 10,0% 7,5% 5,0% 10,0% 7,5% 5,0% 10,0% 5,0%

ao,o

e 250,0 mg

acima de 250,0 mg at 25,0 mg entre 25,0 e 150,0 mg entre 150,0 e 300,0 mg acima de 300,0 mg at 300,0 mg acima de 300,0 mg para todos os pesos

Cflpsulas duras e moles, cpsulas vaginais Suposit6rios e 6vulos Cremes, pomadas, grenulados
PS

ps

at 60,0 9 entre 60,0 e 150,0 9 abaixo de 40,0 mg acima de 40,0 mg

estreis

e Iiofilizados

10,0%

leI Se

O peso declarado for de 40 mg ou menos, a determinalo feita segundo mtodo adequadQ de c/ol8amento. O valor do contedo pode divergir acima ou abaixo de 15% do mesmo.

Ps, GRANULADOS, CREMES E POMADAS

Pesar individualmente 10 embalagens. Remover o contedo e lavar os respectivos recipientes utilizando solvente adequado; secar, esfriar temperatura ambiente e pesar novamente. A diferena entre as duas pesagens representa o peso do contedo. Determinar o peso mdio do contedo, o qual nlo dever ser inferior ao valor nominal declarado. Os pesos individuais podem divergir do mesmo, de acordo com a porcentagem indicada na tabela. Caso nlo seja cumprida essa exigncia, determinar o peso individual do contedo de 20 embalagens adicionais. O peso mdio das 30 embalagens nlo deve ser inferior ao valor nominal declarado e os pesos individuais podem divergir de acordo com a porcentagem indicada na tabela, sendo que somente I embalagem em 30 pode divergir dos limites de variao indicados na tabela. POs ESDREIS
E LIOFILIZADOS

Se mais que duas, porm nlo mais que sete, estiverem com variao entre 10% e 15% e se mais que 1 divergir mais que 15% do peso mdio do contedo, determinar o peso individual de 40 unidades adicionais e calcular o peso mdio das 60. Somente 6 entre os 60 pesos individuais podem divergir mais que 10% do peso mdio do contedo, porm nlo mais que 1 pode divergir mais que 15% do mesmo.

Controle do peso contido em recipientes Os recipientes que contm slidos destinados a solues ou suspens(5es injetveis devem ser examinados quanto ao peso de slidos dispensados e satisfazer s exigncias especificadas na monografia. Uniformidade de pelO - Os slidos destinados a solues ou suspenses injetveis, rojos pesos mdios slo menores ou iguais a 40 mg, nlo esto sujeitos a este teste, mas devem ser submetidos a doseamento apropriado. Os slidos, cujos pesos mdios slo maiores que 40 mg, devem satisfazer s exigncias do teste descrito a seguir, quando o mesmo realizado sobre 20 unidades. Remover o rtulo do recipiente. Lavar e secar o recipiente externamente, abrir e pesar imediata mente com o seu contedo. Esvaziar o recipiente o mais completamente possvel por meio de leves batidas e enxaguar com gua, se necessrio, e a se~ir com lcool etlico. Secar o recipiente a 105 C por uma hora ou, conforme a natureza do

Pesar individualmente 20 unidades, remover o contedo e lavar os respectivos recipientes utilizando gua e em seguida lcool etlico. Secar em estufa aiOS c por 1 hora (ou temperatura mais baixa, at peso constante), esfriar em dessecador e pesar novamente, recolocando a tampa livre da cpsula metlica, no caso de frascos-ampola. A diferena entre as duas pesagens representa o peso do contedo. Determinar o peso mdio das 20 unidades. Somente duas podem divergir do limite especificado na Tabela I, em relao ao peso mdio, porm nenhuma pode divergir de 15% do mesmo.

contedo, temperatura mais baixa, at peso constante. Esfriar em dessecador e pesar. A diferena entre o peso do recipiente com o contedo e o peso do recipiente vazio representa o peso do contedo. Repetir este procedimento com os outros dezenove recipientes. No mais que dois dos pesos individuais podem desviar mais que 10% do peso mdio determinado sobre os vinte recipientes e nenhum devedesviarem mais que 20%. Teor declarado - Para a detenninao do teor declarado em um recipiente, proceder a um dos testes que seguem dependendo da exigncia da monografia. Teste A - Determinar o peso do contedo de dez recipientes seguindo o teste descrito para Uniformidade de peso. O peso do contedo de cada recipiente no deve desviar do peso declarado no rotulo, em porcentual maior que o indicado na Coluna A da Tabela 2. Apenas um recipiente pode ter o peso de seu contedo desviado em porcentual no maior que o indicado na coluna B da referida tabela. Teste B - Determinar o peso do contedo de dez recipientes seguindo o teste descrito para

Pelo dflcl.r8do nor6tulo

(.mg)

De'"io de porc.ntuBl
A B

< >

0,12

0,12

<

0,3

0,3

10,0% 7,5% 5,0%

16,0% 12,5% 10,0%

Uniformidade de peso. Misturar o contedo de dez recipientes e proceder ao doseamento indicado na monografia. Aps o resultado do ensaio, calcular a quantidade proporcional do princpio ativo contido em cada recipiente. Esta quantidade deve estar de acordo com o estabelecido na varial'o permitida na monografia e apenas um reci piente pode desviar mais que duas vezes do grau de tolerncia permitido na monografia. Quando um ensaio biolgico especificado, calcular, do resultado do ensaio, a potncia do contedo dos recipientes. A potncia deve estar entre os limites fiduciaisestabelecidos na monografia.

V.l.2. DETERMINAO DE VOLUME EM FORMAS FARMACSUTICAS

GENERALIDADES

A determinao do volume nominal em produ. tos lquidos com dose mltipla efetuada atravs do peso do seu contedo. As pesagens so realizadas em balanas de sensibilidade adequada. Para produtos lquidos com dose nica e para injetveis, a determinao realizada atravs de seringa de vidro previamente calibrada.

Volume declarado ml

UnidlldtM e ItlrtNTI ttlltadel

de 0,5 a 3,0 de 3,Oa 10,0 maior que 10,0

12 10 6

Produtos lIquidas com dose mltipla

Volume dllClarado ml

ExctlUo mlnimo m6t1f1illml

para IIquidol vilcosos Iml

Pesar individualmente o nmero de unidades 0,5 0,10 0,12 indicadas na Tabela 1, remover o contedo e lavar 0,15 1,0 0,10 os recipientes utilizando gua e em seguida lcool 2,0 0,15 0,25 etlico. Secar em estufa a 105 c por I hora ou 0,30 0,50 5,0 10,0 0,50 0,70 a temperaturas mais baixas at peso constante, 20,0 0,90 0,60 conforme o material do recipiente. Esfriar 3,00% 50,0 ou mais 2,00% temperatura ambiente e pesar novamente, recolo cando a tampa e outras partes correspondentes a cada recipiente. A diferena entre as duas pesao volume mdio das determinaes no pode gens representa o peso do contedo. Determinar o ser inferior ao declarado. Nenhuma unidade poder peso mdio das Wlidades testadas e anotar os ultrapassar o ndice do desvio mximo citado na valoresmnimo e mximo individuais encontrados. Tabela 1. Para se obter os volumes correspondentes efetuar o seguinte clculo: em que V m d V
Produtos lquidas com dose nica e injetveis

= 1!!d

= = =

volume em mI, peso do contedo em g, densidade do produto em glml, determinada a 25C ou conforme descrito na monografia.

Testar o nmero de unidades indicadas na Tabela 2. Remover o contedo total de cada unidade, com auxlio de seringa, e efetuar a medio. Determinar o volume mdio das unidades testadas e anotar os valores mnimo e mimo individuais encontrados . 0 volume nio deve ser inferior ao indicado na Tabela 3.

Volume dllCltlrado ml

Uni __

,...,
12 10 8 3 2

ti "",

o.v;ombimo

to/entio 3,0" 2,5" 2,0% 1,5% 1,0"

a~ 10ml entre 10ml e 30ml entre 30ml e 100ml entre 100 ml e 250 ml acima de 250ml

V.t.3. DETERMINAO DE RESISTaNCIA MECNICA EM COMPRIMIDOS

Os testes de resistncia mecnica, tais como friabilidade e dureza, do considerados oficiais dentro do contexto legal desta Farmacopia e como tal constituem elementos teis na avalialo da qualidade integral dos comprimidos com ou

sem revestimento. Estes testes visam, especifi. camente, a demonstrar a resistncia dos comprimidos ruptura provocada por golpes ou friclo durante os processos de revestimento, embalagem, transporte, armazenagem etc.

Dureza 6 a resilt6ncta do comprimido ao eamapmento ou 1 ruptura sob preuIo radial. A dureza de um comprimido 6 proporcional ao lopritmo da fora de compresslo e inwrsamente proporcional! sua porosidade. O teste consiste em submeter o comprimido . alo de um aparelho que mea a fora aplicada diametralmente, necessria para esmap-lo. A fora 6 medida em newton (N). Pua teste de comprimidos, o mnimo aceitvel 30 N (aproximadamente 3 kgf).
APARELHAGEM

quanto ao mecaniamo empregado para exercer a prelllo. A fora pode ser exerctda por mola espiral ou por bomba de ar operada manualinente. medida que a presslo aumenta, um ~mbolo ou piJtIo aplica determinada fora no compri"'Dto apoiado em base fIXa. Os valores obtidos com o aparelho movido pela bomba de ar podem ser aproximadamente 1,5 vezes maiores que os obtidos com a mola espiral. A dureza mnima aceitivel, neste caso, de 45 N (aproximadamente
4,5 kgf).

r"

Podem ser utilizados, essencialmente, dois tipos de aparelhos, os quais diferem basicamente

Friabilidade a falta de resistncia dos compri midos abraslo, quando submetidos ao mecnica de aparelhagemespecfica. O teste consiste em pesar com exatido um mnimo de vinte comprimidos-,introduzi-Ios no apalho e submet-ios al do aparelho e retirlos aps efetuadas cem rotaes num perodo de cinco minutos. Aps remover qualquer resduo de poeira dos comprimidos, eles slo novamente pesados. A diferena entre o peso inici'ale o fi nal dos comprimidos representa a friabilidade em fimo da porcentagem de p perdido. Consideram-se aceitveis os comprimidos com perda inferior a 1,5% do seu peso ou a porcentagem estabelecidana monografia, quando submetidos ao teste descrito.

Para clculo da porcentagem de friabilidade nlo 510 considerados os comprimidos lascados ou que se separam em duas camadas.

Consiste num cilindro, com 20 cm de dimetro e 4 em de espessura, o qual gira em tomo de seu eixo, velocidade de rotalo de 20 rpm. O cilindro contm vrias lminas, que recolhem os comprimidos em cada rotalo, levando-os a uma altura pr-fixada, de onde caem repetidamente, aps cada rotalo.

V.1.4.1. DETERMINAO DO TEMPO DE DESINTEGRAO PARA COMPRIMIDOS E CPSULAS

teste de desintegrao determina se um comprimido ou cpsula se desintegra dentro do limite de tempo especificado na monografia de cada forma medicamentosa, quando unidades, em nmero especificado, so submetidas s condies experimentais subseqentemente descritas. A desintegrao defmida, para os fms deste teste, como o estado no qual nenhum resduo da unidade (cpsula ou comprimido), salvo fragmentos de revestimento ou matriz de cpsula insolveis, permanece na tela metlica do aparelho de desintegrao. Consideram-se tambm como "desintegradas" as unidades que durante o teste se transformam em massa pastosa que no apresente

APARELHAGEM

Consiste de sistema de cestas e tubos, de recipiente apropriado para o lquido de imerso (um bquer com capacidade de 1 2), de termostato para manter o lquido a 37 c ~ 1C, e de mecanismo para movimentar verticalmente a cesta e os tubos no lquido de imerso, com freqncia constante e percurso especfico. O volume do lquido de imerso dever ser suficiente para que, ao atingir o ponto mais alto do percurso, a parte inferior da cesta fique no mnimo a 25 mm abaixo da superfcie do lquido, e que no ponto mais baixo fique no mnimo a 25 mm do fundo do bquer. Os movimentos ascendente e descendente devero ter a mesma velocidade e a mudana do sentido do movimento deve ser suave. A cesta consiste em seis tubos de vidro ou acrlico transparente, abertos em ambos os lados. As dimenses dos tubos silo: comprimento 77,S mm, dimetro interno 21,5 mm e espessura das paredes aproximadamente 2 mm. Os tubos silo mantidos verticalmente, adaptandose em cada extremidade um disco de material adequado transparente, com dimetro de 90 mm e espessura de 6 mm, possuindo seis orifcios nos quais silo introduzidos os tubos. Os seis orifcios eqidistam do centro de cada disco, estando igualmente espaados. Na face externa do disco inferior encontra-se uma tela de arame (dimetro de 0,635 mm) de ao inoxidvel, com abertura de 2 mm, presa atravs de trs parafusos. O disco superior possui tampa de ao inoxidvel ou acrlico, com dimetro de 90 mm, que fixada mediante trs presilhas. A tampa possui orifcio central com dimetro de 32 mm que encaixa nas presilhas e seis orifcios igualmente espaados e

eqidistantes do centro, com dimetro de 19 mm. No teste de desintegrao de cpsulas, utiliza-se tela de arame de ao inoxidvel presa na face externa da tampa, semelhante tela adaptada ao disco inferior da cesta. As partes que constituem a cesta so montadas e mantidas ftrmemente unidas mediante parafuso metlico central, com dimetro de 5 mm, com porcas convenientemente situadas. A extremidade superior do parafuso central deve ter dispotivo para fixar a cesta ao mecanismo que produz o movimento vertical do sistema. Quando indicado, deve ser adicionado em cada tubo da cesta um disco cilndrico de mat~rial adequado transparente, com densidade relativa entre 1,18 e 1,20, dimetro de 20,7 mm 0,15 mm, e espessura de 9,5 mm 0,15 mm. Cada disco possui cinco orifcios, cada um com 2 mm de dimetro, sendo um orifcio no eixo do cilindro e os outros quatro eqidistantes, dispostos sobre um crculo de 6 mm de raio relativo ao centro do disco. A superfcie lateral do disco possui quatro mossas eqidistantes, com profundidade de 2,55 mm, em forma de V, as quais, no lado superior do disco, medem 9,5 mm de largura, e no lado inferior, 1,6 mm. Todas as superfcies do disco so lisas. O desenho e montagem da cesta podem variar desde que as especificaes para os tubos e abertura das telas sejam mantidas.
COMPRIMIDOS

Utilizar inicialmente 6 comprimidos no teste. Colocar 1 comprimido em cada um dos seis tubos da cesta, adicionar um disco a cada tubo e acionar o aparelho, utilizando gua mantida a 37C 1 c como lquido de imersllo, a menos que outro fluido seja especificado na monografia do medicamento. Ao fmal do intervalo de tempo especificado, cessar o movimento da cesta e observar o material em cada um dos tubos: todos os comprimidos devem estar completamente desintegrados. O limite de tempo estabelecido como critrio geral para o teste de desintegrao de comprimidos de 30 minutos, a menos que outra especficao se encOntre na monograf18 do medicamento.

COMPRIMIDOS COM REVESTIMENTO AUCARADO OU FILME

Utilizar inicialmente 6 comprimidos. Colocar I comprimido em cada um dos seis tubos da cesta.

2-fl.S'1
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2,55

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mento externo solvel, mergulhar a cesta em gua, temperatura ambiente, durante 5 minutos. Acionar o aparelho, sem adicionar os discos, utilizando cido clordrico 0,1 M mantido a 37C 1 c como lquido de imerso. Decorridos 60 minutos, cessar o movimento da cesta e observar os comprimidos: estes no devem estar desintegrados, rachados ou amolecidos. Colocar um disco em cada tubo e acionar o aparelho, utilizando soluo tampo fosfato pH 6,8 (para comprimidos com revestimento de goma-laca recomenda-se ajustar o ~H deste tampo para 7,5), mantida a 37C 1 C, como lquido de imerso. Decorrido o tempo especificado na monografia, ou 45 minutos, cessar o movimento da cesta e observar o material em cada um dos tubos; todos os comprimidos devem estar completamente desintegrados, podendo restar apenas fragmentos de revestimento insolveis.
CPSULAS GELATINOSAS

Aparelho para desintegrao de comprimido. (dimellles em mm).

e cplUlas

Se o comprimido possuir um revestimento externo solvel, mergulhar a cesta em gua, temperatura ambiente, durante 5 minutos. Colocar um disco em cada tubo, e acionar o aparelho, utilizando gua mantida a 37C 1C como lquido de imerso. Decorridos 60 minutos, cessar o movimento da cesta e observar o material em cada um dos tubos. Se os comprimidos no estiverem completamente desintegrados, testar outros 6 comprimidos, utilizando cido clordrico 0,1 M como lquido de imerso, mantido a 37C 1C. Aps 60 minutos, cessar o movimento da cesta e observar o material em cada um dos tubos: todos os comprimidos devem estar completamente desintegrados.
COMPRIMIDOS COM REVESTIMENTO ENttRICO

Aplicar o teste conforme descrito para comprimidos omitindo o uso dos discos. Utilizar uma tela com abertura de 2 mm, de arame de ao inoxidvel adaptada tampa da cesta, conforme descrito no item Aparelhagem. Observar as cpsulas aps 45 minutos ou conforme especificado na monografia do medicamento: todas as cpsulas devem estar completamente desintegradas, ou restando apenas fragmentos insolveis de consistncia mole.

CPSULAS GASTRO-RESISTENTES

Utilizar a cesta conforme descrito para Cpsulas Gelatinosas e proceder conforme descrito para Comprimidos com Revestimento Entrico.

COMPRIMIDOS SUBLINGUAIS

Utilizar inicialmente 6 comprimidos no teste. Colocar 1 comprimido em cada um dos seis tubos da cesta. Se o comprimido possuir um revesti-

Aplicar o teste conforme descrito para Comprimidos, omitindo o uso de discos. Aps'"'s minutos, todos os comprimidos devem estar completamen te desin tegrados.

DETERMINAO DO TEMPO DE DESINTEGRAO DE SUPOSITRIOS, VULOS E COMPRIMIDOS VAGINAIS

V.l.4.2. DETERMINAO DO TEMPO DE DESINTEGRAO SUPOSITRIOS, VULOS E COMPRIMIDOS VAGINAIS

DE

O aparelho (Fig. I) consiste de cilindro de vidro ou plstico, transparente, com paredes de a) dissoluo completa; espessura apropriada, em cujo interior se encontra b) separaio completa de seus componentes, preso, por trs ganchos de metal, um dispositivo acumulando-se substncias graxas fundidas na metlico que consiste de dois discos perfurados de superfcie do lquido, depositando-se os ps ao inoxidvel, contendo cada um 39 orifcios de insolveis no fundo do recipiente e dissolvendo-se 4 mm de dimetro cada. O dimetro de cada disco os componentes solveis da amostra, sendo que a tal que permite a sua introduo no cilindro distribuio dos componentes ocorre de um ou transparente, ficando os discos afastados de, mais dos modos descritos acima; aproximadamente, 30 cm. A determinao c) amolecimento da amostra que pode ser levada a efeito utilizandose trs aparelhos, conacompanhado pela mudana da sua forma sem que tendo cada um uma nica amostra. Cada aparelho ocorra separao completa de seus componentes; introduzido no interior de bquer de, pelo o amolecimento deve ser tal que, ao pressionar a menos, 4 litros de ca~acidade, contendo gua amostra amolecida com basto de vidro, no se temperatura de 36-37 C (a nio ser que a mono perceba existncia de camada mais dura na sua grafia especifique diferentemente). O bquer superfcie; provido de agitador que opere em velocidade d) ruptura da cpsula gelatinosa de vulos, lenta e dispositivo que permita inverter o cilindro sem retir-Io da gua. permitindo liberao de seus componentes; e) ausncia de resduo sobre o disco perfurado ou, quando houver, tenha a consistncia de massa PROCEDIMENTO mole que nlo oferea resistncia presso de Usar trs supositrios ou vulos. Colocar cada basto de vidro. um deles sobre o disco inferior do dispositivo,
I

Considera-se desintegrao completa quando o supositrio ou vulo apresentar:

APARELHO

1
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50 I 52

DETERMINAO

DO TEMPO DE DESINTEGRAO DE SUPOSITORIOS, E COMPRIMIDOS VAGINAIS

OVULOS

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introduzir e fixar o disco no interior do cilindro. Inverter o aparelho cada 10 minutos. Examinar as amostras aps decorrido o tempo prescrito na monografia. O teste considerado satisfatrio se todas as amostras se apresentam desintegradas.
C

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--

A - Placa de vidro a - Comprimido vaginal

D - Agua E - Fundo do recipiente

C - Supertrcie da gue FiI. 2 Apuelho pua cIeain Io vulos e comprimidos vqinIis.

de

IlIpOlIt6doI,

Usar o aparelho descrito em desintegraio de supositrios e vulos, montado conforme Figura 2, Introduzir o cilindro em bquer de diimetro adequado contendo gua a 36-37C que deve cobrir uniformemente as perfuraOlls do disco. Utilizar trs aparelhos, colocando em cada um deles um comprimido vaginal sobre o disco superior. Cobrir o aparelho com uma placa de vidro para assegurar a umidade adequada. Examinar o estado de cada amostra aps decorrido o tempo prescrito na monografia. O teste considerado satisfatrio se todas as amostras se apresentam desintegradas.

V.1.5. DETERMINAO DO TEMPO DE DISSOLUO PARA COMPRIMIDOS E CPSULAS

o teste de dissolu'o determina a porcentagem da quantidade de princpio ativo, declarado no rtulo do produto, liberado no meio de dissoluo, dentro do perodo de tempo especificado na monografia de cada produto, quando o mesmo submetido ao de aparelhagem especfica, sob condies experimentais descritas. O teste visa a demonstrar se o produto atende s exigncias constantes da monografia do medicamento para comprimidos e cpsulas.
APARELHAGEM

O aparelho de dissolu'o consiste de sistema contendo as seguintes partes: (1) um recipiente de forma cilndrica e fundo arredondado com a parte superior achatada, de vidro, plstico ou qualquer outro material transparente e inerte, que n'o reaja, adsorva ou interfira com o medicamento a ser testado. Sua capacidade de um litro e suas dimenses so: altura de 160 a 175 mm e dimetro interno de 100 a 105 mm. Pode ser adaptada tampa de material transparente com um furo central, para permitir a colocao de agitadores e um outro para permitir as coletas de amostras e a insero do termmetro; (2) uma haste metlica (de ao inoxidvel) para agitar o meio de dissoluo, podendo ter em seus extremos dis tipos de agitadores: ps ou cestas (vide Figs. 1 e 2). A haste deve ser centralizada em relao ao fundo do recipiente que contm o meio de dissoluo, e, ao rodar suavemente, seu eixo no deve ser desviado mais que 0,2 mm em relao ao eixo vertical do recipiente; (3) um dispositivo com selecionador de velocidade que imprima haste a velocidade de rotao especificada na monografia do produto e capaz de manter essa velocidade dentro dos limites de 2%. A rotao no deve produzir efeitos indesejveis na dinmica do sistema. Os recipientes so submergidos em banho de material transparente e tamanho adequado, o qual deve possuir dispositivo capaz de manter temperatura homognea de 37C 0,5 c durante o perodo do teste. Deve-se ter cuidado especial para excluir, da montagem e suas vizinhanas, qualquer vibrao, agitao ou movimento externo que altere de forma significativa a dinmica do sistema. De preferncia, a montagem da aparelhagem deve permitir a visualizao das amostras testadas e dos agitadores durante o teste.

a p formam um conjunto nico, podendo ser revestido de material inerte. As ps devem obe decer s especificaes da Fig. 1. Durante o teste, deve ser mantida distncia de 25 mm 2 mm entre o extremo inferior da p e o fundo interno do recipiente que contm o meio de dissoluo. Logo aps adicionar a amostra ao meio de dissoluo, inicia-se a agitao (tempo zero) com velocidade pr-fixada e durante o tempo especificado na monografia correspondente. importante que as amostras se depositem no centro do fundo do recipiente que contm o meio de dissoluo. Caso a amostra flutue, possvel envolv-Ia com um ~queno pedao de arame em espiral, de material inerte, com poucas voltas, tendo o cuidado especial para que a mesma fique folgada e que n'o seja danificada durante a operao.

Cesta
Quando especificado na monografia, utiliza-se como agitador uma haste de ao inoxidvel, que possui em sua extremidade uma cesta desmontvel, do mesmo material, conforme especificaes na Fig. 2. A tela utilizada na confeco da cesta deve ter uma abertura de 0,250 mm, a menos que outra especificao seja dada na monografia. A amostra deve ser colocada dentro da cesta seca, no incio do teste. Durante o teste deve sermantida distncia de 25 mm 2 mm en tre a parte inferior da cesta e o fundo interno do recipiente que contm o meio de dissoluo.
MEIO DE DISSOLUO

Utiliza-se o meio de dissoluo especificado na monografia do produto. Os gases naturalmente dissolvidos no meio de dissoluo devem ser retirados antes do incio do teste, pois ao serem liberados sob a forma de pequenas bolhas durante o teste causam certa turbulncia no meio, alte rando significativamente os resultados. Quando o meio de dissoluo for soluo tampo, o pH deve ser ajustado a 0,05 unidades do valor do pH especificado na monografia do produto.
TEMPO DE DISSOLUO

Ps
Quando especificado na monografia utiliza-se como agitador haste de ao inoxidvel, contendo uma p em sua extremidade, sendo que a haste e

Quando um nico tempo for especificado na monografia do produto, o mesmo representa o tempo mximo dentro do qual deve ser dissolvida a quantidade mnima, em porcentagem, de princpio ativo estabelecida na mesma. No obstante, se esta quantidade for obtida em tempo menor que o especificado, o teste pode ser dado por terminado ao final deste tempo. Quando mais de um te~po for especificado na m~ografia.

Nfvel do meio de dissolu'o

Local aproximado coleta da amostra

de

I I I I
t

42,Omm

1~ 4,O1,Omm ~ 74,Oa75,Omm ~

T
JU

FiI. 1 Ps pua lIIitaio do meio de diuduio. A tolerncia em excentricidade do lIIi1lldor ao de rotalo (E.R.) ele 0,1 mm, medindo . nu duu extlemiclades indicadu pela letra "X".

em torno do eixo

Furo de ventilao Dimetro 2.0 mm

Local aproximado de coleta da amostra

Mola de reteno da cesta com trs presilhas eqidistantes

T
20,2 1,0 mm

_______

Dimetro externo da cesta 22,2 1,0 mm

Material da tela: ao inox. mesh 40. dimetro 0.254 mm. com as junes soldadas.

-,
J~

FiI. 2 Celta pua agitalo do meio ele dissoluio. A tolerncia em excentricidade do agitador ao Jirar em tomo do eixo ele rotalo (E.R.) de 0,2 mm, medindo-le na base da cesta montada.

devem ser tomadas alquotas ao fmal de cada tempo indicado. PROCEDIMENTO Montar e calibrar a aparelliagem conforme especificaes do fabricante, a fim de reduzir ao mnimo fatores que alterem significantemente a dinmica do sistema (excentricidade, vibrao etc.). Adicionar o volume medido do Meio de Dissoluoespecificado na monografia do produto, convenientemente desaerado, ao recipiente da aparelliagem de dissoluo. Manter a temperatura do meio a 37C 0,5 c, retirando-se o termmetro antes de iniciar a agitao. Caso se usem as ps como dispositivo de agitao, colocar a amostra (comprimido ou cpsula) no recipiente de dissoluo. Caso se use a cesta, colocar a amostra dentro da cesta. Em ambos os casos, retirar cuida-

dosamente, quando presentes, as bolhas de ar formadas na superfcie das amostras, ao entrarem em contato com o meio de dissoluo. Caso no seja possvel retirar asbollias nos primeiros minutos do teste, desprezar o resultado se este diferir significativamente da mdia dos demais resultados, realizando novo teste. Imediatamente, dar incio agitao, conforme velocidade pr-fixada. Em intervalos de tempo especificados na monografia do produto, retirar da zona mdia, entre a superfcie do meio de dissoluo e a parte superior do cesto ou ps, amostra para anlise (veja Figs. I e 2). A menos que especificado na monografia do produto, reponha o volume da amostra retirado com lquido de dissoluo. Ao final de cada tempo especificado, colocar alquotas do meio de dissoluo no local correto de coleta de amostra (ver Figs. 1 e 2). Aps filtrao e diluio (caso necessrio) da alquota, a anlise do medica-

mento efetuada mediante a tcnica de deteco indicada na monografia do produto. Repetir o teste com doses unitrias adicionais, conforme necessrio,considerando os critrios de aceitao. Caso o material da cpsula interfira na anlise, testar a cpsula vazia, isenta de traos de seu contedo, no meSmovolume de meio de dissoluo especificado, e efetuar a anlise conforme as exigncias descritas na monografia do produto.
N9 Amostras Testadas

Considerar as possveis interferncias nos clculos dos resultados e efetuar as correes necessrias. Fatores de correo acima de 25% do valor declarado no rtulo invalidam o teste. CWT
~.

Nota:

O~ACEITAAO

A men~ q~ a monografia do produto especifique diver me~te, a amostra ser satisfatria quando os re tados preencherem s seguintes exigncias:

Cada unidade apresenta

resultados maiores ou iguais

a T- + 5%t
Mdia de 12 unidades (EI + E2) igualou maior do que T e nenhuma unidade apresenta resultados inferiores a T - 15% t Mdia de 24 unidades (E 1 + E2 + E31 igualou maior do que T e no mais que 2 unidades apresentam resultados inferiores a T - 15%.

O termo T (To;,ou Trl POde ser expresso por ume das seguintes maneiras, conforme especificado nas monografias: a) Como teor real das unidades do produto, (T = T.1, - determinado pera cada amostra - e que estabelea condies assegurando que esta foi completamente dissolvida. por exemplo. aps a conclusio da prova elevar a velocidade de rotao a pelo menos 150 rpm, at que nio seja detectado aumento no teor da amostra dissolvida, em quantidada superior a dois por canto, observado em perCodos nia menores que 10 minutos. bl Como teor rotulado (T = Trl, quando este se encontra dentro dos limites especificados na monografia. Os valores 5% e 15% representam porcentagens de T. ou Tr conforme o caso.

Estgio E1

Num primeiro estgio (E1) so testadas seis unidades. Se cada unidade individualmente apresentar resultado igual ou maior do que T + 5%, o produto ser aprovado, no sendo necessrio Estgio E3 efetuar o segundo. Caso o critrio para o segundo estgio ainda nlo for satisfat6rio, repete-se o teste com mais 12 Estgio E2 unidades. Se a mdia das 24 unidades testadas Caso o critrio para o primeiro estgio nlo for (E 1 + E2 + E3) for maior ou igual a T e se no atendido, repete-se o teste com mais seis compri- mximo duas unidades apresentarem resultados midos (E2). Se a mdia das doze unidades testadas inferiores a T -15%, o produto aprovado. Se a (E 1 + E2) for maior ou igual a T e se nenhuma das amostra ainda nlo satisflZera este terceiro critrio, unidades testadas apresentar resultados inferiores a o produto reprovado.

T-15%, o resultado do teste ser considerado satisfat6rio.

V.2. MTODOS FSICOS E FSICO-QUMICOS

V.2.1. DETERMINAO DA MASSA

Para se efetuar a medifo da massa, as balanas devem apresentar capacidade e sensibilidade de acordo com o grau de precisfo requerido. Tratando-se de atividades que exijam pesagens ex~tas, na determinafo de massas iguais ou maIOres que 50 mg, utilizar balana analtica de 100-200 g de capacidade e 0,1 rog de sensibilidade e para quantidades inferiores a 50 rog, microbalana analtica de 20 g de capacidade e 0,0 I mg de sensibilidade.

Localizao da balana

APARELHAGEM

A balana analtica deve assentar-se nivelada sobre mesa ou prateleira firme e pesada, protegida por amortecedores de choque, como esteiras de cortia ou lminas de borracha, ou ainda sobre bancada de concreto, apoiada a pilares que estejam fixos no chllo ou conectados aos elementos da construo do prdio a fim de impedir vibraes. Deve estar em local isolado, preferencialmente separado do laboratrio, isento de umidade e do ataque de gases e vapores cidos, distncia de fontes de calor (luz solar direta, fornos, estufas, muflas etc.) e de correntes de ar.
Conservao e limpeza

Os pratos e demais partes da balana, inclusive ~ua caixa de proteo, devem permanecer limpos, lsentos de p e substncias acidentalmente cadas no prato da balana ou no piso da caixa. Tais materiais devem ser removidos imediatamente. Os corpos a serem pesados no devem ser colocados diretamente sobre os pratos. Para tanto, utilizam-se papis ou recipientes adequados como bqueres, vidros de relgios, cadinhos, cpsulas de porcelana e pesa-mtros com ou sem tampa. As partes mveis da balana e os pesos no - Armrio ou caixa de proteo, com abertudevem ser tocados com as mos. Usa-se, para este ras apropriadas para permitir operaes em fim, pina apropriada, que deve ser guardada na seu interior e excluir correntes de ar' - Base de material pesado e resiste~te (mr- caixa de pesos. Agentes dessecantes, tais como slica-gel ou more ou metal, por exemplo); cloreto de clcio, podem ser colocados no interior - Indicador de nvel (gravirntrico ou hidruda caixa de protefo, para manuteno de atmoslico) e dispositivo que possibilite seu nivefera relativamente seca. lamento; Quando a balana no estiver em uso, suas - Sistema amortecedor (magntico, pneumpartes devero permanecer fechadas e o travesso tico ou hidrulico) para restabelecer prontaelevado. mente o equihbrio; A sensibilidade da balana deve ser periodi- Dispositivo para deposio ou remoo de camente inspecionada por tcnico habilitado. carga, bem como sistema que possibilite a leitura da mesma (por intermdio de mostraUtilizao da balana dores e/ou projefo ptica de escala etc.) O material a ser pesado deve estar em equillbrio quando se tratar de balana de prato nico. trmico com o ar do interior da caixa de proteo Devem, tambm, suportar sua carga total sem da balana a fim de evitar erros devidos s corrensofrer tenses inadequadas que possam compro- tes de conveclIo,alm da condensalo da umidade meter sua sensibilidade em pesagens sucessivas sobre os corpos frios. nestas condies. A balana analtica de um s A balana deve estar nivelada na ocasio de seu prato a que melhor se adapta a estas exigncias. uso. A posio de equilbrio com ou sem carga deve ser conferida vrias vezes com 1/10 da carga A balana nlo deve ser sobrecarregada.

.A~ b~anas analticas podem ser de dois tipos pnnClpalS: de braos iguais (dois pratos) ou de prato nico. Ambas necessitam de jogo de massas calibradas ou devem possuir dispositivo adequado que possibilite a verificao da carga aplicada (por exemplo: microbalanas que utilizam medifo magntica), desde que sejam calibradas periodicamente por meio de massas de referncia aferidas. As balanas analticas devem apresentar as seguintes caractersticas:

total e com a carga total. A diferena de equilbrio encontrada em duas determinaes sucessivas, feitas com pesos iguais,nlo deve exceder a 0,11lJ8, para balanas analticas e 0,01 mg, para microanalticas. Tanto os pesos quanto o material a ser pesado

devem ser depositados no centro do prato. Durante as operaes de pesagem, o travesslo e o suporte devem estar elevados e as portas da caixa de protello fechadas. A balana deve ser travada antes de cada opera'o.

V.2.2. DETERMINAO DA TEMPERATURA E FAIXA DE FUSO

Temperatura ou ponto de fuso de uma substncia a temperatura corrigida na qual esta se encontra completamente fundida. Faixa de fuso de uma substncia aquela compreendida entre a temperatura corrigida na qual a substncia comea a fluidificar-se ou a formar gotculas na parede do tubo capilar e a temperatura corrigida na qual est completamente fundida, o que evidenciado pelo desaparecimento da fase slida. Existem, basicamente, trs mtodos para determinao da temperatura e da faixa de fuso.

o agitador deve misturar o lquido rapidamente, mantendo homognea a temperatura do meio. termmetro, calibrado at sua marca de imerso, deve abranger uma faixa de -10 a 360 C, com divises de I o C e colocado a 2 em do fundo do bquer. capilar de vidro borossilicato deve ser fechado em uma das extremidades e ter aproximadamente 8 cm de comprimento, 0,9 a 1,1 mm de dimetro interno e paredes com 0,10 a 0,18 mm de espessura. Para observar o tubo capilar deve-se empregar lente de aumento. Como fonte de calor, utilizar bico de gs ou chapa eltrica.

APARELHAGEM

PROCEDIMENTO

Consiste do aparelho apresentado na Figura.

Nvel de

imerso

Pulverizar a substncia em anlise e dessecar em estufa a vcuo sobre slica-gel, pentxido de fsforo ou outro agente dessecante durante 24 horas. Introduzir poro do p no tubo capilar seco e compact-Io, batendo o capilar sobre superfcie dura de modo a formar coluna de aproximadamente 4 mm de altura. Aquecer o banho rapidamente, sob agitao constante. Quando a temperatura atingir 10 c abaixo da pressuposta faixa de fuso, regular a velocidade de aumento da temperatura para 1 c por minuto. Quando o banho estiver 5C abaixo da faixa de fuso, introduzir O capilar no banho, de forma que sua parte inferior esteja bem prxima do meio do bulbo do termmetro. As temperaturas obtidas so corrigidas mediante adaptao de termmetro auxiliar ao dispositivo anterior, de forma que seu bulbo encoste no termmetro do banho, na zona mdia da coluna emergente de mercrio, quando a substncia funde, lendo-se nesta altura a temperatura t marcada no termmetro auxiliar. a clculo da corre'o a ser adicionada a cada uma das temperaturas, que defmem o ponto de fuso, efetuado atravs da expresso 0,00015 N(T-t) em que nmero de graus correspondentes coluna emergente, temperatura lida no termmetro padro, temperatura lida no termmetro auxiliar. DO BWCO METLICO

Aparelho para determinao do ponto de fusio pelo mtodo do capilar. A, termmetro; B, tubo capilar; C, bquer; D, agitador.

N T t

= = =

o bquer deve ter capacidade de 150 m1 e conter lquido apropriado para o banho de imerso de acordo com' a temperatura desejada. Esses lquidos podem ser: parafina lquida de alto ponto de ebulio, silicona fluida de alto ponto de ebulio, cido sulfrico concentrado, etilenoglicol e gua.

~TODO

AQUECIDO
APARELHAGEM

Consiste de bloco metlico de elevada condutividade trmica, resistente s substncias sob

anlise e de superfcie plana e polida, como bronze, ao inoxidvel e sirnllares. O bloco deve conter cavidade cilndrica interna, paralela sua superfcie superior e a cerca de 3 mm desta, com dimensOes adequadas para acomodar termmetro calibrado. O bloco deve ser uniformemente aquecido atravs de resistncia eltrica ou chama microajustve1. O aparelho deve ser calibrado constantemente com substncias apropriadas e de comprovado grau de pureza.
PROCEDIMENTO

M'TOOO DO CAPILAR ABERTO

Este mtodo empregado para determinao do ponto de fudo de substncias graxas de consis tncia pastosa.
APARELHAGEM

Devese empregar aparelho semelhante ao descrito no Mtodo do Capilar, COOlas seguintes modificaes: o banho de aquecimento deve ser o termmetro deve ser graduado abrangendo faixa de -10 a 100 c - o tubo capilar, semelhante quele no Mtodo do Capilar, deve ser lItlbas as extremidades.
PROCEDIMENTO

Aquecer o bloco rapidamente at temperatura de 10C abaixo do ponto de fuso previsto e, ento, ajustar o aqueciment~ para incrementos de temperatura da ordem de 1 C por minuto. A intervalos regulares, colocar algwnas part. culas da amostra, previamente pulverizada e seca, sobre a superfcie metlica, na regio imediatamente acima do bulbo do term~etro. limpar a superfcie aps cada ensaio. Anotar a temperatura t) na qual a substncia funde imediatamente aps o contacto com o metal. Interromper o aquecimento. Durante o resfriamento, colocar novamente algumas partculas da amostra, a intervalos regu lares, no mesmo local do bloco, limpando a superfcie aps cada ensaio. Anotar a temperatura t2 na qual a substncia solidifica instantaneamente ao contacto com o metal. O ponto de fuso instantneo da amostra calculado mediante a seguinte expresso:

a gua; em 0,2 c, e empregado aberto em

Fundir a substncia rapidamente temperatura nlo superior a 10 c acima do ponto de fuso completo. Agitar e, se .necessrio , mtrar atravs de filtro de papel seco. Inserir a substncia fundida na extremidade do capilar at formar coluna de 8 a 12 mm de altura. Esfriar o capilar contendo a amostra temperatura de IS c, mantendo-a, no mnimo, por 16 horas. Prender o tubo capilar no termmetro de forma tal que a coluna de substncia se localize na parte mdia do bulbo de mercrio. Colocar o sistema em banho de gua aiS c, profundidade de 3 cm da superfcie da gua. Aquecer com agita'o constante para que a temperatura aumente 2C por minuto. . A temperatura na qual a substnCia comea a ascender no capilar o ponto de fuso.

V.2.3. DETERMINAO DA TEMPERATURA DE EBULIO E FAIXA DE DESTILAO

Temperatura ou ponto de ebuliio de mn lquido a temperatura corrigida na qual o lquido ferve sob presso de vapor de 100 kPa (760 mm deH8~ Faixa de destilaio o intervalo de temperatura corrigida para a presso de 100 kPa (760 mm- de Hg), dentro do qual o lquido, ou fralo especfica do lquido, destila inteiramente.

PROCEDIMENTO

APAREUlAGEM

Usar aparelho como o sugerido na Figura, em que A ballo de destilalo com capacidade de 100 mI, conectado a condensador B, na extremidade do qual se introduz o adaptador C, ligado a uma proveta de 50 mI graduada em 0,2 mI. O termmetro deve ser adaptado ao ballo de forma que o bulbo de mercrio fique no centro do gargalo e a cerca de 5 mm abaixo do nvel do tubo lateral. O aquecimento (a gs, eltrico ou atravs de banho) deve ser selecionado de acordo com a natureza da substncia.

Introduzir no ballo cerca de 50 mI da amostra de modo a nlo penetrar no tubo lateral. Adicionar prolas de vidro ou outro material poroso adequado. Adaptar o termmetro no ballo e aquece( lenta mente, protegendo o sistema contra corrente de ar. Registrar a temperatura na qual forem coletadas as cinco primeiras gotas do destilado. Ajustar o aquecimento para obter o destilado vazio de 3 a 4 mI por minuto. Anotar a temperatura quando t040 o lquido ou fralo prescrita estiverem totalmente destilados. Manter o destilado mesma temperatura na qual o lquido foi originalmente medido e anotar o volume do destilado. _ Quando o lquido puro, a maior parte destila temferatura constante (dentro de uma faixa de 0,5 C), que o ponto de ebuliio do lq~do. Lquidos que destilam abaixo de 80C devem ser resfriados a 1O.15C antes de se medir o volume e a proveta que recebe o destilado deve estar mergulhada em baflho de gelo. Quando o ponto de ebulio est acima de

Aparelho pua determiDafo da faixa de deatDalo (dimenl5e. em mm). A, balio de de.tilaio; aclaptldor.

B, condenJl4or; C,

1401 SOC, pode. substituir o condensador de gua por condensador de ar. Corrigir as temperaturas observadas de acordo com o tipo de termmetro utilizado e com a diferena na press'obaromtrica normal 100 kPa (760 mm de Hg), considerando 0,1 DCpara cada 0,36 kPa (2,7 mm de Hg) de variao, adicionando

ao resultado se a presslo real for mais baixa, ou subtraindo se for maior que 100 kPa (760 mm
de Hg).

Comparar os valores obtidos do ponto de ebuJillo, faixa de destilao e volume do desti lado com as respectivas especificaes das monografias.

V.2.4. DETERMINAO DA TEMPERATURA DE CONGELAMENTO

Temperatura ou ponto de congelamento de lquido ou de slido fundido a mais alta temperatura na qual ele se solidifica. Para substncias puras que fundem sem decomposio, o ponto de congelamento do lquido igual a seu ponto de fuso.
APARELHAGEM

O aparelho da Figura consiste em tubo de ensaio de aproximadamente 25 mm de dimetro interno e 150 mm de comprimento, suspenso por intermdio de rolha adequada dentro de segundo tubo maior, de 40 mm de dimetro interno e 140 mm de comprimento, formando, assim, camisa de ar que evita mudana brusca de temperatura. O sistema acima fixo por garra no centro de bquer com capacidade de 1000 mI, contendo gua ou soluo refrigerante. O tubo interior vedado com rolha de modo a conter haste agitadora e termmetro com divises de 0,2 oCoO bulbo do termmetro deve estar fixo a aproximadamente 15 mm do fundo do balo. O agitador basto de vidro adaptado com anel em sua extremidade inferior como indicado na Figura.
PROCEDIMENTO

L
15

--.l..
10

Colocar a amostra no tubo interno em quantidade suficiente para cobrir o bulbo do term metro. Esfriar o tubo interior, mantido na camisa de ar, em mistura refrigerante adequada aS c abaixo do ponto de congelamento esperado. Quando a amostra estiver resfriada a cerca de 5 c acima do ponto de congelamento, mover verticalmente o agitador, entre o topo e o fundo, razo de aproximadamente 20 ciclos por minuto e registrar a temperatura do termmetro de 30 em 30 segundos. Interromper a agitao quando a

Aparelho pua determinaio

(dimeJlJel em mm).

do ponto de conaelamento

temperatura permanecer constante ou aumentar, antes de permanecer constante, o que acontece enquanto ocorre a solidficao. Continuar registrando a temperatura, no mnimo, at 3 minutos aps a temperatura comear a cair novamente. A maior temperatura observada durante a solidificao da substncia corresponde ao seu ponto de congelamento.

V.2.5. DETERMINAO DA DENSIDADE DE MASSA E DENSIDADE RELATIVA

Densidade de massa (P) de uma substncia a razlo de sua massa por seu volume a 20 oCo A densidade de massa da substncia calculada a partir de sua densidade relativa pela frmula:

hidrosttica ou densmetro. O uso desses dois ltimos condicionado ao tipo de aparelhagem disponvel.
Mtodo do picndmetro

Utilizar picnOmetro limpo e seco, com capacidade de, no mnimo, 5 mI, que tenha sido previaexpressa em g/mI ou kg/1. Densidade relativa de uma substtncia a razlo mente calibrado. A calibralo consiste na deterrnide sua massa, pela massa de igual volume de gua, nalo da massa do picnOmetro vazio e da massa de seu contedo com gua, recentemente destilada ambas a 20C (d.'>, ou por massa de igual volume e fervida, a 20 oCo deguaa4C(d .): Colocar a amostra no picnOmetro. Ajustar a temperatura para 20C, remover excesso d substincia, se necessrio, e pesar. Obter o peso da amostra atravs da diferena de massa do plenO. metro cheio e vazio. ProClldimento O quociente entre a massa da amostra lquida e A densidade relativa da substtncia pode ser a massa da gua, ambas a 20 c, a densidade determinada atravs de picnOmetro, balana relativa (d:).

V.2.6. DETERMINAO DO NDICE DE REFRAO

Indice de refrao (n) de uma substncia a relao entre a velocidade da luz no vcuo e sua velocidade no interior da substncia. Quando um raio de luz monocromtica passa de um meio transparente para outro de densidade ptica diferente, refletido ou refratado, exceto quando incide perpendicularmente superfcie de contacto entre os meios. A relao entre o seno do ngulo de incidncia, sen i, e o seno do ngulo de refrao, sen r, constante, no variando com o ngulo de incidncia. Essa relao equivale ao ndice de refrao. Pode-se, pois, definir o ndice de refrao como a relao entre o seno do ngulo de incidncia e o seno do ngulo de refrao, isto , n = sen i/sen r. Para fms prticos medese a refrao com referncia ao ar e substncia e no com referncia ao vcuo e substncia, porquanto as diferenas entre os valores obtidos com ambas as medidas no so significativas para fms farma copicos. Em substncias isotrpicas, o ndice de refrao caracterstica constante em determinado comprimento de onda, temperatura e presso. Por esta razo, este ndice til no s para identificar a substncia, mas tambm para detectar a presena de impurezas. E empregado para caracterizar principalmente gorduras, leos graxos, ceras,

acares e solventes orgnicos, bem como para identificar certos frmacos. E igualmente usado para determinar a pureza de leos volteis. Geralmente determina-se o ndice de refrao em funo da luz de sdio no comprimento de onda 589,3 nm (raia D) e temperatura de 20 0,5e. Da expressar-se o valor do ndice de refrao como n ~.

Refrat6metros

Os refratmetros utilizados normalmente em anlise farmacopica usam luz branca, mas so calibrados de modo a dar o ndice de refrao em termos de comprimento de onda 589,3 nrn, correspondente ao da luz da raia D de s6dio. Visto que o ndice de refrao varia significativamente com a temperatura, durante a leitura 0 deve-se ajustar e manter a temperatura a 20 Quando no for possvel, deve-se corrigir o valor obtido consultando a tabela de correo. A calibrao do aparelho faz-se com gua destilada, cujo ndice de refrao 1,3330 a 20 e e 1,3325 a 25 e. Antes de oper-Io, convm verificar se apresenta erro inicial, que dever ser descontado da leitura.

e.

V.2.6. DETERMINAO 00 NDICE DE REFRAO

Indice de refrao (n) de uma substncia a relao entre a velocidade da luz no vcuo e sua velocidade no interior da substncia. Quando um raio de luz monocromtica passa de um meio transparente para outro de densidade ptica diferente, refletido ou refratado, exceto quando incide perpendicularmente superfcie de contacto entre os meios. A relao entre o seno do ngulo de incidncia, sen i, e o seno do ngulo de refrao, sen T, constante, no variando com o ngulo de incidncia. Essa relao equivale ao ndice de refrallo. Pode-se, pois, definir o ndice de refrao como a relao entre o seno do ngulo de incidncia e o seno do ngulo de refrao, isto , n = sen i/sen r. Para fms prticos mede-se a refra'o com referncia ao ar e substncia e no com referncia ao vcuo e substncia, porquanto as diferenas entre os valores obtidos com ambas as medidas no so significativas para fms farma copicos. Em substncias isotrpicas, o ndice de refrao caracterstica constante em determinado comprimento de onda, temperatura e presso. Por esta razo, este ndice til no s para identificar a substncia, mas tambm para detectar a presena de impurezas. empregado para caracterizar principalmente gorduras, leos graxos, ceras,

acares e solventes orgnicos, bem como para identificar certos frmacos. igualmente usado para determinar a pureza de leos volteis. Geralmente determina-se o ndice de refrao em funo da luz de sdio no comprimento de onda 589,3 nm (raia D) e temperatura de 20 0,5e. Da expressar-se o valor do ndice de refrao como n ~.

:e

Refrat~metros Os refratmetros utilizados normalmente em anlise farmacopica usam luz branca, mas so calibrados de modo a dar o ndice de refrao em termos de comprimento de onda 589,3 nrn, correspondente ao da luz da raia D de sdio. Visto que o ndice de refrao varia significativamente com a temperatura, durante a leitura deve-se ajustar e manter a temperatura a 20C. Quando no for possvel, deve-se corrigir o valor obtido consultando a tabela de correo. A calibrao do aparelho faz-se com gua destilada, cujo ndice de refrao 1,3330 a 20C e 1,3325 a 25C. Antes de oper-Io, convm verificar se apresenta erro inicial, que dever ser descontado da leitura.

:e

Viscosidade expresso da resistncia de lquidos ao escoamento, ou seja, ao deslocamento de parte de suas molculas sobre molculas vizi nhas. A propriedade oposta viscosidade denominada fluidez. A unidade dinmica (sistema CGS) de viscosidade o poise .l!, por definio, a fora, em dinas, necessria ao deslocamento de camada plana de lquido, com rea de I cm2, sobre outra camada idntica, paralela e distanciada da primeira em I cm, velocidade de 1 cm/s. O poise , contudo, demasiado grande para a maioria das aplicaes, recorrendo-se da ao centipoise, cP, correspon dente a um centsimo de poise. s vezes conveniente utilizar-se a viscosidade cinemtica, que consiste na relao entre a viscosidade dinmica e a densidade. Neste caso, no sistema CGS, a unidade o stoke. A exemplo do que ocorre com viscosidade absoluta (medida em poise), mais conveniente exprimir-se viscosidade cinemtica em centistokes (100 centistokes = I stoke) para caracterizar a maioria dos lquidos usuais em Farmcia e Qumica. A determinao da viscosidade - ensaio para o qual a especiflcao da temperatura imprescin dvel devido sua influncia decisiva sobre o resultado (em geral, a viscosidade inversamente proporcional temperatura) - efetuada com base em propriedades diversas. O mtodo mais freqente baseia-se no tempo de escoamento de lquidos atravs de capilares (viscosmetros de Ostwald, Ubbelohde, Baum e Engler) devido simplicidade e ao preo acessvel dos aparelhos. Viscosmetros que tm como princpio de funcionamento a determinaO do tempo de queda livre de esferas atravs de tubos contendo o lquido sob ensaio (Hoppler) ou a velocidade de rotao de eixos metlicos imersos no lquido (Brookfield, entre outros) so igualmente empregados. Embora seja possvel a determinao de visco sidade absoluta, com base nas dimenses exatas do viscosmetro empregado, mais freqente a prtica da calibrao prvia do aparelho com lquido de viscosidade conhecida, permitindo, por comparao, avaliao relativa da viscosidade do lquido sob ensaio. Assim, empregando.se visco smetro de Ostwald ou similar, determinam-se os tempos de escoamento t1 e t2 de volumes iguais dos lquidos de referncia e amostra, de densidade d1 e d2, respectivamente. Sendo 112 a visco sidade do lquido de referncia, a viscosidade absoluta (cP) do lquido amostra pode ser calculada pela equao:
111 "2 _

O quociente 1I2/t2 d2 possui valor constante, k, para cada lquido de referncia, no mesmo viscosmetro. Assim, conhecido este valor (geralmente encontrado no manual do aparelho), simplifica-se a equao:
11

ktd

O valor de k pode tambm ser determinado experimentalmente, medindose o tempo de escoamento de lquido padro, puro, e aplicandose a equao: k

lI/td

Empregando-se gua como padro - usual para determinao de lquidos de baixa viscosidade adotamse os valores de viscosidade abaixo, con forme a temperatura do ensaio: '"

11 (cP)

1,140 1,110 1,082 1,055 1,029 1,004 0,980 0,957 0,936 0,915 0,895

Viscosfmetro

de Ostwald

-;;- - ~d
2

t1 d1
2

' ou melhor,

111

t1 d1 1127'""""]"'""" U2

O viscosmetro de Ostwald o mais simples e popular dentre os aparelhos disponveis. Consta de tubo dobrado em U (Figura), com um dos ramos munido de ampola terminada em capilar. H dois traos de referncia, um imediatamente acima da ampola e o outro sobre o capilar. O outro ramo suficientemente largo para permitir seu enchimento com o lquido sob ensaio at a altura de cerca de 5 mm abaixo do trao de ~ferncia inferior. Para possibilitar maior gama de viscosi dades passveis de determinao, empregamse colees de viscosmetros, com diferentes calibres. O aparelho indicado para determinada avaliao o que permite escoamento da amostra em perodo nlfo inferior a 60 segundos. Para a determinao propriamente dita, transferir para o viscosmetro escoDdo, lavado e seco, quantidade suficiente de lquido para atingir nvel da ordem de 5 mm abaixo do trao de

referncia inferior. Fixar o aparelho em termostato (20 C) e, aps aguardar que o lquido no interior do aparelho adquira a temperatura controlada, aspirar o lquido pelo tubo capilar/ampola (por meio de tubo de borracha fixado na extremidade) at que o nvel do lquido exceda ligeiramente o trao de referncia superior. Soltar ento o tubo e, no instante em que o rnenisco atingir o trao de referncia superior, acionar cronmetro de preciso, retravando-o quando o menisco passar pelo trao de referncia inferior. Registrar o tempo decorrido e repetir o ensaio diversas vezes com intervalos de alguns minutos at que tempos sucessivos Dlo difiram em mais de 0,5 segundos. Determinar a densidade do lquido sob ensaio (V.2.S). comEdo o valor pata a densidade relativa I1gua,a20 C, e calcular a viscosidadedo lquido amostra pela frmula indicada, empregando a constante k fomecida ou determinada por procedimento similar.

V.2.8. DETERMINAO DO PODER ROTATRIO E 00 PODER ROTATRIO ESPECIFICO

Muitas substncias orgnicas tm a propriedade de desviar o plano da luz polarizada quando esta passa atravs delas (no caso de serem lquidas) ou de solues que as contm (quando se trata de slidas). Estas substncias so chamadas opticamente ativas e podem ser dextrogiras ou levogiras. O carter dextrogiro indicado pelo sinal (+) e o levo giro pelo sinal ( - ). A atividade 6ptica funo da estrutura qumica da substncia e de sua concentrao. A determi nao do poder rotatrio serve para estabelecer tanto a identidade quanto a pureza da substncia. Alm disso, s vezes, a atividade ptica presta-se para indicar o valor teraputico de uma substncia. O poder rotatrio varia com a temperatura, o comprimento de onda (quanto mais curto, maior o ngulo de desvio), a natureza da substncia e sua concentrao. Se a soluo contiver duas substncias opticamente ativas e estas n'o reagirem entre si, o ngulo de desvio ser a soma algbrica dos ngulos de desvio de ambas. O poder rotatrio medido em rolarmetros, cuja precislfo varia de 0,01 a 0,05 de rotalfo angular. Os mais usados trabalham com a luz de sdio ou lmpada de vapor de mercrio. Determina-se o ponto zero do polarmetro com o tubo vazio e fechado para as substncias lquidas ou cheio com o solvente para as solues de substncias slidas.

Poder rotatrio

especlfico

O poder rotatrio

especfico,

10:1~, de uma

substncia lquida o ngulo de rotao, medido no comprimento de onda da raia D de sdio, temperatura de 20 De 0,5 De, calculado em fun'o de uma camada de 1 dm de espessura e dividido pela densidade relativa a 20C. dado pela expresso

10:120 = ~ D Id
em que I comprimento, em dm, do tubo do polarmetro, d densidade relativa da substncia. O poder rotatrio especfico, 10:1~, de uma

substncia slida o ngulo de rotao, medido no comprimento de onda da raia 1) de s6dio, =S89,3 nm, temperatura de 20 De 0,5 c, calculado em funo de uma camada de 1 dm de espessura de uma soluo que contm 1 g da substncia por ml. dado pela expresso

10:1~ = l00a
Ic
em que I comprimento, em dm, do tubo do polarmetro, c = concentrao da substncia expressa em porcentagem p/V. s vezes a medida do poder rotatrio especfico realizada em outras condies especificadas nas monografias. Em qualquer caso, porm, devem ser feitas pelo menos cinco medidas: o valor procurado ser a mdia dos valores obtidos. Outrossim, a menos que se indique diferentemente, o poder rotatrio e o poder rotat6rio especfico referem-se substncia seca, anidra ou isenta de solvente em todas as monografias em que se fomecem os valores da umidade, perda por dessecao ou contedo de solvente.

Poder rotatrio

Poder rotatrio de uma substncia o ngulo que a luz polarizada forma com o plano de polarizao ao atravessar a substncia, caso seja lquida, ou soluo, se for slida. Medese o poder rota trio (o:) em uma camada de espessura apropriada, temperatura indicada e no comprimento de onda especificado na monografia. Geralmente, usase camada de 1 dm de espessura, temperatura de 20 DC 0,5 DC e comprimento de onda da raia D de sdio (589,3 nm).

V.2.9. DETERMINAO

DA PERDA POR DESSECAO

Este ensaio visa a determinar a quantidade de substncia voltil de qualquer natureza eliminada nas condies especificadas na monografia. No caso de ser a gua a nica substncia voltil, basta determinar seu teor segundo um dos mtodos descritos sob o ttulo "Determinao de gua" (V.2.20.). Para os demais casos. o procedimento adotado o descrito abaixo. sendo a oplo de mtodo a ser adotado especificada nas monografias.
PROCEDIMENTO

Repetir a operalo at peso constante. Observalo: No caso de a substncia fundir a uma temperatura mais baixa que a especificada para a determinalo. manter o pesa-fJ1tro com seu contedo por I a 2 horas temperatura de 5 a 10C abaixo do ponto de fuso, antes de secla temperatura especificada. Quando a substncia se decompe temperatura de 105C, ela deve ser dessecada a uma temperatura mais baixa. Em ambos os casos, pode-se realizar a secagem presso reduzida, em dessecador.

Reduzir a substincia a p fmo caso se apresente na forma de cristais volumosos. Pesar exatamente cerca de 1 a 2 g e transferir para pesa-fJ1trochato previamente dessecado durante 30 minutos nas mesmas condies a serem empregadas na determinalo. Pesar o pesa-fJ1tro,tampado. contendo a amostra. Agitar o pesa-fJ1trobrandamente para distribuir a amostra da maneira mais uniforme possvel, a uma profundidade ideal de 5 mm. Colocar o pesa-fJ1trona estufa. retirar a tampa. deixando-a tambm na estufa. Secar a amostra (geralmente aiOS C) e por um determinado prazo (geralmente 2 horas) especificado na monografia. Esfriar temperatura ambiente em desse cador. Pesar.

Clculo

A porcentagem de perda por dessecao dada pela equalo

Pa = peso da amostra, Pu = peso do pesa-fJ1tro contendo a amostra antes da dessecao, Ps = peso do pesa.fJ1tro contendo a amostra aps a dessecalo.

V.2.10. DETERMINAO DE CINZAS SULFATADAS

(RESDUO POR INCINERAO)

Cinzas sulfatadas compreendem o resduo no voltil incineralo na presena de cido sulfrico, conforme a tcnica especificada. Em geral, o ensaio visa a determinar o teor de constituintes ou impurezas inorgnicas contidos em substncias orgnicas. Tambm se destina determinao de componentes inorgnicos em misturas e da quantidade de impurezas contidas em substncias inorgnicas termolbeis. PROCEDIMENTO Pesar exatamente cerca de I g - ou a quantidade especificada na monografia - de substncia

pulverizada, transferir para cadinho (preferivelmente de platina) previamente calcinado, esfriado em dessecador e tarado, e juntar cerca de 2 ml de cido sulfrico SR. Aquecer brandamente sobre chapa quente at carbonizalo e incinerar cuidadosamente a cerca de 800 c at desaparecimento do carvo. Resfriar e juntar cerca de I ml de cido sulfrico SR para umedecer o resduo, aquecer sobre chapa quente e incinerar novamente. Acrescentar pequena quantidade de carbonato de amnio (neutralizalo do cido residual) e incinerar at peso constante. Calcular a porcentagem de cinzas sulfatadas em relao substncia sob ensaio.

grau de diviso ou a granulometria ue ps eXl'resso pela referncia abertura nominal da malha do tamis utilizado. Ao determinar a granulometria de p resultante de reduo de drogas vegetais, nenhuma poro da droga pode ser rejeitada durante o processo de reduo, moagem ou peneiramento, exceto nos casos em que tal procedimento seja indicado na respectiva monografia. Os tamises empregados so de ao inoxidvel, lato, crina ou seda, nll'o sendo permitido o revestimento dos fios. Na descrio dos ps so utilizados os termos abaixo:

P finlssimo

abertura nominal de malha de 180 IAm. aquele cujas partculas passam em sua totalidade pelo tamis com aber tura nominal de malha de 125 Jlffi.

A determinao da granulometria de ps resultantes de drogas vegetais e produtos qumicos pulverizados feita pelo processo descrito abaixo, com o auxlio de tamises, cujas caractersticas esto padronizadas na tabela anexa.

PROCEDIMENTO

P grosso

aquele cujas partculas passam em sua totalidade pelo tamis com abertura nominal de malha de 1,70 mm e, no mximo, 40% pelo tamis com abertura nominal de malha de 355 IAm. passam em sua totalidade pelo tamis com aber tura nominal de malha de 710 Jlffi e, no mximo, 40% pelo tamis com abertura nominal de nialha de 250 IAm. aquele cujas partculas passam em sua totalidade pelo tamis de aber. tura nominal de malha de 355 Jlffi e, no mximo, 40% pelo tamis com abertura nominal de malha de

P moderadamente grosso aquele cujas partculas

P semi-fino

180 Jlffi.
P fino

aquele cujas partculas passam em sua totalidade pelo tamis com

Para ps grossos, moderadamente grossos e semifmos utilizar amostras de 25 a 100 g de p. Colocar a amostra sobre o tamis de malha apropriada, provido de tampa e recipiente para a coleta do p. Agitar o tamis em movimentos horizontais rotativos e movimentos verticais por 20 minutos no mnimo, ou at que a operao esteja completa. Pesar cidadosamente o p recolhido e a frao remanescente sobre o tamis. Para ps finos e muito finos proceder como descrito acima, porm utilizando amostras nll'o superiores a 25 g. Agitar o tamis por 30 minutos, no mnimo, ou at que a operao esteja completa. No caso de ps oleosos ou ps tendentes a obstruir as aberturas do tarnis, a tela do mesmo deve ser escovada periodicamente. Pode-se determinar tambm a granulometria com o auxlio de tarnises operados por dispositivos mecnicos. Estes dispositivos reproduzem os movimentos horizontais e verticais da operao manual, atravs de ao mecnica uniforme. A operao mecnica deve ser executada de acordo com as instrues do fabricante do equipamento.

Ab.rtufII nomln.1 dam.lh.

Dllm.tro recomMrMdo de flQI

To/.rlnc" da .IrtUffI m4d1.

,4,...
pen.lfflm.ntrJ " (.proxlm.da) 55 53 51 48 46 44 43 41 37 36 38 36 38 36 37 35 36 34 36 35 36 34 35 34

N9do t.ml. (.proxlmkJ) 4 5 6 8 10 12 14 16 22 25 30 36 44 52 60 85 100 120 150 170 200 240 300 350

mm
4,00 3,35 2,80 2,00 1,70 1,40 1,18 1,00
",m

mm
1.40 1,25 1,12 0,90 0,80 0,71 0,63 0,56
Ilm

tmm
0,13 0,10 0,09 0,07 0,06 0,06 0,04 0,03
Ilm

710 600 500 425 355 300 250 180 150 125 106 90 75 63 53 45

450 400 315 280 224 200 160 125 100 90 71 63 50 45 36 32

25 21 18 15 13 15 13 11 9,4 8,1 7,4 6,6 6,1 5,3 4,8 4,8

V.2.12. COR DE LQUIDOS

A avalialo da cor de lquidos 6 executada por

comparao da soluo sob anlIse - preparada conforme instrues da monografia - e soluespadro de cor (SC). Tais solues encontram emprego como referncia para alguns frmacos e em testes de carbonizao com cido sulfrico especificados em diversas monografias. O processo comparativo, salvo especificao em contrrio, deve ser executado em tubos de ensaio de vidro transparente e fundo chato, com dimetro da ordem de 16 mm, do tipo empregado em ensaio-limite de impurezas. Os tubos devem ser os mais uniformes possveis. Para a avaliao, utilizar volumes de 10 ml tanto para a amostra quanto para o padro, assegurando altura aproximada de 50 mm para os lquidos nos tubos. Observar os tubos transversal mente contra fundo branco, sob luz difusa. E importante comparar as solues nas mesmas condies, inclusive de temperatura (25C). As solues-amostra so preparadas de modo a apresentarem colorao semelhante da soluo de referncia especificada.
P ADROES BSICOS

me de titulante consumido por determinaA'o em branco. Cada ml de tiossulfato de sdio 0,1 M SV equivale a 23,79 mg de CoCh 6H20. Ajustar o volume da soluo adicionando quantidade suficiente de mistura de cido clordrico e gua para obter solulro contendo exatamente 59,5 mg de CoCh 6H20 por ml de soluo.
Soluo base de sulfato cprico

As solues de referncia de cor (SC) so obtidas a partir de 3 solues bsicas, a serem preparadas e armazenadas em frascos hermticos. Destas - com base na Tabela anexa, contendo instrues de preparaio de 20 solues-padro de cor (SC) designadas com as letras do alfabeto, de A a T - preparar a soluo ou solues especificadas para a comparao. Transferir os volumes indicados (deixar a gua por ltimo) e homogeneizar diretamente nos tubos de comparao.
Soluo base de c/oreto cobaltoso

Preparar mistura de 25 ml de cido clordrico e 975 ml de gua. Dissolver 65 g de sulfato cprico (CUS04 . 5H20) em 900 ml desta mistura e completar o volume para 1000 mI com a mesma mistura. Transferir, com auxlio de pipeta, 10 ml desta solulro para frasco de iodo de 250 mI, juntar 40 ml de gua, 4 ml de cido actico glacial, 3 g de iodeto de potssio e 5 ml de cido clordrico. Titular o iodo liberado com tiossulfato de sdio 0,1 M SV, juntando 3 ml de amido SI como indicador. Corrigir o volume de titulante con sumido por determinao em branco. Cada mI de tiossulfato de sdio 0,1 M SV equivale a 24,97 mg de CUS04' 5H20. Ajustar o volume da soluo adicionando quantidade suficiente de mistura de cido clordrico e gua para obter soluo con tendo exatamente 62,4 mg de CUS04 . 5H20 por ml de soluo.
Soluo base de cloreto frrico

Preparar mistura de 25 ml de cido clordrico e 975 ml de gua. Dissolver 65 g de cloreto de cobalto(II) em aproximadamente 900 ml desta mistura e completar o volume para 1000 ml com a mesma. Transferir, com auxilio de pipeta, 5 ml desta soluo para frasco de iodo de 250 ml, juntar 5 ml de perxido de hidrognio SR e 15 mI de hidrxido de sdi05 M. Ferver durante 10 minutos, resfriar e adicionar 2 g de iodeto de potssio e 20 ml de cido sulfrico 0,26 M. Dissol ver com tiossulfato de sdio 0,1 M SV, juntando 3 ml de amido SI como indicador. Corrigir o volu

Preparar mistura de 25 ml de cido clordrico e 975 ml de gua. Dissolver cerca de 55 g de c1oreto frrico (FeCh' 6H2 O) em aproximada mente 900 ml desta mistura e completar o volume para 1000 ml com a mesma mistura. Transferir, com auxl1io de pipeta, 10 ml desta soluo para frasco de iodo de 250 ml, adicionar 15 ml de gua, 3 g de iodeto de potssio e 5 ml de cido clordrico. Deixar em repouso durante 15 minutos. Completar o volume da soluo para 100 ml com gua e titular o iodo liberado com tiossulfato de sdio 0,1 M SV, juntando 3 ml de amido SI como indicador. Corrigir o volume de titulante consumido por determinao em branco. Cada ml de tiossulfato de sdio 0,1 M SV equivale a 27,03 mg de FeCh . 6H2 O. Ajustar o volume da soluo adicio nando quantidade suficiente de mistura de cido clordrico e gua para obter soluo contendo exatamente 45,0 mg de FeCh' 6H20 por ml de soluo.

Partes de

se

Soluo lHIss dBclorsto co/NIltoso 0,1

Solu60 lHIse dBcloreto Mrrico 0,4

Solu6o bass de sulfato cprico

Ague

8 C
O E

F G
H I

J
K

L
M N

O P
Q R

S T

0,3 0,1 0,3 0,4 0,3 0,5 0,2 0,4 0,4 0,5 0,8 0,1 0,0 0,1 0,2 0,2 0,3 0,2 0,5

0,9 0,6 0,6 1,2 1,2 1,2 1,5 2,2 3,6 4,5 3,8 2,0 4,9 4,8 0,4 0,3 0,4 0,1 0,5

0,1 0,3 0,1 0,4 0,3 0,0 0,2 0,0 0,1 0,1 0,0 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,2 0,0 0,4

4,4 8,5 4,2 3,7 3,1 3,5 3,1 3,3 2,3 1,0 0,0 0,3 2,8 0,0 0,0 4,3 4,4 4,1 4,7 3,6

V.2.13. ESPECTROFOTOMETRIA

DE ABSORO ATMICA

Espectrofotometria de absoro atmica destina-se ao doseamento de quase todos os elementos qumicos, ~xceo de gases raros, halognios, oxignio, enxofre, nitrognio, fsforo e carbono. , pois, essencialmente mtodo de alta sensibilidade para o doseamento de tomos, ons ou complexos inicos de elementos metlicos. Compreende a medida da intensidade de luz absorvida em dado comprimento de onda pelos tomos na promoo eletrnica ao estado excitado, ao serem atomizados em uma chama. Se o processo de absoro efetuadoemchamasob condies controladas e reprodutveis, a absorvncia Oogaritmo do inverso da transmitncia) proporcional ao nmero de tomos do elemento dosado, permitindo o estabelecimento de ",tas de calibrao que, por sua vez, permitem a determinao de concentraes desconhecidas em funo da absorvncia observada.
Equipamento

pode ser eliminada por meio de modulao da fonte, o que significa empregar radiao cuja intensidade varia com determinada freqncia. Dessa forma, o detector recebe dois tipos de sinais: um sinal alternado, proveniente da fonte, e um contnuo, emitido pela chama. O sistema de deteco reconhece apenas o sinal alternado, ignorando o sinal contnuo, no modulado. Solventes O solvente ideal para a espectrofotometria de absoro atmica interfere o menos possvel nos processos de absoro e produz tomos neutros na chama. Se existir diferena significativa de tenso superficial ou viscosidade entre soluo amostra e solues de referncia, ocorrero variaes nas velocidades de aspirao e nebulizao e, em conseqncia, diferenas significativas nos sinais produzidos. A acidez das solues tambm influi sobre o processo de absoro. Da a importncia de os soIventes empregados no preparo da soluo-amostra e solues de referncia serem os mesmos ou, ao menos, os mais similares possveis com relao a estes aspectos, devendo tambm permitir o preparo de solues facilmente aspirveis pelo tubo de alimentao da chama. A presena de slidos nas solues pode provocar interferncias, razo pela qual recomenda-se manter o seu nvel abaixo de 2%, sempre que possvel.
OPERAO

O espectrofotmetro de absoro atmica consta de fonte emissora de luz, sistema de nebulizao-combusto e de sistema fotodetector. A fonte emissora de luz compreende lmpada, cujo elemento emissor idntico ao que se deseja dosar. Assim, para a anlise de amostra de zinco, por exemplo, emprega-se "lmpada de cato do oco" em que o cato do contm zinco. A aplicao de potencial aos eletrodos da lmpada excita os tomos de zinco do catodo e estes, ao reverterem ao estado fundamental, emitem radiao precisamente no comprimento de onda (linha espectral) do zinco. No sistema de nebulizao-combusto compreendendo atomizador e chama - o elemento sob anlise liberado no seu estado atmico ou elementar. A soluo contendo a amostra introduzida na chama, geralmente alimentada com mistura ar-hidrognio ou ar-acetileno, esta ltima permitindo temperaturas de chama da ordem de 2300 oCo Existem espectrofotmetros de absoro em que a chama substituda por fomo de alta temperatura. Tais equipamentos so mais eficientes na reduo da amostra ao estado atmico e, por conseguinte, mais sensveis. O sistema fotodetector, por sua vez, destina-se leitura e quantificao da radiao incidente. Compreende dispositivo 6ptico de disperso (monocromador ou filtro), capaz de isolar a luz no comprimento de onda da linha espectral do elemento sob anlise, e detector propriamente dito (fotomultiplicador) acoplado a instrumento de leitura digital ou analgico. A radiao interferente emitida pela chama

Para operar o espectrofotmetro de absoro atmica, recomenda-se obedincia s instrues do fabricante. A calibrao do aparelho executada pela introduo de solvente (geralmente gua) na chama e acerto de 100% de transmitncia (zero de absorvncia). Para a execuo da anlise, h dois mtodos, recomendando-se o primeiro, salvo instrues em contrrio.
Mtodo I (Calibrao direta)

Preparar ao menos trs solues de referncia do elemento a ser dosado, abrangendo a faixa de concentraes recomendada pelo fabricante do aparelho para o elemento sob anlise. Todos os reagentes empregados no preparo da soluoamostra devem ser igualmente includos, nas mesmas concentraes, s solues de referncia. Aps a calibrao do aparelho com solvente, conforme indicado acima, introduzir na chama, trs vezes, cada uma das solues de referncia e, aps estabilizao da leitura, registrar o resultado, lavando o nebulizador-combustor com gua

aps cada operalo de introduo. Traar curva de calibrao plotando a mdia de absorvncias (ou transmitncias) de cada grupo de trs leituras com a respectiva concentralo. Preparar a soluo da substncia a ser dosada conforme indicado na monografia, ajustando sua concentrao para que esta fique situada dentro da faixa de concentraOes das solues de referncia. Introduzir a referida soluo amostra na chama, registrar a leitura e lavar o nebulizador-combustor com gua. Repetir esta seq~ncia duas Vellese, adotando a mdia das trs leituras, determinar a concentrao do elemento pela curva de calibralo.
Mtodo 1/ (Adio padrioJ

Adicionar a cada um de, ao menos, trs bales volumtricos similares, volumes iguais de soluo

da substncia a ser dosada, preparada conforme indicado na monografia. Juntar a todos os bales, com exceo de um, volumes medidos da soluo de referncia especificada, de modo a obter uma srie de solues contendo quantidades crescentes do elemento sob anlise. Diluir convenientemente o volume de cada balo com gua. Aps calibrar o espectrofotmetro com gua, como indicado acima, registrar trs vezes as leituras de cada soluo.. Transferir os resultados das leituras de absorvncia (ou transntncia) e as concentraes correspondentes para grfico cujos eixos inter ceptem em zero de elemento adicionado e zero de leitura. Extrapolar a linha reta que une os pontos at a interceptao do eixo de concentraes. A distncia entre este ponto e a interseco dos eixos representa a concentrao do elemento dosado na soluo amostra.

V.2.14. ESPECTROFOTOMETRIA
ULTRA VIOLETA, VIsVEL

DE ABSORO NO E INFRA VERMELHO

Quando a energia eletromagntica luminosa atravessa uma soluo contendo tomos e molcu Ias, parte desta radiao absorvida e o restante transmitido. A radiao absorvida, por sua vez, depende da quantidade de molculas presente (vale dizer, da concentrao da soluo) e da estrutura destas molculas. Ao estudo desta dependncia entre tomos e molculas de substn cias e a natureza e quantidade de radiao eletro magntica absorvida por elas denomina-se espectro fotometria de absoro. De acordo com a peculiaridade da tcnica e equipamentos e, principalmente, o intervalo de freqncia da energia eletromagntica aplicada, a espectrofotometria de absoro enquadra.se nas regies ultravioleta, visvel ou infravermelho do espectro da luz. Espectrofotometria de absoro atmica tambm includa na categoria. ~ utilizada como tcnica de identificao e quantificao das substncias farmacopicas.
RADIAO ELETROMAGNI!TICA

freqncia (E=hv, em que h corresponde constante universal de Planck), vale dizer, inversamente proporcional ao comprimento de onda (v=c/, em que c corresponde velocidade da luz).
INTERAO ENERGIAMATERlA

Radiao eletromagntica consiste de energia propagada na forma de ondas. Como tal, apresenta comprimento de onda caracterstico (a distncia linear entre dois pontos correspondentes locali zados sobre duas ondas adjacentes). Na regio luminosa do espectro eletromagntico, o compri. mento de onda, (1ambda), geralmente especificado em nanmetros, nm, correspondendo a unidade a 10-9m e, mais raramente, em micrometros, llII1 (10-6m) ou em angstrons A (10.101). As faixas de comprimento de onda de energia eletromagntica de interesse para a espectrofotometria de absoro so as seguintes:

ultravioleta distante ultravioleta vis (vel infravermelho pr6ximo infravermelho infravermelho distante

100 200 380 -

200nm 380 nm 780nm 780 - 3.000 nm 3,0 151lm

15 -

JOOllm

Outras formas de caracterizao das ondas eletromagnticas sio o nmero de onda, ~ correspondendo ao nmero de ondas por cm (v an - I ) = = l/\an e freqncia, v (nu), nmero ~e ciclos completos irradiados por segundo, especificada em Hertz (1 Hz = 1 ciclo/s). A energia eletromagntica melhor compreendida se considerada fluxo de partculas denomi nadas ftons (ou quanta). Cada fton contm determinada energia cuja magnitude proporcional

Molculas, que constituem a matria, tambm so dotadas de energia, sendo esta relacionada sua capacidade de movimento. Participam da energia total da molcula a energia derivada de translao (energia translacional, devida movimentao da molcula como um todo); de vibrao (energia vibracional, devida ao movimento relativo de tomos ou grupos de tomos constituintes da molcula); de rotao (energia rotacional, devida rotao da molcula em tomo de um eixo) e, fmalmente, a energia eletrnica, gerada pela configurall'o de eltron~ na molcula. Destes quatro componentes, apenas a energia translacional nl'o se relaciona com fenmenos espectrofotomtricos. Admitese que molculas podem absorver energia, elevando seu estado energtico. Tal elevao, contudo, no de natureza contnua; realizase necessariamente em etapas (degraus) levando s chamadas transies energticas do estado fundamental para outros, mais altos. Transies na energia eletrnica so caractersticas da regio ultravioleta e visvel enquanto as energias vibracional e rotacional ocorrem na regio infravermelho do espectro. As transies eletrnicas ocorrem em pores da molcula denominadas crom6foros, caracterizados principalmente por insaturaes e grupos carbonlicos. Compreendem promoes de eltrons de orbitais moleculares ocupados, geralmente a e 1r ligantes e no ligantes, para os orbitais de energia imediatamente superiores, antiligantes 1r* ou a* (orbitais antiligantes so representados com asteriscos). Na regio do infravermelho ocorrem transies de energia vibracional por ser a radiao nesta regio insuficientemente energtica para promover transies eletrnicas. As vibraes induzidas por radia'o infravermelha compreendem estiramentos e tensionamentos de ligaes inter-atmicas (simtricos e assimtricos) e modificaes de ngulos de ligaes (vibraes de deformao no plano e fora do plano).
USOS QUANTITATIVOS DA ESPECTROFOTOMETRlA DE ABSORO

A anlise espectrofotomtrica quantitativa tem como princpio a relao proporcional existente

entre a quantidade de luz absorvida e a concentralo da solulo da substncia. Considerada uma solu'o diluda de substncia capaz de absorver luz de dado comprimento de onda (luz monocromtica) em solvente transparente (nlo absorvente neste comprimento de onda), verificase que o decrscimo na intensidade da luz ao atravessar a solu'o diretamente proporcional l intensidade da radiao incidente, l concentrao da substncia absorvente e l espessura da camada de solu'o (distncia percorrida pela luz na soluio). Estabelecido ainda o conceito de transmitncia, T, como quociente entre a intensidade de radiao transmitida pela soluo, 10, e a intensidade da radia'o incidente, I, teremos para o princpio do pargrafo anterior - a lei de Beer - a seguinte formulao:

1 em, ou seja, quando se empregam cubetas espectrofotomtricas com espessura de 1 em. A proporcionalidade entre absorvncia e concentrao prevista na lei de Beer , por vezes, desobedecida. Desvios de proporcionalidade devemse principalmente a alteraes de concentrao de solutos por causa de associaes entre molculas de soluto ou molculas de soluto e solvente ou ainda pela ocorrncia de dissociaes ou ionizaes. Outra causa possvel para desvios a chamada radiaio policromtica (falta de monocromaticidade da radiao incidente). Desvios reais da lei de Beer - insignificantes a concentraes at 0,01 M - podem ocorrer em funlo de a constante da lei estar relacionada no apenas absortividade mas tambm ao ndice de refrafo. Outrossim, quando a concentrao do soluto elevada, pode ocorrer alterao na distri buifo de carga das partculas de soluto, modificando sua absor'o em dado comprimento de onda.

logaritmo do inverso da transmitncia (A = 10 l/n, antigamente conhecida por densidade 6ptica ou extino, k constante de proporcionaldade, caracters tica do soluto (substncia absorvente de radiao), b = distncia percorrida pela luz na soluo (espessura), c = concentralo da solulo.

= absorvncia,

EQUIP AMENTO ESPECTROFOTOM~TRlCO

Quando a concentralo, c, expressa em molll e a espessura, b, em centmetros, a equao toma-se: A

Ebc

em que E (psilon) corresponde l absortividade molar (antigamente, coeficiente de extin'o molar). Se, por outro lado, a concentra'o, c, for expressa em g/litro temos:

A=abc
em que a corresponde l absortividade, relacionada com a absortividade molar pela igualdade e = aM, em que M o peso molecular da substncia. A intensidade da absor'o de luz ultravioleta por substncias crom6foras , em geral, expressa como absortividade molar, nas condies de mxima absorfo, emax. Se o peso molecular da substncia nlo for conhecido, possvel expressar a intensidade de absor'o pela equao
1 E1% em

em que

E~~

corresponae

l absorvncia

de

solulo a 1% da substncia quando o caminho ptico (distncia percorrida pela luz na soluo)

Espectrofotmetros so dotados fundamentalmente de (1) fonte de luz (lmpada de tungstnio para luz visvel e de hidrognio ou deutrio para luz ultravioleta); (2) dispositivo monocromador compreendendo filtro (colormetros e espectrocolormetros) ou dispersor de luz (prisma ou, mais freqentemente, grade de difrao) equipado com seletor de comprimento de onda; (3) compartimento de cubetas, para inser'o de solues de amostras no feixe de luz monocromtica e (4) fotodetector associado a conversor.amplificador e instrumento para medida da luz transmitida pela amostra (analgico ou digital). Espectrofotmetros podem dispor de registradores grficos que permitem a obteno de espectros de absoro. Tal recurso importante para fms de identificafo; em espectrofotmetros de infraver melho quesito indispensvel e em aparelhos de ultravioleta e visvel permite, a par de eventual caracterizalo da substncia, a determinao simplificada de parmetros como os comprimentos de onda de absoro mxima e mnima (~max e ~min' respectivamente). O primeiro usualmente o escolhido para a determinalo quantitativa da substncia em anlise. Espectrofotmetros adequados elaborao de espectros so dotados de mecaismo de feixe duplo em lugar do mais tradicional feixe nico. Permitem que amostra e "branco" (solvente empregado no preparo da soluo de amostra, necessrio ao acerto do zero de absorvncia ou 100% de transmitncia da escala do instrumento do espectrofotmetro) sejam lidos simultnea e continuamente, assegurando manutenlo da calbrao de zero ao longo da varredura de comprimentos de onda. Aparelhos de feixe nico exigem

ajuste inicial do zero, sendo este vlido apenas no comprimento de onda selecionado para a leitura. As cubetas utilizadas para as solues espectro fotomtricas apresentam janelas para passagem da luz incidente e transmitida de material transparente radialo empregada. Na regio do visvel empregam-se cubetas de slica enquanto o ultravioleta requer cubetas de quartzo. No infra vermelho slo necessrias celas de NaCl, KBr, tiF, Caf2, entre outros sais. :e fundamental que as cubetas - normalmente com espessura de 1 cm (tolerncia de 0,005 cm) - sejam as mais idnticas possveis, vale dizer, apresentem a mesma transmi tncia espectral quando preenchidas com o mesmo solvente. As cubetas devem ser manipuladas com cautela, evitando-se toc-Ias na superfcie das janelas, e lavadas com solues de detergentes suaves, enxaguadas com gua destilada e, a seguir, com solvente orgnico voltil, que nlo deixe resduo ao evaporar.

~(nm)

E'"em ,
124,5 144,0 48,6 106,6

fBixB IIdmi"'1/fJ1

235 257 313 350

122,98 126,2 142,4 8145,7 47,08 50,3 104,98108,2

IDENTIFICAO POR ESPECTROFOTOMETRlA NO ULTRAVIOLETA

CAUBRAO

DE ESPECTROFOTOMETROS

A ca1ibrao dos aparelhos deve ser realizada periodicamente. A escala de comprimentos de onda pode ser calibrada empregando-se determinadas fontes de luz que apresentem raias espectrais de intensidade conveniente, distribudas de maneira adequada na regio do espectro a ser verificada. Os valores exatos das posies das linhas caractersticas da lmpada de quartzo de arco de mercrio so os seguintes: 253,70; 302,25; 313,16; 334,15; 365,48; 404,66 e 453,83 nm. A escala de comprimentos de onda tambm pode ser testa<la por meio de f1ltros de vidro adequados, que apresentam bandas de absorlo na regio do viswl e do ultravioleta. Slo bastante utilizados os ftltrospadro de vidro contendo didmo - mistura de praseodmo e neodmo - ou hlmo. Os valores exatos para a posilo das raias caractersticas dos ftltros de vidro contendo hlmo so os seguintes: 241,5 1; 287,5 1; 360,9 1 e 536,2 3 orn. A escala de compri mentos de onda pode, opconalmente, ser cali brada com soluo de perclorato de hlmo SR, que apresenta as seguintes absores caractersticas: .241,2; 278,2; 361,5 e 536,3 orn. As tole rncias admissveis 810 de 1 nm na regio do ultravioleta e de 3 orn na regio do viswl. A calibrao da escala de comprimento de onda em espectrofotmetros de infravermelho efe tuada mediante conferncia dos picos de absoro de polestireno (filme), dixdo de carbono, vapor de gua ou amnia. A escala de absorvncia, por sua vez, pode ser calibrada empregando-se soluo de dicromato de potssio, grau espectrofotomtrico. Os valores de absortvidade especfica e a tolerncia mxima para os comprimentos de onda correspondentes slo os seguintes:

Diversas monografias incluem espectros de absorlo no ultravioleta como prova de identifica(o. Nestes casos, haver especficao da extenso de varredura, solvente, concentrao da soluo e espessura da cubeta a empregar. Alguns frmacos requerem o uso de padres de referncia. Nestes casos, fica subentendido que as leituras de padro e amostra so efetuadas simultaneamente (em sucesslo imedata) e em condies idnticas quanto a comprimento de onda, largura de fenda, posio das cubetas etc. O preparo das solues-padro em geral com preende a elaborao de solues com at 10% de tolerncia na concentrao especficada. Entretanto, cabe corrigir exatamnte a concentrao com base na tomada de ensaio. Se o padro de referncia utilizado no tiver sido previamente dessecado, calcular a absortividade com base na concentrao da substncia anidra.
DETERMINAOES QUANTITATIVAS NO ULTRAVlOLETA E NO VISIVEL

Doseamentos espectrofotomtricos na regio ultravioleta em geral requerem comparao da absorvncia da soluo de amostra - preparada na concentrao especificada na monografia - com padres de concentrao conhecida. Procede-se inicialmente leitura das solues-padro e, em seguida, da amostra, com o menor intervalo de tempo possvel entre as duas etapas e em condes experimentais idnticas. As solues de referncia so preparadas a partir dos PadreS'de Referncia de forma similar descrita na "Identificao por espectrofotometria no ultravioleta". Quando os doseamentos forem executados com elevada freqncia, dispensvel o emprego de padres de referncia para cada deterrninato. Nestes casos, admissivel recorrer a curvas de calbra'o - grficos de absorvncia versus concentra'o - preparadas pela leitura em comprimento de onda de absorvncia mxima (~ax) de solues de concentralo crescente de padres de referncia. A deterrninalo da concentrao da soluo-amostra ento obtida por interpolao. A restrio a este procedimento reside na ocorrncia de desvios da lei de Beer, tomando-o recomendvel somente quando a manuteno da proporcionaldade for confirmada dentro do intervalo de 75-125% da concentrao de trabalho (soluo-amostra). Curvas de calibra!o devem ser

de Referncia - pode.se efetuar os dois espectros simultaneamente (padro e amostra) para comparao por superposio. Pequenas quantidades de impurezas no afetam significativamente o espectro, mas alguns fatores, como polimorfismo, variao no tamanho e orientao dos cristais, tcnica de triturao e formao de hidratos, ppdem originar diferenas. Das trs regies de infravermelho do espectro eletromagntico, a regio intermediria (3,0 a 15,0 Ilm) mais empregada para fins de identi ficao. Nesta regio do espectro, tetracloreto de carbono praticamente transparente (em pelculas de at 1mm de espessura)entre 4000 e 1700 cm-I (2,5 a 6 Ilm). Alternativasusuais so o clorofrmio, o diclorometano e o dibromoetano. Dissulfeto de carbono adequado como solvente at 250 cm-t (40 Ilfi), exceto nas zonas de 2400-2000 cm-1 (4,2-5,0 Ilm) e 1800-1300 cm-t (5,5-7,5 Ilfi), em que apresenta forte absoro. leo mineral - que absorve nas regies entre 30oo28oocm-1 e 15001350 cm-I - alternativa freqente aos solventes orgnicos. Disperses da amostra no leo s'opreparadas triturandose cerca de 2 a 5 mg de substncia com quantidade suficiente de leo para se obter pasta fina e cremosa, que intercalada, para leitura, entre duas placas Ap = ab Cp de cloreto de sdio ou de outro sal apropriado. Aa = abCA Igualmente aceita a preparao de pastilhas de haletos de potssio. A amostra slida (1 a 1,5 mg) em que Ap e Cp representam, respectivamente, triturada com cerca de 300 mg de sal (geralmente absorvncia e concentrao da soluo-padro e brometo de potssio, grau espectrofotomtrico, Aa e CA, absorvncia e concentra'o da soluo- seco e bem pulverizado) e a mistura, homognea, amostra. Se as concentraes so expressas na introduzida em molde e comprimida a vcuo. mesma unidade e as cubetas no diferem nas Forma-se disco, que, fixado em suporte aprodimenses, absortividade, a, e caminho ptico, priado, submetido leitura. Amostra e substncia de referncia, quando for b, assumem o mesmo valor nas duas equaes, que o caso, devem ser preparadas simultaneamente, em podem, portanto, ser combinadas: condies idnticas. Consideram-seaceitveisespec CA = Cp (Aa/Ap) tros em que os picos de absoro mxima apresen tem transmitncia entre 5 e 25%. Se o espectro da IDENTIFICAO POR ESPECTROFOTOMETRIA substncia analisada apresentar alguma diferena NO INFRA VERMEUlO em rela'oao espectro de referncia, cabe dissolver Capaz de diferenciar substncias por menores iguais pores de ambas as substncias (ou somente que sejam as diferenas estruturais (salvo ismeros a amostra se a compara'o estiver sendo feita em pticos), a espectrofotometria no infravermelho relao aos espectros de referncia em solvente ensaio de identificao por excelncia. Algumas apropriado, evaporar as solues at secura sob monografias especificam a execuo de espectros as mesmas condies e repetir a execuo dos para comparao com espectro!! de referncia. espectros com os resduos. Se a diferena notada Como opo - havendo disponibilidade de Padro for devida a polimorfismo, deixar de existir.

conferidas com freqncia, em especial se o espectrofotmetro empregado no for o rotineiro ou quando os reagentes tiverem sido preparados a partir de lotes novos. Em caso de dvida, recorrer tcnica primria de comparao direta com padres de referncia. Doseamentos colorimtricos (na regio visvel do espectro eletromagntico) seguem o mesmo esquema dos doseamentos na regio do ultravioleta, inclusive o referente a curvas de calibrao. Admite-se, contudo, maior tolerncia quanto aos comprimentos de onda de absoro mxima O\max) especificados na monografia em relao aos observados experimentalmente. Recomenda-se que a determinao quantitativa seja efetuada no max observado quando este no diferir em mais de 0,5 nm (200 e 280 nm); 2 nm (280 e 320 nm); e 5 nm (320 e 780 nm) em relao ao valor especificado na monografia. Desvios mais pronunciados tomam necessria a recalibrao do espectrofotmetro. O clculo para determinao de concentrao da soluo.amostra em referncia soluo-padro baseiase na equa'o da lei de Beer, igualmente vlidapara ambas:

Algumas substncias podem ser analisadas com maior sensibilidade e especificidade por meio de mtodos fluoromtricos do que por outras tcnicas espectrofotomtricas. A espectrofotometria de fluorescncia, ou espectrofluorimetria, compreende a medida da fluorescncia emitida quando estas substncias - ditas fluorescentes - so expostas radiao ultravioleta, visvel ou outras tambm de natureza eletromagntica. Tais radiaes promovem a excitao de eltrons da molcula para nveis energticos mais elevados. Aps curta permanncia no estado excitado - cerca de 10-8 a 10-4 segundos - os eltrons revertem ao estado fundamental por meio de processo no radiativo, denominado desativao por coliso, aliado a processo radiativo chamado luminescncia (fluorescncia ou fosforescncia), ao contrrio do que ocorre com a maioria das substncias em que a reverso no compreende emisso de luz. Na desativao por coliso, a energia se perde como calor nos choques entre as molculas. No processo radiante, o excesso de energia reemitido com intensidade mxima em comprimento de onda maior (em 20 a 30 nm) que o da radiao excitatria absorvida devido perda energtica compreendida no processo. Sendo de natureza fluorescente, a radiao emitida pela substncia cessa quando a fonte de energia retirada e esta caracterstica a distingue da fosforescncia, que prossegue por algum tempo ap6s o trmino da excitao. A intensidade da luz emitida por uma soluo fluorescente , em determinadas condies, proporcional concentrao do soluto e, em conseqncia, aproveitvel para fins analticos. No sendo praticvel a determinao absoluta da intensidade de fluorescncia, recorre-se a determinaes. referenciadas a soluOes-padro. O fundamento da espectrofluorescncia consiste, pois, em excitar a substncia com radiao no comprimento de onda de mxima absoro e medir comparativamente a intensidade da luz fluorescente emitida frente a um padro.

Espectro de emisso de fluorescncia - Representao grfica da distribuio espectral da radiao emitida por substncia ativada, apresentando a intensidade da radiao emitida como ordenada e o comprimento de onda como abcissa.
APARELHO

Intensidade de tluorescncla - Expresso emprica da atividade fluorescente, em unidades arbitrrias proporcionais resposta do detector. Espectro de excitao de fluorescncla Representao grfica do espectro de ativao, apresentando a intensidade da radiao emitida por substncia ativada (ordenada) e o comprimento de onda da radiao incidente excitat6ria (abcissa).

A determinao da intensidade de fluorescncia pode ser efetuada em simples fluormetro de ftltro (fluormetro), em espectrofotmetros de absoro adaptados ou em espectrofotmetro de fluorescncia (espectrofluormetro). O fluormetro de ftltro compreende fonte de luz, filtro primrio, cmara de amostra, filtro secundrio e sistema de deteco. Nos fluormetros deste tipo, o detector encontra-se disposto a 90 em relao luz incidente. Tal disposio em ngulo reto permite que a luz incidente atravesse a soluo da amostra sem interferir com o sinal fluorescente captado pelo detector. Claro est que tal mecanismo no impede que parte da luz difusa atinja o detector devido s propriedades difusoras inerentes s solues ou em funo da presena de partculas slidas suspensas. Esta disperso residual controlada com emprego de f11tros. O f11tro primrio seleciona a radiao de comprimento de onda apropriado excitao da amostra enquanto o f11tro secundrio seleciona a radia'o fluorescente de comprimento de onda maior, bloqueando o acesso da radia'o dispersa ao detector. Em sua maioria. os detectores de fluormetros de f11tro so equipados com vlvulas fotomultiplicadoras. havendo, contudo, diferenas entre tipos de equipamentos quanto regio espectral de mxima sensibilidade. Amplificada a corrente eltrica gerada no fotomultiplicador, obtm-se leitura correspondente em instrumento anal6gico ou digital. Espectrofotmetros de fluorescncia. por sua vez, diferenciam-se de fluormetros por no disporem de filtros e sim de monocromadores de prisma ou de grade de difra'o, proporCionando a esperada superioridade em seletividade de comprimento de onda e flexibilidade. Tanto fluormetros como espectrofotmetros de fluorescncia permitem emprego de diversas fontes de luz. Lmpadas de mercrio ou tungstnio, embora comuns. so substitudas com vantagem pela lmpada de arco de xennio alta presso, pois esta proporciona. ao contrrio das demais. espectro contnuo desde o ultravioleta at o infravermelho. De qualquer forma, a radiao

 muito intensa e nro deve jamais ser observada com os olhos desprotegidos, sob risco de leses permanentes. Os monocromadores, por sua vez, dispem de ajuste de largura de fenda. Fendas estreitas propiciam maior resoluo e pureza espectral enquanto fendas largas asseguram maior intensidade de luz em detrimento destas caractersticas. A largura de fenda a ser adotada funo da diferena entre os comprimentos de onda da luz incidente e emitida, assim como do nvel de sensibilidade necessrio anlise. A cmara de amostra geralmente permite uso de tubos redondos e cubetas quadradas, do tipo empregado em espectrofotometria de absoro, salvo pela necessidade de as quatro paredes ver ticais serem polidas. Volumes de amostra da ordem de 2 a 3 ml so adequados embora alguns instrumentos possam estar dotados de cubetas pequenas, com capacidade para 0,1 a 0,3 ml ou ainda de suportes para capilares que requerem volumes ainda menores.
CALIBRAO DO APARELHO

Fluormetros e espectrofluormetros devem ser calibrados com substncias fluorforas estveis de modo a assegurar resultados reprodutfveis. As variaoes so, em geral, devidas a alteraes na intensidade das lmpadas ou na sensibilidade do fotomultiplicador. O fluorforo pode ser amostra pura da substncia a analisar ou qualquer outra substncia fluorescente de fcil purificao, cujos comprimentos de onda de absoro e fluorescncia sejam semelhantes aos da substncia em anlise. Quinina em cido. sulfrico 0,05 M padro adequado para fluorescncia azul; fluorescena em hidrxido de sdio 0,1 M apropriada para fluorescncia verde e rodamina fluorforo de escolha na fluorescncia vermelha. A escala de comprimentos de onda do espectrofotmetro de fluorescncia tambm requer calibrao peridica.
PREPARO DAS SOLUOES

A escolha do solvente utilizado na preparao de solues fluorescentes requer precaues. Natureza, pureza e pH do solvente so parmetros relevantes na intensidade e distribuio espectral da fluorescncia. Em conseqncia, recomen dvel ate r-se ao volume especificado em mtodos estabelecidos. Muitas substncias apresentam fluorescncia em solventes orgnicos, mas so praticamente no fluorescentes quando dissolvidas em gua. Assim, cabe a experimentaO em diversos solventes para determinar a propriedade fluorescente de uma substncia.

Solues destinadas espectrofotometria de fluorescncia so 10 a 100 vezes menos concentradas que as empregadas em espectrofotometria de absoro. Para fins quantitativos, fundamental que a intensidade da fluorescncia guarde relao linear com a concentrao da amostra dentro de limites compatveis com a tcnica. Se a soluo for muito concentrada, parte significativa da luz incidente ser absorvida na periferia da cubeta e menor ser a quantidade de radiao a alcanar a regio central. Isto significa que a prpria substncia atuar como "mtro interno". Todavia, tal fen meno raro, considerando-se que a espectrofotometria de fluorescncia tcnica de elevada sensibilidade, permitindo o emprego de solues de concentraes da ordem de 10-5 a 10-7 M. Devido aos limites de concentrao usualmente estreitos nos quais a fluorescncia proporcional concentrao da substncia, tem-se como regra a obedincia relao (c-d)/(a-b) = 0,40 a 2,50. Nesta, a a intensidade de fluorescncia da soluo de referncia; b, a intensidade do branco corres pondente; c, a intensidade da soluo-amostra e d, a intensidade do branco correspondente. As determinaes de fluorescncia so sensveis presena de partculas slidas nas solues. Tais impurezas reduzem a intensidade do feixe incidente, produzindo falsas leituras elevadas devido a reflexes mltiplas na cubeta. ~, portanto, necessrio eliminar estes slidos por centrifugao ou flltragem antes da leitura, tendo em mente, contudo, que alguns papis de mtro podem conter impurezas fluorescentes. A presena de oxignio dissolvido no solvente exerce efeito atenuador sobre a intensidade da fluorescncia e cabe elimin-lo usando, por exemplo, passagem de corrente de nitrognio, hlio ou qualquer gs inerte na soluo, previamente leitura. Controle de temperatura tambm relevante. Em algumas substncias, a emisso fluorescente pode cair de 1 a 2% por grau de temperatura aumentado. Da - se o objetivo for mxima preciso - ser recomendado emprego de cubetas termostatizadas. Entretanto, para anlise de rotina, no h necessidade deste recurso desde que as determinaes sejam realizadas com rapidez suficiente para evitar aquecimento devido exposio da soluo luz intensa. Algumas substncias fluorescentes so sensveis luz e, quando expostas radiao luminosa intensa do espectrofotmetro de fluorescncia, podem se decompor em produtos mais ou menos fluorescentes. Tal efeito pode ser detectado observando-se a resposta do detector em relao ao tempo e atenuado com a reduo da intensidade luminosa incidente pela utilizao de mtros.

Turbidimetria e nefelometria - variantes de espectrofotometria - destinam-se avaliao quantitativa de substncias em funo da turbidez de suas suspenses, proporcional a seu poder de difrao sobre luz incidente (efeito Tyndall). Na turbidimetria, tambm conhecida por opacimetria, mede-se a intensidade da luz transmitida no mesmo sentido de direo da luz inci dente. Embora haja turbidmetros - destinados especificamente aplicao -, colormetros e espectrofotmetros convencionais so satisfatrios medida da luz transmitida desde que ajustados para comprimento de onda apropriado. A nefelometria (ou difusimetria), por sua vez, compreende a medida da intensidade de luz difundida (refletida) pelas partculas em suspenso, em ngulo reto ao feixe de luz incidente. Mais uma vez, a par de nefelmetros, possvel empregar-se colormetros e espectrofotmetros na medida nefelomtrica. Para tanto, cabe modific-Ios de forma a permitir a captao perpendicular ao ngulo da luz incidente, seja por transferncia da fonte de luz, seja por alterao de posio do fotossensor. Fluormetros - a exemplo de nefe lmetros - destinam-se medida de luz dispersa (posicionamento do fotossensor em ngulo de 90 em relao luz incidente), sendo, portanto, compatveis com a nefelometria. Colormetros e espectrofotmetros comerciais freqentemente dispem de acessrios para adaptao dos instrumentos medida nefelomtrica.
Turbidncia

Uma suspenso avaliada em dado instrumento, sob luz monocromtica, apresenta turbidincia que corresponde ao produto da concentrao C por uma constante de proporcionalidade k, que combina os demais parmetros da equao acima. Tem-se, portanto, S = k. C, expresso da lei de Lambert-Beer, permitindo que procedimentos turbidimtricos e nefelomtricos sejam anlogos aos adotados em espectrofotometria. E, contudo, relevante observar que a proporcionalidade s verdadeira para suspenses muito diludas, pois reflexes secundrias provocam excessivo desvio de linearidade quando o nmero de partculas em suspenso ultrapassa determinado limite. Outra fonte de erro em medidas turbidimtricas e nefelomtricas a decantao das partculas em suspenso. Tal ocorrncia pode ser minimizada com o aumento da viscosidade, com a incorporao de colide protetor - gelatina, Boma arbica ou amido - ao meio lquido da suspenso.
Procedimento

Turbidncia (S) - em analogia transmitncia (T), definida em V.2.l4 - a expresso oficial de disperso da luz produzida por partculas suspensas. E determinvel por turbidimetria ou nefelometria, correspondendo equao

= Po =
P

d4'+'lI.4

bd

O procedimento bsico para o emprego de tcnicas turbidimtricas ou nefelomtricas obedece aos princpios da metodologia espectrofotomtrica, compreendendo elaborao de reta de calibrao com suspenses de concentrao conhecida. Na prtica, permissvel a plotagem contra valores de transmitncia em vez de turbidncia. As etapas de procedimento compreendem, em resumo: (1) ajustar o instrumento no comprimento de onda especificado na monografia (para colormetros, na falta de especificao, empregar mtro que fornea luz na faixa azul); (2) preencher a cubeta com a suspenso mais concentrada e ajustar a leitura de transmitncia para 100% (transmitncia oferece mais linearidade que absorvncia); (3) medir a transmitncia das demais suspenses-padro e traar reta de calibrao e (4) medir a transmitncia da amostra determinando sua concentrao pela reta de calibrao.
Compara50 visual

Po= intensidade da radiao incidente,

P b C d

= =

intensidade da radiao transmitida, espessura da camada de amostra (cubeta), concentrao da amostra, dimetro mdio das partculas, comprimento de onda, constante de proporcionalidade, dependente da natureza da suspenso e do mtodo de medida.

Medidas de turbidez podem ser executadas por comparao visual, tcnica pela qual a suspenso de amostra confrontada com suspenso ou suspenses-padro. Para tanto, empregar tubos de ensaio idnticos, de fundo plano com 70 m1 de capacidade e cerca de 23 mm de dimetro interno. Os tubos devem ser comparados horizontalmente sobre fundo escuro, com fonte de luz lateral.

Mtodos cromatogrficos compreendem a dis tribuio de um soluto entre duas fases - mvel e fIXa- atuando a fase fIXapor adsoro, partio, ftltrao em gelou troca inica. A cromatografia constitui processo de separao. Identificao ou determinao quantitativa dos componentes de

uma amostra s possvel quando os mtodos cromatogrficos so combinados com tcnicas apropriadas de deteco e mtdida. Os principais tipos de cromatografia so: em camada delgada, em papel, em coluna, lquida de alta presso e de gs.

EQUIPAMENTO

PROCEDIMENTO

Consiste em placas de vidro, alumnio ou outro material rgido e inerte, recoberto com fina camada de adsorvente ou suporte, disponveis comercialmente ou preparadas segundo procedimento descrito a seguir,e cuba de vidro (ou outro material transparente e inerte) provida de bordos e tampas esmerilhados, de modo a promover vedafo completa.

A nlo ser que a monografta prescreva diferentemente, desenvolver as cromatoplacas em cuba saturada. Para isso, forrar as paredes da cuba internamente com papel de filtro introduzindo o eluente em quantidade suficiente para impregn-lo. Deixar, no fundo, camada de 5 a 10 mm de eluente. Fechar a cuba, deixando-a em repouso por 1 hora, temperatura ambiente. Apcar as solues em exame na forma de manchas circulares ou bandas de cerca de 1 em de PREPARAO DAS CROMATOPLACAS largura sobre a placa, distncia nio inferior a Preparar suspenso de adsorvente ou suporte e, 1,5 cm das bordas laterais e inferior. A distncia com auxilio de aparelho apropriado, espalhar entre os pontos de apcalo nio deve ser inferior camada uniforme (geralmente 250 a 500 llJIl de a 1,5 cm. Deixar evaporar o solvente, marcar espessura) sobre as placas, previamente mpas e distncia de 10 a 15 cm a partir do ponto de desengorduradas. Utilizar placas de 20 cm de apcalo das amostras e introduzir a croma comprimento e largura varivel(20, 10 ou 5 cm). topIaca na cuba, colocando-a na posiio tio Deixar secar ao ar e, em seguida, colocar na estufa prxima da vertical quanto possvel, de modo tal a 100-105C por 1 hora. Guardar ao abrigo da que os pontos de apcaio. fiquem acima do umidade. Quando a monografia assim especificar, nvel do eluente. Fechar a cuba e deixar desenativar as cromatoplacas, aquecendo-as em estufa, volver o cromatograma at que o eluente atinja li 100-105C, por 1 hora. As placas de celulose o limite marcado. Remover a cromatoplaca, constituem excelo, nlo devendo ser dessecadas deixar secar, e visualizar de acordo com o prescrito na monografia. nem ativadas.

EQUIPAMENTO

PROCEDIMENTO

Consiste em placas de vidro, alumnio ou outro material rgido e inerte, recoberto com fina camada de adsorvente ou suporte, disponveis comercialmente ou preparadas segundo procedi mento descrito a seguir, e cuba de vidro (ou outro material transparente e inerte) provida de bordos e tampas esmerilhados, de modo a promover vedalo completa.

A nlo ser que a monografia prescreva diferen temente, desenvolver as cromatoplacas em cuba saturada. Para isso, forrar as paredes da cuba internamente com papel de filtro introduzindo o eluente em quantidade suficiente para impregn-Io. Deixar, no fundo, camada de 5 a 10 mm de eluente. Fechar a cuba, deixandoa em repouso por I hora, temperatura ambiente. Aplicar as solues em exame na forma de manchas circulares ou bandas de cerca de 1 cm de PREPARAO DAS CROMATOPLACAS largura sobre a placa, distncia nio inferior a Preparar suspenso de adsorvente ou suporte e, 1,5 cm das bordas laterais e inferior. A distncia com awulio de aparelho apropriado, espalhar entre os pontos de aplicao nio deve ser inferior camada uniforme (geralmente 250 a 500 pm de a 1,5 cm. Deixar evaporar o solvente, marcar espessura) sobre as placas, previamente limpas e distncia de 10 a 15 cm a partir do ponto de desengorduradas. Utilizar placas de 20 em de aplicao das amostras e introduzir a eroma comprimento e largura varivel (20, 10 ou 5 cm). toplaca na cuba, colocando-a na posio to Deixar secar ao ar e, em seguida, colocar na estufa prxima da vertical quanto possvel, de modo tal a l00-105C por 1 hora. Guardar ao abrigo da que os pontos de aplicao. fiquem acima do umidade. Quando a monografia assim especificar, nvel do eluente. Fechar a cuba e deixar desen ativar as eromatoplacas, aquecendo-as em estufa, volver o eromatograma at que o eluente atinja a l00-105C, por 1 hora. As placas de celulose o limite marcado. Remover a cromatoplaca, constituem exceo, nlo devendo ser dessecadas deixar secar, e visualizarde acordo com o prescrito na monografia. nem ativadas.

Consiste em cuba de vidro, provida de bordas e tampa esmerilhadas e de dimenses adequadas para conter o papel cromatogrfico, que pode ser adaptado para cromatografia ascendente ou descendente. Utilizar papel para cromatografia, cortado no sentido das fibras em tiras de comprimento varivel e largura nlo inferior a 4,5 em. Para cromatografia descendente, utilizar cuba com tampa provida de orifcio central, fechado por rolha de vidro ou outro material inerte. Na parte superior da cuba h cubeta suspensa, que contm dispositivo pllra prender o papel (geralmente vareta de vidro). De cada lado da cubeta h guias de vidro, que sustentarlo o papel de modo a nlo tocar nas paredes da cuba cro matogrfica. Para a cromatografia ascendente, na parte superior da cuba h dispositivo que pennite sustentar o papel cromatogrfico e que pode ser baixado sem abrir a cuba.
PROCEDIMENTO

aplicar a amostra em pores, deixando-se evaporar o solvente antes de aplicar a porlo se8lcnte. Quando mais de uma amostra for cromatografada sobre o mesmo papel, distanciar os pontos de aplicaio, no mnimo, 3 em.

Introduzir na cuba camada de eluente especificado na monografia, tampar e deixar em repouso por 24 horas. Aplicar a amostra no papel, colocando-o adequadamente sobre as guias de maneira que a extremidade superior permanea dentro da cubeta suspensa e prend-Io com a vareta de vidro. Fechar a cuba e deixar em repouso por I hora e meia. Em seguida, atraws do orifcio na tampa introduzir o eluente na cubeta. Desenvolver o cromatograma at a distncia ou tempo prescritos, protegendo o papel da incidncia de luz direta. Remover o papel, marcar o percurso da fase mvel, secar e visualizar da maneira prescrita na monografia.

Quando a tcnica utilizada for a de cromatografia ascendente, traar linha fina com lpis a 3 em da borda inferior do papel; se a cromatografia descendente, traar linha distncia tal que a mesma fique poucos centmetros abaixo da vareta que prende o papel na cubeta do eluente. Aplicar as amostras na forma de manchas circulares ou bandas de 1 cm de largura sobre a linha traada com lpis. Se o volume total a ser aplicado produzir mancha de dimetro superior a 1 cm,

Colocar no fundo da cuba recipiente contendo o eluente, fechar a cuba e mantla em repouso por 24 horas. Aplicar a amostra sobre o papel introduzindo-o na cuba e deixar em repouso por I hora e meia. Sem abrir a cuba, baixar o papel de modo a colocar sua extremidade inferior em contato com o eluente e desenvolver o cromatograma at a distncia ou tempo prescritos. Retirar o papel, marcar o percurso do eluente, secar e visualizar da maneira prescrita na monografia.

EQUIPAMENTO

Colunas cromatogrficas so constitudas de tubos de vidro ou outro material inerte e transparente, e de comprimento e dimetro variveis, em cuja parte inferior h estrangulamento e tor neira para regulagem do fluxo do eluente. Em algumas colunas, a parte inferior apresenta uma placa porosa, cuja finalidade evitar a sada da fase fixa. Na parte superior da coluna poder haver dilatao de forma esfrica destinada a conter volume maior de solvente. Os tipos de cromatografia em coluna podem ser: por adsoro, partio ou troca inica.

PROCEDIMENTO

Cromatografl8 em coluna por adlOrio Suspender a fase fixa na fase mvel in troduzindo, a seguir, no tubo de vidro, cuja parte basal foi previamente obturada por chumao de algodo, de modo a formar coluna de adsorvente isenta de bolhas de ar. Deixar sedimentar o adsorvente, retirar o excesso de eluente e colocar a amostra no topo da coluna. Em seguida, adicionar fase mvel e deix-Ia fluir pela ao da gravidade ou pela aplicao de presso positiva no topo da coluna. O eluato controlado, recolhendo-se fraes conforme especificado na monografia e examinando-se cada fralo por mtodo adequado. Cromatografl8 em coluna por partio Utilizar fase lquida imiscvel com fase mvel para ser adsorvida na superfcie de suporte slido. Desenvolver a cromatografia da mesma maneira que a cromatografia de adsorlo. De acordo com a monografia, saturar a fase mvel com a fase fixa, antes de ser usada para a eluio. Geralmente, o adsorvente e a fase fixa so mais polares do que a rase mvel. Em alguns casos utilizase a cromatografia de partio de fase reversa, em que o adsorvente polar se transforma em no polar

pela slanizalo ou outros meios (tratamento com parafinas, por exemplo), e a fase fixa menos polar do que a fase mvel. Proceder coleia e ao controle de fraes conforme a monografia. Cromatografl8 em coluna por troca inica Utilizar como fase fi'xa resina de troca inica. Troca de ons consiste em intercmbio reversvel de ons presentes na soluo com ons do polmero resinoso, celulose modificada ou suporte de s11ica-gel. A escolha da resina, forte ou fraca, aninica ou catinica, depender em grande parte do pH no qual dever ocorrer a troca inica e da natureza de nions ou ctions a serem trocados. As resinas fortemente cidas e fortemente bsicas so convenientes para a maioria das aplicaes analticas. Emprega-se, na prtica, grande excesso (200-300%) de resina sobre a quantidade da amostra estequiometricamente calculada; a capacidade das resinas varia de 2 a 5 milimoles por g (peso seco).

Tratamento da resina e preparo da coluna Suspender a resina de troca inica em gua e deixar em repouso por 24 horas. Introduzi-Ia em coluna adequada e, tratando-se de resina aninica, convert-Ia em bsica passando atravs da coluna solulo de hidrxido de sdio SR, velocidade de 3 ml por minuto, at que o eluato fornea reao negativa para cloreto. Passar, em seguida, gua isenta de dixido de carbono. Em caso de resina catinica, a convers'o para a forma cida dse pela passagem de cido clordrico SR atravs da coluna, seguida de lavagem com gua isenta de dixido de carbono at que o eluato fornea realo neutra. Desenvolve-se coluna de troca inica de maneira anloga descrita para cromatografia de adsoro. Terminada a operalo regenera-se a resina lavando-a com hidrxido de sdio SR (colunas aninicas) ou com cido clordrico SR (colunas catinicas) e, em seguida, com gua isenta de dixido de caro bono at reao neutra.

EQUIPAMENTO

l! constitudo por uma ou mais bombas, sistema injetor de amostra, coluna cromatogrfica e sistema de deteclo que permite determinar presena e concentraes dos componentes da amostra. O comprimento, o dimetro interno da coluna, a temperatura da operalo, a composio e a vazio do eluente, a natureza da fase estacionria e os meios de deteco slo descritos nas monografias. Quando a monografia estabelecer a "eficincia mnima da coluna", esta defmida em termos do nmero de pratos tericos por metro, pela expresso

O fator de resoluo (R) entre picos medidos no cromatograma , no mnimo, 1,0 (exceto se a monografia estabelecer diferentemente). O fator de resoluo definido pela expresslo R = 2(DRb - DRa)/(la

+ lb)

em que
R ~a e ~b = fator de resoluo, = distncias medidas ao longo da linhabase, entre os pontos de injeo e a perpendicular linhabase, traada dos respectivos mxi mos de dois picos adjacentes, = largura dos respectivos picos na linha base.

Ia e lb

5,54 (DR \2 N = -C-x lhJ

Os valores de Ia, lb, DRa, DRb devem ser expressos nas mesmas unidades de medida.
PR.OCEDIMENTO

= =

= =

nmero de pratos tericos por metro, distncia, ao longo da linha-base, entre o ponto de injeo da amostra e a perpendicular linha-base traada do mimo do pico de interesse, comprimento da coluna em metros, largura do pico de interesse metade da altura, expressa na mesma unidade de medida que DR'

A preparao das solues descrita na monografia. Registrar o cromatograma e repetir a determinao para assegurarse da reprodutibilidade. Determinar as reas dos picos ou, alternativamente, quando a simetria o permitir, a altura dos picos produzidos por componentes de interesse. A partir dos valores obtidos, calcular o teor destes componentes em relalo a padres internos ou externos.

EQUIPAMENTO

= largura dos respectivos picos na

linhabase. Os valores de Ia, lb, DRa e DRb so expressos nas mesmas unidades de medida.

Consiste em bloco injetor conectado a coluna de material aproprtado, contendo fase fixa que recobre suporte slido, medidor de fluxo para gs de arraste, e sistema de deteco que permite determinar presena e concentraes de compo nentes da amostra. A3 especificaes do equi pamento e as condies de operao so descritas nas monografias. Quando a monografia estabelecer "eficincia mnima da coluna", esta definida em termos do nmero de pratos tericos por metro, pela expresso citada em V.2.l7.4. O fator de resoluo (R) entre picos medidos no cromatograma , no mnimo, 1,0 (exceto se a monografia estabelecer diferentemente). O fator de resoluo defmido pela expresso R

PROCEDIMENTO

= 2(DRa - DRtJ/(1a + ltJ

R = fator de resoluo, DRa e DRb = distncias, medidas ao longo da linhabase, entre os pontos de injeo e a perpendicular linha base, traada dos respectivos m ximos de dois picos adjacentes,

O preparo das amostras descrito na monografia. Determinar o ajuste do aparelho e os volumes a serem injetados, de modo a produzir resposta adequada. Ajustar a vazo do gs de arraste para otimizar a qualidade e a velocidade do desenvolvimento do cromatograma. Nos casos em que se utiliza padro interno, procede.se injeo de amostra para determinar se h presena de picos interferentes com o pico do padro interno. Observada a presena de picos interferentes, proceder correo das condies de operao. Injetar os volumes selecionados das solues descritas na monografia e registrar os cromato gramas resultantes. Repetir a determinao para assegurarse de resposta consistente. Determinar as reas dos picos ou, quando a simetria dos mesmos permitir, suas alturas. A partir dos valores obtidos calcular o teor dos componentes em exame.

CROMATOGRAFIAEM CAMADADELGADA Os materiais abaixo relacionados slo utilizados na preparalo de cromatoplacas, de acordo com o mtodo geral de cromatografia em camada delgada. Podem ser utilizadas cromatoplacas prontas, disponveis comercialmente, desde que correspondam ao teste de verificao do poder de separao ou qualquer outro teste adicional especificado na monografia.
CELULOSE

Teor de sulfato de clcio

Misturar 0,25 g de slica-gel G, 3 ml de cido clordrico 2 Mel 00 ml de gua e agitar vigorosamente por 30 minutos. Filtrar, lavar o resduo com gua e proceder com a titulao complexomtrica de clcio no ftltrado combinado com guas de lavagem. Cada ml de edetato diss6dico 0,05 M equivale a 7,255 mg de sulfato de clcio hemi idratado.
Alcalinidade

P fino homogneo, com tamanho mdio das partculas inferior a 30 llJIl e que correspondem ao teste de verificao do poder de separao.
Teste de verificao do poder de separao

O pH da suspensllo preparada pela agitao de 1 g de slica-gel G com 10 ml de gua isenta de dixido de carbono por cinco minutos , aproximadamente, 7,0.
Verificao do poder de separao

Preparar cromatoplacas utilizando suspenslo de 15 g de celulose em 100 ml de gua com auxlio de agitador mecnico. Preparar soluo a 0,025% (P/V) de cada um dos seguintes corantes: preto brilhante BN, amaranto S, amarelo rpido AB e tropeolina O em mistura de volumes iguais de gua e metano!. Apcar 10 # desta soluo sobre a cromatoplaca e desenvolver usando como fase mvel a mistura de 50 volumes de l-propanol 10 volumes de acetato de etila e 40 volumes de gua. Deixar o solvente subir 10 em. O croma tograma dever mostrar quatro manchas distintas e bem separadas, sendo, pela ordem, uma preta, uma vermelha e duas amarelas, contando a partir do ponto de apcao.
CELULOSE F 254

Preparar cromatoplaca conforme indicado em mtodo geral para cromatografia em camada delgada. Preparar solul'o a 0,01% (P/V) de cada um dos seguintes corantes: azul de indofenol, vermelho Sudan G e amarelo de dimetila em tolueno. Aplicar 10 # sobre a cromatoplaca e desenvolver utilizando tolueno como fase mvel. Deixar o solvente subir 10 em. O cromatograma dever mostrar 3 manchas separadas: a mancha correspondente ao azul de indofenol junto do ponto de aplicao, a mancha correspondente ao amarelo de dirnetila, no meio do cromatograma e a mancha correspondente ao vermelho Sudan G, entre as duas primeiras.
SaICAGEL GF 254

P fmo, homogneo, com tamanho mdio das partculas inferior a 30 Ilfil, contendo indicador fluorescente com intensidade tima a 254 nm. Corresponde ao teste de verificao do poder de separao descrito para celulose. Para o preparo da cromatoplaca utilizar a suspenso de 25g em 100 ml de gua.
CELULOSEG

P fmo, homogneo, branco, com tamanho mdio das partculas variando de 10 a 40 #lID, contendo cerca de 13%.(pjp) de sulfato de clcio hemiidratado e indicador fluorescente, com intensidade mxima a 254 nm. Corresponde a testes de teor de sulfato de clcio, alcalinidade e verificaa:o do poder de separafo descritos para slica-gel G. Corresponde ainda a teste de fluorescncia.
Fluorescncia

P fmo, homogneo, com tamanho mdio das partculas inferior a 30 1lJIl, contendo agente adesivo. Corresponde ao teste de verificallo do poder de separao descrito para celulose.
SILlCA-GEL G

P fmo homogneo. O tamanho de partculas varia entre 10 e 40 Ilfil. Contm cerca de 13%(P/p) de sulfato de clcio hemiidratado. Corresponde aos seguintes testes:

Preparar cromatoplacas segundo descrito em mtodo geral para cromatografia em camada delgada. Preparar solul'o de cido benzico a 0,1% (P/V) em mistura de 9 partes de 2-propanol e 1 parte de cido frmico anidro. Apcar sobre a cromatoplaca, separadamente, 2, 4, 6, 8 e 10 # desta soluo e desenvolvero cromatograma usando como eluente mistura de 9 partes de 2-propanol e 1 parte de cido frmico anidro. Aps desenvolvi mento e secagem verificar a mancha escura de cido benzico sobre fundo fluorescente verde amarelado, no tero superior do cromatograma.

CELULOSE MICROCRlSTALlNA

SfLICA-GEL HF 254

P fmo, homogneo, com tamanho mdio das partculas inferior a 30 1J.rrl. Corresponde ao teste de verificao do poder de separao descrito para celulose. Para o preparo da placa utilizar suspenso de 15 g em 100 ml de gua.
KlESELGUHR G (Tem de diatoaW:eu G)

P fino, acinzentado, aparecendo colorao cinzenta mais pronunciada quando misturado com ligua. O tamanho mdio das partculas varia de 10 a 40 101m. rata-se de terra de diatomliceas T natural, extrada com cido clordrico e calcinada, a qual se adicionaram cerca de 15% de sulfato de clilcio hemdratado. Corresponde aos testes:
Teste de verifica60 do poder de separaSo

P fmo, homogneo, branco, com tamanho mdio de partculas variando entre 10 e 40 1J.rrl, contendo cerca de 1,5% (P/p) de indicador fluorescente com absoro mliximaem 254 orn. Corresponde a testes de verificao do poder de separao e alca1inidade descritos para slica gel G e a teste para fluorescncia descrito para slica-gelGF 254.
S(LICA-GEL SILANlZADA HF 254

P branco, fino e homogneo. Possui propriedade de repelir a ligua; quando agitado com gua permanece na superfcie do lquido. Corresponde ao teste de verificao do poder de separao.
Verifica60 do poder de separaio

Agitar vigorosarnente, durante 2 minutos, 30 g de slica-gel silanizada HF 254 com 60 ml de mistura de gua e metanol 2: 1. Utilizando dispositivo apropriado, espalhar camada uniforme da suspenso de aproximadamente 250 lJ.rrl sobre placas de vidro, medindo 20 por 5 em, cuidadosamente limpas e desengorduradas. Deixar secar ao ar e, em seguida, aquecer em estufa a 110C por 30 minutos. Preparar mistura de laurato de metila, miristato de metila, pa1mitato de metila e estearato de metila, 0,1 g cada. Adicionar a esta mistura 40 ml de soluo de hidr6xido de potssio Alcalinidade a 3,0% (P/v) em etanol a 90%, previamente decanO pH de suspenso preparada pela agitao de tada e aquecer por 1 hora em banho-maria" sob 1 g de Kieselguhr G com 10 ml de gua isenta de refluxo. Esfriar, adicionar 100 ml de ligua,acidificar dixido de carbono por 5 minutos deverlisituarse a mistura com cido clordrico 2 M e extrair com 3 pores, de 10 ml cada, de clorof6rmio. &Wlf. os entre 7,0 e 8,0. extratos clorofrmicos, secli-los com sulfato de sdio anidro, filtrar e evaporar at secura. DissolICIESELGUHR H (Tem de diatomceu H) ver o resduo em 50 ml de clorofrmio. P fmo, acinzentado, aparecendo colorao Aplicar sobre a cromatoplaca 3 pores de cinzenta mais pronunciada quando misturado 10 ll1 cada, desenvolver o cromatograma usando com gua. O tamanho mdio das partculas varia como fase mvel mistura de 1,4-dioxana, gua e de 10 a 40 J,Lm. Corresponde ao teste de verificido actico glacial (65:25:10). Retirar a cromacao do poder de separao descrito para Kieseltoplaca da cuba, aquecer a 120C em estufa guhr G e a teste de alca1inidade. por 30 minutos, deixar esfriar e nebulizar com soluo a 3,5% (p/v) de cido fosfomolhdico em Alcalinidade 2-propanol. Aquecer a 150C em estufa at que O pH de suspenso preparada pela agitao, as manchas sejam visveis. Expor a cromatoplaca por 5 minutos, de I g de Kieselgubr H com 10 ml a vapores de amnia at que o fundo se tome de gua isenta de dixido de carbono situa-se branco; cada cromatograma mostra 4 manchas entre 6,4 e 8,0. distintas, bem separadas.
S(LICA~ELH

Preparar cromatoplacas usando suspenso da amostra em soluo 0,02 M de acetato de sdio anidro. Preparar soluo contendo 0,1% (P/v) de cada um dos seguintes acares: lactose, sacarose, frutose, I).glicose e D-galactose em piridina. Aplicar 10 J,Llda soluo sobre a cromatoplaca e desenvolver o cromatograma utilizando como fase mvel a mistura de 65 volumes de acetato de etila, 23 volumes de 2-propanol e 12 volumes de ligua. Deixar secar em estufa aliO c e esfriar. Nebulizar a cromatoplaca com cerca de 10 ml da soluo de anisaldedo e aquecer a 110C por 10 minutos. O cromatograma dever mostrar cinco manchas separadas e bem defmidas.

Proceder cromatografia em camada delgada, utilizando cromatoplacas preparadas da maneira descrita a seguir:

P fmo homogneo, com tamanho de partculas variando entre 10 e 40 1J.rrl. orresponde a C teste de verificaodo poder de separao descrito para slicagelG.

xido de alumnio

anidro

Oxido de alumnio neutro ou bsico, desidratado e ativado pelo tratamento com calor, oonsis-

tindo em a-A!, 03, Todo o xido de alumnio neutro deve passar pelo tamis de 150 pm e ser retido no tamis de 75 pm. Oxido de alumnio bsico Grau bsico de xido de alumnio comercial ativado, adequado para cromatografia em coluna. Corresponde aos testes arrolados a seguir. Alcalinidade - O pH de suspendo a 10% (p/V) em llgua isenta de dixido de carbono e agitada durante 5 minutos situase entre 9,0 e 10,0. Atividade - Empacotar, em coluna cromatogrllfica medindo 1 cm de dimetro e comprimento adequado, xido de alumnio blisico em quanti dade suficiente para fonnar coluna de 5 cm de comprimento. Aplicar, sobre a mesma, mistura de 5 ml de solulo de AmtII'elo Sud/m e 5 ml de Sud/m Vermelho G e eluir com 20 ml de mistura de I volume de benzeno e 4 volumes de ter de petrleo 6O-80C. O Sudan Vermelho G fonna faixa de aproximadamente 1 em de profundidade na parte de cima da coluna, seguindo-se faixa incolor e, abaixo desta, faixa amarela de Amarelo Sudan. Oxido de alumnio desativado Adicionar 1,5 a 2,0% de llgua ao xido bsico de alumnio, misturar bem e deixar em repouso por uma noite em recipiente bem vedado. O xido de alumnio desativado corresponde ao teste que segue: - Empacotar em coluna adequada de xido de alumnio desativado em quantidade suficiente para fonnar coluna de 20 cm de altura e 1 em de di metro, usando hexano, como fase mvel. Adicio nar no topo da coluna solullo de 0,25 mg de calciferol em 10 ml de hexano. Quando o nvel da solufo estiver atingindo o do suporte, comear a eluir com solufo a 17,5% /V) de ter em hexano. Se necessllrio, ajustar a velocidade de eluilo para I a 2 ml por minuto. Coletar 200 ml de eluato: nlo se verifica presena de calciferol. Coletar 100 ml seguintes do eluato: verificar presena de, no mnimo, 95% do calciferol utili zado no teste. Para deterrnnallo da soluo de calciferol, seguir prescrilo da monografia.

Aplicar, sobre a coluna, mistura de 5 ml de solulo de azobenzeno e 5 ml de soluo de metoxiazobenzeno e eluir com mistura de 1 volume de benzeno e 4 volumes de ter de petrleo 60-80 oCo O metoxiazobenzeno fonna faixa brilhante amarela, de 3 a 5 cm de profundidade, na parte superior da coluna. Imediatamente abaixo fonna-se faixa amarela, mais plllida, de aproximadamente 2 em de largura: corresponde ao azobenzeno. Oxido de alumnio com 7% de gua Passar xido de alumnio neutro trdratado atravs de tarnis de 106 pm e, em seguida, atravs de tamis de 53pm. Misturar 9 partes de material retido no tamis de 53 pm com I parte do material que passou atravs do mesmo tamis. Aquecer a mistura em fomo a 780-820C por 7 horas, esfriar, evitando contato com umidade, e transferir para recipiente bem vedado. Adicionar 7% de gua ao xido de alumnio anidro assim obtido, vedar o recipiente e misturar bem seu contedo, fazendo rolar o recipiente vedado. Deixar em repouso por, no mnimo, 12 horas, agitando ocasionalmente. xido de alumlnio com 4% de Igua Proceder como descrito para xido de alumnio com 7% de gua, adicionando apenas 4% de gua alumina anidra. Carmelose Substncia trocadora de ctioos, fracamente llcida, monofuncional na fonna fibrosa. Tratamento preliminar - Agitar parte de cannelose (carboximetilcelulose) com 15 volumes de hidroxido de sdio 0,5 M e deixar em repouso por 30 minutos. Remover o lquido sobrenadante e lavar o resduo com gua at que as llguas de lavagem mostrem pH 8,0. Agitar o resduo lavado com 15 volumes de cido clordrico 0,5 M e deixar em repouso por 15 minutos. Repetir o tratamento com cido e, fmalmente, lavar com gua at que as guas de lavagem mostrem realo praticamente neutra. Suspender em gua contendo 1% (P/V) de lcool benzlico e estocar at o momento de uso. Diatomita lavada (auxiliar de filtrao) Pesar 500 g de diatomita ca1cinada (tipo Celite 545) e adicionar 2000 ml de cido clordrico. Misturar, deixar em repouso por 12 horas, agi. tando ocasionalmente. Filtrar e lavar o resduo sobre o fl1tro com gua at realo neutra ao tomassol. Lavar com 500 ml de metanol e, em seguida, com 1000 ml de mistura de volumes iguais de metanol e ter. Secar o resduo lavado a lOOC at que 010 se perceba mais odor do solvente. Armazenar em recipientes bem vedados.

Oxido de alumlnio neutro Oxido de alumnio neutro, comercial, adequado para a cromatograf18 de coluna. Corresponde ao seguinte teste: - Empacotar em coluna cromatogrfica, me dindo 1 cm de dimetro e de comprimento adequado, xido de alumnio neutro em quantidade suficiente para fonnar coluna de 5 cm de altura.

quado para aquela determinao, assim como o tamanho de partculas adequado. Suporte de terra de diatomceas rseo Suporte de terra de diatomceas branco Tratase de grnulos brancos de slica consti tudos, principalmente, de esqueletos de diatomceas submetidos calcinao. Encontrase no comrcio sob vrias formas. As mais utilizadas so: - suporte de dltomceas lavado com cido. Tratase de suporte de diatomceas lavado com cido clordrico para removerimpurezas metlicas, reduzir atividade de superfcie e prevenir formao de cauda nos picos. - suporte de dltomceos silanizado. Trata-se de suporte de diatomceas tratado com dimetildiclorossiloxana ou qualquer outro agente silanizante, para reduzir a atividade de superfcie e prevenir formao de cauda nos picos. - suporte de diatomcetlS com lcali. Trata-se de suporte de diatomceas lavado com soluo de hidrxido de potssio para reduzir formao de cauda nos picos de compostos bsicos. Encontram-sedisponveiscomercialmentesuportes de diatomceas de alto desempenho. Tais suportes podem ser adequados para algumas determinaes. A monografia estabelecer, quando necessrio, o grau do suporte considerado adeTratase de grnulos rseos, obtidos a partir da diatomita natural, moldada em tijolos, com auxlio da argila, os quais so calcinados e que brados em seguida. Este suporte mais denso do que o suporte de terra de diatomceas branco e, como o anterior, tambm existe no comrcio com vrios graus de desempenho. Fases estacionrias Grande variedade de substncias qumicas so utilizadas como fase estacionria, incluindo macrogis, steres de alto peso molecular, arnidas, hidrocarbonetos, polissiloxanas e seus derivados e polmeros poliaromticos microporosos. A escolha da fase estacionria adequada para determinalo cromatogrfica deve ser objeto de selelo criteriosa. As monografias podero fazer referncia a tipos de fases estacionrias disponveis comer cialmente. No entanto, estas referncias nlo impedem o uso de produto de origem diferente, contanto que apresentem caractersticas seme lhantes. Padr6es internos Os reagentes utilizados como padres internos nlo devem conter impurezas que produzam picos capazes de interferir com a determinalio descrita na monografia.

A polarografia, mtodo analtico eletroqumico, fundamenta-se na medida da corrente eltrica resultante da eletr6lise de substncias eletroativas (reduzveis ou oxidveis) sob determinado potencial de eletrodo e condies controladas. Em outras palavras, a tcnica implica no registro do aumento da corrente em eletrodo polarizvel durante a eletr6lise de substncia dissolvida no meio eletroltico em funo do aumento da tenso aplicada ao sistema. O grfico desta evoluo da corrente em relao tenso - o polaro. grama - fornece informaes quali e quantitativas sobre constituintes eletroredutveis ou eletrooxidveis da amostra. Dentre as variantes de metodologia polarogr. fica, a mais simples a tcnica em corrente contnua. Requer - a exemplo da potenciometria - o emprego de dois eletrodos, o de referncia (geralmente eletrodo de calomelano saturado, ECS) e o microeletrodo indicador (geralmente eletrodo de mercrio gotejante, EMG). Em alguns casos empregase um terceiro eletrodo, auxiliar. O ECS - de elevada rea superficial - fornece potencial constante durante o ensaio, enquanto o EMG - gotas de mercrio de dimenses reprodutveis fluindo periodicamente da extremidade de capilar ligado ao reservatrio do metal - assume o potencial que lhe conferido pela fonte externa. O equipamento polarogrfico compreende - alm dos eletrodos - a cuba de eletr6lise, fonte de alimentao varivel, dotada de voltmetro e microampermetro e registrador grfico. De forma simplificada, a tcnica consiste na dissoluo da amostra (o mtodo tem sensibilidade para concentraes de espcie eletroativa na faixa de 10-2 a 10-4 M) em eletrlito de suporte, responsvel pela manuteno de pequena corrente residual, mas que se mostra inerte na faixa de potencial de transformao da amostra. Inicial mente, o controle de tenso da fonte (poten cirnetro de preciso) encontra-se totalmente fechado. Nestas condies, a tenso fomecida ao microeletrodo nula e no haver indicao de corrente no microampermetro. A abertura gradual do potencimetro far com que pequeno potencial alcance os eletrodos. Sob esta tenso, ainda reduzida, gua e eventuais ons derivados de impurezas da amostra tendem a adquirir eltrons no EMG (catodo, neste caso), reduzindo-se e provocando a indicaio de pequena passagem de corrente. Elevalo progressiva da tenso aplicada acentuar o processo de reduo e o aumento quase proporcional da corrente. Atinge-se afinal o potencial necessrio reduo da arnostra, o que se reflete em elevaio acentuada da corrente lida no microampermetro e registrada nopola

rograma. H, contudo, limite para a proporciona. lidade da elevao tenso-corrente. Enquanto a corrente se eleva (e a reduo se processa), ocorre diminuio progressiva da concentrao da espcie eletroativa original junto superfcie do eletrodo. Em dado momento - a velocidade da eletrlise sendo constante - tal concentrao atinge nvel insuficiente para permitir elevao adicional da corrente e esta ltima passa a ser limitada pela velocidade com a qual a espcie eletroativa conse gue migrar da pemeria da soluo eletroltica para a superfcie do EMG. Surge o patamar observado no polarograma (Fig. 1), sendo a corrente medida - ento denominada corrente de difuso - parmetro proporcional concentrao de espcie eletroativa na amostra (aspecto quantitativo da polarografia). Superado determinado nvel de tenso, a corrente volta a se elevar. Esse aumento causado pela reao do eletrlito de suporte. Sua presena, em elevadas concentraes, impede que as molculas eletroativas da amostra alcancem o microeletrodo por migrao eltrica e assegura, por isso, que a corrente limite seja efetivamente regulada apenas por difuso. Ao se empregar microeletrodo de mercrio gotejante, a superfcie do eletrodo constante-

mente renovada (forma-se gota nova a cada 3-5 segundos), ocorrendo, da, variao na corrente medida dentro de dado intervalo; a corrente mais baixa quando a gota se forma, chegando ao mximo no instante da queda. O fenmeno explica a forma "dente de serra" caracterstica da onda polarogrfica.
POLAROGRAMA

= =

nmero de eltrons necessrios reduo ou oxidao de uma molcula ou on de substncia eletroativa, coeficiente de difuslfo, em cm2js, concentrao de substncia eletroativa, em milimolesjlitro, massa do fluxo de mercrio, em mg/s, tempo de vida da gota, em s.

A Fig.l ilustra polarograma tpico (EMG), caracterizado por 4 fases distintas. Na fase A aparece a corrente capacitiva, ie, incorporada corrente fardica, ir, resultante da oxidao ou reduo de impurez-as do eletr6lito suporte ou da amostra. O conjunto destas correntes denomina-se corrente residual, ir (ir = ie + ir). Na fase B do polarograma ocorre a corrente fardica, ir, devida converslo da substncia sob ensaio. A eletrodecomposilo leva escassez desta substncia junto ao microeletrodo, verificando-se o patamar (fase C) onde aparece a corrente limite, i\. Esta compreende a soma das correntes residual e de difuslo (i\ = = ir + id) em que a corrente de difuslo - proporcional concentrao da espcie eletroativa na amostra - tem seu valor determinado pela inverso daequafo

Duas outras correntes indesejveis - a de migrao e a de conveclo - podem incorporar a corrente limite. A primeira suprimida pelo emprego de eletrlito de suporte inerte na faixa de potencial empregada, em concentraes, no mnimo, 100 vezes maiores que as da espcie eletroativa. A corrente de convecllo, por sua vez, minimizada pela n[o agitao da soluo. Finalmente, a fase D do polarograma, no qual ocorre reverso da proporcionalidade tensocorrente, corresponde reduo de outras espcies eletroativas, quando presentes, ou, mais freqen temente, eletrlise do suporte.
Equao de IIkovic

A equalo de Illcovic estabelece relaes entre variveis compreendidas na medida polarogrfica e a corrente de difuslo no EMG:

A constante 708 - englobando constante natural e o valor do faraday - estabelecida para operafo a 25C e aplicvel polarografia de corrente contnua amostrada, na qual, em vez do registro contnuo de corrente, efetua-se apenas a leitura da corrente ao trmino da vida da gota de mercrio, permitindo obtenO de polarograma linear. Entretanto, ao empregarse instrumentos dotados de amortecedor de "dente de serra" no registrador, considera-se a corrente mdia dos pulsos. A corrente de difuso obtida segundo a equao de Ilkovic passa a ser a mdia para toda a vida da gota de mercrio. Neste caso a constante adquire o valor 607. As variveis compreendidas na equao de Illcovic devem ser controladas para que a corrente de difuslo seja efetivamente proporcional concentrao de espcie eletroativa na amostra analisada. Alguns ons e molculas orgnicas em soluo aquosa modificam seu coeficiente de difuso razlo de 1 a 2% para cada grau centgrado aumentado, tomando necessrio que a clula polarogrfica tenha sua temperatura controlada com tolerncia de O.S oCo Os parimetros m e t, relacionados com dimenslo e velocidade de renovalo da gota de mercrio, dependem da geometria do capilar, sendo a corrente de difuslo proporcional raiz quadrada da altura da coluna de mercrio. Alturas adequadas - medindo-se da extremidade do capilar at o nvel de mercrio no reservatrio - situam-se entre 40 e 80 em. O dimetro interno do capilar neste caso de 0,04 mm para comprimentos entre 6 e 15 cm. A altura exata do capilar ajustada para permitir a formao de uma gota a cada 3-5 segundos, com circuito aberto e capilar imerso no ele ~rto sob ensaio. Assim. se durante um ensaio em particular todos os parmetros - excelo da concentralo da espcie eletroativa - forem mantidos constantes, a equao de Dkovic pode ser escrita como

id

708

corrente de difuslo, em pA, medida imediatamente antes da queda da gota de mercrio do capilar, constante dependente de diversos parmetros, incluindo a unidade adotada para as variveis, dimenso da gota de mercrio e instante da medida de ici,

em que K representa o conjunto de variveis mantidas constantes. Esta relao direta entre corren te de difusio e concentrao usualmente adotada mediante a determinao prvia da corrente de difuslo de solUo padrlo de referncia, de concentrao conhecida. Em seguida. sob condies idnticas,

detennina-se a corrente de difuso da amostra e, fmalmente, sua concentra!o:

Efetuada a reduo da espcie eletroativa (EMG catodizado), muitas vezes a onda polarogrfica eleva-se acentuadamente antes de cair, de forma igualmente acentuada, at o valor da corrente limite. O fenmeno denominado mximo em que Ap e AA correspondem s alturas das polarogrflco e a corrente correspond~nte recebe ondas polarogrficas do padro e da amostra, o nome de corrente de adsoro (ia)' Traz o respectivamente. inconveniente de dificultar a medida da onda polarogrfica (corrente de difuso) e suas causas Potencial de meia-onda - ainda pouco esc1arecidas - compreendem a adsoro de eletrlito superfcie da gota de A medida da altura da onda polarogrfica para mercrio. A eliminao do mximo polarogrfico fms de anlise quantitativa deve ser efetuada traando-se linhas retas rentes aos picos das , contudo, facilmente efetuada mediante adio oscilaes da corrente residual e da corrente . de quantidades diminutas de determinados tensoativos (supressores de mximo) ao meio eletrolimite e unindo-se, por meio de terceira reta ltico. Sobressaem, para tal fim, soluo de gelaparalela ao eixo das abcissas, os prolongamentos das duas primeiras. A reta vertical traada pas- tina a 0,005% (p/V) e soluo de vermelho de metila a 0,01 % (pjV), entre outras. sando pelo ponto de infiexo da onda polarogr. fica, correspondendo metade da distncia entre a Advertncia corrente residual e a corrente limite (I = 1/2id). A projeo desta reta sobre o eixo das ordenadas Vapores de mercrio so txicos. Ao manusear fornece o chamado potencial de meia-onda, o metal, trabalhar em rea ventilada e evitar parmetro empregado para caracterizar substncias derrames que, caso ocorram, devem ser imediata eletroativas (aspecto qualitativo da polarografia). e cuidadosamente recolliidos. O potencial de meia-onda, El/2, dado em volts versus ECS (eletrodo de referncia), salvo quando houver especificao diferente, e seu valor como POLAROGRAFIA DE PULSO parmetro de identificao decorre de sua indePolarografia de pulso consiste em variante de pendncia da concentrao e caractersticas do tcnica, superior, pela preciso e sensibilidade, EMG. Entretanto, varia em funo da composio, polarografia de corrente contnua no doseamento pH e temperatura do meio eletroltico. e na identificao de elevado nmero de substncias em baixas concentraes, incluindo elementos Remoo de oxig6nio de trao, metablitos e, evidentemente, frmacos. Sua sensibilidade, cerca de 10 vezes mais elevada O oxignio reduzido no EMG em duas etapas, convertendo-se inicialmente em per6xido de que a da polaroKIafia contnua, permite doseamen hidrognio e, em seguida, em gua. O fato de tos na faixa de 10-6 M. Em lugar da aplicao linearmente progressiva tais reaes ocorrerem em potenciais mais nega tivos que zero volts, versus ECS, podendo assim de potencial e medida contnua da corrente desen volvida, a polarografia de pulso compreende a interferir com a onda 'polarogrfica da amostra, toma necessrio eliminar o gs dissolvido na aplicao de pulsos de potencial crescente ao EMG, coincidentes com o perodo fmal de vida soluo previamente determinao. A melhor fonna consiste em borbulhar nitrognio isento de das gotas de mercrio, cada pulso apresentando potencial ligeiramente superior ao anterior. A oxignio atravs da soluo durante um perodo de 10 a 15 minutos imediatamente antes do corrente, por sua vez, amostrada no instante fmal de durao do pulso de potencial, perodo ensaio, tomando a precauio de previamente

em que P e A correspondem, respectivamente, a padro e amostra. Uma vez que polargrafos, em sua maioria, so dotados de registradores automticos, mais fcil determinar graficamente correntes de difuso pela medida - com auxl1io de rgua - da altura da onda polarogrfica (ver Fig. 1). Os valores anotados, em em, podem ser diretamente aplicados frmula, sem necessidade de sua converso em unidades de corrente eltrica:

saturar o nitrognio (para evitar alteraes na soluo eletroltica devidas evaporao) borbulhando-o atravs de pequeno volume de soluo eletroltica em recipiente separado. :e importante manter a cuba eletroltica parada e sem vibraes durante o registro polarogrfico com o intuito de se evitar a fonnao de correntes de conveco. Em conseqncia, necessrio retirar o tubo de nitrognio da soluio durante o registro. Solues alcalinas podem ser desoxigenadas pela adio de bissulfito de s6dio, desde que este no interaja com integrantes da soluo eletroltica. Mximo polarogrfico

F. BIlAS. IV, 1988

.::!
~
l

." ."
-(

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:I

.
E

.t::

0,7

0,6

0,5

0,4

0,3

0,2

Potencial p aplicado (volts)

i /0

Medida da corrente

Fig. 3 Pico polarogrfico obtido na polarografia de pulso diferencial.

Fig. 2 Medida da corrente em relao ao tempo na polarografia de corrente contnua (A); na polaropafia de pullo (B) e na polaropafia de pulso diferencial (e).

no qual a corrente capacitiva adquire valor praticamente nulo e a corrente residual se compe quase que exclusivamente de corrente fardica. Por outro lado, a tcnica de pulsos nA'o provoca

diminuio acelerada da camada de difuso (concentra"o de espcie eletroativa junto ao eletrodo), propiciando a obtenio de correntes de difuso mais elevadas para concentraes equivalentes. Da o aumento de sensibilidade inerente tcnica. Outro aspecto favorvel da polarografia de pulso a maior facilidade na medida da corrente limite, isenta de oscilaes, ao contrrio do que ocorre na polarografia de corrente contnua. Na polarografia de pulso diferencial, pulsos constantes, de pequena amplitude, so sobrepostos a uma rampa de potencial de tenso linearmente crescente. A medida da corrente efetuada duas vezes a cada pulso - imeditamente antes da aplicao do pulso e, novamente, em seu instante fmal - registrando-se apenas a diferena entre os dois valores medidos (Fig.2). O registro grfico deste sistema de medida diferencial fornece curva semelhante derivada da onda polarogrfica, mostrando pico caracterstico (Fig. 3). O potencial do pico polarogrfico corresponde a EI/2 - tili/2, em que LiE representa a altura do pico. Graas natureza do polarograma, que apresenta picos em vez de ondas polarogrficas tradicionais, a polarografia de pulso diferencial propicia resoluo mais elevada. a ponto de permitir doseamentos simultaneos de espcies eletroativas com potenciais de meia onda prximos entre si, em concentraes da ordem de 10-7 M.

V.2.19. DETERMINAO

DO pH

DETERMINAO POTENOOMtTRIA

DO pH

A determinao potenciomtrica do pH feita pela medida da diferena de potencial entre dois eletrodos adequados, imersos na soluo em exame. Um destes eletrodos sensvel aos ons hidrogenio e o outro O eletrodo de referncia, de potencial constante. A equao que expressa a medida potenciomtrica de uma clula : pH
=

pHt + (E - Et)/K,

E Et pH pHt K

potencial medido quando a clula contm a soluo problema, potencial medido quando a clula contm Soluestampo para calibrao do a soluo tampo, medidor de pH valor de pH da soluo problema, S'oempregadas visando aferio do aparelho, valor de pH da soluo tampo, e pennitindo linearidade nas respostas em relao variao do potencial por unidade de s alteraes de potencial observadas. As mais varia'o de pH - teoricamente equivale importantes s'o: tetraoxalato de potssio 0,05 M, a 0,0591631+ 0,000198 (t-25), em que t biftalato de potssio 0,05 M, fosfato equimolar corresponde temperatura na qual 0,05 M, tetraborato de sdio 0.01 M e hidrxido se opera. de clcio saturado a 25 oCo

Os aparelhos comercialmente utilizados para a detenninalo de pH so instrumentos potenciomtricos, providos de amplificadores eletrnicos de corrente com clula de vidro-calomelano. Estes s'ocapazes de reproduzir valores correspondentes a 0,02 de unidades de pH. A escala de pH cali brada no s6 em rnilivolts. mas tambm em unidades correspondentes de pH. Dessa fonna, no h necessidade de se aplicar a equao acima, que traduz a medida eletromtrica de pH. Uma vez que asmedidas de atividadehidrogeninica so sensveis a variaes de temperatura, todos os medidores de pH so equipados com ajuste eletrnico de temperatura.

Tamperatura

C 10 15 20 25 30 35 40

Tatraoxalato da potssio O,05M

Siftslato da potssio O,05M

Fosfato aquimolar

Tatraborato de s6dio O,01M

Hldr6xido da cillcio saturado

a25C 13.00 12,81 12.63 12,45 12,29 12,13 11,98

1,67 1,67 1,68 1.68 1,68 1.69 1.69

4,00 4,00 4.00 4,01 4,02 4,02 4,04

6,92 6,90 6.88 6,86 6,85 6.84 6,84

9.33 9,28 9,23 9,18 9,14 9,10 9.07

Tetraborato de s6dio,O,OI M - Dissolver3,80 g de Na2B40710H20, em gua, para perfazer Tetraoxalato de potssio, 0,05 M - Dissolver 1000 mI. Evitar absoro de dixido de carbono. Hidrxido de clcio, saturado a 25 c - Agitar 12,61 g de KH3(C204)22H20 em gua, para perfazer 1000 mI. excesso de hidrxido de clcio com guae decantar Biftalato de potssio, 0,05 M - Dissolver a 2SoC antes de usar. Proteger de modo a evitar 10,12, de KHCIlH404, previamente dessecado absoro de dixido de carbono. Tais solues devem ser recm-preparadaScom a 100 C durante 1 hora, em gua, para perfazer 1000mI. gua isenta de dixido de carbono e empregadas Fosfato equimolar, 0,05 M - Dissolver 3,53 g em prazo de trs meses, tomando-se cautela para de Na2HP04 e 3,39 g de KH2P04, cada qual evitar o crescimento de fungos e bactrias. Aceitase dessecado a 120C durante 2 horas, em gua, para o emprego de conservantes desde que nio interfira na medio potenciomtrica do pH. perfazer 1000 mI.

MODO DE OPERAO Aferio do aparelho

amostras, usar gua destilada isenta de dixido de carbono; 2. A primeira determinao fornece valor varivel, havendo necessidade de proceder a novas leituras. Os valores encontrados posteriormente no devero variar mais do que O,OS de unidade em trs leituras sucessivas; 3. Para determinaes que exijam alta preciso, as temperaturas das solucs-tantpio e problema, dos eletrodos e das guas de lavagem no devem diferir acima de 2C entre si. Assim, para que se reduzam os efeitos de histerese trmica ou eltrica dos eletrodos, as solues devem estar mesma temperatura por, no mnimo, 30 minutos antes do incio da operao; 4. E importante que, aps a utilizao do aparelho, se conserve o eletrodo em soluo apropriada, normalmente de KCI.
DETERMINAO COLORlMI!TRICA DO pU

1. Retirar o bquer contendo soluo de KCI na qual est mergulhado o eletrodo quando o medidor nlo est em uso; 2. Lavar o eletrodo com jatos de gua desti lada e enxug-Iocom papel de filtro; 3. Imergir o eletrodo em soluio-tamplo de referncia, verificando-se a temperatura em que se vai operar; 4. Ajustar o valor de pH at o valor tabelado, mediante o boto de calibrao; S. Lavar o eletrodo com vrias pores de um segundo tampo de referncia, imergir o eletrodo neste e verificar o valor de pH registrado. Este nlo deve apresentar variaes que superem 0,07 ( 0,07) do valor tabelado para este segundo padro. Vale dizer que existem determinados aparelhos que possuem acoplados frascos com detergentes aninicos, empregados como solues de lavagem entre cada uma das operaes de determinao ou aferio dos valores de pH. A gua tambm se presta a esta funo; 6. Se nio houver preciso nas medidas, veri ficar possveis danos nos eletrodos e troclos.

1. Aps aferio conveniente, lavar o eletrodo com gua (ou solues prprias) e com vrias pores da soluo-problema. Para diluio das

Baseia-se no emprego de solues indicadoras ou de papis indicadores, que tm a propriedade de mudar de colorao conforme a variao do pH. Neste caso trata-se de medida aproximada, indicando, apenas, uma faixa de valores, mais ou menos larga, conforme o indicador empregado. A determinao levada a efeito adicionandose gotas da soluo indicadora soluo em exame ou umedecendo-se com esta soluo papis indi cadores e observando-se a mudana de colorao. As cores desenvolvidas pelos indicadores em diversasfaixas de pH constam do anexo XII.1.

V.2.20. DETERMINAO DE AGUA

Diversas substncias fannacopicas encontramse na fonna hidratada ou contm gua absorvida, tornando relevante o estabelecimento de teoreslimite e sua determinao em ensaio de especifi

cao. Trs mtodos so descritos - volumtrico, destilao azeotrpica e gravimtrico -, sendo recomendada para cada substncia a adoo do mtodo especificado na respectiva monografia.

Baseia-se na reao quantitativa entre gua e soluo anidra de iodo e di6xido de enxofre dissolvidosem piridina e metanol. A amostra pode tanto ser titulada diretamente (mtodo direto) quanto por retomo (mtodo indireto). No ltimo caso, incorpora-se excesso de reagente amostra e, aps aguardar-se o tempo necessrio reao quantitativa, titula-se o excesso de reagente com soluo padro de gua em metanol. Esta tcnica - de uso irrestrito - especialmente recomendada para substncias que liberam lentamente seu contedo de gua.

opo ao preparo do reagente, pode-se recorrer a solues reagentes comerciais. Padronizao do reagente Colocar quantidade suficiente de metanol no frasco de titulao para cobrir os eletrodos e adicionar quantidade suficiente de reagente para fornecer a cor caracterstica da viragem ou a indicao de 100-150 J.LA no microamperCC metro quando da aplicao de 200 mV entre eletrodos. Na determinao de traos de gua (menos de 1%), empregar tartarato de sdio diidratado (C4H4 Na206 2H2O). - cujo teor de gua aps secagem a 150C durante 3 horas corresponde a 15,66% - como padro de referncia. Rapidamente, juntar 150 a 350 mg de sal, exatamente pesados, ao frasco de titulao e titular at o ponto de equivalncia. O ttulo do reagente, em mg de gua/ml de reagente, fornecido pela equao em que 18,2 = peso molecular da gua, 230,08 = peso molecular do tartarato de sdio diidratado, p = massa, em rng, da tomada de ensaio de sal, V volume, em mI' de reagente consumido na titulao. Para a determinao precisa de quantidades significativasde gua (mais de 1%), usar gua como referncia. Rapidamente, transferir 25 a 250 mg de gua, exatamente pesados por diferena, para o frasco de titulao e titular at o ponto de equivalncia. Calcular o ttulo do reagente, T, em mg de gua/ml de reagente, pela frmula (P/V), em que P a massa, em mg, da gua e V o volume, em mI, de reagente consumido. Padronizao de soluo padrio de gua (m6todo indireto) Preparar solufo de gua em metanol, diluindo 2 mI de gua em quantidade suficiente de metanol para completar 1000 mI. Padronizar esta soluO titulando alquota de 25 mI com reagente previamente padronizado conforme o procedimento acima. Calcular o contedo de gua, em mg/ml de soluo, pela frmula

APARELHO

Admite-se o emprego de qualquer equipamento que permita a excluso adequada da umidade atmosfrica e a determinao do ponto final da titulafo. Para substncias incolores, possvel detectar-se o ponto de equivalncia pela mudana de cor do reagente, de amarelo-canrio para mbar. Viragem inversa observada ao se adotar a titulao por retorno. Todavia, mais freqente e preciso determinar-se o final da titulao eletrometri camente. Compreende o uso de dispositivo eltrico capaz de gerar diferena de potencial de 200 mV entre dois eletrodos de platina (rea e distanciamento da ordem de 5 mm2 e 2,5 em, respectivamente) imersos na soluo a titular. Ao ser atingido o ponto de equivalncia, ligeiro excesso de reagente provoca elevao brusca do fluxo de corrente para 50 a 1SO p.A durante 30 segundos a 30 minutos, dependendo da natureza da amostra (o perodo menor quando a substncia solvel no reagente). Reagente de Karl Fischer Adicionar 125 g de iodo mistura de 670 mI de metanol e 170 ml de piridina e resfriar. Transferir 100 mI de piridina para proveta de 250 mI e, mantendo a piridina fria em banho de gelo, passar corrente de di6xido de enxofre atravs do so1vente at que seu volume atinja 200 mI. Juntar, lentamente e sob agitao, esta soluo mistura de iodo fria previamente preparada. Misturar at dissoluo do iodo e aguardar 24 horas antes de padronizar. Quando recm-preparada, a soluo reagente neutraliza cerca de 5 mg de gua/mI, mas deteriora-se com rapidez. Da a convenincia de sua padronizao at uma hora antes de usar ou diariamente, quando em uso contnuo. Proteger da luz quando em uso. Armazenar o reagente sob refrigerao-emfrasco mbar, provido de tampa esmerilhada hermtica. Como

em que V' = volume, em mI, de reagente consumido, T = ttulo do reagente, em mg/ml.

PR.OCEDIMENTO

Determinar teores de gua pelo mtodo direto, salvo quando houver especificao diversa na monografia. Mtodo direto. Salvo quando a monografia especificar de modo diverso, transferir .35 a 40 ml de metanol para frasco de titulao e titular com o reagente padronizado at viragem visualou eletromtrica, com o intuito de eliminar a gua presente como impureza no metanol (desconsiderar o volume consumido, pois ele no entra nos clculos). Rapidamente, adicionar ao frasco quantidade exatamente pesada de amostra, tal que contenha 10 a 250 mg de gua (ou a quantidade especificada na monografia), misturar e titular at viragemvisual ou eletromtrica. Calcular o contedo de gua, em mI, na tomada de ensaio pela frmula (V x T) em que V o volume, em mI, de reagente consumido e T o ttulo do reagente. Mtodo indireto (por retomo). Quando a monografia assim o especificar, transferir 3S a 40 ml de metanol ao frasco de titulalo e titular com o reagente padronizado at viragem visual ou eletromtrica, com o intuito de eliminar a gua presente como impureza no metanol (desconsiderar o volume consumido, pois ele no

entra nos clculos). Rapidamente, adicionar ao frasco quantidade exatamente pesada de amostra tal que contenha 10 a 250 mg de gua; misturar e juntar volume exatamente medido de reagente, sendo este volume superior ao necessrio para a neutralizao da gua presente na tomada de ensaio. Deixar em repouso pelo tempo necessrio para que a reao se complete e titular o excesso de reagente com soluo-padro de gua, at viragem visual ou eletromtrica. Calcular o contedo, em mg, de gua na tomada de ensaio pela frmula

em que T = ttulo do reagente, V' = volume, em mI, do reagente adicionado em excesso aps a incorporao da tomada de ensaio, V = volume, em mI, de soluo-padro de gua necessrio neutralizao do excesso de reagente, R = volume, em mI, de reagente por mI de soluo-padro de gua, determinado na padronizalo desta ltima. Caso a monografia especifique, calcular o teor de gua em porcentagem.

 semelhana do mtodo volumtrico, o azeotrpico permite a determinao de gua contida em amostras de natureza mltipla. A gua presente destilada com tolueno - solvente com o qual praticamente imiscvel - e separada em tubo receptor apropriado aps resfriamento. Convm, contudo, empregar tolueno previamente saturado com gua para evitar resultados baixos devido dissoluo de gua residual no solvente anidro.
APAREIJIO

Empregar o aparelho proposto por Dean e Stark (Figura). Compreende balo de fundo redondo A, com 500 ml de capacidade, conectado pelo tubo cilndrico D ao tubo receptor B. Este tem capacidade para 5 mI, graduado com subdivises de 0,1 mI, assegurando erro de leitura no superior a 0,05 ml e pode, opcionalmente, ser provido de torneira. A parte superior do tubo D liga-se sempre por meio de juntas esmerilhadas - ao condensador de refluxo vertical C. Partes do balo e do tubo D podem ser guarnecidas com tecido de amianto para maior isolamento trmico. O calor para a destilao deve preferivelmente ser fornecido por aquecedor eltrico dotado de controle por reostato ou banho de leo.
PROCEDIMENTO

Apllelho trpico.

pan determinafo

de aua pelo mtodo azeo-

Limpar o tubo receptor e condensador com mistura sulfocrmica, enxaguar com gua e secar em estufa. Introduzir no balo seco 200 mI de tolueno e cerca de 2 ml de gua e destilar durante 2 horas. Resfriar e, aps cerca de meia hora, medir o volume de gua acumulado no tubo graduado. Adicionar ao balo quantidade de amostra tal que contenha 2 a 3 ml de. gua. Apresentando a substncia natureza pastosa, embrulh-Ia em folha de alumnio fazendo pacote de dimenso apropriada sua passagem pelo gargalo do frasco. Se a substncia induzir borbulhamento, juntar areia lavada e seca em quantidade suficiente para cobrir o fundo do frasco (opcionalmente, juntar alguns cacos de material cermico poroso ou tubos capilares de vidro, do tipo empregado para determinao de ponto de fuso, veda-

dos em uma das extremidades por fuso ) com o intuito de regularizar a ebulio. Aquecer moderadamente o frasco contendo tolueno e amostra durante 15 minutos e, quando o tolueno comear a destilar, regular o aquecimento para que destilem 2 gotas por segundo. Destilada praticamente toda a gua, acelerar a velocidade de destilao para 4 gotas por segundo. Concluda a destilao da gua, verter cerca de Ia a 15 ml de tolueno pela boca do condensador de refluxo e prosseguir a destilao durante 5 minutos adicionais. Remover, ento, a fonte de calor, aguardar o resfriamento do tubo receptor temperatura ambiente e deslocar eventuais gotculas de gua retidas na parede do tubo receptor com o auxlio de arame de cobre com extremidade envolta em borracha (latex). Uma vez concluda a separao das fases, ler o volume de gua no tubo receptor (descontando o volume inicial) e calcular a porcentagem de gua na tomada de ensaio.

Para substncias qumicas, adotar as especifi caOes da monografia, seguindo o procedimento descrito em V.2.9. Drogas vegetais devem ser

preparadas e ensaiadas conforme as instrues em V.4.2.3. Para substncias biolgicas, PQr sua vez, proceder conforme indicado na monografia.

A solubilidade de substncia pura em dado solvente, temperatura constante, parmetro caracterstico da substncia, podendo, pois, servir para fms de identificao e avaliao de grau de pureza. Neste princpio, baseia-se a anlise de solubilidade por fases. O procedimento consiste na adio de pores crescentes de amostra a volumes constantes de solvente no qual a substn cia analisada mostra apenas ligeira solubilidade, visando obteno de soluo saturada desta substncia. Uma vez promovido o equilbrio do sistema - por agitao prolongada, sob temperarora constante - detennina-se o contedo total de soluto na soluo sobrenadante (geralmente por tcnica graVimtrica) e traa-se o diagrama de solubilidade por fases, plotando a composio da soluio, em mg de soluto por g de solvente (ordenadas), pela composio do sistema. em mg de amostra adicionada por g de solvente (abcissas). A Fig. 1 ilust!a diagrama deste tipo. Ao longo do segmento AB, a totalidade do slido dissolve e encontrada na soluo (inclinao corresponde unidade). No ponto B a amostra satura a soluo e adies subseqentes nio acarretam aumento em sua concentrao. A inclinao do segmento de reta BC , portanto, nula e a interseco do prolongamento desta reta com o eixo dos Y fornece o valor da solubilidade da substncia.

Fig. 2 Diqrama de solubilidade contendo duas substncill4.

por fases de amoatra

i g
,g
.E!
u-

.. ...
Sl

'~ 'g

8
FiJ. I Diapama de solubilidade por fases de amostra constituda por uma s substncia.

E ""

Se a amostra for constituda de duas substncias (uma delas impureza da outra, por exemplo), o diagrama assume a forma ilustrada na Fig.2. O segmento AB apresenta inclinaio unitria; o ponto B indica saturao da soluo com relao a um dos componentes da amostra (geralmente aquele que est presente em maior proporo); o segmento BC indica a solubilizao do segundo componente e o segmento CD a saturao da soluo com este ltimo (inclinao nula). O valor da inclinao do segmento BC - fase em que somente o segundo componente solubilizado - corresponde proporo deste compo

nente na amostra. A subtrao deste valor da unidade fornece o contedo do primeiro compo nente na amostra, permitindo o emprego da f6nnula (11) 100 para a obteno do teor. A inclinao, I, obtida pela frmula (Y 2 - Y di I(X2-X1), em queYlo Y2 e Xlo X2 correspondem, respectivamente, a projees de pontos do segmento de reta BC sobre a ordenada (composio da solulro) e a abcissa (composio do sistema). A extrapolalfo do segmento BC fornece o limite de solubilidade, SI, em mg de soluto por g de solvente, do primeiro componente, enquanto o prolongamento da reta do segmento CD at o eixo dos Y leva soma das solubilidades dos dois componentes, SI + S2 . A ocorrncia de desvios pronunciados nos pontos que constituem os segmentos de reta do diagrama indica falta de equilbrio no sistema, embora estes tambm possam ser atribudos existncia de soluo slida ou a desvios do comportamento terico. Se necessrio, a inclinalro I pode ser calculada por aproximao grfica ou a partir do mtodo estatstico dos mnimos quadrados. Uma peculiaridade da anlise de solubilidade por fases nlfo ser tcnica aplicvel a misturas cujos componentes esto presentes na amostra na proporo de suas solubilidades. Neste caso particular, ambos os componentes promovem saturao no mesmo ponto, fornecendo, como resultado, diagrama de fases equivalente ao de substncia pura.
ESCOUlA DE SOLVENTE

A escollia de solvente para anlise de solubilidade por fases baseada na solubilidade do componente presente em maior proporo na amostra e no mtodo de doseamento adotado para a determinao da concentrao da soluo formada. Sendo mais usual a tcnica gravimtrica, convm

ao solvente apresentar volatilidade suficiente para permitir sua evapora!o a vcuo, mas insuficiente para dificultar operaes de transferncia e pesagem. Recomendam-se solventes com ponto de ebulilro entre 60 e 150C. Em termos de solubilidade, conveniente que o sOlvente apresente capacidade de solubilizao de amostra em propor!o no inferior a 4 mg/g nem superior a 50 mg/g. A solubilidade tima compreende a faixa de 10a 20mg. Recomendaes adicionais incluem a inrcia do solvente frente aos componentes da amostra (prevendo-se, inclusive, a possibilidade de forma!o de solvatos ou sais) e o emprego de solvente de pureza e concentrao conhecida (traos de impurezas afetam intensamente a solubilidade), admitindo-se, contudo, o emprego de misturas.
APAREUlAGEM

empregado nos ensaios, est ilustrada na Fig. 3. Recipientes de especifica!o diferente so adrnissveis desde que hermticos e apropriados tcnica descrita.

Composio do sistema Pesar com exatido um mnimo de 7 ampolas de 15 ml rigorosamente limpas. Transferir quantidades crescentes exatamente pesadas de amostra para cada ampola, de modo que a primeira contenha quantidade apenas ligeiramente menor que a solubilizvel em 5 ml de solvente e a ltima contenha ligeiro excesso de amostra. Aps transferir 5,0 ml de solvente para cada ampola, resfri-Ias em mistura de gelo seco e acetona e sellas com maarico ar/gs, tomando a precauo de guardar fragmentos de vidro resultantes do processo. Permitir s ampolas atingir a temperatura ambiente e pes.las, juntamente com seus respectivos fragmentos de vidro. Calcular a composi'o do sistema, em mg/g, para cada ampola, pela frmula: 1000(M2-Md/(M3-M2)' em que M2 corresponde massa da ampola contendo amostra; M1 a massa da ampola yazia e M3 a massa da ampola contendo amostra, solvente e eventuais fragmentos de vidro. Equillbrio O perodo necessrio ao estabelecimento de equilbrio nos sistemas contidos nas ampolas varivel de acordo com a natureza da amostra, mtodo de agitao (rotao ou vibraio) e temperatura. A experincia indica prazo mdio de 1 a 7 dias para agitaio por vibrao e 7 a 14 dias para o processo rotacional. Para confirmar a promoio de equilbrio, aquecer a penltima ampola da srie a 40 c com o intuito de obter supersaturao. O resultado positivo se o ponto correspondente a esta ampola for coerente com os demais no diagrama de fases. Todavia, resul tado diverso no significa necessariamente no ter sido atingido o equilbrio. H substncias com tendncia a permanecer em soluio supersaturada e, sendo este o caso, cabe a execuo de srie de anlises, variando-se o perodo de espera com o fim de assegurar a coerncia dos pontos da curva de solubilidade. Composio da soluo Atingido o equillbrio, colocar as ampolas em suporte apropriado para que permaneam em posio vertical, com os gargalos acima do nvel da gua do banho termostatizado. Aguardar a decantao dos slidos nas ampolas, abri-Ias e coletar 2,0 ml de cada uma por meio de pipeta provida de chumao de algodo ou de outro material capaz de atuar como mtro. Remover o material mtrante da pipeta e transferir o lquido

Compreende banho-maria termostatizado, frascos e ampolas apropriadas e balana analtica, com preciso de 10 J,lg. O banho d'gua provido de termostato com tolerncia de controle de temperatura no superior a 0,1 c, especialmente na faixa de 25-30C, usual para os ensaios. O banho equipado com haste horizontal rotativa (25 rpm) provida de garras fixadoras para as ampolas. Como alternativa, pode ser usado vibrador (100 a 120 vibraes/ segundo) igualmente provido de garras fixadoras de ampolas. A ampola - com capacidade para 15 ml -, ao lado do chamado frasco de solubilidade tambm

3mm
70mm 27mm

1
m

f
I- 2S mm-j

Fig. 3 Ampola utizada na anlise de solubilidade por fases.

lmpido para frasco de solubilidade (Fig. 3) tarado e devidamente identificado, pesando cada frasco aps a operalo. Esfriar os frascos em banho de gelo seco e acetona e, em seguida, evaporar o solvente sob presso reduzida. Aumentar gradativamente a temperatura de evaporalo, tomando a precauo de nlo exceder o limite compatvel com a estabilidade da amostra e dessecar o resduo at peso constante. Calcular a composio da solu'o em cada frasco, em mg/g, pela frmula 1000 (P3 -P1)!(P2 -P3), em que P3 corresponde massa do frasco contendo o resduo da evaporalo; P1 a massa do frasco de solubilidade vazio (tara) e P2 a massa do frasco contendo a solulo. Traar diagrama de fases com base nos valores obtidos e determinar a pureza porcentual da amostra em fun'o da inclinalo do segmento de reta.
Aplicao da anlise de solubilidade por fases na purificao de substncias

aumentada em relafo amostra original, prestando-se - aps evaporalo do solvente - determinalo qualitativa das impurezas, a fase adequada, pela elevada pureza, ao preparo de pa dres de referncia para outros ensaios analticos.

PROCEDIMENTO

Enquanto as solues obtidas no processo analtico descrito contm essencialmente todas as impurezas presentes na amostra em proporlo

Pesar quantidade apropriada de amostra e suspend-Ia em solvente adequado de modo a - alcanado o equillrio - dissolver somente 10% do material. Fechar o frasco e aguardar estabelecimento do equilbrio temperatura ambiente (em geral, 24 horas so suficientes). Em seguida, recolher a soluo sobrenadante lmpida e evaporar, temperatura ambiente ou prxima desta, at secra. Pelo fato de a solu'o conter as impurezas da amostra original, obtm-se, por este procedimento, material em que a proporlo de impurezas encontra-se aumentada, sendo a rela'o de enriquecimento aproximadamente igual raz'o da massa da amostra pela massa de slidos dissolvidos no volume de solvente empregado. Purificar o resduo nio dissolvido por lavagem e secagem (padr'o de referncia).

E1etroforese consiste em tcnica de separao quantitativa para componentes de mistura de vrias espcies inicas. Num campo eltrico unidirecional, cada on migra isoladamente, independente dos outros ons, em direo ao plo de sinal de carga oposto ao seu, conservando sua estrutura e suas propriedades. A mobilidade eletrofortica funo da carga eltrica do on, do gradiente de tensfo do campo e da viscosidade. do meio. A separao processa-se em suporte embebido em lquido tamponado de pH constante ou de gradiente de pH, que se coloca dentro de cuba adequada. Os suportes recomendados so: papel de filtro, acetato de celulose, gel de gar ou de agarose, gel de amido, gel de poliacrilamida, camadas porosas de vidro em p, areia, amido, cio reto de polivinila, celulose ou sOica-gel. A aparelhagem consiste geralmente em cuba fechada dentro da qual se coloca suporte com o material a analisar entre dois compartimentos eletrdicos contendo tampo. Este recipiente costuma ser retangular, com dimenses de acordo com o nmero mximo de anlises simultneas a executar. Aplicamse tenses de corrente contnua de 100 a 300 volts, para ons grandes, e de 1000 a 10.000 volts para ons menores; as corren tes usadas nl'o ultrapassam 20 m/A. A temperatura deve ser mantida constante, se necessrio por resfriamento. Aps a separao eletrofortica, os componentes

separados 810 identificados por mtodos ade quados. A sensibilidade, que normalmente permite detectar microgramas de substncias, pode ser aumentada por tcnicas imunolgicas. Todas as substncias ionizveis podem ser analisadas por eletroforese; para as nfo.polares indica-se a anlise cromatogrfica. A eletroforese serve para: a) caracterizar uma substncia pela comparao de sua mobilidade com aquela de um padro; b) verificar a pureza de um produto pela ausncia de contaminantes inicos de cargas diferentes e c) determinar as concentraes relativas dos componentes inicos de uma mistura. A versatilidade da eletroforese permite escolher tcnicas apropriadas para cada caso dentro de grande variedade de condies, conforme se observa nas tabelas seguintes. O gradiente de voltagem indicado em kilovolt por metro kV/m -, onde o numerador representa a tenso entre os eletrodos e o denominador a distncia entre eles. Assim, uma tenso de 200 V, por exemplo, entre eletrodos distantes de 10 em ter gradiente de 2 kV/m. O suporte usado nestes exemplos seguintes o papel de fJ1tro. As mobilidades relativas foram calculadas em relao mobilidade de on mais lento (mobilidade 1).

ramplo
A

pH

Mat.ri.1 ctions inorgnicos aminas cidos orgnicos nucleot(deos pept(deos e aminocid05 ester6ides hidrossolveis vitaminas hidrossolveis fosfatldeos protelnas pigmentos biliares

kV/m

Revelador cido violrico

p. dimeti laminobenzalde(do

3,6

A B

3,6 4,9 9,0

6 5 8 3 5 2 4 2

nitrato de crio amoniacal difeni Icarbazida ninidrina dinitrofeni lidrazina espec(fico para cada vitamina molibdato de amnio negro de amido cido fosf6rico quinidina dif(ll'llcarbazida Dragendorff oxalato de anilina vanilina cores pr6prias

8 6 3 3 4
1

9,0

nions inorgnicos purinas alcal6ides monossacar(deos polissacarldeos corentes hidrossolveis

E1etroforese consiste em tcnica de separao quantitativa para componentes de mistura de vrias espcies inicas. Num campo eltrico unidirecional, cada on migra isoladamente, independente dos outros ons, em direo ao plo de sinal de carga oposto ao seu, conservando sua estrutura e suas propriedades. A mobilidade eletrofortica funo da carga eltrica do on, do gradiente de tendo do campo e da viscosidade. do meio. A separao processase em suporte embebido em lquido tamponado de pH constante ou de gradiente de pH, que se coloca dentro de cuba adequada. Os suportes recomendados so: papel de filtro, acetato de celulose, gel de gar ou de agarose, gel de amido, gel de poliacrilamida, camadas porosas de vidro em p, areia, amido, cIoreto de polivinila, celulose ou slica-gel. A aparelhagem consiste geralmente em cuba fechada dentro da qual se coloca suporte com o material a analisar entre dois compartimentos eletrdicos contendo tampo. Este recipiente costuma ser retangular, com dimenses de acordo com o nmero mximo de anlises simultneas a executar. Aplicam-se tenses de corrente contnua de 100 a 300 volts, para ons grandes, e de 1000 a 10.000 volts para ons menores; as corren tes usadas nJo ultrapassam 20 m/A. A temperatura deve ser mantida constante, se necessrio por resfriamento. Aps a separaoeletrofortica, os componentes

separados so identificados por mtodos adequados. A sensibilidade, que normalmente permite detectar microgramas de substncias, pode ser aumentada por tcnicas imunolgicas. Todas as substncias ionizveis podem ser analisadas por eletroforese; para as nJo-polares indica-se a anlise cromatogrfica. A eletroforese serve para: a) caracterizar uma substncia pela comparao de sua mobilidade com aquela de um padro; b) verificar a pureza de um produto pela ausncia de contaminantes inicos de cargas diferentes e c) determinar as concentraes relativas dos componentes inicos de uma mistura. A versatilidade da eletroforese permite escolher tcnicas apropriadas para cada caso dentro de grande variedade de condies, conforme se observa nas tabelas seguintes. O gradiente de voltagem indicado em kilovolt por metro kV/m -, onde o numerador representa a tenso entre os eletrodos e o denominador a distncia entre eles. Assim, uma tenso de 200 V, por exemplo, entre eletrodos distantes de 10 em ter gradiente de 2 kV/m. O suporte usado nestes exemplos seguintes o papel de mtro. As mobilidades relativas foram calculadas em relao mobilidade de on mais lento (mobilidade = 1).

Tamplo A

pH 3,6

Matarial

kV!m 6 5 8
3

R8velador

A B

3,6 4,9 9,0 9,0

ctions inorgnicos aminas cidos orgnicos nucleotfdeos peptldeos e aminocidos ester6ides hidrossolveis vitaminas hidrossolveis fosfat (deos prote(nas pigmentos biliares

cido violrico
p. dimeti laminobenzalde(do

5 2 4 2

nitrato de crio amoniacal difenilcarbazida ninidrina dinitrofenilidrazina espec(fico para cada vitamina molibdato de amnio negro de amido cido fosf6rico quinidina difenilcarbazida Dregendorff oxalato de anilina vanilina cores prprias

8 6 3
3

nions inorgnicos purinas alcal6ides monossacar(deos polissacar(deos corantes hidrossolveis

4
1

Templo

pH plridina (mil cldo atio glacial (mil acet8to de Idlo anidro (g) barato de I6dlo (g) berblt8ll6dico (li) mat8nol (mil q.s.p. 6gua destilada (mil q.s.p

3,6 10 100
-

1.000

1.000 -

4,9 100 100 4,1

9,0

9,0

8,24

6,4 1.000

1.000

Tabela 3 - Ctions inOqniCOl

MobildilcMs re/ativ.

TampioA

As Ag Fa+++

1 5 10

Pb++ Cu Ca+

11 19 23

Cd Pd+ AI++

28 36 39

Zn Ni++ eo++

43 45 54

Mn Mg++ Fe++

55 57 62

Tabela 4 - Aminu gUeina mescalina arginina histidina lisina 1,0 6,0 6,2 6,5 6,5 gramina ornitina tiramina afeclrlna ereatina 6,8 7,0 7,2 8,0 9,2

Tampo A fanetilamina histamina propilamina cadaverina putrescina 10,2 14,5 15,2 16,0 16,8 etilamina dimatilamina metilamlna amnia 18,0 20,2 23,0 25,0

Tabela S - cidos oqnicos 6- aminolevulinato hidroxlbutirato glut8rato stlccinato 1,0 7,8 8,2 9,4 oxalato lactato malato galaetu ronato

TampfoA 10,6 12,9 14,7 14,7 levulinato maleato eitrato tartarato 15,5 19,0 20,0 21,7

Tabela 6 eldo cido cido cido eitld(fjeo aden(fjeo guanmeo uridflieo (C) (A) (G) lU) 1,0 2,9 5,9 6,2 AA GC CU AG

Nuc1eotdeos 4,4 5,3 5,6 6,8 AU GG GU UU

Tampo A 7,1 9,1 9,4 9,6 ACC AAC GCC ACG 3,4 4,7 5,5 6,8 ACU AAG AGG AUU 7,1 8,1 10,2 10,7

cido asprtieo cido glutlmio taurina hidroxiprolina eistina asparagina

1,0 2,8 4,1 4,6 4,8 5,0

prolina metionina glutamina tirosina fenilalanina triptofano

5,1 5,3 5,3 5,5 5,5 5,7

.rina eitrulina leueina ilOleuelna treonina valina

5,7 5,7 5,9 5,9 5,9 6,2

alanina glfeina arginina histidina Iisina ornitina histamlna

6,6 7,0 17,6 18,0 18,0 18,1 20,8

estron. testosteron. metiltestolterona

delOxicortona androsterona progesterona

fo.fato de piridoxa. difo.fato de tiamina 6c:ido 8ICrbico fosfato de piridoxamina riboflavina

cido nicodnico monofOlfato de tiamina nicotinamida piridoxina tiamina

9,8 10,3 19,9 22,6 23,7

TampioC gam81llobulina beta-globulina 1,0 1,7 2-alfa-globulina 1-a'f81llobulina

2,2
2,7

perlodato borato telurato telurito iodato matafosfato

1,0 3,0 3,5 4,4 4,6 6,1

ortofOlfato metavanadato molibdato tiocianato fluoreto brorn&to

5,4 6,5 5,6 6,8 6,1 6,1

IUlfito ferricianeto cloreto IUlfato persulfato c1oreto

6,4 6,6 6,9 7,1 7,3 7,3

iodeto brometo nitrito nitrato terrocianeto tiossulfato

7,4 7,6 7,6 7,6 7,7 7,8

papaverina colchiclna ioimbina 8Itricnina brucina quinina

1,0 1,6 2,9 2,9 3,6 4,0

cinchonina p1locarpina haro(na morfina escopolamina tubocurarina

4,4 4,7 4,8 5,0 5,4 5,6

nicotina coce(na mescalil'la homatropina atropina efadrina

6,7 6,7 8,1 8,1 8,2 9,3

Tabela 13 sacarOl8 maltOl8 lactose glicarol O-manose 1,0 1,9 2,3 3,1 4,3

- Sacardeos 4,7 5,2 5,6 5,7 5,7

TamploD O-galactOl8 L-lOrb0S8 D-glicose DxIlOl8 5,8 6,1 6,2 6,3

O-ribose O-sorbitol O-frutOl8 L- arabinOl8 D-manitol

Acido vlolfJrico

Cont6m l,75g de cido violrico IC4H3N304 H:zOI em gua a 100,0 ml.

p- Dimerilaminobenzaldefdo

Cont6m l,Og de pdimetilaminoblnzalde(do clorldrico.

Nitrato de c8rio moni.ca'

IC9HuNOl

em 90,0 ml de acatona e 10,0 ml de cido

Cont6m 2,Og de nitrato de c6rio-amoniacal {NH41:zCeIN0316 em cido n(trico 1 Ma

Difenilcarbllzidll

100,0 mio

Borrifar com solulo 0,2 9 por cento IplVl de sulfato cprico ICuS04 5H:zOI e secar a 100 oCo Expor durante 5 minutos a vapores de amon(aco tratar em seguide com soluo 0,1 9 por cento IplVl de difanilcarbazida em etanol.
Ninidrina

Dissolver 0.4 9 de ninidrina e 0,2 9 de cloreto cobaltOlo {CoCI:z6 H:zOI em isopropanol a 100,0 ml.
Dinitrofenilidrtlz/na

Misturar 0,3 9 de 2.4-dinitrofanilldrazlna.

Mol/bdato de amtmio

0,3 ml de cido clor(drico em matanol a 100,0 ml.

Dissolver 0,685 9 de molibdato de s6dio {Na:zMo04 2H:zOI e 0,040 9 de sulfato de hidrazina em 10 ml de gua. Juntar 10 ml de 6cido sulfrico. completar com gua a 100,0 ml.
Negro de amido

Dissolver 0,5 9 de negro de amido {C22H14N,09S2Na21 em 48 ml de matanol. Juntar 5 ml de cido ac6tico glacial. completar com gua al00 ml.
Ac/do fo,frico

cido ortofOlf6rlco a 15,0 por cento {VIVI.

Qu/nid/na

Dissolver 0,3 9 de quinidinaIC20H:Z4N:zO:zI.m

Drtlf/tlndorlf

clorof6rmio a 100,0 ml.

Dissolver 1,7 9 de nitrato bsico de bismuto e 20 g de cido tartrico em 80 ml de gua. Antes do uso, misturar 4 ml desta solulo com 2 mf de solulo de lodeto de potssio a 4,0 por cento lp/Vl. Juntar 12 9 de cido tartrico. 60 ml de gua.
Oxa/ato de anil/na

Dissolver 1,3 9 de 6cido oxlico {C:z H:zO 2 H:zOI e 0,9 ml de anilina em gua a 100,0 ml.
Vanil/na

Misturar antes do uso a solulo etan61ica de vanilina {CsHa031 a 1,0 por cento lp/Vl com volume igual de cido percl6rico a 3,0 por cento {p/VI.

V.3. MTODOS QUMICOS

V.3.1. REAOES DE IDENTIFICAO

Os mtodos clssicos de identificao de funes ou detenninados grupos qumicos pre sentes em frmacos consistem em reaes gue resultam em formao de precipitado, produto colorido, desprendimento de gs, descoramento do reagente usado ou outro fenmeno qualquer facilmente perceptvel. Estes ensaios no so aplicveis a misturas de frmacos.

Alcal6ide

Dissolver alguns miligramas da amostra em 5 ml de gua, juntar cido clordrico SR at acidificar a soluo e, em seguida, verter 1 ml de iodobismutato de potssio SR; formase imedia tamente precipitado alaranjado ou vermelhoalaranjado.

1) Juntar a amostra a hidrxido de amnio 1) Aquecer a amostra com quantidade igual de 6M; formase precipitado branco gelatinoso, cido oxlico; desprendem-se vapores cidos insolvel em excesso do mesmo reagente. com odor caracterstico de cido actico. 2) Adicionar a amostra a hidrxido de s6dio 2) Aquecer a amostra com cido sulfrico SR M ou sulfeto de s6dio SR; formase precipitado e etanol; desprende-se acetato de etila, de odor branco gelatinoso, solvel em excesso do mesmo caracterstico. reagente. 3) Tratar solulo neutra da amostra com 3) soluo da amostra juntar hidr6xido de cloreto frrico SR; produz-se cor 'vermelho- amnio 5 M at que se forme turvao. Adi escura, que desaparece pela adio de cidos cionar, em seguida, 3 a 4 gotas da soluo recmminerais. preparada de quinalizarina 0,05% em hidrxido 4) Dissolver a amostra em gua, adicionar de sdio 1%. Aquecer at ebulio, resfriar e 5 gotas de nitrato de lantnio SR, 2 gotas de acidificar com excesso de cido actico 5 M; iodo 0,1 Mel gota de hidrxido de amnio SR. produz.se cor violetaavermelhado. Aquecer cuidadosamente at ebulilo. Aps alguns minutos forma-se precipitado azul ou Amina aromtica primria aparece colorao azul intensa. Acidificar a soluo da amostra com cido clordrico 2 M e juntar 4 gotas de nitrito de s6dio Acetila SR. Aps 1 a 2 minutos, acrescentar 1 ml de Colocar a amostra em tubo de ensaio e juntar betanaftol SR; aparece cor alaranjada intensa 3 gotas de cido fosfrico SR. Fechar o tubo com ou vermelha, formandose geralmente precipitado. tampa atravessada por outro tubo de ensaio menor cheio de gua e em cujo exterior se depositou uma Amnia e amina aliftica voltil gota de nitrato de lantnio SR. Aquecer o conDissolver a amostra em tubo de ensaio, acresjunto em banho-maria durante cinco minutos (cer. centar xido de magnsio e aquecer se necessrio; tas substncias acetiladas se hidrolisam com dificuldade; neste caso a mistura deve ser aquecida desprendem-se paulatinamente vapores alcalinos, lentamente, at ebulio, sobre chama direta). que escurecem o papel de prata-mangans colo Transferir a gota de nitrato de lantnio SR a uma cado na parte superior do tubo. cpsula de porcelana e misturar com uma gota de iodo SR. Colocar na borda da mistura uma gota AmtJnio, on de hidrxido de amnio 2 M. Na zona de contato Juntar amostra excesso de hidrxido de s6dio dos dois lquidos aparece lentamente cor azul que M a frio; ocorre desprendimento de amnia, persiste por pouco tempo. de odor caracterstico, e que muda para azul a

cor vermellia do papel de tomasso1. A decomposio acelerada pelo aquecimento.

Bicarbonato

1) Tratar a soluo da amostra, fortemente acidificada por cido clordrico (no mximo 2 M), com sulfeto de hidrognio SR; forma-se precipitado alaranjado de su1feto de antimnio, insolvel em hidrxido de amnio 6 M, Irias solvel em sulfeto de amnio SR, hidrxido de sdio 2 M e cido clordrico concentrado. 2) Dissolver a amostra em soluo de tartarato de sdio e potssio SR; aps resfriamento, juntar, gota a gota, sulfeto de sdio SR; forma-se preci. pitado vermellio-alaranjado solvel em hidrxido de sdio 2M.

1) Tratar a amostra com cido mineral; produzse efervescncia com desprendimento de gs incolor que, ao reagir com soluo de hidrxido de clcio SR, forma imediatamente precipitado branco. 2) A uma soluo fria da amostra juntar fenolftalena SI; a soluo permanece inalterada ou fica apenas levemente colorida.
Bismuto, (on

Dissolver a amostra em ligeiro excesso de cidos ntrico ou clordrico e diluir com gua; forma-se precipitado branco que, tratado com sulfeto de hidro~nio, passa a marrom; o composto resultante solvel em mistura quente de partes iguais de cido ntrico e gua, mas insolvel em su1fetode amnio SR.
Bissu/fito

1) A uma SOlUO amoniacal da amostra adio cionar sulfeto de sdio SR e acidificar com cido clordrico diludo; formase precipitado amarelo, insolvel em cido clordrico, mas solvel em solues alcalinas. 2) Aquecer 5 ml da soluo da amostra fortemente clordrica em banho-maria com volume igual de h~pofosfito de sdio SR; formase precipitado de cor marrom a preta. Caso se tratar de A(V), a reduo mais lenta; o acrscimo de iodeto de potssio SR exercer efeito cata1tico.
Barbitrico sem substituinte no nitrognio

Tratar a amostra com cido clordrico 3 M; desprende-se dixido de enxofre, reconhecido por seu odor pungente caracterstico e por escurecer papel de fJ1tro umedecido com nitrato de meICrio(I)SR.

A uma soluo metanlica da amostra juntar algumas gotas de soluo contendo nitrato de cobalto SR e cioreto de clcio SR, misturar e acrescentar, com agitao, algumas gotas de hidr6xido de sdio 2 M; forma-se precipitado azul-violeta.

1) A uma soluo da amostra acidulada com cido clordrico, juntar algumas gotas de soluo de iodo 0,1 % (p/V) e de soluo de lcool polivi m1ico 2% (p/V); produz-se cor verde intensa. A reao alterada por agentes de oxidao ou reduo. 2) Tratar a amostra com cido sulfrico, acrescentar metanol e levar a mistura ignio; ela queima com chama de bordos verdes.

1) Tratar soluo da amostra com cido sulfrico M; forma-se precipitado branco, insolvel nos cidos clordrico e ntrico. 2) Colocar a amostra na zona redutora de chama; esta adquire cor verde-amarela, que se apresenta azul quando vista atravs de vidro verde.

1) soluo da amostra acidificada com cido sulfrico SR, juntar gua de cloro SR; desprende se bromo, que confere cor parda soluo; agitando-se esta com clorofrmio, o solvente adquire cor variando de vermellio a marromavermelhado e a camada aquosa permanece incolor. 2) Tratar a soluo da amostra com cido ntrico SR e nitrato de prata SR; forma-se precipitado caseoso branco levemente amarelado, insolvel em cido ntrico e pouco solvel em hidIxido de amnio 6 M.

1) Tratar soluo neutra da amostra com cIoreto frrico SR; forma-se precipitado amarelo escuro, solvelem ter etlico. 2) Acidular soluo moderadamente concentrada da amostra com cido sulfrico M; formase precipitado de cido benzico, facilmente solvelem ter etlico.

1) Umedecer a amostra com cido clordrico e lev-Ia zona redutora da chama; aparece cor vermellio-alaranjadatransitria. 2) Dissolver a amostra, juntar 2 gotas de

vermelho de metila SI, neutralizar com hidrxido de amnio 6 M, acrescentar cido clordrico 3 M, gota a gota, at acidular a soluo e verter oxalato de amnio SR; forma-se precipitado branco de oxalato de clcio, insolvel em cido actico 6 M, mas solvel em cido clordrico SR.

esverdeado (para este ensaio usar quantidade pequena de clorato, devendo-se tomar cuidado extremo ao execut-lo, pois o gs que se forma decompe-se de modo explosivo acima de 45 - utilizar capela).

De

1) Tratar a amostra com cido mineral; produzse efervescncia, com desprendimento de gs incolor que.~ ao reagir com hidrxido de clcio SR, forma imediatamente precipitado branco. 2) A uma soluo fria da amostra solvel juntar fenolftalena SI; aparece cor vermelha.

1) Tratar soluo da amostra, acidificada com cido ntrico, com nitrato de prata SR; formase precipitado branco caseoso, insolvel em cido ntrico, mas solvel em ligeiro excesso de hidr6xido de amnio 6 M 2) Misturar a amostra seca com igual peso de dixido de mangans, umedecer com cido sulfrico SR e aquecer brandamente; desprende-se cloro, identificado pelo odor e pela produo de cor azul em papel de amido iodetado umedecido.

1) Tratar soluo da amostra com cido sulfrico M; forma-se precipitado branco, insolvel em cido clordrico 3 M ou cido ntrico 2 M, mas solvel em hidrxido de s6dio M aquecido, em acetato de amnio SR e em excesso de cido sulfrico M. 2) Tratar soluo da amostra, isenta de cidos minerais, com eromato de potssio SR; forma-se precipitado amarelo, insolvel em cido actico 6 M, mas solvel em hidr6xido de s6dio M e em cido ntrico, a quente. Caneto Tratar soluo da amostra com sulfato ferroso SR, hidrxido de s6dio SR e c1oreto frrico SR, aquecer at ebulio e acidular com cido clordrico; produz-se colorao ou precipitado azul. Se a quantidade de cianeto presente for pequena, forma-se soluo coloidal de colorao azulesverdeada. Ctrato A 15 ml de piridina adicionar alguns miligramas da amostra dissolvida ou suspensa em 1 m1 de gua, agitar, juntar 5 m1 de anidrido actico mistura, agitar novamente; aparece cor vermelha clara.

1) Tratar a soluo da amostra com ferrocianeto de potssio SR; forma-se precipitado marromavermelhado, insolvel em cidos diludos, mas solvel em hidr6xido de amnio. 2) Tratar solulo da amostra com cido clordrico e limalhas de ferro metlico; deposita-se pelcula vermelha de cobre metlico. 3) Tratar solulo da amostra com excesso de hidr6xido de amnio 6 M; forma-se primeiro precipitado azulado e, em seguida, soluo fortemente azulada.

[ster
Juntar amostra soluo metanlica de clori drato de ldroxilamina SR e soluo de hidr6xido de potssio a 10% (PN) em lcool, aquecer at ebulio, resfriar, acidular com cido clordrico SR e juntar solulIo de cloreto frrico SI; produzse cor vermelho-azulada ou vermelha.
Ferro

Tratar a amostra com sulfeto de amnio SR; forma-se precipitado preto, que se dissolve em cido clordrico 3 M, com desprendimento de gs sulfdrico, earactrizado pelo papel acetato de chumbo.

1) Tratar solulIo da amostra com nitrato de prata SR em meio de cido ntrico SR; no se forma precipitado. Verter cido sulfuroso ou soluo recente de nitrito de s6dio SR a esta mistura; forma-se precipitado branco, insolvel em cido ntrico SR, mas solvel em hidr6xido de amnio 6 M. 2) Submeter a amostra ignio; forma-se cIo reto, identificado por ensaios apropriados. 3) Tratar a amostra seca com cido sulfrico; ocorre crepitalo desprendendo-se gs amarelo

1) Tratar soluo cida da amostra com ferrocianeto de potssio SR; forma-se precipitado azul escuro, que nllo dissolve por adio de cido clordrico SR, mas decomposto por hidr6xido des6dio 2M 2) Tratar a amostra com tiocianato de amnio SR; produz-se cor vermelha intensa que no desaparece com adio de cidos minerais diludos,

mas pode ser extrada com ter etI1ico, passando a colorao vermelha para a camada et6rea.

1) Tratar soluo da amostra com ferricianeto de potssio SR; forma-se precipitado azul escuro, insolvel em cido clordrico 3 M, mas decomposto por hidr6xido de s6dio M. 2) Tratar soluo da amostra com hidrxido de sdio M; formase precipitado branco-esverdeado, que passa rapidamente a verde e, em seguida, quando agitado, a marrom.

SR, com carbonato de sdio SR; forma-se, por aquecimento, precipitado branco, solvel em cloreto de amnio SR. 2) Umedecer a amostra com cido clordrico e aquecer na zona redutora da chama; esta adquire cor vermelha intensa.

1) Tratar soluo neutra da amostra com nitrato de prata SR; forma-se precipitado amarelo, solvel em cido ntrico 2 M ou hidr6xido de amnio 6M. 2) Tratar soluo ntrica da amostra com molibdato de amnio SR; formase precipitado amarelo, solvel em hidrxido de amnio 6M; a reao acelerada pelo calor.

1) Tratar soluio da amostra com hidr6xido de sdio SR; forma-se precipitado branco, que se dissolve com a adio de cloreto de amnio SR. 2) Tratar soluo da amostra, na presena de cIo reto de amnio SR, com carbonato de amnio SR; nio se forma precipitado mas, ao se adicionar fosfato de sdio SR, formase precipitado cristalino branco, insolvel em hidrxido de amnio 6M.

1) Aquecer soluio da amostra, acidulada por cido sulfrico SR, corri sulfato cprico SR; formase precipitado vermelho. 2) Tratar soluo da amostra com cloreto mercrico SR; formase precipitado branco, que se toma cinzento na presena de excesso de hipofosfito.

1) Tratar soluilo da amostra com sulfeto de hidrognio SR; forma-se precipitado preto, insolvel em sulfeto de amnio SR e em cido ntrico 2 M fervente. 2) Aplicar soluo da amostra, sem excesso de cido ntrico, em lmina de cobre brilhante; forma-se depsito que, ao ser polido, se toma brilhante e prateado.

1) Tratar soluo da amostra com hidr6xido de sdio M; forma-se precipitado amarelo. 2) Tratar soluo neutra da amostra com iodeto de potssio SR; forma-se precipitado escarlate, muito solvel em excesso de reagente.

1) Tratar soluio da amostra com gua de cloro SR, gota a gota; desprendese iodo, que muda a cor da soluo de amarela para vermelha; agitandose esta soluo com clorofrmio, este adquire cor violeta. 2) Tratar soluilo da amostra acidificada com cido ntrico SR, com nitrato de prata SR; forma se precipitado amarelo caseoso, insolvel em cido ntrico SR e hidrxido de amnio 6 M.

1) Tratar

a amostra com hidrxido

de sdio

M; o sal decompe-se, dando cor preta.

2) Tratar soluio da amostra com cido clordrico SRj forma-se precipitado branco, que escurece ao ser tratado com hidrxdo de amnio 6 M. 3) Tratar soluio da amostra com iodeto de potssio SR; forma-se precipitado amarelo que, com o tempo, pode passar a verde.

Lactata
Tratar soluio da amostra, acidulada por cido sulfrico SR, com permanganato de potssio SR e aquecer a mistura; desprende.se acetaldedo, identificado pelo odor caracterstico.

1) Tratar a soluo da amostra moderadamente concentrada e alcalinizada por hidrxido de sdio

I) Aquecer a amostra com cido sulfrico e cobre metlico; desprendem.se vapores vermelhopardos (realizar em capela). 2) Tratar soluio da amostra com igual volume de cido sulfrico, esfriar a mistura e juntar 0,5 ml de soluo de sulfato ferroso 0,5 M; na interface produz-se cor parda a roxa.

mas pode ser extrada com ter ett1ico, passando a coloralo vermelha para a camada et6rea.

1) Tratar soluo da amostra com ferricianeto de potssio SR; forma-se precipitado azul escuro, insolvel em cido clordrico 3 M, mas decomposto por hidr6xido de s6dio M. 2) Tratar soluo da amostra com hidr6xido de s6dio M; forma-se precipitado branco-esverdeado, que passa rapidamente a verde e, em seguida, quando agitado, a marrom.

SR, com carbonato de sdio SR; forma-se, por aquecimento, precipitado branco, solvel em cloreto de amnio SR. 2) Umedecer a amostra com cido clordrico e aquecer na zona redutora da chama; esta adquire cor vermelha intensa.

I) Tratar soluio neutra da amostra com nitrato de prata SR; forma-se precipitado amarelo, solvel em cido ntrico 2 M ou hidr6xido de amnio 6M. 2) Tratar soluo ntrica da amostra com molibdato de amnio SR; formase precipitado amarelo, solvel em hidr6xido de amnio 6M; a reao acelerada pelo calor.

1) Tratar soluo da amostra cOm hidr6xido de s6dio SR; forma-se precipitado branco, que se dissolve com a adio de cloreto de amnio SR. 2) Tratar soluo da amostra, na presena de cloreto de amnio SR, com carbonato de amnio SR; no se forma precipitado mas, ao se adicionar fosfato de sdio SR, formase precipitado crista lino branco, insolvel em hidrxido de amnio 6M.

I) Aquecer soluo da amostra, acidulada por cido sulfrico SR, com sulfato cprico SR; forma-se precipitado vermelho. 2) Tratar soluo da amostra com cloreto mercrico SR; formase precipitado branco, que se toma cinzento na presena de excesso de hipofosfito.

1) Tratar soluo da amostra com sulfeto de hidrognio SR; forma-se precipitado preto, inso lvel em sulfeto de amnio SR e em cido ntrico 2 M fervente. 2) Aplicar soluo da amostra, sem excesso de cido ntrico, em lmina de cobre brilhante; forma-se dep6sito que, ao ser polido, se toma brilhante e prateado.

1) Tratar soluo da amostra com hidr6xido de s6dio M; forma-se precipitado amarelo. 2) Tratar soluo neutra da amostra com iodeto de potssio SR; forma-se precipitado escarlate, muito solvel em excesso de reagente.

1) Tratar soluo da amostra com gua de cloro SR, gota a gota; desprendese iodo, que muda a cor da soluo de amarela para vermelha; agitandose esta soluo com clorof6rmio, este adquire cor violeta. 2) Tratar solulo da amostra acidificada com cido ntrico SR, com nitrato de prata SR; formase precipitado amarelo caseoso, insolvel em cido ntrico SR e hidr6xido de amnio 6 M.
Lacrata

I) Tratar

a amostra com hidr6xido

de s6dio

M; o sal decompe-se, dando cor preta.

2) Tratar solulo da amostra com cido clordrico SRj forma-se precipitado branco, que escurece ao ser tratado com hidrxido de amnio 6 M. 3) Tratar soluo da amostra com iodeto de potssio SR; forma-se precipitado amarelo que, com o tempo, pode passar a verde.

Tratar soluo da amostra, acidulada por cido sulfrico SR, com perrnanganato de potssio SR e aquecer a mistura; desprende.se acetaldedo, identificado pelo odor caracterstico.

1) Tratar a soluo da amostra moderadamente concentrada e alcalinizada por hidr6xido de sdio

1) Aquecer a amostra com cido sulfrico e cobre metlico; desprendem.se vapores vermelhopardos (realizar em capela). 2) Tratar solulro da amostra com igual volume de cido sulfrico, esfriar a mistura e juntar 0,5 ml de soluo de sulfato ferroso 0,5 M; na interface produz-se cor parda a roxa.

I) Tratar a amostra com cidos minerais diludos ou com cido actico 5 M; desprendem-se vapores pardacentos (realizar em capela). 2) Tratar papel de amido iodetado com soluo da amostra; o indicador se cora de azul. 3) Adicionar a amostra soluo acidificada de permanganato de potssio SR; desaparece a cor.

insolvel em cido ntrico SR, mas facilmente solvel em hidr6xido de amnio 6 M 2) Tratar a soluo da amostra com hidr6xido de amnio 6 M e pequena quantidade de formaldedo SR; por aquecimento, deposita-se espelho de prata metlica na superfcie do recipiente: Salicilato 1) Tratar a solUlo diluda da amostra com cio reto frrico SR; produz-se cor violeta. 2) Tratar solulo moderadamente concentrada da amostra com cido mineral; forma-se precipitado cristalino branco de cido saliclico, que funde entre 156 e 160 oCo

1) Tratar soluo neutra ou alcalina com cloreto de clcio SR; forma-se branco, insolvel em cido actico solvel em cido clordrico. 2) Tratar soluo acidificada quente com permanganato de potssio SR; a cor.

da amostra precipitado 6 M, mas da amostra desaparece

1) Tratar soluo da amostra, acidulada por cido sulfrico SR, com perxido de hidrognio 3% (p/V) SR; a cor desaparece a frio. 2) Tratar soluo da amostra, acidulada por cido sulfrico SR, com cido oxlico SR em soluo aquecida; a cor desaparece.
Perxido

I) Colocar soluo da amostra, acidulada, com cido clordrico SR, na zona redutora da chama; esta adquire cor amarela intensa. 2) Tratar soluo da amostra com cido clor drico ou ntrico e, em seguida, com acetato de uranila e zinco SR; forma-se preipitado cristalino amarelo-ouro, aps agitao por alguns minutos.

Tratar soluo da amostra, ligeiramente acidulada por cido sulfrico SR, com dicromato de potssio SR; aparece cor azul intensa. Agitando a mistura com igual volume de ter etlico e deixando os lquidos se separarem, a cor azul passa para a camada etrea.

1) Tratar soluo neutra da amostra com cloreto frrico SR; forma-se precipitado marrom claro. 2) Tratar soluo neutra da amostra com nitrato de prata SR; forma-se precipitado branco, facilmente solvel em hidr6xido de amnio 6 M.

I) Tratar solulo alcalina da amostra com tetrafenilborato sdico SR; forma-se precipitado branco. 2) Tratar solulo da amostra com cido actico SR e I ml de cobaltinitrito de sdio SR; forma-se imediatamente precipitado amarelo ou amarelo alaranjado, na ausncia de ons amnio. 3) C~!ocar a soluo da amostra, acidulada com cido clordrico SR, na zona redutora da chama; esta adquire cor violeta; a presena de pequena quantidade de sdio mascara a cor. 4) Tratar soluo da amostra com cido percl6rico SR; forma-se precipitado branco cristalino.

1) Tratar soluo da amostra com cloreto de brio SR; formase precipitado branco, insolvel em cido clordrico SR e em cido ntrico SR. 2) Tratar solulo da amostra com acetato de chumbo SR; forma-se precipitado branco, solvel. em acetato de amnia SR, mas insolvel em cido clordrico ou ntrico SR. 3) Tratar solulo da amostra com cido clordrico SR; no se forma nenhum precipitado (distiniio do tio ssulfato ). Sulfito 1) Tratar a amostra com cido clordrico 3M; desprendese dixido de enxofre, reconhecido por seu odor pungente caracterstico e por escurecer papel de fl1tro umedecido com nitrato mercuroso SR. 2) Acidificar soluo da amostra com cido clordrico SR, aquecer com algumas gotas de permanganato de potssio SR e juntar gotas de cIo reto de brio SR; forma-se precipitado branco.

I) Tratar soluo da amostra com cido clordrico; formase precipitado caseoso branco,

1) Dissolver alguns miligramas da amostra em gua, acidificada com cido actico SR, adicionar uma gota de soluo a I % de sulfato ferroso e uma gota de perxido de hidrognio SR; produz-se cor amarela fugaz. Juntar hidrxido de sdio 2 M gota a gota; produz-se cor azul intensa. 2) Acidificar soluo da amostra com cido sulfrico M, juntar algumas gotas de resorcinol SR e adicionar, cuidadosamente, cido sulfrico, de modo a se formarem duas camadas; aquecendo em banho-maria, por alguns minutos, na interface aparece anel vermelho.

logo a amarelo, e desprende.se dixido de enxofre, reconhecido pelo odor. 2) Tratar soluo actica da amostra com cloreto frrico SR; produz-se cor violeta escura que desaparece rapidamente. Xantina Tratar a amostra com 2 gotas de soluo concentrada de perxido de hidrognio. concentrado e 5 gotas de cido clordrico 2 M, e aquecer at secura em banho-maria; obtmse resduo ver melho-amarelado que, tratado com hidr6xido de amnio 2 M, muda pal'llvermelho-violeta.

Tratar soluo da amostra com cloreto frrico SR; produzse cor vermelha, que nlo desaparece pela adilo de cidos minerais moderadamente concentrados e pode ser extrada com ter, passando a coloralo vermelhapara a camada etrea.

1) Tratar solua:oda amostra com ferrocianeto de potssio SR; forma-se precipitado branco, insolvel em cido clordrico 3 M 2) Tratar solulo neutra ou alcalina da amostra com sulfeto de amnio SR; formase precipitado branco. 3) Tratar solulo da amostra com soluo de hidrxido de sdio 2 M, gota a gota; forma-se 1) Tratar soluo da amostra com cido clor precipitado branco, t1ocoso, solvel em excesso de drico; forma-se precipitado branco, que passa hidrxido de sdio SR.

V.3.l.2.

IDENTIFICAO DE ESTERIDES POR CROMATOGRAFIA EM CAMADA DELGADA

PROCEDIMENTO

Preparar cromatoplaca utilizando Kieselguhr G como suporte. Introduzir a cromatoplaca na cuba contendo o solvente de impregnao e deixar desenvolver at que o solvente atinja o topo da cromatoplaca. Remover a cromatoplaca da cuba e deixar evaporar o solvente. Preparar soluo da amostra a 0,25% (p/V) e soluo do padro a 0,25% (P/V),- utilizando como solvente mistura de 9 volumes de clorofrmio e I volume de metanol. A no ser que a monografia estabelea diferen temente, aplicar sobre a cromatoplaca 2,.d da soluo de amostra, 2,.d da soluo padro e 2,.d mistura 1: I das solues da amostra e do padro. Desenvolver o cromatograma com o eluente especificado na monografia, deixando-o subir no mesmo sentido que o solvente de impregnao. Remover a cromatoplaca da cuba, deixar evaporar o eluente, aquecer a cromatoplaca a 120C por 15 minutos e nebulizar com soluo de cido sul frico a 10% (VIV) em etanol a 96%. Aquecer a 1200C por mais 10 minutos, deixar esfriar e exami nar luz normal e luz ultravioleta (366 nm). A mancha principal do cromatograma obtida com a solufo da amostra corresponder mancha prin cipal obtida com a solu'o do padrfo. A mancha principal resultante da aplicallo da mistura das solues de amostra e de padrllo aparecer como nica e compacta.

I 11 III

Mistura de I volume de formamida e 9 volu mes de acetona Mistura de I volume de 1,2.propanodiol e 9 volumes de acetona Mistura de 1 volume de parafma lquida e 9 volumes de ter de petrleo de faixa de ebulifo 40.60 oCo

A Clorofrmio B Mistura de 3 volumes de tolueno e 1 volume de clorofrmio C Tolueno D Mistura de 4 volumes de cicloexano e 1 volume de tolueno E Mistura de volumes iguais de cicloexano e ter de petrleo de faixa de ebuliio 40-60 oCo F Mistura de 2 volumes de cido actico glacial e 3 volumes de gua G Mistura de 8 volumes de hexano e 2 volumes de dioxana.

V.3.l.3.

PESQUISAS DE ESTERIDES ESTRANHOS POR CROMATOGRAFIA EM CAMADA DELGADA

PROCEDIMENTO I

Preparar cromatoplacas segundo mtodo geral para cromatografla em camada delgada, utilizando slica-gel G como suporte. Preparar 3 solues utilizando como solvente mistura de 9 volumes de clorofrmio e 1 volume de metanol nas seguintes concentraes: 1,5% (p/V) da substncia em exame - solu'io 1; 1,5% (p/V) do padrio oficial correspondente - soluo 2 e 0,03% (p/V) de cada um dos seguintes padres oficiais: prednisolona e acetato de cortisona - soluo 3. Aplicar sobre a cromatoplaca 1 ~ de cada uma destas solues, separadamente, e desenvolver o cromatograma utilizando como eluente mistura de 77 volumes de diclorometano, 15 volumes de ter, 8 volumes de metanol e 1,2 volumes de gua. Secar o cromatograma ao ar, aquecer a 105C por 10 minutos e nebulizar com soluio de azul de tetrazlio alcalina SR. A mancha principal do cromatograma

obtida com a soluo 1 corresponde, na distncia percorrida, colorao e intensidade, mancha principal do cromatograma obtido com a solut1o 2. Qualquer mancha secundria obtida com a 'solut1o 1 nlo deve ser mais intensa do que a mancha correspondente no cromatograma obtida com a

solu8o 3.

PROCEDIMENTO II

Proceder cromatografia utilizando s11ica-ge1 G como suporte e, como eluente, mistura de 95 volumes de 1,2-dicloroetano, 5 volumes de metanol e 0,2 volumes de gua. Aplicar sobre a cromatoplaca, separadamente, llJ1 de cada uma das 3 solues em mistura de 9 volumes de clorofrmio e 1 volume de metanol, como no Procedimento I, com exceo da soluo 3, em que se adiciona acetato de desoxicortona.

V.3.1.4. PESQUISA DE SUBSTNCIAS RELACIONADAS A SULFONAMIDAS POR CROMATOGRAFIA EM CAMADA DELGADA

PROCEDIMENTO

Proceder cromatografia em camada delgada utilizando slica.gel H como suporte. Preparar soluo da substncia em exame a 1,0% (P/V) utilizando como solvente mistura de 9 volumes de etanol a 96% e 1 volume de hidr6xido de amnio 13,5 M - solutfo 1. Preparar soluo de sulfanilamida a 0,005% (P/V), usando o mesmo solvente - so/ulIo 2. Aplicar separadamente sobre a cromatoplaca 10 ll1 de solues 1 e 2. Desenvolver o cromatograma usando mistura de 15 volumes de lbutanol e 3 volumes de hidrxido de amnio M como eluente. Remover a eroma toplaca da cuba, aquecer aiOS c por 10 minutos e nebulizar com soluo a 0,1 % (P/V) de 4-dimetilaminobenzaldedo em etanol a 96%, contendo 1% de cido clordrico (V/V): qualquer mancha no cromatograma obtida com a soluo 1, exceto a mancha principal, no mais intensa

que a mancha soluo 2.

PROCEDIMENTO

obtida

no cromatograma.

com

11

Proceder cromatografia em camada delgada utilizando slica-gel H como suporte e mistura de 20 volumes de clorofrmio, 2 volumes de metanol e 1 volume de dimetilformamida como fase mvel. Aplicar sobre a cromatoplaca, separadamente, 10 ll1 de cada uma das seguintes solues: 0,25% (P/V) da substncia em exame em mistura de 9 volumes de etanol e 1 volume de hidr6xido de amnio 13,5 M - solulIo 1; 0,00125% (P/V) de sulfanilamida no mesmo solvente da soluo 1. Desenvolver o cromatograma, secar ao ar e revelar conforme prescrito no procedimento I: qualquer mancha obtida com a so/u60 1, exceto a mancha principal, nlo deve ser mais intensa que a mancha obtida no cromatograma da solulIo 2.

V.3.l.S. IDENTIFICAO DE FENOTIAZINAS POR CROMA TOGRAFIA EM CAMADA DELGADA

Proceder cromatograf18em camada delgada, conforme descrito em mtodos gerais. Usar Kiese1guhr G como suporte. Impregnar a croma toplaca seca, colocandoa em cuba contendo mistura de 10 volumes de 2fenoxietanol, 5 volumesde macrogol300 e 85 volumes de acetona. Deixar o eluente subir pelo menos 17 em. Remover a cromatoplaca da cuba e utilizar imediatamente. Aplicar sobre a cromatoplaca, separadamente, 2 pl de cada uma das solues seguintes: 0,2% (plV) da sustncia em exame em clorof6rmio - soluplo 1 e 0,2% (P/v) do padra:ooficial corres pondente - so/uplo 2, operando em atmosfera de nitroBnio e luz reduzida. Desenvolvero cromato

grama usando como eluente mistura de 2 volumes de dietilamina e 100 volumes de ter de petr6leo de faixa de ebulio 4060 c, saturada com 2fenoxietanol. Remover a cromatoplaca da cuba, deixar ao ar e examinar sob luz ultravioleta com intensidade mxima em 366 nm: observase fluorescncia, produzida em poucos minutos. Em seguida, nebulizar a cromatoplaca com soluio de cido sulfrico a 10% (VIV) em etanol e observar a colorao produzida: a mancha principal no cromatograma, obtida com a soluiIo 1, cor responde, na distncia percorrida, f1uorescncia e colorao, quela obtida no cromatograma da so/uplo 2 e tem a mesma estabilidade pelo perodo de, pelo menos, 20 minutos depois da nebulizalo.

V.3.l.6.

PESQUISA DE IMPUREZAS RELACIONADAS A FENOTlAZINAS CROMATOGRAFlA EM CAMADA DELGADA

POR

PROCEDIMENTO Preparar cromatoplacas utilizando slica-gel GF 254 como suporte, operando em atmosfera de nitrognio e ao abrigo da luz. Preparar solulo contendo 2,0% (P/V) da substncia em exame em mistura de 95 volumes de metanol e 5 volumes de dietilamina - so1u4o 1. Preparar soluo a 0,01% (P/V) da substncia em exame, utilizando o mesmo solvente - so1uiio 2. Aplicar sobre a cromatoplaca, separadamente, 10,u de cada solulo recmpreparada. Usar fase mvel especificada na monografia. Deixar o solvente subir 12 em acima do ponto de aplicalo. Remover a cromatoplaca da cuba, secar ao ar e examinar sob luz ultravioleta

com m4xUno em 254 nm. Desprezar qualquer mancha sobre a linhabase. Qualquer mancha obtida com a so/u6o 1, exceto a mancha principal nlo . ' nws Intensa que a mancha obtida com a so/u4o 2, exceto se a monograf18 estabelecer diferentemente.

A Mistura de 80 volumes de cicloexano, 10 volumes de acetona e 10 volumes de dietilamina B Mistura de 85 volumes de hexano, 10 volumes de acetona e 5 volumes de dietilamina C Mistura de 15 volumes de l-butanol e 3 volu mes de hidrxido de amnio M

Ensaioslimite consistem em ensaios quantitativos ou semi-quantitativos destinados identifica'o de impurezas presentes em frmacos. Visto que estas impurezas se encontram, freqcntemente, em quantidades pequenas, sua deteco, via de regra feita atravs de reao visvel, bem como sua determinao quantitativa exigem certos cuidados, sobretudo no-que diz respeito a fatores que podem influir nos resultados, a saber: especificidade do ensaio, sensibilidade do mesmo e controle dos erros passveis de serem cometidos pelo operador. Certos ensaios visam a determinar, com preciso, a quantidade de impurezas porventura presentes no frmaco. So os seguintes: (1) limites de substncia solvel; (2) limites de substncias insolveis; (3) limites de umidade, substncia voltil e solventes residuais; (4) limites de substncia no voltil; (5) limites do resduo pela incinerao; (6) limites da perda por dessecao; (7) limites de cinza. Ensaios-limite de cloreto, sulfato, ferro, metais pesados e arsnio destinam-se a comprovar se o contedo de tais impurezas no excede o limite - em microgramas por grama da substncia em exame - especificado na monografia.

Os ensaios silo realizados em tubos de vidro transparente, de fundo chato, geralmente tubos de Nessler, com capacidade aproximadamente de 70 mI e marca externa correspondente a volume de 45 a 50 mI, e dimetro interno de 23 mm. Os tubos empregados devem ser iguais tanto em relao ao dimetro interno quanto aos outros aspectos, uma vez que a comparao entre cor ou turbidez direta. H duas maneiras de interpreta'o: no primeiro caso, os tubos devem ser observados de cima para baixo, contra fundo branco, se possvel oom auxlio de luz colocada diretamente por baixo do fundo dos tubos; no segundo caso, a comparao deve ser feita na horizontal, contra fundo escuro, colocando, caso possvel, fonte de luz diretamente nas laterais dos tubos. Quanto ao padro, pode-se optar por padro fixo ou padro varivel. No primeiro caso, a quantidade da amostra a ser empregada visando comparao com o padrlo de volume fIXO estabelecida em tabelas (Tabelas I, 11 e 11I); no segundo caso, o volume do padro varia de acordo com o limite de cada impureza em determinada amostra, conforme o especificado na monografia.

Preparo da amostra

Em tubos de Nessler colocar a quantidade de amostra especificada na monografia, adicionando 30 a 40 mI de gua. Caso a substncia j esteja em soluo, completar o volume para 30 a 40 m1 com gua. Neutralizar, se necessrio, com cido ntrico SR. Se aps a acidificao a soluo no estiver perfeitamente lmpida, filtrar atravs de papel de filtro isento de cloreto. Caso o limite de cloreto para determinada soluo da substncia corresponda a volume igual ou inferior a 0,2 mI de cido clordrico padro, no h necessidade de diluir a amostra.
Preparo do padr60

em tabela (Tabela I), ao mesmo tratamento efetuado com a amostra. Utilizar as mesmas quantidades de reagentes empregadas no Preparo

da amostra.

Tcnica Desenvolver em paralelo padro e amostra: ao tubo padro e ao tubo amostra adicionar 1 ml de cido ntrico SR e 1 m1 de nitrato de prata SR. Completar O volume para 50 ml com gua. Homogeneizar. Deixar em repouso ao abrigo da luz durante 5 minutos. A turbidez desenvolvida pela amostra no deve ser superior desenvolvida pelo padro.

Submeter o volume de cido clordrico padro indicado na monografia (HCI 0,01 M), ou indicado

Equivalentes em parte de CI- por 1 milhio de partes da substncia (p/pl Padro: 1 ml de cido clor{drico 0,01 M (=0,0003546 9 de CI-) Volume final: 50ml Tubo Nesslerde 50 ml e dimetro externo de 25 mm
gde

Substncia 0,10 0,15 0.20 0,25 0,30 0,35 0,40 0,45 0,50 0,55 0,60 0,65 0,70 0,75 0,80 0,85 0.90 0,95 1,00 1,2 1,4 1,6 1,8 2,0 2,2 2,4 2,6 2,8 3,0 3,2 3,4 3,6

0- plMilhlo 3.546 2.364 1.773 1.418 1.182 1.013 (=0,355%) (=0,236%) (=0,180%) (=0,142%) (=0,120%) (=0,100%1 886 788 709 645 591 545 506 473 443 417 394 373 354 295 253 221 197 177 161 148 136 126 118 111 104
98

gde

Substncia 3,8 4,0 4,2 4,4 4,6 4,8 5,0 5,2 5,4 5,6 5,8 6.0 6.2 6,4 6,6 6,8 7,0 7,2 7,4 7,6 7,8 8,0 8,2 8,4 8,6 8,8 9,0 9,2 9,4 9,6 9,8 10,0

CI- p/Milhlo 93 88 84 80 77 74 71 68 65 63 61 59 57 55 53 52 50 49 48 46 45 44 43 42 41 40 39 38 37 37 36 35

Sendo o padrio fixo (= 0,0003546 9 de CI-), se determinada substncia contiver 354 partes de CI- por milho, dever ser tomado 1 9 para obter- a mesma opalescencia do padri'o; se ela contiver 71 partes de CI- por milho, devero ser tomados 59 e assim por diante.

Preptlro da amostra

Colocar quantidade especificada da substncia em anlise em tubo de Nessler, adicionando 30 a 40 ml de gua. Se a substncia j se encontrar em solufo, acrescentar gua, perfazendo volume de 30 a 40 mI. Caso necessrio, neutralizar com cido clordrico SR. Pode-se, eventualmente, utilizar cido actico, tanto para a neutralizalo quanto para a acidifical'o. Se aps a acidifical'o a solufo Dlo estiver perfeitamente lmpida, fJltrar atravs de papel de fJltro isento de sulfato. Caso o limite de sulfato para determinada solufo da substncia corresponda a volume igual ou inferior a 0,2 ml de cido sulfrico padrl'o, Dlo h necessidade de diluir a amostra.
Preptlro do ptldrlo

indicado na monografia (HZS04 0,005 M>, ou indicado na Tabela 2, ao mesmo tratamento efetuado com a amostra. Utilizar as mesmas quantidades de reagentes empregados no Preparo da amostra.
Tlcnica

Desenvolver em paralelo padro e amostra: ao tubo padrl'o e ao tubo amostra adicionar 1 ml de cido clordrico 3 M e 3 ml de cloreto de brio SR. Completar o volume para 50 ml com gua destilada. Homogeneizar. Deixar em repouso por cerca de 10 mintos. A turbidez desenvolvida pela amostra Dlo deve ser superior desenvolvida pelo padrl'o.

Submeter o volume de cido sulfrico padro

Tabela 2 - Clculo de liateI pua dato Equivalentes em parte de SO. por milhlo di partes da .ubstincia (p/p) Padrlo: 2.5 ml di cido .ulfrico 0.005 M (= 0.0012008 9 de S04) Volumefinll': 50ml Tubo Nllller de 50 ml e diimetro externo de 25 mm
gdtl

Sub,tlnciB 0.50 0.55 0,60 0,65 0.70 0,75 0.80 0.85 0.90 9.95 1,00 1.2 1,4 1,6 1,8 2,0 2,2 2,4 2.6 2,8 3,0

504 plMilhlo 2.401 \=0,240%) 2.183 (=0,220%) 2.001 (=0.200%) 1.847 (=0,185%) 1.715 (=0,171%) 1.601 (=0.160%1 1.501 (=0,150%1 1.412 (=0,141%) 1.334 (=0.133%) 1.264 (=0,126%) 1.200 \=0.120%) 1.001 (=0,100%1 858 750 667 600 546 500 462 429 400 375 353 333 316 300 286 273

gde

Sub,tlnciB 4,6 4,8 5.0 5,2 5,4 5,6 5,8 6,0 6,2 6,4 6,6 6,8 7,,0 7,2 7.4 7.6 7,8 8,0 8,2 8,4 8.6 8,8 9,0 9,2 9,4 9,6 9.8 10.0

504 plMilh60 261 250 2~0 231 222 214 207 200 194 187 182 177 171 166 162 158 154 151 146 143 139 136 133 130 127 125 122 120

-,3.4

"?

3,6 3,8 4.0 4,2 4,4

sendo o padrlo fixo (=0,0012008 9 de S04'I, determinada substincia contiver 500 partes de S04 por milhio, deve rio ser tomado. 2,4 9 para obter. a mesma opalescncia do padrlo; ela contiver 151 partes de 804' por milhio , deveriloser tomedos 8 9 e im por diante.

ensaio-linte para metais pesados consiste em verificar se o contedo de impurezas metlicas que reagem colorimetricamente com o on sulfeto nlo ultrapassa o limite especificado nas monograflas em termos de ncrogramas de chumbo por grama da substncia em anlise. Analogamente, a reao com tioacetanda pode ser empregada para a determinao do limite de metais pesados, em termos de chumbo. ! Em se tratando de metais pesados que normalmente fornecem reao cida, no h necessidade de proceder acidifica4o, como especiflcado na preparao da amostra, tampouco de neutralizar a soluo.
Mtodos de reao com on sulfeto

Slo basicamente trs os mtodos de preparo da amostra para rea'o com on sulfeto empregados como ensaio-linte para metais pesados. O Mtodo I utilizado para substncias que fornecem solues lmpidas nas condies especificadas. o mais recomendado, a menos que outros sejam especificados pela monografia. O Mtodo 11 se aplica a substncias que n'o apresentam solues lmpidas quando submetidas s condies indicadas para o Mtodo 1, para aquelas que interferem na precipita'o dos metais com sulfeto, bem como para 61eos fixos e volteis. Caso no se apliquem ambos os mtodos, recorre-se ao Mtodo lII, que consiste basicamente em processo de digesto mida.

vale a 10 pg de Pb. Uma soluo de 100 #t8 de padro de chumbo por grama de substncia em exame corresponde a 1 ppm de chumbo. Preparo do padro - Para tubo de Nessler de SO ml transferir 2,0 mI de soluo-padro de chumbo, equivalente a 20 #lI de chumbo. Completar com gua para volume flnal de 25 mI. Em seguida, ajustar o pH entre 3,0 e 4,0 com cido actico M ou hidrxido de amnia 6 M. Diluir com gua, perfazendo volume fmal de 40 mI. Homogeneizar . Preparo do tubo controle - Paralelamente, colocar em outro tubo de Nessler 2S mI da soluo da amostra preparada conforme descrito para o Preparo da amostra, acrescentando 2,0 mI de solu'o padro de chumbo, ajustando o pH entre 3,0 e 4,0 com cido actico M ou hidr6xido de amnia 6 M. Diluir com gua para volume de 40 mI, misturando a soluo resultante. Tcnica - Acrescentar, a cada uma das preparaes, 10 mI de sulfeto de hidrognio SR recm preparado. Misturar. Deixar em repouso por 5 minutos. Observar os tubos de cima para baixo, contra fundo branco. A cor obtida com a amostra. nlo deve ser mais escura do que a obtida com o padro; a cor do tubo-controle (amostra + padro) da soluo deve ser mais intensa que a do padro ou igual dele. Se, no entanto, for mais clara, aplicar o Mtodo II ao invs do Mtodo 1.

Soluo estoque de nitrato

de chumbo

A uma solu'o de 1S9,8 mg de nitrato de chumbo em 100 mI de gua, adicionar 1 mI de cido ntrico. Completar o volume com gua para exatamente 1000 mI. Homogeneizar. A soluo obtida deve ser conservada em recipientes de vidro, isentos de sais de chumbo solveis.

Preparo da amostra - Colocar, em tubo de Nessler de SO ml, 2S mI da soluo da amostra, preparada de acordo com a monografia. Se houver indicao do volume de cido, calcular a quantidade da substncia em gramas, mediante a f6nnula 2,0/1000 L, em que L o linte, em porcentagem, dos metais pesados. Dissolver essa massa em 25 ml de gua. Ajustar o pH entre 3,0 e 4,0 com cido actico M ou hidr6xido de amnia 6 M. Diluir com gua, perfazendo volume de 40 mI e homogeneizar a solu'o obtida. Soluio padro de chumbo - Diluir 10,0 ml da soluo estoque de nitrato de chumbo para 100,0 mI com gua. Cada mI desta soluo equi.

Preparo da amostraColocar em cadinho, de preferncia de slica, que pode ser coberto com tampa adequada, quantidade em gramas especificada na monografia, ou calculada mediante a frmula 2,0/1000 L, em que L corresponde ao limite de metais pesados em porcentagem. Inci nerar, cuidadosamente, baixa temperatura, a amostra previamente umedecida com quantidade suflciente de cido sulfrico. Em seguida, adicionar ao contedo do cadinho 2 mI de cido ntrico e 5 gotas de cido sulfrico. Aquecer com cuidado, at que no mais se desprendam vapores brancos. Colocar, ento, o cadinho em mufla, temperatura de 500 a 600 c, por tempo necessrio combusto completa e em seguida esfriar. Adicionar 4 mI de cido clordrico 6 M, evaporando em banhomaria, lentamente, at secura. Umedecer o resduo com 1 gota de cido clor drico 6 M, adicionar 10 mI de gua quente e digerir por 2 minutos. Alcalinizar com hidrxido de amnio 6 M, colocado gota a gota. Diluir com gua para 25 mI, ajustando o pH entre 3,0 e 4,0 com cido actico M. Filtrar, caso seja necesSario, lavar o cadinho e o mtro com 10 mI de gua. Colocar o ftltrado e a gua de lavagem em tubo

de Nessler, diluindo com gua at perfazer volume de 40 ml, misturando em seguida. Preparo do padro - O preparo do padro segue a tcnica descrita para o Mtodo 1 Tcnica - Adicionar concomitantemente ao tubo padro e ao tubo amostra 10 ml de sulfeto de hidrognio SR e homogeneizar. Deixar em repouso por 5 minutos. Observar os tubos de cima para baixo, contra fundo branco; a cor obtida com a amostra nlo deve ser mais escura do que a obtida com o padro.

Preparo da amostra - A tcnica de preparao da amostra varia pouco com o estado fsico das substncias. Para substncias slidas, colocar, em ballio de Kjeldahl de 100 ml, previamente limpo e seco, quantidade da substncia indicada na monografia. Se houver formao de muita espuma, utilizar balo de maior capacidade. Segurando o blo em ngulo de 45, umedecer a substncia com quantidade suficiente de mistura de 8 ml de cido sulfrico e 10 ml de cido ntrico. No caso de substncias lquidas, transferir para balo de Kjeldahl, como descrito para substncias slidas, o volume especificado na monografia e adicionar, cuidadosamente, alguns poucos ml da mistura de 8 ml de cido sulfrico e 10 m1 de cido ntrico. Aquecer cuidadosamente para iniciar a realo. Quando a reao abrandar, adicio nar, em pores, a mistura cida, aquecendo a cada adio. Repetir a operao at que se tenha acrescentado volume total de 18 ml. Aumentar a temperatura de aquecimento, alcanando, lentamente, a fervura, deixando o tempo necessrio para que a soluo escurea. Em seguida, esfriar e acrescentar 2 m1 de cido ntrico. Aquecer novamente at que a soluo no mais escurea. Aquecer vigorosamente a fim de que se produzam vapores brancos densos e adicionar 5 rnl de gua. Esfriar a mistura. Submeter fervura, quando novamente se desprendem vapores brancos densos, at que o volume se reduza ao mnimo. Esfriar e adicionar, cuidadosamente, 5 ml de gua, verificando a cor da soluo. Caso se observe cor amarela, proceder adio de 1 m1 de per6xido de hidrognio a 30% (VIV). Ferver at aparecimento de vapores brancos densos, reduzindo o volume a 2 ou 3 rnl. Caso a cor persista, repetir o tratamento anterior. Esfriar e diluir cautelosamente com pequeno volume de gua. Transferir, COI1l lavagem, para tubo de Nessler de 50 rnl, no permitindo que o volume ultrapasse 25 ml. Preparo do padro - Colocar, em balo de Kjeldahl de 100 ml, mistura de 8 ml de cido sulfrico e 10 ml de cido ntrico. Adicionar volume de cido ntrico para igualar a quantidade excedente acrescentada no preparo da amostra. Aquecer, em seguida, a soluo a fim de produzir vapores brancos densos. Esfriar. Adicio

nar, com cuidado, 10 rnl de gua. Caso tenha sido necessrio utilizar per6xido de hidrognio 30% (V/V) na amostra, acrescentar igual volume, aquecendo, lentamente, com produo de vapores brancos densos. Em seguida, resfriar novamente, adicionar 5 rnl de gua, misturando a soluo. Ferver a mistura, produzindo novamente os vapores e reduzindo o volume para 2 a 3 ml. Esfriar, diluir novamente com pequeno volume de gua e acrescentar 2,0 rnl de soluo padro de chumbo, misturando em seguida. Transferir a mistura e as guas de lavagem, do balo para tubo de Nessler de 50 rnl, at volume total de 25 ml. Homogeneizar. Tcnica - Desenvolver em paralelo padro e amostra: ajustar o pH da soluo da amostra e da soluo padro entre 3,0 e 4,0 com hidr6xido de amnio 2 M. Diluir com gua, perfazendo volume total de 40 rnl. Homogeneizar. Adicionar a cada tubo 10 rnl de sulfeto de hidrognio SR recm-preparado. Homogeneizar. Deixar em repouso por 5 minutos. A cor da amostra no deve ser mais escura do que a do padro.

Soluo padro de chumbo (20 ppm Pb)Diluir 0,8 g de nitrato de chumbo e 2 ml de cido ntrico em gua para volume de 250 ml. Trans ferir 1,0 ml desta soluo para bal'o volumtrico de 100 ml, completando o volume com gua. Soluo padro de chumbo (10 ppm Pb) Diluir 50,0 ml de soluo padro de chumbo (20 ppm Pb) com gua, perfazendo 100,0 ml. Soluo padro de chumbo (2 ppm Pb) Diluir 10,0 ml da soluo padro de chumbo (20 ppm Pb) com gua, perfazendo 100,0 ml. Soluo padro de chumbo (1 ppm Pb) Diluir 5,0 ml de soluo padro de chumbo (20 ppm Pb) com gua, perfazendo 100,0 ml. Preparo do reagente de tioacetamida - Dissolver 1 g de tioacetamida em gua e completar o volume a 100 ml.

Preparo da amostra - Adicionar a 12 ml de solulo aquosa da amostra, conforme especificado na monografia do frmaco, 2 ml de soluo tampo acetato pH 3,5 e homogeneizar. Preparo do padro - A 10 ml da soluo padro de chumbo (1 ppm ou 2 ppm de Pb), adicionar 2 ml de solulo tamplo acetato pH 3,S e 2 ml da soluo em exame. Misturar, deixando em repouso por 2 minutos. Tcnica - Nos tubos contendo amostra e padro acrescentar, concomitantemente, 1,2 ml de reagente tioacetarnida. Aps 2 minutos, desenvolve-secor marrom que, no caso da amostra, no deve ser mais intensa do que a do padr'o.

MeTODO 11

Preparo da amostra - Dissolver a quantidade da amostra especificada na monografia em sol vente orgnico (dioxana ou acetona, contendo, no mnimo, 15% VjV de gua). Transferir 12 m1 da solu'o obtida para tubo de Nessler. Adicionar 2 ml de tampo acetato pH 3,5 e homogeneizar. Preparo do padro - A 10 m1 de soluo padro de chumbo (l ppm ou 2 ppm de Pb), obtida mediante dissoluo de solu'o padro de chumbo (20 ppm Pb) com o mesmo solvente empregado para a dissoluo da amostra, adicionar 2 m1 de tampo acetato pH 3,5 e 2 mI da solulo amostra. Tcnica - Acrescentar a ambos os tubos amostra e padro - 1,2 mI de reagente de tioace M~TODO IV tamida. Homogeneizar imediatamente. Aguardar Preparo da amostra - Transferir para cadinho 2 minutos. A cor marrom desenvolvidana amostra de slica quantidade de substncia especificada na no deve ser mais intensa do que a desenvolvida monografia, misturando 0,5 g de xido de magn no padro. sio. Incinerar at vermelho escuro sobre chama. Prosseguir at obter massa homognea branca ou MI!TODO 11I cinzenta. Se aps 30 minutos de ignio a cor Preparo da amostra - Colocar em cadinho de se mantiver, esfriar, misturar a massa no cadinho slica quantidade da substncia especificada na com basto de vidro, repetindo, em seguida, a monografia. Juntar 4 mI de soluo a 25% (P/V) incinerao. Aquecer a 800 c por aproximadade sulfato de magnsio em cido sulfrico M. mente 1 hora. Aps este perodo, seguir a tcnica Misturar e aquecer com cuidado. Caso a mistura de preparo da amostra no Mtodo llI, iniciando seja lquida, evaporar lentamente em banho-maria por "o resduo assim obtido dissolvido ... ". Preparo do padro - Misturar o volume especiat secura. Incinerar a amostra at, no mximo, 800C. Manter o aquecimento at obter resduo ficado de soluo padro de chumbo (10 ppm de branco ou acinzentado. Esfriar. Umedecer o Pb) a 0,5 g de xido de magnsio em cadinho resduo com poucas gotas de cido sulfrico M. de slica. Em seguida, secar a mistura em estufa a Evaporar. Incinerar novamente por no mais de 105 c, incinerando logo aps. Seguir a tcnica de 2 horas, esfriando logo aps. O resduo assim preparo da amostra no Mtodo [lI, iniciando por obtido dissolvido com duas vezes 5 mI de cido "0 resduo assim obtido dissolvido ... ". AIO mI clordrico 0,2 M, acrescentando-se 0,1 mI de da soluo obtida adicionar 2 ml da soluo da fenolftalena SI. Adicionar hidrxido de amnio amostra. 6 M at que se desenvolva cor rsea. Esfriar. Tcnica - Em cada um dos tubos referentes Descbrar a soluo com cido actico glacial e amostra e ao padro adicionar 1,2 ml de reagente acrescentar mais 0,5 mI do cido. Se necess~rio, de tioacetamida. A cor marrom que se desenvolve f1ltrar e diluir a soluo com gua para volume na amostra no deve ser mais intensa do que a de 20 mI. Transferir 12 ml da soluo obtida para obtida com o padro.

tubo de Nessler, adicionar 2 ml de tampo acetato pH 3,5 e homogeneizar imediatamente. Preparo do padrio - Submeter, repetidas vezes, volume indicado de soluo padro de 10 ppm de chumbo ao processo de incineraio e extrao utilizado no preparo da amostra, obtendo 20 ml de solulo padro. Transferir exatamente 10 mI desta soluo e misturar com 2 mI' da amostra e 2 mI de tampo acetato pH 3,5. Tcnica - Em cada um dos tubos referentes amostra e ao padro adicionar concomitantemente 1,2 mI de reagente de tioacetamida. A cor marrom que se desenvolve para a amostra no deve ser mais intensa do que a obtida com o padrllo.

Solu!o padro de ferro (100 ppm Fe) - Dissolver com gua, em balo volumtrico de 1000 mI, 0,8634 g de sulfato frrico amoniacal dodecaidratado. Adicionar 5 ml de cido sulfrico SR e completar o volume com gua. Soluo padro de ferro (20 ppm Fe) - Transferir 10,0 ml da soluo a 0,1726% (p/V) de sul fato frrico amoniacal dodecaidrato em cido sulfrico 0,05 M para balo.volumtrico de 100 ml, completando o volume com gua. Soluo padro de ferro (10 ppm Fe) - Diluir 50,0 ml da solu[o padro de ferro (20 ppm Fe) com gua, perfazendo volume de 100,0 ml. Soluo padro de ferro (2 ppm Fe) - Diluir 10,0 ml da solu[o padro de ferro (20 ppm Fe) com gua, perfazendo volume de 100,0 ml. Soluo padro de ferro (1 ppm Fe) - Diluir 5,0 ml de soluo padro de ferro (20 ppm Fe) com gua, perfazendo volume de 100,0 ml.

TlScnica - Concomitantemente, juntar aos tubos contendo a amostra e o padro 2 gotas de cido tiogliclico. Misturar e alcalinizar com hidrxido de amnio. Diluir para 50 ml com gua. Deixar em repouso por 5 minutos. A cor rsea produzida na amostra no deve ser mais intensa do que a obtida com o padro.

Preparo da amostra - Dissolver quantidade da amostra especificada na monografia ou na Tabela 3 em solvente adequado e diluir para 40 ml com o mesmo solvente ou utilizar 40 ml da soluo indicada. A essa soluo acrescentar 2 ml de soluo de cido ctrico SR. Preparo do padro - Empregar 10 ml de soluo padrlo de ferro (1 ppm de Fe) ou 1 ml da solUo padrlo de ferro (100 ppm Fe) (Tabela 3) e proceder mesma tcnica indicada para a amostra.

Preparo da amostra - A 10 ml de soluo da amostra especificada na monografia juntar 2 ml de cido clordrico 2 M e 0,5 ml de gua de bromo. Aps 5 minutos, retirar o excesso de bromo por corrente de ar. Preparo do padro - Submeter 10 ml da soluo padro de ferro (2 ppm de Fe), 1 ml de cido clordrico 2 Mel ml de gua mesma tcnica indicada para a amostra. Tcnica - Concomitantemente, juntar aos tubos da amostra e do padro 3 ml de tiocianato de potssio M. Agitar, deixando em repouso por 5 minutos. A cor obtida com a amostra no deve :;er mais intensa do que a produzida pelo padro.

Preparo Nessler a monografia Preparo

da amostra - Colocar em tubo de soluo preparada de acordo com a da substncia. do padro - Transferir exatamente

Equivalentes em parte de Fe por 1 milho de partes da substAncia(p/pl Padro: 1 ml da soluo de sulfato de amnio e ferro li11)dodecaidratado (=0,0001 9 de Fel Volume final: 50 ml Tubo Nessler de 20 mm de dimetro externo
gda

Substlncm 0,1 0,105 0,111 0,116 0,125 0,133 0,143 0,154 0,167 0,182 0,2 0,222 0,25 0,285 0,333

Fep/Milhlo

gde

Substlncia 0,4 0,5 0,667 1 1,111 1,25 1,429 1,667 2 2,5 3,333 5 10 20

Fep!Milh'o

1000 950 900 850 800 750 700 650 600 550 500 450 400 350 300

250 200 150 100 90 80 70 60 50 40 30 20 20 5

Sendo o padro fixo (=0,0001 9 de Fe), se determinada substncia contiver 1.000 partes de Fe por milho, dever ser tomado 0,1 9 para obterse a mesma colorao do padrio; se ala contiver 200 partes de Fe por milho, devero ser tomados 0,59, e assim por diante.

1 ml da soluo padro de ferro (10 ppm Fe) para tubo de Nessler. Dnuir para 4S ml com gua e acrescentar 2 ml de cido clordrico M. Homo geneizar. T~cnica - Adicionar a cada tubo, da amostra e

do padro, SO mg de cristais de peroxidissulfato de amnio. Juntar 3 ml de solulo de tiocianato de amnio SR. Homogeneizar. A cor obtida com a amostra nlo deve ser mais intensa do que a desenvolvidapara o padrlo.

Consiste na determinalo de traos de arsnio, presente na substncia analisada, mediante sua converslo em arsina (AsH3), que pode ser detectada espectrofotometrica ou visualmente. Os limites slo estabelecidos em termos de arsnio ou, em certos casos, em As,03' importante lembrar que metais ou sais de metais como Cr, Co, Hg, Mo, Ni, Pd e Ag podem interferir na geralo de arsina.

MIlTOOO ESPECTROFOTOMIlTRICO

Preparo da amostra - Transferir para frasco gerador de arsina a quantidade de substncia indicada na monografia, ou calcular essa quantidade, em gramas, mediante a frmula 3,0/L, em que L o limite de arsnio em ppm. Dissolvercom gua, completando o volume para 35 ml. Adicio nar 20 mI de cido sulfrico 2 M, 2 mI de iodeto de potssio SR, 0,5 ml de cloreto estanoso fortemente cido SR e 1 mI de 2.propanol. Homogeneizar. Deixar em repouso por 30 minutos temperatura ambiente. Na unidade (c) do aparelho descrito, colocar duas mechas de algodo embebidas em solulo saturada de acetato de chwnbo SR, deixando entre elas espao de 2 mm. O excesso da solulo deve ser eliminado espremendose as mechas de algodlo e secando-as presso reduzida, temperatura ambiente. Asjuntas (b) e (d) devem ser lubrificadas com vaselina e unidas como na Fig. 1. Preparo do padro - Transferir para o frasc gerador de usina 3,0 mI de solulo padro de arsnio. Diluir com gua at perfazer 35 mI. Proceder da mesma forma descrita para o Preparo da amostra. Tcnica - Transferir para a unidade de absoro (e) do frasco gerador contendo a amostra e do que contm o padro 3,0 mI de dietilditiocarbamato de prata SR. Adicionar 3,0 g de zinco granulado (malha de 1 mm) mistura do frasco gerador de arsina. Imediatamente aps esta adio, unir as unidades (c) e (e) ao frasco gerador. Deixar em banho de gua temperatura de 25C (tolerncia de 3C) por 45 minutos. Em intervalos de 10 mio nutos agitar vagarosamente. Ap6s este perodo, transferir o contedo da unidade de absoro para cela de 1 em. Comparar a cor vermelha produzida FiI.! Apuelho para detenniDalo de IrInio pelo pelo padrlo com a obtida com a amostra. Esta mcltodo upectrolotomcltrico. ltima n(o deve ser mais intensa do que a primeira.

Baseia-se na tealo entre a usina liberada e dietilditiocarbamato de prata, que forma complexo vermelho, sendo a absorlo medida em espectro fotmetro ou colormetro. O antimnio interfe rente da realo, uma vez que forma estibina, dando resultado falsamente positivo no desenvol vimento de cor com dietilditiocarbamato de prata SR. Quando se suspeita dessa interferncia, devese comparar as solues em comprimento de onda de 535 e 540 nm. Neste, a interferncia da estibina desprezvel. Dois mtodos podem ser empregados. Estes diferem no que diz respeito ao tratamento da amostra e do padrlo. O Mtodo I , em geral, utilizado para substncias inorgnicas; o Mtodo II empregado para substncias orgnicas. O aparelho utilizado compreende, conforme mostra a Fig. 1: (a) gerador de arsina; (b) e (d) juntas; (c) unidade esmerilhada; (e) tubo de absorlo. Outro aparelho adaptado, que tenha as caractersticas essenciais do apresentado, pode, eventualmente, ser utilizado.

A so/ulIo estoque padro de arsnio preparada do seguinte modo: secar por 1 hora aiOS c o tri6xido de arsnio. Pesar exatamente 132,0 mg e dissolver, em 5 mI de solulo de hidrxido de sdio 5 M na proporlo de 1:5, em ballo volum6 trico de 1000 mI. Neutralizar com cido sulfrico M adicionando, em seguida, mais 10 mI do referido cido. Completar o volume com gua recm fervida e resfriada. Transferir 10,0 mI dessasolulo para outro ballo volumtrico de 1000 ml. Acrescentar 10 mI de cido sulfrico M. Comple tar o volume com gua recmfervida e poste riormente esfriada. Homogeneizar. Conservar a solulo em recipiente de vidro. Deve ser utilizada dentro de 3 dias. Cada ml da solulo obtida corresponde a 1 lJ.8de arsnio.

Caso necessrio, determinar a absoro em espectrofotmetro ou colormetro em comprimento de onda entre 535 e 540 nm, empregando dietilditiocarbamato de prata SR como branco.
MeTOOO U

Este mtodo emprega perxido de hidrognio na digesto da amostra. Com certas substncias, pode provocar realio violenta. Assim, importante que se proceda com a mxima cautela possvel em todas as operaes. Deve-se tomar cuidado, tambm, na presena de compostos halogenados, especialmente quando se aquece a amostra com cido sulfrico e posteriormente se adiciona perxido de hidrognio a 26% (v/V). O aquecimento deve ser mais brando, impedindo que se atinja a temperatura de ebulilio da mistura e antes de carbonizar para evitar a perda de arsnio trivalente. Preparo da amostra - Transferir para o frasco gerador quantidade da amostra especificada na monografia ou calculada em gramas mediante a frmula 3,0/L, em que L o limite de arsnio em ppm. Adicionar 5 ml de cido sulfrico e prolas de vidro. Se necessrio, empregar maior quantidade do cido para umedecer completamente a substncia, cuidando para que o volume no ultrapasse 10 ml. Proceder digesto em capela, de preferncia usando placa de aquecimento, com temperatura n(o superior a 120C, por tempo necessrio ao incio da queima. Uma vez iniciada a decomposilio da amostra pelo cido, adicionar, com cuidado e gota a gota, perxido de hidrognio a 30% (V/V). Esperar que a reao se abrande e, ento, aquecer entre uma gota e outra. Caso haja excesso de espuma, interromper o aquecimento. Assim que diminuir a intensidade da reao, aquecer cautelosamente, com agitao do frasco, para promover aquecimento homogneo. E necessrio que se mantenham as condies oxidantes durante toda a digesto. Para tanto, h que se adicionar pequenas quantidades de soluo de perxido de hidrognio 30% (VIV) sempre que a mistura se tome marrom ou escurea. Destruda a matria orgnica, aumentar paulatinamente a temperatura de aquecimento, permitindo que saiam os vapores de trixido de enxofre, deixando a soluo incolor ou cor de palha clara. Esfriar. Acrescentar, com cuidado, 10 m1 de gua. Misturar. Evaporar at que se formem vapores fortes. Caso necessrio, repetir a operao, removendo traos de perxido de hidrognio. Esfriar e juntar 10 ml de gua. Lavar o frasco e diluir com gua, perfazendo 35 ml. Proceder como no Preparo da amostra do Mtodo I, iniciando por "Adicionar 20 ml de cido sulfrico

a 30% (VIV) empregado para o preparo da amostra. Proceder, em seguida, ao aquecimento da soluo obtida at que se formem vapores fortes. Esfriar e adicionar, com cuidado, 10 ml de gua. Repetir a operalio de aquecimento; fmdo este, esfriar novamente e diluir com gua para completar 35 ml. Proceder como para o Preparo da amostra. Tcnica - Seguir a descrita para o Mtodo L
MeTODO VISUAL

O mtodo consiste na converso de traos de arsnio em arsina, por reduo com zinco e cido clordrico concentrado. A 3rsina liberada reage com papel de cloreto de mercrio(lI), ou brometo de merc rio(ll), produzindo mancha de cor amarela. No processo, alm de Hg(AsHzh, principal produto da reao, podem ser formados, no caso de se empregar cIoreto mercrico, produtos como AsH(HgCh), As(HgCh) e AszHg3, que produzem mancha amarela ou marrom. O aparelho empregado para a determinao visual de arsnio o que aparece Fig. 2. Consiste, basicamente, de erlenmeyer, geralmente de 100 ml, onde se d a gerao de arsina. Este frasco fechado com rolha de vidro esmerilhado. Por esta rolha passa tubo de vidro de aproximadamente 200 mm de comprimento e dimetro interno de

2M ... "
Preparo do padro - A 3,0 ml de soluo padro de arsnio, colocado no frasco gerador, juntar 2 ml de cido sulfrico. Misturar. Acrescentar o mesmo volume de per6xido de hidrognio

Fia. 2 Apuelho para c1eterminaio de IrInio pelo mtodo visual (dimenses em mm).

5 mm. A extremidade inferior dessetubo estreita-se para dimetro interno de 1 mm. A aproximadamente 15 mm da ponta desse tubo h um orifcio com dimetro de 2 a 3 mm, que deve estar, no mnimo, 3 mm abaixo da superfcie mais baixa da rolha de vidro. A extremidade superior do tubo superfcie plana e forma, com o eixo do tubo, ingulo reto. A esta superfcie se ajusta, mediante 2 espirais, outra, igualmente plana, de outro tubo de vidro com o mesmo dimetro interno e 30 mm de comprimento. No tubo inferior, colocam-se 50 ou 60 mg de algodllo com acetato de chumbo ou diumao de algodllo e papel de acetato de chumbo enrolado, com peso aproximado de 50 a 60 mg. Em seguida, coloca.se, entre as superfcies planas, disco de papel de brometo mercrico, ou cloreto mercrico, com tamanho adequado a recobrir todo o orifcio do tubo. Prep8lO da amostra - No erlenmeyer dissolver quantidade especificada de substncia em 25 mI de gua. Se for solufo, ajustar volume para 25 mI.

Em seguida, acrescentar 15 m1de cido clordrico, 0,1 mI de soluA'ocida de cloreto estanoso SR e 5 mI de iodeto de potssio M. Deixar em repouso por 15 minutos. Prep8lO do padro - Colocar 1 mI da soluo padro de arsnio (l ppm As) no frasco gerador e dnuir com gua para 25 mI. Submeter a soluo ao mesmo tratamento dispensado amestra. Tcnica - Adicionar ao frasco contendo a amostra e quele contendo o padro 5 g de zinco ativado. Imediatamente aps, ligar o tubo ao frasco gerador e deixar em banho de gua, temperatura adequada para que a liberao de usina seja uniforme. Para melhor visualizao da cor, aps tempo adequado liberao de usina, umedecer os papis com soluo de iodeto de potssio a 10%, colocada em cpsula de porcelana de 10 em de dimetro. A cor vermelha inicial desaparece, intensificando a cor amarela. A cor obtida com a amostra no deve ser mais intensa que a obtida com o padro.

Dissolver, em tubo de Nessler, a quantidade indicada da substncia em an41iseem 14 mI de gua. Alca1inizar,se necessrio, com hidr6xido de sdio 2 M e diluir para 15 mI com gua. Adicionar 0,3 mI de solufo de iodeto de potssio mercmo alcalino. Tampar o tubo, agitar e deixar em repouso por 5 minutos. A cor amarela que se produz nfo deve ser mais intensa que a produzida pelo trata-

mento anlogo de mistura de 10 ml de solufo padrlo de amnia (1 ppm de NH3) e 5 ml de gua.

Solu60 psdr60 de am6nia (1 ppm)

Diluir 40,0 mI de solufo padrfo de amnia 2,5 ppm (1,0 mI de solufo de cloreto de amnio 0,00741% (p/V) em sua a 100,0 mI) com sua a 100,0 mI.

V.3.3. DETERMINAES EM GORDURAS E LEOS

o controle analtico de substncias graxas - gorduras, leos, ceras, resinas, blsamos, entre outras - consiste no estabelecimento de diversas propriedades fsicas e qumicas, ao lado da avalia lo de especificaes de cor, odor, sabor e limites de impurezas. Os principais ensaios fsicos com preendem determinalo da densidade, das temperaturas de fuslo e solidificao, do ndice de refralo, do desvio polarimtrico e da presena de gua e sedimentos. As determinaeSqumicas, por sua vez, constituem o estabelecimento dos chamados ndices, entre os quais o de acidez, de steres, de saponificao, de iodo, de perxidos, de hidroxlla, de acetila e a dosagem da matria insaponificvel.

Substncias graxas lquidas devem apresentar limpidez. Havendo turvao, aquecer o material em banho-maria a 50 De at seu desaparecimento. Persistindo a turbidez, flltrar atravs de papel de filtro seco, em funil provido de camisa de gua quente. Homogeneizar e pesar, de wna vez, todas as amostras necessrias s diversasdeterminaes. Substncias slidas temperatura ambiente devem ser mantidas fundidas durante a amostragem.

Proceder conforme instruGes sob o ttulo "Determinafo da densidade de mua e densidade relativa" (V.2.S).

Proceder conforme instrues do Mtodo m, sob o ttulo "Determinalo da temperatura e faixa de fudo" (V.2.2).

Temperatun (ou ponto) ele lIOIiclificalo 6 sinnimo de temperatura de congelamento, constituindo constante fsica para leos e gorduras. A tcnica descrita prev a separalo, por saponi ficafo seguida de hidrHse, dos cidos graxos contidos na amostra, para posterior determinalo da temperatura de solidificalo destes.
SepllJ7lSodos Icidos graxos

Transferir 75 ml de solulo de hidrxido de potssio em gUcerol(preparar dissolvendo 25 g de hidrxido de potssio em 100 ml de g1!cerol)para bquer de 1000 ml e aquecer a 150 e. Adicio nar 50 ml de amostra tratada conforme indicado acima (clarificada e fundida, se slida) e prosseguir o aquecimento - com agitao freqente - nlo permitindo temperatura ultrapassar 150C. A saponificao dada por concluda quando a mistura apresentar homogeneidade, sem vestgios PROCEDIMENTO de material particulado. Transferir a mistura para Proceder conforme instrues sob o ttulo outro bquer de 1000 mi, contendo 500 ml de gua quase fervente, juntar lentamente 50 ml de "Determinao da temperatura de congelamento" soluo de cido sulfrico a 25%(V/V) e aquecer, (V.2.4).

sob agitao freqente, at separalo defmida de fase lmpida (cidos graxos). Lavar a fase graxa com gua fervente a fun de isentla de cido sulfrico e mantla - em bquer pequeno - sobre banho-maria fervente at6 decantalo da gua, deixando lmpida a fase oleosa. Filtrar e recolher a mistura de cidos graxos enquanto ainda quente em bquer seco e dessecla a 150C durante 20 minutos. Transferir a mistura quente para frasco apropriado e mantla em banho de gelo at solidificafo. Para avaliar o grau de pureza dos cidos graxos separados pelo procedimento acima, transferir previamente ao congelamento - 3 ml da soluio de cidos graxos dessecados para tubo de ensaio e adicionar 15 mI de etanol. Aquecer a solulo at fervura e juntar 15 ml de hidrxido de amnio 6 M. A soluo resultante deve ser lmpida.

Proceder conforme instrues sob o ttulo "Detenninalo do ndice de refralo" (V.2.6). A determinalo deve ser feita temperatura

ambiente e a 40 OCo respectivamente, para leos e gorduras.

Proceder confonne inltruGel sob o ttulo "Determinalo do poder rotatrio e do poder rotatrio especfico" (V.2.8).

Materiais graxos pouco refmados - especial. mente os de origem animal - contm umidade e matria estranha, para os quais slo estabelecidos limites especificados nas monografias. A tcnica de determinao de gua e sedimentos em matrias graxas compreende a solubilizalo da frao lipfdica da amostra em benzeno e a leitura, aps centrifugafo, do volume de fase aquosa contendo sedimentos.
Centrffuga

em que d corresponde ao dimetro de giro da centrfuga, em cm. Os tubos devem ser do tipo cnico, providos de tampa, com capacidade para 125 ml e gradua dos a partir da base.
PROCEDIMENTO

Empregar preferencialmente centrfuga com dimetro de giro (medida da distAncia entre as extremidades dos tubos dispostos na horizontal) entre 38 e 43 em, ajustando a velocidade de rotaA'opara 1500 rpm. Evitar o uso de centrfuga angular. Centrfugas de dimensionamento diverso podem ser empregadas, calculandose a velocidade de rotalo (em rpm) pela frmula
1500

J 4l

Transferir para dois tubos de centrifugao 50 ml de benzeno e adicionar 5 ml de amostra (aquecer ligeiramente o leo, se necessrio, para eliminar turvalo provocada pela solidificao de cido esterico). Tampar, agitar os tubos com vigor e imergi.los em banho-maria a 50C durante 10 minutos. Centrifugar durante 10 minutos e ler os volumes de gua e sedimentos nas bases de ambos os tubos. Repetir a operalo por mais 10 minutos e repetir a leitura quantas vezes for necessrio para que 3 leituras sucessivas forneam resultado constante. Com base na soma dos volumes de depsito dos dois tubos, calcular a porcentagem, em volume, de gua e sedimentos no material graxo.

o ndice de acidez pode ser expresso em unidadesde massa (mg de hidrxido de potssio necessrios neutralizao de alcidos graxos livres em 1 g de amostra) ou de volume (mI de hidrxido de sdio 0,1 M necessrios neutralizalo dos cidos graxos livres em 10 g de amostra). A t6cnica a seguir, compreendendo solubilizaoda tomada de ensaio em solvente orgnico e neutrallzalo dos cidos graxos livres nela contidos, leva diretamente segunda defmilo. nada impedindo, contudo, a conservaio do valor determinado para o primeiro conceito. lndices de acidez elevados so sugestivos de hidrlise acentuada dos 6steres que compem a matria graxa. As causas da degradao incluem tratamentos qumicos integrantes do processo industrial de extrao e purificalo, atividade bacteriana, aio cataltica (calor e luz), estocagem prolongada em condies inadequadas e a presena de impurezas, especialmente umidade. Cabe, todavia, salientar que a deteco de 'Proporo elevada de alcidos graxos livres em wna amostra de leo ou gordura nlo guarda relalo com grau de rancificalo, pois esta decorre de oxidalo pelo

ar (e/ou bactrias) dos alcidos graxos livres. PROCEDIMENTO Pesar exatamente cerca de 10,0 g de amostra e dissolver - em erlenmeyer de 2S0 ml - em SO ml de mistura de partes iguais de lcool e ter, previamente neutralizada fenolftalena SI com hidrxido de sdio 0,1 M SV. Nlo ocorrendo dissoluo, acoplar o frasco a condensador de refluxo vertical e aquec-Io lentamente, sob agitao freqente. Oleos saturados com dixido de carbono (tcnica de conservalo) devem ser solubilizados na mistura solvente e aquecidos sob refluxo durante 10 minutos para assegurar a expulslo do ps. Opcionalmente, podem ser transferidos - previamente amostragem - para c4psula de porcelana rasa e mantidos em dessecador l presslo reduzida durante 24 horas. Para neutralizar os alcidos graxos livres, juntar 1 mI de fenolftalena SI e titular com hidrxido de sdio 0,1 M SV at persistncia da cor rsea plida durante 30 segundos sob agitaio. Proceder a ensaio em branco e corrigir o volume de titulante consumido.

Defmese ndice de saponificao como a quantidade, em rng, de hidrxido de potssio necessria neutralizao dos cidos graxos livres e saponificao dos steres presentes em 1 g de amostra. leos e gorduras naturais - em sua maioria misturas de steres triglicerdicos de cidos de cadeia longa - apresentam ndices de saponifi cao semelhantes. Entretanto, a determinao do ndice de saponificao relevante como indcio da presena de cidos contendo menos de 16 ou mais de 18 tomos de carbono, pelo fato de seu valor ser inversamente proporcional ao peso molecular mdio dos cidos graxos presentes na amostra. O ndice de saponificao tambm indicador vlido para adulteraes de matria graxa com substncias insaponificveis (leo mineral, por exemplo). ~
PR.OCEDIMENTO

frasco e mantlo em banho de gua .fervente durante 30 minutos sob rotao freqente. Se a amostra for constituda de leo saturado com di6xido de carbono (tcnica de conservao), transferi-Ia, previamente pesagem, para cpsula de porcelana rasa e mant-Ia em dessecador presslo reduzida durante 24 horas. Adicionar 1 ml de fenolftalena SI e titular o excesso de hidr6xido de potssio alcolico 0,5 M SV com cido clordrico 0,5 M SV. Proceder determinao paralela de branco e corrigir o volume de titulante consumido para a amostra. O ndice de saponificao fornecido pela f6rmula IS = V f . 28,05
m

Transferir 1,5 a 2,0 g, exatamente pesados, de amostra para frasco cnico de 250 ml e juntar 25 ml de hidrxido de potssio alcolico 0,5 M SV. AcopIar condensador de refluxo vertical ao

V = volume corrigido de cido clordrico 0,5 M SV consumido, f = fator de correfo, se houver, do cido clordrico SV, m = massa, em g, da tomada de ensaio.

Define-se iDcIic:e ele como a quantidade, 20 a 30 ml de lcool neutralizado fenolfta em q, de hidrxido de potsio necesria lena SI. Misturar, adicionar 1 ml de fenolfta saponificalo dos ~lteres presentes em 1,0 a de lena SI e titular com hidr6xido de potllio ma~ria graxa. Conclui-se que) para substancias alcolico 005 M SV. Neutralizados os 'cidos isentas de 'cidos araxos livres, o ndice de ~res graxos livres, juntar ao frasco 2S ml de hidrxido comsponde ao ndice de saponificalo. Al6m de potllio alcolico O,~M SV e prosseguir cUsso, ~ demecessio deteJ'IIlo quando o conforme indicado sob "Detenninalo do ndice ndice de acidez e o de saponificalo forem de saponificalo", a partir de "Acoplar condeno conhecidos; neste CIIO, basta subtrair o primeiro IIdor de refluxo ... ", omitindo, contudo, nova adilo de feno1ftalena SI. do sesundo para se chegar ao ndice de ~sterel. A diferena entre o nmero de ml de icido clordrico O,S M consumidos no ensaio e o nmero PROCEDIMENTO de ml patos no branco multiplicada por 28,OS Tranaferir 1,S a 2,0 a, exatamente pesados, e dividida pelo peso ela amostra em grama ~ o de amostra para frasco cnico de 2S0 ml e juntar ndice de ~ster.

Defme-se ndice de iodo como a quantidade, em g, de iodo absorvido sob condies determinadas, por 100 g de matria graxa. O ndice de iodo constitui, pois, medida quantitativa do grau de insaturao dos cidos graxos - esterificados e livres - presentes na amostra. A tcnica descrita baseia-se na incorporao de quantidade exata de mistura de iodo e bromo amostra; parte adicionada s duplas ligaes das cadeias dos cidos e o excesso de iodo, liberado pela adilo ao meio de quantidade correspondente de iodeto de potssio, titulado com soluo padrio de tiossulfato de sdio. O valor encontrado na determinao sugestivo do grau de pureza do material ensaiado assim como da presena de adulterantes: leos secantes (leos de linhaa e de fgado de bacalliau, por exemplo) apresentam ndices de iodo elevados, acima de 120, enquanto leos nlo secantes (azeite de oliva, por exemplo) geralmente fornecem ndices inferiores a 100 e gorduras animais, tipicamente saturadas, apresentam ndices de iodo reduzidos, abaixo de 90.

frmio para dissoluio. Adicionar 25 ml de brometo de iodo SR, tampar o frasco e deix-Io em repouso ao abrigo da luz durante 30 minutos, sob agitao ocasional. Em seguida, adicionar 30 ml de iodeto de potssio SR e 100 ml de gua (nessa ordem) e titular o iodo liberado com tiossulfato de sdio 0,05 M SV. Prximo viragem (a soluio titulada adquire cor amarela plida), juntar 3 ml de amido SR e prosseguir titulando at desaparecimento da cor azul. Executar branco paralelo e proceder necessria correo do volume de titulante consumido para a amostra. O ndice de iodo obtido pela frmula

In dice

de 12

V = -----fm1,269

v
f m

= =

volume

corrigido

de tiossulfato

de sdio

O,OS M SV consumido,
fator de correlo, se houver, do tiossulfato de sdio SV, massa, em g, da tomada de ensaio.

PROCEDIMENTO (MI!TODO DE HANUS)

Transferir cerca de 800 rng de gordura (slida) ou 200 mg de leo, exatamente pesados, para frasco de iodo de 250 ml e juntar 10 ml de cloro-

Observs6o: A tomada de ensaio deve ter grandeza adequada para consumir at cerca de 50% da soluio de brometo de iodo. Do contrrio, o resultado da determinaio nlo confivel, sendo necessrio repeti-Ia com tomada de ensaio menor.

o ncIice de per6xidos exprime o volwne, em ml, de solUlo volwntrica diluda de tiossulfato de sdio necessio 1 titulalo indireta (excesso de iodo) dos peIxidos presentes em 1 g de matria graxa. O valor encontrado critrio de avalialo para rancidez incipiente (pr-rancidez, caracterizada pela formalo de peIxidos instveis) e indica o estado de "conservaloda matria graxa. Os limites alo estabelecidos nas monografias.

PROCEDIMENTO

Transferir cerca de 1 g, exatamente pesado, de amostra para frasco de iodo de 2S0 ml e juntar

2S ml de mistura de 2 volwnes de llcido actico glacial e 1 volume de clorofrmio, lIItando at dissolulo da amostra. Adicionar 1 ml de solulo saturada de iodeto de potsio, tampar o frasco e deixll-Io em repouso durante 1 minuto. Juntar 3S ml de gua e titular o iodo liberado com tiossulfato de sdio 0,001 M SV. Prximo virasem (a solulo titulada adquire cor amarela plllida), juntar 1 ml de amido SR e prosseguir titulando at desaparecimento da cor azul. Execu tar branco paralelo e proceder 1 necessria corre Io do volume de titulante consumido para a amostra. O ndice de peIxidos fornecido pela frmUla V1m, em que V o volmne corrigido, em ml,de tiollUlfato de ldio 0,00 1M consumido e m corresponde massa, em g, da tomada de ensaio.

o ndice de bidroxila exprime a quantidade, em rog, de hidrxido de potssio necessria neutraliza1'o do cido formado na aclao com anidrido actico - das hidroxilas contidas em 1g de amostra. O mtodo aplicvel a substncias graxas e derivados, inclusive lcoois graxos, mono e diglicerdios e cido hidroxiesterico. O valor determinado inversamente propor cional ao peso molecular das cadeias constituintes da amoStra e ndices muito reduzidos, por exemplo, sugerem adulterao ;ia substncia com lcoois superiores ou com substncias graxas n'o alcolicas (parafmas etc.).
PROCEDIMENTO

Transferir a quantidade especificada (Tabela anexa), exatamente pesada, de substncia para frasco cnico de 250 rnl provido de tampa esme rilhada. Juntar 5 rnl de mistura anidrido acticopiridina SR e acoplar o frasco a condensador de refluxo Quntas esmerilhadas). Mant-Io sob aquecimento em banho-maria fervente durante 1 hora, ajustando o nvel de gua do banho 2 a 3 em acima do nvel de lquido no frasco. Em seguida, adicionar 10 rnl de gua atravs do condensador e manter sob aquecimento durante 10 minutos adicionais. Deixar resfriar e verter - ainda pelo M

condensador - 15 rnl de lcool but11ico, previamente neutralizado fenolftalena SI com bidrxido de potssio alcolico 0,5 M SV. RemoVero condensador e - aproveitando para lavar a parede do frasco - adicionar mais 10 rnl de lcool butlico neutralizado. Adicionar cerca de I rnl de fenolftalena SI e titular com hidrxido de potssio alcolico 0,5 M SV at viragem para rosa-plido. Tratar, paralelamente, outro frasco da forma descrita acima, omitindo a amostra (branco). O clculo do ndice de hidroxila requer a considerao da acidez livre da amostra original. Para tanto, adotar o volume de titulante obtido na determinao do ndice de acidez da amostra ou proceder como segue: transferir para frasco cnico, com 125 rnlde capacidade, cerca de 10 g de amostra, exatamente pesados, e juntar 10 rnl de piri dina recm-preparada e neutralizada feno1ftalena SI com hidrxido de potssio alcolico 0,5 M SV. Juntar cerca de 1 rnl de fenolftalena SI e titular, at viragem para rosa-plido, com hidrxido de potssio alcolico 0,5 M SV. Calcular o ndice de hidroxila pela frmula

TI =
Indlce de hidroxila esperado Massa da tomada de ensaio (g)

T2

O 20 50 100 150 200 250 300

a a a a a a

20 50 100 150 200 250 a 300 a 350

10 5 3 2 1,5 1,25 1,0 0,75

VI = V2 = V3 =

molaridade exata da soluo padro de hidrxido de potssio alcolico, massa, em g, da tomada de ensaio empregada para a acetilao, massa, em g, da tomada de ensaio empregada na determinao da acidez livre, volume, em rnl, de soluio padrio consu mida pelo branco, volume, em rnl, de soluio padro consu mida pela amostra acetllada, volume, em rnl, de soluio padro consumida na titulaio da acidez livre.

o ndice de acetila, cujo objetivo estabelecer o grau de presena de lcoois livres em substncias graxas, calculado com base na diferena entre ndices de saponificalo da substncia acetilada pela tcnica descrita a seguir e da substncia nloacetilada. Corresponde quantidade de lcali em mg de hidr6xido de potssio - necessria neutralizalo do cido actico liberado na hidr61isede 1 g de substncia acetilada.
PROCEDIMENTO Transferir 10 g de substncia e 20 ml de anidrido actico para ballo de fundo redondo e gargalo longo, com 200 ml de capacidade, fIxado a con densador de refluxo. Apoiar o frasco sobre tela de amianto em cujo centro tenha sido cortado orifcio de cerca de 4 em de dimetro e aquecer sobre chama de bico de gs com altura mxima de 2S mm (evitando que a chama alcance a base do balo). Manter em ebulio regular durante 2 horas, resfriar e transferir o contedo do balo para bquer de 1000 ml contendo 600 ml de gua. Adicionar 0,2 g de p de pedra.pomes e ferver durante 30 minutos. Resfriar e transferir a mistura

para funil de separao, rejeitando a camada aquosa inferior. Lavar a substncia acetilada com 3 ou mais pores de 50 ml de soluo saturada quente de cloreto de sdio at que a soluo de lavagem nlo mais fornea realo cida ao papel de tomassol. Juntar ainda 20 ml de gua quente ao funil e agitar, removendo, em seguida, o mais completamente possvel. a fase aquosa. Transferir a substncia para cpsula de porcelana, juntar 1 g de sulfato de s6dio pulverizado (desidratante), misturar bem e fIltrar atravs de papel de fl1tro pregueado. Determinar o ndice de saponificao da substncia original, no-"acetilada, e da substncia acetilada pelo procedimento acima e calcular o ndice de acetila pela f6nnula IA c
= (b - a~ 1335 13 5 - a

a = ndice
b

de original, ndice de acetilada.

saponifIcao saponifIcao

da da

substncia substncia

Matria insaponificvel em gorduras e leos a parcela da substncia que, embora solvel em solventes lipftlos clssicos, n'o se deixa saponificar por hidrxidos alcalinos. Igualmente includos na defmi'o estio os produtos de saponificalo lipossolveis. A fralo insaponificvel de leos e gorduras geralmente consiste de fitosterides ou colesterol e taxas anormalmente elevadas indicam a presena de adulterantes. PROCEDIMENTO Na falta de especificalo de tomada de ensaio na monografia, transferir 5,0 g, exatamente pesados, de matria graxa para frasco cnico de 250 ml, juntar solu'o de 2 g de hidrxido de potssio em 40 ml de lcool e aquecer o frasco durante 2 horas sob banho-maria fervente, aco plando-Ihe previamente condensador de refluxo vertical. Retirar o condensador e prosseguir no aquecimento at evaporalo do lcool e dissolver

o resduo em 50 ml de gua quente. Transferir a soluio para funil separador provido de tampa de politetrafluoretileno (Teflon), lavando o frasco com 2 pores de 25 ml de gua e juntando tambm essa gua ao funil. Resfriar temperatura ambiente, juntar algumas gotas de lcool para precipitar a separao de fases e extrair a fase oleosa com 2 pores de 50 ml de ter etico, combinando os extratos etreos em outro funil separador. Lavar os extratos combinados com 20 ml de hidr6xido de sdio 0,1 M, com 20 ml de hidrxido de s6dio 0,2M e, finalmente, com pores de 15 ml de gua at que a ltima nlo se avermelhe pela adilo de 2 gotas de fenolftalena SI. Transferir os extratos etreos, bem como poro de 10 ml de ter eh1ico empregado na lavagem do funil, para copo tarado. Evaporar o ter at secura em banho-maria fervente e dessecar o resduo durante 30 minutos a 100 oCoEsfriar em dessecador durante 30 minutos e pesar o resduo (substncia insaponificvel na tomada de ensaio). Calcular o resultado em porcentagem.

o doseamento com nitritos mtodo de utilidade na determinao quantitativa de aminas aromticas primrias, em geral, e de sulfonamdicos, em particular. Existem, basicamente, dois mtodos de dosea mento com nitritos:
o mtodo 1 emprega como indicador goma de amido iodetado ou papel de amido iodetado. O excesso de cido nitroso, em conseqncia da reao com o cido ioddrico do indicador, libera iodo, responsvel pela cor azul caracterstica da reao com o amido. O mtodo 2 compreende a determinao poten ciomtrica do ponto fmal da titulao. Este mtodo emprega eletrodos adequados - platinacalomelano ou platina-platina -, que devem ter diferena de potencial de 50 a 100 mV. A sensibilidade do dispositivo que mede a corrente deve variar de 0,1 a I nA. Pode-se utilizar agitao mecnica ou magntica ou, eventualmente, corrente de nitrognio atravs da soluo para mistur-Ia. Aps o uso, devese ter o cuidado de imergir os eletrodos por alguns segundos em cido ntrico SR ao qual se adicionou 1 rng/mI de cloreto frrico, lavando-osem seguida com gua.
Ml!TODO 1

a ltima adio. Esta deve continuar positiva. Caso tenha sido empregado, inadvertidamente, excesso de titulante, adicionar quantidade conhecida do sulfonamdico e proceder titulao por retorno. Para tanto, acrescentar quantidade conhecida da amostra e titular o excesso com a soluo de nitrito de sdio 0,1 M SV. O peso, em rng, da amostra correspondente a cada ml de nitrito de s6dio 0,1 M SV encontra-se descrito na monografia de cada frmaco em particular.
MUOD02

Tcnica - Pesar exatamente cerca de 500 rng, em se tratando de derivado sulfonamdico, ou quantidade especificada na monografia correspondente, quando se trata de outro tipo de amina aromtica primria. Transferir para erIenmeyer de 250 mI, adicionando, com agitao, tOO mI de cido clordrico SR para dissolver a amostra. Em seguida, adicionar cerca de 30 m1 de gua e 20 g de gelo picado. Aps resfriamento a aproximadamente 15C, titular a amostra lenta mente com soluo de nitrito de s6dio 0,1 M SV, previamente padronizada com sulfanilamida padro. Atinge.se o ponto final de titulao quando uma gota do lquido da soluo do erIenmeyer der imediatamente mancha azul sobre a goma de amido iodetado SI, colocada em placa de toque, ou sobre papel de amido iodetado SI umedecido. Para se comprovar o trmino da titulao, repetir a prova de toque 2 minutos aps

Tcnica - Pesar exatamente cerca de 500 mg, quando se tratar de sulfonamdico, ou a quantia dade especificada na monografia, quando se tratar de outras aminas aromticas primrias. Transferir para erIenrneyer e adicionar 20 ml de cido clor drico SR e 50 ml de gua. Agitar at dissoluo. Resfriar. para 15 De, mantendo esta temperatura no curso da titulao. Caso for especificado, acrescentar catalisador adequado. Titular, lentamente e sob agitao, com nitrito de sdio 0,1 M SV, previamente padronizado com sulfanilamida. A ponta da bureta devepermanecer pouco acima da superfcie da soluo, a fim de evitar a oxidao do nitrito de sdio. Deve-se,outrossim, impedir a agitao rpida, que forma um vrtice de ar abaixo da superfcie. No incio da titulao, a agulha do registrador apresenta deflexo a cada volume do titulante adicionado, voltando, em seguida, ao ponto de origem. Quando a titulao estiver a aproximadamente 1 ml do ponto fmal calculado, acrescentar volumes de 0,1 m1 em intervalos de, no mnimo, 1 minuto. Ao se atingir o ponto fmal da titulao, nio se observa deflexo alguma. O peso, em rng, da amostra que equivale a cada ml de nitrito de sdio 0,1 M SV adicionado encontra-se especificado na monografia de cada frmaco em particular. No doseamento de sulfonamdicos ou outras aminas aromticas primrias na forma de comprimidos, determinar o peso mdio de 20 comprimidos e, aps pulverizao, pesar o equivalente a 500 mg de princpio ativo. No caso de injetveis ou outras formas lquidas deve-se pipetar quantidade equivalente a 500 rngde princpio ativo. No restante, o procedimento anlogo.

o mtodo de Kjeldabl, descrito na forma de macro e de semi-microtcnica, destina-se determinao de nitrognio em substncias relativamente lbeis como amidas e aminas. Compreende duas fases: (1) mineralizao - digesto cataltica da substncia orgnica em cido sulfrico - com a decorrente converso quantitativa do nitrognio presente em sulfato de amnio; (2) destilao do digesto alcalinizado, sendo a amnia liberada no processo doseada por volumetria.
V.3.4.2.1. MTODO I (MACRODETERMINAO)

nitrognio, para balo Kjeldahl de 500 ml e juntar 25 rnl de cido sulfrico contendo 1 g de cido saliclico dissolvido. Misturar e aguardar durante cerca de 30 minutos, agitando com freqncia. Juntar 5 g de tiossulfato de sdio, misturar e, em seguida, adicionar 0,5 g de sulfato cprico. Prosseguir conforme indicado na tcnica j descrita, a partir de "Inclinar o balo cerca de 45 ... ". Quando o contedo de nitrognio na amostra excedeI 10%, juntar - previamente digesto - 0,5 a 1,0 g de cido benzico para facilitar a decomposio da substncia.

Transferir cerca de 1 g de amostra, exatamente pesado, para balo Kjeldahl de 500 rnl. Juntar 10 g de sulfato de potssio, 0,5 g de sulfato cprico e V.3.4.2.2. MtTODO 11 (SEMI-MICRODETERMINAO) 20 rnl de cido sulfrico. Inclinar o balo cerca de 45 e aquecer lentamente, mantendo a ~empeTransferir quantidade exatamente pesada de ratura abaixo do ponto de ebulio enquanto substncia, correspondente a 2-3 mg de nitrognio, houver desenvolvimento de espuma. Aumentar a para balo de Kjeldahl compatvel com o aparelho. temperatura at que o cido ferva de modo regular Juntar 1 g de sulfato de potssio e 0,1 g de sule prosseguir no aquecimento at 30 minutos aps fato cprico e, se for o caso, lavar os slidos a mistura ter ficado lmpida e adquirido cor aderentes ao gargalo com rmo jato de gua. Juntar verde-clara. Deixar esfriar, juntar 150 rnl de gua, 7 m1 de cido sulfrico e, em seguida, 1 m1 de misturar e esfriar novamente. Juntar cuidadosaperxido de hidrognio a 30% (V/V), tomando a mente 100 ml de soluo a 40% (p/V) de hidrxido precauo de, nas duas adies, permitir que os de sdio, permitindo que o lcali escorra pela lquidos escorram pela parede do balo. Aquecer parede do balo e forme fase independente sob a o frasco e manter a digesto at desaparecimento soluo cida. Adicionar pequena quantidade de dos resduos de carbonizao e a soluo azul-clara zinco granulado e, sem demora, conectar o balo se mostrar perfeitamente lmpida. Cuidadosamente, ao bulbo de isolamento previamente fixo a juntar 20 ml de gua e esfriar. Conectar o balo condensador, cuja outra extremidade esteja imersa ao aparelho de destilao indireta, por vapor e, em 100 ml de soluo a 5% (P/v) de cido brico atravs do funU, juntar 30 rnl de soluo a 40% em erlenmeyer de 500 rnl. Misturar as fases (P/V) de hidrxido de sdio. Lavar o funil com no balo, por agitao suave, e destilar at que gua e, sem demora, proceder destilao. Recocerca de 80% do volume contido no balo tenham lher o destilado em erlenmeyer de 250 rnl contendo sido destilados. Adicionar cerca de 3 gotas de 15 m1 de soluo a 5% (p/V) de cido brico, cerca vermelho de metila SI ao frasco receptor e titular de 25 rnl de gua e 3 gotas de vermelho de metila com cido sulfrico 0,25 M SV. Fazer ensaio em SI. Certificar-se de que a extremidade do condenbranco e proceder necessria correo no volume sador esteja imersa - por meio de tubo de vidro de titulante consumido. Cada ml de cido sulfrico ligado ao condensador por junta apropriada - no 0,25 M SV equivale a 7,003 mg de nitroFnio. lquido coleto r, antes de iniciar a destilao. Para amostras com baixos nveis de nitroFnio, Destilar at que o volume de destilado atinja 80 empregar cido sulfrico 0,05 M SV. Neste caso, a 100 m1; remover o frasco coletor, lavar as parecada m1 equivale a 1,401 mg de nitrognio. des com pequena quantidade de gua e titular com cido sulfrico 0,005 M SV. Fazer ensaio em Na presena de nitratos ou nitritos branco e proceder necessria correo no volume Transferir quantidade exatamente pesada de de titulante consumido. Cada ml de cido sulf\amostra, correspondendo a cerca de 150 mg de SV equivale a 0,1401 mg de nitrognio.

mtodo do frasco de combusto constitui variedade de anlise elementar destinada identi ficao e/ou doseamento de substncias orgnicas segundo seu contedo em halognios ou enxofre. A amostra subqtetida combustllo em frasco apropriado, em ambiente de oxignio, sendo o halognio gasoso ou dixido de enxofre formados no processo absorvidos em solues apropriadas, nas quais so convertidos em formas qumicas doseveis por mtodos volumtricos.
APARELHAGEM

Compreende frasco de iodo de parede grossa (cerca de 2 mm), de vidro refratrio resistente, com capacidade nominal de 500 mI. Para a tcnica de determinao de flor, emprega-se frasco de quartzo. base da tampa esmerilhada que acompanha o frasco, fIXa-se, por fuso, segmento de basto de vidro ao qual, tambm por fuso, fixado fio de platina em cuja extremidade se encontra anexada rede de platina com abertura de malha 4251lm. As dimenses encontram-se na ilustrao anexa.

deslocamento devido presso exercida pelos gases de ignio. Iniciada a combusto, inverter o frasco para assegurar vedaio lquida na tampa, tomando a precauo de evitar que material incompletamente queimado caia no lquido. Concluda a combusto, lI8itar o frasco ocasionalmente, at que a fumaa branca formada no processo desaparea. Decorridos 15 a 30 minutos, colocar pequena poro de gua na borda do frasco e remover a tampa, peimitindo que esta gua flua para o interior do frasco, lavando as paredes do gargalo. Lavar tampa, gargalo, fio e rede de platina com gua e juntar estas guas de lavagem soluo absorvente. A soluo obtida segundo este procedimento designada soluoamostra. Para o preparo do branco, proceder da maneira descrita, omitindo a amostra (Nota 2). Amostras Ilquidas Enrolar pt"~uena quantidade de algodo absorvente em pedao de papel de ftltro provido de mecha e pesar, neste dispositivo, a quantidade especificada da amostra, que absorvida no algodo. Aps a fixao do algodo envolvido no papel de ftltro grade de platina, proceder combusto tal como descrita para amostras slidas. Determinao de cloro e bramo Queimar a quantidade especificada de substncia sob exame da forma descrita, empregando como soluo absorvente 20 mI de gua acrescidos de 1 ml de perxido de hidrognio (100 volumes) e 3 ml de hidrxido de sdio 0,1 M. Concluda a absoro, juntar 2 gotas de azul de bromofenol SI e quantidade suficiente de cido ntrico 0,1 M para virar o indicador de azul para amarelo, incorporando 0,5 mI de excesso. Se a substncia em anlise contiver enxofre, adicionar algumas gotas de nitrato de brio 0,005 M.Juntar 100 mI de etanol aproveitando a adio para lavar as paredes internas do frasco e, em seguida, 15 gotas de difencarbazona SI. Titular com nitrato de mero crio(Il) 0,005 M SV at colorao r6sea permanente. Cada mI de nitrato de mercrio(lI) 0,005 M SV equivale a 0,3550 mg de cloro ou a 0,79904 mg de bromo. Determinao de iodo Queimar a quantidade especificada de substncia sob exame da forma descrita, empregando como lquido absorvente 10 mI de gua acrescidos de 2 mI de hidrxido de sdio M. Concluda a absorio, juntar 1 mI de soluo de hidrato de hidrazina 4 M em gua, tampar novamente o frasco

Amostras slidas Pesar a quantidade especificada de substncia (correspondente a cerca de 23 mg do elemento sob anlise) em pedao de papel de ftltro de formato e dimenses apropriadas, dobrar e prender o pacote assim preparado na tela de platina, deixando livre a mecha. Umedecer o gargalo do frasco com gua, colocar em seu interior a soluo absorvente especificada e borbulhar oxignio nesta soluo com o intuito de expulsar o ar e saturar o ambiente do frasco e a soluo absor vente com o gs. Acender a mecha (veja Nota 1) e, sem demora, colocar a tampa no frasco, mano tendo-a em posio com firmeza para evitar seu

e agitar at descoramento da soluo. Em seguida, proceder como descrito em Determinao de cloro e bromo a partir de "Concluda a absoro ... ". Cada ml de nitrato de mercrio(I1) 0,005 M SV equivalea 1,269 mg de iodo.
Determinao de f1or

Queimar quantidade especificada de substncia sob exame da forma descrita, empregando como lquido absorvente 15 ml de gua. Completada a operao, lavar tampa, fio de platina, tela de platina e paredes do frasco (Nota 3) com 40 ml de gua. Adicionar 0,6 ml de alizarina SI e, em seguida, gota a gota, hidrxido. de sdio 0,1 M at que a cor mude de rosado para amarelo. Adicionar 5 ml de sol\lo tampo acetato pH 3 e titular com nitrato de t6rio U,UU5 SV M at que a cor amarela mude para amarelo rosado. Cada ml de nitrato de t6rio 0,005 M SV equivale a 0,380 mg de flor. Havendo dificuldade na identificao do ponto de viragem, fazer ensaio preliminar com soluo padronizada de flor inorgnico.
OeterminaSo de enxofre

como lquido absorvente 12,5 ml de per6xido de hidrognio SR. Concluda a absoro, juntar 40 ml de gua, aproveitando para lavar tampa, fio e tela de platina e paredes do frasco. Ferver a soluo por 10 minutos, esfriar, adicionar 2 ml de cido actico SR e 20 ml de etanol SR. Titular com nitrato de brio 0,01 M SV, usando 2 gotas de torina SI e 2 gotas de cloreto de metiltionnio SI como indicador at que, a cor amarela mude para r6sea. Cada ml de nitrato de brio 0,01 M SV equivale a 0,3206 g de enxofre.

Queimar a quantidade especificada de substncia sob exame da forma descrita, empregando

l. Recomenda-se ao analista usar culos de segurana e proteo adequada para evitar que estilliaos de frasco o atinjam em caso de acidente. 2. Assegurar-sede que os frascos de combusto estejam escrupulosamente limpos e isentos de traos de solventes orgnicos. 3. Substncias contendo flor fornecem teores baixos se a combustio for executada em frascos de vidro borossilicato. Obtm-se resultados satisfat6rios em frascos de vidro-sodaisento de boro mas o rendimento ideal implica no emprego de frascos de slica (quartzo).

Complexometria mtodo analtico volumtrico que compreende a titulao de ons metlicos com agentes chamados complexantes. A reao envolvida do seguinte tipo:

Muitos complexantes, denominados quelantes, so capazes de formar estruturas cclicas atravs da coordenao simultnea de vrios grupos da mol cula, junto ao on metlico. O cido edtico (etilenodiaminatetractico, EDTA) exemplo tpico. Este cido consiste no agente complexante mais utilizado em complex:vmetria. Como a maioria dos agentes complexantes, o EDTA apresenta vrios equilbrios cido-base em funo do pH:

Em pH 2,3, 50% do EDTA esto presentes na foma de H3EDTA-; em pH 4,5, cerca de 90% encontram-se na forma de H2 EDTA 2 -. Em pH 8,1, todo o EDT A encontrado na forma de HEDT A3 -. Acima de pH 12,5, o EDTA estar ionizado completamente . Dessa maneira, a formao de complexos em soluo compreende uma srie de equihbrios do tipo:

do agente quelante soluo contendo o on metlico at o ponto de viragem, que detectado por mtodo conveniente. Emprega-se este mtodo para dosear, pelo EDTA, os ons alumnio, ferro (11), clcio, magnsio, zinco, cdmio, cobre(I1), nquel, cobalto, chumb o (11), brio, mangans, mercrio e muitos ootros. Na titulalo por retoqlO adiciona-se excesso conhecido da soluo padro do agente quelante do on metlico e titula-se este excesso por retomo com soluo padro de um segundo on metlico, at viragem. Por este mtodo podem ser doseados chumbo(I1), alumnio, mercrio(I1) e nquel. Uma das vantagens deste mtodo a possibilidade de titular metais na forma de sais insolveis; assim, o sulfato de brio dissolvido em excesso de EDT A amoniacal e titula-se por retomo com magnsio. A titulao por substituio consiste em deslocar quantitativanlcnte um segundo metal MIl de um complexo pelo metal MI que est sendo doseado e, em seguida, dosear diretamente, por soluo padrfo do agente quelante, o segundo metal assim liberto; a partir destes dados calcula-se o teor de MI no sistema. Usa-se este mtodo para dose ar clcio, chumbo, mercrio e ferro (1II). A titulao indireta usada para dose ar ons, tais como nions, que n[o reagem com um agente quelante. Duas maneiras so utilizadas neste mtodo: a) Precipita-se quantitativamente a substncia doseada fazendo-a reagir com um on metlico; retira-se o complexo por ftltrap; redissolve-se este complexo com excesso de soluo padro de EDT A e titula-se este excesso com soluo padro de um on metlico apropriado. Usando-se este artifcio possvel dose ar barbitricos, que no reagem com o EDTA, pela anlise complexomtrica.
Barbiturato + Hg(I1) Complexo Hg-Barbiturato (precipitao) Complexo Hg-Barbiturato + EDT A em excesso Barbiturato + Hg-EDTA + EDTA (dissoluo) H.EDTA2+ Zn2+ ~ Zn-EDTA2(titulao) + 2W

Na complexometria, o ponto de viragem pode ser determinado visual ou instrumentalmente. Via de regra empregam-se indicadores comple. xantes que exibem profundas alteraes de cor mediante coordenalo com o metal. Exemplos tpicos slo: cido calconcarboxlico, alaranjado de xilenol, calcona, calmagita, murexida, negro de eriocromoT e violeta de pirocatecol. O indicador complexo mtrico atua de forma competitiva com o agente titulante, devendo ser deslocado efetivamente pelo mesmo nas proxi midades do ponto de equivalncia. De modo anlogo ao agente titulante, a ao do indicador tambm afetada pelo pH. Assim, a escolha adequada do indicador e o controle do pH (por exemplo, atravs de tampes) tomam-se fatores decisivos na anlise complexomtrica. H quatro tipos de titulao complexomtrica: direta, por retomo, por substituio e indireta. Na titula'o direta, que mais simples e mais freqentemente usada, adiciona-se soluo padro

b) Precipita-se o nion com excesso de metal apropriado e titula-se o metal em excesso no filtrado com soluo padro de EDTA. Desta maneira possvel dose ar, por exemplo, os sul fatos.

sof

+ Ba2+ em excesso"

BaS04 + Ba2+ (precipitao) (titulao)

Ba2+ + EDTA4- "'" Ba - EDTA2-

Pesar exatamente a quantidade da substncia indicada na monografia, dissolver em 2 ml de cido clordrico M e 50 ml de gua, salvo se a monografia indicar outro tipo de solvente. Juntar 25 ml de EDT A dissdico 0,1 M SV e 10 ml da mistura, em volumes iguais, da soluo de acetato de amnio 2 M e cido actico 2 M. Aquecer 'at ebulio, deixando a soluo ferver durante 2 minutos. Resfriar. Juntar 50 ml de etanol e 3 ml de soluo recm-preparada de ditizona em etanol 0,025% (pfV). Titular o excesso de EDT A dissdico com sulfato de zinco 0,1 M SV at mudana da cor de azul-esverdeada para violeta-rsea. Cada ml de EDT A dissdico 0,1 M SV equivalente a 2,698 mg de alumnio.
Bismuto

calcona SI. Prosseguir a titulao at que a cor mude de rsea para azul intensa. Cada ml de EDTA dissdico 0,05 M SV equivalente a 2,004 mg de clcio.
Chumbo

Pesar exatamente a quantidade da substncia indicada na monografia e dissolver em 5 a 10 ml de gua, ou na quantidade mnima de cido actico 5 M. Diluir a 50 ml com gua. Juntar gotas de alaranjado de xilenol SI e metenamina suficiente (aproximadamente 5 g) para que a soluo adquira cor violeta. Titular com EDT A dissdico 0,05 M SV ou 0,1 M SV, conforme indicado na monografia, at mudana da cor de violeta para amarela. Cada ml de EDT A dissdico 0,05MSV equivalente a 10,35 mg de chumbo. Magnsio

Pesar exatamente a quantidade da substncia indicada na monografia e dissolver em quantidade mnima de cido ntrico 2 M. Juntar 50 ml de gua e ajustar o pH a 1,0-2,0 adicionando gota a gota, e com agitao, cido ntrico 2 M ou hidrxido de amnio 5 M. Usar como indicador alaranjado de xilenol SI. Titular lentamente cOm EDTA dissdico 0,05 M SV at mudana da cor de violeta rsea para amarela. Cada ml de EDT A dissdico 0,05 M SV equivalente a 10,45 mg de bismuto.
Clcio

Pesar exatamente a quantidade da substncia indicada na monografia e dissolver em 5 a 10 ml de gua, ou na quantidade mnima de cido clordrico 2M. Diluir a 50 ml com gua. Juntar 10 ml de soluo-tampo de cloreto de amnio, pH 10,0, e negro de enocromo T SI. Titular com EDTAdissdico 0,05 MSVou 0,1 MSV, conforme indicado na monografia, at mudana da cor de violeta para azul. Cada ml de EDT A dissdico 0,05 MSV equivalente a 1,215 mg de magnsio. Zinco

Pesar exatamente a quantidade da substncia indicada na monografia, dissolver em alguns ml de gua e acidificar, se necessrio, com quantidade mnima de cido clordrico 2 M. Diluir a aproximadamente 100 ml com gua. Titular com EDTA dissdico 0,05 M SV at cerca de 2 ml antes do ponto de equivalncia previsto. Adicionar 4 ml de hidrxido de sdio 10 M e gotas de

Pesar exatamente a quantidade de substncia indicada na monografia e dissolver em 5 a 10 ml de alaranjado de xilenol SI e metenamina suficiente (cerca de 5 g) para conferir cor violeta soluo. Titular com EDTA dissdico 0,05 M SV ou 0,1 M SV, conforme indicado na monografia, at mudana da cor de violeta para amarela. Cada ml de EDTA dissdico 0,05 M SV equivalente a 3,268 mg de zinco.

Os frmacos que no podem ser doseados em meio aquoso, por serem demasiadamente pouco bsicos ou pouco cidos, sfo doseados em meio no-aquoso, que mtodo rpido e exato, permitindo, alm disso, dosear misturas de frmacos. Visto que, neste mtodo de doseamento, se usam solventes orgnicos, deve-se levar em conta o alto coeficiente de expanso cbica da maioria em relao ao da gua. Isso porque h possibilidade de ocorrer variao do teor do titulante em meio nfoaquoso em funo da temperatura. Corrige-se, entfo, o volume do titulante e, por conseguinte, seu ttulo, multiplicando-o pela frmula

11 + coeficiente de expanso cbica do solvente

(to - t)1 em que to = temperatura de padronizao do titulante, t = temperatura de utilizao do titulante. So inmeros os compostos qumicos, incluindo os frmacos, que podem ser doseados com vantagem em meio no-aquoso: cidos carboxlicos, aminocidos, anidrido de cidos, enis do tipo dos barbitricos e das xantinas, fenis, haletos de cidos, imidas, pirris, sulfas, aminas, compostos de amnio quatemrio, compostos heterocclicos nitrogenados, sais alcalinos dos cidos orgnicos, sais alcalinos dos cidos inorgnicos, alguns sais de aminas. A titulao em meio no-aquoso baseia-se no conceito cido-bsico de Br'msted-Lowry. Segundo esses autores, cido a substncia que tem a capacidade de doar pr tons e base aquela que tem a capacidade de receber prtons. Assim, substncias potencialmente cidas podem funcionar como cidos somente em presena de base qual possam doar prton e vice-versa. O solvente desempenha, por conseguinte, papel muito importante na determinafo do carter cido-bsico de uma substncia, j que dele depende o meio necessrio para que um ou outro carter seja ressaltado. A gua deveria ser o solvente de escolha, porquanto de fcil disponibilidade. No entanto, por seu carter anfotrico - cido e bsico - pode competir com a base ou com o cido a ser determinado pela captao ou doao do prton se tais compostos forem mais fracos do que a gua. Tais substncias no seriam, portanto, titulveis em meio aquoso. Como resultado da interao entre soluto e solvente, dois sfo os efeitos possveis de serem observados: efeito nivelador e efeito diferenciador do solvente. Pelo efeito nivelador no se pode comparar a fora, quer cida quer bsica, de dois solutos, visto que se mostraro idnticos neste particular. Assim que, em gua, os cidos carbo-

xwcos so fracos, mas tornam-se completamente ionizados quando em amnia lquida. A alta basicidade desta ltima exerce, portanto, efeito nivelador sobre as foras aparentes dos cidos nela dissolvidos. Os cidos carboxlicos assemelham-se, nestas condies, aos cidos minerais comuns, fortemente cidos. Analogamente, a fora aparente de uma base pode ser ressaltada pelo efeito nivelador de solventes cidos. Assim, amnas, teres, arnidas, cetonas e nitrocompostos e mesmo certos hidrocarbonetos aromticos so fracamente bsicos na presena de gua. Tomam-se, contudo, fortes ao serem dissolvidos em cido sulfrico 95 a 100%, que exerce, com isso, seu efeito nivelador. medida que a acidez do solvente diminui, na seguinte ordem: cido sulfrico, cido actico, fenol, gua, piridina e butilamina, as bases vo se tornando progressivamente mais fracas at que percam, com exceo das mais fortes, suas caractersticas bsicas. Atravs do efeito diferencador pode-se, em presena de dois cidos ou duas bases, proceder comparao de suas foras. Em solvente fracamente protoflico, como o cido actico glacial, que forma on acetnio por adio de um prton, pode-se ordenar de forma decrescente a fora de cidos minerais nele dissolvidos, como segue: cido perclrico, cido bromdrico, cido sulfrico, cido clordrico e cido ntrico. Analogamente, o cido actico, por ser anfipr6tico, exerce efeito diferenciador em mistura de bases fracas ou muito fracas. Os solventes empregados na titulao em meio no-aquoso devem satisfazer certas exigncias: (1) no devem sofrer reaes secundrias com a substncia, tampouco com o titulante; (2) devem dissolver a substncia permitindo, no mnimo, preparo de soluo 0,01 M; (3) devem dissolver o produto da titulafo. Se a precipitao for, con tudo, inevitvel, o precipitado deve ser compacto e cristalino, ao invs de volumoso e gelatinoso; (4) devem permitir com facilidade a visualizao do ponto final, seja este medido mediante o uso de indicadores, seja mediante potencimetro; (5) devem ser de baixo custo e de fcil purificao. Para a titulao de substncias de carter bsico - aminas, heterocclicos nltrogenados, oxazolinas, compostos de amnia quatemrio, sais alcalinos de cidos orgnicos e de inorgnicos fracos e alguns sais de aminas - empregam-se solventes de natureza relativamente neutra ou cida, sendo o cido actico glacial o mais empregado. O anidrido actico reservase a bases muito fracas, como amidas. Tem igualmente a fmalidade de evitar o excesso de gua eventualmente presente como umidade adsorvida ou de hidratao do frmaco. A dioxana freqentemente utilizada

com cido actico, urna vez que muitas vezes se recomenda nstura de solventes aprticos com cidos. Para as de difcil dissoluo pode-se empregar mistura de glicis com outros solventes. Como titulante emprega-se, geralmente, a soluo de cido perclrico em cido actico. Outros titulantes teis so cido percl6rico em dioxana, cido p-toluenossulfnio (cido tsico) e cido fluorsulfnico. O mtodo de deteco do ponto fmal do doseamento varia de acordo com o pKa das bases em gua. Para aquelas que apresentam pKa da ordem de 4, a deteco , em geral, por meio de indicadores; para as que apresentam pKa entre 1 e 4, a deteco potenciomtrica. Nesse. caso, o eletrodo de vidro-calomelano til. Em cido actico, tal eletrodo funciona de acordo com o previsto teoricamente. No caso do eletrodo de calomelano como referncia, vantajoso substituir a ponte salina de cloreto de potssio aquoso por perclorato de ltio 0,1 M em cido actico glacial. Aps remoo do cloreto de potssio aquoso, lavar com gua e depois com solvente no-aquoso. . Quando se trata de sais de cidos halogenados cloridrato, bromidrato e iodidrato - deve-se adicionar acetato de mercrio, que no se dissocia em soluo de cido actico. O on haleto, base demasiadamente fraca para Ieagr quantitativamente com cido perclrico em cido actico, substitudo quantitativamente pelo on acetato, que em cido actico base forte. Quando se emprega cido perclrico 0,1 M SV podem-se utilizar quantidades de acetato de mercrio superiores a 3 g, sem risco de reaes secundrias. Quando se trata de cido perclrico 0,01 M SV, recomenda-se que a quantidade de acetato de mercrio no ultrapasse 2 moles por moI de composto em exame. Para a titulao de substncias que se comportam como cidos - cidos halogenados, anidridos de cidos, cidos carboxlicos, arninocidos, enis do tipo de barbitricos e xantinas, imidas, fenis, pirris e sulfas - empregam-se como solventes os de natureza bsica ou aprtica. Para os que tm acidez mdia, utilizam-se bases mais fracas, como dimetilformamida - a presena de gua pode provocar hidrlise, produzindo cido frrnico, que interfere na titulao -, freqentemente empregada, e piridina. Em se tratando de cidos fracos, empregam-se bases mais fortes, como morfolina, etilenodiarnina e n-butilarnina. Alm dessas, certos lcoois e cetonas encontram emprego nessas deternnaes. Outrossim, selecionando adequadamente os solventes bsicos; pode-se proceder determinao seletiva em mistura de cidos. ~ importante que se protejam os solventes da exposia'o excessiva atmosfera, devido interferncia de CO2 na reao. Por isso, pode-se empregar atmosfera inerte ou aparelho especial, durante a titulaa'o. Para determinar a absoro de CO2 deve-se proceder titulao

do branco, que nlio deve exceder 0,01 m1 do metxido de sdio 0,1 M SV por m1 de solvente. Duas classes de titulante podem ser empregadas para determinalio de substncias de carter cido: (1) os alcxidos de metais alcalinos e (2) oshidr6xidos de alquilamnio quaternrio. Dos alcxidos, o met6xido de potssio, em mistura de metanoltolueno ou metanol-benzeno, o mais empregado. O met6xido de ltio em metanol-benzeno utilizado para os compostos que formam precipitado gelatinoso mediante titulao com metxido de sdio. Dos hidrxidos, o mais utilizado o hidrxido de tetrabutilamnio. O mtodo de deteco do ponto final no doseamento de cidos de pK em gua em tomo de 7 pode ser feito com o uso de indicador. Por outro lado, para os cidos com pKa entre 7 e 11 recomenda-se determinao potenciomtrica, ainda que em certos casos se recorra a indicadores, corno violeta az6ico ou o-nitroanilina, com menor preciso, entretanto. O erro alcalino restringe o emprego de eletrodo de vidro com alcxidos de metais alcalinos, sobretudo em solventes bsicos. Assim, pode-se, ainda que sujeito a erros, utilizar o eletrodo de antimnio. Com os hidr6xidos de amnio quatemrio, em particular os hidrxidos de tetrabutilamnio e o de trimetilexadecilamnio - em mistura de benzeno-metanol ou lcool isoproplico - tem-se a vantagem de que o sal do cido titulado solvel . no meio de titulao. Por outro lado, o ponto de viragem , em geral, determinado potenciometricamente com sistema de eletrodo de vidro-calomelano. Nesse caso vantajosa a substituio da ponte salina de cloreto de potssio aquoso do eletrodo de calomelano de referncia por cloreto de potssio em metanol. Os sistemas mais empregados para a titulao em meio nllo-aquoso esto na Tabela.

Titula60 de substncias de carter bsico

Dissolver quantidade de substncia indicada na monografia em quantidade igualmente especificada do solvente ou mistura de solventes adequados. Juntar o indicador adequado ou, no caso de determinao potenciomtrica, empregar o eletrodo adequado, titulando com soluo actica de cido perclrico 0,1 M SV. Paralelamente, proceder titulao em branco. Para se calcular o teor porcentual da substncia doseada emprega-se a f6rmula que segue: %

100(n - n') mEq p

tomada da amostra em g, mililitros de cido percl6rico gasto com a amostra,

n'
mEq

mililitros de cido perclrico gasto com o branco, miliequivalente da amostra.

Caso necessrio - se to for diferente de t corrigir o volume segundo a frmula indicada anteriormente, a saber:

to t

temperatura na qual o titulante foi padronizado, temperatura na qual a titulao foi realizada.

Titulao de sais de cidos halogenados

quantidade de substncia especificada na respectiva monografia adicionar solvente ou mistura de solventes adequados. Adicionar entre 5 e 15 ml (geralmente 10 rnl) de acetato de mercrio actico SR para impedir a interferncia do halognio. Titular com cido perclrico 0,1 M SV como descrito para as substncias de natureza bsica.

Mtodo J - Dissolver quantidade da substncia especificada na monografia correspondente no solvente ou mistura de solventes indicados. Adicionar o indicador recomendado ou, se for o caso, usar o eletrodo adequado determinao potenciomtrica_ Titular com soluo padro de metxido de potssio 0,1 M SV, previamente padronizada com cido benzico. Cuidar para que no haja absoro de dixido de carbono. Efetuar ensaio em branco. O clculo do teor de substncia segue a frmula anteriormente indicada. Analogamente, se houver necessidade, aplicar a frmula de correo de volume usando o coeficiente de expanso cbica do benzeno, que 0,0012. Mtodo 11 - Dissover quantidade da substncia indicada na monografia correspondente no solvente ou mistura de solventes indicados. Titular com soluo de hidrxido de tetrabutilamnio 0,1 M SV, vertida de bureta equipada com absorvedor de dixido de carbono. Determinar o ponto de viragem potenciometricamente. Efetuar ensaio em branco, fazendo, caso necessrio, correo de volume. O clculo do teor da substncia segue a frmula anteriormente indicada.

Acido
(para titulao de basese de seus sais)

cido actico glacial cido frmico cido propinico Anidrido actico Cloreto de sulfonila Acetato de etila Acetonitrila lcoois Benzeno C1orobenzeno Clorofrmio Dioxana n-Butilamina Dimetilformamida Etilenodidmina Morfolina Piridina Acetona Acetonitrila lcool t-butllico 2-Butanona Isopropilacetona

Alfazurina 2-G Cloreto de metilrosanilina p-Naftolbenzelna Verde de malaquita Vermelho de quinaldina Alaranjado de metila p- Naftolbenzelna Vermelho de metila

Mercrio-acetato de mercrio Vidro-calomelano Vidro-prata-c1oreto de prata

Relativamente neutro
(para titulao diferencial de bases)

Calomelano-prata-cloreto de prata Vidro-calomelano

Bsico (para titulao de cidos)

Azul de timol p- Hidroxiazobenzeno o- Nitroanilina Timolftale(na Violeta azico Azul de bromotimol Azul de timol p- Hidroxiazobenzeno Violeta az6ico

b Aotimnio-antimnio Antimnio-calomelano Antimnio-vidro Platina-calomelano Vidro-calomelano Antimnio-calomelano Vidro-calomelano Vidro - plati na

Relativamente neutro
(para titulao diferencial de cidos)

= solventes relativamente

neutros de constante dieltrica baixa, tais como benzeno, clorofrmio ou dioxana, podem ser utilizados junto com qualquer solvente cido ou bsico a fim de aumentar a sensibilidade dos pontos de viragem da titulao.

b = no titulante.

A tcnica destinada determinao da quanti dade de grupos metoxila em substncias orgnicas consiste na rea'o do composto a dosear com cido ioddrico concentrado. O iodeto de metila formado - mais voltil que o cido ioddrico aquoso - separado por destilao sob corrente contnua de nitrognio ou di6xido de carbono, lavado e absorvido em soluo bromo-actica. O doseamento compreende a volumetria de retomo de iodo liberado com soluo padronizada de tiossulfato de sdio.
APARELHAGEM

O aparellio empregado na determinao da metoxila consis~ de balo de fundo redondo, com 50 ml de capacidade, ao qual se encontra soldado brao lateral capilar, com 1 mm de dimetro interno, destinado almenta'o de gs de arraste inerte (nitrognio ou di6xido de carbono). Ao ballo conecta-se - por juntas esmerilliadas condensador vertical de cerca de 25 cm de altura e 9 mrn de dimetro interno, em cujo topo est fixado tubo curvo (180), cuja extremidade, capilar, com 2 mm de dimetro interno, encontra-se imersa em cerca de 2 ml de gua contida em pequeno frasco de lavagem. A sada do lavador consiste em tubo de cerca de 7 mm de dimetro interno, que termina em tubo removvel de 4 rnm, imerso no lquido absorvente do primeiro de dois frascos receptores montados em srie.
PROCEDIMENTO

Introduzir no balo quantidade de amostra suficiente para a formao de aproximadamente

50 mg de iodeto de metila ou a quantidade indi cada na monografia. Juntar prolas de vidro, 2;5 ml de fenol fundido e 5 ml de cido ioddrico. Preparar soluo a 10% (P/V) de acetato de potssio em cido actico glacial e colocar 6 e 4 ml desta soluo no primeiro e no segundo tubo receptor, respectivamente, juntando a cada tubo 6 gotas de bromo. Passar corrente uniforme de dixido de carbono ou nitrognio atravs do brao lateral do balio, visando expulso contnua de iodeto de metila formado. Aquecer suavemente o balo por meio de micro-bico de Bunsen ou manta de amianto, de forma a permitir que os vapores do lquido em ebulio alcancem a poro mediana do condensador. Manter sob aquecimento durante 30 minutos e transferir quantitativamente, por lavagem, o lquido contido nos dois tubos coletores para erlenmeyer de 250 ml provido de tampa esme rilhad a, contendo 5 ml de soluo a 25% (P/V) de acetato de sdio. Ajustar o volume do lquido para cerca de 125 ml com gua e juntar 6 gotas de cido frrnico. Agitar o frasco por rotao manual at que o excesso de bromo (cor castanha) desaparea e juntar mais 12 gotas de cido frrnico. Tampar o frasco, agit-lo com vigor para assegurar completa remoo dos vapores de bromo e deix-lo em repouso durante 1 a 2 minutos. Adicionar 1 g de iodeto de potssio e 5 ml de cido sulfrico M e titular o iodo libe rado com tiossulfato de sdio 0,1 M SV, empre gando amido SI como indicador. Repetir a opera'o omitindo a substncia e proceder necessria corre'o do volume de titulante consumido. Cada ml de Na2 S2 03 0,1 M SV equivale a 0,5172 mg de metoxila (CH3 O).

20 m1 de cido clordrico. Fixar o balo ao apa relho e passar corrente lenta e uniforme de di?tido de carbono ou nitrognio, previamente em soluo a 6% (p/V) de carbonato de sdio, pelo brao lateral. Aquecer gradualmente a mistura, mantendo-a em ebulio durante cerca de 10 minutos e, em seguida, removendo momentaneamente APARELHAGEM a fonte de calor, resfriar por imerso progressiva O aparelho empregado na determinao de em banho de gua, constitudo de um recipiente com dimetro maior que o do ballo e altura dixido de enxofre semelhante ao adotado para a suficiente para no derramar gua quando o determinao de metoxila. Consiste de balo de balo estiver inteiramente imerso nele. O volume fundo redondo, de capacidade para 1000 a 15ooml, em cuja parede, prximo ' base, encontra-se sol de gua dever ser controlado para que isto no acontea. Introduzir - removendo momentadado brao lateral capilar destinado alimentao neamente o balo do aparelho - cerca de 50 a de gs de arraste (nitrognio ou dixido de caro bono). Ao balo conecta-se - por juntas esmeri- 100 g de amostra e reiniciar o aquecimento, mantendo a ebulio durante 45 minutos. Desligar lhadas - condensador de refluxo vertical em cuja a corrente de gs de arraste e transferir quantitaextremidade superior se encontram ligados dois tivamente, por lavagem com gua, o lquido tubos de absorlo em srie, ambos preenchidos contido nos dois tubos coletores para erlenmeyer com 10 ml de soluo de perxido de hidro gnio SR, neutralizada com hidrxido de sdio de 250 ml e titular com hidrxido de sdio 0,1 M SV pela viragem de azul de bromofenol SI. Repetir 0,1 M pela viragem de azul de bromofenol SI. a operao omitindo a amostra e proceder necessria correo no volume de titulante consumido. PROCEDIMENTO Cada ml de hidrxido de sdio 0,1 M SVequivale Transferir ao ballo cerca de 500 ml de gua e a 3,203 mg de dixido de enxofre.

o mtodo compreende o arraste - por corrente de di6xido de carbono ou nitrognio - de S02 liberado na ebulio da substncia em meio cido aquoso, sua absoro em soluo de per6xido de hidrognio e o doseamento do cido sulfrico formado no processo com lcali padronizado.

V.3.4.8.1.

MeTODO POR DESTILAO

Outras substncias volteis - Espritos, elixires, tinturas e preparaes similares que contenham propores apreciveis de substncias volteis, alm de lcool e gua, tais como: leos volteis, clorofrmio, ter, cnfora etc., devem sofrer o tratamento que segue antes da destilao. Lquidos com menos de 50% de lcool - MisMltodo 1 turar a amostra de 35 mI, exatamente medidos, Lquidos com menos de 30% de lcool - Trans- com volume igual de gua, em funil separador, ferir para aparellio destilador adequado, por meio saturando esta mistura com cloreto de sdio. de pipeta, amostra de, no mnimo, 3S mI do Extrair os componentes volteis, agitando com lquido em que o lcool est sendo determinado, poro de 2S ml de hexano. Passar a camada anotando a temperatura na qual o volume foi inferior para um segundo funil separador e repetir medido. Juntar igual quantidade de gua e destilar a extrao com mais duas pores de hexano. coletando volume de destilado que seja menor Reunir as pores de hexano e tratar com 3 pores que a amostra medida cerca de 2 mI. Ajustar de 10 ml de soluo saturada de cloreto de sdio. a temperatura do destilado quela em que foi Reunir as solues salinas e destilar de maneira medida a amostra e juntar gua suficiente at usual recolliendo volume .de destilado duas ou obter o volume inicial dela. Misturar. O destilado trs vezes o volume da amostra inicial. lmpido ou, no mximo, levemente turvo e no Lquidos com mais de 50% de lcool - Tomar contm mais que traos de substncias volteis uma amostra e diluir com gua de modo que alm de lcool e gua. Determinar a densidade do contenha aproximadamente 25% de lcool e que lquido a 25 oCoCom o resultado, avaliar a porcen- seu volume final seja cerca de 3S mI. A seguir tagem, em volume, de C2HsOH contido no proceder como indicado para lquidos com menos lquido examinado, pela Tabela Alcoomtrica. de SO% de lcool, prosseguindo a partir de "saturando esta mistura com cio reto de sdio". Mtodo 2 Na preparao de coldio para destilao, usar Lquidos com i'llaisde 30%de lcool - Proceder gua em lugar da soluo saturada de cloreto de Se o destilado como indicado no mtodo anterior, com a seguinte sdio, indicada anteriormente. modificao: diluir a amostra com volume de obtido for turvo, por estarem presentes leos gua duas vezes maior e coletar volume de desti- volteis em pequenas propores, e n[o foi emprelado cerca de 2 mI menor que duas vezes o volume gado o tratamento com hexano, ele pode ser da amostra. Ajustar a temperatura do destilado clarificado e adequado para a determinao da

Este mtodo deve ser usado na determinao de lcool, a menos que na monografia seja especificado outro mtodo. ~ adequado para exame da maioria dos extratos fluidos e tinturas. Deve ser usado balo destilador com capacidade de duas a quatro vezes o volume do lquido a ser aquecido. A velocidade de destilao deve ser tal que permita a produo de destilados lmpidos. Destilados turvos devem ser clarificados por agitao com talco ou com carbonato de clcio precipitado e flltrados. Em seguida, ajustar a temperatura do filtrado e determinar o teor de lcool pela densidade. Durante todas as manipulaes, tomar precaues para minimizar a perda de lcool por evaporaio. Os lquidos que formem demasiada espuma durante a destilao devem ser tratados previamente com cido fosfrico, sulfrico ou tnico, at reao fortemente cida ou com ligeiro excesso de soluo de cloreto de clcio, ou pequena quantidade de parafina ou ainda leo de silicona, antes de iniciar a destilao. Para evitar a ocorrncia de ebulio violenta, adicionar fragmentos de material insolvel e poroso, tal como carbonato cie silcio ou prolas de vidro.

quela em que foi medida a amostra e completar com gua a volume igual a duas vezes o volume inicial. Misturar e determinar a densidade a 25 oCo A proporo de C2HsOH, em volume, neste destilado, avaliada pela densidade, igual metade daquela do lquido examinado. Tratamento especial cidos e Bases Volteis - Lquidos contendo bases volteis devem ser tratados com cido sulfrico diludo SR, at reallo levemente cida. Se estiverem presentes cidos volteis, preparao dever ser adicionado hidrxido de sdio SR at reao levemente alcalina. Glicerol - Lquidos contendo glicerol devem ser adicionados de volume tal de gua que o resduo, aps a destilao, contenha, no mnimo, 50% de gua. lodo - Solues con tendo iodo livre devem ser tratadas antes da destilao com zinco pulverizado ou descoradas com quantidade suficiente de soluo de tiossulfato de sdio 10% (p/V) seguida da adio de algumas gotas de hidrxido de sdio

SR.

densidade, por agitao com cerca de 1/5 de seu volume de hexano ou por fJ.ltrao atravs de fina camada de talco.

condutor usase gs inerte, como hlio, fluindo com vazo de cerca de 60 ml por minuto.
Procedimento

V.3A.8.2. MlTODO POR. CROMATOGRAFIA A GS

Proceder de acordo com as especificaesgerais para cromatografia a gs. Usar aparelho eficiente para a determinao quantitativa de lcool.
Soluo padro

Para lquidos contendo mais de 10%de lcool, preparar duas solues padro de lcool em gua, de maneira que as concentraes sejam, respecti vamente, cerca de S% abaixo (Soluo padrio 1) e cerca de S% acima (Soluo padrlo 2) da concentrao de lcool esperada na amostra sob exame. Determinar a densidade de cada uma das solues padro a 2S c (V.2.5) e obter a concentrao exata de C2 Hs OH pela Tabela Alcoomtrica. Para lquidos contendo menos de 10% de lcool, P1 preparar exatamente duas solues alcolicas P, padro, de maneira que as concentraes sejam, X respectivamente, cerca de 1% menor e cerca de 1% maior que a concentrafo esperada, diluindo com gua. Determinar as densidades das Y solues do mesmo modo que as anteriores.
EQUIPAMENTO

Proceder com a amostra e cada uma dassolues padro como segue: transferir 2S rol para reCipiente adequado de rollia esmerilhada, juntar 1,0 ml do padrio interno (acetona, a menos que especificado diferentemente na monografia) para cada 6% de lcool estimado na amostra e misturar. Juntar gua somente se for necessrio para efetuar a soluo. Injetar quantidade apropriada da soluo no aparellio. Calcular a relaio entre a rea do pico do lcool e a rea do pico do padro interno pelos cromatogramas. Calcular a porcen tagem de lcool na amostra pela frmula
P1 (Y -Z) + P2 (Z -X) (Y -Z)

= porcentagem de lcool na Soluo padro I,

= = = =

Sob condies tpicas, o instrumento contm uma coluna de 2 m x 4 mm carregada com macrogol (polietilenoglicol) 400 a 20% em slica cromatogrfica calcinada. A coluna mantida na temperatura de 100 C; o injetor equigado com fJ.ltro para slidos e mantido a 160 C; como

porcentagem de lcool na Soluo padrlo 2, relao entre a rea do pico do lcool e a rea do pico do padro interno da Soluo Padrlo 1, relao entre a rea do pico do lcool e a rea do pico do padro interno da Soluo Padro 2, relao entre a rea do pico do lcool e a rea do pico do padrio interno da Soluo Amostra.

Se o valor obtido estiver fora da faixa dos valores includos pelas solues padro, repetir o procedimento usando aquelas que forneam uma faixa que inclua o valor da amostra.

Porotln,.m
C2HSOH

de

Oensidllde no ar 15,56C a 15,560C 1,OO 0,9985 0,9970 0,9956 0,9942 0,9928 0,9915 0,9902 0,9890 0,9878 0,9866 0,9854 0,9843 0,9832 0,9821 0,9810 0,9800 0,9789 0,9779 0,9769 0,9769 0,9749 0,9739 0,9729 0,9719 0,9708 0,9697 0,9687 0,9676 0,9664 0,9653 0,9641 0,9629 0,9617 0,9604 0,9590 0,9576 0,9562 0,9548 0,9533 0,9517 0,9501 0,9485 0,9469 0,9452 0,9434 0,9417 0,9399 0,9380 0,9361 0,9342 0,9;322 0,9302 0,9282 0,9262 0,9241 0,9220 0,9199 0,9177 0,9155 0,9133

Porotln""""
C2HSOH

de

Densidede no ar

Em IIolume e 15,56C O 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 26 26 27 28 29 30 31 32 33 34 36 36 37 38 39 40 41 42 43 44 46 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60

Em peso 0,00 0,80 1,59 2,39 3,19 4,00 4,80 5,61 6,42 7,23 8,05 8,86 9,68 10,50 11,32 12,14 12,96 13,79 14,61 16,44 16,27 17,10 17,93 18,77 19,60 20,44 21,29 22,13 22,97 23,82 24,67 25,52 26,38 27,24 28,10 28,97 29,84 30,72 31,60 32,48 33,36 34,25 35,15 36,05 36,96 37,87 38,78 39,70 40,62 41,55 ~2,49 43,43 44,37 45,33 46,28 47,25 48,21 49,19 50,17 51,15 52,15

25C e 250C 1,OO 0,9985 0,9970 0,9956 0,9941 0,9927 0,9914 0,9901 0,9888 0,9875 0,9862 0,9850 0,9838 0,9826 0,9814 0,9802 0,9790 0,9778 0,9767 0,9756 0,9744 0,9733 0,9721 0,9710 0,9698 0,9685 0,9673 0,9661 0,9648 0,9635 0,9622 0,9609 0,9595 0,9681 0,9567 0,9552 0,9537 0,9621 0,9606 0,9489 0,9473 0,9456 0,9439 0,9421 0,9403 0,9385 0,9366 0,9348 0,9328 0,9309 0,9289 0,9269 0,9248 0,9228 0,9207 0,9185 0,9164 0,9142 0,9120 0,9098 0,9076

Em
/HIIO

Em volume a 15,56C 0,00 1,26 2,51 3,76 5,00 6,24 7,48 8,71 9,94 11,17 12,39 13,61 14,83 16,05 17,26 18,47 19,68 20,88 22,08 23,28 24,47 25,66 26,86 28,03 29,21 30,39 31,56 32,72 33,88 35,03 36,18 37,32 38,46 39,69 40,72 41,83 42,94 44,05 46,16 46,24 47,33 48,41 49,48 50,65 51,61 52,66 63,71 54,76 55,78 56,81 57,83 58,84 59,85 60,85 61,85 62,84 63,82 64,80 65,77 66,73 67,69

25C a 25DC 1,0000 0,9981 0,9963 0,9945 0,9927 0,9911 0,9894 0,9879 0,9863 0,9848 0,9&33 0,9818 0,9804 0,9789 0,9776 0,9762 0,9748 0,9734 0,9720 0,9706 0,9692 0,9677 0,9663 0,9648 0,9633 0,9617 0,9601 0,9686 0,9568 0,9551 0,9534 0,9516 0,9498 0,9480 0,9461 0,9442 0,9422 0,9402 0,9382 0,9362 0,9341 0,9320 0,9299 0,9278 0,9256 0,9235 0,9213 0,9191 0,9169 0,9147 0,9124 0,9102 0,9079 0,9056 0,9033 0,9010 0,8987 0,8964 0,8941 0,8918 0,8995

15,56C 15,56C 1,0000 0,9981 0,9963 0,9945 0,9928 0,9912 0,9896 0,9881 0,9867 0,9852 0,9839 0,9825 0,9812 0,9799 0,9787 0,9774 0,9763 0,9761 0,9738 0,9726 0,9714 0,9701 0,9688 0,9676 0,9662 0,9648 0,9653 0,9620 0,9605 0,9690 0,9574 0,9568 0,9541 0,9624 0,9506 0,9488 0,9470 0,9451 0,9432 0,9412 0,9392 0,9372 0,9352 0,9331 0,9310 0,9289 0,9266 0,9246 0,9226 0,9203 0,9181 0,9159 0,9137 0,9114 0,9092 0,9069 0,9046 0,9024 0,9001 0,8978 0,8955

I,

O 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 36 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56. 57 58 59 60

PorctmtllgBm de CzHsOH Em volume a 15,56 "C Em peso

Otmsidede no ar

PoretJntllgem de CzHsOH Em peso Em volume a 15,56C

Densidade no ar

26C a 250C 0,9053 0,9030 0,9006 0,8983 0,8959 0,8936 0,8911 0,8887 0,8862 0,8837 0,8812 0,8787 0,8761 0,8735 q,8709 0,8682 0,8655 0,8628 0,8600 0,8572 0,8544 0,8516 0,8487 0,8458 0,8428 0,8397 0,8367 0,8335 0,8303 0,8271 0,8237 0,8202 0,8167 0,8130 0,8092 0,8053 0,8011 0,7968 0,7921 0,7871

16,66C a 15.560C 0,9111 0,9088 0,9065 0,9042 0,9019 0,8995 0,8972 0,8948 0,8923 0,8899 0,8874 0,8848 0,8823 0,8797 0,8771 0,8745 0,8718 0,8691 0,8664 0,8636 0,8608 0,8580 0,8551 0,8422 0,8493 0,8462 0,8432 0,8401 0,8369
0,8336

25C
a 250C a

15,66C 15,660C 0,8932 0,8909 0,8886 0,8862 0,8839 0,8815 0,8792 0,8768 0,8745 0,8721 0,8697 0,8673 0,8649 0,8625 0,8601 0,8576 0,8552 0,8528 0,8503 0,8479 0,8454 0,8429 0,8404 0,8379 0,8354 0,8328 0,8303 0,8276 0,8250 0,8224 0,8197 0,8170 0,8142 0,8114 0,8086 0,8057 0,8028 0,7988 0,7967 0,7936

61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100

53,15 54,15 55,17 56,18 57,21 58,24 59,28 60,33 61,38 62,44 63,51 64,59 65,67 66,77 67,87 68,98 70,10 71,23 72,38 73,53 74,69 75,86 77,04 78,23 79,44 80,66 81,90 83,14 84,41 85,69 86,99 88,31 89,65 91,03 92,42 93,85 95,32 96,82 98,38 100,00

0,8303 0,8268 0,8233 0,8196 0,8158

0,8118

0,8077 0,8033 0,7986 0,7936

61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100

68,64 69,59 70,52 71,46 72,38 73,30 74,21 75,12 76,02 76,91 77,79 78,67 79,54 80,41 81,27 82,12 82,97 83,81 84,64 85,46 86,28 87,08 87,89 88,68 89,46 90,24 91,01 91,77 92,52 93,25 93,98 94,70 95,41 96,10 96,79 97,46 98,12 98,76 99,39 100,00

0,8871 0,8848 0,8824 0,8801 0,8777 0,8753 0,8729 0,8706 0,8682 0,8658 0,8634 0,8609 0,8585 0,8561 0,8537 0,8512 0,8488 0,8463 0,8439 0,8414 0,8389 0,8364 0,8339 0,8314 0,8288 0,8263 0,8237 0,8211 0,8184 0,8158 0,8131 0,8104 0,8076 0,8048 0,8020 0,7992 0,7962 0,7932 0,7902 0,7871

e cido clordrico. Adicionar algumas prolas de vidro. 3. Conectar condensador a refluxo e iniciar o Tcnica para hidrlise de protenas e aquecimento do balo usando manta eltrica. peptdeos isolados Manter a suspenso sob ebulio constante e suave por 24 h. 1. Pesar (ou pipetar, caso esteja em soluo) 4 4. Resfriar temperatura ambiente e transferir a 10 mg de protena em tubo de cultura de micror quantitativamente o contedo para balo volum ganismos de 20 x 150 mm (com disco de teflon trico de 50 ml, completando o volume com na tampa para melhor vedao), previamente gua destilada. lavado com ldrxido de sdio 0,2 M, enxaguado 5. Seguir as demais etapas conforme os itens e seco em estufa. 7 a 10 da tcnica anterior. 2. Se a amostra for slida, pipetar 5 ml de cido clordrico sobre a mesma, seguido de gua. Misturas de aminocidos em soluo (soros) Se a amostra for lquida, pipetar igual volume de ou em preparalJes farmacluticas cido clordrico, de modo que a concentralo 1. Diluir adequadamente a soluo com tampo [mal de cido clordrico seja 6 M. 3. Passar nitrognio no interior do tubo na citrato pH 2,2 (0,20M em Na+), podendo ser altura da superfcie da solulro, para eliminao analisadaem seguida. 2. Caso esteja na forma de p ou comprimido do O2, durante 23 minutos. Fechar em seguida solubilizar a amostra em cido clordrico 0,1 M. o tubo com o disco e a tampa rosquevel. 3. Transferir o material para balo volumtrico 4. Colocar o tubo em posilro vertical em estufa regulada alIO c 2C, mantendo-o e completar o volume com o mesmo tamplro acima. por 22h. 4. Filtrar a soluo, mantendoa sob refrige. 5. Remover o tubo da estufa e, ainda na vertical, resfri-Io em gua corrente ou banho ralo (4C) at ser analisada. de gelo. 6. Transferir quantitativamente o contedo do Tcnica de hidrlise com oxidao tubo para balo volumtrico de 10 ml e completar de cistina e metionina o volume com gua destilada. Devido a perdas durante a ldrlise cida de 7. Se houver algum resduo ou precipitado, protenas, os aminocidos sulfurados slro prefe. remov-Io por centrifugalro e ftltrao em placa rencialmente analisados atravs de seus respectivos de vidro sinterizado ou membrana filtrante de derivados 9xidados. A oxidao promovida por cido perfrmico, que transforma cistina e cistena 0,45 ~ de porosidade. 8. Pipetar 5,0 ml da solulro para balo de em cido cistico e metionina em metionina evaporador rotatrio, procedendo secagem sulfona, ambos resistentes s condies de hidr Use. presslo reduzida, temperatura mxima de 50C. 9. Adicionar ao resduo do balo 10 ml de 1. Preparar o cido perfrmico acrescentando gua destilada e reevaporar. Esta operalro deve 1 ml de perxido de hidrognio 30 volumes a ser repetida mais duas vezes, ou at o resduo no 90 ml de cido frmico. apresentar odor de cido clordrico. 2. Agitar ligeiramente a solulro, mantendoa 10. Solubilizar a pelcula seca formada pelo em seguida em repouso por 1 h temperatura hidrolisado em volume adequado de tampo ambiente. citrato pH 2,2 (0,20M em Na+). A soluo resul 3. Resfriar o cido perfrmico formado em tante de aminocidos deve ento ser mantida banho de gelo. em frasco de vidro, tampado e sob refrigerao 4. Pesar a amostra contendo 10 mg de protena at a realizao da anlise. em balo de fundo redondo de 25 ml e adicionar 2 ml de cido perfrmico gelado. Tcnica para hidrlise de amostras, 5. Manter a mistura em banho de gelo durante com baixo teor de protena, contendo 4 h, se a amostra for solvel, ou 16 h, se for carboidratos e/ou lipdeos insolvel. 6. Adicionar 0,5 ml de cido bromdrico 40% 1. Transferir quantidade de amostra que para remover o excesso de cido perfrmico. contenha 10 mg de protena para balo de 150 ml 7. Acoplar o ballo a evaporador rotatrio e de fundo redondo e boca esmerilhada.

A anlise de aminocidos realizada atravs de duas operaes: (1) hidrlise das ligaes pept dicas seguida de (2) avaliao de cada aminocido no hidrolisado resultante.

2. Juntar ao meio 40 ml de cido clordrico

6 M, preparado com partes iguais de gua destilada

remover atravs de pressfo reduzida o bromo residual, fazendo os vapores passar por soluo de hidrxido de sdio M. 8. Proceder hidrlise como descrito ante riormente.
Separao e anlise quantitativa aminocidos isolados de

A separao dos aminocidos nos hidrolisados , normalmente, realizada por cromatografia de

troca inica, atravs de resinas de poliestireno sulfonado em analisadores de arninocidos. Nesses aparelhos, aps a separaio, os arninocidos eludos das colunas cromatogrficas formam complexo de colorao azul-violeta pela reao com ninidrina. A determinaio quantitativa feita espectrofotometricamente. No uso de autoanalisadores de aminocidos, devem ser seguidas as especificaes dos respectivos fabricantes.

V.4. MTODOS DE FARMACOGNOSIA

V.4.1. PREPARO DE MATERIAL VEGETAL PARA OBSERVAO E ESTUDOS HISTOLGICOS

Amolecimento

do material

Como normalmente os rgos e tecidos vegetais que compem os fitofrmacos se apresentam secos, para serem observados ao microscpio conveniente primeiro amolec-Ios. mediante tratamento com gua quente, ou outro mtodo de amolecimento indicado. O tempo necessrio para o amolecimento de cada rgo vegetal varia de acordo com a sua textura. Se se tratar de rgo recm-colltido, apenas os de consistncia mais firme necessitam de tal tratamento. Execuo dos cortes Uma vez amolecidos, procede-se preparao dos cortes dos rgos vegetais a serem observados. Os cortes podem ser realizados com o auxlio de objeto cortante, como navalha, lmina-de-barbear ou bisturi. Recomendase incluir a amostra em material adequado que permita fixar o fragmento a fim de ser seccionado. Entretanto, cortes melhores e mais precisos podem ser obtidos com o emprego de micrtomos. H, basicamente, trs tipos de micrtomos: os de congelao, usados para os materiais mais frgeis; os rotativos, para cortes em srie de material includo em parafma; e os de desliza mento, para aqueles materiais mais resistentes, como o caso de ramos, partes de caules e de razes. Neste ltimo caso, mtodo relativamente fcil de preparo do material a ser cortado consiste em sua incluslo em macrogol solvel em gua. Este mtodo descrito a seguir.

macrogol puro, derretido, onde permanecem durante 12 a 25 horas, em estufa a 65 DC; - Retirar da estuf, emblocar e deixar esfriar temperatura ambiente; - Aparar os blocos para colocao no micr6tomo; - Cortar o material a seco e - Lavar os cortes com gua e colorir.

Mltodos de colorao Em histologia vegetal, o emprego de corantes prtica generalizada. Os mtodos de coloraio podem compreender a aplicao de um s6 corante (colorao simples) ou de dois ou trs corantes diferentes (colorao composta). Coloraio simples alguns corantes que podem ser usados: - Soluo de safranina a 1%: colorao de clulas com paredes lignificadas; - Soluo de verde malaquita a 1%: colorao de celulose; - Soluo de acridinalaranja a 0,1 %; colorao de floema e de clulas no lignificadas e - Azul de Astra a I %: colorao de paredes celulsicas sem impregnao de lignina. Colorao composta - algumas misturas corantes que podem ser usadas: de

- Ferver as amostras para retirar o ar; - Coloclas em bquer contendo soluo de macrogol a 20%; - Marcar o bquer, a partir da superfcie do lquido, dividindo-o em 5 partes aproximadamente iguais; Deixar o material em estufa a 65C (por 3 a 4 dias); Quando a soluo evaporar at 1/5 do seu volume inicial. transferir as amostras para

1) Safraninaazul de Astra - procedimento: - Colocar em safranina por 5 a 25 minutos; - Lavar duas vezes com gua destilada; - Colocar em azul de Astra por 10 a 25 minutos; - Lavar duas vezes com gua; - Passar por bateria de lcool: a 50%, a 70%, a 90%, a 95%, lcool absoluto (2 vezes), xilol e - Montar em lminas com blsamo do Canad ou resina sinttica. 2) Safranina-verde malaquita - procedimento: - Colocar em verde malaquita por I minuto. aquecendo levemente; - Lavar duas vezes com gua;

Para que os resultados dos mtodos de anlise de drogas vegetais expressem valores representativos da quantidade total de droga disponvel, imprescindvel recorrer a tcnicas de amostragem definidas e uniformes. Os procedimentos de amostragem especificados levam em considerao trs aspectos: (a) nmero de embalagens que contm a droga; (b) grau de diviso da droga e (c) quantidade de droga disponvel. Nmero de embalagens Examinar a integridade dos recipientes de embalagem e a natureza da droga neles contida. Havendo razovel homogeneidade, recolher amostras segundo o esquema abaixo: N9de embalagens I a 10 N9 de embalagens a serem amostradas 1 a/ 3

10 a 25 a

25 50

3 a 4 a

5 6

amostras de cima para baixo e de baixo para cima (dire'o vertical) e lateralmente (direo transversal), perfazendo amostra de, no mnimo, 250 g para at 100 kg de droga. Havendo mais de 100 kg a amostrar, proceder amostragem seguida de sele'o por quarteamento, gerando amostra de 250 g no final do processo. Para drogas com dimenses superiores a 1 em, proceder amostragem manual. Combinar as amostras retiradas de cada embalagem aberta, tomando a precauo de n'o aumentar seu grau de fragmentao durante a manipulao. Para quan tidades de droga at 100 kg, a amostra deve constituir-se de, no mnimo, 500 g. Havendo mais de 100 kg de droga a amostrar, proceder amostragem seguida de seleo por quarteamento, gerando amostra de 500 g no final do processo. Em ambos os casos - drogas com dimenses inferiores ou superiores a 1 cm - permissvel amostrar quantidades inferiores s especificadas acima desde que a quantidade total de droga disponvel seja inferior a 10 kg. Todavia, a amostra fmal n'o dever ser inferior a 125 g. Quarteamento Distribuir a droga sobre rea quadrada, dividida em quatro partes iguais_ Com a mlio, distribuir a droga sobre a rea de modo homogneo e rejeitar as pores contidas em dois quadrados opostos, em uma das diagonais do quadrado. Juntar as duas pores restantes e repetir o processo, se necessrio. Havendo diferena acentuada em dimenses de fragmentos, executar separao manual e anotar as porcentagens aproximadas dos componentes de diferentes graus de diviso encontrados na amostra.

50 a 75 75 a 100 Mais de 100

6 a 8 8 a 10 5% do total de embalagens (10, no mnimo)

Grau de divisoe quantidade de droga Consistindo a droga de componentes de dimen ses inferiores a 1 cm ou quando ela se constituir de material fmamente fragmentado ou pulverizado, empregar aparelho de amostragem (tubo provido de dispositivo de fechamento na base). Recolher

Drogas vegetais devem estar, o quanto possvel, isentas de fungos, insetos e outros materiais contaminantes. Nlo devem apresentar aspecto ou odor anormal, descoramento ou quaisquer outros indcios de deterioralo. Materiais estranhos droga 510 classificados em trs tipos fundamentais: (a) partes do organismo ou organismos dos quais a droga deriva, excetuados aqueles includos na definilo e descrilo da droga, acima do limite de tolerncia especificado na monografia; (b) quaisquer organismos, pores ou produtos de organismos alm daqueles especificados na defmilo e descrilo da droga em sua respectiva monografia e (c) impurezas de natureza mineral no inerentes droga, tais como pedras, areia ou terra.

Razes, rizomas, cascas e ervas Folhas, inflorescncias, sementes e frutos Materiais particulados ou fracionados (de peso mdio inferior a 0,5 g por componente)

500 g 250 g 50 g

PROCEDIMENTO

Determinar a quantidade de amostra a. ser submetida ao ensaio com base na seguinte tabela:

Colher - por quarteamento - a quantidade de tomada de ensaio especificada, a partir da amostra obtida por amostragem segundo o procedimento descrito anteriormente e espalh-Ia em camada fma sobre superfcie plana. Separar manualmente os materiais estranhos droga, inicialmente a olho nu e, em seguida, com auxlio de lente de aumento (S a 10 vezes). Pesar o material separado e determinar sua porcentagem com base no peso da tomada de ensaio.

a) estufa: a 100-105 c durante 5 horas antes da primeira pesagem, salvo quando houver outra especifica'ona monografia; b) deSllecador: sobre pent6xido de fsforo, sob presso atmosfrica e temperatura ambiente; c) presso reduzida: sobre pent6xido de fsforo, sob press'o no superior a 2,7 kPa (aproxi Preparo da amostra madamente 20 mm de Hg) e temperatura ambiente, Reduzir - por corte, granulao ou fragmen- salvo quando houver outra especificao na taio - drogas do pulverizadas ou trituradas de monografia. forma a limitar a dimenso de seus componentes o ensaio dado por concludo quando duas a, no mximo, 3 mm de espessura. Sementes e pesagens sucessivasn'o diferirem entre si por mais frutos, mesmo de dimenses inferiores a 3 mm, devem ser quebrados. Evitar moinhos de alta de 5 mg. Calcular a porcentagem de gua em velocidade ou outros procedimentos que acarretem rela'o droga seca ao ar. perda de umidade no preparo da amostra.
Mtodos azeotrpico e volumtrico Mtodo gravimtrico

A presena de quantidade excessivade gua em drogas vegetais propicia o desenvolvimento de microrganismos, insetos e hidrse - e conse qente deterioraio - de constituintes da droga. Da a necessidade do establecimento de limites de umidade para drogas vegetais, em geral, na faixa de 8 a 14%. Trs mtodos so empregados: gravimtrico (dessecao), azeotr6pico (destilao de tolueno) e volwntrico (Karl Fischer). O primeiro, tecnica mente mais simples e rpido, no aplicvel quando a droga contm substncias volteis alm da gua. Os demais requerem equipamentos especiais e compreendem tcnicas mais complexas, sendo, contudo, aplicveiscom menos restries.

de 2 a 5 g, ou o especificado na monografia, exata mente pesados, de amostra preparada conforme instrues anteriores, para pesa-filtro chato tarado, previamente dessecado nas mesmas condies a serem adotadas para a amostra dunnte 30 minu tos. Dessecar a amostra por um dos seguintes procedimentos, conforme especificado na monografia:

Proceder conforme descrito em "Determinao da perda por dessecao" (V.2.9). Transferir cerca

Proceder conforme descrito em "Determina'o de gua" (V.2.20), empregando amostra de droga vegetal preparada conforme descrito em V.4.1.

A determinao de cinzas totais destinase a estabelecer a quantidade de substncia residual nlo-voltil no processo de incineralo especificado. As cinzas totais incluem as derivadas de tecido vegetal (cinzas fIsiolgicas) e de materiais estta nhos, especialmente areia e terra aderente superfcie da droga (cinzas nlofisiolgicas).
PROCEDIMENTO

Pesar exatamente cerca de 3 g - ou a quanti. dade especificada na monografia - da droga pulverizada, transferir para cadinho (de silcio ou platina) previamente calcinado, resfriado e

pesado. Aps distribuir a amostra uniformemente no cadinho, incinerla aumentando paulatina. mente a temperatura, nlo ultrapassando 450C, at que todo o carvo seja eliminado. Resfriar em dessecador e pesar. Nos casos em que o carvo nlo puder ser eliminado totalmente, resfriar o cadinho e umedecer o resduo com cerca de 2 ml de gua ou solulo saturada de nitrato de amnio (oxidante). Evaporar at secura - sucessivamente em banho-maria e sobre chapa quente - e inci nerar at peso constante, nlo excedendo 450C. Calcular a porcentagem de cinzas em relao droga seca ao ar.

Cinzas insolveis em cido compreendem o resduo obtido na fervora de cinzas totais ou sulfatadas com cido clordrico diludo, aps fIltragem, lavagem e incineralo. O mtodo destina i determinalo de slica e constituintes siliCOlOS droga. da
PROCEDIMENTO

Ferver o resduo obtido na determinaio de cinzas totais ou sulfatadas durante 5 minutOl com 25 ml de cido clordrico (70 8/1) SR em cadinho

coberto com vidro de relgio. Lavar o vidro de relgio com 5 ml de gua quente, juntando. esta gua ao cadinho. Recolher o resduo insolvel em Ifcido sobre papel de filtro isento de cinza, IaVllldCM>om gua quente at que o fJ1tradose c mostre neutro. Transferir o papel de filtro contendo o resduo para o cadinho original, secar sobre chapa quente e incinerar a cerca de 500 c a~ peso constante. Calcular a porcentagem de cinzas insolveis em cido em relalo i droga

seca 10 ar.

o teor de leos essenciais em drogas vegetais determinado pelo processo de destilao por arraste a vapor, com auxlio do equipamento descrito abaixo. O equipamento (Figura), confeccionado em ~dro resistente, de qualidade apropriada, com preende:

I'"'

150

c:
8 C

-,

1
150

K.J

1) Balo de fundo redondo, de 500 a 1000 ml de capacidade, de colo curto, provido de uma junta 24/40, fmea; 2) Condensador, adaptvel ao balo atravs de uma junta esmerilhada 24/40, macho, construdo em pea nica de vidro, compreendendo as partes descritas a seguir, com as respectivas medidas: 2.1 Tubo vertical (AC) de 210-260 mm de comprimento e 13-15 mm de dimetro interno; 2.2 Tubo dobrado, com segmentos (CD) e (DE) medindo 145-155 mm de comprimento cada e dimetro interno de 7S mm; 2.3 Condensador de bolas, tipo Allihn (FG), de 145-155 mm de comprimento e dimetro interno de 15 mm nas bolas e S-10 mm nos estreitamentos; 2.4 Rolha Gunta esmerilhada 14/20) (K') que obtura uma sada lateral (K) provida de junta esmerilhada 14/20 fmea, na extremidade; 2.5 Tubo (GH) de 30-40 mm de compri mento e 7-Smm de dimetro interno, formando as partes (HK) ngulo (GHK) de 30 a 40; 2.6 Alargamento em forma de pera (1) de 5 ml de capacidade; 2.7 Tubo (JL) provido de e~ala graduada de 110 a 120 mm, de 3 ml de capacidade e subdividida em vigsimosde mililitro; 2.S Alargamento em forma de bola (L) de aproximadamente 2 ml de capacidade; 2.9 Torneira de 3 vias e 2.10 Tubo de conexo (BM) de 7-S mm de dimetro, provido de tubo de segurana. O ponto de insero (B) encontra-se 20-25 mm acima da parte mais alta da escala graduada. 3) Fonte de calor que pode ser aquecedor eltrico ou bico de gs dotado de regulagem fina da chama e 4) Suporte vertical adequado. Antes da utilizao o equipamento deve ser limpo por lavagens repetidas e sucessivas com acetona, gua, mistura sulfpcImica e, novamente, gua. Depois de seco deve ser montado em local protegido de correntes de ar.

trao de referncia superior

1 s J_
rol trao de referncia inferior

PROCEDIMENTO

Aparelho para determinafo de leos essenciais em drOPS veJetais (dimellles em mm).

Introduzir no balo o volume do lquido indicado na monografia e pedaos de pedra porosa para regularizar a ebulio. Adaptar o condensador ao balo. Retirar a rolha esmerilhada (K') e, pela abertura (K), introduzir gua at que a mesma comece a escorrer em (B). Com auxlio de pio peta volumtrica introduzir xilol, na quantidade

prescrita, apoiando-se a ponta da pipeta no fundo da sada lateral (K). Aquecer o lquido no interior do balo at o incio da ebulio e destilar na vazio de 2 a 3 ml por minuto, a no ser que a monografia prescreva diferentemente. Para determinar a velocidade da destilao, escoar a gua com auxlio da torneira de trs vias, at que o meDisco esteja no nvel do trao de referncia inferior (Figura).. Fechar a torneira e cronometrar o tempo necessrio para encher o volume compreendido entre os traos de referncia inferior e superior (5 ml). Abrir a torneira e continuar a destilailo por 30 minutos. Desligar

o aquecimento, deixar esfriar por 10 minutos e fazer a leitura do volume de xilol no tubo graduado. Introduzir no ballo a quantidade da droga prescrita na monografia e proceder com a destilalo por arraste a vapor, como descrito acima, pelo tempo e na Velocidade indicada na moo<>grafia. Terminada a operalo, deixar esfriar por 10 minutos e ler o volume do leo essencial recolhido no tubo graduado. Subtrair da leitura o volume do xilol determinado anteriormente. A diferena representa a quantidade de leo essencial contida na amostra. Calcular o resultado em mililitros de leo essencialpor 100 g da droga.

A detenninao de leos fIXos baseia-se na sua extrao por solvente que, depois de evaporado, deixa como resduo o leo cuja quantidade determinada por pesagem. Caso a amostra contenha teor elevado de componentes hidrossolveis (carboidratos, uria, cido ltico, entre outrolr) cabe prtratamento da amostra, a fim de evitar interferncia na determi nalo de matrias graxas. Para tanto, transferir a tomada de ensaio para funil contendo papel de ftltro, lavar com gua e secar o resduo em estufa aIOS c durante 2 horas.
PROCEDIMENTO

Transferir cerca de 10 g, exatamente pesados, de droga seca, obtida na determinao da perda por dessecao (V.2.9) para cartucho de celulose e coloc-Io em aparelho extrato r Soxhlet, cobrindo-o com algodo desengordurado. Pesar o balo limpo e seco (contendo fragmentos de porcelana ou contas de vidro) e montlo no aparelho sobre

banho-maria, tomando a precauio de assegurar vedalo na junta esmerilhada do balo (reco menda-se operao em capela). Transferir para o extrator ter de petrleo em quantidade sufi ciente para realizar trs sifonagens e encaixar o condensador de refluxo. Proceder extrao sob aquecimento suficiente para manter o solvente em ebulio moderada durante 4 horas. Concluda a extrao, aguardar esfriamento, transferir o contedo do cartucho para almofariz de porcelana e juntar quantidade aproximadamente igual de areia lavada e seca. Pulverizar a droga e transferi-Ia novamente, no interior do cartucho, para o extrator. Reiniciar e manter a extrao, nas condiOes acima, por perodo adicional de 2 horas. Desligar o baIlo do aparelho e evaporar o solvente (de preferncia por destilalo sob corrente de dixido de carbono). Transferir o balio para estufa aIOS C,resfriar e pesar. Repetir a operao at peso constante e calcular a porcentagem de leos fIXOSna droga com base na diferena entre a massa da tomada de ensaio e a do resduo.

A determinao de cineol compreende a determinao do ponto de congelamento (criometria) do composto de combinao molecular entre cineol e o-cresol - cresineoI. Sendo esta temperatura proporcional ao contedo de cineol no composto, possvel estabelecer-se seu teor pela tabela a seguir. O mtodo empregado na dosagem de cineol em essncias de eucalipto e niaouli. Determinaes em outras essncias nlo so recomendadas sem comprovao prvia de exatido em vista de alguns constituintes essenciais solubilizarem o cresineol (mesmo na essncia de eucalipto, h riscos de erro quando o contedo de alf~terpineol for superior a 12,5%). Erros tambm advm da presena de umidade, seja na essncia,seja no o-cresoI. O o-eresol empregado deve ser puro e seco, apresentando ponto de fuso superior a 30C. Deve ser conservado em frasco hermtico, por ser higroscpico.
PROCEDIMENTO

Secar a essncia em ensaio, agitando-a com sulfato de s6dio ou c1oreto de clcio, ambos anidros, em tubo de ensaio ou erlenmeyer provido de tampa esmerilhada. Deixar em contato durante 24 horas e filtrar. Transferir para tubo ,de ensaio

(cerca de 15 mm de dimetro e 80 mm de altura) 3,0 g de essncia, exatamente pesados, e adicionar 2,1 g de o-cresol em sobrefuso. Agitar a mistura com bulbo de termmetro (0-60 c, graduado em dcimos de grau) suspenso sobre o tubo de modo que a extremidade do bulbo no ultrapasse o limite de 5 mm da base do tubo e sem tocar em suas paredes, at induo de cristalizao. Anotar a temperatura mxima observada no termmetro, durante a cristalizao. Aquecer o tubo a cerca de 510C acima da temperatura lida e introduzi-Io em outro tubo maior (cerca de 60 mm de dimetro e 100 Jl}m de altura) de modo a criar camada de ar. Fixar o tubo menor dentro do outro com auxlio de placas de cortia adaptadas ou por qualquer outro meio e mergulhar o conjunto em banho-mana termostatizado, mantendo a temperatura cerca de 5 c abaixo do ponto de congelamento previamente anotado para o cresineoI. Agitar a mistura com movimentos verticais do termmetro e, ao iniciar-se a cristalizao (turvao do lquido), observar a estabilizao da temperatura. Havendo flutuaes durante a cristalizao, considerar sempre a temperatura mxima lida durante o perodo de congelamento. Repetir a determinao quantas vezes for necessrio para que duas leituras sucessivasacusem variao mxima de 0,1 oCo

r.mp.
(oCJ 24 25
26

0,0

0,1

0,2

0,3

0.4 46,1 47,4 48,7 50,0 51,3 52,6 53,9 55,2 56,5 57,8 59,1 60,4 61,7 63,0 64,4 65,8 67,5 69,4 71,2 73,1 75,0 76,9 7~,8 80,8 82,9 86,0 87,3 89,8 92,3 94,8 97,5

0,5

0.6

0.7 46,5 47,8 49,1 50,4 51,7 53,0 54,3 55,6 56,9 58,2 59,5 60,8 62,1 63,4 64,8 66,3 68,1 69,9 71,8 73,6 75,5 77,4 79,4 81,5 83,6 85,7 88,1 90,6 93,1 95,6 98,4

0,8

0.9

45,6 46,9 48,2 49,5 50,8 52,1 53,4 54,7 56,0 57,3 . 58,6 59,9 61,2 62,5 63,8 65,2 66,8 68,6 70,5 72,3 74,2 76,1 78,0
SO,O

45,7 47,0 48,3 49,6 50,9 52,2 53,5 54,8 56,1 57,4 68,7 60,0 61,3 62,6 63,9 65,4 67,0 68,8 70,7 72,5 74,4 76,3 78,2 80,2 82,3 84,4 86,6 89,1 91,6 94,1 96,6 99,7

45,9 47,2 48,5 49,8 51,1 52,4 53,7 55,0 56,3 57,6 58,9 60,2 61,5 62,8 64,1 65,5 67,2 69,0 70,9 72,7 74,6 76,5 78,4 80,4 82,5 84,6 86,8 89,3 91,8 94,3 96,9 100,0

46,0 47,3 48,6 49,9 51,2 52,5 53,8 55,1 56,4 57,7 59,0 60,3 61,6 62,9 64,2 65,7 67,3 69,2 71,0 72,9 74,8 76,7 78,6 80,6 82,7 84,8 87,1 89,6 92,1 94,6 97,2

46,3 4~,6 48,9 50,2 51,5 52,8 54,1 55,4 56,7 68,0 59,3 60,6 61,9 63,2 64,5 66,0 67,7 69,6 71,4 73,3 75,2 77,1 79,0 81,1 83,2 85,3 87,6 90,1 92,6 95,1 97,8

46,4 47,7 49,0 50,3 51,6 52,9 54,2 55,5 56,8 58,1 59,4 60,7 62,0 63,3 64,6 66,2 67,9 69,7 71,6 73,4 75,3 77,2 79,2 81,3 83,4 85,5 87,8 90,3 92,8 95,3 98,1

46,6 47,9 49,2 50,5 51,8 53,1 54,4 55,7 57,0 68,3 59,6 60,9 62,2 63,5 64,9 66,5 68,2 70,1 71,9 73,8 75,7 77,6 79,6 81,7 83,8 85,9 88,3 90,8 93,3 95,8 98,7

46,8 48,1 49,4 50,7 52,0 53,3 54,6 55,9 57,2 68,5 59,8 61,1 62,4 63,7 65,1 66,6 68,4 70,3 72,1 74,0 75,9 77,8 79,8 81,9 84,0 86,1 88,6 91,1 93,6 96,1 99,0

27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55

82,1 84,2 86,3 88,8 91,3 93,8 96,3 99,3

Pesar a quantidade de droga estabelecida na monografia, transferir para proveta de 500 ml provida de rolha esmerilhada e adicionar 50 ml de gua. Arrolhar a proveta e agitar manualmente, durante 3 minutos, com duas agitaespor segundo. Deixar em repouso por I minuto e fazer a leitura

da coluna de espuma que se forma a partir da superfcie do lquido. Repetir a leitura 30 minutos depois: o ndice de espuma (aps I minuto e aps 30 minutos) o nmero de m1 correspondentes altura da coluna de espuma.

V.4.2.10. DETERMINAO DE SUBSTNCIAS EXTRAMIS

POR LCOOL

(EXTRATO ALCOLICO)

Pesar exatamente cerca de 2 g da droga e transferir a amostra para cartucho do extrator de Soxhlet, previamente tarado e seco. Introduzir no balo do extrator 200 mg de hidr6xido de sdio e lcool absoluto em quantidade suficiente. Extrair por cinco horas, retirar o cartucho com o resduo e sec-Io em estufa a 105C por 30

minutos. Pesar o resduo seco e calcular o teor de substncias extraveis por lcool (extI;.ato alc06Iico) por diferena entre o peso da amostra e o peso do resduo seco. Referir o resultado ao peso da droga seca (Determinao de gua em drogas vegetaisV.4.2.3).

V.S. MTODOS BIOLGICOS

V.5.1. TESTES DE SEGURANA BIOLGICA

Os testes aqui apresentados so aplicados a insumos farmacuticos, medicamentos e correlatos que, de acordo com a Farmacopia, devem ser estreis, e so adequados para revelar a presena de bactrias, fungos e leveduras nos mesmos. Contudo, resultado satisfatrio indica somente que no foi encontrado microrganismo contaminante na amostra examinada. A extenso deste resultado ao restante do lote requer a segurana de que todas as unidades do mesmo tenham sido preparadas de modo a garantir grande probabilidade de que todo o lote passaria pelo teste. Obviamente isso depende das precaues tomadas durante os processos operacionais da fabricao.
PRECAUOES DURANTE O TESTE

- Extrato de levedura (solvel em gua) - Casena de digesto pancretica - Tioglicolato de sdio 0,5 ou cido tiogliclico - Soluo de resarzurina sdica (1 :1000) recm-preparada gua pH aps esterilizao:

5,0 g 15,0 g 0,5 g 0,3 ml 1,0 ml 1000 ml

7,1 0,2.

OS testes no devem ser realizados sob exposio direta de luz ultravioleta ou em reas sob tratamento com aerossis. Devem ser efetuados em condies adequadas de forma a evitar contami nao acidental da amostra durante o teste. Isto conseguido, por exemplo, pelo uso de cabina de fluxo laminar, associado a freqentes ensaios quanto contaminao do ar e superfcies, contagens de partculas, determinao de velocidade e direo do fluxo de ar.
MEIOS DE CULTURA E FLUIDOS DE DILUIO E/OU LAVAGEM

Misturar todos os ingredientes, menos o tiogli. colato de sdio ou cido tioglic6lico, soluo de resarzurina sdica, com I 000 ml de gua e aquecer at dissoluo total. Dissolver o tioglicolato de sdio ou cido tiogliclico nesta soluo e, se necessrio, ajustar pH para 7,1 0,2, aps a esterilizao, com soluo de hidrxido de s6dio O,IM. Adicionar a soluo de resarzurina sdica, misturar e distribuir em frascos adequados. Esterilizar durante 15 minutos a 121C. Desenvolve-se cor rsea na superfcie, que no deve exceder um tero da altura; caso mais que um tero adquirir cor rsea, restaurar o meio por aquecimento em banho-maria ou em vapor fluente. b) Meio de tioglicolato com 1% de penicilinase (Meio 11) Empregar, preferencialmente para produtos contendo penicilina, soluo de penicilinase padronizada em termos de unidade Levy. Uma unidade Levy de penicilinase inativa 59,3 unidades de benzilpenicilina em 1 hora, a 2S oCo em soluo tampo fosfato pH 7,0. lJsar esta soluo para inativa r a penicilina nas amostras. A penicilinase deve ser adicionada aos tubos aps a esterilizao, usando tcnica assptica. Nmero representativo de tubos contendo meio com penicilinase sem o produto dever acompanhar o teste durante o perodo de incubao. Quando se empregar meio com penicilinase, realizar controle positivo. Proceder o seguinte teste para verificar se toda a penicilina foi inativada: A tubo de meio contendo a amostra, adicio nar I ml de cultura de Staphylococcus aureus ATCC 6538-P, contendo 50 a 100 clulas. Aps 24 horas de incubao a 30-32 DCobservar se ocorreu o crescimento.

A escolha do meio de cultura de vital impor tncia para oferecer condies ideais multiplicao dos mais diversos microrganismos, com exigncias diferentes para o crescimento. As monografias indicam os meios a serem empregados. Os meios mais usados atualmente para testes de esterilidade so: Meio de casena-soja e Tiogli colato; o primeiro para leveduras, fungos e aerbios e o segundo, especialmente, para anaer6bios, embora haja, tambm, crescimento de aer6bios, leveduras e at mesmo fungos no tioglicolato. a) Meio de tioglicolato fluido (Meio I) L-Cistina - Cio reto de s6dio - Dextrose - gar granulado (umidade superior a 15%) 0,5 g 2,5 g 5,5 g no 0,75 g

c) Tioglicolato com 1% de polissorbato 80 (Meio I1I) Empregar nos testes de esterilidade para pomadas oftlmicas. Adicionar 1 ml de polissor bato 80 por litro de meio, antes da esterilizao. d) Tioglicolato com 0,5% de azolectina e 0,4% de polissorbato 80 (Meio IV) Empregar para teste de esterilidade de produtos que requeiram inativao de substncias inibidoras. e) Meio de casena-soja (Meio V) Empregar para deteco de bactrias aer bicas, fungos e leveduras. - Casena de digesto pancretica - Farinha de soja de digesto pa panica - Cio reto de sdio - Fosfato de potssio dibsico - Dextrose
gua

Dissolver o tecido animal de digesto pptica em gua. Filtrar e, caso necessrio, ajustar o pH para 7,1 0,2 com hidrxido de sdio 0,1 M. Distribuir em frascos adequados e esterilizar durante 15 minutos a 121 oCo j) Fluido JJ o fluido I com adio de 0,1 % de polissor bato 80, antes da esterilizao. k) Fluido JII Tecido animal de digesto pptica - Extrato de carne - Polissorbato 80 - gua -

5,0 g 3,0 g 10,0 g 1 000 ml

pH aps esterilizao: 6,9 0,2

3,Og

5,Og 2,5 g 2,5 g

l000ml
0,2

pH aps esterilizao: 7,3

Dissolver todos os ingredientes em gua, com ajuda de aquecimento. Resfriar temperatura ambiente. Se necessrio, adicionar hidrxido de sdio 0,1 M, de modo a obter pH 7,3 0,2 aps a esterilizalo. Caso necessrio, flltrar; distribuir em frascos adequados e esterilizar por 15 minutos a 121 oCo f) Casenasoja com 1% de penicilioase (Meio VI) Empregar para produtos contendo lina. Preparar e usar conforme o meio 11. penici

Misturar todos os ingredientes com gua e aquecer at dissolulIo. Filtrar e, se necessrio, ajus~ar pH para 6,9 0,2 com hidrxido de sdio 0,1 M. Distribuir em frascos ade~uados e esterilizar durante 15 minutos a 121 C. Ajustar o pHa 6,9 0,2 com soluo de hidrxido de sdio 0,1 M. Distribuir em frascos adequados.

PRE-INCUBAO E TESTE DE SENSIBILIDADE DOS MEIOS DE CULTURA

g) Casenasoja com 0,1 % de polissorbato 80 (Meio VII) Preparar e empregar conforme o meio

m.

h) Caseioa-soja com 0,5% de azolectioa e 0,4% de polissorbato 80 (Meio VIII) Preparar e empregar conforme i) Fluido J - Tecido animal de digesto pptica - gua 1g 1000 ml

o meio IV.

Os meios de cultura devem apresentar esterilidade e capacidade de promover crescimento de microrganismos que devem ser testadas em cada lote antes do teste das amostras ou em paralelo com ele. Aps a esterilizao, os meios de Tioglicolato fluido e de Caseina-soja devem ser incubados, respectivamente, a 30-35C e 20-25 c durante, no mnimo, 7 dias. No deve ocorrer crescimento de microrganismos. Efetuar teste para verificar a capacidade dos lotes de meios em promover o crescimento de microrganismos. Os seguintes microrganismos 110 adequados para realizar o teste: a) Baclus subtilis ATCC 6633, ou se no for desejado microrganismo formador de espora, Micrococcusluteus ATCC 9341. b) Candida albicans ATCC 10.231. c) Aspergillus niger ATCC 16.404.

pH aps esterilizao: 7,1

Meio Tioglicolato fluido

0,2
Microrgllnismo

Temperatura de incubBlo

B. subtifis ou M. lureus C.albicans C. spo/'O(/tlnes ou B. vuffIBtus B. subtifis ou M. futew C. afbicans A. niger

30 - 35C

Casena-soja

20 - 25C

d) aostridium sporogenes ATCC 11.437; se no for desejado microrganismo formador de esporo, Bacteroides vulgatus ATCC 8482. Inocular pelo menos dois tubos de cada meio, com volume de suspenso de microrganismos que contenha 50 a 100 clulas, conforme tabela da pgina anterior. Este meio ser considerado satisfatrio desde que todos os tubos inoculados apresentem evidncia de crescimento dentro de 7 dias. Senl0 o teste de crescimento realizado concomitantemente com o teste de esterilidade, este considerado invlido, caso no ocorra proliferao de microrganismo na prova de crescimento.
PREPARAO DA SUSPENSO BACTERIANA

Usualmente necessrio efetuar ajuste do processo de diluio antes de iniciar a prova para conseguir densidade especfica de 50-100 clulas viveis por mililitro da soluo, devido variao entre cepas do mesmo microrganismo, meios de cultura e superfcie de gar inclinado. Para esta belecer, numericamente, uma variao entre o crescimento em um meio e o microrganismo especfico, fazer uma srie de contagens em placas a partir da diluio 10-6 (I: 1.000.000), para determinar a densidade bacteriana. Escolher volume adequado desta diluio de tal modo que ao ser diludo em volume conhecido contenha de 50-100 clulas viveis por ml. Se o procedimento estiver bem padronizado (como, por exemplo, a rea da superfcie do gar inclinado, tcnicas de laboratrio etc.) possvel reproduzir os resultados com a mesma cepa de bactrias.

I) Com o aUXilio de ala de platina transferir inculo da cepa do microrganismo especfico para tubo de ensaio contendo gar nutriente inclinado. Semear levemente a cultura sobre- toda a superfcie do gar inclinado, de modo a obter pelcula uniforme de crescimento; 2) Incubar sob condies timas de crescimento do microrganismo especfico; 3) Aps o perodo de incubao transferir a cultura do microrganismo da superfcie do gar inclinado para frasco contendo 99 ml de gua esterilizada; 4) Homogeneizar a suspenso, no mnimo, 25 vezes por inclinao do frasco; 5) Preparar uma seqncia de diluies desejadas: 1:100; 1:10.000 e 1:1.000.000, a partir da suspenso do frasco original; 6) A homogeneizao das suspenses de cada diluio pode ser realizada tambm com o auxlio de basto de vidro, por agitao magntica ou prolas de vidro.
AVALIAO DA ATIVIDADE BACTERIOSTTlCA OU FUNGlSTTlCA

Antes de iniciar o teste de esterilidade de insumos farmacuticos, medicamentos ou correlatos, avaliar seu nvel de atividade bacteriosttica e/ou fungisttica pelo seguinte procedimento: Preparar, pelo menos, quatro tubos de meio de cultura ou de cada um dos meios de cultura a serem empregados no Teste de esterilidade. Adi cionar a todos os tubos quantidade do produto em anlise, conforme segue (2):

Contedo do recipiente (mO menos que 10 I I a 50 51 a 100

Volume mlnimo de produto (mO I ml. ou o contedo total, se menor que I 5 10

Volume mlnimo de meio (mO 15 40 80

Inocular metade dos tubos com microrganismo aerbico e a outra metade com anaerbico, conforme indicado para o Teste de crescimento nos Meios de cultura (l). Preparar duplicata do conjunto, em condies idnticas, porm no adicionar o produto a ser testado. Incubar todos os tubos contendo tioglicolato a 30-35 c e a 20-25 c, os que contiverem casena-soja. Se houver crescimento normal dos microrganismos na presena e na ausncia do produto, o Teste de esterilidade
(l) Quando se tratar de antibitico, microrganismos sensveis. empregar cepa de

pode ser realizado sem modificaes. Se o cresci mento for pequeno ou nulo o produto exerce atividade bacteriosttica e/ou fungisttica e essa atividade deve ser eliminada antes do teste de esterilidade por meio de agentes neutralizantes ou, no decorrer do mesmo, atravs da diluio do produto. Deve-se repetir o teste at determinar a relao ideal entre os volumes do produto e do meio, que no interfira no crescimento de microrganismos. Outra maneira de evitar as atividades
(2) Para algodo, gaze e material relacionado, empregar duas peas por tubo.

bacteriosttica e/ou fungisttica empregar o mtodo de filtrao por membrana, quando a natureza do produto assim o permitir.
PROCEDIMENTO PARA O TESTE DE ESTERILIDADE

O teste de esterilidade pode ser realizado de duas maneiras: atravs do Mtodo de inoculao do produto diretamente no meio (Mtodo Direto) ou pelo Mtodo de filtrao por membrana, o qual deve ser empregado sempre que possvel.

Amostragem
O nmero de amostras de um produto para teste de esterilidade deve ser, no mnimo, de 20 unidades ou 10% do nmero de unidades que constituem o lote se este for inferior a 199 unidades. Antes do teste proceder assepsia das paredes externas dos frascos e ampolas, mergulhando-os em soluo antimicrobiana. No caso de artigos cujas embalagens no resistam a esse tratamento, fazer assepsia das amostras por meio de gaze ou pano estril, embebido em soluo antimicrobiana. Para matrias-primas, amostragem satisfatria baseada na raiz quadrada do nmero total de recipientes do lote, conforme abaixo indicado:

ferir assepticamente o volume indicado de cada amostra para os tubos contendo Meio de tioglicolato fluido e Meio de casena-soja (os volumes mnimos, tanto de material em anlise quanto dos meios de cultura, esto especificados no item Teste de Avaliao dIl Atividade Bacteriosttica ou Fungisttica). Misturar o lquido com o meio sem arejar excessivamente. Incubar o Meio de tioglicolato fluido por 14 dias a 30-35 DC e o Meio de casena-soja por 14 dias a 20-25 DC. Se o material em anlise provocar turvao dos meios de cultura, de modo a impedir a observao do crescimento microbiano, transferir pores adequadas de cada tubo para outros tubos contendo os meios, aps 3 a 7 dias do incio da incubao. Continuar a incubao de todos os tubos at que se completem 14 dias a contar do incio do teste. Slidos Transferir quantidade de produto na forma de slido seco (ou de soluo ou suspenslio do produto preparada pela adio de diluente estril ao recipiente), correspondente a 300 mg de cada recipiente sob anlise, ou todo o contedo, se for menor que 300 mg, a volume no inferior a 40 ml de Meio de tioglicolato fluido e a 40 ml de Meio de casena-soja. Misturar e proceder como para Lquidos. Pomadas e leos insolveis em miristato de isopropila Selecionar 20 recipientes, dividi-Ios em dois grupos de 10 e trat-Ios como segue: transferir assepticamente 100 mg de cada recipiente para frasco contendo 100 ml de veculo aquoso estril, capaz de dispersar o material em anlise homogeneamente por toda a mistura. A escolha do agente dispersante incorporado ao veculo aquoso pode diferir de acordo com a natureza do material em anlise; contudo, este agente no deve causar bacteriostase nem fungistase na concentrao utilizada; portanto, executar o Teste de Avaliao da Atividade Bacteriosttica ou Fungisttica para esse agente, antes de empreg-Io. Transferir 10 ml dessa mistura a 80 ml de Meio de tioglicolato fluido e 10 ml a 80 ml de Meio de casena"'soja. Continuar o procedimento como descrito para Lquidos. Algodlo purificado, gaze, bandagem e material relacionado De cada embalagem de algodo, gaze em rolo ou gaze em bandagem a ser analisada, retirar, com instrumentos estreis, duas pores de 100 a 500 mg das partes mais internas da amostra. Para materiais em embalagem individual, tais como chumao de gaze, retirar duas pores individuais de 250 a 500 mg, ou duas unidades totais, no caso de unidades pequenas (ex: bandagens menores que 25 a 75 mm). Transferir uma poro para tubo com 40 ml de Meio de tioglicolato fluido e

N9 total de repicien tes do lote

N9 de fflCipienttn a serem abertos para teste

1 a
4 a

10 17 26 37 50 65 82 101

a a a a a a a a

3 9 16 25 36 49 64 81 100 121

todos 3
4

5 6 7 8 9 10 11

A assepsia dos recipientes deve ser realizada por meio de gaze ou pano estril, embebido em soluo antimicrobiana.

Procedimento
O teste de esterilidade pelo Mtodo de inoeulao ou direto consiste na transferncia assptica de quantidade do produto a ser examinado para Meio de tioglicolato fluido e Meio de casena-soja seguida de incubao a 30-35 DC e 20-25 DC, respectivamente, durante 14 dias. Lquidos Retirar o lquido do recipiente utilizando pipeta estril ou seringa e agulha estreis. Trans-

soja.

outra para tubos com 40 m1 de Meio de casenaContinuar o procedimento como descrito para Lquidos.

Mtodo de filtrao por membrana

Aparellios parenterais Para aparelhos de formas e dimenses que permitam sua imerso total em no mais que 1000 ml de meio de cultura, testar o aparelho intacto, mergulhando uma unidade em Meio de tioglicolato fluido e outra em Meio de caseinasoja. Verificar se os pequenos canais e orifcios esto em contato com o meio de cultura; caso isto no ocorra, fazer cortes no aparelho para atingir tal objetivo. No podendo o aparelho ser imerso completamente, dividi-lo em pores adequadas. No podendo ser dividido, passar Meio de caseinasoja e TIoglicolato fluido pelo interior de 20 amostras, recolher pelo menos 15 m1 destes meios e incublo por 14 dias a 20-25 c com no menos que 100 m1 dos mesmos meios. Continuar o procedimento como descrito para Lquidos.

Gaze com vaselina

Preparar o Meio de tioglicolato fluido conforme descrito no item Meio de cultura, adicionando 1,0 g de gar e 5,0 g de gelatina para cada 1000 ml de meio. Distribuir pores de 300 m1 em frascos que permitam o fechamento hermtico aps a esteriliza"o. Esterilizar durante IS minutos a 121C. Aquecer o meio a 52C e transferir assepticamente o contedo total de uma embalagem de gaze com vaselina. Fechar hermeticamente e agitar durante 10 minutos em agitador mecnico. Resfriar os frascos em posio inclinada at que a vaselina forme camada slida vedando a superfcie do meio. Quebrar a vedao por uma nica e rpida agitao. Incubar a 20-25 c durante 7 dias e agitar, em agitador mecnico, durante, pelo menos, 10 minutos. Transferir assepticamente 0,5 m1 dessa mistura para 15 m1 de Meio de tioglicolato fluido e 0,5 m1 para 15 m1 de Meio de caseina-soja. Incubar, respectivamente, a 30-35 c e 20-25 c durante, pelo menos, 7 dias.

O teste de esterilidade pelo Mtodo de filtrao por membrana consiste na dissoluo da substncia em anlise em fluido estril adequado e a passagem dessa soluo atravs de membrana estril, que ir reter qualquer contaminallo em sua superfcie; em seguida esta lavada, seccionada e transferida assepticamente para meio de cultura adequado. Para realizar o teste necessrio funil apropriado no qual colocada a membrana e receptculo para esse funil, que acoplado a reservatrio (que acolher as solues fIltradas), ligado a bomba de vcuo. A membrana pode ser de nitrato de celulose (empregada, por exemplo, em solues aquosas, oleosas e alcolicas fracas) ou acetato de celulose (empregada, por exemplo, em solues alcolicas fortes), com dimetro de 47 mm,porosidade nominal de 0,45 JJ.m 0,02 JJ.m e fluxo de 55 a 75 ml de gu por centmetro ttuadrado por minuto, presso de 700 mm a 25 C. Todo material deve ser esterilizado durante 15 minutos a 121C. No empregar volume de amostra menor que o indicado.
Lfquidos misc{veis em veculos aquosos

Transferir, assepticamente, o volume indicado abaixo pQra conjunto de funil e membrana, flltrar, lavar com trs pores de 100 m1 de Fluido I, cortar a membrana ao meio, colocar uma das metades no Meio de tioglicolato fluido e a outra no Meio de casena-soja. Incubar, respectivamente, a 30-35 c e 20-25 c durante, pelo menos, 7 dias. No realizar o teste com volume de amostra inferior ao indicado. Se o volume for insuficiente, aumentar o nmero de amostras.
Lfquidos imiscfveis em velculos aquosos

Proceder como para "Lquidos miscveis em veculos aquosos", substituindo o Fluido I pelo Fluido IL

Volume de trlCipiente (m/)

menos que 10 11 a 50

Volumtl mlnimo ctHierecipiente /NUe meio cH eulture (ml)

1 miou contedo total se menor que 1 ml 5 10 Contedo total 500

Volume m(nimo de cede meio de eultUrll

(mI) 100 100 100 100 100

Nmero mfnimo de em OItrll' e .,..", telte.

20 20 20 10 10

51 a 100 101 a 500 Acima de 500

Pomadas e leos solveis em miristato de isopropila Selecionar 20 unidades, transferir 100 mg de cada unidade para frasco contendo 100 ml de miristato de isopropila, cujo pH seja igualou superior a 5,5, e que tenha sido esterilizado por filtrao em membrana de 0,22 J,lm. Aquecer o miristato de isopropila a 47C. Agitar e dissolver a pomada. Transferir a mistura para conjunto de funil e membrana. Umedecer antes a membrana com pequena quantidade do lquido de lavagem, filtrar, lavar com 3 pores de 100 ml de Fluido lI. Cortar a membrana ao meio, colocar uma das metades no Meio de tioglicolato fluido e a outra no Meio de casena-soja. Incubar, respectivamente, a 30-35C e 20-25 c durante, pelo menos, 7 dias. Se a substncia contiver vaselina, usar como lquido de lavagem o Fluido III Slidos solveis Transferir uma quantidade de substncia em forma slida (ou de soluo ou suspenso da substncia preparada pela adio de diluente estril ao recipiente), correspondente a 300 mg de cada recipiente em anlise, ou todo o contedo, se for menor que 300 mg, a cerca de 100 a 200 ml de diluente apropriado (Fluido I ou Fluido lI). Filtrar o contedo do frasco em conjunto de funil e membrana, lavar com 3 pores de 100 ml de fluido apropriado e prosseguir como para "Lquidos miscveis em veculos aquosos". Algodo purificado, gaze e material relacionado (categute, suturas etc.) Fazer amostragem de acordo com a monografia para AlgodlIo purificado, gaze e material relacionado. Transferir o total de amostras para frasco contendo volume suficiente de Fluido I, ou, quando for o caso, passar o fluido pelo interior dos tubos ou do equipamento. Agitar vigorosa mente. Transferir o lquido para conjunto de

funil e membrana e filtrar. Prosseguir como indicado para "Lquidos miscveis em veculos aquosos' . Controle negativo ou branco Efetuar constantemente controle negativo, simulando teste com os fluidos e solventes utili zados. O resultado do teste deve ser negativo. Observao e interpretao dos resultados Durante o tempo de incubao, observar os tubos em anlise, periodicamente, para verificar eventual aparecimento de crescimento microbiano. Se, ao final do perodo de incubao, no ocorrer crescimento microbiano, a amostra considerada satisfatria para o teste de esterilidade. Se ocorrer crescimento, o produto no corresponde ao teste de esterilidade, a menos que se possa demonstrar o contrrio por reteste, ou por meios que comprovem no ter a contaminao causa relacionada com a amostra (ex.: contaminao ambiente, contaminao de controle negativo). O reteste deve ser feito de maneira idntica ao teste inicial. Se no aparecer evidncia de cresci mento, a amostra satisfatria para o teste de esterilidade. Se houver crescimento no primeiro reteste, isolar e caracterizar o(s) contaminante(s) microbiano(s) do primeiro reteste e comparar com o(s) contaminantes do teste de esterilidade original. Se o contaminante for o mesmo nos dois testes, a amostra no corresponde ao teste de esterilidade. Se os dois contaminantes forem diferentes, deve ser realizado um segundo reteste. O segundo reteste deve ser feito com o dobro de unidades de amostra utilizadas no teste inicial. Os volumes de cada unidade devem ser os mesmos indicados para o teste inicial. Se no houver evidncia de crescimento, a amostra satisfatria para o teste de esterilidade. Se houver crescimento de qualquer microrganismo, a amostra considerada insatisfatria para o teste de este rilidade.

o teste de pirognios fundamentase na medida do aumento da temperatura corporal dos coelhos, quando se injeta intravenosamente uma doselimite de 10 rnl por kg de peso, durante perodo no superior a 10 minutos, de soluo estril da substncia em anlise. Para os produtos que requeiram preparao preliminar ou que necessitem de condies especiais de administrao, seguir as normas recomendadas na monografia.
Seleo dos animais Usar coelhos de ambos os sexos, adultos, sadios, preferencialmente a mesma raa, pesando no mnimo 1,5 kg. Mallter os animais em gaiolas individuais em sala de temperatura uniforme (20C 2 0c) e livre de perturbaes que os possam excitar. Uma semana antes de usar um animal pela primeira vez, iniciar exerccio de condicionamento segundo a tcnica recomendada para o teste, mas sem a injeo do produto aser analisado. Ocorrendo teste de pirognio negativo, pode-se usar o mesmo animal aps 48 horas. Quando o teste de pirognio for positivo, no se usam os mesmos animais antes de duas semanas.

Procedimento Durante as duas horas precedentes, e durante o teste, suprimir alimentao dos trs coelhos, dando-lhes somente gua. No mximo 40 minutos antes da injeo da dose do produto a ser testado, determinar a temperatura de controle (inicial) de cada animal mediante duas leituras feitas com intervalo de 30 minutos. A mdia das duas temperaturas considerada como a temperatura de controle do animal, que a base para a determinao de qualquer aumento de temperatura resultante da injeo da soluo da teste. No usar animais com temperat<lra superior a 39,8 oCoUsar no teste somente os animais cujas temperaturas de controle no se desviem de mais de 1,0C um do outro. No devem ser usados os animais que apresentarem desvio maior do que 0,2 C, nas duas leituras da temperatura controle. Preparar o produto a ser testado conforme especificado na monografia. Aquecer o mesmo a 37-38C. Injetar pela veia marginal da orelha de trs coelhos no menos do que 0,5 ml nem mais de 10 rnl da soluo por kg de peso corporal ou a quantidade indicada na monografia. A injeo no deve durar mais de 10 minutos, a menos que na monografia se especifique tempo diferente. Registrar a temperatura I, 2 e 3 horas aps a injeo.

Registro da temperatura Usar termmetro clnico de preciso, graduado em 0,1 C, com tempo de elevao de temperatura mxima previamente determinado ou qualquer outro dispositivo de registro de temperatura de igual sensibilidade. Intro uzir o termmetro no reto do animal profundidade aproximada de 6 centmetros. Se for utilizado dispositivo registrador, que deva permanecer no reto durante o perodo do teste, conter os coelhos de maneira que fiquem em postura natural de repouso. Quando se empregar termmetro clnico deixar transcorrer o tempo necessrio (previamente determinado) para que alcance a temperatura mxima, antes de proceder leitura.

Interpretao A temperatura maxuna registrada para cada coellio considerada como sua resposta. Quando as temperaturas medidas aps a injeo forem inferiores temperatura de controle, a resposta equivale elevao de temperatura zero. Se nenhum dos trs coelhos apresentar elevao de temperatura de 0,6 c, ou mais, sobre suas respectivas temperaturas de controle, e se a soma dos aumentos dos trs no exceder a 1,4 c, o produts em exame cumpre os requisitos de ausncia de pirognios. Se algum coelho apresentar aumento da temperatura de 0,6 C,ou mais, ou se a soma dos aumentos exceder a 1,4 c, repete-se o teste usando-se outros cinco animais. Se no mximo trs dos oito coellios mostrarem aumentos individuais de temperatura de 0,6 c, ou mais, e se a soma dos oito aumentos de temperatura no exceder a 3,7 c, o produto em exame cumpre os requisitos para ausncia de pirognios.

Material As seringas, agulhas e vidrarias tomam-se apirognicas a 250C durante 30 minutos ou a 200 c por uma hora. O cloreto de sdio, a 200C durante 2 horas.

Interpretao Manter os animais em observao durante 48 horas ou pelo tempo indicado na monografia. Usar camundongos sadios, de ambos os sexos, A sobrevivncia de todos os camundongos durante preferencialmente de cepa conhecida, no utili o perodo estabelecido determina a aprovao do zados previamente em testes biolgicos. Mant-los produto. A morte de um ou dois animais ou a sob dieta uniforme, gua vontade e temperatura presena de sintomas anormais requer repetio ambiente constante de 20-24 oCo No dia do teste, do teste, empregando-se cinco ou mais camun selecionar camundongos com peso entre 18 e dongos (19,5 a 20,5 g), no utilizados previamente. A amostra cumpre os requisitos do teste se o 22g. nmero de camundongos mortos no exceder 10% do total de animais testados, incluindo o teste Preparao da amostra original. Seleo dos animais A amostra deve ser preparada conforme especificao constante na respectiva monografia e administrada imediatamente. Procedimento Usar seringas,agulhase vidrariaestreis. Segundo especificado na monografia, administrar volume da substncia sob teste, em cinco camundongos por uma das vias seguintes: 1) Intravenosa. Injetar a dose na veia caudal, mantendose a velocidade constante de 0,1 m1por segundo ou a indicada na monografia; 2) Intraperitonial. Injetar a dose na cavidade peritonial; 3) Subcutnea. Injetar a dose na regio cervical ou abdominal; 4) Oral. Administrar a dose por meio de sonda ou outro dispositivo adequado.
TESTE PARA SOROS E VACINAS DE USO HUMANO

Salvo especificao diferente constante na monografia, injetar intraperitonealmente uma dose humana 1, porm no exceder 1,0 ml, em cinco camundongos selecionados conforme descrito no teste geral, e uma dose humana em dois cobaios sadios, pesando entre 250 e 350 g. Neste caso n!o exceder 5,0 ml. A amostra aprovada no teste se nenhum dos animais apresentar sintomas anormais durante os sete dias seguintes. Se um animal morrer ou apresentar sintomas anormais, repetir o teste. A amostra cumpre os requisitos do teste caso nenhum dos animais do segundo grupo morrer ou apresentar sintomas anormais no intervalo de tempo especificado.
A dose humana a declarada no rtulo ou na bula da preparao a ser examinada.

PreparaSo do padro de referncia

Empregar dicloridrato de histamina, conservado em frasco hermtico e opaco, dessecado sobre sl1ica.gel durante duas horas, antes do uso.
SoluSo padro de referncia

Dissolver, em gua estril, quantidade suficiente e exatamente pesada de dicloridrato de histarnina para obter soluo contendo o equivalente a 1 mg/mI de histamina (base livre). Conservar sob refrigerafo em recipiente de vidro mbar dotado de tampa esmerilhada, ao abrigo da luz, durante um ms. No dia do teste, preparar soluo padro de referncia contendo o equivalente a 1,0 p.g/ml de histamina (base livre), em soluo fisiolgica.
SoluSo da amostra

Preparar a soluo da amostra conforme especificao da monografia respectiva.

Mtodo sugerido

Pesar gato adulto e sadio (no caso de fmea, que nio esteja prenhe) e anestesi-Io atravs de injeo intraperitonial de cloralose ou barbitrico que permita a manuteno de presso arterial uniforme. Imobilizlr o animal e proteg-lo para prevenir perda de calor corporal. Dissecar a veia femural oujugular, preparando-a por insero de cnula repleta de heparina (1000 unidades/ml de soluo fisiolgica) para a administrafo das solues padro de referncia e amostra. Expor cirurgicamente a artria car6tida, dissecando-a completamente das estruturas circundantes, inclusive o nervo vago. Inserir uma cnula

conectando-a diretamente ao manmetro de mercrio ou outro dispositivo apropriado para o registro contnuo da pressio arterial. . Avaliar a sensibilidade do gato histarnina, injetando em intervalos uniformes de, no mnimo, 5 minutos, doses correspondentes a O,05p.g (dose A); 0,10 p.g (dose B) e 0,15p.g (dose C) de hista mina (base livre) por kg de peso corporal. Aps cada administrao, lavar imediatamente a cnula por injeo de aproximadamente 0,5 ml de soluo fisiolgica, para remover atividade residual. Repetir trs vezes a administrao da dose B a fim de observar a uniformidade de resposta mesma dose. O animal considerado apto realizao do teste se as respostas aos trs nveis de dosagem forem nitidamente diferenciadas e as respostas seqncia de doses B forem aproximadamente similares, correspondendo a quedas de presso arterial nlo inferiores a 2,7 kPa (20 mm de mercrio). Injetar duas sries de quatro doses, consistindo cada srie de ~uas injees da dose especificada na monografia da amostra, intercaladas com a dose B, sempre com intervalo uniforme de, no mnimo, 5 minutos. Medir a alterao da presso arterial aps cada uma das injees. Na anlise dos resultados, considera-se que a amostra cumpre os requisitos do teste se a mdia de suas respostas depressoras for inferior quela da dose B. Terminar o teste administrando uma dose C do padro para comprovar que a resposta se mantm superior dose B: Caso isto do ocorra, o teste no vlido. O animal pode ser usado enquanto pennanecer estvel e responder, adequadamente, adrninistrafo da soluo padro de referncia.

Usar cobaia com peso entre 250 e 350 g, em jejum de aproximadamente 24 horas. Sacrificar o animal com golpe na nuca e sangria imediata por seco dos vasos cervicais. Retirar aproximadamente 10 cm da poro distal do 11eO.Lavar internamente com soluo nutritiva. Selecionar poro com cerca de 2 0"- 3 em de comprimento e amarrar duas linhas fmas nas extremidades. Efetuar pequena inciso na poro central do tecido. Transferi-lo para cuba-de-6rgo-isolado,de 10 a 20 rol de capacidade, temperatura controlada entre 34 a 36C sob corrente de ar ou mistura de 95% de oxignio e 5% de CO2 Fixar uma das linhas no fundo da cuba e amarrar a outra na alavanca destinada a registrar as contraes musculares no quimgrafo ou outro sistema de registro adequado. Ajustar a alavanca para o registro das contraes do leo com grau de amplificao da ordem de 20 vezes. Lavar a preparao com soluo nutritiva e deix-Ia em repouso durante 10 minutos. Adicionar volumes conhecidos - da ordem de 0,2 a 0,5 rol de soluo padro de referncia de histamina (l p.g/ml) - para obter resposta subm xima (dose maior). Lavar o 11eotrs vezes com soluo nutritiva. Efetuar as adies sucessivasem intervalos regulares de aproximadamente 2 minutos. Adicionar novas doses de soluo padro de referncia de histamina - obtidas por diluio da soluo original, de modo a manter os volumes de doses sempre iguais - estabelecendo a dose respon svel por resposta cuja intensidade seja a metade da dose maior (dose menor). Prosseguir o teste adicionndo seqncias de 3 doses: dose padro de referncia menor, dose de soluo da substncia sob teste e dose padro de referncia maior. Ajustar a diluio da amostra para que, ocorrendo contrao do leo, esta seja menor que a produzida pela dose padro de referncia maior.

Estabelecer a reprodutividade da contrao por repeties sucessivasda seqncia de doses. Calcular a atividade da substncia sob teste em termos de seu equivalente em p.g/rol de histamina (base livre), tomando por base as diluies efetuadas. O valor encontrado no deve exceder o limite estabelecido na monografia. No ocorrendo contrao no teste supracitado por efeito da amostra ensaiada, preparar nova soluo da amostra, adicionando quantidade de histamina correspondente ao limite mximo especificado na monografia e observar se a contrao produzida proporcional quantidade de histamina adicionada. Considerar o teste vlido se essa resposta for proporcional e se confirmar reprodutibilidade das contraes induzidas pela seqncia de doses: dose padro de referncia menor, dose de soluo da substncia sob teste e dose padro de referncia maior. Caso contrrio, realizar o teste para substncias vasodepressoras.
Soluo nutritiva

(preparar no momento da utilizao)

Soluo A* Sulfato de atropina Bicarbonato de sdio Dextrose anidra (para uso parenteral) gua bidestilada (obtida de equipamento de vidro) 50 ml 0,5mg 1,0g 0,5 g

Cioreto de sdio Cloreto de potssio Cloreto de clcio anidro Cioreto de magnsio anidro Fosfato de sdio dibsico guaqsp

160,0 g 4,0 g 2,0 g 1,0 g 0,05g 1.000 ml

V.S.1.6.- CONTAGEM DE MICRORGANISMOS VIVEIS EM PRODUTOS QUE NO NECESSITAM CUMPRIR COM O TESfE DE ESTERILIDADE

V.5.1.6.1 - CONTAGEM DE MICRORGANISMOS vIVEIS TOTAIS

Preparao de amostras
Substncias solveis em gua - Transferir 10 g ou 10 ml da mistura de amostras para frasco volumtrico contendo 90 ml de tamp'o fosfato pH 7,2. Agitar at dissoluo e ajustar o pH entre 6,5 e 7,5 com cido clordrico 0,1 M ou hidrxido de sdio 0,1 M e completar o volume de 100 ml. Transferir duas alquotas de 10 ml para dois frascos volumtricos contendo 90 ml do Fluido I. Filtrar, lavar as membranas trs vezes com Fluido I, incubar, contar as colnias e calcular o nmero de microrganismos. Substncias oleosas misdveis em gua - Transferir 10 mg ou 10 ml da mistura de amostras para frasco volumtrico contendo 90 ml de Fluido 11 aquecido a 45-48C e completar o volume de 100 ml. Ajustar o pH entre 6,5 a 7,5 com cido clordrico 0,1 M ou hidrxido de sdio 0,1 M. Transferir duas alquotas de 10 ml para dois frascos volumtricos contendo 90 rol de Fluido 11. Filtrar, lavar as membranas trs vezes com Fluido ll, incubar, contar as colnias e calcular o nmero de microrganismos.

Este mtodo capaz de determinar o nmero total de bactrias e fungos presentes em produtos e matrias-primasno estreis. O mtodo consiste na contagem da populao de microrganismos que apresentem crescimento visvel, em 4 dias, em gar casena-soja (Meio 1) a 30-35 c e em 7 dias, em gar Sabourauddextrose (Meio 11) a 20-25C. A determina'o pode ser efetuada atravs do
Mtodo de filtrao por membrana, Mtodo de contagem em p1Jlca ou Mtodo dos tubos ml tiplos.

Empregar tcnicas asspticas na amostragem e na execu'o do teste. Realizar o teste preferen. cialmente em capela de fluxo laminar e empregar, quando possvel, a tcnica de filtra'o por mem brana. Na amostragem de produtos em processamento, coletar 3 amostras do incio, 4 do meio e 3 do tim do processo. Executar o teste na mIstura destas amostras. Substncias solveis em miristato de isopropi1Jl Utilizar diluio que permita que o nmero de - Transferir 6 alquotas de 1 g ou 1 ml da mistura Unidades Formadoras de Colnias se encontre de amostras para cada um de 6 frascos volumtri dentro dos limites sugeridos para o mtodo a cos e completar volume de 100 ml com miristato ser usado. de isopropila aquecido a 45-48C. Agitar os frascos, rapidamente, at dissolu'o. Filtrar cada urna das solues atravs de membrana fIltrante M~TODO DE FILTRAO POR MEMBRANA e lavar as 6 membranas com caldo nutriente Empregar membrana de nitrato de celulose ou esterilizado por filtra'o e aquecido a 45-48 oCo acetato de celulose, com pOrosidaden'o superior Transferir 3 membranas para 3 placas de Petri a 0,45 IJ.ID. O equipamento para flltra'o e a contendo Meio I e 3 membranas para 3 placas membrana devem ser esterilizados por autocla contendo Meio ll. Incubar, contar as colnias e vagem e devem ser obedecidas precaues durante calcular o nmero de microrganismos. o teste, conforme descrito na seco V.5.l.!. Para produtos de uso tpico, efetuar teste Transferir 10 ml ou a quantidade de diluio adicional, transferindo uma membrana para placa que represente 1 g da amostra a ser testada, para contendo gar para fermentao de anaerbios, uma de duas membranas fIltrantes e filtrar imedia- incubando em jarra para anaerbios a 30-35 c tamente. Se necessrio, diluir a amostra de maneira durante 3 dias. a obter contagem de colnias entre 10 e 100. Lavar ambas as membranas, pelo menos trs vezes, com aproximadamente 100 ml de lquido estril adequado. Transferir uma das membranas, para ~tTODO DE CONTAGEM EM PLACA contagem de bactrias, para superfcie de placa Bactrias - Empregar placas de Petri 100 x de Petri contenda 15-20 ml de Meio 1. Incubar x 20 mm, adicionando a cada placa 1 ml da a 3035 c durante 4 dias. Transferir a segunda mistura de amostras e 1520 ml de Meio lliquemembrana, para contagem de fungos, para super- feito a 45C, ou alternativamente, dispersar a fcie de placa de Petri contendo 1520 ml de mistura de amostras na superfcie do meio solidi Meio ll. Incubar a 20-25 c durante 7 dias. Avaliar ficado na placa. Diluir a amostra de maneira que o nmero de colnias desenvolvidas. Calcular o o nmero de colnias no ultrapasse a 300 por nmero de microrganismos por grama ou ml de placa. Preparar, pelo menos, duas placas de Petri amostra. Se necessrio, proceder contagem de para cada diluio e incubar a 3035 c, durante 4 dias. '-Contar o nmero de colnias desenvolbactrias e fungos separadamente.

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CONTAGEM DE MICRORGANISMOS VIVEIS EM PRODUTOS QUE NO NECESSITAM CUMPRIR COM O TESTE DE ESTERIUDADE

vidas. Calcular o resultado empregando placas com o maior nmero de colnias, sem ultrapassar 300 colnias por placa. Fungos - Empregar placas de Petri 100 x x 20 mm, adicionando a cada placa 1 rnl da mistura de amostras e 15-20 rnl de Meio Illiquefeito a 45C, ou, alternativamente, dispersar a mistura de amostras na superfcie do meio solidificado na placa. Diluir a amostra de maneira que o nmero de colnias no ultrapasse a 100 por placa. Preparar, pelo menos, duas placas de Petri para cada diluio e incubar a 2025 c, durante 7 dias. Contar o nmero de colnias desenvolvids. Calcular o resultado empregando placas com O maior nmero de colnias, sem ultrapassar 100 colnias por placa. Preparao de amostras Empregar, no mtodo de contagem em placas. 1 ml de preparaes de amostras contendo 10 g ou 10 mI, diludas ou dissolvidas em 100 rnll de diluente adequado, conforme descrito no Mtodo de filtrao por membrana para Substncias solveis em gua, Substncias oleosas miscveis em gua e Substncias solveis em miristato de isopropilll. Cremes e pomadas insolveis em miristato de' isopropilll - Transferir 10 g da mistura de amostras para frasco volumtrico contendo 90 mI de caldo nutriente com 0,1% de tetradecilsulfato sdico, aquecido a 4548 c e agitar at mistura homognea. Transferir 4 alquotas de 5 rnl para, pelo menos,4 placas de Petri 20 x 150 mm, adicionar a metade delas 20 a 40 ml de Meio I e s outras, igual volume de Meio 11, ambos liquefeitos a 45C. Misturar, homogeneamente, o gar com a amostra e deixar solidificar. Incubar, contar as colnias e calcular o nmero de mio crorganismos. Efetuar teste adicional, transferindo duas alquotas de 1 mI da primeira diluio para duas placas de Petri 10 x 100 mm, contendo 15-20 mI de .gar para fermentao de anaerbios, incubando em jarra para anaerbios a 30-35 c durante 3 dias. Cpsulas vazias - Adicionar 90 ml de tampo fosfato pH 7,2, aquecido a 45-48C sobre 50 cpsulas. Agitar at suspenso total e completar o volume de 100 mI (diluio 5: 10). Transferir 1 ml desta suspenso para 9 mI de gua (diluio 5: 100) e, caso necessrio, transferir 1 mI da ltima diluio para 9 mI de gua (diluio 5: 1000). Transferir alquotas de 1 ml de cada diluio para, pelo menos, 4 placas de Petri 20 x 100 mm, adio cionar a duas delas 1520 ml de Meio I e s outras duas, igual vplume de Meio 11, ambos liquefeitos a 45C. Misturar, homogeneamente, o gar com a
(1) Alguns produtos podem volumes maiores de diluente. requerer o emprego de

amostra e deixar solidificar. Incubar, contar as colnias e calcular o nmero de microrganismos. Gelatinas - Transferir 10 g da mistura de amostras para frasco volumtrico contendo 90 ml de gua estril aquecida a 48C e deixar em repouso durante uma hora (diluio 1:10). Em seguida transferir o frasco para banho-maria a 45C durante 30 minutos, agitando vigorosamente a intervalos freqentes. Diluir 1 rnl desta soluo com 9 ml de gua estril (diluio 1:100) e, caso necessrio, transferir 1 rnl da ltima diluio para 9 ml de gua (diluio 1:1000). Prosseguir conforme indicado para Cpsulas vazias, a partir de "Transferir alquotas de ... Demais substncias insolveis ou parcialmente solveis em gua - Transferir 10 g ou 10 ml da mistura de amostras para frasco volumtrico contendo 90 mI de tampo fosfato pH 7,2 (diluio 1: 10). Agitar at dissoluo e ajustar o pH entre 6,5-7,5 com cido clordrico 0,1 M ou hidrxido de sdio O,I M. Transferir 1 rnl desta diluio para 9 mI de gua (diluio 1: 100) e, caso necessrio, transferir 1 mI da ltima diluio para 9 rnl de gua (diluio 1: 1000). Prosseguir conforme indicado para Cpsulas vazias a partir de "Transferir alquotas de ... ". Aerosis - Resfriar pelo menos 10 recipientes em mistura de lcool e gelo seco por uma hora. Abrir os recipientes e deix-los temperatura ambiente para que o propelente escape. Retirar 10 g ou 10 ml dos recipientes e transferir para frascos contendo 90 mI de tampo fosfato pH 7,2 (diluio 1: 10) ou outro diluente apropriado e completar o volume de 100 rnl. Transferir 1 ml desta diluio para 9 ml de gua (diluio 1: 1000). Prosseguir conforme indicado para Cpsulas vazias a partir de ''Transferir alquotas de ... ". Contagem de colnias - Usar contador de colnias com iluminao artificial controlada, lupa apropriada e, quando possvel, contador registrador. Somente as placas que apresentarem at 300 colnias para bactrias e 100 para fungos devero ser consideradas para registro dos resul tados. Calcular a mdia aritmtica de cada diluio a partir dos valores obtidos das placas. Calcular o nmero de microrganismos por g ou rnl para cada dilui[o, multiplicando o nmero de colnias da placa pela diluio usada e relatar a mdia aritm tica dos resultados. Expressar os resultados como Unidades Formadoras de Colnias (UFC). Exemplo:
Dilui60 ColfJnias p/placas UFC/gouml

1: 100 1: 100 1: 1000 1:1000

293 100 41 12

2,93 x 10 1,00x10" 4.1 x 10" 1,2 x 10"

CONTAGEM DE MICRORGANISMOS VIVEIS EM PRODUTOS QUE NO NECESSITAM CUMPRIR COM O TESTE DE ESTERlUDADE

Mdia: (2,93

+ 1,00; 4,1 + 1,2) x 104

= 2,3 x

Y>"

UFCjg ou mI

Caso o nmero de colnias nas placas de todas as diluies seja menor que 20, registrar a contagem correspondente menor diluio e expressar como UFCjg ou mI. Se as placas de todas as diluies no apresentarem colnias, registrar a contagem como sendo menor que uma vez a diluio menor correspondente. Por exemplo, se nenhum crescimento for detectado na diluio 1: 100, expressar a contagem como menor do que 100 Unidades Formadoras de Colniasjg ou mI.
MtTODO DOS TUBOS MLTIPLOS

mento de microrganismos, transferindo urna alada de cada tubo para outro tubo contendo caldo de casena-soja ou meio equivalente, ou semeando em meios slidos, seletivos ou no, incubando, por perodo adicional. Determinar o Nmero Mais Provvel de microrganismos por g ou mI, atravs da Tabela I. Sendo necessria maior preciso no teste, podese empregar 5 tubos por diluio, avaliando o Nmero Mais Provvel atravs da Tabela 11. Capacidade nutritiva dos meios de cultura e validao dos mtodos de contagem Incubar os microrganismos que seguem em tubos contendo caldo de caserna-soja.
Staphylocaccus lIureus ou Bllcillus subtilis Escharichia cal CsndidB IIlbicans ou ATCC 6538 p ATCC6538 ATCC6633 ATCC 8739 ATCC 10231 ATCC 2091 18-24 hs 18-24 hs 18-24 hs 18-24 hs 48 hs 48 hs 30-35 Qc 30-35C 30-35 c 3O-35C 20-25C 20-25C

utilizado principalmente quando se espera que o produto apresente densidade bacteriana baixa. Deve ser rnantida a razo entre o volume da amostra e o volume do meio de cultura a utilizar. Preparao de amostras Preparar as amostras, inicialmente na diluio 1: 10, atravs dos procedimentos que seguem: Amostras slidas - Misturar 10 g da amostra com 90 mI de diluente. Se forem necessrios volumes maiores, misturar 25 g da amostra com 225 mI de diluente. Amostras liquidas - Misturar 1 m1 da amostra com.9 ml de caldo de casena-soja ou este adicionado de substncias emulsmcantes ou neutrali zantes2 (polissorbatos,lecitina de soja etc.). Preparar diluies 1: 100 e 1: 1000 a partir da diluio 1: 10. Empregar urna srie de doze tubos, contendo 10 ml de caldo de caserna-soja. Aos trs primeiros tubos, adicionar 1 mI da amostra diluda, dissolvida ou homogeneizada, na proporo de 1: 10, conforme descrito nos mtodos anteriores. Aos trs tubos seguintes, adicionar 1 mI da diluio 1: 100 da amostra e aos prximos trs tubos, 1 mI da diluio 1: 1000 da amostra. Aos trs ltimos tubos, adicionar 1 m1 do diluente. Incubar os tubos a 30-35 c durante 4 dias. Os ltimos trs tubos no devem apresentar crescimento microbiano. Anotar como positivos os tubos que apresentarem crescimento de microrganismos. Isto pode ser caracterizado, tambm, pela formao de produtos fmais de metabolismo (gs, cido, base etc.) ou pelo exame microscpico direto. No caso de amostras que turvem o meio, confIrmar se os tubos so positivos para o cresci-

Diluir cada cultura empregando tampo cloreto de sdio-peptona pH 7,0 de modo a obter 100 clulas por mI. Empregar inculo dos microrganismos separadamente, como controle do mtodo de contagem, na presena e na ausncia de amostra. No ocorrendo crescimento esperado na presena da amostra, significa que esta possui atividade inibidora. Para elimin-Ia, adicionar agentes neutralizantes, como polissorbato 80 a 0,4% e lecitina de soja 0,5%, aumentar o volume de diluente, associar ambos os procedimentos, ou empregar o "Mtodo de Filtrao por Membrana".

gar de Ca,e{1/IJ-,oja (Meio I)

Digesto pancretico de caseina . Digesto papa{nico de farinha de soja . . . . . Cloreto de sdio . . . . . . . . . . . . . . . .

gar ......................

15,0 g 5,0 g 5,0 g 15,0 g

gua
pH ap6s elteriJizao:

. 7,3 0,2 (Meio 11)

loo0ml

gar de Saoouraud-dextrole

(2) Caldo de Ctlle{1/IJaoja com 0,1 % de polissorbato 80 - usado para pomadas; Caldo de CtlN{1/IJ'$Oja com 0,4% de polissorbato 80 e 0,5% de lecitina de soja usado em amostras que requeiram inativao de substncias inibidoras; Caldo de Ctlle{naaoja com 1% de penicilinase - usado para amostras que contenham penicilinas.

Dextrose. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Mistura de partes iguais de casena tratada por suco pancretico e digesto pptico de tecido animal . . . . . . . . . . . . . . . . . . gar . gua " . pH ap6' e'terllizao: 5.6 0,2
Misturar

10 g
15 g 1000 ml

e ferver

ptlTa efetum a rolu60. de A1IiJeTbior

gar para Fermentao

Extrato de levedura ... . . . . . . . . . .. Digesto pptico de tecido animal . . . . . . .

5 g 5 g

CONTAGEM DE MICRORGANISMOS VIVEIS EM PRODUTOS QUE NO NECESSITAM CUMPRIR COM O TESTE DE ESTERILIDADE

Digesto papanico de farinha de soja . . . . . Dextrose . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Cloreto de sdio . . . . . . . . . . . . . . . . gar . Tioglicolato de sdio. . . . . . . . . gua . pH aps esterilizao: 7,2 0,2 Caldo de Ctlse(no-lIOja Casena tratada por suco pancretico Farinha de soja por digesto papanica ... Cloreto de sdio . . . . . . . . . . . . . . . . Fosfato de potssio dibsico . Dextrose . gua . pH aps erterilizaa: 7,3 0,2 Caldo Nutriente Extrato de Carne . . . . . . . Digesto pancretico de gelatina. . . . Polissorbato 80 . . . . . . . . . . . . . . . . . gua . pH IlpS esterilizao: 6,9 0,2 Fluido I Digesto pptico de tecido animal . . . . . . .
gua .........

10 g 10 g 5 g 20 g 2 g 1000 ml

Tabela I - Nmero mais provvel e limites de confllUla 95%

Nmtlro de tubor cujo crrtlCimtlnto tl vis'-""I para Ctlda Nmtlro Limite NMP Mais qusntidtldtl do produto sob Prov~1IfI1 de 'Omg 'mg micror'OOmg ou ou ou I/lIni,mOl Inferior Superior por O,, mIl 0,0' mIl O,OO'ml/ gouml tubo tubo tubo
O O O 1 1 1 1 1 2 2 2 2 2 2 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 O

flX,,","
17,0 3,0 5,0 g
g

2,5 g 2,5 g
1000 ml

O
1 O O 1 O 1 O O 1

<

O
1 O

O
1 1 2 O O 1 1 2 2

3 g 5 g 10,0 ml l000ml

O
1

1 g
l000ml

O
1

pH aps esterilizao: 7,1

0,2

O
O O 1 1 1 2 2 2 3 3 3 3

O l'
2

Flu1doI/ Digesto pptico de tecido animal . . . . . . . Polissorbato 80 . . . . . . . . . . . . . . . . . gua , . pH aps esterilizao: 7,1 0,2 Tampo Fosfato pH 7,2 Soluo-estoque Fosfato de potssio monobsico Hidrxido de sdio 4%

1 g
1 ml 1000 ml

O
1 2 O 1 2 O 1 2 3

. .

34 g (l75 ml (aprox.) 1000 ml

3 3 3 4 7 7 11 11 9 14 15 20 21 28 23 39 64 43 75 120 93 150 210 240 460 1.100

<0,5 <0,5 0,5 1 1 3 3 1

9 13 20 21 23 36 36 36 37 44 89 47 150 120 130 380 210 230 380 380 440 470 1300 2400 4800

3
3 7 4 10 4 7 15 7 14 30 15 30 36 36 71 50

>2.400

Dissolver o forfato de potdsrio monobdrico em 500 ml de t1guJJ, certar o pH para 7,2 0,1 com hidrxldo de sdio a 4%. Completllr o volume com dgua, e,terilizar e con,ervar sob refrigerao. Quando da utilizao diluir a IIOluo estoque com dgua no propor4"ode 1para 800 eesterillzar. Tamp40 cioreto de Wdio-peptono pH 7,0 Fosfato de potssio monobsico

3,56 g (equivalente a 0,067M) 7,23 g Fosfato dissdico 2 H20 . 4,30 g Cloreto de sdio . . . . . . . . . . . . . . . . 1,0 g Peptona . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1000ml gua ......................

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Tabela 2 - llClice do nmero mais provvel e limites de confiana 95%

USIIndo 5 tubos com O,1,0,01 e 0,001 9 Nmero de Positivos Tubos 0,07 NMP Limitl1NMP

Tabela 2 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 O O O O 1 1 1 2 2 2 3 3 3 4 4 5 5 O O O O O 1 1 1 1 2 2 2 2 2 2 3 3 3 3 3 3 4 4 4 4 4 4 5 55 5 5 5

(Continuao)
O 1 2 3 O 1 2 O 1 2 O 1 2 O 1 O 1 O 1 2 3 4 O 1 2 3 O 1 2 3 4 5 O 1 2 3 9 5 O 1 2 3
4

0,1

0,007

79 <2 2 4 2 4 6 4 6 6 2 4 6 8 4 6 8 6 8 10 8 10 11 5 7 9 12 7 9 12 9 12 14 12 14 15 8 11 13 11 14 17 20 14 17 20 11 71 21 24 25

Inferior

Superior

O O O O O O O O O 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3

O O O 1 1 1 2 2 3 O O O O 1 1 1 2 2 2 1 3 4 O O O O 1 1 1 2 22 3 3 4 O O O 1 1 1 1 2 2 2 3 3 4 4 5

O 1 2 O 1 2 O 1 O O 1 2 3 O 1 2 O 1 2 O 1 O O 1 2 3 O 1 2 O 1 2 O 1 O O 1 2 O 1 2 3 O 1 2 O 1 O 1 O

<0,5 <0,5 <0,5 <0,5 <0,5 <0,5 <0,5 <0,5 <0,5 <0,5 <0,5 <0,5 1 <0,5 <0,5 1 <0,5 1 2 1 2 2 <0,5 1 2 3 1 2 3 2 3 4 3 4 4 1 2 3 2 4 5 6 4 5 6 5 7 1 8 8

1 11 1 11 15 11 15 15 7 11 15 19 11 15 19 13 19 23 19 23 23 13 17 21 28 17 21 28 21 28 34 28 34 37 19 25 31 25 34 46 60 34 46 60 46 63 63 12 73

5 O 1 2 3 4 5

13 11 21 25 11 21 26 22 26 32 21 33 39 34 40 41 48 23 31 43 58 76 33 46 64 84 49 1Q 94 120 148 177 79 109 141 175 251 253 130 172 221 218 345 436 240 348 542 920 1600 1600

3 5 1 8 5 7 9 7 9 11 9 11 13 12 14 14 16 7 11 15 19 24 11 16 21 26 11 23 28 33 38 44 23 31 37 44 53 77 35 41 51 90 117 145 68 118 180 210 350 800

31 46 63 15 46 63 18 61 78 91 80 93 126 95 108 110 124 10 89 114 144 180 93 120 134 191 126 168 219 281 366 515 181 251 343 503 669 788 300 484 698 849 999 1161 134 1005 1405 3000 5300

INTERPRETAO

DOS RESULTADOS

O limite prescrito em uma monografia deve ser interpretado da seguinte maneira: 102 microrganismos - limite mximo de aceitao 103 microrganismos - limite mximo de aceitao 5 x 102 5 x 103 etc.

Este mtodo permite a deteco da presena de clulas viveis de Salmonella sp., Escherichia coZi, Pseudomonas aeruginosa e Sthaphylococcus aUTeus, que devem estar ausentes em produtos farmacuticos no estreis e matrias-primas de USO direto em sua fabricao. Conforme a via de administrao do produto, alm dos quatro microrganismos anteriormente citados indesejvela presena dos seguintes:
VIA ORAL (SUDOS E FLUIDOS)

frasco contendo 90 ml de tampo fosfato pH 7,2 e agitar at dissoluo*; 2) Filtrar atravs de membrana de 0,45 ~m. Lavar com 100 ml de Fluido I; 3) Colocar a membrana em frasco contendo 300 ml de Caldo de enriquecimento; 4) Incubar a 3035 C, durante 24-48 horas.
SUBSTNCIAS OLEOSAS MIScfvEIS EM GUA

&cilIus cereus Enterobacter sp Candida albicans Aspergillus flavus e parasiticus

VIA NASAL OU RESPIRATORIA

Enterobacter sp Se"atia marcescens Klebsiella sp Candida albicans Proteussp Acinetobacter sp Pseudomonas cepacia Pseudomonas maltophilia Pseudomonas stutzeri

I) Transferir 10 g ou 10 ml da amostra para frasco contendo 90 ml de Fluido 11 aquecido a 4548C*; 2) Filtrar atravs de membrana de O,45~. Lavar com 100 ml de Fluido 11; 3) Prosseguir conforme itens 3 e 4 de Substncias solveis em gua.
SUBSTNCIAS SOLVEIS EM MIRISTATO DE ISOPROPILA

Se"atia marcescens Klebsiella sp Pseudomonas cepacia Pseudomonas maltophilia Pseudomonas stutzeri Streptococcus sp, grupo B
VIA INTRAMAMRIA

1) Transferir 6 pores de 1 g ou 1 ml da amostra para 6 frascos contendo 100 ml de miristato de isopropila aquecido a 45-48C. Agitar cada frasco rapidamente at dissoluo; 2) Filtrar o contedo de cada frasco atravs de membrana de 0,45 ~m. Lavar cada membrana com 100 ml de Caldo nutriente pr-mtrado e aquecido a45-48C; 3) Colocar as membranas em 6 frascos contendo 300 ml de Caldo de enriquecimento; 4) Incubar a 30-35 C, durante 24-48 horas.
POMADAS E CREMES INSOLOVEIS EM MIRlSTATO DE ISOPROPILA

Staphylococcus sp Streptococcus sp, grupo B Bacillus cereus Semztia marcescens Corynebacterium pyogenes Klebsiella sp Mycoplasma sp Enterobacter sp Pseudomonas sp Otrobacter sp Nocardia sp Proteus sp Cryptococcus neoforrnans Candida sp

1) Transferir 2 pores de 5 g ou 5 ml para 2 frascos contendo 300 ml de Caldo de enriquecimento com 0,1% de pQjissorbato 80. Se necessrio, ajustar pH entre 6,5-7,5 com HCl 0,1 M ou NaOHO,1 M; 2) Incubar a 3035 C, durante 24-48 horas.

1) Transferir 10 g da amostra para frasco contendo 300 ml de Caldo de enriquecimento. Deixar a 48C, durante 1 hora, transferir para
* No se dispondo de sistema de filtrao por membrana,
proceder conforme "Substncias insolveis ou JKlrcialmenterolveisem dgua".

SUBSTNCIAS SOLVEIS EM GUA

1) Transferir 10 g ou 10 ml da amostra para

banho-maria a 45C e esperar 30 minutos, agitando a intervalos freqentes; 2) Incubar a 30-35 c, durante 24-48 horas.
SUBSTNCIAS INSOLVEIS OU PAROALMENTE SOLVEIS EM GUA

dadas por zona diferente, de cor amarela forte, quando multiplicadas em gar sal manitol-

vermelho de fenol. Em Agar de Vogel-Johnson

as colnias so de cor negro brilhan dadas por zona amarela. e circun-

1) Transferir 10 g ou 10 rnl da amostra para frasco contendo 300 rnl de Caldo de enriquecimento. Se necessrio, ajustar o pH entre 6,5-7,5 com HCI 0,1 M ou NaOH 0,1 M; 2) Incubar a 30-35 c, durante 24-48 horas.
V.S.1.7.2. - FASE SELETIVA E TESTES DE CONFIRMAO

A) Transferir

com

ala, para placa com

Agar

cetrimida, o material enriquecido em meio no

seletivo, usando o mtodo de estrias em supero fcie. Nesse meio, as colnias de P. aeruginosa apresentam aspecto muito variado; portanto, deve-se proceder a testes de confirmao para cada colnia com aspecto morfol6gco diferente. B) Testes de confirmao 1. Citocromo oxidase - Colocar uma gota de solulo aquosa a 1% de cloridrato de N.N-dimet-p-fenilenodiamina, recen temen te preparada, em colnia suspeita da placa de Agar cetrimida. Colnias de P. aeruginosa desenvolvem coloraio rosea, que passa a marrom, vermelho escuro e negro entre 10 e 30 minutos. Todas as espcies de P. aeruginosa produzem citocromo oxidase. Empregar no trabalho ala de platina, pois ala de nquel-cromo pode interferir no teste; 2. Produio de fluorescena - Inocular colnia isolada em Agar inclinado para deteco de jluorescezna. Incubar a 30-37C, durante 24 horas, e examinar a fluorescncia do gar luz ultravioleta, no comprimento de onda entre 328 e 210 nm. Cerca de 99% das cepas de P. aeruginosa produzem fluorescena. 3. Crescimento a 41C - inocular colnia isolada em Agar inclinado de infuso crebro e corao. Incubar o tubo a 41 C,em banhomaria ou estufa, durante 48 horas. Aproximadamente 99% das cepas de P. aeruginosa crescem a 41C.

B) Testes de confirmao 1. Colorao de Gram - S. aureus so cocos Gram-positivos, formando grupamentos semelhantes a cachos de uva. 2. Coagulase - Reconstituir liofilizado de plasma de coelho ou cavalo em gua estril. Inocular colJa suspeita em 0,5 rnl de plasma reconstitudo. Controles positivo e negativo devem ser procedidos em paralelo. Inocular os tubos em banho-maria a 30-37 c e verificar a formao de gel. Examinar os tubos em 2, 4 e 24 horas. Se ocorrer formao de gel em 24 horas, o teste considerado positivo. 3. Desoxirribonuclease - Preparar tubos con tendo Agar para teste de desoxirribonuclease com verde de metila. Repicar a colnia suspeita para o meio contido no tubo. Incubar a 3037 c, durante 18 horas. Controle positivo deve ser procedido em paralelo para comparao dos resultados. A formaio de zona incolor ao redor de crescimento indica reao de desoxirribo nuclease positiva. Culturas de S. aureus devem apresentar reall'o positiva.
S8lmonella sp

A) Fazer repique de colnia do meio nio-seletivo para placa de Agar-verde brilhante. Colnias de Salmonella sp neste meio sio razoavelmente grandes e produzem zona avermelhada ao redor. Inocular colnia suspeita em 100 ml de Caldo de digesto pancretico de casena. Incubar a 30-37 c, durante 24-48 horas. Adicionar 0,5 ml do reagente de Kovac e agitar suavemente. Rea'o positiva (presena de indoI) apresentar cor vermelha intensa. Salmonella sp indol negativa. B) Teste de confirmao 1. gar trplice acar-ferro - Inocular colnia suspeita em gar trplice acar-ferro contido em tubo. Para isto, furar a base nio inclinada com fio reto, retir-lo e pass-lo pela superfcie inclinada. Incubar a 30-37 c, durante 24 horas. Colnias tpicas de Salmonella sp apresentam reaio alcalina (cor vermelha) na parte superior (inclinada) e cida (cor amarelada) na base, com ou sem produl'o de gs e H2S. Se estas reaes forem positivas, prosseguir com os itens que seguem; 2. Usina-descarboxilase - Inocular colnia suspeita em Agar de lisina-fe"o, contido em tubo, empregando o mesmo procedimento

A) Transferir por meio de ala e pelo mtodo de estrias em superfcie o material enriquecido em meio na:o-~~vo para placa com gar sal manitol-ve'11hf1ho de fenol ou Agar de ~ Johnson. Incubar a 36C, durante 48 horas. As colnias de S. aureus apresentam-se amareladas, lisas, de consistncia untuosa e circun-

descrito para Agar tr(plice acar-ferro. 0 Incubar a 30.37 C, durante 24 horas. Colnias tpicas de Salmonella sp apresentam reao alcalina (cor purprea) em todo meio, com ou sem formao de gs H2S; 3. Crescimento a partir de citrato como nica fonte de carbono - Repicar a cultura do item A para gar cifra to de Simmons inclinado. Incubar a 30-37 oc, durante 4 dias. Colnias tpicas de Salmonella sp crescem sobre o meio e mudam a cor da parte incli nada para azul; 4. Urease - Repicar a cultura do item A para Agar uria inclinado. Incubar a 30.37 oc, durante 4 dias. Colnias tpicas de Salmonella sp no produzem urease; 5. Fermentao da lactose - Repicar cultura do item A para tubo contendo Caldo de lactose. Incubar a 3037 durante 24 horas. A maioria das cepas de Salmonela sp nllo fermenta lactose, permanecendo o meio inalterado.

oc,

A) Fazer repique do meio no-seletivo para placa de Agar Mac Conkey. Colnias de E. coli apre sentam cor vermelha tijolo. Caso haja crescimento heterogneo, transferir colnias circundadas de colorao vermelha tijolo para nova placa contendo Agar Mac Conkey. Inocular colnia suspeita em Agar peptonaferro. Para inocular este meio, furar a base no inclinada com fio reto, retir-Io e pass.lo pela superfcie inclinada. Incubar a 30-37 durante 24 horas. E. coli no produz gs H2S.

oc,

0,5 ml de reagente de Kovac e agitar o tubo suavemente. Colorao vermelha intensa indica a presena de indol, que produzido por E. coli; 4. Teste de vermelho de metila - Inocular tubo contendo Caldo vermelho de metilaVoges-Proskauer com colnia suspeita da placa de Agar de eosina-cloreto de metiltion(nio. Incubar a 30-37 oc, durante 18-48 horas. Adicionar 5 a 6 gotas do indicador vermelho de metila SI por 5 ml de cultura. Reaes positivas, fortemente cidas, desen volvem colorao vermelha-brilhante; reaes fracamente positivas desenvolvem colorao vermelha-alaranjadae reaes negativas desen volvem colorao amarela. E. coli vermelho de metila positivo; 5. Teste de Voges-Proskauer - Inocular tubo contendo Caldo. vermelho de metila- VogesProskauer com colnia da placa de Agar de eosinac/oreto de metiltion (nio. Incubar a 3037 oc, durante 24 horas. Adicionar 4 ml do reagente de Voges-Proskauer por 5 ml de cultura. Incubar a 3537 durante 1 hora. O desenvolvimento de cor vermelha de eosina indica a presena de diacetila, produto de oxidao de acetilmetilcarbinol. E. coli VogesProskauer negativa; 6. Crescimento a partir de citrato como nica fonte de carbono - Inocular colnia isolada da placa de Agar eosina-cloreto de metiltio n (nio em gar citrato de Simmons inclinado. 0 Incubar a 30-37 C, durante 4 dias. E coli no utiliza citrato como nica fonte de carbono, no ocorrendo crescimento.

oc,

V.S.1.7.3

B) Teste de confirmao 1. gar de eosina-cloreto de metiltionnio Incubar colnia tpica da placa de Agar Mac Conkey para placa contendo Agar de eosinacloreto de metiltionmio. Incubar a 30-37 durante 24 horas. Colnias pretas, esver deadas e brilhantes podem evidenciar a presena de E. coli; 2. gar trplice acar-ferro - Inocular colnia isolada da placa de Agar de eosina-cloreto de metiltion(nio em tubo contendo Agar tr(plice acar-ferro, seguindo o mesmo procedimento empregado para Salmonella sp. Colnias tpicas de E. coli apresentam reao alcalina (vermelha) ou cida (amarela) na parte superior (inclinada) e cida (amarela) na base, com ou sem formao de gs e H2S; 3. Teste de indol - Inocular tubo contendo Caldo de digesto pancretico de caselna com colnia suspeita da placa de gar de eosina-cloreto de metiltionnio. Incubar a 0 30-37 C, durante 48 horas. Adicionar

- DESCRIO DOS MEIOS DE CULTURA E REAGENTES

oc,

Digesto pancretico de tecido animal Extrato de levedura Extrato de carne . . . . . . . . . . . . Cloreto de sdio . . . . . . . . . Dextrose Fosfato de potssio dibsico Fosfato de potssio monobsico gua pH aps esterilizao. . . . . . . . . . Volume por frasco . . . . . . . . . . .

. .

. .

. . . . . . . . .

5,0 1,5 1,5 3,5 1,0 3,68 1,32

g g g g g g g 1000 ml

8,0 0,1

300 ml

Digesto pancretico de Ooreto de magnsio . Sulfato de potssio . . Brometo de cetrimnio Glicerol . . . . . . . . gar gua pH aps esterilizao. Volume por placo

gelatina . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

g 1000 ml 7,2 0,2

20,0 1,4 10,0 0,3 10,0 13,6

g g g g

m1

1520 ml

Extrato de levedura Dgesto pptico de tecido animal Dgesto pancretico de casena . Lactose Cio reto de sdio . . . . . . . . . Sacarose . . . . . . . . . . . . . . Vermelho de fenol . . . . . . . . Verde brilhante . . . . . . . . . . gar gua

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

3,0 5,0 5,0 10,0

5,0

pH aps esterilizao. Volume por plaCll Agar Mac Conkey

. . . . .

. . . . .

10,0 80 12,5 20,0 1000 6,9 1520

g g g g g g

Cloreto gar gua

de metiltionnio

. . .

65 mg 15,0 g 1000 ml
7,1 0,2

pH ap6s esterilizao. Volume por placa

. . . . . . . . . .. .

15-20 ml

gar para deteco de f/uorescena

Digesto Digesto Fosfato Sulfato Glicerol gar pancretico de casena . ppiico de tecido animal . . . de potssio dibsico . de magnsio heptaidratado . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

mg mg g ml 0,2 ml

gua . pH aps esterilizao. . . . . . . . . . . . Volume por tubo. . . . . . . . . . . . . . Infuso de crebro e corao

Infuso de crebro de novilho .... Infuso de corao de boi . . . . . Digesto pancretico de casena . . Digesto pptico de tecido animal. Dextrose . . . . . . . . . . . Cloreto de sdio Fosfato de sdio dibsico gua . . . . .. . .. . .. ... . .. . . .

10,0 10,0 1,5 1,5 10,0 15,0 1000 10

g g g g

ml
g

ml

7,2 0,2 ml

Dgesto pancretico de gelatina . . . . . . Dgesto pancretico de casena . Digesto pptico de tecido animal . . . . . Lactose . Mistura de sais biliares . Qoreto de sdio . . . . . . . . Vermelho neutro . . . . . . . . Cloreto de metilrosanilnio . gar . gua .

17,0 1,5 1,5 10,0 1,5 5,0 0,030 0,001

13,5

g
g g

g
g g

200,0 250,0 5,0 5,0

2,0

g g
g g

g g
g

pH aps esterilizao. Volume por plaCll

. . . . . . . . . . . . de fenol

1000 ml 7,1 0,2 15-20 ml

pH aps esterilizao. . . . . . . . . . . . gar de infuso de crebro

g 5,0 g 2,5 g 1000 ml 7,4 0.2

e corao

Agar sal manitolvermelho

Extrato de carne . . . . . . . . . . . . . . Digesto pptico de tecido animal . Digesto pancretico de casena . Cloreto de $dio . . . . . . . . . . . D-Manitol . . . . . . . . . . . . . Vermelho de fenol . . . . . . . . . gar . gua ....................

1,0 5,0 5,0

75,0

g g g g

Composio idntica infuso de crebro e corao com adio de 15,0 g de gar por litro. Volume por tubo: 10 ml (inclinado)
Caldo de nitrato enriquecido

pH ap6s esterilizao. Volume por plaCll

. . . . . . . . . . . .

10,0 g 0,025 g 15,0 g 1000 ml 7,4 0,2

1520 ml

A composio deste meio idntica infuso de crebro e corao qual so adicionados 3 g de nitrato de potssio e mais 500 ml de gua. Volume por tubo: 20 ml (com tubo de Ourham)
gar para teste de desoxirribonuclease

gar de Vogel.Johnson
Digesto pancretico Extrato de levedura D-Manitol . . . . Fosfato de potssio Qoreto de Itio . . Glicina. . Vermelho de fenol gar gua de casena . . . . .

. . . . . dibsico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

pH aps esterilizao.

10,0 g 5,0 g 10,0 g 5,0 g 5,0 g 10,0 g 25,0 mg 16,0 g 1000 ml 7,2 0,2

cido desoxirribonuclico

.......

gar .................

g Verde de metila . Digesto pancretico de casena . . . . . g Digesto papanico de farinha de soja . . . S~ g Qoreto de $dio . . . . . . . . . . . . 5,0 g gua .............. 1000 ml 7,3 0,2 pH apresterilizaii"o. . . . . . . . . . . .

2,0 15,0 0,05 15,0

Volume por tubo Inclinado

10

ml

Antes de distribuir o meio nas placas, adicionar 20 mI de soluo de telurito de potssio a I % para 100 mI de meio resfriado a 45.50 oCo Volume por placa: 15-20 mI.

Dgesto pancretico gua qsp

de casena

. . . . .. .

pH aps esterilizao.

. . . . . . . . . . .

10,0 g 1000 ml 7,2 0,1

gar trplice acarferro

Extrato Extrato Digesto Digesto Lactose Sacarose Dextrose de carne . . . . . . . . . de levedura .... . . . pancretico de casena . pptico de tecido animal . . . . . . .. .. : . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

Digesto pancretico de gelatina. . . . . . Fosfato de potssio dibsico . Lactose . Eosina Y . . . . . . . . . . . . . . . . . ..

10,0 2,0 10,0 400

g
g

g
mg

3,0 3,0 15,0 5,0 10,0 10,0 1,0

g g

g
g

g g g

Sulfato fenoso . . . . . . . Cloreto de sdio . . . . . . Tiossulfato de sdio . . . . gar Vermelho de fenol . . . . . gua pH apl elterilizao Volume por tubo inclinado
o o o o

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
o

0,2 g 5,0 g 0,3 g 12 g . . . . . . .. 0,025 g 1000 ml 1.4 0.2 10 ml

o o

Caldo de caserna-soja Casena tratada por suco pancretico Farinha de soja por digesto papanica. Qoreto de sdio .. . . . . . . . . . . .. Fosfato de potssio dibsico Dextrose gua pH aps elterilizatfo. . . . . . . . . . ..
o

17,0 I 3,0 g 5,0 g 2,5 g 2,5 "g 1000 ml 7.3 0,2

Caldo lactose Digesto pancretico de gelatina 5,0 g Extrato de levedura 3,0 g Dextrose 1,0 g L-Usina " 10,0 g Citrato frrico amoniacal . . . . . . . . . 0,5 g Tiossulfato de sdio . . . . . . . . . . . . 0,04 g Prpura de bromocresol . . . . . . . . . . 0,02 g gar . 15,0 g gua . . . . . . . . . 1000 ml pH apuuerilizao 6,7 0,1 Volume por tubo inclinado 10 ml
o o o o o o o o o o

Digesto pancretico de lelatina . . . . . . Extrato de carne . . . . . . . . Lactose gua . pH aps elterilizatfo. . . . . . . . . . . . Volume por tubo
o o o

5,0 g 3,0 g 5,0 g 1000 ml 6.9 0,1 10-20 ml

Agar peptona-ferro Digesto pancretico de gelatina. . Digesto pancretico de casena . . Digesto pptico de tecido animal. Citrato fnico amoniacal . . . . . Fosfato de potssio dibsico ...... Tiossulfato de sdio .. gar . , . . . . . . . . . . . . . . . gua , pH apl esterilizar, Volume por tubo
o o o o

r'

Fosfato de amnio monobsico 1,0 g Fosfato de potssio dibsico 1,0 g Qoreto de sdio . . . . . .. 5,0 g Citrato de sdio 2,0 g Sulfato de magnsio . . . . . . . . . . . . 0,2 g Azul de bromotimol . . . . . . . . . . . . 0,08 g gar 15,0 g gua .1000 ml pH ap6ulterilizll60 . 6,8 0,2 Volume por tubo inclinado . 10 ml
o o o o o o o o o o o o o o

15,0 2,5 2,5 0,5 1,1 0,08 . . .. 15,0 1000

. . . .

. . . .

.. . . . . . .

g g g g
I

g g ml ml

6.7 0,2
10

Reagente de Kovac lcool amlico ou isoamlico 15,0 ml p-Dimetilaminobenzaldedo. . . . . . . . 1,0 I cido clordrico concentrado. . . . . .. 5,0 ml DinolHr o aldeido no dlcool e adicionar o dcido lentamente. Con8enar 80b refrigeratfo.
o

Indicador Digesto pancretico de gelatina. Dextrose Cloreto de sdio . . . . . . . . Fosfato de potssio monobsico Uria . . . . . . . . . . . . . . . gar . . . . . . . . . . . . . . . Vermelhodefenol . . . . .. . gua pH apulteriliza4'o. " . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. .. . . 1,0 g 1,0 g 51) g 2,0 g 20,0 I 15,0 g 0,012 I 1000 m1 6,8 a 6,9

vermelho de metila

Vermelhodemetila " , 0,01 g Etanol . . . . . . . . . . . . . ". 30,0 m1 gua . . . . . . . . . . . . . . , . . . . .. 50,0 m1 DUlOlve o corrlnte no dlcool e comPleta, com 4gU11. Reagente Voges.proskauer Soluio alcolica de ct-naftol a 5% . . . . .. HidIXido de potssio a 40% . . . . . . . .. Tamplo cloreto de sdio-peptona pH 7,0 3,0 m1 1,0 m1

. . . . ..

Dissolver todos os ingredientes, sem pr, em 100 ml de gua e esterilizar por filtrao atravs de membrana esterilizante. Separadamente, dissQI ver gar em 900 rol de gua, esterilizar a 121 c, durante 15 minutos, resfriar a SO c, juntar primeira soluo e agitar vigorosamente. Distribuir alquotas de 10 rol em tubos e deixar solidificar em posifo inclinada.

Fosfato de potssio monobsico . . . .. 3,56 Fosfato diss6dico. 2 H2 O . . . . . . . .. 7,23 Qoreto de sdio 4;30 Peptona . . . . . . . . . . . . . . . 1,0 gua 1000
o o o o

Fluid

I 1 g 1000 m1

Digesto pancretico de casena . . . . . . 3,5 g Digesto pptico de tecido animal. . . . . 3,5 I Dextrose 5,0 I Fosfato de potssio dibsico 5,0 g gua 1000 ml pH ap6ulterilizatfo 6,9 0,2 Volume por tubo. 10 ml
o o o o

Digesto pptico de tecido animal . . . . . gua . pH ap8 e8teriliza4'o: 7,11: 0,2 Fluido /I

Digesto pptico de tecido animal . . . . . Polissorbato 80 . gua o.' pH ap68 e8teriliza4'o: 7,11: 0,2

1 g 1 ml 1000 m1

V.S.I.7.4 - ESTERILIZAO E ACONDICIONAMENTO DOS MEIOS DE CULTURA

Staphylococcus aUTeus

ATCC 6538 P Ctlldo de Ctlse(na-so/a ouATCC 6538 ATCC 9027 ATCC 8739 caldo de Ctlse(na-so/a Ctlldo de /actose Ctlldo de /actose

1) Meios em placas - Esterilizar o meio a 121 De, durante 15 minutos e distribuir, assepticamente, em placas de Petri estreis de 100 x 20 mm. Incubar a 30-35 De, durante 24 horas, e conservar sob refrigerao; 2) Meios em tubos - Dissolver os ingredientes do meio (ferver durante 1 a 2 minutos quando se empregar gar) e distribuir em tubos 18 x 150 mm, quando se empregar o volume de 10 mI, e em tubos 25 x 200 mm, quando se empregar o volume de 15 a 20 mI. Esterilizar a 121 De, durante IS minutos. Incubar a 30-35 De, durante 24 horas e conservar sob refrigerao.

Pseudomonas aeruginosa Escherichia col; Salmonel/a typhimurium1

v .s.1.7.s - CAPAODADE SELETIVA E NUIRlTIV A DOS MEIOS DE CULTURA E VALIDAO DO TESTE PARA PESQUISA E IDENTIFICAO DE PATOGENOS.
Incubar os microrganismos que seguem em tubos contendo os meios indicados, temperatura de 3035 e, durante 18-24 horas.

Diluir cada cultura empregando tampo cloreto de sdio-peptona pH 7,0 de modo a obter 1000 clulas por mI. Testar o mtodo aplicando inculos de aproximadamente 100 clulas dos microrganismos Escherichia coli, Salmonellae, Pseudomonas aeruginosa e Staphylococcus aureus na presena e na ausncia da amostra sob exame. Deve ocorrer crescimento e identificao positiva pata os respectivos microrganismos.

Nfo recomendado nmero de cepa. Pode ser empregada salmonela nfo patognica para o homem, como Salmonel/a abony (NCTC 6017).

Preparao padro de referncia

Como preparao padro, empregar bitartarato de epinefrina. Esta preparao deve ser conservada em frascos hermticos e opacos e dessecada sobre slica-geldurante 18 horas antes do uso.
Soluo padro de referncia

nmco suficientemente bloqueado somente se injeo subseqente de soluo recente de cloreto de acetilcolinaO,OOI%(p/V)na dose de I mI porkg de peso nl[o produzir queda transitria na presslio arterial. Se esse mecanismo no estiver suficientemente paralisado, injetar dose de 0,5 mI da soluo de sulfato de atropina at paralisia completa.
Procedimento

Dissolver 91 mg de bitartarato de epinefrina (equivalente a 50 mg de epinefrina base 4H13N~) em soluo recente de bissulfito de sdio 0,4% (p/V). Completar 50 mI com gua e homogeneizar. A solulio fmal ter 1,0 mg de epinefrina (base livre) por mI. Conservar, sob refrigerao, em frasco hermtico mbar. Usar, no mximo, durante 6 meses. Desprezar a soluo quando esta apresentar algum sinal de deteriorao, tal como mudana de cor.
Diluilo do padrlo

Diluir a solul[o padro de referncia de epinefrina, em soluo fisiolgica, de modo que a administrairo de dose entre 0,1 e 0,5 mI produza aumento de 20 a 70 mm de mercrio na presso arterial.
Mtodo proposto

Selecionar rato com peso entre 275 e 325 g e anestesiar com anestsico isento de efeitos sobre a pressiro arterial. Imobilizar o animal e mantlo aquecido para prevenir a perda de calor corporal. Cirurgicamente proceder intubao traqueal, se necessrio, e expor a veia femural ou jugular, preparando-a para injees intravenosas. Adminis trar 200 unidades de heparina por 100 g de peso corporal. Cirurgicamente expor a artria cartida e canular, conectando-a ao manmetro ajustado para o registro contnuo da press[o arterial. Injetar, intravenosamente, soluo de sulfato de atropi.na 0,1% (P/V) na proporo de 1 mI por kg de peso corporal. Considerar o receptor musca-

Selecionar dose da diluio padro que produza aumento entre 2,7 kPa e 9,3 kPa (20 e 70 mm de mercrio) na presso arterial. Injetar a dose a intervalos constantes de, no mnimo, 5 minutos para possibilitar o retomo da presso arterial ao nvel basal. Aps cada injeo administrar imedia tamente 0,2 ml de soluiro fisiolgica para lavar a cnula. Assegurar-se da reprodutibilidade da resposta, repetindo a dose duas ou mais vezes. Administrar nova dose da diluio do padro de modo a obter resposta hipertensora aproximada mente 20% maior do que a mdia das respostas da dose menor. Considerar o animal apto para o teste se (1) as respostas para a primeira dose selecionada forem reprodutveis entre 2,7 kPa e 9,3 kPa (20 e 70 mm de mercrio) e (2) significativamente menores em relao resposta da dose maior. Mantendo constante o intervalo de tempo estabelecido, injetar srie de cinco doses na qual se alternem a dose selecionada da diluiiro padr'o e dose de igual volume da substncia sob teste, diluda convenientemente. Aps cada uma das cinco injees, medir a variao na presso arterial. Calcular a diferena entre cada resposta da amostra e a mdia das respostas das doses da diluio padr'o, imediatamente anterior e posterior. A amostra cumpre os requisitos do teste se a mdia destas diferenas significar que as respostas obtidas com a solu'o da amostra no sio maiores do que aquelas da diluio padro. Os resultados devem corresponder ao limite de atividade pressora especificado para este teste na monografia correspondente.

Determina-se a potncia da oxitocina compa- mato de etila 2,5% (P/V) por kg de peso do ani rando sua atividade com aquela da preparao mal). Por disseco cuidadosa, expor a artria isquitica conectando-a diretamente ao manpadro por mtodo de ensaio adequado. metro de mercrio ajustado para o registro cont Preparao padro nuo da presso arterial. Canular a veia crural ou braquial, preparandoa para injetar as diluies do Empregar o quarto padro internacional de padra:oe da amostra. oxitocina para avaliao biolgica, estabelecido em 1978, que consiste de oxitocina sinttica, Avaliao da sensibilidde do animal dessecada, com albumina humana e cido ctrico Determinar, atravs de administrao experi(disponvel em ampolasque contm 12,5 unidades). Pode ser utilizada outra preparao, cuja potncia mental, volumes da diluio padro que produzam tenha sido determinada em relao ao padro queda rpida e transitria de 20 a 40 mm de internacional. mercrio na presso arterial. Se necessrio, no decorrer do ensaio alterar a concentrao do Soluo padro padro, a fim de que a injeo intravenosa de duas doses, entre 0,15 e 0,5 mI, produza resposta Transferir o contedo da ampola do padro na faixa indicada. A razla entre doses da amostra internacional para recipiente adequado e adicionar e do padro deve ser idntica e constante no 0,5 ml de cido actico 0,045 M para cada unidade de oxitocina. Tampar o frasco com algodo e decorrer do ensaio. Se ocorrer taquifllaxia, manilevar a banho-maria fervente, onde deve perma- festada por rpido decrscimo na resposta, consinecer, com leve agitao, durante 5 minutos. derar o frango inadequado para o ensaio. Resfriar sob gua corrente e filtrar. Colocar a soluo estoque em ampolas, fechar por fuso do vidro e aquecer em banhomaria fervente durante 20 minutos. Conservar a soluo em refrigerador e usar, no mximo, durante 6 meses.
Procedimento

MI!TODO A: HIPOTENSO ARTERIAL EM FRANGO Diluio do padro

No dia do ensaio, efetuar uma primeira diluio da soluo estoque em soluo fisiolgica, de modo a obter soluo com potncia de 0,4 unidades de oxitocina por mI. Esta concentrao usada para avaliaoda sensibilidade do animal.
Diluio da amostra

Injetar as duas doses selecionadas do padro e da amostra, em seqncia aleatria, a intervalos uniformes de 3 a Ia minutos, registrando, no mnimo, 4 respostas para cada dose. Ao invs desta seqncia aleatria, pode-se usar delinea mento de blocos ao acasopara eliminar a influncia de possveis alteraes de sensibilidade do animal. A partir dos resultados, calcular a potncia da substncia que est sendo examinada e seus limites de confiana, atravs de mtodo estatstico descrito na seo VI.5.
MI!TODO B: CONTRAO 00 TERO DE RATA IN VITRO

Efetuar diluio da amostra de oxitocina, em soluo fisiolgica, de modo a obter soluo com potncia presumida idntica da diluio do padro.
Animal

Usar uma rata em fase sexual estro e pesando entre 120 e 200 g. Sacrificar com golpe na nuca e sangria imediata por seco dos vasos cervicais. Dissecar um corno uterino e suspender em cubade-6rglloisolado, contendo soluo nutritiva da seguinte composia:o:
Cloreto de sdio . . . . . . . . . . . . 9,0 Ooreto de potssio. . . . . . . . . . . 0,42 0,0795 Ooreto de clcio . . . . . . . . . . . . 0,50 Bicarbonato de sdio . . . . . . . . . Dextrose . 0,50 I\Ia (dl:stilada e condensada em condensador de vidro) q.p. . . .. 1.000 ml
g g

Selecionar um frango domstico, sadio, pesando entre 1,1 e 2,5 kg. Empregar anestsico de ao prolongada e isento de efeitos sobre a presso arterial (por exemplo, 5 ml de solulo de carba

g g g

Manter a cuba.de.rgo-isolado a 32C ou outra temperatura adequada, na qual se evitem as contraes espontneas e o tero mantenha sua sensibilidade. Oxigenar a soluo com mistura de 95% de oxignio e 5% de dixido de carbono. Registrar as contraes do msculo isolado, atravs de alavanca isotnica de inscrio frontal. Preparar a soluo padro, em soluo nutritiva, de modo a obter concentrao de 0,02 unidades por mI. Similarmente, fazer a soluo da amostra de modo que, com base na potncia presumida, apresente a mesma concentrao da solulo padrlo. Estabelecer a curva dose-resposta pela adio de doses da soluo padro. Uma vez completa a resposta, a cada dose substituir a soluo nutritiva para relaxar o msculo. As doses

slo adicionadas em intervalos uniformes de 3 a 5 minutos conforme a velocidade de recuperao do rgo. Selecionar duas doses da soluo padro que produzam contraes claramente discriminadas entre 20 e 80% da resposta mxima. A razo entre as duas doses do padro e da amostra deve ser idntica e rnantida constante no decorrer do ensaio. Adicionar as doses em seqncia segundo o delineamento do quadrado latino (2 x 2), registrand<He, no mnlmo, quatro respostas para cada dose do padro e da amostra. A partir dos resultados, calcular a potncia da substncia que est sendo examinada e seus limites de confiana, atravs de mtodo estatstico descrito na selo VI.5.

Determinase a potncia da corticotrofma comparando um ou mais dos seus efeitos biolgicos com o mesmo efeito da preparall'o padro de corticotrofina, por mtodo de ensaio adequado. Quando o material a ser ensaiado se destina administrao subcutnea ou intramuscular, usar o mtodo de ensaio subcutneo; quando intravenosa, usar o mtodo de ensaio intravenoso. Preparao padro Empregar o terceiro padro corticotrofina suna (ACTH) biolgica, estabelecido em 1962, corticotrofina suna purificada, lactose (disponvel em ampolas dades). Pode ser utilizada outra quada, cuja potncia tenha sido relao ao padro internacional. Soluo padro Dissolver o contedo total da ampola da preparao padro de corticotrofina em 2,5 ml de geltina SR e homogeneizar de modo a obter soluo que contenha 2,0 unidades internacionais por mI. Com o mesmo solvente, preparar trs diluies do padro que produzam depleo do nvel de cido ascrbico adrenal varivel entre 20 e 80% da resposta mxima. Como aproximao, podem ser tentadas concentraes entre 20 e 600 miliunidades internacionais por mI, aplicando-se doses crescentes segundo progresso geomtrica. As solues devem ser injetadas, no mximo, 4 horas aps sua preparao. Soluo da amostra Diluir do mesmo modo que o padrlio a fim de obter trs diluies da amostra com potncia presumida igual a das diluies do padro. internacional de para avalialio que consiste de liofdizada com contendo 5 unipreparalio adedeterminada em

entre 24 e 27C. Realizar o ensaio 18 a 36 horas aps a hipofisectomia. Para o ensaio, pesar os animais, distribu-Ios aleatoriamente em 6 grupos de 6 a 10 ratos. destinando-os respectivamente para as diluies do padro e da amostra. Procedimento Injetar subcutaneamente 0,5 ml da respectiva diluio em todos os ratos de cada grupo. Trs horas aps a injelio, anestesiar os animais, retirar as glndulas adrenais, isolar de tecidos circunvizinhos e pesar. Executar a operalio to rpido quanto possvel, para evitar perda de peso. Sacrificar os ratos e examinar se a hipofisectornia foi completa. Colocar o par de glndulas adrenais de cada rato em recipiente adequado contendo 8 ml de cido metafosfrico 2,5% (p/V) e triturar convenientemente. Deixar o homogeneizado em repouso durante 30 minutos. Determinao de cido ascrbico Filtrar os extratos de cido metafosfrico e pipetar 4 ml de cada filtrado para tubos de ensaio contendo 4 ml da soluo de acetato de indofenol SR. Misturar por agita"o e, 30 segundos depois, ler a absorvncia em espectrofotmetro a 520 nm. Calcular a concentrao de cido ascrbico em mg para 100 g de glndula adrenal, a partir da absorvncia encontrada e da curva padro elaborada conforme processo descrito a seguir. Preparar curva padro, absorvncia-concentralio, usando 4,0; 6,0; 8,0; 10,0 e 12,0 p.g de cido ascrbico por ml em cido metafosfrico 2,5% (p/v). Transferir 4,0 ml para cinco tubos de ensaio, contendo cada um 4,0 ml da soluo de acetato de indofenol SR. Misturar por agitao e, 30 segundos depois, ler a absorvncia em espectrofotmetro a 520 nm. Plotar os valores de absorvncia-concentrao para obter a curva padrlio. A partir dos resultados, calcular a potncia da substncia que est sendo examinada e seus limites de confiana, atravs de mtodo estatstico descrito na seo VI.5.
M~TODO 8: INTRAVENOSO

Animais Usar ratos sadios, do mesmo sexo, cujo peso esteja entre 100 e 200 g; para cada ensaio, a faixa de peso entre os ratos deve ser mantida tlio estreita quanto possvel e nunca exceder 15 g. Manter os animais em condies uniformes de gua, alimentall'o e temperatura, no mnimo, durante uma semana. Anestesiar os ratos com ter e hipofisectomiz-Ios. Aps a operalio, deixlos com acesso alimentalio, gua e solulio de D-glicose a 5% (P/v) em soluo fisiolgica. Manter a sala isenta de rudos e com temperatura uniforme O mtodo subcutneo proposto adequado desde que sejam observadas as seguintes modificaes: I) Preparar as solues padro e amostra em soluo fisiolgica sem a adill'o de gelatina e acidificar pela adio de 0,25% (V /V) de cido actico 5M. Administrar por via in travenosa; 2) Cinqenta e cinco a sessenta e cinco minutos depois, retirar as glndulas adrenais.

Determina-se a potncia da insulina comparando seu efeito hipoglicemiante com aquele produzido pela preparao padro de insulina por mtodo de ensaio adequado.
Preparao padro

Procedimento

Empregar o quarto padro internacional de insulina para avaliao biolgica, estabelecido em 1958, que consiste em mistura de 52% de insulina bovina e 48% de insulina suna purificada e recristalizada (contendo 24,0 unidades por mg). Pode ser utilizada outra preparao adequada, cuja potncia tenha sido determinada etn relao ao padro intemacional.
Soluo padro

Pesar exatamente quantidade adequada da preparao padro e dissolver em soluo fisio lgica acidificada com cido clordrico at pH 2,5, de modo a obter soluo com 40 unidades internacionais por ml. conveniente adicionar substncia conservante para evitar o crescimento de microrganismos. Conservar a soluo entre 2 e 8C, evitando o congelamento. Usar a soluo, no mximo, durante 6 meses aps sua preparao.

Distribuir os camundongos, ao acaso, em quatro grupos iguais de 24 animais cada um, identificando cada lote para a administrao das duas diluies do padro e da amostra, respectivamente. Injetar cada dose, subcutaneamente, usando o mesmo volume, usualmente 0,25 ml; nunca exceder, porm, 0,5 ml para cada camundongo. Colocar os animais em recipientes transparentes no interior de um incubador de ar com a parte frontal tambm transparente, ~justado , temperatura uniforme entre 29 e 35 C e umIdade relativa de 40 a 60%. Pode ser usada uma srie de pequenas caixas submersas at trs quartas partes de sua altura em banho-maria temperatu~a adequada e que possibilite a ventilao necessna das mesmas. Planejar o ensaio de modo que os recipientes dos quatro lotes sejam distribudos uniformemente no incubador ou em banhomaria. Observar os camundongos durante uma hora e meia aps a injeo e registrar o nmero de ani mais que entram em convulso ou morrem, Para recuperar os animais, injetar 0,5 ml de glicose 15%(P/V), subcutaneamente. A partir dos resultados, calcular a potncia da substncia que est sendo examinada e seus limites de confiana, atravs de mtodo estatstico descrito na seo VI. 7.
M~TODO B: GLICOSE SANGfNEA EM COEUlOS Diluio do padro

Diluio do padro

Diluir a soluo padro em soluo fisiolgica acidificada com acido clordrico, at pH 2,5, de modo a obter duas diluies contendo, respectivamente, por exemplo, dependendo de sensibilidade dos animais, 30 miliunidades (diluio do padro 1) e 60 miliunidades internacionais de insulina por ml (diluio do padro 2).
Diluio da amostra

Dissolver a amostra em soluo fisiolgica acidificada com cido clordrico, at pH 2,5, de modo a obter duas diluies presumidas de, respectivamente, por exemplo, dependendo da Diluio da amostra sensibilidade dos animais, 30 miliunidades (diluiUtilizando o mesmo solvente, fazer duas o da amostra 1) e 60 miliunidades internacionais solues da amostra de modo que, com base na de insulina por ml (diluio da amostra 2). potncia presumida, se obtenha, respectivamente, por exemplo, dependendo da sensibilidade dos Animais animais, 1,0 unidade (diluio da amostra 1) e Selecionar, no mnimo, noventa e seis camun- 2,0 unidades internacionais de insulina por m1 dongos sadios, do mesmo sexo, e mant-Ios em (diluio da amostra 2). dieta uniforme e adequada. Para cada ensaio, a faixa de diferena de peso no deve exceder 5 g. Dose a injetar Com base em ensaio prvio, selecionar as doses Alm disso, deixar os animais em jejum, mas com a injetar cujo volume, usualmente, deve estar entre acesso gua, entre 2 e 24 horas antes do ensaio.

Diluir volume adequado da soluo padro de modo a obter duas diluies contendo, respectivamente, por exemplo, dependendo da sensibilidade dos animais, 1,0 unidade (diluio do padro 1) e 2,0 unidades internacionais de insulina por m1 (diluio do padro 2). Usar como solvente soluo contendo cresol ou fenol 0,1 a 0,25% (pfV), glicerol 1,4 a 1,8% (p/V) e cido clordrico suficiente para produzir pH entre 2,5 e 3,5.

0,30 e 0,50 ml. Para cada ensaio, esse volume da dilui'o padrlro e da amostra deve ser o mesmo. Animais Selecionar, no mmuno, 24 coelhos sadios, pesando nlfo menos que 1,8 kg cada um. Uma semana antes do ensaio, colocar os animais nas condies do laboratrio, com livre acesso gua e com dieta uniforme. Procedimento Dividir os coelhos, ao acaso, em quatro grupos

iguais de, no mnimo, 6 coelhos cada um, destinando-os, respectivamente, para as duas doses do padro e da amostra. Aproximadamente 20 horas antes do ensaio, deixar para cada coelho quantidade de alimento que deve ser consumida durante 6 horas. Antes de cada fase do ensaio seguir o mesmo horrio de alimentao. Durante o ensaio, retirar o alimento e a gua at que seja coletada a ltima amostra de sangue. Injetar, subcutaneamente, a dose indicada para o respectivo grupo, conforme o planejamento a seguir:

Grupo I

l~ injeo diluio diluio diluio diluio do padro do padro da amostra da amostra I 2 I 2

2~ injeo diluio diluio diluio diluio da da do do amostra amostra padro padro 2 I 2 I

2 3 4

Observar que a segunda injeo deve ser feita preferencialmente no dia seguinte, porm nunca exceder uma semana aps a primeira injeo. Coletar amostra de sangue atravs da veia marginal da orelha de cada coelho uma hora e duas horas e meia aps cada injelfo. Determinar a concentrao de glicose de cada amostra por mtodo adequado, tal como o descrito no Mtodo C. A partir dos resultados, calcular a potncia da substncia que est sendo examinada e seus limites de confiana, atravs de mtodo estatstico descrito na seo VI.5.
MUODO c: GLICOSE SANGlNEA EM CAMUNDONGOS

Diluies da amostra Utilizando o mesmo solvente, fazer duas solues da amostra de modo que, com base na potncia presumida, se obtenham, respectivamente, por exemplo, dependendo da sensibilidade dos animais, 50 miliunidades (diluio da amostra 1) e 100 miliunidades internacionais de insulina por ml (diluio da amostra 2). Animais Selecionar, no mnimo, 40 camundongos do mesmo sexo, pesando entre 20 e 25 g. Para cada ensaio, a faixa de diferena de peso no deve exceder 2 g. Manter os animais temperatura ambiente uniforme, com acesso giJa e alimentao. Procedimento Distribuir os camundongos, por sorteio, em 4 grupos iguais de, no mnimo, 10 animais cada um, identificando cada lote para a administrao das duas diluies do padro e da amostra, respectivamente. Injetar cada dose, subcutaneamente, utilizando 0,1 ml para cada 10 g de peso mdio dos animais. Adotar o delineamento duplo cruzado, conforme o esquema a seguir:

Diluies do padro Diluir volume adequado da soluo padro de modo a obter duas diluies contendo, respectivamente, por exemplo, dependendo da sensibilidade dos animais, 50 miliunidades (diluio do padro I) e 100 miliunidades internacionais de insulina por ml (diluio do padro 2). Ajustar a concentrao destas diluies conforme a sensibilidade da cepa de camundongos utilizada. Usar, como solvente, soluo fisiolgica acidificada com cido clordrico at pH 2,5 a 3,5.

Grupo I 2 3

1~ injeo diluio diluio diluio diluio do do da da padro padro amostra amostra I 2 I 2

2~ injeo diluio diluio diluio diluio da da do do amostra amostra padro padro 2 1 2 1

Exatamente quarenta minutos aps cada injeio, coletar amostra de 50 a 100 ~ de sangue de cada animal, atravs da explorao do plexo

venoso ocular com tubo capilar heparinizado. Nas mesmas condies, aplicar a segunda injeo pelo menos duas horas e meia aps a primeira ou

no dia seguinte. Centrifugar o sangue para separar o plasma e determinar o teor de glicose pelo mtodo a seguir. Transferir 25 J do plasma, recentemente separado, para um tubo de ensaio. Adicionar 2,5 mI de reagente de cor, agitar e deixar temperatura ambiente por 60 minutos. Determinar a absorvncia em espectrofotmetro a 510 nrn, usando como branco 25 ",,1 de gua e 2,5 mI de reagente de cor. Determinar o contedo de glicose utilizando curva padrfo com concentraes variando de 50 a 250 mg por mI. A partir dos resultados, calcular a potncia da substncia que est sendo examinada e seus limites de confiana, atravs do mtodo estatstico descrito na se[O VIS.

Aspergillus niger. Ela catalisa a oxidao aerbica

da glicose. A soluo contm no mnimo 735 unidades/ml e no maximo 790 unidades/rnl de atividade de glicose-oxidase e no mximo, 15 unidades/ml de atividade de catalase. Pode conter tampes e estabilizantes. Unidade de atividade de glicose-oxidase a quantidade capaz de absorver 10 mm3 de oxignio/minuto, atuando sobre o substrato glicose, a 30 c, em pH 5,9, na presena de excesso de catalase. Caractersticas da soluo: lmpida, de colorao marrom-amarelada. Densidade em tomo de 1,18 a 1,21. Armazenagem: recipientes bem fechados, sob refrigerao. A estabilidade de, no mnimo, 6 meses. Peroxidase

Reagente de cor Dissolver 0,1 g de aminofenazona em 250 mI de tampo fosfato pH 6,0. Juntar 5 mI da soluo de glicose-oxidase, 5 mI da solu'o de peroxidase e 0,33 g de cido 4-hidroxibenzico. Completar com tampo fosfato pH 6,0 a 300 mI. Soluo padro de glicose Dissolver 0,100 g de glicose anidra e 0,2 g de cido benzico em gua at perfazer 100 mI. Armazenar sob refrigerao. Soluo de glicose-oxidase Obtm-se a enzima a partir de miclios de

Preparado liofilizado obtido a partir da raiz de

Cochlearia armoracia L. Catalisa reaes de oxidao com o perxido de hidrognio. Caractersticas: p de cor branca a parda. A soluo da enzima a 0,025 por cento (p/V) em tampo fosfato pH 6,0 apresenta: absorvncia 403 nm .. O6 absorvncia 275 nm - mIOlmo , . Soluo de peroxidase: contm 1,0 g de peroxidase em tampo fosfato pH 6,0. Apresenta, no mnimo, 820 unidades internacionais/ml.

A duralo do efeito hipogHcemiante,produzido grupo solulo da amostra e nos do outro solulo por preparaOesmodificadas de insulina, compa padro preparada em soluio fisiolgica acidifirada com a hipogHcemiaproduzida em coelhos ou cada com cido clordrico para pH 2,5, de modo cobaias, pela preparalo padrlo de insulina. a conter a potncia nominal da amostra: ambas Selecionar os animais a partir de colnia sadia e 81 solues aio injetadas, sem diluies postedistribulos aleatoriamente em dois grupos iguais riores, em volumes couespondentes ao peso de, no mnimo, Ia animais. Aproximadamente corporal dos animais. Uma, duas, quatro e seis dezoito horas antes da realzalo do ensaio colocar horas aps as injees determinar o nhel mdio os animais isolados e demlos em jejum com livre de sticose sangnea de cada grupo atravs de acesso i gua. No incio do ensaio, determinar o mtodo adequado, tal como o descrito no m nvel mdio de glicose sangnea de cada grupo. todo C do ensaio biolgico de insulina (V.5.2.3). Injetar, subcutaneamente, nos animais de um

DeterDna-se a potncia do glucagon, comparando sua atividade hiperglicemiante com aquela da preparao padro por mtodo de ensaio adequado.
Preparao padro

Ml!TODO PROPOSTO

Empregar o primeiro padro internacional de glucagon suno para avaliao biolgica, estabelecido em 1973, que consiste em glucagon suno liofilizado com lactose e cloreto de sdio (fornecido em ampolas contendo 1,49 unidades). Pode ser utilizada outra preparao adequada, cuja potncia tenha sido determinada em relao ao padro internacional.
Soluo padro

Reconstituir o contedo total da ampola da preparao padro com 2 mI de soluo fisiolgica acidificada com cido clordrico R a pH 3,0. Diluir a soluo resultante com o mesmo solvente, de modo a obter concentrao conveniente, como a de 100 Dliunidades internacionais por ml. Conservar esta soluo entre 2C e 8 c e us-Ia, no mximo, at dois dias aps sua preparao. l~ injeo diluio diluio diluio diluio do do da da

Selecionar, no mnimo, vinte e quatro coelhos adultos, sadios, cada qual com peso entre 1,8 e 2,8 kg. Mant-Ios em condies uniformes de temperatura, umidade e dieta adequada, pelo menos durante uma semana. Trat-Ios cuidadosamente para evitar excit-Ios. Quarenta e oito horas antes do ensaio, injetar intramuscularmente, em cada coelho, 1 ml de acetato de cortisona. Dezesseis horas antes do ensaio, deixar os animais em jejum, com acesso gua, assim permanecendo at a ltima coleta de amostra sangnea. Distribuir os coelhos em quatro grupos iguais de, no mnimo, seis coelhos cada um. Fazer duas diluies .da soluo padro, em soluo fisiolgica acidificada a pH 3,0 com cido clordrico, de modo que contenham respectivamente 6 e 24 miliunidades internacionais de glucagon por mI. Paralelamente, fazer duas diluies da amostra, usando o mesmo solvente, a fim de obter concentralfo presumida idntica das diluies do padro. No mesmo horrio, em dois dias consecutivos, injetar nos coelhos, subcutaneamente, I ml de cada uma das quatro diluies, confornle o planejamento duplo cruzado a seguir: 2~ irljeo 1 2 1 2 diluio diluio diluio diluio da da do do amostra 2 amostra 1 padro 2 padro 1

Grupo 1

2
3 4

padro padro amostra amostra

Coletar a amostra sangnea pela veia marginal da orelha de cada coelho aos vinte e aos sessenta minutos aps a injeo. Deterrnirlar a concentrao de glicose atravs de mtodo adequado, como o descrito no mtodo C do ensaio biolgico de

insulina (V.S.2.3). A partir dos resultados, calcular a potncia da substncia que est sendo exarnirlada e seus limites de confiana, atravs de mtodo estatstico descrito na seo VI.S.

Determina-se a potncia da heparina comparando a concentrao necessria para inibir a coagulao do plasma citratado de ovelha, recal cificado. com a da preparao padro de heparina necessria para produzir o mesmo efeito por mtodo de ensaio adequado.

Preparao padro
Empregar o quarto padro internacional de heparina suna. estabelecido em 1983, que consiste do sal sdico do princpio ativo purificado, isolado da mucosa intestinal suna, liofilizado (disponvel em ampolas de 1780 unidades). Pode ser utilizada outra preparao adequada, cuja potncia tenha sido determinada em relao ao padro internacional.

na proporo de 1 mI para cada 19 mI de sangue. Misturar, imediatamente, por leve agitao e inverso do frasco. A seguir, centrifugar o sangue e reunir todo o plasma no mesmo recipiente. Retirar 1 ml deste plasma e transferir para tubo de ensaio. Adicionar 0,2 mI de cloreto de clcio 1% (p/V) e homogeneizar trs vezes por inverso leve do tubo. Colocar em banho-maria a 37C. Considerar o plasma adequado se houver a formao de cogulo slido em at 5 minutos. Armazenar o lote de plasma em frascos contendo, no mximo, 100 mI cada um e congelar. Evitar o descongelamento parcial antes da utilizao. Para o ensaio, descongelar o plasma em banho-maria temperatura no superior a 37C e flltrar em gaze.

Procedimento
Usar dez tubos de ensaio de 13 x 100 mm meticulosamente limpos. Adicionar volumes decrescentes da dilui'o padr'o de modo que a dose maior no exceda 0,80 ml e que correspondam a sries geomtricas, nas quais cada passo seja aproximadamente 5% menor do que o anterior. Adicionar, a cada tubo, cloreto de sdio 0,9% (p/V) suficiente para completar 0,80 mI. Adicionar 1 ml de plasma a todos os tubos. A seguir, juntar 0,20 ml de cloreto de clcio 1% (p/V) e anotar a hora. Tampar cada tubo e homogeneizar, inver tendo trs vezes de tal maneira que toda a supero fcie interna seja umedecida. Colocar em banhomaria a 37C. Similarmente, fazer a srie usando a soluo da amostra de heparina. Completar todo o processo de preparao e mistura dos tubos da soluo padrllo e amostra no perodo de 20 minutos aps a adio do plasma. Uma hora, exatamente marcada, aps a adio do cloreto de clcio 1% (P/V) determinar, por observao, a extenso do cogulo em cada tubo, identificando trs graus (0,25, 0,50, 075) entre o zero (0,00) e a coagulao total (l,00). Se a srie no apresentar dois tubos com graduallo acima de 0,50 e dois tubos abaixo de 0,50, repetir o ensaio usando solues do padro e da amostra com concen trao modificada. A partir dos resultados, calcular a potncia da substncia que est sendo examinada e seus limites de confiana, atravs de mtodo estatstico descrito na seo VI.6.

Soluo padro
Dissolver o contedo da ampola de heparina padro em soluo de cloreto de sdio 0,9% (P/v) de modo a obter soluo de concentrao de 3 unidades internacionais por ml. Conservar sob refrigerao evitando o congelamento.

Ensaio preliminar
Determinar, se necessrio, atravs de ensaio preliminar, a concentrao mnima aproximada de heparina que, presente em 0,80 mI de cloreto de sdio 0,9% (P/v), inibe a coagulao de 1 mI de plasma na presena de 0,2 ml de cloreto de clcio 1% (P/V), aps 1 hora em banho-maria a 37C. Esta concentrao, usualmente, est entre 0,5 e 3 unidades internacionais. Para o ensaio, preparar uma diluio do padro com a concentrao determinada em ensaio preliminar.

Soluo da amostra
Dissolver a amostra em cloreto de sdio 0,9% (p/V) de modo a obter soluo com potncia presumida da soluo padro. Preferencialmente, realizar ensaio preliminar.

Plasme
Coletar sangue de ovelha diretamente no frasco que contm soluo de citrato de sdio 8% (P/V),

Procedimento Amostra

Dissolver em gua quantidade suficiente e exatamente pesada de sulfato de protarnina, para obter soluio contendo 1,0 mg por rnl (base livre).
Soluo de heparina

No dia do ensaio preparar solu'o de heparina, em soluo fisiolgica, de modo a obter, respectivamente, potnca de 90 ou 115 unidades interna cionais por rnl, conforme origem da mesma, tecido pulmonar ou mucosa intestinal.
Plasma

Empregar o plasma nas condies descritas no ensaio biolgico de heparina.

Soluo de tromboplastina-elcio

Dissolver, em soluo de cloreto de clcio 2% (p/V), quantidade de tromboplastina determinada, se necessrio, atravs de ensaio preliminar que, em aproximadamente 35 segundos, coagula soluo com volumes iguais de plasma e mistura de 4 volumes da soluo de cloreto de sdio 0,9% e I volume da soluo tromboplastina-clcio.

Usar tubos de ensaio de 13 x 100 mm meticu losamente limpos. Em 10 tubos, colocar 2,5 rnl de plasma. Colocar os tubos em banho-maria a 37 c 0,2 c e em nove deles adicionar 0,5 ml da amdstra. No dcimo tubo, que servir como controle, pipetar 2 rnl de cloreto de sdio 0,9% (p/V) e 0,5 ml da solu[o de tromboplastina-clcio. Homogeneizar por dispositivo adequado e registrar o tempo de coagulao, isto , o perodo entre ad'o da solu'o de tromboplastina-clcio e a forma'o de fibras de fibrina. :e o tempo normal de coagulao do plasma. Pipetar, respectivamente, para os nove tubos restantes, volumes em rnl de solu'o de heparina: 0,43,0,45,0,47,0,49,0,50, 0,51, 0,53, 0,55 e 0,57. Adicionar cloreto de sdio 0,9% (p/V) para completar 4,5 mI. Tomando os tubos aleatoriamente, adicionar 0,5 ml da soluo de tromboplastina-clcio e determinar o tempo de coagulao individual do modo descrito para o tubo controle. Calcular a potncia em unidades internacionais de heparina neutralizadas por rog, pela frmula NH/NP, na qual NH o nmero de unidades internacionais de heparina e Np o nmero de mg de sulfato de protamina no tubo seguinte quele em que o tempo de coagulao , no mnmo, 2 segundos maior do que o do controle.

Determina-se a potncia de gonadotrofina srica comparando seu efeito sobre o aumento de peso de ovrios de ratas imaturas com aquele da preparao padro de gonadotrofma srica, por mtodo de ensaio adequado.
Preparao padro

Soluo da amostra

Do modo anteriormente descrito, preparar a amostra de gonadotrofina srica, usando o mesmo solvente, a fim de obter as trs diluies da amostra com potncia presumida idntica das diluies do padro.

Empregar o segundo padro internacional de gonadotrofma srica eqina para avaliao biol- Merooo PROPOSTO gica, estabelecido em 1966, que consiste em Selecionar ratas imaturas de 21 a 24 dias de princpio ativo extrado de soro de guasprenhes, idade e com variao de peso no superior a 10 g. liofilizado, com lactose (fornecido em ampolas Distribuir os animais ao acaso, em seis lotes contendo 1600 unidades). Pode ser utilizada iguais, cada qual com sis a dez ratos. Identioutra preparao adequada, cuja potncia tenha ficar cada lote designando-os,respectivamente, para sido determinada em relao ao padro intercada uma das trs diluies do padrllo e da amostra. nacional. Manter os animais em condies uniformes de gua, alimentallo, temperatura e iluminallo. Soluo padro Efetuar, em cada rata, seis administraes de Dissolver o contedo total da ampola da 0,20 mI, subcutaneamente, na rea dorsal, com a preparao padro de gonadotrofma srica em respectiva soluo. Injetar os animais, na tarde do tampo albumina-fosfato pH 7,2 de modo a obter primeiro dia, manh, meio-dia e tarde do segundo soluo com concentrao de 100 lUlidades dia e na manh e tarde do terceiro dia. No sexto internacionais de gonadotrofma srica por ml. dia, sacrificar cada rata, retirar os ovrios, isolar Com o mesmo solvente, preparar trs diluies da gordura e trompas de Falpio e pesar imediado padro de tal forma que a menor dose produza tamente. Registrar o peso combinado dos ovrios resposta positiva, a maior no produza resposta de cada rata. mxima e, alm disso, as trs doses estejam em A partir dos resultados, calcular a potncia da srie geomtrica como 1:1,2:1,44. Fazer curva substncia que est sendo examinada e seus dose-resposta a fim de selecionar as doses de limites de confiana, atravs de mtodo estatstico descrito na seo VI.5. acordo com a sensibilidadeda colnia de animais.

DeterDna-se a potncia da gonadotrofina corinica, comparando seu efeito sobre o aumento de peso da prstata ventral ou vesculas seminais de ratos imaturos com aquele da preparao padr'o de gonadotrofina corinica por mtodo de ensaio adequado.

tentadas doses entre 0,75 e 3,0 unidades internacionais.

Solues da amostra
Do modo anteriormente descrito, preparar a soluo da amostra de gonadotrofma corinica, usando o mesmo solvente, a fim de obter as trs diluies da amostra com potncia presumida idntica das diluies padro.
MtTOOO PROPOSTO

Preparao padro
Empregar o segundo padr'o internacional de gonadotrofina corinica humana para avaliao biolgica, estabelecido em 1963, que consiste em princpio ativo extrado de urina de mulher grvida e liofilizado com lactose (fornecido em ampolas contendo 5300 lUlidades). Pode ser utilizada outra preparao adequada, cuja potncia tenha sido deterDnada em relao ao padro internacional.

Soluo padro
Dissolver o contedo total da ampola da prepara"o padro de gonadotrofina corinica em tampo albUDna-fosfato pH 7,2, de modo a obter solu"o com a concentra"o de 10 unidades internacionais de gonadotrofma corinica por ml. Com o mesmo solvente, preparar trs diluies do padro de modo que as respostas estejam na zona linear da curva dose-resposta e, alm disso, estejam em srie geomtrica como, por exemplo, I :2:4. Como aproximao inicial, poderiam ser

Selecionar ratos imaturos de, aproximadamente, 21 dias de idade e peso semelhante na faixa de 30 a 40 g. Os animais so distribudos, ao acaso, em seis lotes de, no mnimo, dez ratos. Mant-los em condies uniformes de gua, alimentao, temperatura e ilunna'o. Identificar cada lote designando-os para cada uma das trs diluies do padro e da amostra. Injetar cada rato, subcuta neamente, na rea dorsal, com 0,20 ml da respectiva soluio, durante trs dias consecutivos, aproximadamente no mesmo horrio. No quarto dia, cerca de 24 horas aps a ltima injeo, sacrificar os animais, retirar a prstata ventral ou as vesculas seminais de cada um e pesar imediatamente. Registrar o peso. A partir dos resultados, calcular a potncia da substncia que est sendo exaDnada e seus limites de confiana, atravs de mtodo estatstico descrito na seo VI.5.

Determina-se a potncia da gonadorelina, comparando o efeito estimulante da secreo do hormnio luteinizante da hipfise (avaliado comparando a deple'o de cido asc6rbico ovariano de ratas pseudoprenhes) com aquele da prepara'o padrfo por mtodo de ensaio adequado.

Preparao padro
Empregar a primeira preparao de referncia, estabelecida em 1980, que consiste em resduo liofilizado de soluo com aproximadamente 50 JJ8 de gonadorelina, 2,5 mg de lactose e 0,5 mg de alburnina de plasma humano (fomecida em ampolas contendo 31 unidades). Pode ser utilizada outra prepara'o adequada, cuja potncia tenha sido determinada em relao preparao de referncia.

qual dissolvida em 0,5 rn1 de tampo alburninafosfato pH 7,2. Estabelecer a curva dose-resposta e selecionar trs doses do padro e da amostra que estejam na regio linear. Como aproximao, podem ser tentadas doses de 0,5,1,0 e 2,0 /Jg, de acordo com a sensibilidade da cepa de animais usados. Dissolver as doses em 0,1 ml de tampo albumina-fosfato pH 7,2 contendo gelatina 1% (P/V). Injetar cada rata, subcutaneamente, seis a nove dias ap6s a administrao da gonadotrofina corinica. Trs horas aps a injeo, sacrificar os animais, remover os ovrios, isol-l os de tecidos circunvizinhos e imediatamente pes-Ios. Executar a operao to rapidamente quanto possvel para evitar perda de peso. Tratar os ovrios de cada rata separadamente, como segue. Homogeneizar convenientemente com soluo recente de cido metafosfrico 2,5% (p/V) e ajustar o volume para 10 rn1 com a mesma soluo. Deixar o homogeneizado em repouso durante 30 minutos.

Animais
Selecionar, no mnimo, 56 ratas de aproximadamente 21 dias e peso semelhante na faixa de 30 a 40 g. Mant-Ias em condies uniformes de gua, alimentao, temperatura e iluminao.

Determinao de cido ascrbico

Filtrar os extratos de cido metafosfrico e pipetar 4 rn1 de cada um para tubos de ensaio contendo 4 rn1 da soluo de acetato de indofenol SR. Misturar por agitao e, 30 segundos depois, ler a absorvncia em espectrofotmetro a 520 nm. Calcular a concentrao de cido asc6rbico em mg por 100 g de ovrio, a partir da absorvncia encontrada e da curva padro elaborada do mesmo modo tratando volumes adequados de soluo de cido L-asc6rbico em cido metafosf6rico 2,5 % (p/v). A partir dos resultados, calcular a potncia da substncia que est sendo examinada e seus limites de COnflllDa,atravs de mtodo estatstico descrito na seo VI.5.

Procedimento
Distribuir as ratas, por sorteio, em sete grupos iguais de oito animais. Identificar cada grupo designando-os respectivamente para as trs doses do padro e da amostra. O stimo grupo servir como controle. Injetar todas as ratas, subcutaneamente, no primeiro e terceiro dias can 50 unidades de gonadotrofina serica e no quinto dia com 50 unidades de gonadotrofina corinica, cada

Determina-se a potncia de menotrofma em relao atividade hormonal folculo-estimulante, comparando seu efeito sobre o crescimento e maturafo dos ovrios de ratas imaturas com aquele da preparall'o padrll'o de FSH e LH (ICSH) urinrio humano, por mtodo de ensaio adequado. A potncia em relall'o atividade hormonal luteinizante estimada comparando a depleo do contedo de cido ascrbico ovariano de ratas pseudoprenhes, com aquela da prepara'o padro de FSH e LH (ICSH) urinrio humano, por mtodo de ensaio adequado. Preparaopadro Empregar o primeiro padro internacional de FSH e LH (ICSH) urinrio humano, para avaliafo biolgica, estabelecido em 1974, que consiste em extrato de urina de mulher aps menopausa, liofilizado, com 5 m1 de lactose (disponvel em ampolas contendo 54 unidades de atividade de folitropinae 46 unidades de atividade de lutrofina). Pode ser utilizada outra preparao adequada, cuja potncia tenha sido determinada em relao ao padro internacional.

A partir dos resultados, calcular a potncia da substncia que est sendo examinada e seus limites de confiana, atravs de mtodo estatstico descrito na sefo VI.5. Atividade da lutrofina: LH (/CSH) Selecionar ratas de aproximadamente 21 dias de idade e peso semelhante na faixa de 30 a 40 g. Distribuilas por sorteio, em 6 grupos iguais de, no mnimo, oito ratas. Identificar cada grupo designando-os, respectivamente, para as trs doses do padrll'o e amostra. Injetar os animais, subcutaneamente, no primeiro e terceiro dias com 50 unidades de gonadotrofina srica e no quinto dia com 50 unidades de gonadotrofina corinica, cada qual dissolvida em 0,5 m1 de tampo alburninafosfato pH 7,2. Estabelecer a curva dose-resposta e escolher trs doses do padro e da amostra que estejam na regio linear. Embora dependa da sensibilidade da colnia de animais, como aproximao podem ser tentadas doses de 0,5, 1,0 e 2,0 unidades. Seis a nove dias aps a aplicao da gonadotrofina corinica, dissolver cada dose de menotrofina em 0,5 ml de tampo albumina-fosfato pH 7,2 e injetar intravenosamente em cada grupo de animais. Trs horas aps, sacrificar as ratas, remover os ovrios, isolar de tecidos estranhos e pesar imedia tamente, executando a operao to rapidamente quanto possvel para evitar perda de peso. Tratar os ovrios de cada rata separadamente, como segue. Homogeneizar em solu'o recente de cido metafosfrico 2,5% (p/V) e ajustar a 10 ml com a mesma soluo. Deixar o homogeneizado em repouso durante 30 minutos. Filtrar os extratos de cido metafosfrico e pipetar 4 ml de cada filtrado para tubos de ensaio contendo 4 m1 da soluo de acetato de indofenol SR. Misturar por agita'o e, 30 segundos depois, ler a absorvncia em espectrofotmetro a 520 nm. Galcular a concentra'o de cido ascrbico a partir da absorvncia lida e da curva padr'o preparada tratando, do mesmo modo, volumes adequ,dos da soluo de cido L-ascrbico em cido metafosfrico 2,5% (P/V). Expressar o resultado em mg por 100 g de ovrio. A partir dos resultados; calcular a potncia da substncia que est sendo examinada e seus limites de confiana, atravs de mtodo estatstico descrito na seo VI.5.

Atividade da folitropina: FSH Selecionar ratas de aproximadamente 21 dias e peso semelhante na faixa de 30 a 40 g. DistribuiIas, por sorteio, em 6 grupos iguais de, no mnimo, oito ratas. Identificar cada grupo designando~s, respectivamente, para as trs doses do padro e amostra. Estabelecer a curva dose-resposta e selecionar trs doses do padro e da amostra que estejam na regio linear. Embora dependa da sensibilidade da colnia de animais, como aproximao podem ser tentadas doses de 0,5, 0,71 e 1,0 unidades por injeo. Dissolver cada dose em 0,5 ml de tamp'o albumina-fosfato pH 7,2 contendo 14 unidades de gonadotrofinacorinica. Injetar cada rata, subcutaneamente, na rea dorsa!. Repetir a injeo 24 e 48 horas depois. Cerca de 24 horas aps a ltima injeo, sacrificar as ratas, remover os ovrios e pes-Ios. Registrar o peso de ovrios por rata.

Determinase a potncia de digital, compa rando sua atividade sobre o msculo cardaco de cobaio com aquela da preparao padro por mtodo de ensaio adequado. Preparao padro Empregar o terceiro padro internacional de digital, estabelecido em 1949, que consiste em p seco de folhas de Digitalis purpurea (disponvel em ampolas contendo 2,5 g). Pode ser utilizada outra preparao adequada, cuja potncia tenha sido determinada em relao ao padro internacional. Soluo padro Transferir quantidade exatamente pesada da preparafo padro para ballo volumtrico de 50 mI e adicionar 10 mI de etanol80% (VIV) para cada g de p6. Tampar o ball'o aps untar, levemente, a parte esmerilhada com parafina lquida. Agitar continuamente durante 24horas 2 horas a 25C 5C OU 48 horas a 10 a 20C. Em seguida, centrifugar ou filtrar a mistura, atravs de vidro sinterizado, evitando a evaporao do solvente. Transferir o lquido para recipiente adequado, bem fechado, e manter a temperatura entre -5 e 5C. Usar, no mximo, duran te 1 ms. No dia do ensaio diluir a solulo padrlo em solulo fisiol6gica de modo a obter concentrao padro de digital com 3 a 5 mg por mI. Solu6o da amostra Preparar a amostra de digital da mesma maneira, usando o mesmo solvente a fun de obter soluo

com potncia padro.

presumida

idntica

da soluo

MeTODO PROPOSTO

Selecionar, no mnimo, doze cobaios adultos, sadios, de peso entre 200 e 600 g. Para cada ensaio, o peso mdio dos dois grupos no deve diferir mais de 10% e o animal mais pesado no deve variar mais do que 100 g, em relao ao mais leve. Separar em dois grupos de 6 cobaios cada um, designando-os, respectivamente, para a solu o padro e amostra. Anestesiar o animal com carbamato de etila a 50% (P/V) na dose de 2 mI/kg por via intraperitoneal, dissecar e canular a veia jugular, preparando.a para as administraes intravenosas das solues do padrlo e da amostra. Paralelamente, preparar o animal para a manuteno de respirao artificial. Aleatoriamente, injetar as doses da soluo padrlo ou da amostra, atrav6s da veia jugular, em velocidade lenta e uniforme, como a de 0,5 a 1 ml por minuto. duralo da infuslo pode variar de 20 a 40 minutos, com a duralo mdia dos grupos nlo diferindo em mais de 10%. Continuar a injelo at que ocorra a parada cardaca, observvel atravs de eletrocardiograma ou outro dispositivo adequado. Anotar o volume de extrato administrado como sendo a dose letal. Determinar, para cada animal, a dose letal em rnl por kg de peso corporal e transformar em logaritmo. A partir dos resultados calcular a potncia da substncia que est sendo examinada e seus limites de confiana, atravs de mtodo estatstico descrito na seo VI.4.

Determina-se a potncia da vasopressinacompa rando sua atividade com aquela da preparao padro de argipressina por mtodo de ensaio adequado. Preparao padro Empregar o primeiro padro internachmal de argipressina para avaliao biolgica, estabdecido em 1978, que consiste em argipressina sinttica liofilizada com albumina humana e cido ctrico (disponvel em ampolas que contm 8,20 unida des). Pode ser utilizada outra preparalo adequada, cuja potncia tenha sido determinada em relao ao padrlo internacional. Soluo padro Dissolver o contedo total da ampola da preparao padro em cloreto de sdio 0,9% (P/V), de modo a obter soluo de 2,0 unidades interna cionais por ml. De acordo com a sensibilidade do animal, sero necessriasdiluies posteriores, de modo que o volume injetado nlo seja inferior a 0,1 ml nem superior a 0,5 ml. Soluo amostra Preparar a amostra de vasopressina, do modo anteriormente descrito, usando o mesmo solvente, a fun de que a solulo resultante tenha potncia presumida idntica da soluo padro.

de etila 5% (pjV) favorvel manuteno de presso arterial uniforme. Quarenta e cinco a sessenta minutos depois, fixar o rato sobre a mesa de cirurgia. Dissecar a veia jugular ou femural, inserir cnula adequada com, aproximadamente, 1 mm de dimetro externo e prepar-Ia para a administrao intravenosa. Administrar 200 uni dades de heparina, dissolvida em soluo fisiolgica para cada 100 g de peso corporal. Dissecar a artria cartida e conectar a manmetro de mercrio de 2 a 3 mm de dimetro interno, ou outro sistema adequado para obter registro contnuo da presso arterial. Manter o animal aquecido durante a cirurgia, bem como durante o ensaio. Determinao da sensibilidade do animal Determinar, por experimentao, a dose de soluo padro que, injetada intravenosamente, a intervalos regulares de 12 a 15 minutos, produz elevao da presso arterial entre 2,7 a 9,3 kPa (20 e 70 mm de mercrio). A partir desta obser vao, selecionar duas es da soluo padrlo que estejam na razo de aproximadamente 2 para 3 ou de 3 para 5. Aps o teste preliminar, selecio nar duas doses da amostra que estejam na mesma razo e correspondam, em atividade, quelas doses selecionadas da preparao padro. Como referncia inicial, podem ser tentadas doses de 6 e 10 miliunidades. Procedimento Injetar as duas doses selecionadas da solulo padro e da amostr~ em seqncia aleatria, a intervalos uniformes ae 12 a 15 minutos, registrando pelo menos quatro respostas para cada dose. Aps cada injelo, lavar a cnula com 0,2 ml de soluo fisiolgica. Ao invs desta seqncia aleatria pode-se usar um planejamento de blocos ao acasopara eliminar a influncia de variaes na sensibilidade do animal sobre o resultado do ensaio. A partir dos resultados, calcular a potncia da substncia que est sendo examinada e seus limites de confiana, atravs de mtodo estatstico descrito na seco VI.5.

Preparao do animal Aproximadamente 18 horas antes do ensaio, selecionar um rato pesando ao redor de 300 g. Injetar, intravenosamente, 10 ml por kg de peso corporal, uma soluo preparada do seguinte modo: dissolver 10 mg de cloridrato de fenoxihen zamina em cloreto de sdio 0,9% (p/V), adicionar 0,1 ml de lcool, acidificar com I gota de cido clordrico e diluir com cloreto de sdio 0,9% (p/V) at completar 10 ml. No dia do ensaio, anes tesiar o rato, usando como anestsico carbamato

Determina-se a potncia da lipressina comparando sua atividade com aquela da preparao padro por mtodo de ensaio adequado.
Preparao padro

(disponvel em ampolas contendo 7,7 unidades). Pode ser utilizada outra preparao adequada, cuja potncia tenha sido determinada em relao ao padro internacional.
Mt!TODO PROPOSTO

Empregar o primeiro padro internacional de lipressina, estabelecido em 1978, que consiste em Iipressina liofilizada, com albumina e cido ctrico

Usa-se o mtodo descrito para ensaio biolgico de vasopressina.

Determina-se a potncia da feUpreaina compa rando sua atividade com aquela da preparao padrlo de felipreaina por mtodo de ensaio adequado.
Preparao padro de referlncia

fisiolgica, para obter soluo de 0,01 unidade por ml.

Soluo da amostra

Empregar preparao padrlo de referncia de felipreaina.

Soluo padro

Preparar a amostra de felipressina do mesmo modo, usando o mesmo solvente, a ftm de que a soluo resultante tenha a potncia presumida idntica da soluo padrlo.
MeroDO PROPOSTO

Usa-se o mtodo descrito para ensaio biolgico Dissolver quantidade calculada, exatamente de vuopressina. pesada, da preparao padrlo em soluio fisioObservar, porm, 'que na determinao da lgica, de modo a obter soluo de 0,1 unidade sensibilidade do animal podem ser tentadas, como por ml. No dia do ensaio fazer diluio em solulo referncia inicial, doses de 2,0 a 5,0 nilliunidades.

Determina-se a potncia da somatotrofina comparando seu efeito sobre o aumento de peso corporal, ou da espessura da cartilagem de conjugao da tIbia de ratas hipofisectomizadas, com aquele da preparao padrllo de somatotrofina por mtodo de ensaio adequado.

M~TODO A: AUMENTO DE PESO CORPORAL

Preparao padro

Empregar o primeiro padro internacional de somatotrofina para avaliao biolgica, estabele cido em 1982, que consiste em somatotrofma pUrificada,liofilizada, com lactose, glicina, manitol e bicarbonato de s6dio (disponvel em ampolas contendo 4,4 unidades internacionais). Pode ser utilizada outra preparao, cuja potncia tenha sido determinada em rela'o ao padro inter nacional.

Injetar 0,5 ml da respectiva soluo, subcuta neamente, durante nove dias consecutivos, no mesmo horrio. Acompanhar a variao individual, pesando as ratas durante os 10 dias de durao do ensaio. No dcimo dia, pesar os animais, sacrific-los e examinar macroscopicamente se a hipofisectomia foi completa. Desprezar os animais que apresentarem algum vestgio do rgo. Registrar aumento de peso corporal individual. A partir dos resultados, calcular a potncia da substncia que est sendo examinada e seus limites de confiana, atravs de mtodo estatstico descrito na se'o VI.5.
M~TOOO B: M~TODO DA l1BIA

M~TODOS PROPOSTOS

Selecionar, no mnimo, sessenta ratas, da mesma linhagem, de 26 a 30 dias de idade e peso aproximadamente igual. Duas a trs semanas antes do ensaio, colocar os animais em condies uniformes de gua, alimenta'o, temperatura e iluminao. Para o ensaio, pesar as ratas e realizar a hpofisectomia. Aps a cirurgia, mant-Ias temperatura constante entre 25 e 27 DC e controlar a estabilidade do peso durante, no mnimo, 14 dias. Desprezar aquelas que apresentarem flutuao ponderal maior que 3% nos ltimos 10 dias. Dividir aleatoriamente em quatro grupos iguais de, no mnimo, oito ratas cada um, designando-os, respectivamente, para as duas doses do padro e da amostra. Preparar duas diluies do padr'o em bicarbonato de sdio 1,4% (P/V), de modo que estejam em srie geomtrica como 2: 4. Como aproximao inicial podem ser tentadas doses entre 40 e 160 miliunidades internacionais por ml. Paralelamente, fazer duas diluies da amostra, usando o mesmo solvente, a fim de obter concentraes presumidas idnticas das diluies do padro.

Injetar 0,5 ml da respectiva soluo, subcutaneamente, durante quatro dias consecutivos. Vinte e quatro horas aps a ltima injello, sacri ficar os animais e examinar se a hipofisectomia foi completa. Desprezar os animais que apresentarem algum vestgio do rgo. Retirar as ttbias e isollas dos tecidos circunvizinhos. Cortar com lmina fina e afiada a parte proximal dos ossos, em sentido longitudinal, corando-os com nitrato de prata da seguinte maneira: lavar os fragmentos dos ossos durante 10 minutos com gua, por 10 minutos com acetona e 10 minutos novamente com gua. Transferir para soluo recente de nitrato de prata 2% (P/V). Dois minutos depois, lavar com gua, eXllondo-os ao mesmo tempo luz intensa, at que fodas as pores calcificadas apresentem colorao marrom-escura. Medir a espessura da cartilagem epifisria, usando micros cpio equipado com micrmetro ocular. Efetuar 10 medidas distribudas diagonalmente ao longo de todo o comprimento da ep fIse de cada fragmento. Registrar como resposta o aumento mdio da espessura da cartilagem epifisria das ttbias de cada rata. A partir dos resultados, calcular a potncia da substncia que est sendo examinada e seus limites de confiana, atravs de mtodo estatstico descrito na seo VI.5.

Soluo 2 (tampo fosfato de potssio 0,1 M, estril, pH 8,0) Dissolver 16,73 g de fosfato de potssio dibsico Unidade Internacional e Preparao Padro e 0,523 g de fosfato de potssio monobsico em Unidade Internacional a atividade especfica gua suficiente para perfazer 1000 ml. Esterilizar contida em uma quantidade (massa) de Padro a soluo por 20 minutos em autoclave a 121 De Biolgico Internacional ou Preparao de Refe- e, se necessrio, ajustar o pH para 7,98,1 com rncia Biolgica Internacional. A quantidade cido fosf6rico 6 M ou hidrxido de potssio equivalente de unidades para uso internacional 10M estabelecida, sempre que necessrio, pela Organi- Soluio 3 (tampo fosfato de potssio 0,1 M, zao Mundial da Sade. estril, pH 4,5) Substncias Qumicas de Referncia Interna Dissolver 13,6 g de fosfato de potssio monob cional nio apresentam unidades de atividade sico em gua suficiente para perfazer 1000 m1. biolgica defmidas. Quando so necessrios Esterilizar a soluo por 20 minutos em autoclave ensaios biolgicos, a potncia desses produtos a 121 De e, se necessrio, ajustar o pH para 4,4expressa em termos de massa equivalente da 4,5 com cido fosf6rico 6 M ou hidr6xido de substncia pura. potssio 10M O nmero de unidades ou a massa equivalente Soluo 4 (tampo fosfato de potssio a 10%, da substncia pura, em microgramas, contidos em I mg de substncia antibitica, est indicado na estril, pH 6,0) monografia de cada um dos produtos inscritos Dissolver 20,0 g de fosfato de potssio dibsico e 80,0 g de fosfato de potssio monobsico em gua na Farmacopia. Para os ensaiosmicrobiolgicosda Farmacopia, suficiente para perfazer 1000 rnl. Esterilizar a Preparaes Padro (padres Primrios) so os soluo por 20 minutos em autoc1ave a 121 De Padres Internacionais e Preparaes de Referncia e, se necessrio, ajustar o pH 5,9-6,1 com cido estabelecidos pela Organizao Mundial da Sade fosfrico 6M ou hidrxido de potssio 10M. e pela Farmacopia Europia ou os Padres e Soluo 5 (tampo fosfato de potssio 0,2 M, Preparaes de Referncia brasileiros. Outras estril, pH 10,5) preparaes adequadas, de uso internacional Dissolver 35,0 g de fosfato de potssio dibsico corrente, nas quais a potncia tenha sido deter e 2,0 mI de hidrxido de potssio 10M em gua minada em relao s preparaes padro da suficiente para perfazer 1000 mI. Esterilizar a Organizao Mundial da Sade, possuem valor soluo por 20 minutos em autoclave a 121 De legalidntico. e, se necessrio, ajustar o pH para 10,4.10,6 com Recomenda-se que sejam preparados e empre- cido fosfrico 6 M ou hidrxido de potssio gados padres de trabalho (secundrios); todavia, 10M imprescindvel que a potncia tenha sido deter Soluo 6 (cido clordrico metanWco 0,1 M) minada por nmero adequado de ensaios compa- Diluir 10,0 mI de cido clordrico 1,0M em rativos em relao a padro primrio relevante, metanol suficiente para perfazer 1000 ml. validada por anlise estatstica apropriada e que os dados e resultados sejam arquivados disposi. Soluo 7 (soluo de lcool isoproplico a 80%) io da fiscalizao competente por prazo idntico Diluir 800 mI de lcool isoproplico em gua suficiente para perfazer 1000 ml. ao da validadedos produtos ensaiados. Para o ensaio de lotes de substncias antibi- Soluo 8 (tampo fosfato de potssio 0,1 M, ticas, para as quais existam Preparaes Padro estril, pH 7,0) , nacionais, referendadas por organizaes interna- Dissolver 13,6 g de fosfato de potssio dibsico cionais, obrigatrio o uso dessaspreparaes. e 4,0 g de fosfato de potssio monobsico em gua suficiente para perfazer 1000 mI. Esterilizar Solu#1S a soluo por 20 minutos em autoclave a 121 De e, se necessrio, ajustar o pH para 6,8.7,2 com Soluio 1 (tampo fosfato de potssio a 1%, cidofosfrico 6M ou hidrxido de potssio 10M estril, pH 6,0) Dissolver 2,0 g de fosfato de potssio dibsico e Meios de cultura 8,0 g de fCl!lfato potssio monobsico em gua de Podem ser empregados meios de cultura desi suficiente para perfazer 1000 ml. Esterilizar a soluo por 20 minutos em autoclave a 121 De dratados, disponveis no comrcio que, quando
F. BRAS. IV, 1988

Determina-se a potncia (atividade) de um antibitico comparando a dose que inibe o cresci mento de microrganismo sensvel com a dose da preparao padro do antibitico que produz inibio similar.

e, se necessrio, ajustar o pH para 5,9-6,1 com cido fosfrico 6 M ou hidr6xido de potssio

10M

reconstitudos com gua destilada, conforme as especificaes do fabricante, possuam a mesma composio que o meio confeccionado com os ingredientes individualmente indicados para sua obteno. Meiode cultura n~ 1 Dissolver 6,0 g de peptona seca, 4,0 g de casena de digesto pancretica. 3,0 g de extrato de levedura, 1,0 g de dextrose e 15,0 g de gar em lJia suficiente para perfazer 1000 mI. O pH, aps esterilizao, dever ser 6,6. Meio de cultura n~ 2 Dissolver 6,0 g de peptona seca, 3,0 g de extrato de levedura, 1,5 g de extrato de carne e 15,0 g de gar em lJia suficiente para perfazer 1000 mI. O pH, aps esrerilizao, dever ser 6,6. Meio de Cultura n~ 3 Dissolver 5,0 g de peptona seca, 1,5 g de extrato de levedura, 1,5 g de extrato de carne, 2,5 g de cloreto de sdio, 1,0 g de dextrose, 3,68 g de fosfato de potssio dibsico e 1,32 g de fosfato de potssio monobsico, em gua suficiente para perfazer 1000 mI. O pH, aps esterilizao, deverser 7,0. Meiode cultura n~ 4 Dissolver 6,0 g de peptona seca, 3,0 g de extrato de levedura, 1,5 g de extrato de carne, 1,0 g de D-glicosee 15,0 g de gar em gua suficiente para perfazer 1000 mI. O pH, aps esteriliza'o,dever ser 6,6. Meio de cultura n~ 5 Usar o meio de cultura ne;> porm, o pH, aps 2, esterilizao, dever ser 7,8.

Meio de cultura n~ 10 Usar o meio de cultura ne;> , adicionando, porm, 9 ao invs de 20,0 g, 12,0 g de gar e 10,0 mI de polissorbato 80 (esse ltimo adicionado aps aquecer o meio para dissolver o gar, diluindo, imediatamente, com gua para perfazer 1000 mI). O pH, aps esterilizao, dever ser 7,3. Meiode cultura n~ 11 Usar o meio de cultura ne;> mas o pH, apsesteri1, /izao, dever ser ajustado para 8,0. Meio de cultura n~ 12 Preparar como o meio de cultura n'? 1, adicio nando, porm, 300 mg de sulfato de mangans hidratado (MnSO. H2 O) para cada 1000 mI de meio. Meio de cultura n~ 13 Dissolver 10,0 g de peptona seca e 20,0 g de dextrose em gua suficiente para perfazer 1000 mI. O pH, aps esterilizao, dever ser 5,6. Meiode cultura n~ 14 Dissolver 10,0 g de glicerol, 10,6 g de peptona seca, 10,6 g de extrato de carne e 3,0 g de cloreto de s6dio em gua suficiente para perfazer 1000 mI. O pH, aps esterilizao, dever ser 7,0. Meio de cultura n~ 15 Preparar como o meio de cultura n9 14, adicionando, porm, 17,0 g de gar para cada 1000 mI de meio. Meio de cultura n~ 16 Dissolver 15,0 g de casena de digesto pancretica, 5,0 g de soja de digesto papanica, 5,0 g de cloreto de sdio, e 15,0 g de gar em gua sun ciente para perfazer 1000 mI. O pH, aps esteri liza'o,deverser 7,3.

Meiode cultura n~ 6 Dissolver 40,0 g de dextrose e 10,0 g de peptona Meiode cultura n~ 17 seca em gua suficiente para perfazer 1000 mI. Dissolver 17,0 g de casena de digesto pancretica, 3,0 g de peptona de soja, 2,5 g de dextrose. O pH, aps esterilizao, dever ser 5,6. 5,0 g de cloreto de sdio e 2,5 g de fosfato de Meiode cultura n~ 7 potssio dibsico em gua suficiente para perfazer Usar o meio de cultura ne;> esterilizado e res- 1000 mI. O pH, aps esteriliza o, dever ser 7,3. 1, friado a 50 oCo Preparar soluo aquosa contendo 10 mg de neolIcinapor mI e esterilizar por ftltra- Meio de cultura n~ 18 o em membrana com porosidade de 0,22 IJID. Usar o meio de cultura n9 11, mas, aps aquecer Adicionar, assepticamente, soluo estril de a soluo para diss6lver os ingredientes, adicionar sulfato de neolIcina, para obter concentra'o 20,0 mI de polissorbato 80. O pH, aps esterilifmal com potncia de 100 #lg de neolIcinapor zao, dever ser 8,0. mI de meio. Meio de cultura n~ 19 Meio de cultura n~ 8 Dissolver 9,4 g de peptona seca, 4,7 g de extrato Usar o meio de cultura ne;> , porm, o pH, aps de levedura, 2,4 g de extrato de carne e 15,0 g 2 de cloreto de sdio, 10,0 g de dextrose e 23,S g de esterilizalo, dever ser ajustado para 5,8-6,0. gar em gua suficiente para perfazer 1000 mI. Meio de cultura n~ 9 O pH, aps esterilizao, dever ser 6,1. Dissolver 17,0 g de casena de digesto pancretica, 3,0 g de soja de digesto papanica, 5,0 g Meiode cultura n~ 20 de cloreto de sdio, 2,5 g de fosfato de potssio Dissolver 40,0 I de dextrose, 10,0 g de peptona dibsico, 2,5 g de dextrose e 20,0 g de gar em (seca, 15,0 g de gar e 0,05 g de clorafenicoI gua suficiente para perfazer 1000 mI. O pH, (em potncia) em gua suficiente para perfazer 1000 mI. O pH, aps esterilizao, dever ser 5,6. aps esterilizao, dever ser 7,3.

cultura resultante na superfcie do meio com 50 ml de soluo fisiolgicaestril. Padronizao da suspenso Diluir a suspenso preparada, com soluo ftsiolgica estril, de modo a obter a transmitnia de 25% no comprimento de onda de 580 nm, empregando colormetro adequado e tubos de ensaio com 13 mm de dimetro como cuba de absoro. Determinar a quantidade de suspenso a ser adicionada a cada 100 mI de gar ou caldo nutriente para produzir zonas de inibilo claras e definidas ou relao satisfatria dose-resposta no mtodo turbidimtrico. O inculo dos microrganismos submetidos ao procedimento I pode ser estocado temperatura de 4C, respectivamente, pelos seguintes perodos: 1 semana, 2 semanas, 2 semaPreparao do inoculo nas, 2 semanas, 6 m"ses, 1 semana, 2 semanas e 2 semanas. MicrorJUsmosrecomendados - Staphylococcus aureus (A TCC 6538 P) Miaococcus j7avus. Efetuar como indicado no - Miaococcusluteus (ATCC 7468) Procedimento 1. Empregar, entretanto, no tubo - Miaococcusluteus (ATCC 9341) com meio inclinado e no frasco de Roux, meio Staphylococcus epidermidis (ATCC 12228) de cultura n~ 7, incubando o frasco por perodo - Saccharomyces cerevisiae (ATCC 9763) de 48 horas. A suspenso pode ser estocada por duas semanas, temperatura no superior a 4C. - Bordetella bronchiseptica (ATCC4617) - Bacillus cereus varomycoides (ATCC 11778) Procedimento 2 - Bacillus subtilis (ATCC 6633) Bacillus subtilis. Efetuar como indicado no - Klebsiella pneumoniae (ATCC 10031) Procedimento 1. Na preparao da suspenso, - Escherichia coli (ATCC 10536) porm, empregar, no frasco de Roux, o meio de Streptococcusfaecium (ATCC 10541) cultura n~ 12, cujo perodo de incubao de Micrococcus luteus (ATCC 10240) 5 dias. Na padronizalo da suspenslo proceder Microsporum gypseum (ATCC 14683) a choque trmico e padronizar a suspenso corno Saccharomyces cerevisiae (ATCC 2601) segue: ~ntrifugar e decantar o lquido sobreMiaococcus j7avus resistente neomicina nadante. Ressuspender o sedimento com 50 a (ATCC 14452) 70 mI de soluo fisiolgica estril e aquecer Pseudomonas aeruginosa (ATCC 25619) a suspenso por 30 minutos a 70C. Executar Mycobacterium smegmatis (ATCC607) testes em placas, para se assegurar da viabilidade dos esporos e determinar.a quantidade dos que Com a finalidade de indicalo, foram arrolados devero ser adicionados a cada 100 mI de meio, microrganismos dispmveis na ATCC. Os mesmos para obter zonas de inibio adequadas. A susgrmens podem tambm ser obtidos de outras penso pode ser estocada, por 6 meses, em tempefontes: INCQ8, CIP, NCIB, NCPF, NCTC, NCYC ratura no superi01 a 4 C. e 881. A correspondncia entre os microrganismos Procedimento 3 e os endereos das entidades fornecedoras dos Bacillus cereus. Efetuar como indicado no Proce mesmos encontram-se indicadas na seo XlII.5. dimento 1. Entretanto, incubar o frasco de Roux Meio de cultura n~ 21 Usar o meio de cultura n)20, esterilizado e resfriado a 50C. Adicionar, assepticamente, 2,0 mI de soluo estril de cicloeximida Pl!Ia cada 100 mI de gar fundido. Preparar solulo contendo 10,0 mg de cicloeximida por mI, em gua, e esterilizar, por flltralo, em membrana com porosidade de 0,22 ~m. Meiode cultura n~ 22 Dissolver 15,0 g de peptona seca, 5,0 g de farinha de sc!a de digesto papanica, 4,0 g de cloreto de sdio, 0,2 g de sulfito de sdio, 0,7 g de L-cistina, 5,5 g de dextrose e 15,0 g de gar, em gua suficiente para perfazer 1000 mI. O pH, aps esterilizao, dever ser 7,0. Procedimento 1 Staphylococcus aureus, Micrococcus lu teus, Staphylococcus epidermidis, Bordetella bronchiseptica, Bacillus subtilis, Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli e Pseudomonas aeruginosa. Preparao da suspenso Manter o microrganismo em tubos contendo 10ml do meio de cultura nQ1 inclinado. Incubar o tubo a 3235C, por 24 horas. Empregando 3 mI de soluo fisiolgica estril, transferir a cultura crescida sobre o meio do tubo inclinado para maior superfcie de gar, como em frasco de Roux contendo 250 mI do meio de cultura n~ 1. Incubar o frasco de Roux a 32-35 oCo Lavar a por uma semana. Na padronizao da suspenso, proceder a choque trmico e padronizar a sus penso como se~e: aquecer a suspenso por 30 minutos, a 80 C. Lavar trs vezes a suspenso de esporos com 20 a 25 mI de gua estril. Ressuspender os srmens em 50 a 70 mI de gua estril e promover novo choque trmico por 30 minutos a 70C. Executar testes em placas para se asse gurar da viabilidade dos esporos e determinar a quantidade dos que devero ser adicionados a cada 100 mI de gar, para obter zonas de inibio adequadas. A suspenslo pode ser estocada, por 6 meses, temperatura no superior a 4C. Procedimento 4 Miaosporum gypseum. Incubar o microrganismo,

por 6 a 8 semanas, a 25C. em frascos de Erlen meyer de 31, contendo 200 ml de meio de cultura nC? 6 Verificar o crescimento por esporulao. Quando a esporulao for 80% ou mais, recolher os condios da camada micelial com esptula estril ou outro instrumento adequado. Os con dios esto na parte superior da camada flutuante. Manter os condios em 50 ml de soluo fisiolgica. Determinar, experimentalmente, a quantidade de condios para o ensaio. A suspenso pode ser estocada, por dois meses, temperatura no superior a 4C. Procedimento S Streptococcus {aecium. Manter o microrganismo em quantidades de 100 ml de meio de cultura nt? 3. Para realizar o ensaio, preparar subcultura, transferindo, com ala de platina, microrganismos da cultura estoque para o mesmo caldo nutriente e incubar, por 16 a 18 horas, a 37C. Determinar, experimentalmente, a quantidade de grmens para o ensaio. Manter essa cultura sob refrigerao por prazo no superior a 24 horas. Procedimento 6 Saccharomyces cerevisiae. (ATCC 9763). Manter o microrganismo em tubos contendo 10 ml de meio de cultura nt? 19 inclinado. Incubar os tubos a 32-35 c, durante 24 horas. Inocular 100 ml de caldo nutriente - meio de cultura nt? 13 - e incubar, por 16 a 18 horas, a 37C. Padronizar a suspenso conforme descrito no Procedimento 1. A suspenso pode ser estocada, por 4 semanas, temperatura no superior a 4C. Procedimento 7 Saccharomyces cerevisiae. (ATCC 9763 e ATCC 2601 ). Seguir o indicado no Procedimento 1. Incubar, porm, o tubo inclinado e o frasco de Roux, com o meio de cultura n!J 19, a 30C, o ltimo por perodo de 48 horas. A suspenso pode ser estocada, por 4 semanas, temperatura no superior a 4C. Procedimento 8 Mycobacterium smegmatis. Manter o microrganismo em tubos com meio inclinado contendo 10 ml do meio de cultura nt? 16 e efetuar repiques semanalmente. Incubar o tubo a 37C, por 48 horas. Usando 3 ml de soluo fisiolgica estril, transferir as culturas que cresceram no gar inclinado para frasco de erlenmeyer de 500 ml, contendo 100 ml de meio de cultura nt? 14 e 50 g de prolas de vidro. Agitar a cultura por rotao velocidade de 130 ciclos por minuto, num raio de 3,5 cm e temperatura de 27C, por perodo de cinco dias. Determinar a quantidade de suspenso a ser adicionada a cada 100 ml de gar por intermdio de ensaio em placas. A suspenso pode ser estocada, por duas semanas, temperatura no superior a 4C.

Usar para dessecao dos padres o proCedimento indicado nos Mtodos de Ensaio Microbiolgico e, para as amostras, o mtodo especificado para cada antibitico na respectiva monografia. Mtodo 1 Em ambiente de baixa umidade relativa, pulverizar, caso necessrio, a amostra para obter p fmo. Empregar na preparao da amostra quatro unidades, quando forem analisadas formas farmacuticas como comprimidos, cpsulas, drgeas ou pastilhas. Transferir aproximadamente 100 mg de amostra para pesa-filtro tarado provido de tampa esmerilhada. Pesar o frasco e coloc-I o em estufa sob presso reduzida, inclinando a tampa sobre a boca do frasco par assegurar que perma nea aberto durante a dessecao. Dessecar a 60C, sob presso de 0,67 kPa ou menos, durante trs horas. Concluido o processo, introduzir ar seco na estufa, submetendo-o a agente dessecante como cido sulfrico ou slica-gel. Repor a tampa e colocar o pesa-filtro em dessecador contendo agente dessecante como pentxido de fsforo ou sl1ica-gel. Deixar esfriar temperatura ambiente e pesar, calculando a perda porcentual de massa da amostra. Mtodo 2 Proceder conforme o Mtodo 1. Empregar, porm, pesa-fIltro tarado provido de tampa com tubo capilal de dimetro interno da ordem de 0,20 a 0,25 mm, e dessecar sem remover a tampa. Mtodo 3 Proceder conforme o Mtodo 1. Dessecar, porm, a amostra alIO c, sob presso de 10,67 kPa ou menos, durante trs horas. Mtodo 4 Proceder conforme o Mtodo 1. Dessecar, porm, a amostra a 40C, sob presso de 10,67 kPa ou menos, durante duas horas. Mtodo S Proceder conforme o Mtodo 1. Dessecar, porm, a amostra a 100 c, sob presso de 5 mm de Hg ou menos, durante quatro horas. Mtodo 6 Proceder conforme o Mtodo 1. Dessecar, porm, a amostra a 40 c, sob presso de 10,67 kPa ou menos, durante trs horas. Mtodo 7 Proceder conforme o Mtodo 1. Dessecar, porm, a amostra a 25C, sob presso de 10,67 kPa ou menos, durante quatro horas. Mtodo 8 A substncia antibitica secao. no submetida des-

Todo o material deve ser adequado para o uso pretendido e deve ser minuciosamente limpo, aps cada utilizao, para remover qualquer vestgio de antibitico. O material deve permanecer coberto quando no estiver em uso. Toda vidraria destinada ao trabalho com o microrganismo deve ser esterilizada em estufa entre 200 c e 220C por perodo de 2 horas. Na diluio da soluo padrio e amostra empregar frascos volumtricos, pipetas ou equipamentos cuidadosamente' calibrados.
V.5.2.17.1 ENSAIO MICROBIOWGICO POR

5 a 8 mm de dimetro. Podem, ainda, ser usados discos de papel, confeccionados com papel de qualidade apropriada ou moldes de ao inoxidvel. Quando so usados discos de. papel, eles devem ser esterilizados, de ambos os lados, por meio de lmpada de esterilizalfo. Preparao da SolUo Padro de Trabalho e da Curva Padro Para assegurar a validade do ensaio, usar pelo menos trs* diferentes doses da substncia que est sendo ensaiada, tendo presumidamente a mesma concentrao (atividade) que as solues do padro de potncia conhecida. As doses usadas na curva de dosagem devem estar em progresso geomtrica; por exemplo, pela preparao de sries de diluio na razo 2: I, uma vez que para o sistema ensaiado existe relao linear entre o logaritmo da concentrao do antibitico e o dimetro da zona de inibiio. A Tabela 11, exposta a seguir, indica para cada antibitico a preparao da soluo padro de trabalho e da curva padro, compreendendo: a) condies de dessecao, conforme

DIFUSO EM GAR Para cada antibitico relacionado na Tabela 1, apresentada a seguir, verificar o meio de cultura (conforme a relao dos meios de cultura), a quantidade de meio a ser usada na camada base e na camada semeada e o microrganismo de ensaio. O volume de inculo a ser adicionado a cada 100 ml de meio de cultura deve ser determinado experimentalmente. Entr~tanto, como referncia inicial, sugere-se quantidade de inculo a ser adicionado por 100 ml de meio. Preparar a camada base atravs da adio de quantidade apropriada de gar fundido nas placas de Petri, as quais devem ser especialmente selecionadas, ter fundo plano, possuir dimenses de 20 por 100 mm e tampa de material apropriado. Distribuir o gar uniformemente nas placas, que devem ser colocadas em superfcie nivelada para assegurar que a camada de meio tenha profundidade uniforme. Colocar a tampa de cada placa ao lado dessa; se for utilizada tampa no porosa, deix-Ia levemente entreaberta para evitar o acmulo de umidade condensada a partir da camada de gar quente. Aps o endurecimento do gar, tampar as placas. Para preparar a camada semeada - superfcie -, adicionar o volume de inculo determinado para a quantidade apropriada de meio de cultura que tenha sido fundido e resfriado entre 48C e 50C. Agitar o frasco, por rotao, para obter suspenso homognea e adicionar a quantidade indicada do meio inoculado em cada placa de Petri, contendo a camada base nlio inoculada. Espalhar uniformemente a camada, tampar as placas e permitir o seu endurecimento sobre superfcie plana. Aps o endurecimento do meio, colocar seis cilindros de ao inoxidvel, com dimetro externo de 8 mm :t 0,1 mm, dimetro interno de 6 mm :t 0,1 mm e comprimento de 10 mm 0,1 mm, sobre a superfcie do gar inoculado, de maneira que formem entre si ngulo de 60 e com raio de 2,8 cm. Tambm podem ser utilizados cilindros confeccionados em vidro, porcelana ou alumnio e esterilizados nas condies j descritas. Em lugar dos cilindros, podem ser perfurados, no meio, com furador estril, poos de

Des-

secao de substncias antibiticas.

b) solvente inicial para dissoluo do antibitico, caso seja necessrio, e at qual concentrao usado; c) soluo para diluio at a concentrao de trabalho, conforme Solues; d) concentralio da soluo de trabalho, expressa em peso ou Unidades Internacionais por mI de soluo; e) prazo de validade da soluo padro de trabalho sob refrigerao; f) soluo empregada para diluiO da soluo de trabalho, por ocasilfo da preparalfo da curva padro, conforme Solues e g) faixas de concentrao sugeridas, em peso ou Unidades Internacionais por mI, dentro das quais podem ser encontradas as concentraes adequadas para a curva padrlfo. A prepara'o das amostras dos antibiticos est indicada na respectiva monografia.

Em ensaios de rotina, quando a linearidade do sistema foi comprovada em nmero adequado de experimentos usando o ensaio de trs pontos, pode ser empregado ensaio de dois pontos. Quando se emprega o delineamento com mais de trs pontos, utilizar placas de 20 x 1SOmm. Ser aceito, igualmente, o delineamento S xl, adotado oficialmente por outras farrnacopias de uso internacional corrente. Todavia, em caso de controvrsia ou litgio, deve ser aplicado o ensaio de trs pontos.

Meio de cu/tu,.. a ler IJllldo (conformtl Antibi6tico Microrganilmo

3. Meiosde Cultural
&16 Suptlrf{cie

Vo/umtJ (mO de mtlio a .r aplictJdo 11II1 e811111c/a1 &Ie Suptlrffcie

VO/Umtlde in6culo ml/l00ml

Temperatu,.. de incufIIo dBlplBces

c
32835 32835 38838

Amoxicilin8 Ampicllin8 Anfomicin8

Micrococculluteul (A TCC 9347) Micrococcul luteul (A TCC9341J Micrococcul f/WUI ,..iltente ~ neomicina (ATCC 14452J Saccheromycel cerrwili." (A TCC9163J MicrococcUlluteul (ATCC1468J MicrOCOCCU6 Iuteul (ATCC 10240J StlIphylococt:Ul wreUl (ATCC 6538PJ MycobBcterium ImtI/II1IIItil (A TCC601J &ci/lUl.ubtilil (ATCC6633J PreudomOlllll eeruglnOlB (ATCC 25619J StaphylococcUlBUreul (A TCC 6538PJ StaphY/OCOCCUlBUreul (ATCC6538PJ StaphylococcusBureu. (A TCC 6538PJ

11 11 2

11 11 1

21 21 21

4 4 4

0,5 0,5 0,5

Anfotericin88 Bacltracin8 8acitracin8

19 2 2 2 15 5 9 2 2 2 1 1 1 15 5 10 1 1 21 21 21 10 21 21 21

8 4 4

1,0 0,3 0,3 1,0 1,0

29 a 31 32a35 32835 32835 32835 36838 36838 32 8 35 36838

8enzilpenicilina

Bleomicin8 Canamicin8 Carbenicilin8

111 111
0,5 0,05 0,05

Cefacetril8 Cefadroxil8 Cefalexin8

21 21

32835

Antibitico

Micro",.,,;""o

Meio de eultulll li IlJr ullldo (conforme 3. Meios de Cultura) BaIlJ Superffcie 1

Volume (m/} de"";o a aplicIIdo

"".~
811.
21 Superflcie 4

Vo/umede in6culo ml/l00ml 0,2

TemptNatulll de incu16o da$plac.

e
32a36

Cefllloglicina

StIIphyIOCOCClll euTeUI (ATCC 6538P} S"""y1ocot:cul IlUfflUl (ATCC663BP} sr""'y1ocot:cul IlUffIUI (A TCC 663BP} sr.phy1ocot:cul IlUffIUI (ATCC 6638P} s,.""y1ocot:cul IlUfflUl (A TCC 663BP} s,.""y1ocot:cul IlUffIUI (ATCC 6538P} Sr.phyIocot:cUl IlUf'fIUl (ATCC 6538P} MicrococcullutrlUl (ATCC9341} Staphylocot:cUlaure,. (ATCC6538P} Micl'OCOCCUllur.UI (A TCC9341} Microcot:CUllur.UI (ATCC9341} Staphylococcus IlUf'fIUl (A TCC 6638P} Bordetella bronchilflptica (ATCC4611J

Cefeloridina

21

0,1

32a35

Cefelotina

21

0,1

32a36

Cefllplrina

21

0,08

32a35

Cefazolina

21

0,05

32a35

Cefoxitina

21

0,1

32a36

Cefradina

21

0,05

32 a 36

Ciclacilina

11

11

21

0,5

36a38

Cicloaerina

10

0,04

29 a 31

C1indamicina

11

11

21

1,5

36a38

C1oranfenicol

21

2,0

32a36

C10xacilina

21

0,1

32a36

CoIistina

10

21

0,1

36a38

Antibi6tico

MicrolflHlilmo

Meio de culturtl a ser usedo (conforme 3. Meios de Cultura) Base Superflcie 5

Volume (mO de meio a ser aplicado nascemades Base 10 Superflcie 4

Volume de in6culo ml/100ml

(1)

Temptlrtlturtl de incuba60 dasplaces

c
36a38

Dactinomicina

11IIci/l,. suMi/i' (A TCC6633J StephylOCOCCf/$/lUrtN' (A TCC653BPJ Baci/l,. ,ubtilis (A TCC6633J Micrococeus lutllU' (ATCC9341J I1IIciIlUllUbtllis (ATCC 6633J MicfOCOtX:W (A TCC9341J

Dicloxacilina

21

0,1

32 8 35

Oiidroestreptomicin8

21

(1)

36a38

Eritromicina

11

11

21

1,5

32 a 35

Estreptomicina

21

(1 )

36838

FeneticiJina

lu,.,.

11

11

21

0,5

32 a 35

Fenoximetilpenicilina

StIIphyIococcus /lU,.,' (A TCC 6638PJ Staphylococcus epidermidis (ATCC 1222BJ MicrMporum f/YPNUm (ATCC 14683J Baci/lUllUbtilis (A TCC6633J Stephylot:occu'lIuff1Ul (A TCC6638PJ StllPhylococcu, epidermidi, (ATCC 12228J SacchIIromyces CfJI'fJVisiIltl (A TCC2601J

21

1,0

32 a 35

Gentamicina

11

11

21

0,03

36a38

Griseofulvina

20

21

(1 )

29 a 31 durante 48 horas 36838

Mitomicina

10

0,5

Neomicina

11

11

21

0,4

32 a 35

Neomicina

11

11

21

1,0

36a38

Nistatina

19

1,0

29 8 31

Antibitico

Mit:ro"."imro

Meio de cultura a .er uSlldo (conforme 3. Meios de Cultura)

Volume (mO de meio a ser aplClldo ". camadas Superllcie 4

/MIe
Novobiocina SMphylococcus epderm/di. (ATCC 12228} SttIphylococcu, .,." (A TCC 6538P} StIIphylococcul.,,;dennidl (ATCC 12228} Bordetellllbtonch."tiCII (A TCC 4611J 8BcIlUllUbtlli, (A TCC6633} StIIphykH:occUlaurtJ'JI (A TCC 6538P} S""",ylococcu, epidermidi, (ATCC 12228} 8BcIlUl ,ubtlli. (ATCC6633} 2

Superllcie 1

88.
21

Volume de ifl6culo ml/100ml 4.0

Temperatura dei"cubalo da. plllClI$

c
34a36

Qxecilina

21

0,3

32 a 35

Peromomicina

11

11

21

2.0

36a38

Polimixina B

10

21

0,1

36a38

Rifampicina

21

0.1

29 a 31

Rifampicina

21

0.1

36a38

Sisomicina

11

11

21

0.03

36a38

Vancomicina

10

(1 )

36a38

Procedimento Empregar, no ensaio, pelo menos seis placas de Petri. Dispor as solues, em cada placa, de tal forma que as solues do material de referncia e as da amostra estejam alternadas na camada inoculada e que no estejam adjacentes concentrao mais alta do padro e da amostra para evitar a sobreposio das zonas. Aplicar as solues nos cilindros por meio de pipeta que libere volume uniforme de lquido. Quando for usado o sistema de poos, o volume de lquido aplicado deve ser suficiente para ench-Ios completamente, e quando forem usados moldes de ao inoxidvel, adicionar volume de 0,2 mI. Incubar as placas na temperatura indicada, que nlo dever ter varialo superior a 0,5 C, durante perodo de 16 a 18 horas. Em seguida, me4ir o dimetro das zonas de inibio; empregar disposi tivo adequado para medida, como paqumetro, rgua milimetrada ou projetor ptico. Para alguns microrganismos, o procedimento pode ser melliorado se as placas preparadas permanecerem temperatura ambiente por perodo de 30 minutos a 2 horas, durante o qual ocorre a difus'o do antibitico para o meio. Clculo da Potncia A partir dos resultados, calcular a potncia da substncia que est sendo examinada e seus limites de confiana, atravs de mtodo estatstico padro, descrito na seo VI.5. V.5.2.17.2. - ENSAIO MlCROBI0LOOICO POR TURBIDIMETRIA Inocular o meio de cultura recomendado para o ensaio com quantidade conhecida do microrganismo sensvel ao antibitico, de modo que, aps incubao de aproximadamente quatro horas, a turbidez bacteriana no meio seja de fcil medida e mantenha correlao entre a dose e a resposta da substncia em anlise. A seguir, descrever-se-io os antibiticos a serem ensaiados pelo mtodo turbidimtrico (Tabela III), com microrganismo, meio de cultura, volume de in6culo padronizado sugerido como referncia inicial e temperatura de incubao para cada caso. Preparao da Soluo de Trabalho e da Curva

mesma concentrao que as solues do padro de potncia conhecidas. As doses usadas devem estar em progresso logartmica. A preparao das amostras dos antibiticos est indicada na respectiva monografia. A Tabela IV, apresentada a seguir, indica, para cada antibitico, a preparao da soluo padro de trabalho e da curva padro, compreendendo: a) condies de dessecao, conforme Desse-

cao de substncias antibiticas;

b) solvente inicial para dissoluo do antibi6tico, caso seja necessrio, e at qual concentrao usado; c) soluo para diluio do antibitico at a concentrao de trabalho, conforme Solues; d) concentral'o de solul'o de trabalho, expressa em peso ou Unidades Internacionais por mI de solul'o; e) prazo de validade da soluo padro de trabalho sob refrigeral'O; f) soluo empregada para diluilo da soluo de trabalho, na ocasio da preparalo da curva padrlo, conforme Solues; g) faixa de concentral'o, em peso ou Unidades Internacionais por ml, dentro da qual as concen traes adequadas para a curva padro podem ser encontradas.

A concentrao de referncia do ensaio a dose do meio ou a dose central da curva padro. Procedimento Empregar para cada antibi6tico o microrganismo e o caldo nutritivo j relacionados. Determinar experimentalmen~ o volume de in6culo a ser adicionado a 100 mI de caldo a partir da quantidade sugeri da como referncia inicial. O meio inoculado deve ser preparado e utilizado imedia tamente. Distribuir, em tubos idnticos, vlume igual de cada uma das solues do padro e da amostra; adicionar para cada tubo volume igual de caldo nutriente inoculado, por exemplo, 1 mI de soluo com antibitico e 9 mI do meio (0,1 ml de soluo para gramicidina e tirotricina). Pelo menos dezoito tubos slo usados para ensaio por retas paralelas 3 x 3; trs tubos para cada concentralo do padro e da amostra. O nmero de replicaes por concentrao em cada ensaio deve ser suficiente para assegurar a preciso estatstica, especificada na monografia. Incubar, em banho-maria, temperatura adequada, por 3 a 4 horas, tomando a precauo de assegurar temperatura uniforme e tempo de incubao idntico para todos os tubos. O tempo adequado deve ser verificado pela observalo do crescimento no tubo contendo a concen trao de referncia do ensaio. Aps o perodo de

Padrllo
Para assegurar a validade do ensaio a ser executado, empregar pelo menos trs doses da preparao padro e da substncia que est sendo exami nada, as quais devem ter, presumidamente, a

Pode ser necessrio realizar o ensaio com nmero maior de doses do padro e da amostra ou repeti-Io e combinar os resultados para obter a preciso requerida.

incubaio, interromper a multiplicaio dos quantidade de caldo nutriente e formaldedo, a microrganismos pela adifo de 0,5 ml de soluio 12 por cento, em cada tubo. de formaldedo, a 12 por cento, em cada tubo. Determinar a absorvncia para cada tubo em Cilculo da Potncia A partir dos resultados, calcular a potncia da fotocolormetro apropriado, no comprimento de onda de 530 nm. Padronizar o aparelho em absor amostra e seus limites de confiana, atravs de m vncia zero atravs de branco contendo a mesma todo estatstico padrio descrito na selo VI.5.

.~

Soluo padrlo a. Antibiticos Condi/Je$ de

de$$SCB/Io

de trabalho d. Concentra6o da soluo de trabalho fim/} 1 mg 0.1 mg 0.1 mg 1 mgl 100 U.1. 1.000 U.1. 2 U.I. 1mg 1mg 1 mg 1mg 1mg 1mg 1oo~ 1 mg 1 mg 1 mg 1mg 1 mg 1mg 1mg 1 mg 1 mg 1 mg 1 mg e. Prazo de validade da soluio sob refrigera'o 7 dias 7 dias 14 dias Usar no mesmo dia Usar no mesmo dia 4 dias 14 dias 30 dias 14 dias 7 dias Usar no mesmo dia 7 dias 5 dias 7 dias 5 dias 3 dias 5 dias Usar no mesmo dia 1 dia 5 dias 30 dias 30 dias 30 dias 7 dias 14 dias f. Solu'o para dilui60 (item 2) 2 2 2 5 1 1 8 2 1 1 1 1 1 3 1 1 1 1 2 1 1 2 1 1 4

Curva padrlo g. Faixa de concentra60 (1m/) 0.05 0.05 a 0,2 ~g7 a O,2",g7 a 2~g7 2U.I.

b. Solvente inicial

c. Solu'o para dilui60 (item 2) gua estAril gua estAril

(irem 5) Amoxicilina A mpicili na AnfomicinaS Anfotericina Bacitracina Benzilpenicilina Bleomicina Canamicina B Carbenicilina Cefacetrila Cefadroxila Cefalexina Cefaloridina Cefal oglici na Cefalotina Cefllpirina Cefazolina Cefoxitina Ciclacilina Cefradina Ciclosserina Clindamicina Cloranfenicol C10xacilina Colistina B

8 8 1 1 1 8 7 8 8 8 8 8 1 8 1 8 8 8

------

--

2
Dimetilsulfxido HClO.01M 1

5 a 20~g 0.5 1 a 4 U.1. 0,2 a 0.01 0,5 a 0.2 U.1. a 2~g

--------

8
2 1 1 1 1 1 gua estAril 1 1 1 1 gua estAti! 1 gua estAril gua estAril 1 1 4

10 a 40~g 5 a 2O~g 10 10 0,5 5 0.5 0,5 0,5 10 0.5 5 20 0.5 20 a 40~ a 4O~g a 2~g a 20~g a 2~g a 2~ a 2~g a 40~ a 2.0
~7

-------10.000$&9 por ml nasolu60 4

-----

8
8 1 8 8 8 1

-10.000 ",g por ml em Mcool .r"ico

--

a 20$&9 a 80~ a 2~g a 80 ",g

-10.000 ~ por ml em IIcool etnico

2 a 8~g 0,5 a 2~g

Solulo PIr60 de ttablllho

eu",. padrlo

Antibi6tict

CotHIiII de

..
&

b.
$o"""'", 51 iniciei

c.
$olulo ptIf8 dilullo (i""" 21

ti.
Concentnllo demlulo de trablllho

e.
PrIlZOde ""lIdede de ,olulo,ob refr/~raIo

f. $olulo pera dlluilo (i"'m2)

g. Feixe de concentralo

fi,.",

l/mil 1 mg 1rng 1mg 1rng 1mg 1.000 U.I. 1ooU.1. 1 mg 1 mg4 1mg 1mg 1rng 1.000U.I? 1 mg 1mg 1 mg 10.000U.1. 1mg 1rng 1mg

l/mil 0,5 2,5 0,5 0,5 0,5 0,05 0,2 0,05 a 2,.g a 10,.g a 2119 e 2,.g e 2119 e O,2U.1. a 2 U.1.

Dae:tinomiclna Dicloxacilina Dildr08ltreptomiclna EritromiclnaS Estreptomiclna Fenetlcillll8 F.noximetilpeniciline G.ntamiclne Griseofulvine Mitomicina Neomlcill8 Neomlcine Nistetina Novobloclna Oxecilina PlIromomlcine PoIimixine B Rifempicina Sisomlclna' Vencomicine

1 8 5 1 1 8 8

10.000 ,.g por ml

1111

IJ/cooi mtltHico

---

,
2 2 2
A,rMe'~ril

90dilll 7 dies 30 dilll 14 dilll 30 dilll 7 dilll 4 dias 30 dies 90 dies 14dilll 14 di 14 dilll User no mesmo die 5 dids 3 dilll 21 dias 14 dilll 1 die 14 di. 7 dias

2 1 2 2 2 2 1 2 2 1 2 2 4 4 1 2 4 1 2 2

10.000,.g por ml em .Icool mtltHico

3
8 8 1 1 4 6 8 1 1 8 8 1

---------10.000 119por ml em~etRico

2
Oimetllfo"".",lde

e 0,2"9 2 a 10"'9 0,5 a 2,.g 5 a 20,.g

2 2
Oirnetllformlltnidll

(s. aureu,)
a 2,.g

0,6

(S. epidermidi,)

2
1

10 e 40 U.1.7 0,2 a 1,.g 2 e 10,.g 0,5 200 0,05 e 2"9 e SOOU.I.

---

A,rMemril3

------

2 4
Alcoal metflico

2
Agw lII~rll

2 e 10 "g a O,2"g 5 a 2Ojolg

1 Diluir el rquotas de solulo de tr8beIho oom dlmetillulf6xido. pere obter concentre6es entre 10 e 4O,.g por mi conforme os pontos de curve pedrlo. 2 Diluir elrquotas de soIu1o de trebBlho com dirnetHfonnemide, pere obt.r concentre6es entre 10 e 40 unid8des por ml conforme os pontos da curve pedrlo. 3 Adlcioner 2 ml de . 11pere cede 5 m9 de pedrlo. 4 Diluir 81(quotes de solula de tnlbe/ho com dimetilforlllllmide, pere obter concentre&ls antnl 40 e 2oo,.g por ml conforme os pontos de curva padrlo. 5 Quendo se emprllg8l' eritromiclne sob e forma de estoleto, hidroliser e solulo de trebelho, em benho-merie, e 60 C, durent. 2 horlll. 'Sisomlcina" higrOlC6pice. tom8r prKaI/Sei durente e pesegem. O pedrfo de trebelho deve permanecer e _20C, em etmosfera de nitrognio. 7 Preparer concomitllntllrlnenlle 81 soluGes do pedrlo e emostre. 8 A Solulo pedrlo de tr8beIho deve permen_ durante ume noite tempereture embi.nte pere complete dissolulo.

Antibi6tico

MicrorganilmO

Caldo nutriente (itwn 3.Meia. de cultura)

VoIu".de in6culo ml/lOO ml

Tem,.,.rura de incub860

c
37 37 28 37 37 37
36

Amicacina Canamicina Candicidina Capreomici na Ciclosserina Cloranfenicol Clortetraciclina Demeclociclina Diidroestreptomicina Doxiciclina Espectinomicina Estreptomicina Gramicidina Lincomicina Minociclina Oxitetraciclina Rolitetraciclina Tetraciclina Tirotricina Tobramicina

Stllphylococcus Stllphylococcus

IlUreus (A TCC 6538P) IlUreus (A TCC 6538P)

3 3
13

0.1 0.2 0.2 0.06 0.4 0.7 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 1.0 0.1 0.2 0.1 0.1 0,1 1.0 0.15

SIIccharomyctJS cerevisille (A TCC 9763) Klebsiellll pneumoniilfl Staphylococcus (A TCC l003l)

3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3

IlUrtIU' (A TCC 6538P)

Escherichill coli (A TCC 10636) Staphylococcu, Stllphylococcus Srsphylococcus IlUrtIU' (ATCC 6538P) aurllU' (ATCC 6538P) (ATCC l0031) aureu, (A TCC 6538P) (A TCC 10031)

Klebsifllla pnllUmoniae

Eschflrichia coli (A TCC 10636) Klebsiella pnllUmoniae Streptoeoceu, Sraphylococcu, Staphylococcu, Staphylococcus Staphylococcus Staphylococcu, Streptococcu, Staphylococcu, faecium (ATCC 10541) aureu' (A TCC 6538P) IlUreu, (A TCC 6538 P) IIUrtlU' (ATCC 6538P) IIUrtlU' (A TCC 6538 P) IlUrtIU' (A TCC 653BP) faacium (A TCC 1054 I) aureu, (A TCC 6538 P)

37 37 37 37 37 37 37 37 37 37 37 37 37

Antibi6ticos

..
CondifJ. de dflRscalo (item 5)

Solulo Padrlo de Tr.balho b. Sol".,nte inici.I c. Solulo /RIra diluilo (item 2) d. Concentra6o d.solulo de trabalho (lml) e. PrllZo de Ifalidllde dB solulo sob rtlfrigerBlo f. Solulo para diluilo (item 2) Agua .tril Agu

Curv. Padrlo g. Faix.de concentrlllo (/mO

Amicacina Cenamiclna CenCticidina1 Cepreomicina Cicloaerina C1oranfenicol Cortetraciclina Damacloclclina DidrOfJ$treptomicina Doxicicilna ElP8Ctinomicina E.traptomicina Gramicidina Lincomicina Minociclina Oxitetraciclina Rolitatraclclina Tetraciclina Tirotricina2 Tobramicina

8 8 6 5 1 8 8 1 5 8 8 1 1 8 8 8 1 8 1 8

----10.000119 por ml em lleool etflico

---

Agu

~ril

Agull.~ril Dimetilrulf6xido AgulI.~;;I AgulI.~ril 1 HCIO,01M HCIO,1M Agull.~ril HCIO,1M Agua es~ril Agull es~ril lcool etflico 95% Agua es~ril HCI 0,1 M HCIO,1M gulI.~ril HClO,1M Alcool erflico 95% Agu.es~ril

1mg 1mg 1mg 1 mg 1 mg 1 mg 1mg 1rng 1 mg 1 mg 1rng 1mg 1 mg 1 mg 1mg 1mg 1 mg 1 mg 1 mg 1 mg

14 dias 30 dias Usar no mwmo dia 7 dias 30 dias 30 dias 4 dias 4 dias 30 dias 5 dias 30 dias 30 dias 30 dias 30 dias 2 dias 4 dias 1 dia 1 dia 30 dias 14 dias

~ril

AgUII.~ril A9UII.tril Agua.tril 1 Agu. estril Agua .tril Agua.tril Agua.tril AgUII.tlril Agu tlril

6 6 0,02 60 20 1 0,03 0,06

a 141lg a 14119 a O,141lg3 a 180119 a 80 Ilg a 41lg a O,09llg a O,141lg

------

------------

--

20 a 60119 0,06 a 0,141lg 20 a 60 Ilg 20 a 0,02 a 0,3 a 0,06 a 0,16 a 0,16 a 0,16 0,02 60119 O,08~g O,8~g O,121lg 0,321lg O,321lg

Alcool etflico 95% Agu ~ril Agu. estril Agu ~ril

------

Agull .~ril AgUII .tril Alcool etflico 95% Agua estril

---

a 0,321lg a 0,08 "g 1 a 4119

1 No ensaio da candicidina, empregar equipamento estril em todas as etapas. Par. o ensaio da tirotricina, empreger a solulo padrio de trabalho e a curva dos.resposta Preparar, Imultaneamente, solues padrlo e amostras.

da gramicidina.

VI. PROCEDIMENTOS ESTATSTICOS APLICA VEIS AOS ENSAIOS BIOLGICOS

VI.l. GLOSSRIO DE SMBOLOS

Todos os logaritmos desta secio do em baile 10.

S.MBOW DEFINiO

A
A

Z
Z

p PtP1P3

doses das preparal'les ensaiadas (amostras) A ..... Z estimativa da inclinalo da linha de regresslo da resposta em relalo ao logaritmo da dose baseada em todas as preparaOes do ensaio nmero de blocos (animais) num ensaio cruzado constante usada na avalialo dos limites de confiana (Tabela 15) nmero de nveis de doses para cada preparalo num ensaio balanceado graus de liberdade nmero de preparal'les em um ensaio, incluindo a preparalo padro nmero de tratamentos diferentes dentro de um ensaio k = dh nmero de rplicas para cada tra tamento nmero de estimativas individuais da potncia probabilidade doses menor, mdia e maior da preparalo padro P; em ensaios com somente dois nveis de doses, P1 representa a dose maior estimativa da varincia fomecida pelo quadrado mdio do erro na anlise da varincia. Tambm usado com uma letra ndice; por exemplo, s~ repre senta a varineia do log potncia M estimativa do desvio padro, ou seja, a raiz quadrada de S1 estatstico de Student (Tabela 3) estatstico de Dunnett (Tabela 12) varincia para heterogeneidade entre ensaios coeficiente de ponderao log dose - tambm usado com ndice para indicar uma preparao particular mdia dos log dose resposta individual ou resposta indivi dual transformada resposta calculada para substituir um valor perdido

C'

mdias das respostas para as prepa ral'les padrlo e amostra amostras ensaiadas soma das respostas para as amostras A ... Z soma das respostas para as doses menor, mdia e maior da amostraA. Para um ensaio com dois nveis de doses, A2 representa a resposta para dose maior. Similarmente para outras amostras ensaiadas soma das respostas para cada sujeito (l a 2n) em ensaio duplo cruzado total incompleto das respostas em ma ou bloco que tem um valor perdido. estatstico usado no clculo dos limites de confiana (Frmula 14) Mede a preciso da inclinao soma de respostas em cada coluna (1 a n) em delineamento quadrado latino soma incompleta das respostas em uma coluna de delineamento em quadrado latino com um valor perdido constante estatstica da Tabela 18 constante estatstica para testar homogeneidade de estimativas indivi duais de logaritmo da potncia soma de quadrados (Tabela 10) para regresso

razo de duas estimativas da varincia independentes (Tabelas 4 e 5) soma das respostas na fase I ou fase 11num ensaio cruzado soma das respostas em cada uma das mas 1 a n em delineamento de quadrado latino, ou em cada bloco de um delineamento em blocos ao acaso estatstico utilizado no teste de valores aberrantes total incompleto das respostas em um ensaio com excluso do valor perdido intervalo entre log doses consecutivas termo de correlo usado na anlise da varincia K = (~y)2 /N intervalo de confiana em logaritmos

intervalo de confiana em logaritmos para mdia semiponderada contrastes lineares para as preparaoes padrlo e amostra (Tabelas 8 e

ralo padrlo P. Para ensaio de somente dois nveis de dosagem, P2 representa as respostas para a dose

maior
soma de quadrados quadrtica. A partir da anlise da vamncia (Tabelas 9 elO) contraste quadrtico para as prepa raes padrfo e amostra (Tabela 9) estimativa da potncia da amostra limites de confiana inferior e supe rior da estimativa de potncia estimativa da razo de potncias antes da corre'o pela potncia suposta (R' = antilog M') constante especfica para testar valo res aberrantes (Tabela 2) potncia suposta para a amostra A, quando se preparam as doses total incompleto das respostas para um tratamento excluindo o valor perdido varincia do logaritmo de potncia individual ponderalo estatstica usada na com binalo de vrias estimativas, independentes do log potncia semi-ponderafo de cada logaritmo de potncia numa srie de ensaios

9)
estimativa do log da potncia ou do log da razlo de potncia usada com uma letra ndice em um ensaio mltiplo, para denotar uma prepa ralo particular (M = log R) limites de confiana da estimativa do log da potncia mdia de vrias estimativas indepen dentes de M estimativa do log da potncia da amostra A ou do log da razo de potncias antes de corrigir pela potncia suposta (M' = log R') limites superior e inferior da estima tiva do log potncia, antes de corrigir pela potncia suposta nmero total de respostas no ensaio nmero total de respostas para as preparaes P e A preparalo padro soma das respostas para a preparao padro soma das respostas para as doses inferior, mdia e superior da prepa

Ensaios biolgicos
So procedimentos destinados a avaliar a potncia de princpios ativos contidos nas matriasprimas e preparaes farmacopicas, utilizando reagentes biolgicos tais como microrganismos, animais, fluidos e rgl'os isolados de animais. A caracterstica dos reativos biolgicos sua variabilidade. Enquanto os reativos fsico-qumicos podem ser definidos e padronizados para fome cerem resultados idnticos em todos os laboratrios, impossvel definir totalmente os reagentes biolgicos, apesar dos esforos de entidades internacionais neste sentido. Essa variabilidade inerente aos reativos biolgicos torna imprescindvel: I) o emprego de padres de referncia adequados para se obter potncias relativas e 2) o emprego de mtodos estatsticos para os delineamentos experimentais e anlise dos resultados.

nmeros aleatrios. Convm assinalar que este procedimento n4'o elimina todos os vcios. Por exemplo, por efeito do acaso, os animais de maior peso poder4'o ser destinados a determinada dose e esta diferena de pesos viciar os resultados. Portanto, dever ser criado o equihrio, ou seja, deve-se classificar os animais por faixa de peso e distribuir, ao acaso, aqueles de mesmo peso para todas as doses e preparaes (padro e amostra).

Anlise estatstica
~ procedimento matemtico aplicado aos resultados experimentais para estimar a potncia da amostra e avaliar a validade e preciso do ensaio. Os mtodos de anlise se relacionam com os delineamentos experimentais utilizados.

Resultados
Expressar os resultados de avalia"o biolgica como estimativa da potncia relativa (R), que ser a melhor expresso da verdadeira potncia relativa (p), impossvel de ser calculada com certeza, devido variabilidade dos reativos biolgicos. Tal estimativa da potncia relativa deve ser acompanhada por limites de confiana inferior e superior (Ri, Rs). Estes limites definem o intervalo de modo que seja pr-determinada a probabilidade (p) de a verdadeira potncia relativa (p) estar fora deste intervalo. As probabilidades de erro mais utilizadas nos ensaios biolgicos so p = 5% e p = 1%, tambm expressas como p = 0,05 e p = 0,01. As monografias estabelecem especificaes para a amplitude aceitvel desses intervalos em relao potncia estimada. Estas especificaes levam em conta a dificuldade dos mtodos e a necessidade prtica de se estimar a verdadeira potncia com determinada precis"o. Nos casos no especificados explicitamente entenderse- que a probabilidade de erro utilizada no clculo dos limites p = 0,05. Pllra alcanar os limites de confiana especificados devese, s vezes, realizar mais de um ensaio. Para se obter uma estimativa da potncia com intervalo de confiana reduzido, deve-se combinar estatisticamente os resultados destes ensaios independentes. Os procedimentos de clculo so planejados para o ensaio de amostra nica. No caso de serem ensaiadas vrias amostras simultaneamente, empregar as modificaCles descritas neste volume.

Delineamentos experimentais
O delineamento de um ensaio compreende: a) seleo do conjunto de doses do padro (P) e das amostras do desconhecido (A) que sero ensaiados; b) especifica"o das unidades experimentais (animais, microrganismos, antisoros, sangue etc.); c) regras pelas quais se distribuiro as doses para as unidades experimentais; d) especificaes das medidas ou outros registros que devam ser procedidos em cada unidade experimental. O melhor delineamento experimental aquele que produz a informao desejada com a maior eficincia. Por dificuldades prticas, pode ser impossvel alcanar este objetivo. Portanto, para cada ensaio podem-se empregar diferentes delineamentos experimentais, de acordo com a disponibilidade de pessoal, reagentes e tempo. Todos os delineamentos que forneam ensaios vlidos e de precis"o adequada, como resultado final, sl'o cientificamente aceitveis. Alm disso, devem compreender algum sistema que assegure distribuil'o ao acaso das unidades experimentais para as diversas doses utilizadas.

Acaso e vIcio
Deve-se fazer distribui4'o ao acaso utilizando aparelho empregado em jogos de azar ou tabela de

Todas as respostas obtidas sem obedecer estri tamente o protocolo prestabelecido devem ser eliminadas. Quando, aps tabular as demais respostas, se observarem valores aparentemente aberrantes, a decis'o de mantlos ou eliminlos deve baseaBe em critrios estatsticos, como os descritos a seguir: lQ) Critrio baeado na variao dentro de um nico grupo de respostas supostamente equivalentes. Em mdia, para relativamente poucas :respostas idnticas dentro do grupo, serlo despre zadas observaes vlidas em 2 ou 4% das provas. Comeando com o valor supostamente aberrante, indicar as respostas em ordem de magnitude de Yt a YN, onde N representa o nmero de obser vaesno grupo. Calcular

existe base estatstica suspeito.

para a eliminao do valor

= G, = G3 =
Gt

(Y,-Yt)!(YN-Yt), (Y3-Yt)/(YN'I-Yt), (Y3-YI)/(YN.,-Yt),

quando N quando quando

= 3a7 N = 8 a 13 ou N = 14 a 24

Se G1, G, ou G3 excedem o valor crtico dado pela Tabela 1 para o valor correspondente de N,

2Q) Critrio que contempla a amplitude de uma srie K = 2 ou mais grupos de igual tamanho. Os grupos podem receber diferentes tratamentos; porm, todas as n respostas dentro de cada grupo deoorrem do mesmo tratamento. Calcular os intervalos em cada um dos k grupos, subtraindo a resposta menor da maior. Dividir o maior dos k intervalos pela soma de todos eles. Comparar este valor (R+) com a Tabela 2. Se k for menor ou igual a 10, usar os valores tabulados na parte superior da tabela; se maior, multiplicar R+ por (k + 2) e interpolar, se necessrio, entre os valores tabulados na parte inferior da mesma. Se R+ exceder o valor tabulado ou interpolado, o grupo com intervalo maior suspeito (p = O,OS) e a observa'o de seus dados permitir identificar o valor que, entlo, se considera aberrante. O proce dimento pode ser repetido com os demais inter valos st houver suspeita de valor aberrante em um segundo grupo.

Mede-se diretamente as doses de cada preparao (padro e amostra) necessrias para produzir respostas pr-determinadas em cada unidade experimental de dois grupos equivalentes de animais ou outros reativos biolgicos. Exemplo tpico o ensaio biolgico de digital. Preparar as solues do padro e amostra de modo que contenham aproximadamente a mesma potncia, levando em considerao a atividade declarada da amostra ou a estimada em ensaios prvios (SA)' Transformar cada resultado (dose eficaz) em logaritmos (x) e calcular os valores mdios dos logaritmos das doses eficazes para o padro (ip) e para a amostra (iA). Calcular a potncia relativa da amostra (R'), antes de ajustar pela potncia suposta, como o antilogaritmo de M', em que:

Obter o valor apropriado de t na Tabela 3, de acordo com os gra4s de liberdade (gl) dados pelo denominador da equao (3). Calcular a potncia relativa da amostra e os limites de confiana, levando em considerao a potncia suposta da amostra (S utilizada para preparar as diluies:

A)

R= antilog M M Rs
R'
1

(5)

= =

M' + log SA

com limites de confiana

antilog (M tSM]

M'=Xp-XA

(I)
Para que o ensaio seja vlido, a varincia de
Xp deve ser a mesma de XA, diferindo somente por

Calcular a varincia de M' como a soma das varin cias das duas mdias, a partir da equao

2 2(1 1) sM' = Sx Np + NA

erros de amostragem. Para testar, calcular as varincias e dividir a maior pela menor. Deste modo, obtm-se uma relao de varincias (F). Calcular a varincia de Xp do seguinte modo:

= --~~--N xp

x;_(~"p)2/Np
p-l

(8)

Np e NA so os nmeros de animais tratados

com padro e amostra;

f e X representam

soma

trios dos resultados calculados para as duas preparaes. Calcular os limites de confiana como:
R~ R!
1

antilog (M' tSM')

Calcular analogamente s2 (8a) XA A distribuio da razo de varincias (F) encontra-se nas Tabelas 4 e 5, porm para este teste os valores da Tabela 4 correspondem a p = 0,10 e os da Tabela 5 a p = 0,02. O valor F do ensaio no deve ultrapassar o valor da tabela, correspondente aos graus de liberdade do numerador e denominador com que se obteve F. Os graus de liberdade so aqueles dos denominadores das varincias das equaes (8) e (8a).

VI.S. ENSAIOS INDIRETOS QUANTITATIVOS

Natureza e validade

Em geral n[o possvel medir diretamente a dose eficaz. Por essa razo, a potncia determi nada indiretamente, comparando as respostas produzidas em escala quantitativa, por exemplo, peso, por doses conhecidas do padrlo com aquelas produzidas por uma ou mais doses de amostra. Num intervalo restrito de doses, as respostas ou sua transformalo conveniente (logaritmo, probito etc.) apresentam relalo linear com o logaritmo das doses correspondentes. Usar dois ou mais nveis de doses do padro ou, preferencialmente, do padrlo e amostra para determinar a posio e a inclinalo da reta. Proceder em cada ensaio desta maneira, pois, dependendo da sensibilidade dos reativos biolgicos utilizados, pode variar tanto a posi[o quanto a inclinalo da reta. Cada tratamento consiste de uma dose fIXa do padrlo (Pio P:l, P3 etc.) ou da amostra (alo a:l, a3 etc.) e administrado a um certo nmero (n) de unidades experimentais (animais, rglos, culturas, tubos etc.). Registrar n respostas, ou seja, wna para cada unidade experimental. Para que os mtodos apresentados neste captulo sejam vlidos, devem-se cumprir as seguintes condies: 1) as unidades experimentais correspondentes a cada tratamento devem ser selecionadas ao acaso; 2) para cada tratamento, as respostas ou a transformalo das mesmas usadas no clculo (y) constituem amostra de distribuilo normal; 3) o desvio padro da resposta ou de sua transformaA'o independente do nvel de res posta, ou seja, igual para todos os tratamentos, s diferindo pelos erros de amostragem; 4) a resposta, ou sua transformalo utilizada nos clculos (y), tem relao linear com o logaritmo da dose (x) no intervalo de doses utilizadas; 5) a linha reta correspondente a uma ou mais amostras deve ser paralela do padrlo. A partir de estudos ensaio, possvel condiOes 2 e 3. De ensaio, podese testar lo 4 (linearidade) preliminares do mtodo de supor o cumprimento das posse dos resultados de cada as condies 4 e S. A condi s pode ser verificada em

ensaios em que se aplicam pelo menos trs dilui es de cada preparao. Quando se realiza ensaio com somente duas diluies, presumese que a linearidade do sistema foi previamente estabelecida. A condilo 5 (paralelismo) deve ser testada em cada ensaio. Neste, nunca se devem utilizar menos de duas diluies de cada preparao. Se Dlo for cumprida qualquer das condies de 1 aS, os mtodos de clculo descritos neste captulo nlo slo confiveis e tornam-se neces srios estudos para estabelecer as concluses corretas. conveniente que a amostra seja ensaiada com doses cujas respostas sejam aproximadamente iguais quelas obtidas com as correspondentes doses do padrfo. Isto aumenta a precislo do resultado. Denominar a potncia suposta para a amostraSA

Expresso de pfllincia

e restries

Realizados os testes de validade correspondentes e sendo satisfatrios os resultados, pode-se expres sar a potncia relativa de cada amostra em relalo ao padro com uma razfo de potncias ou conver ter em unidades apropriadas para cada amostra, por exemplo unidades internacionais, nacionais, unidades de peso etc. Tambm podem-se calcular os limites de confiana a partir do conjunto de dados obtidos no ensaio. Para simplificar os clculos da anlise estatstica apresentados neste captulo, necessrio impor as seguintesrestries ao delineamento dos ensaios: a) testar cada preparalo, padrfo e amostra, com o mesmo nmero de diluies. Apresentam-se frmulas para ensaios farmacopicos, utilizando dois e trs nveis de doses para cada preparalo; b) manter constante em cada ensaio a razlo de doses consecutivas para todos os tratamentos e c) obter o mesmo nmero de respostas para cada tratamento. Caso alguma resposta for perdida, esta pode ser estimada pelos mtodos apropriados a cada deli neamento apresentado neste captulo; e se se perder um tratamento, atender ao especificado na seo de Enlflios ptUCIIlmente balanceados.

Ao acaso

Quando as unidades experimentais forem, na sua totalidade, razoavelmente homogneas enio houver indicaio de que a variabilidade da resposta poder ser menor em certos subgrupos, proceder distribuilo das unidades experimentais para os diferentes tratamentos ao acaso. Havendo possibilidade de alguns subgrupos como, por exemplo, camadas, posies em estantes ou dias de experimento, serem mais homogneos que a totalidade das unidades, a precisio do ensaio pode ser aumentad: Ltltroduzindo-6euma ou mais restriOesno delineamento experimental.
S/ocos
110 IlcasO

duplo cruzado o ensaio com duas doses do padro e da amostra, e triplo cruzado aquele de trs

doses de cada preparall'o.Proceder o ensaio em duas fases conforme o perodo de tempo definido no mtodo. Dividir os animais em quatro ou seis grupos e realizar um tratamento em cada grupo na primeira fase. Na segunda fase, os animais que receberam uma preparaio recebero outra; os animais que receberam doses menores, nesta etapa recebero as maiores. Seguir o esquema da Tabela 6.
QUlldflldo latino

Possibilita segregar uma fonte de variafo tal como a sensibilidade de diferentes ninhadas de animais ou a varialo entre as placas de Petri no ensaio microbiolgico por difusfo. Este planejamento obriga que cada tratamento seja aplicado uma vez em cada bloco (ninhada, placa etc.) e s pode ser realizado quando o bloco for suficiente mente grande para acomodar todos os tratamentos.
Cruzlldo

Utilizar este planejamento quando o experimento puder ser dividido em blocos. Contudo, s possvel aplicar dois tratamentos por bloco. Por exemplo, um bloco pode ser um animal possvel de ser testado em duas ocasies diferentes. Tem como objetivo aumentar a preciso, eliminando a influncia da variaio dos animais, ao mesmo tempo que se equilibram os efeitos de qualquer diferena entre os nveis gerais de resposta, nas duas etapas do ensaio. Denominar

Adequado quando a resposta pode ser afetada por duas fontes de variaio, cada qual podendo ter k nveis diferentes. Por exemplo, se se realiza o experimento em k dias diferentes e por k experimentadores, ou se realiza um ensaio de antibi ticos por difuslo em placa, no qual os tratamentos podem ser aplicados num esquema de kk, onde cada tratamento s ocorre uma vez em cada fila e em cada coluna. Utilizar somente quando o nmero de colunas, filas e tratamentos for igual. As respostas sio registradas em forma de um quadrado denominado latino. Existem muitas possibilidades de quadrados latinos encontradas na literatura especializada. A partir de um podem-6e confeccionar outros, alternando ao acaso filas e/ou colunas. A Tabela 7 apresenta exemplo de quadrado latino com duas doses do padro e da amostra. Para qualquer delineamento, a distribuilo das unidades experimentais nos blocos deve ser feita por procedimento ao acaso, sendo as unidades mantidas o mais uniformemente possvel antes e durante o experimento.

Tem por objetivo estudar a validade do ensaio e calcular o erro residual. Com excelo do clculo do erro residual, a anlise dos dados de um ensaio idc!ntica para os delineamentos ao acaso, blocos ao acaso e quadrado latino. A seguir, serlo descri tas as frmulas para a anlise de cada tipo de ensaio. Consultar o glossrio de smbolos. As frmulas 510 apropriadas para o caso em que se esteja comparando uma nica amostra (A) contra o padrlo de referncia (P), como tambm para o caso de ensaios m61tiplos onde estejam includas h-I amostras (A ... Z). As frmulas para os ensaios cruzados nlo se enquadram no esquema geral e serlo apresentadas separadamente. Se necessrio, transformar as respostas (y) para cumprir as condies de validade descritas. Somar todos os valores y para cada tratamento e para cada preparalo, como se observa nas Tabelas 8 e 9. A partir destes dados, obter os contrastes lineares relacionados com as inclinaes das linhas dose-resposta. Quando slo ensaiadas tres doses de cada preparao se obtm tambm contrastes quadrticos,

que representam a curvatura das linhas. Ver frmulas nas Tabelas 8 e 9. A varialo total de respostas decorrente dos diferentes tratamentos pode ser dividida como se mostra na Tabela 10. As somas de quadrados 510 obtidas a partir dos valores das Tabelas 8 ou 9. K representa o quadrado da soma de todas as respostas obtidas no ensaio dividido pelo nmero total das mesmas:

Calcular o erro residual do ensaio subtraindo as variaes controladas no delineamento da varialo total nas respostas (Tabela 11). Nesta tabela, ~~ representa a soma dos quadrados de todas as respostas registradas no ensaio. Convm assinalar que a soma de quadrados reduzida correspondente ao item tratamentos igual ao somatrio das somas de quadrados reduzidas da Tabela 10 e que, para o quadrado latino, o nmero de respostas replicadas (n) igual ao nmero de filas, colunas ou tratamentos (k).

Para ensaiar a significncia das fontes de variayo relacionadas na Tabela 10, cada soma de quadrados reduzida obtida na tabela deve ser dividida pelo nmero correspondente de graus de liberdade para se obter os quadrados mdios. O quadrado mdio do erro residual (S2) quociente similar, obtido da linha apropriada na Tabela 11. Para obter a razo conhecida como F, dividir o quadrado mdio de cada fonte de variayo a ser testada por S2. Calcular a significncia de cada fonte, utilizando as Tabelas 4 e 5, em que se encontram valores de F crticos para probabilidade de erro de 5% (p = 0,05) e 1% (p = 0,01). Os valores de F crticos so obtidos na coluna correspondente ao nmero de graus de liberdade associado ao quadrado mdio da fonte ensaiada (glt) e na fila da tabela correspondente ao nmero de graus de liberdade associado com S2 (gh). Se o valor de F calculado for maior que o valor tabulado, a fonte de variayo ensaiada considerada "significativa" para o nvel de probabilidade utilizada. Considerar os ensaios "estatisticamente vlidos" se os testes apresentarem os seguintes resultados: 1) Regresso significativa, ou seja, F calculado maior que o tabulado para uma probabilidade p = O ,O 1. Indica que a inclinayo da linha doseresposta satisfat6ria; 2) Termos quadrticos no significativos, ou seja, os valores de F calculados devem ser menores que aqueles tabulados para p = 0,05. Equivale a satisfazer a condiyo de linearidade da relao entre a transformao da resposta utilizada e o logaritmo da dose; 3) Paralelismo no significativo. Caso se estejam ensaiando vrias amostras simultaneamente e se obtenha um desvio significativo do paralelismo, isto pode ser devido utilizao de alguma preparao que forneceu linha dose-resposta com uma inclinao diferente em relao s outras amostras. Neste caso, calcular o valor de l' para cada preparayo A ... Z, usando a equa'o

devem ser eliminados do ensaio e a anlise repetida desde o incio. Em ensaios com erro residual muito grande, uma razo F "significativa" para o termo preparayes pode indicar que a suposio de potncia que serviu de base para a preparao das diluies n[o foi correta. Isto no condio de invalidade. Chegando-se a essa conclus[o, a potncia estimada no ensaio pode ser usada como potncia suposta em ensaios posteriores. Nos testes de paralelismo e quadrticos podem ocorrer por acaso valores de F muito baixos, menores que 1. Se isto acontecer repetidamente, pode ser indicao de que n[o se cumpriram as condies supostas, o que deve ser investigado mais profundamente. No caso de ensaios cruzados, com esquema de clculo especial, as frmulas a utilizar encontramse nas Tabelas 13 e 14. Existem trs termos de interaes devidos s rplicas dentro de cada grupo: fases x preparayes, fases x regresso e fases x paralelismo. Como nos delineamentos anteriormente discutidos, cada soma de quadrados reduzida deve ser dividida pelo nmero correspondente de graus de liberdade para se obter os quadrados mdios. No caso do delineamento duplo cruzado, obtm-se dois quadrados mdios correspondentes aos errOS I e 11, que se denominam si e s11' Dividir o

quadrado mdio de cada fonte de variao pelo S2 apropriado para se obter a razo F. Para as fontes paralelismo, fases x preparaes, fases x regre'sso, utiliza-se fontes, utiliza-se slI' Calcular a significncia da fonte utilizando as Tabelas 4 e 5. Se o F calculado for maior que o valor tabulado, para os graus de liberdade da fonte ensaiada (gld e do S2 correspondente (gh), a fonte de variao considerada "significativa" para o nvel de probabilidade utilizada (p = 0,05 ou P = 0,01). Para que o ensaio seja vlido, a regresso deve ser significativa e o paralelismo e as trs interaes n[o devem ser significativas. No ensaio cruzado, o teste de paralelismo nlo muito sensvel, pois depende da varialo entre blocos (animais). Estabelecida a validade estatstica dos ensaios feitos com qualquer delineamento, calcular a potncia e os limites de confiana pelos mtodos descritos a seguir. sf, Para as outras

Cada l' calculado deve ser comparado com o valor da Tabela 12, onde gll = h -1 e gl2 igual ao nmero de graus de liberdade associado com S2. Se encontrar valor de t "significativo" para alguma amostra, todos os dados relativos a esta preparayo

VI.S.4. ESTIMATIVA DA POTeNCIA

E LIMITES DE CONFIANA

Calcular primeiro a resposta mdia para cada preparalo (Yp, YA ... yz)

MA RA MAs MAl RAS

Yp = irp-

(10)

= =

e analogamente para outras preparaes. Chamando I o intervalo entre log dose conse cutiva de cada preparalo nos ensaios com duas doses de cada preparalo obtm-se a inclinao comum (b), a partir da equao

M + log SA antilog MA MAs + 10gSA Mi + 10gSA antilog MAs RAi

(16) (17) (18)

(l9)

antilog MAi

Valores perdidos: Em ensaio balanceado requer-se o mesmo nmero de observaes em cada total. Se alguma resposta for perdida por causa nlo relacionada com os tratamentos aplicados, como a morte de um animal ou a quebra de algum tubo de ensaio, a anlise estatstica toma-se muito mais complexa. Pode-se restabelecer o equilbrio de dois modos: I) Reduzir o nmero de observaes nos grupos maiores at que o nmero de respostas seja o mesmo para cada tratamento. Be o delineamento for totalmente ao acaso, pode-se subtrair a mdia de cada grupo maior, tantas vezes quantas forem necessrias, ou eliminar uma ou mais respostas de cada grupo maior, selecionando-as ao acaso. Para ensaio de blocos ao acaso, conservar somente os blocos completos; 2) Alternativamente, um grupo casualmente menor pode ser recomposto no tamanho original, quando o nmero de respostas perdidas no for maior que um em qualquer tratamento ou 5% no total do ensaio. Neste caso, calcular a substituio do valor perdido. Perde-se um grau de liberdade

Lp + LA + ... Lz Inh

Para ensaios com trJ doses de cada preparao, o denominador Inh deve ser substitudo por 2 Inh. O logaritmo da razo de potncias da amostra A (M), antes de corrigir pelo valor de SA,

-YP M'A = YA b
A potncia calculada estimativa da verdadeira potncia de cada amostra. Os limites de confiana (com 5% de probabilidade de excluir a verdadeira potncia) podem ser calculados como o antilogaritmo da frmula
M'As _ CM' ts..;c )_1_ +_1_ + {YP-YAf M'Ai A b Np NA E - S1 t1 (l3)

na varincia do e"o
a) Se substituir restantes b) Se substituir

S2

para cada valor substitudo.

Obter E da Tabela 10. O S2 o erro residual da Tabela 11 dividido por seus graus de liberdade e t se encontra na Tabela 3 de acordo com os graus de liberdade de s 2 Para ensaios balanceados de 2 e 3 doses por preparao, a frmula para os limites da equao 13 pode simplificar.se:
MM~S CM. =
Ai

o delineamento totalmente ao acaso, o valor perdido pela mdia das respostas do grupo incompleto; o delineamento de blocos ao acaso, o vaior perdido aplicando a frmula

y'

nB' +kT' -G' (n-I)(k-I)

(C -1) (CM'A2 + c'12)

(15)

em que c' coeficiente obtido na Tabela 15 e C, medida da significncia da regresso. Em ensaio com inclinao bem definida o valor de C estar muito prximo da unidade. Obter a razo de potncia (RA) e os limites de confiana (Rs, Ri) tomando os antilogaritmos dos valores obtidos a partir das frmulas 12 e 15, aps somar log SA a ambos:

em que B' o total incompleto das respostas no bloco que contm o valor perdido, T' o correspondente total incompleto do tratamento que tem o vaior perdido, G' a soma de todas as respostas registradas no ensaio. Como se definiu anteriormente, n o nmero de blocos e k o nmero de tratamentos ou doses; c) Se o ensaio estiver baseado em delineamento de quadrado latino, o valor perdido (y') se obtm da equao , y

k(B' + C' + T') - 2G' (k-l) (k-2)

(21)

em que B' e C' so as somas das respostas nas filas e colunas, respectivamente, que contm o valor perdido. Neste caso, k = n. Se houver perda de mais do que um valor, substituir temporariamente, pela mdia do tratamento respectivo, todos os lugares vazios, exceto um. Completar este lugar com o valor y', calculado pela equao 21. Substituir um por um os valores que haviam sido colocados temporariamente; usando o valor calculado com a equao 21. O processo se repete desde o incio (29 ciclo) e assim sucessivamente, at se obter, em dois ciclos consecutivos de clculo, conjunto estvel de valores y' para todas as observaes perdidas. Se o nmero de valores substitudos for pequeno em relao ao nmero total de observaes do ensaio (menor que 5%), a aproximao decorrente das substituies descritas e da reduo dos graus de liberdade, equivalente ao ninero de valores substitudos, geralmente satisfatria. Porm, a anlise deve ser interpretada com cwdado, sobretudo se existe predominncia de valores perdidos em um tratamento ou bloco particular. O mesmo vlido para o caso de valores perdidos nos planejamentos cruzados.
Ensaios parcialmente balanceados

modo, aumentar a preciso do resultado. A equao que se emprega para clcular a potncia :

Esta frmula similar frmula 12, porm subtrai-se a metade do intervalo log-dose quando se omitirem as respostas da dose menor e adicionase o mesmo intervalo quando se desprezar a dose maior. As respostas mdias YA e yp so obtidas da mesma forma que nos ensaios totalmente balanceados (frmula 10), porm deve-se introduzir modificao no clculo da inclinao (b) de acordo com o delineamento do ensaio. Para ensaios mltiplos, que originariamente teriam duas doses de cada preparao, os contrastes lineares (Lp ... Lz) devem se formar excluindo LA (como as respostas para ai ou a2 foram eliminadas, no possvel formar um contraste LA)' Calcular a inclinao a partir da mdia dos valores de L dividida por In: Lp+ ...

Lz

In (h -1)

Se a potncia presumida das amostras (usada para calcular as doses de ensaio) for muito difeb = ~ rente da verdadeira potncia, possvel que a Para ensaios mltiplos com trs doses de cada dose maior fornea resposta mxima ou que a preparao, obter LA da Tabela 8 e todos os dose menor fornea resposta muito baixa ou nula. Estas respostas estaro fora da zona linear da outros contrastes da Tbela 9. A equao para a curva log dose-resposta e os testes de 'Validade inclinao : indicaro curvatura e/ou desvio de paralelismo 2 (Lp + ... + Lz) + LA (25) "significativo" . b In (4h - 3) Neste caso, as respostas dose maior ou menor da amostra podem ser desprezadas, calculando-se Se existir uma nica amostra, a equao se um valor de potncia relativa a partir dos dados reduz a: remanescentes. Esta potncia pode ser tomada como potncia suposta para selecionar doses de 2 Lp + LA amostra para outro ensaio, com o objetivo de se obterem respostas similares ao padro e, deste 51n

VI.6. MDIAS MVEIS

No caso particular do ensaio biolgico ckJ heparina, o intervalo entre a dose que pennite a coagulalo e aquela que a inibe tio pequeno que a curva dose-resposta nlfo pode ser detenninada explicitamente. Para interpolar o logaritmo da dose correspondente a 50% da coagulalo, tanto para o padrlo quanto para a amostra, utilizam-se as mdias mveis. Clculo da patincia Transformar em logaritmo os volumes da prepa ralo padrlo usados em 5 ou 6 tubos que consti tuem a srie, de modo que 2 ou 3 tubos apresen tem graus de coagulalo iguais ou menores que 0,5 e 2 ou 3 tubos tenham graus iguaisou maiores que 0,5. Confeccionar tabela correlacionando os tubos numerados consecutivamente com o grau de coagulalo observado. Denominar x os logaritmos dos volumes utili zados e Y os graus de coagulalo correspondentes. Calcular as mdias emparelhadas Xi e Yidos tubos 1, 2 e 3, dos tubos 2, 3 e 4, dos tubos 3,4 e 5 e, quando a srie consistir de 6 tubos, dos tubos 4, 5 e 6, respectivamente. Se para um destes pares de mdias o grau de coagulalfomdio Yi exata

mente 0,50, o correspondente Xi a mediana do logaritmo do volume da preparalo padro xp. Caso isto nlo ocorra, interpolar o xp a partir dos valores emparelhados de Yi, Xi e Yi+ xi+1 que I, ocorram imediatamente abaixo e acima do grau 0,5, como: xp = Xj + (Yi - O,5)(Xj+1 - Xj)/(Yi - Yi+1) (27)
A partir dos dados emparelhados obtidos nos tubos da amostra, calcular do mesmo modo a mediana do logaritmo do volume XA.O logaritmo da potncia da amostra :

MA = Xp- XA+ log SA

(28)

em que SA a suposilo da potncia da amostra feita na prepara'o da soluo correspondente dos tubos da amostra. Repetir o ensaio independentemente e calcular a mdia de dois ou mais valores de M para obter M. Caso a segunda detenninao de M difira da primeira mais que 0,05, continuar realizando ensaios at que o logaritmo do intervalo de con fiana, calculado conforme final da selo Combi na40 de estimativas de potncia, no exceda 0,20. A potncia da heparina sdica : R

antilog de M

Em alguns ensaios nlo possvel nem conve niente medir o efeito em cada unidade experimental (por exemplo, animal) em escala quantitativa. Neste caso, podem-se medir efeitos de tudo ou nada, como morte ou ocorrncia de sintoma pr~stabelecido. A proporlo de unidades experimentais que apresentam o sintoma constitui o resultado. Esses ensaios slo chamados quantais. Neste captulo ser apresentado clculo aproxi mado. No caso de dispor de facilidades de computafo, pode-se recorrer ao clculo terico exato. Devese registrar, para cada dose, a porcentagem de animais com efeito positivo. Exemplo: porcen tagem de camundongos em convulsllo. TransConnar as porcentagens em probitos, utilizando a Tabela 16. Cada probito ser considerado como o valor da resposta transformada (y). O mtodo a seguir utilizado quando 010 ocorrem respostas equiva. lentes a porcentagens zero ou 100. Nesse caso, empregar mtodos estatsticos completos de mxima probabilidade Oogto ou probito). Para cada valor de y, devese obter um valor de coeficiente de ponderafo (w) na Tabela 17.

As frmulas das somas de quadrados para os testes de validade slo as mesmas utilizadas nos ensaios indiretos quantitativos (Tabela 10), tomando n 1, com excelo do termo erro (S2), que tem graus de liberdade iguais a infinito, e se calcula como:

S2

=_k_

nl:w
em que k nl1mero de tratamentos, n = nmero de animais utilizados em cada tratamento. Calcular a potncia e os limites de confiana usando as frmulas 12 e 19. Este mtodo aproximado til quando o ensaio delineado de modo que as respostas em porcentagem correspondentes s doses menores e maiores estejam uniforme mente espaadas ao redor de 50%. Se wna das doses testadas fornecer respostas zero ou 100%, estas podem ser desprezadas. Neste caso, obter a estimativa de potncia pelos mtodos descritos na

seo Ensaios parcilllmente balllnceados.

VI.8. COMBINAO DE ESTIMATIVAS DE POTNCIA

Quando se realizam n' ensaios independentes para cada amostra, os resultados podem ser combi nados a fim de se obter uma potncia estimada com intervalo de confiana reduzido, que cumpra os limites estabelecidos em cada monografia. Existem vrios mtodos para combinar ensaios repetidos.

Adotar simplificaes, levando-se em conta dois aspectos: a) corrigir estimativas do log da potncia (M') pela potncia suposta (SA) antes de realizar as combinaes (M = M' + 10g SA); b) as estimativas devem ser independentes, ou seja, obtidas em ensaios separados.

VI.8.1. POT:eNCIA MDIA PONDERADA E LIMITES DE CONFIANA

Supor que foram analisados resultados de n' ensaios para se fornecerem n' valores de M com limites de confiana (em logaritmos) associados a cada valor de M, obtidos segundo as equaes 13 a 19. Para cada ensaio, obter o intervalo de confiana logartmico (L), subtraindo o limite inferior do superior. Calcular tambm uma ponde. ra'o (W) para cada valor de M a partir da equailo 30, onde t o mesmo valor empregado no clculo do intervalo de confiana:

correspondente na Tabela 18 para de liberdade, considera-se que no para suspeitar da heterogeneidade Neste caso, a potncia mdia e os lados so corretos.

(n' - 1) graus
h elementos de potncias. limites calcu-

Se o valor de X~ for maior que o da Tabela 18, considera-se que as potncias so heterogneas, ou seja, que a disperso dos valores individuais de M maior que a esperada, de acordo com os respecti. vos limites de confiana. Neste caso, no aplicar as frmulas 31 e 33, averiguar a origem desta heterogeneidade e, caso se considerar adequado, calcular M usando semi-ponderaes W' :

W=4(1
L2 Para cada ensaio, calcular o produto WM e dividir seu somatrio pelo somatrio de todas as ponderaes a fim de se obter o logaritmo da potncia mdia ponderada (M), conforme a equailo 31:

W'

1/(V+v)

(35)

= ~WM/~,W

e v a varincia da heterogeneidade entre ensaios e se calcula pela equao:

o erro padro da potncia mdia (SM) a raiz quadrada da recproca da ponderao total:
Quando V varia de tal maneira que v calculado nmero negativo, pode.se calcular v aproximado, omitindo-se o termo aps o sinal negativo na equaio 37. _ Para calcular a mdia semi.ponderada (M), substituir na equao 31 os valores de W e ~W pelos respectivos valores de W' e ~W':

Calcular os limites de confiana aproximados (p = 0,05), a partir do antilogaritmo dos valores obtidos atravs da frmula 33:

t sM

(33)

Obtm-se o valor de t na Tabela 3, com graus de liberdade equivalentes soma dos graus de liberdade da varincia do erro dos ensaios indi viduais. Este mtodo aproximado de combinao d resultados satisfatrios quando: a) C for menor que 1,1 para cada um dos n' ensaios e b) as estio mativas individuais da potncia formarem um conjunto homogneo de acordo com o teste de homogeneldade realizado, aplicando a estatstica 2 X Esta calculada elevando-se ao quadrado a diferena entre cada valor de M em relao mdia ponderada (fd), multiplicando-se este quadrado pela ponderailo correspondente (W) e somandose os valores para todos os ensaios:

M = ~ (W'M)/
n'

Pode-se considerar este valor de M prximo ao centro de um intervalo de confiana de tamanho aproximado L~, que a raiz quadrada de:

n'

~W'

(38)

L~

4t2 / ~W'

(39)

em que t, da Tabela 3, tem graus de liberdade iguais ao somatrio de graus de liberdade da varincia do erro dos n' ensaios individuais. No caso especial do ensaio de heparina, todos os logaritmos de potncia (M) tm a mesma pon derailo e o intervalo de confiana de logaritmo da estimativa da potncia M se determina corno segue: Clculo da varincia do erro com n'-l graus de liberdade:

Se o valor de

x~ calculado for menor que o

Determinar o intervalo de confiana om Ioga- n' ritmos (L)

nmero de estimativas individuais da potencia.

Calcular os limites de confiana: em que s Ms = M + 1/2 L Mi = M -1/2 L Rs = antilog Ms Ri = antilog Mi (42) (43) (44) (45)

=.JiY. t (Tabela 3) com n'-I graus de liberdade.

Em amostras de uma populaio normal. valoras iguais ou maioras qua GI, G2 a G3 ocorram com probabilidade p 0.02 quando podem existir dados aberrantas s num extremo. ou com p 0,04, quando ocorrerem em qualquer extremo.

GI
N

3 ,976 8 .780 14 ,602

4 .846 9 .725 15 ,579

5 .729 10 ,678 16 .559

6 ,644 11 .638 17 ,542

7 .586 12 .605 18 ,527 13 ,578 19 .514 20 .502 21 ,491 22 ,481 23 ,472 24 .464

G2
N

G3

Nf1de intervalos k

VlJlortJ$de 14 crlticos

/fIJ

intervalos de n obserVlllJtIS cada um

2 0,962 .813 ,681 ,581 ,508 ,451 ,407 ,369 .339

3 0,862 ,667 ,538 ,451 ,389 .342 ,305 ,276 ,253

5 0,764 ,563 ,446 ,369 ,316 ,278 ,248 .224 ,204

6 0.736 .539 ,425 ,351 ,300 .263 ,234 ,211 ,193

8 0.702 ,507 ,398 ,328 ,280 .245 ,218 ,197 ,179

9 0,691 ,498 ,389 ,320 ,273 ,239 ,213 ,192 ,174

10

2 3 4 5 6 7 8 9 10

0,803 ,601 ,479 ,398 ,342 ,300 ,267 ,241 .220

0,717 ,521 ,410 ,338 .288 ,253 ,225 .203 ,185

0,682 .489 ,382 .314 .267 .234 .208 ,188 ,172

N9de intervalos k

Valores de (k + 2) R+ critico. 2

para intervalos de n observs8as cadlJ um

3 3,04 3,03 3,02 3,03 3,11

5 2,44 2,42 2.41 2,41 2,44

6 2.30 2.29 2,28 2,28 2,29

8 2.14 2,13 2,12 2,11 2,11

9 2.09 2,07 2.06 2,05 2.06

10

10 12 15 20 50

4,06 4,06 4,06 4,13 4,26

2,65 2,63 2,62 2,62 2,67

2,21 2,20 2,18 2,18 2,19

2.05 2,04 2,02 2.01 2,01

VI.9~2

TABELAS ESTATtSTICAS

Tabela 3 - Distribuiio de t
Probllbildlldtl gl ,9

,8 ,325 ,289 ,277 ,271 ,267 ,265 ,263 .262 ,261 .260 ,260 ,259 ,259 ,258 ,258 .258 ,257 ,257 ,257 .257 ,257 .256 ,256 ,256 .256 .256 .256 .256 ,256 ,256 ,255 ,254 .254 ,253

,7

,6

,5

,4

,3 1,963 1,386 1,250 1,190 1.156 1.134 1,119 1.108 1,100 1,093 1,088 1,083 1.079 1,076 1.074 1,071 1.069 1.067 1,066
1,064

,2

,1

,05

,02

,01

,001

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 40 60 120
00

,158 ,142 ,137 ,134 .132 .131 ,130 ,130 ,129 ,129 .129 ,128 ,128 ,128 .128 ,128 ,128 ,127 ,127 ,127 ,127 ,127 .127 ,127 ,127 .127 ,127 .127 ,127 .127 ,126 ,126 ,126 .126

,510 ,445 ,424 ,414 ,408 ,404 ,402 ,399 ,398 .397 ,396 .395 ,394 ,393 ,393 ,392 ,392 ,392 ,391 ,391 .391 ,390 .390 .390
,390

,727 ,617 ,584 ,569 ,559 ,553 ,549 ,546 ,543 ,542 ,540 ,539 ,538 ,537 .536 ,535 ,534 .534 .533 .533 .532 ,532 .532 ,531 ,531 .531 ,531 ,530 ,530 .530 ,529 ,527 ,526 ,524

1,000 ,816 ,765 .741 ,727 ,718 ,711 ,706 ,703 .700 .697 ,695 ,694 .692 ,691 ,690 ,689 .688 .688 ,687 ,686 ,686 .685 ,685 ,684 ,684 ,684 ,683 .683 ,683 ,681 ,679 .677 ,674

1,376 1,061 ,978 ,941 ,920 ,906 ,896 ,889 .883 .879 .876 ,873 .870 ,868 ,866 ,865 ,863 ,862 ,861 .860 ,859 ,858 ,858 ,857 ,856 ,856 ,855 ,855 ,854 ,854 ,851 ,848 ,846 ,842

3.078 1,886 1,638 1,533 1.476 1.440 1,415 1,397 1,383 1.372 1,363 1,356 1.350 1,345 1.341 1,337 1,333 1.330 1.328 1,325 1,323 1.321 1,319 1,318 1.316 1,315 1,314 1,313 1.311
1.310

6,314 2,920 2,353 2,132 2,015 1,943 1,895 1,860 1,833 1.812 1,796 1,782 1,771 1,761 1,753 1,746 1.740 1,734 1.729 1,725 1,721 1.717 1.714 1,711 1,708 1.706 1,703 1.701 1,699 1,697 1.684 1.671 1,658 1,645

12,706 4,303 3,182 2,776 2,571 2,447 2,365 2,306 2,262 2,228 2.201 2,179 2,160 2.145 2,131 2,120 2.110 2,101 2,093 2.086 2.080
2,074

31,821 6.965 4.541 3,747 3,365 3,143 2,998 2,896 2,821 2,764 2.718 2,681 2.650 2,624 2,602 2,583 2.567 2,552 2,539 2,528 2,518 2.508 2,500 2,492 2.485 2,479 2,473 2.467 2,462 2,457 2,423 2,390 2,358 2.326

63,657 9.925 5,841 4,604 4,032 3,707 3,499 3.355 3.250 3,169 3,106 3,055 3,012 2,977 2,947 2,921 2,898 2.878 2,861 2,845 2.831 2,819 2,807 2,797 2,787 2,779 2,771 2.763 2,756 2,750 2,704 2.660 2,617 2.576

636,619 31,598 12,924 8,610 6,869 5,959 5,408 5,041 4.781 4,587 4,437 4,318 4.221 4,140 4.073 4.015 3,965 3,922 3,883 3,850 3.819 3,792 3,767 3.745 3.725 3,707 3,690 3,674 3,659 3,646 3,551 3,460 3,373 3,291

.....

1,063 1.061 1.060 1.059 1,058 1.058

1,057 1,056

2,069 2.064 2,060

2.056

,390 ,389 ,389 ,389 ,389 ,388 ,387 ,386 ,385

1,055 1,055 1,060 1,046 1,041 1,036

2,052 2,048 2.045 2.042 2.021 2,000 1.980 1,960

1,303 1.296 1,289 1,282

TABELAS ESTATlsnCAS

VI.9.-3

Tabela 4 - RazIo de varinciu (F) - Ponto. de p

= 0,05
8

2
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 40 60 120
00

3 215.7 19,16 9,28 6,69 5,41 4,76 4,35 4.07 3,86 3,71 3,69 3,49 3,41 3,34 3,29 3,24 3,20 3,16 3,13 3,10 3,07 3.05 3,03 3,01 2,99 2,98 2,96 2,95 2,93 2,92 2,84 2,76 2,68 2,60

4
224,6 19,26 9,12 6,39 5,19 4,53 4,12 3,84 3,63 3,48 3,36 3,26 3,18 3,11 3,06 3,01 2,96 2,93 2,90 2,87 2,84 2,82 2,80 2,78 2,76 2,74 2,73 2,71 2,70 2,69 2,61 2,52 2,46 2,37

5 230,2 19,30 9,01 6,26 5,05 4,39 3,97 3,69 3,48 3,33 3,20 3,11 3,02 2,96 2,90 2,85 2,81 2,77 2,74 2,71 2,68 2,66 2,64 2,62 2,60 2,59 2,57 2,56 2,54 2,53 2,45 2,37 2,29 2,21

6 234,0 19,33 8,94 6,16 4,95 4,28 3,87 3,58 3,37 3,22 3,09 3,00 2,92 2,85 2,79 2,74 2,70 2,66 2,63 2,60 2,57 2,55 2,53 2,51 2,49 2,47 2,46 2,44 2,43 2,42 2,34 2,25 2,17 2,10

72
243,9 19,41 8,74 5,91 4,68 4,00 3,57 3,28 3,07 2,91 2,79 2,69 2,60 2,53 2,48 2,42 2,38 2,34 2,31 2,28 2,25 2,23 2,20 2,18 2,16 2,15 2,13 2,12 2,10 2,09 2,00 1,92 1,63 1,75

24
249,0 19,46 8,64 5,71 4,53 3,84 3,41 3,12 2,90 2,74 2,61 2,50 2,42 2,35 2,29 2,24 2,19 2,15 2,11 2,08 2,05 2,03 2,00 1,98 1,96 1,95 1,93 1,91 1,90 1,89 1,79 1,70 1,61 1,52

00

161.4 18,61 10,13 7,71 6,61 5,99 5,59 5,32 5,12 4,96 4,84 4,75 4,67 4,60 4,54 4,49 4,45 4,41 4,38 4,35 4,32 4,30 4,28 4,26 4,24 4,22 4,21 4,20 4,18 4,17 4,08 4,00 3,92 3,84

199,5 19,00 9,65 6,94 5,79 5,14 4,74 4,46 4,26 4,10 3,98 3,88 3,80 3,74 3,68 3,63 3,59 3,55 3,52 3,49 3,47 3,44 3,42 3,40 3,38 3,37 3,35 3,34 3,33 3,32 3,23 3,15 3,07 2,99

238,9 19,37 8,84 6,04 4,82 4,15 3,73 3,44 3,23 3,07 2,95 2,85 2,77 2,70 2,64 2,59 2,55 2,51 2,48 2,45 2,42 2,40 2,38 2,36 2,34 2,32 2,30 2,29 2,28 2,27 2,18 2,10 2,02 1,94

254,3 19,50 8,53 5,63 4,36 3,67 3,23 2,93 2,71 2,54 2,40 2,30 2,21 2,13 2,07 2,01 1,96 1,92 1,88 1,84 1,81 1,78 1,76 1,73 1,71 1,69 1,67 1,65 1,64 1,62 1,51 1,39 1,25 1,00

r,

VI.9 .

TABELAS ESTATlSTlCAS Tabela 5 - Rufo de variindu (F) - Pontos de p = 0,01

g/l 912

3 5403 99,17 29,46 16,69 12,06 9,78 8,46 7,59 6,99 6,65 6,22 5,95 5,74 5,56 5,42 5,29 5,18 5,09 5,01 4,94 4,87 4,82 4,76 4,72 4,68 4,64 4,60 4,57 4,54 4,51 4,31 4,13 3,95 3,78

4 5625 99,25 28,71 15,98 11,39 9,15 7,85 7,01 6,42 5,99 5,67 5,41 5,20 5,03 4,89 4,77 4,67 4,58 4,50 4,43 4,37 4,31 4,26 4,22 4,18 4,14 4,11 4,07 4,04 4,02 3,83 3,65 3,48 3,32

5 5764 99,30 28,24 16,62 10,97 8,75 7,46 6,63 6,06 5,64 5,32 6,06 4,86 4,69 4,56 4,44 4,34 4,25 4,17 4,10 4,04 3,99 3,94 3,90 3,86 3,82 3,78 3,75 3,73 3,70 3,51 3,34 3,17 3,02

6 5859 99,33 27,91 16,21 10,67 8,47 7,19 6,37 5,80 5,39 6,07 4,82 4,62 4,46 4,32 4,20 4,10 4,01 3,94 3,87 3,81 3,76 3,71 3,67 3,63 3,59 3,56 3,53 3,50 3,47 3,29 3,12 2,96 2,80

8 5982 99,37 27,49 14,80 10,29 8,10 6,84 6,03 5,47 5,06 4,74 4,50 4,30 4,14 4,00 3,89 3,79 3,71 3,63 3,56 3,51 3,45 3,41 3,36 3,32 3,29 3,26 3,23 3,20 3,17 2,99 2,82 2,66 2,51

12

24 6234 99,46 26,60 13,93 9,47 7,31 6.07 5,28 4,73 4,33 4,02 3,78 3,59 3,43 3,29 3,18 3,08 3,00 2,92 2,86 2,80 2,75 2,70 2,66 2,62 2,58 2,55 2,52 2,49 2,47 2,29 2,12 1,95 1,79

00

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 40 60 120
00

4052 98,50 34,12 21,20 16,26 13,74 12,25 11,26 10,56 10,04 9,65 9,33 9,07 8,86 8,68 8,53 8,40 8,28 8,18 8,10 8,02 7,94 7,88 7,82 7,77 7,72 7,68 7,64 7,60 7,56 7,31 7,08 6,85 6,64

4999 99,00 30,82 18,00 13,27 10,92 9,55 8,65 8,02 7,56 7,20 6,93 6,70 6,51 6,36 6,23 6,11 6,01 5,93 5,85 5,78 5,72 5,66 5,61 5,57 5,53 5,49 5,45 5,42 5,39 5,18 4,98 4,79 4,60

6106 99,42 27,05 14,37 9,89 7,72 6,47 5,67 5,11 4,71 4,40 4,16 3,96 3,80 3,67 3,55 3,45 3,37 3,30 3,23 3,17 3,12 3,07 3,03 2,99 2,96 2,93 2,90 2,87 2,84 2,66 2,50 2,34 2,18

6366 99,50 26,12 13,46 9,02 6,88 5,65 4,86 4,31 3,91 3,60 3,36 3,16 3,00 2,87 2,75 2,65 2,57 2,49 2,42 2,36 2,31 2,26 2,21 2,17 2,13 2,10 2,06 2,03 2,01 1,80 1,60 1,38 1,00

Tabela 7 - Exemplo de ordem de doses no quadrado latino

Duplo cruzado Grupo FIISe 1 1
PI P2 81 82

Triplo cruzaclo
a2 Pl 81 82 81 Pl

P2
82 Pl 81

Fase 1/
82 81 P2 Pl

Fase 1
PI

Fase P2 1/
81 83 82 81 P3 Pl

P2
a2

2 3
4

P2
P3 ai 82 83

P2

5 6

P2

Pl

PJrIo
(p)

tfAmortnt

AmtntnJ

h- 1

(A) AI A2 ZI Z2 ZI + Z2 =Z

(Z)

Dose menor (soma de .poltas) Dose maior (soma de respoltas) Por preparalo (soma de respostas) Contrllte linear

Pl P2 P1 + P2 = P P2 - Pl = Lp

AI + A2 = A A2 - AI = LA

Z2 - ZI = LZ

PBdnJo

(P) Dose menor (soma de respostas) Dose m4dia (soma de respostas) Oose maior (soma de respostas) Por preparalo (soma de respostas) Contraste linear Contraste quadrtico Pl P2 P3 Pl + P2 + P3 = P P3- Pl = Lp PI-2P2 + P3= Qp AI A2 A3

tf AlI7D$tnJ (A) ZI Z2 Z3

AmtntnJ

h- 1

(Z)

AI + A2 + A3= A A3 - AI = LA AI - 2A2 + A3 = QA

ZI + Z2 + Z3 = Z Z3 - ZI = LZ ZI-2Z2+Z3=QZ

Fonte de verielo

GreU$ de liberdede fgl}

Some de quedredOl reduzide EMeo de dUII dOllS EMeio de trls dosas

Preparaes

h-1

p2 + A2 + 0'0+ Z2
211

-K
=E

p2 +A2 +.0.+ Z2
311

-K
=E

(Lp + LA +.0.+ LZ)2 Regresdo

1 211h

(Lp + LA + .. + LZ)2
211h

PlIralelismo

h-1

2 2 2 (Lp + LA + .. + LZ)
o

211

-E

2 2 (Lp + LA +
2n

2 + LZ)

-E
=Q

(Op + QA + "0 + QZ)2 Quadrtlco Diferena de Quadrticos

1 6nh

222 Qp + QA +'00 +QZ

h-1 6n

-Q

Font de 'ItIrlalo

GraU' de liberdade

Somll th quadrados raduzide Da/in ",.nto

110

f,,)
k-1

lICeIO

Bloco.

110

.caiO

QUlldrlldo latino

Tratamentos BlocCll(filas) Blocos (coluna) erro residual TOTAL

2 2 2 P1 + P2 + . + Zd
n

-K

2 2 2 P1 + P2 + ... + Zd
n

-K -K

n-1

--
I:y2 - K

F2 + F2 + 1 2
k

2 ... + Fn

p2 + p2 + + Z2 1 2 d -K n 2 2 2 F1+F2++Fn
k

...

-K

n-1

--
I:y2 _ K

2 2 2 C1 +C2+ .. +Cn
k

-K

Por diferena
N - 1

I:y2 - K

Obtida subtraindo, da sorna de quadrados reduzida total, todas as outras sornas de quadrados reduzidas calculadas para o delineamento correspondente.

Tabela 12 - Tabele de t' pua compualo bicauclal entre (h - 1) amostras e um padrlo para um coeficiente de confiana conjunto de p = 0,95
gll gh

=
3

(h - ')

= nf/mtJI'O de amostras
4

(excluindo padr'o)

2 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 16 16 17 18 19 20 24 30 40 60 120
00

5 3,62 3,39 3.24 3.13 3.05 2,99 2.94 2,90 2,87 2.84 2.82 2.80 2.78 2.76 2,75 2.73 2.70 2.66 2.62 2.58 2.56 2.51

6 3,73 3.49 3.33 3,22 3,14 3.07 3,02 2.98 2.94 2,91 2.89 2.87 2.85 2.83 2.81 2,80 2,76 2.72 2.68 2.54 2.60 2,57

8 3.90 3.64 3.47 3.35 3,26 3,19 3.14 3.09 3.06 3,02 3,00 2,97 2,96 2,94 2,92 2.90 2.86 2.82 2,77 2.73 2,69 2.65

9 3,97 3.71 3.53 3,41 3.32 3.24 3.19 3.14 3.10 3,07 3,04 3,02 3.00 2.98 2.96 2.95 2,90 2.86 2.81 2,77 2.73 2.69

2,57 2,46 2.36 2.31 2,26 2,23 2.20 2.18 2.16 2,14 2.13 2,12 2,11 2.10 2.09 2,09 2.06 2.04 2.02 2.00 1,98 1,96

3.03 2.86 2.75 2,67 2.61 2.57 2,53 2,50 2,48 2.46 2,44 2.42 2.41 2.40 2.39 2.38 2.35 2.32 2.29 2,27 2.24 2.21

3,29 3,10 2.97 2.88 2.81 2.76 2,72 2.68 2,65 2.63 2.61 2,59 2,58 2.56 2.55 2,54 2.51 2.47 2.44 2,41 2,38 2,35

3.48 3,26 3.12 3.02 2,95 2.89 2,84 2.81 2.78 2,75 2.73 2.71 2,69 2.68 2.66 2.65 2.61 2.58 2.54 2,51 2.47 2.44

3,82 3,57 3,41 3,29 3,20 3,14 3.08 3.04 3.00 2.97 2,96 2,92 2.90 2,89 2,87 2.86 2,81 2,77 2.73 2.69 2.65 2,61

FASE I Dose menor (soma de respostas) Dose maior (soma de respostas) Total FASE 11 Dose menor (soma de respostas) Dose maior (soma de respostas) Total Por preparao (soma de respostas)

FASE I FASE 11 TOTAL

P21- P11 = Lpt P211- P1I1 = LPII P2 + PI = Lp

~1-A11

= LAI

Lpt + LAI = LI Lpll + LAII = LII Lp+LA=I:L

A211- AlII = LAII A2 + AI = LA

Fontel dfll4rialo

GrtlU, dtI liberdsdtl ('O

Some dtI qUBdredol f'IIduzids

Par.lelllmo

2 2 Lp + LA
2n

-E

Fases X preparaes

2 2 2 2 PI + PII + A1+ Ali

n

-K

Fases X regresslo Erro I

F Prepera&l. 2 2 LI + LII E
2n

Diferena

Blocos - Pareleli.mo - (F X Preparaes) (F X Regresslo) 2 B2 + B2 + I 2 p2 + A2 2 ... + B2n

Blocos (.nim.is)

bl-1

-K

Prepara15es Regresslo

2n

K
2 =E

(Lp+ LAI N 2 2 FI + FII

2n

Fases

-K
-E -

Fa X paralelismo

2 Lpl

2 2 2 LplI + LAI + LAII

n

P.releli.mo - (F X Regresslol Erro 11 TOTAL

K = (I:y)2/N

Diferena N -1

Tot.1 - Blocos- Preparaes - RegressloFa - (F X Par.lelismol I:(V2) - K

N n bI 8

= = = =

nmero total de respostas nmero de riplices por dose incluldas.s duas f nmero de blocos (animais) som. das duas respostas para cada bloco (animal)

3/2
2

5/2 3 8/3
4

16/3 20/3 8

"

2 2,95 3,82 4,23 4,53 4,80 5,05 5,31 5,58 5,92 6,41 0,2 6,91 7,10 7,41

3 3,12 3,87 4,26 4,56 4,82 5,08 5,33 5,61 5,95 6,48 0,3 6,93 7,12 7,46

5
3,36 3,96 4,33 4,61 4,87 5,13 5,39 5,67 6,04 6,64 0,5 6,96 7,17 7,58

6 3,45 4,01 4,36 4,64 4,90 5,15 5,41 5,71 6,08 6,75 0,6 6,98 7,20 7,65

8 3,59 4,08 4,42 4,69 4,95 5,20 5,47 5,77 6,18 7,05 0,8 7,01 7,26 7,88

9 3,66 4,12 4,45 4,72 4,97 5,23 5,50 5,81 6,23 7,33 0,9 7,03 7,29 8,09

3,72 4,16 4,48 4,75 5,00 5,25 5,52 5,84 6,28 0,0 6,88 7,05 7,33

10 20 30 40 50 60 70 80 90

2,67 3,77 4,19 4,50 4,77 5,03 5,28 5,55 5,88 6,34 0,1 6,90 7,07 7,37

3,25 3,92 4,29 4,59 4,85 5,10 5,36 5,64 5,99 6,55 0,4 6,94 7,14 7,51

3,52 4,05 4,39 4,67 4,92 5,18 5,44 5,74 6,13 6,88 0,7 7,00 7,23 7,75

97 98 99

"

Probito$

0,0 0,001 0,015 0,131 0,439 0,637 0,439 0,131 0,015

0,1

0,2 0,001 0,025 0,180 0,503 0,627 0,370 0,092 0,008

0,3 0,002 0,031 0,208 0,532 0,616 0,336 0,076 0,006

0,4 0,002 0,040 0,238 0,558 0,601 0,302 0,062 0,005

0,6 0,003 0,050 0,269 0,581 0,581 0,269 0,050 0,003

0,6 0,005 0,062 0,302 0,601 0,558 0,238 0,040 0,002

0,7 0,006 0,076 0,336 0,616 0,532 0,208 0,031 0,002

0,8 0,008 0,092 0,370 0,627 0,503 0,180 0,025 0,001

0,9 0,011 0,110 0,405 0,634 0,471 0,154 0,019 0,001

1 2 3 4 5 6 7 8

0,001 0,019 0,154 0,471 0,634 0,405 0,110 0,011

gl

X2

gl

X2

1 2 3 4 5 6 7 8

3,84 5,99 7,81 9,49 11,07 12,59 14,07 15,51

9 10 11 12 13 14 15 20 25

16,92 18,31 19,67 21,03 22,36 23,69 25,00 31,41 37,65

Da equalo 3: s; = 1/22 [0,44042 Ensaio de digital pelo mtodo da parada cardlaca em cobaia A soluo do padrlo foi usada na concentrao de 0,0658 UI/ml. Uma diluio equivalente de amostra foi preparada a partir da po~ncia suposta de SA = 1,3 UI/lOO mg. As cobaias foram perfundidas aleatoriamente com soluo padro ou amostra, registrando-se o volume justamente necessrio para produzir a parada cardaca em cada animal. As respostas encontram-se na Tabela 19. Clculo da estimativa de patlncia limitas de confiana
fi

""... "" 1,33042 _ 19,~:412)

""

"" (1,53172,," ... "" 1,40722 _14,~~902)]

=
=

1/22 [27,3829 - 27,3396 + 19,8879 - 19,8500] 0,003691

Da equalo 2: 2 1 1 sM= 0,003691 ( 14 + 10) SM= ...;0,000632

0,000632

= 0,0251 Para p = 0,05 com 22 gl, t = 2,07 (Tabela 3)

Da equalo 7:

Da equalo 1: M' = 1,3974 - 1,4089 = - 0,0115 Da equa(o 6: M = -0,0115+logl,3 = 0,1024 Da equalo 5: R = antilogO,1024 = 1,27

~= antilog [0,1024 (2,07xO,0251)]

Rs = antilog [0,1024 + (2,07 x 0,0251)] = 1,43 Ri = antilog [0,1024 - (2,07 x 0,0251)] = 1,12 A estimativa mdia da potncia da amostra de digital 1,27 UI/ 100 mg. Os limites de confiana (p = 0,05) para a verdadeira potncia s(o 1,12 VI/l00 mg e 1,43 VI/l00 mg.

P.drfo DoselfltJII ml/lcg

P
Log dOIll Iflml xp Do", Ifltel ml/lcg

Amortl'll

A Log dOllllfltel x A

27,57 25,97 27,74 30,94 28,31 27,29 22,13 23,63 21,39 22,13 20,97 29,23 23,78 21,40 I:x
i

1,4404 1,4145 1,4431 1,4905 1,4519 1,4360 1,3450 1,3735 1,3302 1,3450 1,3216 1,4658 1,3762 1,3304 19,5841 1,3974 27,3829 0,003331 14

34,02 21,90 28,33 24,87 27,56 24,73 21,67 21,30 29,10 25,54

1,5317 1,3404 1,4523 1,3957 1,4403 1,3932 1,3359 1,3284 1,4639 1,4072

I:x

S2

14,0890 1,4088 19,8879 0,004211 10

Exemplo 2: Ensaio com trs doses, delineamento equivalentes da amostra foram prepuadas a partir completamente ao acaso da potncia suposta SA = 3000 UI/mg. Os ratos foram injetados subcutaneamente com Ensaio de gonadotrofina corinica humana 0,20 mI da solulo respectiva, durante trs dias pelo mdtodo do aumento de peso de consecutivos, num total de 0,6 ml/rato. vesculas seminais Os pesos das vesculas seminais encontram~e na Tabela 20. As doses utilizadas do padrlo foram: Pl = 1,0 UI/ml, P2 = 2,0 UI/ml e P3 = 4,0 UI/mI. Doses

PI 8.5 10,4 11.4 11.6 10.2 9,1 9.5 7,7

PI 12.5 13.1 8.3 13.1 9.0 14,4 11,7 11.72*

PI 14.8 14.1 14.9 13.8 14,6 15.2 12.3 15,5

111

II

111

10.5 10,5 9.1 9.9 10.5 8.4 10.1 10,1

16.8 14.3 14,9 12,3 15,4 14,9 12,8 10,0

16,7 16.9 18.8 16.7 12,7 16.2 17,3 12.8

Plldr60 P

Ament1lr

Dose i1lenor Dose mdia Dose maior Preparai'o Contraste linear Contraste quadrtico

a:

PI PI PI P L

78.40 93.82 '" 115,20 c 287,42 o: 36.80 c 5,96

'" '"

AI o: 79,10 Az 111,40 A. 128.10 A = 318.60 LA 49.00 0:-15.60 A

..

Fontrlda
IfIIrilllo

gl 1 1 1 1 1 5 41 47

Soma de qUlldrNn

Owdflldo mJio

Prepara&ts Regresslo Paralelilmo Ouadrtico Diferena de quaclrticol Tratementol Erro TOTAL

20.26 230.05 4.65 0,97 4.84 260,77 119.18 379,95

20.26 230.05 4.65 0.97 4.84

11

79.05 1.60 0.33 1.66

<0.01 >0.06 >0.05 >0.05

= 2,91

52,15

As somas de quadrados foram obtidas empregando-se as frmulas das Tabelas 9, 10 e 11.

Clculo da estimativa de potlncia e limites de confiana Utilizar frmulas 10 a 15. I t b = 10g 2,0 = 0,3010 = 2,02 com 41 gl daTabela 3 = 36,8 + 49,0 = 890 2xO,301x8x2 '

N
n

=
= = =

48 8
(1:y)2/N 8031,21. = = 7,651,25

K 1:y2

Prepara~s

fJA = 318 :0 -

287,422 + 318,62 24 Regresso = (36,8 + 49,0)2

=

13,27

yP

= 287,42 = 11 97

24

'

32

= 230,05

M' = 13,27 - 11,97 = 01460 8,90 ' SA = 3000 10gSA = 3,4771 M = 0,1460 + 3,4771 = 3,6231 R = Antilog 3,6231 = 4 198,56 UI/mg C 230,05 = 230,05 _ 2,91 (2,02)2 = 8/3, da Tabela 15
:t

Paralelismo

=
2 1 : 49,0 2 - 230,05

= 36,8
Quadrtico

4,65

=
= 0,97 = Q

= 1,05

[5,96+(-15,6)]2

96

C'

Diferena de quadrticos 2 5,96 +(-15,6)2

=
-0,97= 4,84

M'

M'~ = 1,OS x 0,146

I

~(l,05-1)[l,05

--------::------c,---:- __ :--:-:-::-.
(0,146)2 t 8/3 (0,3010)2]

48
Tratamentos = 78,402 + 93,832 + ... + 128,102

Mi

M;

= 0,2679 = 0,0381

8
= 260,77 Total = 8031,21 -7651,25 = 379,95 Erro = 379,95 - 260,77 = 119,18.

Logaritmo dos limites de confiana da pot~ncia

Ms = 0,2679 + 3,4771 = 3,7449 Mj = 0,0381 + 3,4771 = 3,5151

Limites de confiana da potncia

Rs = antilog 3,7445 = 5552,64 Ri = antilog 3,5151 = 3274,16 UI/mg UI/mg

Validade do ensaio O ensaio cumpre com as condies de validade:

Exemplo 3: Ensaio com trs doses, delineamento blocos ao acaso Ensaio de antibi6tico usando placas de Petri

a) regresso significativa, F calculado 79,05 maior que o valor crtico da Tabela 5 para p=O,OI, g11 = 1 e g12 = 41 ; b) desvio de paralelismo no significativo, F calculado 1,60 menor que o valor crtico da Tabela 4 para p = 0,05, g11 = 1 e gh = 41 e c) desvio de linearidade nlo significativo, F = 0,33 e 1,66.

As doses utilizadas do padro foram:

Pl = 0,25 UI/mI, P2 = 0,50 UI/ml e P3 = 1,00 UI/ml.

Doses equivalentes da amostra foram preparadas com base na potncia suposta SA = 1650 UI/mg. Os dimetros dos halos de inibio encontramse na Tabela 23.

Psdrlo P

Amo6trs A

Piscas
(Blocos)

PI 17,0 14,9 15,0 14,6 14,7 14,4 14,9

P,
20,4 19,7 18,6 18,3 18,0 19,1 19,0

P,
24,0 22,7 22,0 22,4 22,3 23,3 22,5

s.

., .,
24,4 22,2 22,3 22,2 22,6 23,0 22,4

Total Bloco 123.9 113,7 110,9 111,3 109,8 113,6 113,2

1 2 3 4 5 6 7

17,4 14,9 16,0 14,8 14,4 14,5 15,0

20,7 19,3 18,0 19,0 17,8 19,3 19,4

Psddo.P

Amo6trsA

0018 menor 0018 mdia 0018 maior Prepare60 Contraste linear Contra.ta quadrtico

p.

P, P, P Lp
Qp

= = = = = =

105,5 133,1 159,2 397,8 53,7 -1,5

AI = 106,0 A, = 133,5 A, = 159,1 A = 398,6 LA = 53,1 -1,9 QA =

Fonte M "'fislo

gl

SoI1M M qusdrsdOl

Qusdrsdo mldio

Prepara Regr lo Paralelismo Quadrtico Difarena da quadrticOl TratementOl (blocOl) Erro

Pl8C81

1 1 1 1 1 5 6 30

0,0150 407,3657 0,0129 0,1376 0,0019 15101,26 22,18 4,99

0,0150 407,3657 0,0129 0,1376 0,0019 3020,25 3,70 .:1 = 0,17

0,09 2396 0,08 0,81 0,01

>0,05 < 0,01 >0,05 >0,05 >0,05

21,8

<0,01

As 10m. de quadradOl foram obtid.

N =42 n = 7

empragando-Ie ai frmula d. Tabela 9, 19 a 11.

K= l:ty):1/N = 15101,26 Ey:1= 15535,96

Preparaes

=
+ 398,6:1

Diferena de quadrticos _1,5:1 + (-1,9):1 42 Tratamentos _ 105,5:1 -

= =
00019 ,

397,8:1

21 Regresslo
(53,7

_ 01376 '

=
+ 53,1):1 = 407,3657 = E 28

+ 133,1:1 + ... + 159,12

7

Paralelismo 53,7:1 + 53,1:1 =---1-4---- 407,3657

- 15101,261 Blocos (Placas)

407,53

0,0129

123,92

+ 113,7:1 + ... + 113,22

Quadrtico [-1,5 + (-1,9)]:1 84 = 0,1376 = Q

6 15101,261 = 22,18

Total = 15535,96 - 15101,261 Erro = 434,7 - 22,18 - 407,53

434,7 = 4,99

Validade de ensaio O ensaio cumpre com as condirJesde validade: a} regresslo significativa, F calculado 2390 maior que o valorcrtico da Tabela 5 para p = 0,01, gll = 1 e gl2 = 30; b) desvio de paralelismo nfo significativo, F calculado 0,08 menor que o valor crtico da Tabela4 para p = 0,05, gll = 1 e gl2 = 30, e c) desvio de linearidade nfo significativo, F calculados = 0,81 e 0,01. Clculo da estimatiVtl de potlneia e limites dtl confiana Utilizar frmulas 10 aIS. I t b = log 1,00 -log 0,50 = 0,301 = 2,04 com 30 gl da Tabela 3. = 53,7 + 53,1 = 1267 28 x 0,301 ' = 398,6 = 1898 21 ' c'
M~

= antilog 3,2206 = 1662 = 407,3657/[407,3657 - 0,17 (2,04)2 ] = 1,0017 = 8/3, da Tabela 15

1,0017 x 0,003157

:t

J (1,0017-1)

U,0017x(0,003157)'+

8/3 (0,301)']

M~ = 0,0235 Mi = -0,0171 Logaritmo dos limites de confiana da potlncia Ms = 0,0235 + 3,2175 = 3,2410 Mi = -0,0171 + 3,2175 = 3,2004 Limites de con/illna da patincll Rs = antilog 3,2410 = 1742 UI/mg Rj = antilog 3,2004 = 1586 UI/mg Exemplo 4: Ensaio com duas doses, delineamento quadrado latino En.io de oxitocina - mtodo da contra6o do tJtero isolado de ram As doses administradas do padrfo foram: PI = 0,2 ml e P2 = 0,25 ml de solu!o contendo 0,02 UI/ml. Doses equivalentes da amostra foram prepa radas com base na potncia suposta de 10 UI/m1 diluda 1:500.

YA
M'
SA

YP = 397,8 = 18,94
21

= 18,98 - 18,94 = 0,003157 12,672 = 1650 UI/mg = M'+log1650=0,003157+3,217480 = 3,2206 =

Fil.

,
P.
p.
8. 8.

Colu".

3
8. 8.

4
8. 8.

1 2 3
4

P. P.
8. 8.

P. P.

P,
p.

Fi.

,
38 38 39 45 CI =1110 P1 =142 C2 =158 P2 =188

Coluna ;/

Total

;s
35 44 37 45 C3 =181 AI =160 C4 =155 A2 =174

Fi.

1 2 3 4 TOTAL COLUNA TOTAL DAS DOSES

43 30 45 38

40 38 40 37

F. F. F. F

156 150 161 165

~rIo
Dose menor Dose maior Preparafo Contraste linear PI P, P Lp

Amo.t,..
142 166 308 24 AI = A, = A LA

.. ..
=

.. ..

150 174 324 24

Fonr.de

".ri.Io
Prepara6es RlIgrealo Paraleliamo Tratamento Filas Colunas Erro TOTAL

,1 1 1 1 3 3 3 6 15

Some do. qulnuJtn

OUlldtWdo

m4d1o 16,0 144,0 0,0 10,5 2,2 a' = 9,67

16,0 144,0 0.0 160,0 31,5 6,5 58,0 256,0

1,65 14,89 (1,00

>0,05 <0,01 >0,05 >0,05 >0,05

1,08 0,23

A anlise nlo apresentou diferenas significaAs somas de quadrados foram obtidas empre gando-seas frmulas das Tabelas 8, 10 e 11. tivas (p>O,OS) entre filas e entre colunas.
N

=
= =

16

Validade do ensaio

n
K

4 (I;y)2/N

6322/16

= =

O ensaio cumpre com as condies de validade:

24964 a) regresslo significativa, F calculado 14,9 maior que o valor crtico da Tabela 5 para p = 0,01, gll = 1 e g12= 6, e b) desvio de paralelismo nlo significativo, F calculado 0,0 menor que o valor crtico da Tabela 4 para p= 0,05, gll = 1 e ~ = 6.
Clculo da estimativa de potlncia e limites de confiana

Preparaes 3082 + 3242 8 - 24964,0 Regresso= (24 + 24)2 2x4x2 Paralelismo = 242 + 242 2x4

16,0

=
Utilizar frmulas 10 a 15

Tratamentos = 1422 + 1662 + 1502 + 1742 ------4----24964

= = =
160,0

log 0,25 -log 0,20 = 0,0969 2,45 com 6 gl da Tabela 3 24+24 0,0969x4x2 3~4 = 40,5 40,5 - 38,5 61,91

= =

61,91

1562 + 1502 + 1612 + 1652 4 Colunas = 1602 + 1562 + 1612 + 1552 ------4----

YP = 3~8 = 38,5

O0323 '

- 24964 = 6,5

Total = 25 220 - 24 964 = 256,0 Erro = 256,0 - 160,0 - 31,5 - 6,5

= =

58,0

10 log SA = 1 0,0323 + 1 = 1,0323 = antilog 1,0323 = 10,8 UI/ml = = Potncia estimada

144,0 144,0 - 9,67 x 2,452

c'

1, da Tabela 15

M'

Mi

= 1,67

x 0,0323

y' (1,67-1,0) [1,67(0,0323)2

+ 1(0,09691)2]

M~ Mi Ms

Ensaio de insulina em camundongos

=
=

0,1402 -0,0324 0,1402

Logaritmo dos limites de confllJna da potincia

:t

1,1402

Mi = -0,0324+ 1 = 0,9676 Limites de confllJna da potncia

Rs Ri

antilog 1,1402 antilog 0,9676

= =

13,81 UI/mI 9,28 UI/mI

As doses utilizadas do padro foram p, = 60 mUI/mI e P2 = 120 mUI/ml. Foram preparadas doses equivalentes da amostra, a, = 60 mUI/ml e a2 = 120 mUI/ml a partir da potncia suposta SA = 27,4 UI/mI. Os camundongos foram injetados com 0,1 mI da solulo respectiva para cada 10 g de peso mdio, de acordo com a Tabela 6. As respostas encontram-se na Tabela 30.

Grupo 1 PI a2 total P2

Grupo 2 a, total aI

Grupo 3 P2 total a2

Grupo 4 PI total

37,1 35,2 43,1 41,3 54,2 41,4 48,6 57,8 71,1 60,8 78,2 76,1

16,6 40,1 33,9 16,2 33,2 13,1 32,7 50,4 47,3 26,1 50,9 54,4

53,7 75,3 77,0 57,5 87,4 54,5 81,3 108,2 118,4 86,9 129,1 130,5

32,4 35,2 35,3 32,9 31,9 51,2 38,2 39,7 37,0 38,9 42,6 30,4

48,4 73,8 73,1 45,2 33,1 62,4 76,2 50,1 73,8 64,6 54,6 49,6

80,8 109,0 108,4 78,1 65,0 113,6 114,4 89,8 110,8 103,5 97,2 80,0

36,8 53,2 71,2 37,1 45,9 82,2 64,8 49,1 44,1 64,7 88,0 90,1

17,0 24,9 58,2 24,8 22,7 42,7 33,9 37,6 10,4 34,7 61,6 60,3

53,8 78,1 129,4 61,9 68,6 124,9 98,7 86,7 54,5 99,4 149,6 150,4

30,9 27,8 35,4 49,8 28,2 49,9 28,3 39,6 32,2 55,1 40,6 43,5

52,1 59,4 39,1 79,0 37,3 51,1 59,5 55,8 40,6 68,2 61,4 52,8

83,0 87,2 74,5 128,8 65,5 101,0 87,8 95,4 72,8 123,3 102,0 96,3

Padrlo P Fase I Dose menor Dose maior Total Fase 11 Dose menor Dose maior Total Preparaio Contraste linear Fase I Fase 11 Total P11 P21 PI PlII P211 PII P Lpl LI LPII P

Amoltra A A11 A21 AI

Totltl

= = = = = = = = = =

644,9 445,7 1090,6 656,3 428,8 1085,1 2175,7 -199,2 -227,5 -426,7

= =
=

727,2 461,3 1188,5 704,9 414,9 1119,8 2308,3 -265,9 -290,0 -555,9

FI

2279,1

A111 = A211 = = Ali A

FII l:y LI

2204,9 4484,0 -465,1 -517,5 -982,6

= =
= =

LAI = LAII = LA =

i~

F.onte de IflIrislo Paralelismo Fases X P reparales Fases X RegressSo

gl

Soma de quadredos

Quadrado mtKJio

-' Blocos

~~"o

1 1 1 44 47 1 1 1 1 44 95

173,88 41,61 28.60 14545.64 14789,73 183,15 10057,32 57.35 0.19 2673,39 27761,13

173,88 41,61 28,60 330,58 314,67 183,15 10057.32 57.35 0.19 60,76

0.53 0,13 0,09

>0.05 >0.05 > 0.05

(camundongos) Preparees Regresslo Fases Fases X Paralelismo erro 11

3,01 165,52 0.94 0.00

<

>0.05 0.01 >0,05 >0,05

TOTAL

As somas de quadrados foram obtidas empregando

Fases x preparaes = _10~O,6' + 1085,1' + 1188,S' + 1119,8'

24

as frmulas das Tabelas 13 e 14.

N n

bl K

48 = (:ty)'/N = 4 484,0'/96 :ty' = 237201,30

= = =

96
24

= 209440,17

-209440,17 - 57,35 -183,15 = 41,61 Erro I = 14789,73 - 173,88 - 41,61 - 28,60 = = 14545,64 Erro 11 = = 27 761,13 - 14789,73 - 183,15 - 10057,32- 57,35 - 0,19 = 2673,39
Validade do ensao

Total = 237201,30 - 209 440,17 = 27 761,13 Blocos = 448 459,8 2 = 14789,73 Preparaes = = 2175,7' :8 2308,3' - 209 440,17 = 183,15 _ 2279,1' + 2204,9' Fases 48 = 57,35 Regresslo = - [(-426,7) + (-555,9)]' 96 Paralelismo = = (-426,~; + (-555,9)' -10057,32 = 173,88 = 10057,32 = E

O ensaio cumpre as condies de validade: a) regresso significativa, F calculado 165,52 maior que o valorcrtico da Tabela 5, para p = 0,01, gll = 1 e gl2 =44; b) paralelismo no significativo, F calculado 0,53 menor que o valor crtico da Tabela 4, para p =O,05,gll = 1 e gl, =44;e c) nenhuma das trs interaes foi significativa - os trs valores de F calculados: 0,13, 0,09 e 0,00 foram menores que o valor crtico da Tabela 4 para p = 0,05, gll = 1 e gl2 = 44.
Clculo da estimativa de po~ncia e limites de confiana

- 209 440,17 =

Utilizar frmulas 10 aIS. I = log 120 -log 60 = 2,0792 - 1,7782 = 0,301 t = 2,01 com 44 gl da Tabela 3 b = (-426,7) + (-555,9) 24 x 2 x 0,301 - _ 2175,7 YP- 2x24 = 45,33 - _ 2308,3 YA 2x24 = 48,09 M' = 48,09 - 45,33 = _68

01 '

Fases x regresslo = = (-465 1)' + (-517 5)' ' 48 ' -10057,32 = 28,60

Fases x paralelismo = _ (-199,2)' + (-227,5)' + (-265,9)' + (-290,0)'

24

- 68,01

00406 - - ,

-10057,32 -173,88 - 28,60 = 0,19

SA= 27,4 10gSA = 1,4377 M = -0,0406+ 1,4377 = 1,3971

Potncia estimada: UI/mI

antilog 1,3971 = 24,95

Clculo da estimativa de potncia e limites de confiana

10057,32 [10057,32-60,76(2,01)2]
1 da Tabela 15

_ - 1,025

XiP = 0,8691 YiP= 0,417 M!= 1,025 (- 0,0406) x~j+l)P = 0,8572 Y(j+I)P = 0,750 \/ (1,025-1) [1,025(-0,0406)2 + 1(0,301)2] M;= 0,0064 Mj = - 0,0896 xp 08691 + (O417 _ O5) 0,8572 - 0,8691 , , , 0,417-0,750 Logaritmo dos limites de confiana xp 0,8661 Ms= 0,0064 + 1,4377 = 1,4441 YiA = 0,333 xiA = 0,8807 Mi= - 0,0896 + 1,4377 = 1,3481 Limites de confiana da potnciJz Y(j+I)A = 0,667 xCr+1)A = 0,8691 Rs = antilog 1,4441 = 27,80 UI/ml = 0,8807 + (0,333-0,5) 0,8691 - 0,8807 Ri = antilog 1,3481 = 22,29 UI/mI 0,333 - 0,667

M;

c'

Ensaio de heparina pelo mtodo de inibio da coagulao de plasma ovino citratado As doses utilizadas do padro, em ml, foram:

= = = =

0,8749 140,6 UI/mg 0,8661 - 0,8749 + log 140,6 2,1392

PI = 0,78; P2 = 0,76; P3=0,74; P4 =0,72; Ps = 0,70 e P, = 0,68. Doses equivalentes (a) da

amostra foram preparadas a partir da potncia suposta SA = 140,6 UI/mg. O ensaio foi desenvolvido conforme est descrito no mtodo de avaliafo de heparina neste volume. Foram realizados trs ensaios. A ttulo de exemplo do clculo de M, somente se desenvolver o ensaio N<?1. Os graus de coagulall'o encontram-se na Tabela 33.

Supondo que outros dois ensaios realizados com a mesma amostra forneceram as estimativas: M2

M
R

= 2,1995 e M3 = 2,1805, calcular M = (2,1392 + 2,1995 + 2,1805)/3 = 2,1731 = antilog M = 149,0 UI/mg

Calcular a varincia do erro:

S2

S2 n'
t

= {14,1686- 42,4999/3}/2 = 0,001 s = y'O,OOI = 0,0316 = 3

4,3 (Tabela 3 gl

= 2)

PIIdrlo P Tubo p ml

AmOltnl
11

ml

= 2 x 0,0316 x 4,3 = 0,1569 1,7321

1 2 3 4 5 6

0,78 0,76 0,74 0,72 0,70 0,68

0,00 0,00 0,50 0,75 1,00 1,00

0,78 0,76 0,74 0,72 0,70 0,68

0,00 0,25 0,75 1,00 1,00 1,00

= 0,0784
= = = = 2,1731 + 0,0784 = 2,2515 2,1731 - 0,0784 = 2,0947 178,4 124,4

Plldrlo Tubo log dOlll (ml X 10) xp mldill$ logdoSfl xiP

P 1Mdill$ l/nIu COIIgUIII6o Y/P logdoSfl (ml X 10) xA

AmoItnlA midilll 109 doSfI X/A mId/. grllU COIIf/UIIIIo Y/A

1 2 3 4 5 6

0,8921 0,8808 0,8692 0,8573 0,8451 0,8325

0,8807 0,8691 0,8572 0,8450

0,167 0,417 0,750 0,917

0,8921 0,8808 0,8692 0,8673 0,8451 0,8325

0,8807 0,8691 0,8572 0,8450

0,333 0,667 0,917 1,000

Exemplo 7: Ensaio dicotmico m todo de probitos simplificado

Ensaio de insulina pelo mtodo de convulso em camundongos

de duas doses,

cada dose do ensaio conforme est descrito no ensaio de insulina, neste volume.

(P + A)2 _ 20,152 k --4-

As doses utilizadas do padro foram Pl = 18 mUl/carnundongo e P2 = 30 mUl/carnundongo. Doses equivalentes da amostra (ai = 18 mUII camundongo e a2 = 30 mUI/camundongo) foram preparadas com base na potncia suposta SA 40 Ul/ml. Os camundongos foram injetados subcutaneamente com 0,25 rol/camundongo da solulo respectiva. Previamente foram divididos ao acaso em quatro grupos, que receberam, respectivamente,

101,5056

Preparaes = 2 = 9,75 + 10,42 _ 101 5056

2
Regresso

'
+ 0,94)2 4 =

= =
+
2

= (0,79
Paralelismo 0,792

=
Tabela 35 - Exemplo 7: Respostas (% de camundonlos em convulsio)
Padrlo P
Pl P2

AmO$tre A
B1 B2

4 =-----------------30(0,576) + 28(0,619)+ 28(0,619)+ 24(0,540)

=
Validade do ensaio

0,0616

nmero de camundongos injetados Inl nmero de camundongos em convulso porcentagem de respostas 1%)

30 9 30,0

28 17 60,7

28 11 39,3

24 18 75,0

O ensaio

cumpre

as condies

de validade:

a) regresso significativa, F calculado 12,15 maior que o valor crtico da Tabela 5,parap = 0,01, gll = 1 e gl2 = infinito; e

Padrlo
Pl

P
P2 ai

AmO$trllA
B2

Probito lTabela 16) Ponderao w (Tabela 17) Preparao Contraste linear

Pl = 4,48 0,576 P = 9,75 Lp = 0,79

P2 = 5,27 0,619

AI = 4,73 0,619 A = 10,4 LA = 0,94

A2 = 5,67 0,540 l:y = 20,15 l:L= 1,73

Fonte da vllrialo

g/

Soma de qulldrlldol

Quadrado mdio

Preparaes Regresso Paralelismo Erro

1 1 1 Infinito

0,1056 0,7482 0,0056

0,1056 0,7482 0,0056 s2 = 0,0616

1,71 12,15 0,09

<

>0,05 0,01 >0,05

b) demo de paralelismo nl'o significativo, F calculado 0,09 menor que o valor crtico da Tabela 4, para p = 0,05; gll = 1 e sI2 = infinito.
C4leulo da flstimativa eM potineiB limittJs dfl confiana fi

= antilog 1,6860 = 48,53 UI/mI = = Potncia estimada = 1,4625

_ 0,7482 C - [0,7482-0,0616(1,96)2] c' = 1 (da Tabela 15) M~ Mi = 1,4625 x 0,0839

Utilizar frmulas 10 a 15. 1= log30-1og18=1,4771-1,2553=0,2219 t = 1,96 com gl = infinito e p = 0,05 (da Tabela 3) b = 0,79 + 0,94 - 39318 2(0,2219) - ,

,",,0,4625 [1,4625 (0,0839)2

+ (0,2219)2]

M'
Mi= 0,1227 0,1658 Mi = - 0,0431 Lol'Iritmo dos limites de confiana M.= 0,2885 + 1,6021 = 1,8906 MI= 0,0431 + 1,6021 = 1,5590
Limites de con/fanfl da pot4ncia

~=

0,2885

9p = 9~5 = 4,87
- - 10,4 - , YA- -2- - 520 M' = 5,20 - 4,87 = 00839 3,9318 ' SA= 40,0 log SA = 1,6021 M = 0,0839 + 1,6021 = 1,6860

Rs = 77,73 UI/ml RI = 36,22 UI/mI Usando o mtodo completo de anlise de probitol, obtew uma estimativa de potmcia de 48,48 com limites de 35,9 e 75,92 UI/mI.

VI.IO.4. EXEMPLO DE COMBINAO DE ESTIMATIVAS DE POTeNCIA

Teste de homogeneidade de potlnCll.

Combina6o de ensaios de corticotrofina mtodo de deplfl60 de cido ase6rbico supra-renal em raras hipofisecromizadas ,.10

dos Iog das estimativas

XJ

1:W(M-M)2

5,5

Trs ensaios independentes da mesma amostra foram realizados conforme procedimento descrito neste volwne (VI. 8). Os resultados dos ensaios encontram-se na Tabela 38.
Tabela 38 - Exemplo 8: Dados pua combinafo de potnclu

Xg1

= 2 p = 0,05 (Tabela 18) = 5,9

Como X calculado menor que o valqr crtico, nIo se tem elementos para suspeitar de heteropneidade.

Enulo 1
M
L
t2

E",.io2
1,25164 0,90082 4,1209 33

E",.o3
1,42193 0,11555 4,2025 27

gI

1,24797 0,29097 4,1209 34

= .J 1/1:W = .J 1/1474,0198 =
=

0,0260

1,98 x 0,0260

Oilculo da potlncll mdia ponderada

M
R

= 1: M W = 2058,6174 1:W 1474,0148

= 1 3966 '

= =

1,4226 1,3700 26,5 23,5

antilog 1,3966

24,9

= =

VII. RADIOFRMACOS

VII. RADIOFRMACOS

Radiofrmacos so preparaes contendo um ou mais radionucldeos. Alm de atender s especificaes farmacopicas, os radiofrmacos tm a sua produo, suprimento, estocagem, uso e despejo regulamentados por outras normas governamentais pertinentes em vigor. Nucldeo - Espcie de tomo caracterizado pelo nmero de prtons e nutrons contidos em seu ncleo (ou seja, pelo seu nmero atmico e pela massa atmica). Istopos - Nucldeos do mesmo elemento qumico, isto , com o mesmo nmero atmico e massa atmica diferente. Radioistopos - Istopos radiativos. Radionucldeo - Nucldeo radiativo. Radiatividade (ou atividade) - propriedade que certos nucldeos tm de emitirem radiao por transformaes espontneas de seus ncleos. A radiatividade de uma preparao o nmero de transformaes nucleares por unidade de tempo que ocorrem numa determinada quantidade da preparao. Estas transformaes podem envolver a emisso de partculas carregadas, captura de eltrons ou transio isomrica. As partculas carregadas emitidas do ncleo podem ser partculas alfa (ncleos de hlio, de nmero de massa 4) ou partculas beta (eltrons de carga negativa ou. positiva, respectivamente {r -ngatron ou (t-psitron). A emisso de partculas carregadas pode ser acompanhada de raios gama, os quais tambm so emitidos no processo de transio isomrica. Esta emisso de raios gama pode ser parcialmente substituda pela ejeo de eltrons, conhecidos como eltrons de converso interna. Este fenmeno, assim como o processo de captura de eltrons, causa emisso secundria de raios X, devido reorganizao de eltrons no tomo. Esta emisso secundria pode, por si mesma, ser substituda parcialmente pela ejeo de eltrons conhecidos como eltrons Auger. Raios X, even tualmente acompanhados pelos raios gama, so emitidos no processo de captura de eltrons. Partculas (j+ so aniquiladas em contato com a matria; este processo acompanhado pela emisso de raios gama com energia de 0,511 MeV. Desintegrao - Transformao na qual o ncleo emite uma ou mais partculas. Tempo de meiavida - Tempo no qual a quantidade de radionucldeos decai metade do valor inicial. A meia-vida relacionada constante de decaimento P,) pela equao: T7

Decaimento radiativo - A radiatividade decai em razo exponencial, que caracterstica para cada radionucldeo. A atividade em qualquer tempo pode ser calculada pela expresso

A = atividade no tempo t, Ao = atividade inicial,

constante de decaimento - (tambm deno

minada de constante de desintegrao ou constante de transformao, Le., a frao de tomos radiativos que sofrem transfor maes na unidade de tempo, desde que este tempo seja curto em comparao com a meia-vida), tempo decorrido, base de logaritmos neperianos.

Atividade especfica (ou radiatividade especfica) - Radiatividade do radionucldeo relacionada massa unitria do elemento ou composto; comumente referida atividade de 1 g da substncia especificada na monografia: W N x O 693 . M' T desmtegraoos/s/g

ou

x 7

S = radiatividade especfica, N = nmero de Advogrado, W = peso atmico, M = peso molecular. Concentrao radiativa - A concentrao radia tiva da solu'o a radiatividade do radionucldeo contida no volume unitrio e geralmente referida como atividade por 1 ml. Como ocorre com todas as especificaes envolvendo radionucldeos, necessrio declarar a data e, no caso de radionucldeos com meia-vida curta, a hora na qual a concentrao radiativa foi determinada. Carreador - Istopo estvel do radionucldeo em questo adicionado preparao radiativa na forma qumica idntica quela na qual o radionucldeo est presente. Pureza radiativa - Razo, expressa em porcen tagem, da radiatividade do radionucldeo relacio nada com o total da radiatividade da fonte. Pureza radioqumica - Razo, expressa em

0,693

porcentagem, da radiatividade do radionucldeo em questo presente na fonte na forma qumica declarada, relacionada ao total da radiatividade do radionucldeo presente na fonte. Pureza qumica - Razo, em porcentagem, da massa da substncia presente na forma qumica declarada e o total da massa contida na fonte, desprezados excipientes ou solventes. Identificao de radionucldeos - Um radionucldeo identificado pelo tempo de meia-vida, pela natureza e energia da sua radia'o, conforme descrito na monografia. Medida do tempo de meia-vida - A meia-vida medida com auxlio de aparelhos de deteco, tais como cmara de ionizao, contador GeigerMueller ou contador de cintilaes. Os radiofrmacos podem ser utilizados diretamente, secos, ou aps diluio conveniente. A quantidade de radiatividade, consideradas as condies experimentais, deve ser suficientemente alta para permitir a deteco durante vrias meias-vidas presumveis, porm no alta demais, para evitar o fenmeno de "perda de contagens" devida, por exemplo, ao tempo morto do tubo Geiger.Mueller. A fonte radiativa preparada de modo a evitar perdas durante sua manipulao. Amostras lquidas devem ser examinadas e contidas em frascos ou tubos selados. Produtos slidos devem ser protegidos por capa de folha adesiva de acetato de celulose, ou outro material cuja massa por unidade de rea seja suficientemente pequena para nlo atenuar quantidade significativa da radiao em estudo. A mesma fonte medida em condies geomtricas idnticas e em intervalos que correspondem usualmente metade da meiavida e pelo tempo correspondente a, aproximadamente, trs meias-vidas. O funcionamento correto do equipamento verificado atravs do uso de uma fonte permanente e as variaes da contagem so corri gidas, se necessrio, conforme descrito em Medida da radiatividade. Traa-se uma curva, lanando-se o tempo no eixo das abcissas e, no eixo das ordenadas, o logaritmo do nmero de impulsos contados por unidade de tempo, ou a corrente eltrica, conforme o tipo do equipamento usado. A meia vida calculada a partir desta curva no deve diferir por mais de 5% do especificado na respectiva monografia. Determinao da natureza e da energia da radiao - A natureza e a energia da radiao emitida podem ser determinadas por diversos procedimentos, que incluem a elaborao da curVa de atenuao e o uso de espectrometria. A curva de atenuao usada geralmente para a determinao da energia da radiao beta; a espectrometria usada, principalmente, para determinao da energia da radiao gama. Curva de atenuao - Elaborada para emissores beta puros ou para emissores beta-gama, quando no h disponibilidade de espectrmetro de raios gama. Este mtodo de determinao de energia

mxima da radiao beta fornece apenas valores aproximados. A fonte, montada convenientemente para proporcionar condies geomtricas constantes, colocada em frente janela delgada do contador Geiger-Mueller e protegida conforme descrito em Medida do tempo de meia-vida. A contagem da fonte , entio, medida. Entre a fonte e o contador so colocados, nesta ordem, pelo menos seis telas de alumnio, de massa crescente por unidade de rea, dentro de limites tais que para o absorvedor de maior massa por unidade de rea seja obtida velocidade constante de contagem. Com emissores beta puros a velocidade de contagem no afetada pelo acrscimo de absorvedores adicionais. Os absorve dores so inseridos de modo tal que as condies geomtricll3 sejam mantidas constantes. Constri-se uma curva colocando em abcissas a massa por unidade de rea do absorvedor expressa em mg/cm2 e, em ordenadas, o logaritmo do nmero de impulsos contados por unidade de tempo para cada um dos absorve dores utilizados. Curva idntica elaborada utilizando-se o padro. O resultado calculado em relao parte mediana, praticamente retilnea, das curvas. Clculo do coeficiente de atenuao da massa O coeficiente de atenuao da massa Jlm, expresso em cm 2 por mg, depende da energia da emisso beta e das propriedades fsicas e qumicas do absorvedor. Isto permite a identificao de emisso beta e o coeficiente calculado, a partir de curvas construdas como descrito anteriormente, pela expresso 2,303 m2 -ml em que ml m2

= = =

Al A2

massa, por unidade de rea, do mais leve, massa, por unidade de rea, do mais pesado (medir ml e m2 parte retilnea da curva), velocidade de contagem para unidade de rea ml, velocidade de contagem para unidade de rea m2.

absorvedor absorvedor dentro da massa por massa por

O coeficiente de atenuao assim calculado no deve diferir por mais de 10% do coeficiente obtido em condies idnticas com o padro do mesmo radionucldeo. Espectrometria gama - Baseia-se na propriedade que certas substncias (cintiladores) tm de emitirem luz quando bombardeadas por raios gama. O nmero de ftons produzido proporcional energia absorvida pelo cintilador. A luz transformada em impulsos eltricos de amplitude aproximadamente proporcional energia dissipada pelos f6tons gama. A anlise dos impulsos de sada for-

nece, com auxlio do analisador de pulsos, o espectro de energia da fonte. Os espectros de cintila!o de raios gama mostram um ou mais picos caractersticos correspondentes s energias da radiaio gama na fonte. Estes picos so acompanhados por outros, mais ou menos largos, devidos a efeitos secundrios da radia!o no cintilador ou ao material em tomo do mesmo. A forma do espectro varia de acordo com o equipamento utilizado, tornando-se necessrio calibrlo com auxlio de padr!o do radionucldeo em questo. O espectro de raios gama do radionucldeo que os emite prprio do mesmo, sendo caracte rizado pelo nmero de raios gama de energia individualizada produzida por transformao. Esta propriedade pode ser utilizada para identificar quais radionucldeos esto presentes na fonte e as quantidades de cada um deles. Possibilita, tambm, avaliar o grau de impurezas presentes, pela detecA'o dos picos estranhos queles espe rados. O detector preferido para a espectrometria de raios gama um detector semicondutor de germnio ativado com ltio. Tais equipamentos podem ter resolulf (largura total) do pico meia altura mxima de 2,0 a 2,5 KeV em 1,3 MeV, possibilitando a identificao dos picos que se distanciam por 5 KeV no espectro de raios gama. Os detectores de cintilaA'o de iodeto de sdio ativados com tlio tambm podem ser usados, porm, com resolulfo menor (50 KeV, aproxi madamente). A sada de cada um destes detectores ocorre na forma de pulsos eltricos, cuja amplitude proporcional energia dos raios gama detectados. Aps amplificaio, estes pulsos slfo analisados em analisador multicanal, que fornece o espectro de energia gama da fonte. A relalfo entre energia gama e o nmero do canal pode ser facilmente estabelecida utilizando.-se fontes de raios gama de energia conhecida. O sistema de deteco deve ser calibrado, pois a eficincia do detector funa:o da energia da radiao gama, da forma da fonte e da distncia da fonte ao detector. A eficincia da detec!o pode ser medida com auxlio de fonte calibrada do radionucldeo em questo ou, para trabalho mais genrico, pode ser construda uma curva de eficincia versus energia gama a partir de uma srie de fontes calibradas de vrios radionucldeos. A utiliza!o de detector de baixa resoluio poder trazer alguma dificuldade em identificar as impurezas, pois os picos no espectro podem n!o estar bem resolvidos. Neste caso, recomen dvel a determina!o da meiavida por medidas repetitivas na amostra. E possvel estabelecer a razo do decaimento da radiatividade no espectro desde que os picos diminuam em amplitude em funA'o da meia-vida. Se, numa fonte, a impureza radiativa de meiavida mais longa estiver presente, a mesma facilmente detectvel pelo isolamento e identificao de

picos caractersticos, cujas amplitudes decrescem em velocidades diferentes daquelas do radionuc1deo esperado. A determinao da meiavida de picos interferentes por medidas repetitivas na amostra ajudar na identificalfo da impureza. Medida da mdiatividade - A medida abSoluta da radiatividade de uma amostra somente pode ser efetuada se o esquema de decaimento do nucldeo conhecido e est baseado no mtodo de coincidncia, no qual a emisso beta e a emisso gama sio contadas em separado e em coincidncia, com auxlio de equipamento apropriado. Trs medidas so suficientes para determinar a eficincia dos contadores e as velocidades absolutas de desintegrao. Na prtica, muitas correes podem ser necessrias para obter resultados precisos. E mais comum utilizlJr medidas comparativas de solues contra fonte padrlfo, utilizando contador Geiger-Mueller, contador proporcional, contador de cintilalfo ou cmara de ionizaio. O contador Geiger-Mueller utilizado para medir emissores beta e beta-gama. Contadores de cintilaio e semicondutores so utilizados para medir raios gama; emissores beta de baixa energia necessitam de contador de cintilaio lquido. Alternativamente, pode ser usado um instrumento calibrado pela referncia a uma fonte padro. Qualquer que seja o equipamento usado, essencial que se trabalhe em condies geomtricas extremamente bem definidas, de modo que a fonte radiativa esteja sempre na mesma posio no aparelho e, conseqentemente, sua distncia do dispositivo de medi!o seja constante e perma nea a mesma, enquanto a amostra substituda pelo padro. Solues de radiofrmacos contendo emissores de raios gama podem ser medidas diretamen te com auxI1io de aparelhos como a cmara de ionizao ou detector de cintila!o de poo. Entretanto, para emissores beta de energia alta e moderada podem ser empregados o contador Geiger-Mueller e o contador de cintilador de cristal plano, sendo tambm comum a contagem no resduo aps evaporalo. Recomenda-se cobrir o resduo seco com fita adesiva de acetato de celulose, cuja massa por lUlidade de rea seja inferior a 10 mg por cm2, de modo que a absoro da radiatividade seja desprezvel. O resduo de evapora!o da soluA'o padro deve ser tanto quanto possvel idntico ao da soluo em exame, isto , as duas solu~es devem conter os mesmos sais nas mesmas concentraes e a evaporao deve ser conduzida nas mesmas condies, idnticas dimenses de superfcie e de mesmo material. Quando estas precaues sl'o tomadas os resultados obtidos so satisfatrios, qualquer que seja o equipamento. E necessrio assegurar que a eficincia do equipamento de medilio permanea constante durante o tempo de mediio, verificada pelo uso de fonte secundria, ou seja, radionucldeo de vida longa.

Emissores beta de baixa energia podem ser medidos por um detector lquido de cintilaes A amostra dissolvida na soluo de uma ou mais (geralmente duas) substncias orgnicas fluorescentes (cintiladores primrios e secund rios), que convertem parte da energia de desinte grao em ftons de luz, os quais so detectados e convertidos em impulsos eltricos no fotomul tiplicador. Quando se utiliza o contador de cinti lao lquida, medidas comparativas devem ser corrigidas devido aos efeitos de interferncia da luz. Medidas diretas devem ser feitas em condies que assegurem que as condies geomtricas sejam constantes (volumes idnticos dos reci pientes e solues). Todas as medidas de radiatividade devem ser corrigidas pela subtrao da atividade da radiao de fundo, devida radiatividade do meio e aos sinais esprios gerados no prprio aparelho. Em certos equipamentos, nos quais a contagem feita em altos nveis de atividade, a correo pode ser necessria, em razo das perdas por coinci dncias, devidas ao tempo de resolu4'o do detector e do equipamento eletrnico associado. Para sistema com tempo de paralisa4'o fixo ( r), aps cada contagem a corre4'o dada pela equao N em que

equao exponencial ou pela tabela ou, ainda, pode ser obtida graficamente da curva estabelecida para cada radionucldeo. Todas as determinaes do teor de radiatividade devem ser acompanhadas de declarao da data e, se necessrio, da hora em que as medidas foram feitas. A medida da radiatividade de amostra em soluo calculada em relao ao volume original da mesma e expressa por unidade de volume - concentrao radiativa.

Pureza radionucldica
Para estabelecer a pureza radionucldica da preparao, a radiatividade e a identidade de cada radionucldeo presente devem ser conllecidas. O mtodo mais comumente utilizado para examinar a pureza radionucldica o da espectrometria gama. No mtodo totalmente preciso porque as impurezas beta-emissoras geralmente no so detectveis e, quando so empregados detectores de iodeto de sdio, os picos devidos s impurezas so freqentemente encobertos pelo espectro do radionucIdeo principal. A monografia estabelece as exigncias gerais para a pureza radionucldica (por exemplo, o espectro de raios gama nio deve diferir significa. tivamente daquele da fonte padro) e pode estabelecer limites para impurezas radionucldicas especficas (por exemplo, cbalto - 60 em cobalto - 57). Estas exigncias slo necessrias, embora elas por si s n'o sejam suficientes para assegurar que a pureza radionucldica da preparao suficiente para uso humano. O fabricante deve examinar seus produtos em pormenores e, espe cialmente, as preparaes de radionucldeos de vida curta devem ser analisadas quanto presena de impurezas de vida longa, aps perodo conve niente de decaimento. Desta maneira, podem ser obtidas informaes sobre a convenincia dos processos de fabricao e a adequao dos procedimentos de controle.

No 1- Nor

N = contagem de velocidade por segundo, No = contagem por segundo medido, r = tempo de paralisa'o em segundos. evidente que esta corre'o ser aceitavelmente pequena somente se o produto No r for muito pequeno. Com equipamentos mais modernos a corre'o feita automaticamente. Correes da perda por coincidncia devem ser feitas antes das correes para radia'o de fundo. Determinaes de radiatividade mostram varia es estatsticas porque est'o relacionadas probabilidade de desintegra'o nuclear. Nmero suficiente de contagens deve ser feito para compensar variaes no nmero de desintegraes por unidade de tempo. Pelo menos 10000 registros s'o necessrios para obter desvio padro de no mais de 1%.

Pureza radioqumica
A determinao da pureza radioqumica consiste na separao de substncias qumicas diferentes que o radionucldeo contm e a medida da radiatividade ligada substncia qumica declarada. Conseqentemente, na determinao da pureza radioqumica podem ser usados todos os mtodos de separao analtica. Entretanto, consideraes sobre presteza e simplicidade levaram a preferir a cromatografia em papel ou em camada delgada e, em certos casos, a eletroforese em papel ou f1lme de acetato de celulose. Devido radiatividade devem ser tomadas precaues adicionais. Na cromatografia, na linha de partida deve ser depositado volume igual a 10 J.L1 ou menor, como descrito em procedimentos gerais. prefervel n'o diluir a preparao em exame, mas importante evitar depositar quantidade de radiatividade tal que perdas de contagem por

Teor de radiatividade
As quantidades de radiatividade rio Sistema Internacional (SI) so medidas em unidades becquerel (Bq) , que igual a I transformao nuclear por segundo (equivalente a aproximadamente 2,7 x 10-11 curies). A atividade decai em razo exponencial, que caracterstica de cada radionucldeo. A determinao da atividade somente verdadeira no tempo de referncia especificado. A radiatividade em outros tempos pode ser calculada a partir da

coincidncia venham a ocorrer durante a medida da radiatividade. Considerando as massas muito pequenas do material radiativo aplicado aos cromatogramas, o uso de carreadores , s vezes, necessrio e os mesmos podem ser adicionados quando a monografia assim o prescrever. Aps o desenvolvimento, o suporte seco e as posies das reas radiativas so detectadas ou pela auto-radiografia ou pela medida da radiatividade ao longo do cromatograma, com auxlio de contadores devidamente colimados, pelo corte das faixas e contagem de cada uma delas ou por qualquer outro mtodo adequado. As posies das manchas ou reas permitem identificafo qumica por comparaio com solues das mesmas substncias qumicas (Dio radiativas), visualizadas por reao de cor ou exame sob luz ultravioleta. A visualizao pela reafo de cor direta da amostra radiativa nem sempre possvel ou desejvel, j que o borrifamento com reagente de visualizao pode causar difuso da substncia radiativa para alm das manchas ou reas identificadas. Medidas de radiatividade podem ser feitas por integral'o, utilizando-se equipamento autom. tico ou contador digital. As propores das reas abaixo dos picos fornecem as relaes das concentraes radiativasdas substncias qumicas. Quando as tiras so cortadas em pores, as razes das quantidades de radiatividade medidas fornecem as propores das concentraes de espcies qumicas radiativas.
Atividade especffica

uso. O teste constitui controle de qualidade da produll'o.

Pirognios

Algumas preparaes devem corresponder ao teste de pirognio, tomando-se as precaues necessrias para evitar irradiao do pessoal envolvido no teste. Entretanto, por causa da meia-vida usualmente c~rta do radionucldeo presente na prepara'o e da radiatividade relativamente alta que estas podem conter, difcil realizar o teste antes da liberao do lote ao consumo. Para evitar hipertermia, que pode no ser causada pelos pirognios, mas pela radiatividade da preparao, s vezes necessrio esperar at que a radiatividade tenha decado a nveis previstos na monografi~. Conduzido nestas condies, o teste constitui controle de qualidade da produll'o. Recomenda-se ao produtor verificar previamente a ausncia de pirognios nas solues que ser'outilizadas como matria-prima na prepara'o. O teste oficial pode n'o ser adequado para alguns radiofrmacos; por exemplo, pode no ser suficientemente sensvel para aqueles destinados administrao por qualquer via que d acesso ao fluido cerebroespinal. Neste caso o teste, aps liberal'o ao uso, pode ser inaceitvel. Nestas circunstncias, pode ser utilizado o teste que emprega o lisado de lmulus do ameb6cito.

Proteo Os radiofrmacos devem ser mantidos em recipientes bem vedados e em local suficientemente protegido para evitar irradia'o do pessoal por emissOesprimrias ou secundrias, de acordo com regulamentos nacionais e internacionais sobre manuseio de substncias radiativas. O poder penetrante de cada radial'o varia consideravelmente de acordo com sua natureza e energia. Partculas alfa do completamente absorvidas por espessuras de slidos ou lquidos Esterilidade que variam de alguns a dezenas de micrometros; Radiofrmacos para administrao parenteral partculas beta sA'oabsorvidas completamente na devem ser preparados com precaues que visem espessura de alguns mm a vrios em. Raios gama a excluir contaminao bacteriana e assegurar no sio completamente absorvidos, mas somente esterilidade, devendo corresponder ao Teste para atenuados, e uma redul'o de 10 vezes pode Esterilidade da Farmacopia. (V.5.1.1) Entre requerer, por exemplo, alguns em de chumbo. tanto, dificuldades especiais podem surgir no Quanto mais denso o absorvente, menor o caso de radiofrmacos que s'o preparados em alcance de partculas alfa e beta e maior a ate pequenos lotes e para os quais a execul'o do nuaio de raios gama. Decomposio induzida pela radiao - As teste de esterilidade apresenta certo grau de risco radiolgico; esta considera'o especial deve ser preparaes de radiofrmacos tendem a ser menos levada em conta pelo fabricante na determinao estveis do que os seus correspondentes inativos, do nmero de recipientes a serem testados. Por ocorrendo a sua decomposi'opor auto-irradiao causa das caractersticas radiativas das prepa e, por isto, devem ser utilizadas dentro de prazo raes nem sempre possvel aguardar o resultado curto. Os efeitos da radiao primria incluem a do teste de esterilidade para liberar o lote para desintegrao do tomo radiativo e a decomA atividade especfica calculada relacionandose a concentrao radiativa (radiatividade por unidade de volume) com a concentraA'o da substncia qumica em exame, aps verificaA'o de que a radiatividade somente atribuvel ao radionuc1deo (pureza radionucldica) e espcie qumica (pureza radioqumica) em questA'o.

posio de molculas quando a frao de energia de partcula emitida ou do raio gama absorvida por estas mesmas molculas (efeito externo). Muitos fatores est'o envolvidos, incluindo a energia e a natureza da radiao, a atividade especfica e o tempo de armazenagem. Os efeitos de radiao primria podem induzir efeitos secundrios devidos forma'o de espcies excitadas, que podem degradar outras molculas presentes; por exemplo, as dos solventes ou conservan teso Tambtn deve ser considerada a susceptibilidade oxidao e redullo de pequena quantidade de espcjes qumicas presentes. A excluso inicial de todos os traos de agentes de oxidao e reduo nem sempre suficiente porque tais agentes podem formarse continuamente, por efeitos da radiao. Por isto, o tiossulfato de sdio includo na soluo de iodeto de sdio (131 I) para manter o iodeto na forma reduzida. Durante o armazenamento, recipientes e solues podem escurecer devido radiatividade emitida. Tal fato no determina, necessariamente, a deteriorao da preparao.

A quantidade de material radiativo presente na preparao , freqentemente, muito pequena para ser medida pelos mtodos qumicos ou fsicos normais. Considerando a frmula
Smax

1,16x 1020 Bqg-l --W-x-t -/2--1

atividade especfica mxima, peso atmico, tempo de meiavida em horas. Verifica-se que, por exemplo, para soluo de pertecnetato de sdio (99mTc) com a concentrao radiativa de 37 MBq (1 mC) por ml, a concentrao do pertecnetato pode ser to baixa quanto 3 x 10-10 g/ml. O comportamento de massas t'o pequenas em solues muito diludas pode requerer conside raes especiais. s vezes, a adi'o de carreador inerte pode ser necessria para limitar a absoro das superfcies do recipiente. Por esta razlo, a 2 P) requer adio inje'o de fosfato de sdio de fosfato.

Conservantes
No obrigatria a adio de conservantes a preparaes radiofarmacuticas apresentadas em recipientes de doses mltiplas, exceto quando especificada na monografia respectiva. Variaes nas dosagens, alteraes da dose com o tempo, em virtude do decaimento de radiatividade, e a necessidade de reter, dentro de recipiente prprio, qualquer material para uso futuro, requerem recipientes de doses mltiplas para muitas prepa raes radiofarmacuticas. Os conservantes antimi crobianos sofrem decomposio pela influncia da radiao e isto elimina seu uso para radiofrmacos injetveis. Pode ser necessrio distribuir tais preparaes em frascos de doses mltiplas, sem incorporao de conservantes antimicrobianos. Nestes casos, a nlo ser que parte do contedo seja usada e a retirada de doses subseqentes seja necessria, o recipient.e dever ser submetido a processo de esterilizalo posterior, tio logo quanto possvel, aps o uso inicial e em seguida a cada um dos usos subseqentes. O importante verificar se as caractersticas do material no foram adversamente afetadas.

Rotulagem O rtulo de radiofrmacos seguintes declaraes: deve conter as

Dilui6es
No caso em que sejam necessrias diluies prefervel utilizar veculos de mesma composio que os presentes na preparao. Tais veculos e todo o equipamento usado devem estar isentos de poeiras e traos de matria orgnica.

1) nome sob o qual descrito na monografia ou sinonmia aprovada; 2) indicao de que o produto radiativo; a radiatividade total existente na data e hora indi cadas; 3) para preparaes lquidas, a radiatividade total do recipiente ou a concentrao da radiati vidade por rnl, na data e hora declaradas e o volume do lquido no recipiente; para slidos, tais como liofilizados, a radiatividade total; para cpsulas, a radiatividade de cada cpsula e o total de cpsulas por recipiente; 4) nome e endereo do fabricante; 5) referncia que consiste em figuras ou letras ou ainda uma combinalo de letras e figuras pela qual pode ser acompanhado o histrico da pre paralo; 6) data limite e o perodo de utilizalo do produto; 7) referncia de que se trata de produto para uso mdico; 8) via de administrao; 9) nome e concentrao de estabiliza dores ou conservantes antimicrobianos e 10) condies de armazenamento.

VIII. PRODUO DE DISCOS E METODOLOGIA PARA TESTE DE SENSIBILIDADE AOS ANTIBACTERIANOS

Os discos de sensibilidade aos antibacterianos do redondos, achatados, de papel absorvente, tendo dimetro de 6,35 mm e espessura uniforme; contm antibacterianos distribudos uniforme mente e destinam-se a medir o nvel de sensibilidade de microrganismos. Quando outro material ou sistema (por exemplo, muldisco) for utilizado na confeclo de

discos, este dever' apresentar as mesmas caractersticas e resultados daqueles oferecidos pelos discos de papel. Para identificar o antibacteriano contido no disco do recomendados vriosprocessosanalticos, tais como: cromatografia, eletroforese, espectrofotometria e inativafo enzim'ca.

VII!.1. PRODUO DE DISCOS

Papel absorvente A espessura do papel deve ser suficiente para assegurarcerta rigidez ao disco e permitir completa absorlfode volume de gua entre 2,5 a 4 vezes o seu peso. O papel deve ser isento de substncias inibidoras tanto para os microrganismos quanto para os antibacterianos. A codificalfo dos discos deve ser feita por trs letras coincidentes entre os fabricantes e que identifiquem os antibacterianos neles contidos, e a tinta usada nio deve interferir com a atividade dos mesmos. A impressio da concentialfo do antibacteriano no disco facultativa. Concentraes dos antibacterianos nos discos

Os discos devem ter concentraio riica; contudo, serio penhitidas duas concentraes, se comprovada cientificamente sua necessidade.Neste caso, as concentraes deverio vir gravadas nos respectivos discos. Antibacterianos A qualidade dos antibacterianos usados no preparo dos discos deve corresponder qualidade usada na fabricaio farmacutica e deve satisfazer os requisitos da Farmacopia Brasileira. Solventes

Os solventes aquosos ou orgnicos usados para dissolver os antibacterianos ou que agem Para a impregnalfo dos discos recomendam-se como veculo para impregnar o papel devem estar isentos de componentes de atividade inibias concentraes especificadasna Tabela I. dora ou que possam inativar os antibacterianos, A recomendalfo da concentralfo do antibactebem como afetar suas propriedades de difuslo. riano no disco deve ser comprovada por trabalho cientfico publicado sobre o assunto. No estabePrepar66o dos discos lecimento da concentra4o, os discos impregnados Os antibacterianos usados na preparaio dos devem apresentar zonas de inibilo com microrganismos, inclusive contra os quais se espera que discos devem ser pesados analiticamente, levando em consideralo suas potl!ncias em unidades o antibacteriano seja clinicamente eficaz. A concentralo inibitria mnima (C.LM.) internacionais ou microgramas. deve ficar dentro de uma faixa de concentra4o As solues alterveis por luz e calor devem ser possvel de ser obtida nos fluidos e tecidos corpo- protegidas. A secagem dos discos deve ser feita rais durante o tratamento. de maneira a eliminar o solvente sem prejudicar Com os microrganismos altamente sensveis a distribllo uniforme do antibacteriano e encontrados na clnica prtica, os dimetros das sem prove<:ar perda excessiva da potncia. Cada zonas de inibi40 nlo devem exceder 40 mm, mas fabricante, conforme estudo de estabilidade, dever especificar seu prazo de validade. de preferl!ncianlo devem ultrapassar 30 mm.

DISCOS-PADRo

Cada lote de discos produzido deve ser controMeio de cultura E lado quanto sua potncia, frente a discos-padro. Peptona . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Os discos-padrllo so preparados com discos Extrato de levedura . virgens marcados de PI a P5, correspondentes s Extrato de carne . . . . . . . . . cinco concentraes da reta padro (Tabela 1). gar . No precisam ser estreis, mas sim isentos de con. gua . taminao. Os discos-padrfo para a impregnao pH 6,5 a 6,6 ap6s a e,teriliza60 analtica devem ser colocados em tela de alumnio, ao inoxidl1vel ou nl1ilon, separadamente, de modo Meio de cultura F a facilitar a circulao de ar entre eles. A secagem Caselna de digesto pancretica . feita em ar circulante ou sob presso reduzida. Soja de disesto papalnica . Aps a secagem eles devem ser guardados por at Cloreto de sdio . . . . .'. . . . . . . . . . . 4 semanas, em dessecador, sob pressfo reduzida.
Fosfato de potssio dibsico ..... . ... Dextrose. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . gar .
gua pH 7,3 ap6, 11 e,teriliztllo

6,Og 3,Og 1,5 g 15,Og 1.000 ml

MEIOS DE CULTURA

17,0 g 3,Og 5,Og 2,5 g 2,5g 20,Og 1.000 ml

Na preparafo das placas para a dosagem dos discos, podem ser usados meios de cultura prepa. rados a partir de componentes individuais ou meios desidratados; neste caso, aps a suspenso em I1gua destilada, sua composifo deve ser a mesma daquele preparado com os componentes individuais. Nas dosagens so usados os seguintes meios:

Meio de cultura G

Idntico ao meio F, exceto:

gar ............

Polissorbato 80 (estril) Adicionar o possorbato 80 ap6s a fervura

12,0 g 10,Og

Peptona . Casena de Extrato de Extrato de Dextrose gar gua

pH 6,5
ti

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . digesto pancretica . levedura . carne . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

6,Og 4,Og 3,0 g 1,5 g 1,0 g 15,Og 1.000 m1

Peptona . Extrato de Extrato de Dextrose. gar gua

pH

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . levedura . . . . . . . . carne . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . , . .

6,Og 3,Og 1,5 g 1,0 g 15,0 g 1.000 ml

6,6 aps 11e,terilizlllo

6,6 ap6s a e,terilizalfo Meio de cultura I

Meio de cultura 8

Idntico ao meio A, porm acrescido de 300 mg por litro de sulfato de mangans hidratado.
Meio de cultura C

Caselna de digesto pancretica Soja de digesto papalnica Cloreto de sdio .. .. .. . .. gar

gua pH 7,311p6, 11esterilizlIlo

..

..

. ..

15,Og 5,0 g .. 5,Og . 15,Og . 1.000 ml

. .

Idntico ao meio A, exceto que o pH fmal deve ser ajustado entre 7,9 e 8,1 aps a esterilizaio.
Meio de cultura D Peptona . Extrato de levedura . . Extrato de carne . . . . . . . . . . . . . . . . Cloreto de sdio ..... . . . . . . . . . . . Dextrose. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Fosfato de potssio dibsico . Fosfato de potssio monobsico . gua .
pH 7,0 ap6, a e,terlliZll6o

5,0 g 1,5 g 1,5 g 3,5 g 1,0 g 3,68g 1,32g 1.000 ml

Casena de digesto pancretica Soja de disesto papanica Cloreto de sdio Fosfato de potssio dibsico Dextrose gua
pH 7,3 aps fi e.terlliztl4o

..

. 17,Og . 3,Og . 5,Og . 2,5g . 2,5 g . 1.000 ml

SUSPENSES DOS MICRORGANISMOS PARA TESTE

Os microrganismos utilizados nas metodologias de dosagem dos discos do aqueles recomendados

pelo ATCC, INCQS, NCTC e NCYC, cujos ende reos constam em "Ensaio Microbiolgico de Antibiticos". Como referncia bsica foram listados os microrganismos da ATCC (American Type Culture Collection dos EUA).
Suspenso n9 1

Staphylococcus aureus (ATCC6538P) Manter o microrganismo em meio de cultura A inclinado repicando-o, semanalmente. Antes da preparao da suspenso estoque, inocular um tubo COO1 meio de cultura A inclinado e incubar a 3235 c por 24 horas. Colher o crescimento de superfcie do meio inclinado com 3 ml de soluo fisiolgica estril, espalhando este volume sobre a superfcie de 250 ml de meio de cultura A, contido em garrafa de Roux. Incubar por 24 horas a 3235C. Colher o crescimento da superfcie da garrafa com 50 ml de soluo fisiolgicae contas de vidro estreis.Padronizar esta suspensoestoque de modo a obter 20% de transmitncia em compri mento de onda de 580 nm. Guardar a suspenso estoque em refrigerador por uma semana.
Suspenso nf? 2

fornecer 10% de transmitncia em 580 nm. Quando isto ocorrer, a suspenso estoque considerada satisfatria para o uso; caso contrrio, ajustar a suspenso estoque e proceder nova diluio de 1:1O. Obtida a transmitncia recomendada, usar como inculo a suspenso estoque e no a sus pendo de 1:10. Renovar a suspenso estoque quinzenalmente, se guardada em refrigerador.
Suspenso nf? 5

Bacillus subtilis (ATCC6633) Manter o microrganismo em meio de cultura A inclinado, repicando-o semanalmente. Preparar a suspenso de esporos inoculando um tubo com meio inclinado A e incubando-o a 37C por 16a 24 horas. Colher o crescimento de superfcie do meio inclinado com 3 ml de soluo fisiol6gica estril, espalhando este volume sobre a superfcie de 250 ml de meio de cultura B, contido em garrafa de Roux. Incubar por 5 dias a 37C. Colher o crescimento de superfcie com 50 ml de soluo fisiolgica e contas de vidro estreis. Centrifugar e decantar o lquido sobrenadante. Reconstituir o sedimento e aplicar choque trmico na suspenso, aquecendoa por 30 minutos a 70C. Guardar a suspendo de esporos em refrigerador por trs meses. No h necessidade de acerto de transmi tncia.
Suspenso nf? 6

Seguir o mesmo procedimento da suspenso rf? 1, exceto que a padronizao da suspenso estoque feita indiretamente, atravs de diluio de I: 10 com soluo fisiolgicaestril que venha a fornecer 20% de transmitncia em 580 nm. Ajustar a suspensoestoque se foro caso, baseando se na diluio de 1:10. Como inculo nio usar esta diluio e sim a suspenso estoque ajustada indi retamente.
Suspenso n'! 3

Staphylococcusaureus

(ATCC 13150)

Seguir o mesmo procedimento da suspenso

n'! 1, exceto que a padronizao da suspenso

inculo preparada diariamente a partir de suspen so estoque feita de modo a obter 80% de transmitncia em 580 nm.
Suspenso n9 4

Staphylococcus epidermidis (ATCC 12228) Manter o microrganismo em meio de cultura A inclinado, repicando-o se.manalmente.Inocular um tubo com meio de cultura A inclinado recmpre rado, e incubar a 32-35 c por 24 horas. Colher o crescimento de superfcie do meio inclinado com 3 ml de soluo fisiolgica estril, espalhando este volume sobre a superfcie de 250 ml de meio de cultura A, contido em garrafa de Roux. Incubar por 24 horas a 32-35 oCoColher o crescimento de superfcie da garrafa com 50 ml de soluo fisiolgica e contas de vidro estreis. Padronizar a suspenso estoque de modo a obter 80% de transmitncia em 580 nm e mantla em refrigerao por uma semana.
:,uspenso nf? 7

Micrococcus luteus (ATCC9341) Manter o microrganismo em meio de cultura A inclinado, repicandoo quinzenalmente. Antes da preparao da suspenso estoque, inocular em tubo com meio de cultura A inclinado e incubar a 26C por 24 horas. Colher o crescimento de superfcie do meio inclinado com 3 a 4 ml de meio de cultura D, espalhando este volume sobre a superfcie de 250 ml de meio de cultura A, con tido em garrafa de Roux. Incubar a 26C por 24 horas. Colher o crescimento de superfcie da garrafa com 15 ml de meio de cultura D e contas de vidro estreis. Diluir em 1: 10 uma alquota da suspenso estoque com meio de cultura D para

Bordetella bronchiseptica (ATCC4617) Manter o microrganismo em meio de cultura F inclinado, repicando-o quinzenalmente. Inocular um tubo com meb de cultura Finclinado. recm preparado e incubar a 37C por 16-24 horas. Colher o crescimento de superfcie do meio incli nado com 3 ml de gua estril, espalhando este volume sobre a superfcie de 250 ml de meio de cultura F, contido em garrafa de Roux. Incubar por 24 horas a 37C. Colher o crescimento de superfcie com 50 ml de gua e contas de vidro

estreis. Padronizar a suspenso estoque de modo a fornecer 50% de transmitncia em 580 nm e mant-Ia em refrigerador por quinze dias.

esta suspendo estoque. Guardar em refrigerador por 2 semanas.

Suspenso nt? 12 Suspenso n'? 8

Seguir o mesmo procedimento da suspenso n9 1, exceto que a padronizao da suspens'o estoque feita para obter 80% de transmitncia em 580nm.

Escherichia coli (ATCC 25922)

Seguir o mesmo procedimento da suspenso

Suspenso nl? 9 Klebsiella pneumoniae

Manter (A TCC 10031) no capsulado em o microrganismo

(ATCC 13150) Seguir o mesmo procedimento da suspenso n9 3, exceto que a padroniza'o de suspens'o estoque feita para fornecer 20% de transmitncia.

n98. Suspenso nt? 13 Staphylococcusaureus

meio de eultum A inclinado, repicando-o semanalmente. Inocular um tubo com meio de eultum A
inclinado, recm-preparado, e incubar a 32.35 c por 24 horas. Colher o crescimento de superfcie do meio inclinado com 3 ml de solu'o fisiolgica estril, espalhando este volume sobre a superfcie de 250 ml de meio de cultura A, contido em garrafa de Roux. Incubar por 24 horas a 32-35 oCoColher o crescimento de superfcie com 50 ml de solu'o fisiolgica e contas de vidro estreis. Diluir em 1:1O, tambm em solu'o fISiolgica estril, alquota da suspenso estoque de modo a fornecer 40% de transmitncia em 580 nm. Quando esta transmitncia for obtida, usar como inculo a suspens'o estoque ajustada e no a dilui'o de 1:10. Guardar a suspens'o estoque em refrigerador por no mais que uma semana.

Suspenso n'? 14 Bacillus pumilus (A TCC 14884)

Seguir o mesmo procedimento estoque tncia. feita para fornecer da suspenso da suspenso 40% de transmi

n9 1, exceto que a padroniza'o

Suspenso n'? 15 Escherichia coli (ATCC 11105)

Seguir o mesmo procedimento da suspenso

n9 8. Suspensa n'? 76 Escherichia coli (ATCC 25922)

Seguir o mesmo procedimento da suspenso

Suspenso nl? 10 Streptococcus faecalis (ATCC 14506)

Manter o microrganismo em meio de eultura E inclinado, repicando-o semanalmente. inocular um tubo com meio inclinado, recm-preparado, e incubar a 37C durante 24 horas. Colher o crescimento do tubo inclinado com 3 ml de meioJ e completar o volume para 10 ml com o mesmo meio J. Incubar o caldo por 16-18 horas a 37C e, em seguida, conservar em refrigerador por n'o mais que uma semana. A suspenslIo inculo ser obtida acer tando a transmitncia do caldo para 80% em 650 nm, tendo como controle o prprio meio.

n9I.

Suspenso nl? 11 Pseudomonas aeruginosa (ATCC 25619) Manter o microrganismo em meio de eultura I
inclinado, repicando-o semanalmente. Inocular um tu bo com meio de eultum I inclinado, recm-preparado, e incubar a 37C por 24 horas. Colher o crescimento de superfcie do meio inclinado com 3 ml de solu'o fisiolgica estril, espalhando este volume sobre a superfcie de 250 ml de meio de eultura I, contido em garrafa de Roux. Incubar por 24 horas a 37C. Colher o crescimento de superfcie com 30 ml de meio de eultura J e contas de vidro estreis. No h necessidade de padronizar

a) Camada Base A cada placa de Petri (20 x 150 mm), adicionar 42 rnl de meio de cultura fundido confoune especificado na Tabela 2. Deixar o meio solidificar em superfcie plana, mantendo as tampas das placas de um lado, com pequena abertura para a evapora'o da gua de condensao. b) Camada de Superfcie Fundir, esfriar a 48C e inocular o meio de cultura de superfcie especificado na Tabela 2. Homogeneizar o meio de cultura inoculado e distribuir 8 ml sobre o meio base, mantendo as placas em superfcie plana. Evitar as gotculas de gua de condensa'o sobre a superfcie do meio. c) Deposio dos Discos Depositar sobre a superfcie do meio de cultura, com o auxlio de pina, os discos do padro e da amostra, fazendo leve press'o sobre eles para melhor aderncia. Usar trs placas, depositando, alternadamente, em cada uma delas, os cinco discos referentes ao padro e os dois discos referentes ao lote sob teste. Incubar as placas por uma noite a 32-37C.

Aps a incubao, proceder s leituras dos halos de inibi!o com o auxl1io de projetor ptico, rgua milimetrada ou paqumetro. O clculo feito tirando-se a mdia das trs leituras de cada concentrao do padro e a mdia das seis leituras da amostra sob teste. Marcam-se os resultados na escala aritmtica do papel semilogartmico, sendo que as concentraes dos antibacterianos slo anotadas em escala logartmica. Usar a seguinte equall'o para calcular a melhor reta:

LIMITES Os discos so considerados satisfatrios quando os resultados obtidos se encontrarem dentro dos limites de 75 a 150% da potncia assinalada no r6tulo. A homogeneidade do lote considerada satisfatria se em seis discos do primeiro ou segundo teste da amostra a diferena entre a maior e a menor zona de inibio obtida no ultrapassar o limite de 2,5 mm, ou se o mesmo nmero de zonas fora do limite em trs ou mais testes consecutivos no for mais que 10% do total de discos testados. AMOSTRAS De cada lote fabricado retirar quantidade de amostras, necessrias ao controle de qualidade e ao controle de referncia. Estas permanecero armazenadas durante o perodo de validade do produto. ROnJLAGEM Todos os produtos devem estar nitidamente identificados por rtulos. Na etiqueta afIXada embalagem dos discos devem constar os seguintes dados: nome do produto, quantidade de discos em cada embalagem, concentrao do antibacteriano por disco, nome e endereo do fabricante, responsvel tcnico, nmero e validade do lote, condies de armazenagem e os dizeres "para uso exclusivo em laboratrio".

B
A

(30 + 2b + c - e)/5

= (3e+ 2d+c-a)/5

em que Mdia da mais baixa concentralo da "reta" padro, A = Mdia da mais alta concentrao da "reta" padro, a, b, c, d, e, = Mdia das zonas de inibio de cada concentrao, sendo que a corres ponde menor concentrao e e maior concentrao da "reta" padro, respectivamente. Marcar os dois pontos B e A no papel semilogartmico e unilos com uma reta. A mdia das 6 leituras da amostra lida na "reta" padro corresponder concentralo do antibacteriano contido nos discos sob teste. B

Tabela I - Concentrao de antibacterianOl em diJcOI, solventes utilizadOl e reta padrio para controle

Antibacterianos Amicacina, sulfato Amoxicilina Ampicilina Bacitracina Becanamicina Benzilpenicilina Cenamiclna, sulfato Cerbenicilina Cefaclor Cefedroxila Cefalexina Cefaloridina Cefalotina Cefapirina Cefazolina Cefotaxima Cefoxitina Cefradina Cefuroxlma Clindamicina Cloranfenicol COliitina, sulfato Dicloxacilina Doxiciclina Eritromiclna Espiremlclna Estreptomicina, sulfato Fosfomiclna* Gentamicina, sulfato Hetacilina lincomicina Minociclina Nalid(xlco, cido Neomiclna, sulfato Netilmicina Nitrofuranto( na Novobiocina sdica Oxecilina sdlca Pipem(dico, cido Pirom(dico, cldo* Polimixina B, sulfato Rlbostemlclna Rifamicina B Rifamplcina* Rifampicina Rifampiclna + Trimetoprima* Sisomlcina Sulfametoxazol + Trimetoprima* Sulfonamlclas Tetraciclina Tobramicina Trimatoprima Vancomlcina * * * * * *
f:05-SO

CodlConc. /.I(/ou V.I. AMI-30 AMO-10 AMP-10 BAC-10 BEC-30 PEN-l0 CAN-30 CAR-100 CFC-30 CFD30 CFE-30 CFA-30 CFl-30 CFP-30 CFZ-30 CTX-30 CFO-30 CFI-3O CRX-30 CLI2 ClO-30 COl10 DIC-1 DOX-30 ERI-15 E5P-100 EST-10 FOS50 GEN-10 HET-10 L1N-2 MIN-3O NAl-30 NEO30 NET-30 NIT300 NOV-30 OXA-1 PIP-20 PIR-50 POl3OQ RIB-SO RFM30 RIF-3O RIF-5 RIT35 SI5-10 SUT25 SUl-3OQ TET-3O TOB-10 TRI-5 VAN30

Solventes gua gua gua gua gua gua gua lcool metnico lcool medlico 50% lcool metnico 50% lcool met(ljco 50% lcool met(ljco 50% lcool met(lico 50% lcool met(lico 50% lcool met(ljco 50% lcool met(ljco 50% lcool met{lico 50% lcool met{lico 50% lcool metnico 50% lcool rnetnico 50% lcool met(ljco 50% gua gua lcool met(ljco lcool metnico lcool met{lico gua gua gua gua lcool met(ljco 50% lcool matflico gua gua lcool medlico 50% N, N-dimetilforrnamida gua gua lcool met(lico 50% lcool met(ljco 50% gua gua lcool medlico lcool met(ljco lcool met(ljco lcool met(ljco gua acetona 50% lcool met(lico 50% lcool medlico gua lcool met(ljco gua 25 j.IIl

Rem Padrlo -

Conc./Disos

3,3 1,3 1,3 1,3 3,3 1,3 3,3 12,8 15,0 15,0 15,0 15,0 15,0 15,0 15,0 15,0 15,0 15,0 15,0 1,0 3,3 1,3 0,71 3,3 1,3 12,8 1,3 25,0 5,0 1,3 1,0 3,3 3,3 3,3 3,3 33,0 3,3 0,71 15,0 25,0 33,0 25,0 3,0 3,0 3,0 15,0 3,3 15,0 33,0 3,3 5,0 3,0 3,3

6,3 12,2 23,4 45,Oj.lg 4,4 2,4 8,1 15,Oj.lg 2,4 4,4 8,1 15,Oj.lg 4,4 8,1 15,0 U.I. 2,4 6,3 12,2 23,4 45,Oj.lg 2,4 8,1 15,0 u.1. 4,4 6,3 12,2 23,4 45,Oj.lg 23,7 43,8 81,1 1SO,Oj.lg 21,2 30,3 42,4 60,Oj.lg 21,2 30,3 42,4 6O,Oj.lg 21,2 30,3 42,4 60,Oj.lg 21,2 30,3 42,4 60,Oj.lg 21,2 30,3 42,4 60,Oj.lg 21,2 30,3 42,4 60,Oj.lg 21,2 30,3 42,4 60,Oj.lg 21,2 30,3 42,4 60,Oj.lg 21,2 30,3 42,4 60,Oj.lg 21,2 30,3 42,4 6O,Oj.lg 21,2 30,3 42,4 6O,Oj.lg 1,41 2,0 2,82 4,Oj.lg 6,3 12,2 23,4 45,Oj.lg 2,4 4,4 8,1 15,Oj.lg 1,41 2,0 2,82,..g 1,0 6,3 12,2 23,4 45,O,..g 5,4 11,0 22,5j.1g 2,7 23,7 43,8 81,1 150,O,..g 2,4. 4,4 8,1 15,O,..g 35,5 50,0 70,7 100,Oj.lg 7,1 10,0 14,1 20,Oj.lg 4,4 2,4 8,1 15,Oj.lg 1,41 2,0 2,82 4,Oj.lg 6,3 12,2 23,4 45,01lg 6,3 12,2 23,4 45,Oj.lg 6,3 12,2 23,4 45,Oj.IQ 6,3 12,2 23,4 45,Oj.lg 63,0 122,0 234,0 450,Oj.lg 6,3 12,2 23,4 45,Ollg 2,82,..g 1,0 1,41 2,0 21,2 30,3 42,4 60,Oj.lg 35,5 50,0 70,7 100,Oj.lg 63,0 122,0 234,0 450,OU.1. 35,5 SO,U 70,7 100,Oj.lg 6, 12,0 24,0 48,0 j.IQ 6,0 12,0 24,0 48,Oj.lg 6,0 12,0 24,0 48,Oj.lg 21,2 30,3 42,4 6O,O,..g 6,3 12,2 23,4 45,O,..g 21,2 30,3 42,4 6O,Oj.lg 63,0 122,0 234,0 450,O,..g 6,3 12,2 23,4 45,Oj.lg 7,1 10,0 14,1 20,O,..g 6,0 12,0 24,0 48,Oj.lg 6,3 12,2 23,4 45,Oj.lg

PIR-50
RIF-3O

RIT35 SUT25 SUl-300

: Adicionado de 50 j.IIlde glicose-6-fosfato : cido pirom(dico 25 j.IIl+ cido beta-hidroxiplromdico : Outros microrganismos que no N. tmJningitidis : Rifampicina 30 j.IQ trimatoprima 5 j.lg + : Sulfametoxazol 23,75 j.IIl+ trirnetoprima 1,25 j.lg : Sulfonamidas - disco preperado com sulfediazina

Tabela 2 - Meb. de cultura, suspenlGe. bacterianas e inculo. recomendados no controle de disco. antibacterimos
ml da suspenslo p/100 ml/meio N9da suspendo Camada base C E E E E E E F E E E E E E E E E E E C E F E E C C C C C E C E C C C C E E C C F C E E E C C F E C C C ClImada superflcie C A A A A A A G A A A A A A A A A A A C A G A A C C C C C A C A C C C C A A C C G C A A A C C G A C C C

Antibacterianos Amicacina, sulfato Amoxicilina Ampicilina Bacitracina Becanamicina Benzilpenicilina Canamicina, sulfato Carbenicilina cefaclor cefadroxila cetalexina cefaloridina Cefalotina cefaprina cefazolina cefotaxima cefoxitina cefradina cefuroxima Clndamicna Cloranfenicol Colistina, sulfato Dicloxacilina Doxicclina Eritromcina Espiramicina Estreptomicina, Fosfomicina Gentamicina, Hetaclina Lincomlcina Minociclina Nalid(xico, NlOmicina, Netilmicina Nitrofuranto(na Novobiocina s6dica cido sulfato sulfato sulfato

0,2 - 0,7 5,5 - 6,5 0,5 - 1,5 0,5 - 1,5 0,2 - 0,7 0,5 -1,5 0,5 - 1,5 2.5 - 3,5 0.5 -1,5 0,5 -1,5 0.5 -1.5 0,5 - 1,5 0,5 - 1,5 0,5 - 1.5 0.5 -1,5 0,5 -1,5 0,5-1,5 0,5 -1,5 0,5 - 1,5 0,2 -0,7 3,5 -4,5 0,5 - 1,5 2,5 -3,5 1,0 - 2,0 1,5 - 2.5 1,5 - 2,5 2.5 -3,5 4.5 - 5,5 0,2 - 0,7 4,5 - 5,5 0.2- 0.7 1,0- 2,0 2,5 - 3.5 2,0- 3,0 0.2 - 0,7 0,2 - 0.7 3.5 -4,5 1,5 - 2,5 0,2 - 0,7 2.5-3,5 0.5 -1.5 2,5- 3,5 0.5-1.5 0,5 -1.5 3,5-4,5 0.2 - 0.7 2,5 - 3,5 2.5 - 3.5 1,0 - 2,0 0,2 - 0,7 2,5 - 3,5 0,5 - 1.5

13 13 3 3 1 3 8 11 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 16 3 4 7 13 1 10 5 1 12 13 3 3 1 12 6 13 13 5 13 5 12 7 6 5 5 5 13 14 15 1 3 14 6

Oxacilina sdica Pipem(dico, cido Pirom(dico. Polimixina Rifamicina Rifampicina Rifampicina Sisomcina Sulfametoxazol Sulfpnamidas Tetraciclina Tobramicina Trmetoprima Vancomicina Rifampicina 30 mcg e 5 mcg Teste com sulfadiazina cido B, sulfato B

R ibostamicina

+ Trimetoprima + Trimetoprirna

IX. RECIPIENTES E MATERIAIS EMPREGADOS NA SUA FABRICAO

IX.t. MATERIAIS EMPREGADOS NA FABRICAO DE RECIPIENTES

Os materiais descritos a seguir so empregados na fabricao de recipientes destinados a uso farmacutico.

M~TODOS GERAIS DE ANLISE DE MATERIAL PLSTICO

LIMPIDEZ E GRAU DE OPALESCtNCIA DE

SOLUOES
Existem minal'o.
Mtodo A

dois procedimentos

para esta deter-

Em tubos de ensaio de vidro neutro com dimetro interno de 12 mm, comparar 2,0 ml do lquido em anlise e 2,0 ml de lquido padro recm-preparado como descrito a seguir. Cinco minutos aps a preparao do mesmo, a compa ralro efetuada em ambiente escuro sob feixe luminoso lateral, proveniente de lmpada eltrica que fornea claridade de 1000 luz a 1 m de distncia.
Mtodo 8

Lmpido, se a limpidez corresponde da gua ou do solvente usado nas condies de operao. Muito fracamente opalescente, se sua opales. cncia no mais pronunciada que a da solulro Alou B1 Fracamente opalescente, se sua opalescncia nfo for mais intensa que a da soluo A2 ou B2 Opalescente, se sua opalescncia nlro for mais intensa que a da soluo A] ou B]. Muito opalescente, se sua opalescncia nlro for mais intensa que a da soluo A4 ou B4
ReBtivos

Em tubos de ensaio de vidro neutro com dimetro interno de 16 mm de fundo chato, comparar 10 ml do lquido em anlise com 10 ml de solulro padro recm-preparada como descrito a seguir. Cinco minutos aps a preparao da mesma efetuar a comparao sobre fundo negro observando na direfo do eixo no tubo.
Expresso dos resultados

Solulro de cloreto de sdio 0,2 M; dissolver 11,7 g de cloreto de sdio em gua e comple tar para 1000 ml. Diluio I de cloreto: 10 ml de soluo 0,2 M de cloreto de sdio e completar para 100 ml com gua (7,10 mg de Cl/l). DiluiiIo 11 de cloreto: 20 ml de diluio I e completar para 100 ml com gua (14,2 mg de CI/l). Diluio III de cloreto: 1,0 ml de diluio I e completar para 100 ml com gua (0,71 mg de

CI/I).
Soluo padro

Um lquido considerado:

Preparar as solues padro de acordo com o quadro que segue, evitando agitaio.

AI
ml
Diluio Diluio 111 11 (R)

Bl
ml 0,25

A2
ml 0,75

B2
ml 3,75

A]
ml

B]
ml

A4
ml

B4
ml

0,05

0,15 1,0 0,75 0,2 5,0 3,75 1,0 1,0 0,05 0,2 5,0 0,25 1,0 1,0 0,65 0,2

0,75 5,0 3,25 1,0

0,25 1,0 0,55 0,2

1,25 5,0 2,75 1,0

cido nftrico diludo gua

Soluo de nitrato de prata (R2)

ENSAIO POR. COMBUSTO EM ATMOSFERA DE OXIG~NIO (8r,a,F,I,S)

Reduzir a amostra a pequenos fragmentos a partir da tomada de ensaio (p) indicada na monografia. Colocar este material no centro de papel de filtro de 10 a 15 cm2, que foi previamente embebido, em sua parte mediana, com solulo saturada de carbonato de ltio e seco em estufa. Embalar a amostra e colocar no porta-amostra de platina existente na haste da tampa do ballo de Schniger de 500 mI. Colocar no ballo gua ou solulo absorvente, conforme indicado na monografia. Substituir o ar do frasco por oxignio e tamp-lo. Acender pequena chama na borda da embalagem da amostra e rapidamente trocar as tampas, ou seja, colocar a tampa com haste e porta-amostra e manter o frasco firmemente fechado durante a combustl'o. Deixar que a embalagem caia no meio absorvente para que se tenha a totalidade dos produtos de combustlo. Resfriar e lavar as paredes do frasco com l1gua.Em se tra-

tando de doseamento de cloro, tomar a amostra indicada na monografia e usar 20 ml de hidrxido de sdio M. Como meio de abosrlo adicionar 2,5 ml de cido ntrico SR, 2,5 ml de gua, 10 ml de nitrato de prata 0,1 M, 5 ml de solulo de sul fato frrico amoniacal 10% (P/V) e 1 ml de ntrobenzeno. Titular pelo tiocianato de amnio 0,05 M at coloralo amarelo-avermelhada. Fazer ensaio em branco nas mesmas condieS. porA centagem de cloro presente na amostra dada pela equalo. % Cl = (n2 - nd' 0,1773 p em que p = massa, em mg, da tomada de ensaio, 0,1773 = equivalente de cloreto. n2 = ml gastos na titulalo da tomada de ensaio, nl = ml gastos na titulalo do branco

Os materiais plastificados base de c1oreto de polivinila so constitudos de polmeros obtidos por policondensao em massa ou polimerizao em suspenso do c1oreto de vinila em presena de adjuvantes diversos com propriedades plastificantes, estabilizantes, lubrificantes, antioxidantes e assim por diante. Suas caractersticas so variveis, dependendo da composio qualitativa e quantitativa das misturas utilizadas e das condies de fabricao e usinagem. Os materiais base de PVC para uso farmacutico e mdico so definidos pela natureza dos seus componentes, dentro de especificaes que variam em fun'o de sua utilizao. Eles devem encerrar de 35 a 75% de cloreto de polivinila. No devem conter outros adjuvantes alm de steres dos cidos ctrico, adpico ou ftlico com o lcool at 50%. Contudo, o material usado em recipientes para coleta, conservalro, tratamento e administrao de sangue e seus derivados deve atender s especificaes da monografia. Pequenas quantidades de octanoato de zinco, fosfito de dinonil-2,4-fenila e de nonil4-fenila, leo de vaselina e estearato de zinco e de clcio (cada um em proporo inferior a 1%) so permitidas, bem como at 6% de leo de soja epoxidado, correspondendo de 6 a 8% em epxido e com ndice de iodo inferior ou igual a 6. Caractersticas P, esferas, grnulos, folhas translcidas de espessura varivel ou objetos manufaturados incolores; por combusto libera vapores negros espessos com odor cido picante. Iden tificao Preparao das solues para testes - As amostras a serem analisadas devem, se necessrio, ser divididas em pedaos medindo 1 x 1 em, aproximadamente. Extrao pelo tetraidrofurano - Pesar 5 g de material e transferir para balo com junta esmerilhada, juntar 50 ml de tetraidrofurano e conectar condensador para refrigerao. Manter sob agitao constante at dissoluo. A soluo pode ficar ligeiramente opalescente. Resfriar com banho de gelo e juntar, sob agitao, 100 rnl de etanol. Deixar decantar, filtrar ou centrifugar o lquido sobrenadante. Recolher o precipitado (A) e o filtrado (B). Soluo A Purificar cerca de 0,5 g do precipitado (A) por dissoluO em 5 rnl de tetraidrofurano e precipitao por adio sucessiva de 20 rnl de etanol

sob agitalro. Recolher o precipitado (A) por filtrao e dissolv-lo em 5 rnl de tetraidrofurano. Evaporar o filtrado (B), cuidadosamente, ou em evaporador rotativo, at consistncia xaroposa (1 a 3 rnl). Retomar o resduo com 10 rnl de cloreto de metileno.

1) Em cela de c1oreto de sdio para espectrofotometria no infravermelho (V.2.14) colocar algumas gotas da solu'o A, evaporar at secura em estufa aIOS c e.. traar o espectro infravermelho. O espectro deve corresponder ao do cloreto de polivinila padro; 2) Com a soluo B proceder nas condies do item 1 e traar o espectro de absorlro no infravermelho, comparando o espectro obtido com ftalato, adipato ou citrato de dioctila. O espectro deve corresponder ao do padro utilizado; 3) Introduzir 5 m1 da soluo B em coluna cromatogrfica de 20 mm de dimetro contendo 60 g de slica-gel. Eluir com 750 rnl de c1oreto de metileno, seguido de 250 rnl de acetona. Recolher o eluato acetnico, evaporar at secura e transferir a amostra para cela de cloreto de sdio com o fim de determinar o espectro de absoro no infravermelho. O espectro obtido deve corresponder ao do leo de soja epoxidado.

SOLUO SI

Aquecer sob refluxo, durante 5 horas, 25 g do material em 500 rnl de gua. Resfriar e decantar para eliminar a massa residual do material. Aspecto da soluo A soluo SI deve ser lmpida e incolor sem apresentar odor de lcool graxo (IX.l.I-Mtodo B). Absoro no ultravioleta Evaporar at secura 100 ml da soluo SI e retomar este resduo com 5 rnl de hexano. Traar o espectro de absoro entre 250 e 310 nm. A extino no mximo de absor'o no deve ser superior a 0,25. Poder tampo Utilizar a soluo SI e proceder como indicado na monografia do polietileno de baixa densidade (lX.l.1.2.1.).

Substncias redutoras

Utilizar a soluo SI e proceder como indicado na monografia do polietileno de baixa densidade. Devese gastar, no mximo, 3 ml de KMn04 0,01 M por g de material.
SOLUO S2

intensidade padro.
Bro

da colorao deve ser inferior do

Mineralizar 2,5 g do material, utilizando 15 ml de cido sulfrico e aquecer at obteno de massa xaroposa negra. Aps resfriamento, adicionar, com cautela, 5 ml de soluo concentrada de perxido de hidrognio. Aquecer modera damente e alternar evaporao e adio de perxido at obteno de lquido incolor. Concentrar at volume aproximado de 5 ml, resfriar e transferir para balo volumtrico de 25 ml, completando o volume com gua.
Estanho

Em cadinho de silcio, calcinar 2 g de material, e retomar o resduo com 10 rnl de cido clordrico, evaporando at secura em banho-maria. Por duas vezes este resduo retomado cada vez com 1 ml de gua. Filtrar e adicionar 3 ml de soluio de sulfato de clcio SR. Preparar um padro a partir de 1,2 mI de soluo de brio com 50 ppm (SP), adicionado de 0,8 rnl de gua e 3 mI de soluo saturada de sulfato de clcio SR (30 ppm). A turvao obtida na amostra nio deve ser superior do padro.
Fsforo total

A 10 ml da soluo S2 adicionar 0,3 rnl de cido tiogliclico e 30 rnl de gua. Homogeneizar e adicionar 2 rnl de solu[o de laurilsulfato de sdio SR, 1 rnl de reativo de "ditiol" (tolueno3,4-ditiol) e completar a 50 rnl com gua. Aps 15 minutos a colorao no deve ser mais intensa que a de um padr[o preparado a partir de 10 rnl de cido sulfrico diludo a 1:5 (V/V) adicionado de 10 rnl de soluo de estanho de 5 ppm (50 ppm).
Metais pesados

A 10 ml de solu'o S2 adicionar 2 gotas de fenolftalcna SI e soluo de hidrxido de sdio concentrado ::= SR at fraca colorao rsea. Completar o volume para 20 rnl com gua. Adicionar 2 mI de soluo tamp[o pH 3,5 SR e 1,2 ml de reativo de tioacetamida SR. Agitar e deixar repousar por 2 minutos. A colorao castanha no deve ser mais intensa que a obtida com 5 rnl de soluo de chumbo de 10 ppm adicionada a 15 mI de gua (50 ppm). A colorao amarela da soluo no deve ser mais intensa do que a obtida com 2 ml de soluo com 5 ppm de cdmio adicionada de 18 ml de gua (10 ppm).

Calcinar em cadinho de platina 0,25 g de material em presena de 0,5 g de carbonato de sdio anidro. Deixar resfriar e retomar o resduo com gua. Transferir para balo volumtrico de 50 mI, lavando o cadinho. Acidificar com cido sulfrico a 60%, at que no ocorra mais efervescncia. Completar o volume para 50 mI com gua. A 20 ml desta solu"o adicionar 25 ml de reativo 1110libdovandico SR e completar a 50 mI com gua. Preparar padro a partir de 1 rnl de soluo de fosfato monopotssico a 0,0219% (p/V) adicionado de 10 mI de gua e 25 mI de reativo molibdovandico. Completar para 50 rnl com gua. Se a soluo em anlise tomar colorao amarela, esta n[o deve ser mais intensa que a obtida com o padro (500 ppm).
Cloreto de vinla (monmero)

Determinar por cromatografia a gs (y .2.17 .5), utilizando heptano como padro interno.

Tomar 10 ml da soluo S2 diluda a 1:200 (VIV) em gua e adicionar 5 mI de soluo tampo de acetato pH 4,4, 1 rnl de solu'o de tiossulfato de sdio 0,05 M SV e 5,0 rnl, exatamente medidos, de soluo diluda de ditizona (0,0008%) SR. Agitar e examinar aps 2 minutos a colorao da fase orgnica. Simultaneamente, efetuar o ensaio com padro preparado a partir de 1 mI de soluo a 10 ppm de zinco SR e 9 rnl de gua e outro ensaio em branco com 10 ml de gua. Se a fase orgnica tomarse levemente violeta, a

Utilizar 2 frascos de 7 rnl e para cada um deles transferir tomada de amostra compreendida entre 0,950 e 1,050 g. Adicionar em um dos frascos 5 mI de soluo de heptano a 0,003% (p/V) em acetato de etila e, no segundo frasco, 5 mI de soluo de heptano a 0,0003% (PN) em acetato de etila. Fechar os frascos e deixar em repouso durante 16 horas temperatura ambiente.

Pr8pt1ralo da wlu6Bs ptldrlo

a) Soluo de cloreto de vinila a 1,200 g/1000 ml (efetuar esta manipulao em capela com exa ustio ): Pesar frasco de 50 mI, com tampa, contendo 50 mI de acetato de etila. Encher seringa pIs-

tica (polietileno ou polipropileno) com cloreto de vinila e deixar permanecer em contacto durante alguns minutos. Esvazi-Ia, colocando a seguir mais 50 ml do mesmo gs. Adaptar agulha hipodrmica e acertar o volume para 25 ml. Injetar lentamente este volume no frasco previamente pesado, agitando para facilitar a dissoluo e evitando contacto entre o lquido e a agulha. Pesar o frasco e calcular o teor de cloreto de vinila da solull'o obtida, expresso em g do monmero cloreto de vinila por ml (p/V) (50 ml da solull'o obtida contm, aproximadamente, 0,06 g de cloreto de vinila).

CondilJe, de operelo

Coluna em ao inoxidvel de 3 m de comprimento e 3 mm de dimetro externo cheia com polietilenoglicol* 20M a 10% p/p em suporte de terra de dtatomaceas calcinada (80-100 C). Temperatura: injetor 200C; detector 150C; coluna 60 Uc durante 2 minutos e subseqente elevafo de 15C por minuto at 110 oCoManter a 100 c durante 4 minutos. Gs de arraste: nitrognio (40 ml/min). Detector de ionizao de chama.

b) Soluo padro, diluill'onC? 1 Pesar exatamente cerca de 0,05 g de material Utilizar 4 frascos de 7 ml contendo cada wn em anlllise para deterrninall'o do cloro total, 5 ml de heptano a 0,003% (P/v) em acetato de segundo o mtodo de combusto em atmosfera etila. Tomar trs deles e injetar respectivamente de oxisenio (V.3.4.3). Cada ml de solulo de 25, 100 e 200 JJ. da solull'oa 1,2 g/IOOO. tiocianato de amnio 0,05 M SV corresponde a 0,003125 g de cloreto de polivinila. c) Solufo padro, diluill'onC? 2 Utilizar cinco frascos de 7 ml contendo cada um 5 ml de solull'ode heptano a 0,0003% (P/v) (n2 - nd 0,3125 em acetato de etila. A cada quatro deles injetar, %PVC = p respectivamente, 2, 5, 10 e 25 p.l da solufo a 1,2 g/1000. p = massa da amostra, ou tomada de ensaio Injetar sucessivamente 2 ml de cada uma das = volume gasto na titulalo da amostra solues padro de diluies 1 e 2. O teor de = volume gasto na titulalo do branco cloreto de vinila da amostra examinada deve ser inferior a 1 ppm. = equivalente de cloreto de polivinila

1X.1.1.2.1 - POLlETILENO DE BAIXA DENSIDADE

Substncias redutoras

Obtido a partir de reao de polimerizao do etileno com oxignio ativo como catalisador, o polietileno contm, no mximo, 0,02% (p/p) de hidroxitolueno butilado (BHT) ou, no mximo, 0,05% (p/p) de Irganox 1076 como estabilizante. Este tipo de polietileno tambm designado como "polietileno de alta presso".
Caracter/sticas

P, esferas, grnulos, folhas translcidas de espessura variada ou nl)jetos manufaturados. Solvel em tolueno a quente e insolvel na gua, metanol e etanol. Insolvel no hexano que, no entanto, dissolve os baixos polmeros residuais. SOLUO S2 Introduzir em balo 10 g do material e 50 ml de Os materiais base de polietileno de baixa densidade amolecem a partir de 100 o C e queimam hexano. Adaptar condensador e aquecer sob com chama azulada desprendendo odor de vela. refluxo durante 4 horas. Resfriar em gua gelada e filtrar rapidamente por cadinho de vidro de Densidade: 0,910 a 0,930. porosidade fma (10-16 J,Lm). Recolher o filtrado e fechar o recipiente para evitar evaporaio. Identificao Levar a refluxo durante 15 minutos 0,5 g de material em 10 ml de clorobenzeno. Da soluio obtida gotejar sobre cela de NaCl para procedimento em espectroscopia na faixa do infraverme lho; secar o solvente a 80 c e traar o espectro. Caso o material esteja sob forma de folhas, a identificaio procedida diretamente.
Absoro no ultravioleta

A 20 ml de soluo SI adicionar 2 ml de cido sulfrico 0,5 M SV e 20 ml de permanganato de potssio 0,01 M SV. Deixar em ebulio durante 3 minutos. Resfriar temperatura ambien- . te e adicionar 1 g de iodeto de potssio. Titular com tiossulfato de sdio 0,005 M SV em presena de goma de amido. Efetuar ensaio em branco a partir de 20 ml de gua. Sejam n e n' o nmero de ml de tiossulfato 0,005 M utilizado respectivamente para amostra e branco; n - n' deve ser inferior a 0,5 ml.

Traar o espectro de absoro da soluo S2 entre 220 e 340 nm. Utilizar cubetas de 1 em. Comparar com o espectro obtido com soluo de BHT a 0,004% (P/V) em hexano, que apresenta mximos situados a 227 e 283 nm ( 3 nm), ou com o espectro de uma soluo de Irganox 1076 a ENSAIO 0,01% (P/V) no hexano que apresenta mximo de absoro a 283 nm ( 3 nm). Preparo da amostra O valor de extino no mximo de absoro do As amostras, quando necessrio, devem ser estabilizante identificado no deve ser superior ao cortadas em pedaos de 1 x 1 cm. obtido com a soluo padro correspondente.
SOLUO SI

Substncias solveis no hexano

Introduzir em balo 25 g de material e adicionar Evaporar 10 ml da soluo S2 em banho-maria 500 ml de gua. Aquecer sob refluxo durante fazendo uso de cpsula de vidro tarada. Secar em 5 horas. Deixar resfriar e decantar. estufa durante uma hora temperatura de 100105C. O peso do resduo no deve ser superior Aspecto da soluo SI a3%. A soluo SI deve ser incolor e lmpida (X. 1.1. Mtodo B), no devendo apresentar odor Cromatografia em camada delgada de lcool graxo. Utilizar placa de s11ica-gelGF 254. Aplicar soluo padro em hexano contendo 0,002% Poder tampo (p/V) de BHT e 0,005% (p/V) de Irganox 1076. Tomar 100 ml da soluo SI e adicionarO,15 ml Efetuar uma primeira corrida altura de 17 cm de corante BRP SI. A viragem do indicador para com o hexano. Secar a placa naturalmente e entio efetuar uma azul no deve necessitar mais do que 1,5 ml de hidrxido de sdio 0,01 M SV. A 100 ml da solu- segunda corrida altura de 15 cm em clorofrmio. o SI adicionar 0,2 ml de soluio de alaranjado Secar a placa ao ar e pulverizar com soluo de metila SI. O incio da viragemdo indicador no clorofrmica de iodo at apario das manchas. deve gastar mais do que 1 ml de cido clordrico A soluo S2 pode apresentar manchas correspondentes a um dos padres e aos polmeros de 0,01 MSV.

baixo peso molecular que tenham migrado com ohexano.

ENSAIO

Preparo da amostra Cinzas sulfatadas

Proceder como descrito em V.2.1O utilizando amostra de 10 g e 2 ml de cido sulfrico 0,1 M. O teor de cinzas sulfatadas no deve ser superior a 0,02%. Quando possvel, cortar as amostras em pedaos de aproximadamente 1 x 1 cm.

SOLUO S}

Como indicado na monografia de baixa densidade.

1X.1.1.2.2 - POLIETILENO DE ALTA DENSIDADE

do polietileno

Obtido a partir de reao de polimerizao de etileno sob baixa presso e em presena de catalisadores, que conferem ao produto traos de silcio e cromo ou alumnio e titnio. Como estabilizante encontra-se o hidroxitolueno butilado, correspondente a 2,6-bis (1, l-dimetiletil)4-metilfenol (BHT).

Aspecto da soluo SI
A soluo deve ser lmpida e incolor (lX.1.1 -Mtodo B).

Poder tampo
Como indicado na monografia de baixa densidade (lX.1.l.2.1). do polietileno

c.racterlsticas
P, esferas, grnulos, folhas translcidas de espessura variada ou objetos manufaturados. O polietileno de alta densidade solvel em tolueno a quente, insolvel em gua, hexano, metanol e etano1. Esses materiais amolecem a partir de 140C queimando com chama azulada e desprendendo odor de vela. Densidade: 0,991 a 0,965.

Substncias redutoras
Como indicado na monografia de baixa densidade (IX. 1. 1.2.1.). do polietileno

SOLUOS2

Idtmtificao
a) Como indicado na monografia do polieti. leno de baixa densidade. b) O produto responde, no mnimo, a uma dessas reaes:

Introduzir em balo munido de agitador 10 g do material e adicionar 40 mI de hexano (R). Adaptar em condensador e aquecer sob refluxo durante 4 horas. Resfriar em gua gelada e fIltrar atravs de cadinho de vidro de porosidade fina (10-16 ~). Transferir quantitativamente o fIl trado para balo volumtrico de 50 mI. Completar o volume com hexano.

Absoro no ultravioleta
Traar o espectro de absoro no UV entre 220 e 340 nm, utilizando a soluo 82 em cubetas de quartzo de 1 cm. Comparar o espectro obtido com o de uma soluo de BHT a 0,002% (p/V) em hexano. Os espectros da soluo em anlise e do padro devem apresentar mximos a 227 e 283 nm ( 3 nrn). Medir a extin'o num destes mximos de absor'o. O teor em BHT no deve ser superior a 0,02%.

Cromo - metade do resduo obtido no ensaio de cinzas sulfatadas, adicionar 0,25 ml de gua e 0,3 ml de bidrxido de sdio 2 M. luntar 10 mg de persulfato de sdio e levar ebulifo por 30 segundos . .Rellfriar e adicionar, gota a gota, cido clordrico 2 M, at viragem em papel tornasso1. Resfriar e adicionar 2 gotas de soluo alcolica de difenilcarbazida 8R. Obtm-se colorao violeta na presena de cromo. Titnio - metade de resduo obtido no ensaio de cinzas sulfatadas acrescentar 5 ml de cido sulfi1rico e 10 ml de cido fluordrico. Homogeneizar e aquecer at que se desprenda fumaa branca. Retomar este resduo com 30 ml de gua e levar ebulio at dissolver. Resfriar e transferir para balo volumtrico de 50 ml, com pletar o volume com gua. A 10 mI desta soluo adicionar 1 ml de soluo concentrada de perxido de hidrognio. Obtm-se colorao amarela na presena de titnio.

Crometogrefie em camada delgada

Utilizar placa de slica-gel GF 254 e aplicar 25 ,.J de soluo ~ e 25 ,.J de soluo padro de BGT a 0,002% (P/V) em hexano. Utilizar como fase mvel mistura de 95 volumes de hexano e 5 volumes de acetato de etila. Revelar com lm pada UV a 254 nm e por pulverizao de soluo de sulfato frrico-ferricianeto de potssio. O cromatograma deve apresentar, aps pulverizao daquela soluo, mancha azul de mesmo Rf e de mesma superfcie e intensidade que a obtida no cromatograma padro.

Cinzas sulfatadas

Substncias redutoras

Determinar como indicado na monografia de polietileno de baixa densidade, a partir de 5 g de material. O teor de cinzas sulfatadas no deve ser superior a 0,1 % (IX.l.l.2.l).
IX.l.l.2.3 - POLIPROPILENO

Como indicado na monografia de baixa densidade (IX.l.l.2.I).

SOLUO S2

de polietileno

Como indicado na monografia de baixa densidade (IX.1.1.2.I).

Absoro no ultravioleta

de polietileno

Obtido a partir da polimerizao do propileno, este composto contm traos de alumnio e de titnio provenientes dos catalisadores, assim como produtos de estabilizao como estearato de clcio.
Caracterlsticas

Diluir a soluo S2 a I :20 em hexano e traar o espectro de absoro entre 220 e 340 nm, utilizando cubetas de quartzo de 1 cm. As extinOes observadas nos mximos de absoro entre 2S0 e 300 nm no devem ser superiores a 0,2.
Substncias solveis em hexano

P, esferas, grnulos, folhas translcidas de espessura variada ou objetos manufaturados no coloridos. pouco solvel em tolueno, xileno e em decallna a frio. Insolvel em gua, metanol, etanol e hexano que, no entanto, dissolve baixos polmeros residuais. Os materiais em polipropi. leno amolecem a partir de ISO c e queimam com chama azulada, desprendendo odor de vela e de lcool octlico. Densidade: 0,900 a 0,910.

Evaporar em banho-maria e em cpsula de vidro tarada 10 rnl de soluo 52. Secar em estufa a l00-IOS oCo O peso de resduo n'o deve ser superior a 3%.
Cromatografia em camada delgada

.a) Como indicado na monografia de polietileno de baixa densidade (IX.1.1.2.1). b) Ao resduo obtido no ensaio de cinzas sulfatadas adicionar S rnl de cido sulfrico e 10 g de sulfato monopotssico. Homogeneizar e aquecer at desprendimento de fumaa branca. Retomar com 30 rnl de gua e levar at ebulio para solubilizar. Resfriar e transferir para balo volumtrico de SO rnl e completar o volume com gua. A 10 rnl desta soluo adicionar 1 ml de soluo concentrada de perxido de hidrognio SR quando ento se obtm colorao amarela.

Utilizar placa de slica-gel GF 254. Fa7..er aplicaes de SOp.l da soluo S2 e SOJ.ll de uma soluo que contenha 0,1 % (p/V) em hexano, de cada uma das seguintes substncias:

a) b) c) d)

cido esterico, Irganox PS 800, Irganox 1076, Irganox 1010.

Preparo da amostra

Como indicado na monografia de baixa densidade (IX.1.1.2.l).

SOLUO SI

de polietileno

Desenvolver o cromatograma altura de IS cm com hexano, secar a placa naturalmente e entl'o proceder a novo desenvolvimento altura de IS cm com clorofrmio lavado com gua e mtrado. Secar a placa ao ar. Revelar luz ultravioleta a 2S4 nm ou pulverizar soluo clorof6rmica de iodo at aparecimento das manchas. O cromatograma da amostra deve apresentar quatro manchas com valores de Rf idnticos aos do cromatograma padro e, perto da linha do eluente, mancha correspondendo aos polmeros de baixo peso molecular.
Cloretos

Como indicado na monografia de baixa densidade (IX.1.1.2.l).

Aspecto da soluo

de polietileno

A soluo SI deve ser lmpida ou, no mximo fracamente opalescente (IX.l.1 - Mtodo B).

Poder tampo

Como indicado na monografia de baixa densidade (IX.l .1 .2.1 ).

do

Efetuar a minerallzao do cloro por combusto no oxignio com amostra de O,OSg de polipropileno. Os produtos de combusto s'o absorvidos em 10 ml de hidrxido de sdio 0,1 M SV. Adi cionar 0,5 ml de cido ntrico e completar o volume a 15 ml com gua. A soluo deve satisfazer ao ensaio-limite de cloretos. Simultaneamente preparar um padro a partir de 10 rnl de hidrxido de sdio 0,1 M SV. Adicionar 0,5 ml de cido ntrico SR a S ml de soluo de cloreto aS ppm.

Cinzas sulfatadas

SOLUO 82

Como indicado na monografia do Polietileno de baixa densidade (IX.1.1.2.1), a partir de 10 g de material. A taxa de cinzas sulfatadas nlo deve ser superior a 0,1%.
IX.l.U.4 - POLIESTIRENO

Dissolver 5 g de poliestireno em clorofrmio utilizando agitador mecnico. Completar a 50 ml com o mesmo solvente.
Material solvel no metanol

Obtido a partir de reao de polimerizao do estireno com perxidos orgnicos como catalisadores, o poliestireno contm Irganox 1076 como estabilizante, leo de parafina como plastificante e traos de lubrificantes, que so utilizados durante a elaborao dos objetos, tais como cido esterico, estearato de zinco e N,N -diesteariletilenodiamina.
Caractersticas

Tomar 5 ml da solulo 82 e adicionar 15 ml de clorofrmio. Adicionar lentamente e sob agitafo 50 ml de metanoI. Deixar repousar durante 2 horas na geladeira. Filtrar e lavar o precipitado com 10 ml de metanol. Evaporar em banho-maria em cpsula de vidro tarada e seca em estufa (100-105C) at peso constante. O peso do resduo no deve ser superior a 25 mg.
Estireno

P, esferas, grnulos, folhas translcidas de espessura variada ou objetos manufaturados no coloridos. Solvel em tolueno, xileno, estireno, clorofrmio e cloreto de metileno. Insolvel em metanol que, no entanto, dissolve os baixos polmeros.
Identificao

Cromatografia a gs (V.2.17.5) utilizando o xileno como padro interno. A soluo exame formada a partir de 10 ml da soluo S2 qual se adiciona, lentamente e com agitao, 10 ml de soluo de xileno a 0,02% (p/V) e etanoI. Resfriar por 2 horas e depois fIltrar.

Colocar algumas gotas da soluo S2 (ver em Poliestireno-Ensaio) sobre cubeta de cJoreto de sdio para espectrofotometria no infravermelho e evaporar o solvente a 70C. Traar o espectro e fazer comparao com espectro padro do poliestireno. Caso o material se encontre sob forma de folhas, a identificao efetuada diretamente.

a) Soluo 0,1% de estireno (P/v) em clorofrmio. b) Solues diludas Em srie de seis frascos introduzir 10 ml de soluo de xileno a 0,02% (P/V) em metanoI. Em cinco deles adicionar, respectivamente, 1,2,3, 4 e 5 ml da soluo de estireno em clorofrmio (0,1% (P/V). Completar os volumes a 20 ml com clorofrmio. Os teores em estireno so, respectivamente, iguais a O, 0,05, 0,10, 0,15, 0,20 e 0,25 mg/ml. Injetar, sucessivamente, 2 pl de cada uma das solues diludas e 1 a 5 J,Llda soluo em anlise. Calcular o teor em estireno da amostra examinada, que no deve ser superior a 0,2%.
Condies de operao

Preparo da amostra

Como indicado na monografia do polietileno de baixa densidade (IX.1.1.2.1).

SOLUO SI

Como indicado na monografia do polipropileno (IX.l.l.2.3).

Aspecto da soluo

Como indicado na monografia do polipropileno (1X.l.1.2.3).

Coluna de ao inoxidvel de 3 m de comprimento e 3,175 mm de dimetro cheia de polietilenoglicol* 20M a 20% (pjp) em suporte de Chromosorb (malha 30 a 60). Temperatura: injetor = 200C detecto r = 200C coluna = 110 c Gs de arraste: nitrognio (30 ml/min) Detector de ionizao de chama.
Compostos insaturados

Tomar 100 ml da soluo SI (IX.1.l.2.3), adicionar 0,15 ml de corante BRP SI. A viragem do indicador para azul no deve necessitar mais do que 1,5 ml de hidr6xido de sdio 0,01 M SV.
Substncias redutoras

Como indicado na monografia do polietileno de baixa densidade (IX.l.1.2.l).

Transferir para frasco comco, munido de tampa, quantidade da amostra (p) de aproxima macrogol

damente 0,50 g de poliestireno. Adicionar 50 mI de clorofrmio e agitar. Adicionar 10 ml de soluo actica de bromo 0,2 M. Molhar a tampa com uma gota de gua, tampar e agitar. Deixar em contato durante uma hora, ao abrigo da luz. Adicionar 10 ml de soluo de iodeto de potssio 1M e 100 ml de gua. Titular com tiossulfato de sdio 0,05 M SV. Efetuar ensaio em branco. Sejam n e n' o nmero de ml gastos para amostra e para o branco, respectivamente. Cada ml de tiossulfato de sdio 0,05 M SV corresponde a 0,00799 g de bromo.
(n'-n)xO,799

O ensaio para zinco feito a partir de 0,5 ml da soluo adicionada de 9,4 ml de gua. Adicio nar 5 ml de soluo tampo de acetato pH 4,4, I ml de soluo de tiossulfato de sdio e 5 ml exatamente medidos de soluo diluda de ditizona. Agitar. Preparar, paralelamente, nas mesmas condies, ensaio a partir de padro de I mI de soluo de zinco a 10 ppm e 9 ml de gua. Aps 2 minutos, a colorao da fase orgnica n"o deve ser mais intensa do que a obtida com o padro (0,2%).
lX.1.1.2.S - POLlESTIRENO OPACO

Certos materiais base de poliestireno so adicionados de xido de titnio com a finalidade de tornlos opacos.
Caractersticas

,....

Perxidos residuais

Pesar 5 g de material cortado em pedaos de So as mesmas descritas na monografia de 1 x 1 cm e colocar em balo cnico. Adicionar 150 ml de cloreto de metileno, tampar o frasco e poliestireno (IX. 1.1.2.4) com exceo de: agitar com agitador mecnico at completa dissoColorao - material branco opaco. luo. Borbulhar nitrognio na soluo para Solubilidade - as solues obtidas deste eliminar todo o ar, adicionar I ml de soluo de solvente so opalescentes ou turvas. iodeto de s6dio a 20% em cido actico anidro. Tampar, agitar e deixar repousar durante 30 mio nutos ao abrigo da luz. Adicionar 50 mI de gua e titular com tiossulfato de sdio 0,05 M SV em presena de goma de amido. Efetuar ensaio em a) O poliestireno opaco d as reaes de branco a partir de ISO ml de cloreto de metileno. Sejam n e n' o nmero de ml de tiossulfato 0,05 identificao da monografia de poliestireno M SV empregado, respectivamente, para amostra (IX.1.1.2.4). b) Adicionar 5 ml de cido sulfrico e 10 g e para o branco: n - n' deve ser inferior a 0,2 mI. de sulfato monopotssico aos resduos obtidos no ensaio de cinzas sulfatadas. Homogeneizar e Cinzas sulfatadas aquecer at que se desprenda fumaa branca. Como indicado na monografia de polietileno Retomar com 30 ml de gua e levar ebulio de baixa densidade (IX.l.l.2.l). O teor de cinzas para solubilizar. Aps resfriamento, transferir sulfatadas no deve ser superior a 0,1%' para balo volumtrico de 50 ml e completar o volume com gua. A 10 ml desta soluo, adio Metais pesados e zinco cionar 1 ml de soluo concentrada de per6xido Retomar o resduo do ensaio de cinzas sulfa- de hidrognio, quando. se evidencia colorao tadas com 2 ml de cido clordrico, e evaporar amarela. lentamente em banho-maria. Adicionar ao resduo 0,05 ml de cido clordrico, 10 ml de gua em ebulio e aquecer durante 10 minutos em banho- Ensaio O poliestireno opaco responde aos ensaios da maria. Resfriar e adicionar 'hidr6xido de amnio, gota a gota, at que a soluo se torne fracamente monografia do poliestireno (IX. 1.1.2.4), salvo que: alcalina ao papel de tornassol e ajustar o pH entre A soluo ensaio S2 permanece opalescente 3,0 e 4,0 com cido ntrico diludo. Filtrar e commesmo aps centrifugao ou fJJtrao. pletar a lOOOm1 com gua. Utilizar 12 ml desta A dissoluo do material lenta. soluo para o ensaiolimite de metais pesados O teor obtido no ensaio de cinzas sulfa (10 ppm). Preparar o padro com soluo de chumbo a 1 ppm. tadas no deve ser superior a 3%.

Condies de acondicionamento Os frascos de vidro devem ser acondicionados pelo fabricante em caixas de papelo, de cabea para baixo, com divisrias separando as camadas. Podem ser igualmente acondicionados com material adequado, com a finalidade de melhorar o acondicionamento, a proteo contra quebra e o atrito entre os frascos, e de assegurar a limpeza dos mesmos. O fornecedor deve identificar as caixas, atravs da gravao, carimbo ou etiqueta com os seguintes itens: Nome do fornecedor Contedo (tipo e capacidade do frasco) Quantidade por caixa Cdigo do material Lote de fabricao Data de fabricao Sinalizao para posicionamento (seta ou smbolo)
Tipos de vidro

Tipo NP - Vidro sdico-clcico de resistncia hidroltica baixa (no parenteral). O vidro Tipo I o mais indicado para envasamento de todas as preparaes para uso parenteral. O vidro Tipo lI, convenientemente desalcalinizado, geralmente usado para solues parenterais neutras e cidas. Para preparaes parenterais alcalinas, poder ser utilizado o vidro do tipo 11 desde que comprovada sua estabilidade em relao soluo envasada. O vidro Tipo 111 indicado para preparaes contendo veculos no-aquosos. Sua utilizao para preparaes parenterais aquosas ser aprovada apenas mediante o teste de estabilidade em relao soluo a ser envasada. O tipo NP indicado para qualquer tipo de produtos no parenterais, isto , para uso tpico ou oral.

De acordo com os valores obtidos no teste de resistncia hidroltica, os vidros so classificados

em:
Tipo I - Vidro de borossilicato de resistncia hidroltica elevada, ou seja, vidro neutro; Tipo n - Vidro sdico-clcico de resistncia hidroltica elevada, resultante de tratamento apropriado de superfcie (pelo S02); Tipo Vidro sdico-clcico de resistncia hidroltica mdia, porm, com grande resistncia mecnica, sem qualquer tratamento de superfcie;

Defeitos crticos - So aqueles capazes de por em risco a sade ou a vida dos usurios. Defeitos maiores - So os que impedem a utilizao funcional do frasco, provocam falta de segurana para as pessoas que os manuseiam e/ou comprometem o processo de envasamento. Defeitos menores - No impedem a utilizao normal dos frascos, mas podem comprometer a boa apresentao do produto. A valll60 Visual A-ftmo~~osmgeme~~~

m-

Defeitos
J

Q/Jllntidade do lote

AtnOItl1lf/flll1 (fr.cos)

Crfticos LOA = 0,04 Ac. Re.

Maiores LOA = 1,0 Ac. Re.

Menor. LOA =2,5 Ac. Re.

501 a 1.201 a 3.201 a 10.001 a

1.200 3.200 10.000 35.000

32 50 80 125 200 315 500

O O O O O O O

1 1 1 1 1

1 1 2 3 5 7 10

2 2 3 4 6 8 11

2 3 5 7 10 14 21

3 4 6 8 11 16 22

36.001 a 160.000 160.001 a 500.000 500.001 ou mais

LQA = Limite de aualidede Aceitvel Ac.: Aceitar Re.: Rejeitar

,
1

As amostras deverlIo ser coletadas segundo os princpios de amostragem ao acaso, ou seja, no devero ser retiradas em sua totalidade da mesma caixa, do mesmo ponto de pilha, carregamento ou palete. A determinao do nmero de caixas aleatrias para a amostragem do nmero de frascos indicado pela quantidade total do lote (Tabela 1) dever obedecer ao critrio de fi + 1.

- Texto impresso ou escala volumtrica comprometidos por falha ou erro de impresso.

Defeitos menores

Defeitos crticos

- Mancha ou pinta preta localizada na parede externa ou interna do frasco, sem possibilidade de trocas com o produto; - Risco ou estria na superfcie do frasco; - Sulco na parede externa do frasco; - Incluso de pequenas bolhas de ar na parede do frasco (at 2 mm); - Falta de perpendicularidade da parede em relao ao fundo.

Mistura de tipos de frascos; Texto impresso ou escala volumtrica no correspondente ao padro ou totalmente ilegvel; - "Fagulha" ou "rebarba" de massa de vidro localizada no interior do frasco ou aderida parede ou gargalo do mesmo; Fio de vidro que se estende internamente de um lado ao outro da parede ("gaiola" ou "telefone"); - Contaminao por presena de fungos no interior do frasco; - Mancha ou pinta preta localizada na parede interna, irremovvel nas condies normais de limpeza, mas sendo liberada para o produto nas condies do processamento.
Defeitos maiores

Avaliao ffsica e qufrnica

A - Plano de amostragem e qualidade
Tabela 2 - Plano de amostragem e de qualidade para avaliao fsica e qumica

Qualidade de frascos 32 50 80 125 200 315

Amostragem

..
5 5 5 8

Defeitos Menores Maiores LOA = 1,0 LOA =6,5 O O O O O O O 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 2 3 3 2 2 2 2 3 4 4

13 20 20

"Fagulha" ou "rebarba" na parede externa do frasco; Irregularidade de espessura do frasco (m distribuio de massa vtrea na parede ou no fundo do frasco); Deformao no corpo ou fundo do frasco (irregularidade na superfcie do vidro para dentro - chupado, estufado, dobra ou ruga); Incluso de material no fundido ou contaminao da forma, com rachadura ao seu redor (pedras); Estrangulamento da boca (ovalizao) ou boca no formada totalmente; Fissura na superfcie do frasco (trincado atravessando toda a massa de vidro, podendo ser no corpo, no fundo, na jun'o do corpo com pescoo ou no ombro do frasco); Rosca, anelou planura do gargalo incompleto ou deformado, comprometendo a veda'o; Incluso de pequena bolha de ar (acima de 2 mm) na parede do frasco; Gargalo torto (falta de perpendicularidade em rela'o ao corpo), deformado ou incompleto (m distribui'o ou falta de massa vtrea); Superfcie do gargalo no plana comprometendo a vedao;

500

Obtido no Plano de Amostragem para Inspeo Visual Para cada teste

Dimenses: fora das especificaes do desenho padro: Volume: fora da tolerncia, conforme Tabela 3.

Volume solutlo 0,5 1,0 2,0 5,0 10,0 20,0 30,0

(mO

LIquido 0,10 ml O,10ml O,15ml O,30ml O,50ml O,60ml O.SOml 2%

L fquido viscoso 0,12 ml 0,15 ml O,25ml O,50ml O,70ml O,90ml l,20ml 3%

50,0 ou mais

Choque trmico quando no suportar a temperatura diferencial mnima de 42C, segundo o procedimento que segue: Imergir completamente os frascos em banho de gua a 21C, mantendo-os imersos at que a temperatura se estabilize (21 + 1,1 C). Transferi los, imediatamente, para banho com temperatura mais alta, conforme o diferencial estabelecido, deixando-os completamente imersos por 5 minutos. Retorn-los imediatamente ao banho mais frio, imergindo-os por 30 segundos. A capacidade de cada tanque dever ser, no mnimo, de 4,2 litros para cada 500 g do vidro a ser testado. Defeitos menores Peso: Fora das tolerncias estabelecidas.

vez durante 30 segundos e decantando cuidado samente. Secar o frasco e o contedo por 20 minutos a 140 De e resfriar em dessecador. O p dever ser usado para teste, no mximo; at 48 horas aps a secagem. Procedimento Transferir 10 g de p de vidro, cuidadosamente pesado, para erlenmeyer com tampa e que tenha sido previamente submetido digesto com gua quimicamente pura a 90C, por 24 horas, ou a 121C, por 1 hora. Adicionar 50 mI de gua quimicamente pura e preparar um frasco para teste em branco. Autoclavar os frascos a 121C 2 c durante 30 minutos. Resfriar em gua corrente e decantar o sobrenadante para erlenmeyer, lavando o resduo com quatro pores de 15 ml cada de gua quimicamente pura. Estas sero adicionadas ao extrato principal. Acrescentar 5 gotas de soluo de vermelho de metila SI e titular, imediatamente, com soluio de cido sulfrico 0,01 M SV. O volume de cido gasto na titulao nio deve exceder ao indicado na tabela de Tipos de Vidros e Limites de Testes (Tabela 4). Teste no extrato aquoso Lavar, com gua quimicamente pura (conduti vidade nia maior que 0,15llmho/cm a 25 "c), os frascos selecionados, aleatoriamente, em nmero correspondente ao estabelecido pelo Plano de Amostragem. Encher os frascos com gua quimicamente pura at 90% de sua capacidade e tamp-Ios com papel de alumnio. Proceder autoclavaio a 121C 2 "C por 60 minutos. Retirar uma alquota de cada frasco, transferindo-as para proveta graduada, de modo a se obter 100 mI do extrato aquoso. Transferir tal extrato para erIenmeyer de 250 mI, adicionar 5 gotas de soluo de alaranjado de metila e titular, ainda aquecido, com soluio de cido sulfrico 0,01 M. O tempo entre a retirada do material da autoc1ave e a titutao nio deve ultrapassar 60 minutos. Proceder paralelamente a ensaio em branco. O volume de cido gasto na titulao nio deve ultrapassar ao indicado na tabela de Tipos de Vidros e Limites de Testes (Tabela 4).

c-

Teste de resistncia qumica ou hidroltica

Determina a resistncia do frasco de vidro novo ao ataque pela gua. O grau de ataque determinado pela alcalinidade liberada do frasco para o meio nas condies especificadas; extremamente pequeno nos frascos de maior resistncia. O teste deve ser realizado em ambiente isento de fumaas e poeiras. A amostragem para teste deve seguir o Plano de Amostragem e Qualidade do item Avaliao fsica e qumica. Teste no vidro pulverizado Preparao da amostra: Lavar, com gua quimicamente pura (condutividade no maior que 0,15Ilmho/cm a 25C), os frascos selecionados, aleatoriamente, em nmero correspondente ao estabelecido pelo Plano de Amostragem. Sec-los em corrente de ar seco. Quebrar os frascos em fragmentos de, aproximadamente, 25 mm e dividilos em trs pores de cerca de 100 g. Em almofariz especial, de ao inoxidvel duro ou de bronze, triturar cada porio, separadamente, e pass-la por peneiras nOs 20,40 e 50. Espalhar a poro retida na peneira nQ 50 em folha de papel e, com ajuda de mi, remover as partculas de ferro eventualmente introduzidas durante a pulverizao. Transferir o p para erlenmeyer de 250 ml de vidro resistente com seis pores sucessivas de 30 mI de acetona, agitando cada

Limitf16 Tipodfl vidro

Dtncrilo

Tipo dfI tfl6te

OIpidMJe (mO
Vidro boroailieato Vidro sdico-dlcico (tratado) Vidro sdico-Qlcico l.m tratamento) Vidro s6dicodlcico luso geraU Vidro pulverizado Extrato Aquoso Vidro pulverizado todos

Volume (mil de c:ldo sulfrico 0.01 M

1.0 0,7 0.2 8.6 15.0

11 11I

< 100
> 100
todos

NP

Vidro pulverizado

todos

Os materiais coostituintes dos recipientes plsticos para uso farmacutico slo constitudos principalmente de um ou mais polmeros e, eventualmente, de certos aditivos. Esses materiais nlo devem apresentar, em sua composilo, substincias que podem ser extradas pelo cOlltel1dodo recipiente em proporaes que levem alteralo de sua eficcia ou da sua estabilidade, ou ao aumen to de sua toxicidade. Quando os recipientes apresentam partes constitudas de diferentes materiais, estes elevem atender s especificaaes das respectiva mObografias.

A natureza e quantidade dos aditivos so funlo do tipo de polmero utilizado, da tecndogia de transtormafo do polmero em recipiente e do uso a que se destina. Os aditivos aceitveis 510 indicados nos tipos de formulalo de cada material descrito na Fannacopea. Poderio ser utilizados outros materiais, nlo delCntos na FlDIlacoptia, desde que a camposilo destes leia previamente aprovada pelas autoridades campetentes do Minist6rio da Sa1idee os recipientes fabricadoscam tais materiais atendam, tlll1bm, s especificaftesdesta mmografia de acordo com o fm a que se destinam.

Apresentam-se sob forma de bolsas plsticas flexveis ou ampolas plsticas, constitudos geralmente de polietileno ou de materiais base de cloreto de polivinila. So transparentes, de fonna a possibilitar a verificao do aspecto e limpidez das solues neles contidas.
ENSAIO

sulfrico 0,5 M SV e 20 ml de pennanganato de potssio 0,01 M SV. Deixar em repouso durante 15 minutos temperatura ambiente. Adicionar 1 g de iodeto de potssio e titular com tiossulfato de sdio 0,005 M SV, em presena de soluo de amido. Efetuar ensaio em branco em 10 mI de gua. A diferena entre as duas titulaes no deve ultrapassar 3 mI. Transmisso da luz Cortar sees circulares de duas ou mais reas do recipiente em anlise. Lavar e secar as peas cuidadosamente, de modo a no arranhar suas superfcies. Fazer a montagem da pea no suporte para leitura no espectrofotmetro. Medir a transmitncia, em relao ao ar, na regio espectral entre 290 e 450 nm, com intervalos de 2 nm. No comprimento de onda de transmitncia mxima, tirar a mdia dos valores obtidos para as duas ou trs amostras. A transmisso de luz mdia observada no deve exceder aos porcentuais mximos de 15% no caso de recipientes fechados com chama e 10%para os demais casos. Tolerncia
em

O ensaio deve ser efetuado com recipientes tratados de maneira usual para sua utilizao, ou seja, nas mesmas condies de lavagem e esterilizao. Em se tratando de recipientes cuja fabricao, envasamento e fechamento sllo efetuados em processo contnuo, abrir, esvaziar e lavar os recipientes com duas pores de gua para injetveis, usando volume equivalente a um quarto de sua capacidade total, antes de proceder ao ensaio. Preparao da soluo S Encher o recipiente com volume de gua para injetveis correspondente sua capacidade nominal; fech-lo cuidadosamente. Em se tratando de recipientes fabricados, envasados e fechados em processo contnuo fazer o fechamento com folha revestida de alumnio. Aquecer o material em autoclave aliO c durante 30 minutos. No caso de recipientes base de cloreto de polivinila, aquecer em autoclave a 110C durante 1 hora. Utilizar nmero suficiente para obter volume total de soluo S de 750 ml. Recolher, assepticamente, fralo de solulo S necessria para o ensaio de tolerncia em coelhos. Aspecto da soluo S A solUo lmpida e incolor. Acidez ou Alcalinidade A 100 mI de soluo S adicionar 0,15 ml de corante BRP SI. O indicador vira para azul, no necessitando mais que 1,5 rol de hidr6xido de s6dio 0,01 M SV. A 100 mI de solulo S adicionar 0,2 rol de soluo de alaranjado de metila. O incio da viragem no necessita mais que 1 mI de cido clordrico 0,01 M (SV). Absoro no ultravioleta Evaporar secura 100 ml de soluo S e retomar o resduo com 5 ml de hexano. Traar o espectro de absoro no ultravioleta entre 250 e 320 nm. A absorvncia no mximo de absoro no deve superar a 0,25. Substncias redutoras A 20 ml de soluo S adicionar 2 ml de cido

coelhos

Prep3rar trs coelhos como indicado no ensaio de pirognio (V.5.1.2). Isotonizar assepticamente a soluo S com adio de cloreto de s6dio estril e apirognico e aqued-la a 37 2C. Injetar na veia marginal de cada coelho volume de soluo S isotnica na proporo de 20 rol/kg de massa corporal. Medir as temperaturas retais a cada 30 minutos, durante 3 horas. A soma das elevaes trmicas deve ser inferior a 1,15 oCoObservar as reaes e comportamento dos animais durante a injeo, 15 minutos aps estas e durante as 48 horas seguintes. Os coelhos no devem apresentar sinal algum de intolerncia local ou geral. Esterilidade Os recipientes devem atender ao teste de esterilidade. Introduzir, assepticamente, no recipiente 100 rol de soluo estril de cloreto de s6dio a 0,9%. Agitar o recipiente para garantir o contacto da soluo com toda a parede interna. Filtrar o contedo em membrana de 0,45 J,lm e coloc-Ia no meio de cultura adequado, como descrito no teste de esterilidade (V.5.l.l).
1X.2.2.1.1. RECIPIENTE BASE DE CLORETO DE POLIVINILA

Estes materiais seguem a monografia para Recipientes de Material Plstico para Solues Injetveis Aquosas (IX.2.2.1), satisfazendo ainda aos ensaios descritos a seguir.

Resistincia trao Encher o recipiente com gua acidificada com I mI de cido clordrico diludo SR. Suspender o recipiente pela ala existente na sua parte inferior e aplicar fora de 20 N (2,05 kgt) no bico do mesmo. Manter a tralo durante 5 segundos. Repetir o ensaio aplicando a fora a cada uma das linhas de solda. No deve ocorrer ruptura, nem estiramento.

C/Ofeto

Proceder ao ensaio-limite para cloreto com 15 mI de soluo S (IX. 1.1.2.2). Preparar um padrllo com 1,2 mI de soluio a 5 ppm de cloreto e completar a 15 mI com gua (0,4 ppm). Amnia A 5 ml de soluo S adicionar gua at perfazer volume de 14 ml. A solullo deve satisfazer ao ensaio-limite para amnia. (V.3.2.6.) Estanho Em cpsula de vidro de borossilicato colocar 25 mI de solufo S e 2 mI de cido sulfrico concentrado. Evaporar at volume prximo de 3 m!. Resfriar e adicionar com precauo 1 mI de solullo concentrada de perxido de hidrognio. Aquecer moderadamente at descoramento da solufo. Caso nlo ocorra descoramento, alternar adilo de perxido de hidrognio e aquecimento. Resfriar e transferir para tubo graduado de 50 mI. Lavar a cpsula com gua e completar o volume para 20 mI. Adicionar 0,3 mI de cido tioglic6lico e 20 ml de gua. Misturar e adicionar 2 ml de solulo de laurilsulfato de sdio SR, I m1 de reativo de "ditiol" (tolueno-3,4.ditiol) SR e completar a 50 ml com SUa. Aps IS minutos a coloralo nlo deve ser mais intensa que a do padrlo preparado nas mesmas condies a partir de mistura de 10 m1 de cido sulfrico diludo a um quinto e de 10 mI de solulo a 5 ppm de estanho (2 ppm).

/mpermeabilidade Colocar o recipiente utilizado no ensaio de reaistncia trafo entre duas placas recobertas com papel absorvente impregnado de soluo de azul de bromofenol diludo (1 :5) SI e seco. Exercer, progressivamente, fora sobre as placas a fun de comprimir o recipiente de modo a que a presso interna (diferena entre a presso aplicada e a presslo atmosfrica) atinja 67 kPa (50 mmHg) em um minuto. Manter esta presso durante 10 minutos. O papel indicador no deve revelar escape do lquido do interior do recipiente. /mptlrmeabilidade ao vapor Envasar um recipiente com soluo de cloreto de sdio a 0,9%. Fechar e pesar o recipiente, conservando-o em estufa a 37C durante 7 dias, aps o que deixar esfriar temperatura ambiente e pesar. Calcular a perda sofrida referente a 365 dias. O valor encontrado nlo deve ser superior a 2,5%.

IX.2.2.2. REaPIENTF.S DE MATERIAL PLSTICO PARA SANGUE E PRODurOS DO SANGUE

Os recipientes (ou bolsas) em material plstico para a coleta, a conservao, o tratamento e a administrao do sangue e dos seus componentes so fabricados a partir de um ou vrios polmeros com certos aditivos. A composio, bem como as condies de fabricao dos recipientes, devem ser registradas no rgio competente do Ministrio da Sade, segundo a legislao nacional e os acordos internacionais que regem a matria. Alm de obedecer s exigncias normais para recipientes de material plstico para soluo injetvel aquosa (IX.2.2.1.), os materiais, nas condies normais de utilizao, no devem ceder monmeros ou outras substncias em quantidade nociva, ou que acarretem modificaes do sangue. Os recipeintes, fornecidos em condies estreis, podem conter solues anticoagulantes segundo o uso previsto. Devem ser suficiente mente transparentes para permitir a inspelo visual do seu contedo, antes do enchimento com o sangue e aps esta operao e suficientemente elsticos para oferecer o mnimo de resistncia ao enchimento e esvaziamento nas condies normais de utilizao. Os recipientes nio devem conter mais que 5 mI de ar. Cada recipiente munido de dispositivo de acordo com o uso previsto. Pode apresentar um ou mais comprtimentos; neste ltimo caso, o recipiente de coleta ligado por um ou mais tubos a uma ou mais bolsas secundrias, para permitir a separalio dos componentes do sangue em sistema fechado. As peas alio de forma e tamanho apropriados para permitir a adaptaio conveniente dos disposi tivos de transferncia. Os protetores das agulhas e dos coneelores devem assegurar a esterilidade interna do mate rial e devem ser de fcil remoo. A capacidade dos recipientes expressa por sua capacidade nominal, que se entende pelo volume de sangue a ser envasado no recipiente, e de acordo com o volume envasado de soluo anticoagulante. Sua forma deve permitir a centrifugao, quando cheios. Os recipientes devem possuir dispositivos adequados para sustentao em posio que no prejudique o enchimento, a conservalo, a manipulao ou a administrao de sangue.

Ensaio O ensaio deve ser efetuado com recipientes nas mesmas condies de lavagem e esterilizao. Em se tratando de recipiente contendo soluo anticoagulante, desprezar a soluio, lavar o reci piente com 250 mI de gua para injetveis a 20 1 c e desprezar a gua de lavagem.
Prepars60 da solu60 51

Encher o recipiente com 100 ml de solulo estril e apirognica de cloreto de sdio a 0,9%. Fech-Io e aquec-Io em autoclave de modo que a temperatura do lquido seja mantida aliO c durante 30 minutos. Preparao da soluo 52 Introduzir no recipiente um volume de gua para injetveis correspondente sua capacidade nominal. Fechar o recipiente e aquec-Ioem autoclave de modo que a temperatura do lquido seja mantida aliO c durante 30 minutos. Resistincia s variaiJes de temperatura Colocar o recipiente em local apropriado temperatura inicial de 20 a 23C. Resfrilo rapidamente no congelador, mantendo-o ali durante 24 h. Elevar a temperatura a 50C, mantendo-o assim durante 12 h. Deixar resfriar temperatura ambiente. O recipiente deve satisfazer aos seguintes testes: resistncia centrifugalo, resist&lcia tralo, impeDlleabidade, impeDlleabilidade ao vapor, esvaziamento sob presalo e enchimento. Resistincia centrifuga60 Encher o recipiente com gua acidificada por adilo de 1 ml de cido c1ordico diludo SR. Envolver o recipiente em papel absorvente impregnado de azul de bromofenol diludo (1:5) SI ou de outro indicador apropriado e seco. Centrifugar a 5000 rpm por 10 minutos. Nlo deve ocorrer qualquer fuga sobre o papel indicador, nem qualquer distorllo permanente. Resistncia trao Proceder como indicado na monografia para Recipientes de Material Plstico para Solulo Injetvel Aquosa (IX.2.2.1).

Impermeabilidade Proceder como indicado na monografia para Recipientes de Material Plstico para Solu'o Injetvel Aquosa (IX.2.2.1). Impermeabilidade ao vapor Proceder como indicado na monografia para Recipientes de Material Plstico para Solu'o Injetvel Aquosa (Ix..2.2.l). Esvaziamento sob presso Encher o recipiente com quantidade de gua igual capacidade nominal, a 5 1 C, e fixar a uma das conexes do tubo para transfuso sem agulha. Comprimir o recipiente de modo a manter durante todo o esvaziamento press'o interna (diferena entre a press'o aplicada e a press'o atmosfrica) de 4,0 kPa (30 mmHg). O recipiente deve esvaziar-se em menos de 2 minutos. Velocidade de enchimento Ugar O recipiente, por meio de tubo previamente munido de agulha de pun'o, a reserva trio contendo soluo de mesma viscosidade que o sanRue, tal como, solu'o de sacarose a 33,5% p/V a 37C, mantendo diferena de 9,6 kPa (70 mmHg) entre presso atmosfrica e presso interna, COOl a base do recipiente e a parte superior da bolsa no mesmo nvel. O volume do lquido que flui para a bolsa em 8 minutos nlo deve ser menor que a capacidade nominal da bolsa. Esterilidade Proceder como indicado na monografia para Recipientes de Material Plstico para Soluo Injetvel Aquosa (IX. 2.2. 1). Pirognio A soluo SI deve satisfazer ao teste de pirognio (V.5.1.2). Injetar em cada animal 10 m1 da soluo por quilograma de peso corporal. Toxicidade A soluo SI satisfaz ao teste de toxicidade. Injetar em cada rato 0,5 ml da solulo. Efeito hemoltico no sistema tamponado Soluo tampo concentrada Dissolver 90,0 g de cloreto de sdio, 34,6 g de fosfato dissdico e 2,43 g de fosfato monossdico em gua e completar a 1000 mI.

Soluo tampo A o A 30,0 ml da soluo tamp'o concentrada juntar 10,0 ml de gua. Solulo tamplo B o A 30,0 ml da solu'o tamp'o concentrada juntar 20,0 ml de gua. Soluo tampo Co A 15 ml da soluo tamp'o concentrada juntar 85,0 ml de gua. A cada um de trs tubos de centrfuga introduzir 1,4 m1 de solulo S2' No tubo I juntar 0,1 ml de soluo tampo Ao; no tubo 11, 0,1 m1 de soluo tamp'o 80 e, no tubo m, 0,1 ml da soluo tamp'o Co' A cada tubo juntar 0,02 ml de sangue humano, fresco e heparinizado, misturar bem e aquecer em banho maria a 30 1 c durante 40 minutos. Preparar 3 solues contendo, respectivamente: I) 3,0 ml de soluo tampo Ao e 12,0 ml de gua (Soluo AI)' 2) 4,0 ml de solUlo tampo 80 e 11 ml de gua (Solu'o 81); 3) 4,75 ml de solu o tamplo 80 e 10,25 ml de gua (Solulo CI). Nos tubos I, 11 e III juntar, respectivamente, 1,5 ml das solues AI, B1 e CI. Preparar simulo taneamente .trs outros tubos de modo anlogo, substituindo a solu'o S2 pela gua. Centrifugar simultaneamente os tubos a serem examinados e os tubos de referncia (padro) a, exatamente, 2500 rpm durante 5 minutos. Aps a centrifugao, medir as absorvncias dos lquidos a 540 nm, utilizando a solulo tampio concentrada como lquido de compensalo e calcular a porcentagem do ndice hemoltico:

Aexp x 100 AulO em que: AlOo Aexp

=
=

absorvncia de tubo m, absorvncia do tubo I e 11, respectivamente, e dos tubos de referncia.

A soluo do tubo I fornece ndice hemoltico que nlo deve ultIapassar 10% e o ndice hemol tico da soluo do tuboIl nlo deve desviar mais de 10% do tubo de referncia. Utilizar 10,0 ml de sangue fresco com 0,1 ml de heparina 5.000 VI por m1 sem agente conser vante.

1X.2.2.2.1. RECIPIENTE BASE DE CLORETO DE POLIVINILA PARA SANGUE E PRODUI'OS DO SANGUE, CONTENDO OU NO SOLUO AN11COAGULANTE.

Amnia

Tomar 5,0 rnl da soluo S2 e completar 14 ml com gua. A solulo deve satisfazer ao ensaiolimite de amnia (2 ppm) (V.3.2.6).
Resduo por evaporao

Estes recipientes (bolsas) seguem as monografias de Recipiente Plstico para Sangue e Produtos do Sangue (IX.2.2.2) satisfazendo ainda os ensaios descritos a seguir.
Soluo de referncia

Utilizar como soluio de referncia a gua para preparao de injetveis contida em vidro de borossilicato e esterilizada em autoclave a 110 c por 30 minutos.
Substncias redutoras

Em bquer de vidro de borossilicato de caracidade apropriada, previamente aquecido a 105 C, evaporar 100 rnl da soluo ~. Nas mesmas condies, evaporar 100 mI da soluo de refe rncia (ensaio em branco). Secar os resduos em estufa a 100-105 c at peso constante. O resduo da soluio ~ nio deve ser superior a 3 mg do ensaio em branco.
Absoro no ultravioleta

Medir a absorvncia da soluo ~ em 230 a Imediatamente aps a preparao da soluio 360 nm, utilizando como lquido de compensaio S2 (IX.2.2.2.), transferir para o frasco de vidro a soluo de referncia. Entre 230 e 250 nm no borossilicato volume correspondente a 8% da capa deve ocorrer absolVncia superior a 0,30; entre cidade nominal do recipiente (bolsa). Juntar 251 e 360 nm ela no deve ser superior a 0,10. 20 rnl de permanganato de potssio 0,002M e 1,0 rnl de cido sulfrico diludo SR e deixar em Ftalato extrafvel repouso ao abrigo da luz durante 15 minutos. Soluo padro: Dissolver 1,0 g de ftalato de Simultaneamente, tomar volume igual da soluo dioctila (DEHP) em etanol com densidade relativa de refer6ncia, recm-preparada, em outro frasco entre 0,9373 e 0,9378 (solvente de extralo). de vidro borossilicato. Juntar em cada uma das duas solues 0,1 g Solues padro diludas: A partir da soluo de iodeto de potssio. Deixar repousar ao abrigo padro, preparar diluies correspondentes a 20, da luz durante 5 minutos e titular, imediatamente, 10,5,2, 1 mg do DEHP/l00 rnl usando o mesmo com soluo de tiossulfato de s6dio 0,01 M em solvente de extrao. presena de 0,25 ml de solulo de goma de amido. Prepaf'll6o da amostra: Por intermdio de tubo, A diferena entre as duas titulaes no deve exce agulha ou adaptadorcs. introduzir o solvente de der 2 rnl. extralo previamente aquecido a 37C, em bailo de vidro bem fechado, no recipiente (bolsa) em Acidez ou alcalinidade quantidade correspondente metade de sua capa Tomar volume da solulo S2 correspondente cidade nominal. Eliminar todo o ar do recipiente a 4% do volume nominal do recipiente (bolsa). e fechar o tubo. Imergir o recipiente, em posio Adicionar 0,1 rnl de soluio de fenolftalena SI: horizontal, no banho de gua mantido a 37 a solulo permanece incolor. Adicionar 0,4 rnl 1 c durante 60 minutos sem agitar. Retirar do de soluo de hidr6xido de s6dio 0,1 M e 0,1 rnl banho, agitar suavemente cerca de 10 vezes e de vermelho de metila SI: a solulo fica corada em transferir o contedo para frasco de vidro. vermelho alaranjado ou vermelho. Determinao espectrofotomtrica: Determinar a absoro das solues padrio diluda e da amostra Cloretos a 272 nm, usando como branco o solvente de Quinze ml da solulo 82 devem satisfazer ao extrao. Determinar a concentralo de ftalato ensaio limite de cloretos (0,4 ppm) (V.3.2.1.). em DEHP, em mg por 100 rnl de extrato. A Preparar padro com mistura de 1,2 rnl de soluo concentra[o nlo deve ser superior a 10 mg por 100 mI. a 5 ppm e de 13,8 rnl de gua.

X.MTODOSDEPREPARAO

x.t. MTODOS DE ESTERILIZAO

Um mtodo de esterilizao tem por finalidade remover ou destruir todas as formas de vida, animal ou vegetal, macrosc6picas ou microscpicas, saprfitas ou no, presentes no produto considerado, sem garantir a inativao completa de toxinas ou enzimas celulares. O procedimento selecionado para atingir o nvel de esterilizao estabelecido depende sobremaneira da natureza do material e das dificuldades impostas por grande diversidade de produtos. O conhecimento do tipo, do teor e da fonte dos contaminantes nos produtos, antes da esterilizao, e a aplicao de mtodos para minimizar tal contaminao e preveni-Ia p6s-processamento contribuem para asseguraro xito da esterilizao.

Calor:

mido seco ionizante no ionizante

- Radiao:

Proporo constante de populao microbiana inativada por unidade de tempo considerado. O valor D, ou tempo de reduo decimal do microrganismo, o intervalo de tempo, temperatura constante de tratamento, necessrio para reduzir de 90% a populao microbiana. O valor z do microrganismo definido como o incremento de temperatura necessrio para reduzir de 90%, ou variar de fator 10, por exemplo, o valor D. Admitem-se valores de z genricos; para o calor mido z = 10C e para o calor seco z = 20C. O valor F do tratamento trmico o intervalo de tempo de aquecimento necessrio, temperatura de referncia constante, para se obter o nvel de destruio pr-estabelecido. Para calor mido em produtos termolbeis, o valor F total, que depende do nmero e da resistncia dos microrganismos existentes no produto, deve assegurar probabilidade menor que 10-6 sobreviventes microbianos. Para materiais termoestveis, o valor F calculado para promover probabilidade de falha de pelo menos 10- 6 sobreviventes, independentemente do nmero inicial e da resistncia dos microrganismos no produto, e garantir reduo de, no mnimo, 12 ciclos lo~artmicos de microrganismos, apresentando valor D121 c ~ 1 minuto. O calor o agente esterilizante mais simples, econmico e seguro de que se dispe. A sensibilidade dos diversos microrganismos ao do calor bem variada, sendo as formas esporuladas as mais resistentes. A esterilizao pelo calor mido causa a coagulao da protena celular dos microrganismos, enquanto a esterilizao pelo calor seco , principalmente, processo de oxidao.
CALOR MIDO

Apresenta menor margem de segurana do que a esterilizao em autoclaves, sob presses elevadas. Para atingir as concentraes limites do produto final, dissolve-se ou suspende-se o medicamento em soluo adequada de um dos seguintes bactericidas: Para injetveis
Oorocresol . . . . . . . . . . . . . . Acetato ou nitrato de fenilmercrio 0,2% (p/V) O,002%(p/V)

Para co/rios Soluo de cloreto de benzalcnio, suficiente para fornecer concentrao fmal de 0,1% (P/v) de cloreto de benzalcnio.
Acetato ou nitrato de fenilmercrio Acetato de clorexidina Tiomersal . . . . . 0,002% (P/V) 0,1% (p/V) 0,01% (P/v)

A preparao farmacutica ento distribuda em recipientes adequados e mantida em temperatura entre 98 e 100C, durante 30 minutos. Bactericidas no devem ser adicionados a certas preparaes injetveis como: a) solues de medicamentos administrados por vias que permitam acesso ao lquido cerebrospinal; b) preparaes injetveis administradas por via intracardaca ou intraocular; c) preparaes injetveis administradas em doses nicas, superiores aiS ml, a menos que a monografia especfica permita a presena do bactericida.
ESTERILIZAO PELO CALOR MIDO SOB PRESSO

Os processos de esterilizao pelo calor mido podem ser conduzidos presso normal, temperatura de 90 a 100 C; ou sob presso elevada, sempre acIma de 100 oCo
ESTERILIZAO PELO VAPOR FLUENTE

Esta tcnica consiste em expor por 30 minutos, no mnimo, o material ao do vapor fluente, no interior de autoclave fechada, com torneira de purga aberta, de modo que a temperatura no ultrapasse 100 oCo
ESTERILIZAO POR AQUECIMENTO A 100 c COM ADiO DE BACTERlCIDA

Esta tcnica indicada para preparaes medicamentosas instveis a temperaturas superiores.

De todos os mtodos de esterilizao utilizados, o calor mido, na forma de vapor saturado sob presso, considerado o melhor e mais eficiente. Neste mtodo, o agente responsvel pelo aquecimento o vapor de gua saturado, ao qual corresponde um valor de temperatura e presso de vapor defmida, muitas vezes utilizada para controlar a temperatura nas auto claves aps completa remoo do ar. O intervalo de tempo necessrio para que se estabelea o equihbrio trmico entre o produto e o vapor circulante depende da natureza do material, dos recipientes, emb?lagens e respectivos volumes e dimenses, e do momento em que a esterilizao, propriamente dita, se inicia. O superaquecimento e reduo do teor de umidade da cmara devem ser evitados, pois so prejudiciais esterilizao. Indicase esta tcnica principal-

mente para preparaes material cirrgico.

aquosas,

vesturio

Esterilizao em estufa de ar quente O processo pelo calor seco em estufas aplicado, principalmente, para materiais cujo contacto direto com o vapor sob presso danoso ou indesejvel. Tem igualmente o objetivo de despirogenar. Nas estufas de conveco forada, o tempo necessrio para que seja atingido o equil. brio trmico entre o produto e o ambiente reduzido; e as diferenas de temperatura em vrios pontos das prateleiras podem limitar-se a 1 De; em estufas de conveco normal, tais diferenas podem atingir at + 20 De. Condies a respeitar na esterilizao pelo calor seco. A esterilizao pelo calor seco geralmente realizada no intervalo de temperatura de 200 De a 220 De, por perodo de tempo no inferior a duas horas objetivando inclusive a despirogenao. Pares de temperaturas mais elevadas e por tempos menores podem ser aplicados a produtos termoestveis, enquanto pares de temperaturas menores e por perodos mais longos so usados para materiais termolbeis. O binrio tempo-temperatura determinado por estudos de validao fsica e biolgica do ciclo de esterilizao. Por exemplo: os ps devem ser esterilizados a 160 De durante duas horas ou a 170 e por uma hora, em embalagens contendo, no mximo, 30 g, espalhados em camada delgada. Substncias que nlo suportam aquecimento a 160 De, como as sulfonamidas, so esterilizadas em pores de 4 a 5 g, acondicionadas em invlucro duplo de papel, no intervalo de 140 De a 150 De durante duas horas, no mnimo. A esterilizalo de glicerol, parafma e diversos leos realizada temperatura de 160 De durante duas horas ou de 170 De por uma hora, em fraes de 30 ml, acondicionadas em frascos de 200 ml.

Esterilizador contlnuo por vapor sob presso De aplicao prtica na esterilizao de solues injetveis de grandes volumes, apresenta algumas vantagens sobre a auto clave clssica: (a) frascos cheios podem ser esterilizados medida que vo sendo envasados, diminuindo o risco da formao de pirognios; (b) todos os frascos so submetidos s mesmas condies de esterilizao. Condies a respeitar na esterilizao pelo vapor A programao de um ciclo de esterilizao deve ser validada com o auxlio de termopares bem localizados e de indicadores biolgicos que conduzam escolha da temperatura mais elevada compatvel com o produto e do tempo de exposio deste ao vapor, necessrio para garantir o nvel ae uestruio estabelecido e assegurar o xito da esterilizao. Este tempo depende da natureza, distribuio e volume da carga. So propostas combinaes temperatura-tempo apropriadas para tal finalidade, combinaes estas que devem ser avaliadas para cada caso. Temperatura (DC) 115 121 126 134 a a a a 118 124 129 138 Tempo mlnimo (minuto) 30 15 10 3

Quaisquer outros pares temperatura-tempo podem ser empregados desde que sua eficincia seja estabelecida atravs da avaliao do ciclo de esterilizao. A distribuio da carga na cmara de suma importncia, devendo todas as embalagens ou unidades dos produtos ser espaadas suficientemente umas das outras, permitindo a penetrao do vapor at as regies mais profundas. Para pequenos volumes e frascos de paredes relativamente finas, de at 250 ml, o tempo necessrio para atingir o equihbrio trmico curto e o processamento a 121 De por um mnimo de 15 minutos ser satisfatrio. Para volumes maiores de lquido por rec~iente, a durao total do aquecimento a 121 e ser certamente maior e dever ser programada atravs de validao do ciclo. Para a maioria das roupas e vestimentas, o vapor usado na esterilizao no deve conter mais do que 5% de umidade relativa e o processo deve ser conduzido temperatura de 134-138 De, por perodo mnimo de 3 minutos.
ESTERILIZAO PELO CALOR SECO

VALIDAO DE PROCESSOS DE ESTERILIZAO POR CALOR

A esterilizao pelo calor seco aplicada a objetos de vidro e de metal, ps, vaselinas, gorduras, ceras, solues e suspenses oleosas e tecidos especiais.

Validar assegurar que um processo cumpra 9s fms para os quais foi programado. eom esta finalidade so definidos os parmetros do ciclo de esterilizao e das cargas-padro, e a natureza do material, termolbil ou termoestvel. Sempre que possvel, a .escolha da temperatura feita em funo da estabilidade trmica do produto e do tempo de esterilizao, de acordo com as caractersticas de penetra'o de calor na carga. A carga deve ser bastante homognea, no devendo ser misturados materiais termolbeis com termoestveis, ou de diversos volumes. Devem tambm ser definidas e respeitadas as condies de entrada do material na carga, como temperatura, umidade e distribuio. Para produtos termoestveis define-se apenas a carga mxima, enquanto

a carga mlmma tem grande importncia para material termolbil, pois se a carga for muito pequena haver maior degradao do material. Inicia-se a fase de validao determinando-se o nmero e a resistncia trmica dos microrganismos associados ao produto e calibrando-se os indicadores biolgicos no laboratrio. Os estudos de resistncia trmica objetivam a determinao dos valores Dez. O tempo de reduo decimal pode ser calculado; diretamente da curva de sobrevi ventes, construda colocando-se em ordenadas o logaritmo dos esporos viveis sobreviventes e em abcissas, os tempos correspondentes de exposio temperatura do processo: indiretamente, pelo mtodo do Nmero Mais Provvel, atravs da equao 8 logN 1

No

termopares devem registrar temperaturas que, quando comparadas quelas do termmetro padrll'o, apresentem variaa-o mxima de I c para esterilizalio em autoclaves e 2 c para esterilizall'o em estufas. As leituras indicadas pelo potencimetro s'o ajustadas quelaS do termmetro de referncia para intervalo de 0,5 oCo Por norma, a diferena de temperatura entre o ponto mais frio e o mais quente, para autoclaves, no deve superar a 2,5 oCoA validao biolgica utiliza os indicadores biolgicos para verificar se o valor F mnimo obtido, por medidas fsicas, garante o nvel de letalidade pr-estabelecido. Para isto, slio desenvolvidos estudos de distribuilio e penetrao de calor, com um mnimo de 10 unidades, contendo o indicador biolgico, colocadas nas reas mais frias, previamente determinadas por mdidas fsicas. E, fmalmente, avaliase a reprodutividade do processo. As temperaturas obtidas durante o ciclo de esterilizao podem ser convertidas em velocidades letais, a intervalos de tempo especficos, pela equa'o

Drr
8

= = =

tempo de redu'o decimal temperatura de referncia, tempo de exposilfo das amostras inoculadas temperatura de referncia, popula'o microbiana inicial, nmero de sobreviventes nas amostras, calculado pela equa'o de Halvorson e Ziegler: N
j

em que L T Tr z

= = = =

2,303

log-

n q

velocidade letal, temperatura do produto ou ponto estudado, temperatura do processo, incremento de temperatura necessrio para variar o valor D de fator 10.

em que Ni nmero mais provvel de esporos sobreviventes por ml de material aquecido, volume em ml de cada amostra aquecida, nmero total de amostras aquecidas quela combinall'o temperatura (Tr) tempo (8), nmero de amostras aquecidas a esta combinall'o, em que nll'o se presencia crescimento positivo em subcultura.

O tempo letal de esteriliza'o de cada ponto, onde foi inserido o termopar, calculado pela integra'o das velocidades letais do processo de aquecimento: F

a
n

=
=

tIO

(T - Tr)/zd8

(4)

em que 8 o intervalo de tempo entre medidas sucessivas de temperaturas. H vrios mtodos pelos quais as velocidades letais podem ser integradas, sendo o mtodo trapezoidal de Patashnik o mais simples: F

Em seguida, inicia-se a fase de validao do ciclo de esteriliza'o, a nvel dos equipamentos: autoclaves e estufas. A validao fsica utiliza termopares para estudar a distribuio de calor na cmara de esterilizao vazia, a distribuio do calor na cmara carregada, a penetrao do calor nos componentes individuais da carga (pontos frios) e a penetrao de calor na carga (ponto frio da carga). Os termopares so acoplados ao potencimetro, que deve ter preciso de 1C. Para a calibralio dos termopares, os terminais dos sensores e o bulbo do termmetro de referncia silo amarrados e imersos em banho de leo para esteriliza'o em autoclaves (calor mido) e de areia para esterilizalo em estufas (calor seco). Os

6.8 (LI + ~ + L3

+ Ln-l)

(5)

A validaio na estufa (calor seco) deve ser realizada objetivando destruir todos os microrganismos viveis, assim como despirogenar. Com respeito validao de despirogenao, no foram fixados limites de inativalio das toxinas. O procedimento aconselhvel impregnar elementos com concentraes crescentes de endotoxinas, com a finalidade de conhecer a concentrao mxima destruda no processo de esteriliza'o, em condies operacionais defmidas. Os termopares, os indicadores biolgicos e as endotoxinas devem ser colocados muito prximos uns dos outros, no mesmo ponto frio escolhido para ser avaliado.

As radiaes podem ser classificadas em dois grandes grupos: radiaes ionizantes e radiaes no-ionizantes. As radiaes ionizantes eletromagnticas so: raios X, raios 'Ye radiaes corpu~ulares,. representadas pelos raios {j (eltrons), protons, neutrons e raios a. Os raios ultravioletas so considerados radiaes eletromagnticas, por~ nl'o ionizantes. Na prtica, as radiaes utilIZadas como agentes esterilizantes limitam-se aos raios 'Ye raios (I As radiaes ionizantes sfo aplicadas a produtos altamente alterveis pelo calor seco ou mido, produtos estes que podem ou nl'o ser acondicionados na embalagem final. As preparaes farmacuticas apresentam maior estabilidade radiao no estado slido que na forma lquida. A radiao causa a destruio de certas substncias, como insulina, heparina, tet~aciclinas e vitamina C. A esterilizao por radiao aplica-se a vrios produtos, tais como os seguintes: vitaminas, ps, antibiticos esterides hormonios, vacinas, pomadas, ossos, " transplantes de tecidos, seringas descartveis, agulhas, bandagens, tubos de plstico, sondas, placas de Petri, suturas e equipamento cirrgico, oftlmico e farmacutico. Os raios 'Yso radiaes de elevada energia, emitidas por istopos radiativos: cobalto 60, csio 137 e tntalo 182. O cobalto o mais utilizado na indstria farmacutica. O elevado poder de penetJ~o dos raios 'Y toma difcil centr-Ios sobre o objeto e evitar a irradiao do ambiente circunvizinho. Os locais de trabalho devem serprotegidos com vidro contendo chumbo. As radiaes no podem ser interrompidas e as operaes de exposio so controladas distncia. ~ra evitar o escurecimento do vidro pelos raios '"1, mcorpora-se1hecrio. Os raios~, ou raios catdicos, so eltro acelerados, originados ao se estabelecer elevada diferena de potencial entre o ctodo e um ou mais nodos, em tubo de vcuo elevado. Devido carga das radiaes corpusculares, os raios ~ apresentam menor penetrabilidade, comparativamente, aos raios a, de energias equivalentes. Na prtica a esterilizao realizada com raios (3 acelerados a 7 MeV, nunca excedendo a 15 MeV. Quando a energia equivalente a 7 MeV n'o suficiente para que a penetra'o se d em certas embalagens, recorre-se tcnica de fogo cruzado, bom bardeando o material, simultaneamente em senti ' uos opostos. Otempo de exposio de 1segundo, no mximo, em locais protegidos com paredes de 2,5 m de espessura. As radiaes catdicas, orienta das por campo eltrico, sobre determinado ponto, no so dissipadas para o ambiente circunvizinho, apresentando maior segurana na operao e so menos onerosas que as radiaes a.

Escolha da dose esterilizante

As unidades utilizadas para medir as radiaes ionizantes do o Raentgen, o rad, o rep e o gray. quantidade de radiao X ou 'Y aplicada a um material, acima de 3 MeV,que, atravessando 1 g de ar, libera energia de 86 ergs (8,6 x 10-6 J), que corresponde a 97ergs (9,7x10-6J)/g de gua. quantidade de radiao de qual. quer tipo que produz os mesmos efeitos que 1 "Roentgen" de raios X ou 'Y. dose absorvida de qualquer radiao equivalente a 100 erg/g ou 10-2 J/kg de material absorvente. dose absorvida de qualquer radiao equivalente a 104 erg/g ou 1 J/kg de material absorvente (l GY = 100 rad).

"GRAY" ou "GY"

..

A unidade de radiao mais empregada o rad, expresso em kilorad (krad) ou Megarad(Mrad). Cada espcie microbiana apresenta sensibilidade diferente para as radiaes, sendo que a resistncia cresce na seguinte ordem: formas vegetativas bacterianas, fungos, leveduras, esporos e vrus. Dose de radiao ou dose de inativao de cerca de 2,5 Mrad suficiente para garantir reduo do nmero inicial de esporosviveis termorresistentes de 6 a 10 ciclos logartmicos e de 15 ciclos logartmicos para as formas vegetativas bacterianas mais resistentes. Os esporos de Bacillus pumilus so geralmente os mais resistentes s radiaes ionizantes e considerados como indicadores biolgicos. A dose letal da radiao depende dos seguintes fatores: nmero inicial de microrganismos, natureza do material a esterilizar, prtratamento irradiao, tenso de oxignio no meio, valor de pH, temperatura, umidade relativa intrnseca e composio do meio. A eficincia do ciclo de radiao deve ser avaliada, periodicamente, por srie de estudos experimentais, pela determinao do nmero inicial e fmal de microrganismos presentes no material, pelo emprego paralelo de indicador biolgico e pelo uso de dosmetros adequados.
ES_TERILIZAO POR RADIAOES NAO-lONIzANTES

A luz ultravioleta apresenta intervalo de comprimento de onda entre 210 e 328 nm (2100 e 3280 A). As radiaes compreendidas entre 2400

e .2800 so as mais eficazes do ponto de vista microbicida. As radiaes ultravioletas mais uti lizadas so as prod~idas em lmpadas de quartzo' com vapor de mercrio de comprimento de onda de 2537 . Estas radiaes tm poder penetrante muito pequeno e, praticamente, a aplicaa'o fica limitada esterilizao de superf cies, em laboratrios farmacuticos, na manutenlo de ambientes asspticos, na fabricalo e acondicionamento de produtos medicamentosos (como antibiticos), em reas destinadas ao enchimento e capsulagem, cmaras asspticas e ar de circulafo. O pessoal que trabalha em reas em que foram instaladas lmpadas de luz ultravioleta deve estar protegido da ao dos raios diretos ou refletidos. Bastonetes de bactrias gram-negativas slo os microrganismos mais facil mente destrudos por luz ultravioleta, enquanto

estafI1ococose estreptococos exigem cerca de 5 a ' 10 vezes a dose de energia radiante; esporos bacterianos, 10 vezes; e esporos de fungos, 50 vezes ou mais para garantir o mesmo nvel ~e destruilio estabelecido. Ctilibrar, periodicamente, o rendimento da transformao de energia eltrica em luminosa, emitida pelas.lmpadas UV de baixa pressio de vapor de mercrio, que apresenta o comprimento de onda de 2537 . O rendimento da transformalio de energia eltrica em luminosa da ordem de 60%, sendo que 90% do total da emitida tm o comprimento de onda de 2537A. A energia radiante inversamente proporcional distncia entre a fonte geradora e a supefcie irradiada, quando esta distncia menor que trs vezes o comprimento da fonte UV; quando for maior, a energia radiante ser inversamente propor cional ao quadrado da distncia.

A tcnica de esterilizao por filtrao tem por objetivo eliminar, mecanicamente, microrganismos de lquidos termolbeis ao calor em autoclave ou ao aquecimento com bactericida. Embora existam fJltros capazes de reter alguns vrus, a esterilizao por fIltrao considerada tcnica falvel, sendo recomendvel apenas quando no possvel aplicar mtodos mais eficazes. O xito da esterilizao por filtrallo depende do em prego de elementos filtrantes com poros de dimenses adequadas e das condies de assepsia observadas durante o procedimento. O ftltro, .incluindo o elemento filtrante propriamente dito, o respectivo suporte e todo o material que venha a entrar em contacto com o lquido ftltrado devem ser previamente esterilizados. A natureza do elemento fIltrante, responsvel pela remoo fsica das bactrias do lquido que o atravessa, pode ser: derivado de celulose, plstico, cermica porosa, estrutura sinttica apropriada, ou combinaes adequadas destes. Fibras de amianto no podem pertencer estrutura do elemento ftltrante, pois se comprovou que elas sll'o cance igenas e afetam indesejavelmente o produto ftltrado, quando arrastadas com ele. Para acelerar a flltrao pode-se aplicar presso positiva do lado no estril do sistema, ou presso reduzida do

lado estril, desde que no provoque a ruptura do elemento ftltrante; este procedimento no se deve aplicar, porm, aos ftltros de vidro poroso. Filtrao prolongada , igualmente, danosa e deve ser evitada, pois pode permitir o crescimento de contarninante, atravs do meio ftltrante, que recontamina o lquido j esterilizado. A dimenso efetiva dos poros dos filtros esterilizantes deve ser conferida antes do uso e a integridade dos mesmos, confirmada ao findar a filtrao. O procedimento de ponto de bolha, ou o teste de velocidade de difuso, deve ser realizado de acordo com as recomendaes do fabricante para fIltros tipo membrana. nmero inicial de microrganismos das solues deve ser determinado corno parte da validao do procedimento, urna vez que o xito do mtodo de ftltrao depende, sobremaneira, da carga microbiana na soluo a ser filtrada. A eficincia da operao avaliada, experimentalmente, utilizando-se suspenses de determinadas espcies microbianas, corno Semztia marcescens ou Chromobacterium prodigiosum, que depois de filtradas, atravs do elemento ftltrante em ensaio, so incubadas a 37 e por sete dias ou mais, para certificar se estio isentas de microrganismos.

X.l.2. MTODO QUMICO

o emprego de substncias qurncas em estado gasoso, na esterilizao de material slido, processo em que se torna necessrio estabelecer condies bem deterrnnadas de temperatura, concentrao, umidade, tempo de atuao e nmero inicial de rncrorganismos. O gs esterilizante ideal deve apresentar atividade intensa e rpida contra bactrias, esporos e vrus, se possvel presso atmosfrica; ter inrcia total quanto ao material a esterilizar; possuir bom coeficiente de difuso, que confira penetrao fcil e completa eliminao aps a esterilizao; ser incuo ao homem e aos animais; no ser inflamvel; ser facilmente armazenado e manipulado; ser ativo na ausncia de UDdade; ser econmico e de fcil obteno. Apenas o xido de etileno aproxima-se das condies ideais: facilmente obtido, liberado em estado puro; no se polimeriza sobre as superfcies de contacto e rapidamente eliminado por simples aerao. A aplicao de vapores de xido de etileno procedimento alternativo ao uso de agentes fsicos que, comparativamente, so rncrobicidas mais eficientes. O xido de etileno utilizado na esterilizao de material oftlmico (material anestsico), marcapassos e mquinas de corao e pulmo, seringas descartveis, vesturio hospitalar, material plstico, borrachas, equipamento de ao inoxidvel e material de papel. Os vapores de xido de etileno no ar ao atingirem aproximadamente 3% entram em combusto, seguida de exploso caso o ar esteja confinado. Utilizam-se misturas de xido de etileno com gases inertes, dixido de carbono ou hidrocarbonetos fluorados, de tenses superficiais muito prximas, sem o risco de alteraes das propores do s respectivos componentes, ou de exploso. A toxicidade do xido de etileno, quando inalado, assemelha-se quela produzida pelo amonaco, irritante aos olhos e causa dores de cabea, nuseas e vrntos. Efeitos txicos imediatos ocorrem exposio de 12500 ppm. As solues aquosas e produtos apresentando teores residuais de xido de etileno produzem queimaduras na pele e nas mucosas. Na presena de ons cloro, o xido de etileno pode formar produtos txicos. Apresenta penetrao fcil e rpida em materiais de diferentes naturezas: papel, papelo, celofane, artigos de couro, alguns plsticos (cloreto de polivinila), fibras sintticas e tecidos em geral. O xido de etileno no penetra em substncias cristalizadas. Tem ao bactericida, esporocida, virucida e fungicida, agindo por alquilao no especfica de grupos como -OH;

- NH2 e - SH, com perda do H e formao do grupo alquil-hidroxila. O efeito da urndade, durante a esterilizao com vapores de xido de etileno, crtico e complexo. Urndade em excesso (>60%) provoca a hidrlise do agen te qumico a etilenoglicol e, em quantidade insuficiente 30%), impede a ao de alquilao. A esterilizao de produtos farmacuticos limitada quase que exclusivamente a ps de substncias que slIo estveis exposio de xido de etileno. A penicilina nlIo reage com o gs, mas a estreptorncina perde parte da atividade; a tiarnna, riboflavina, nicotinamida, piridoxina, cido flico e vitarnnas em geral so destrudas. H necessidade de se deterrnnar a estabilidade dos produtos farmacuticos, antes de submet-los esterilizao gasosa por xido de etileno. Para se efetuar o cic10 de esterilizao, a autoc1ave adaptada previamente aquecida a 55C. Coloca-se a amostra. Reduz-se a presso na cmara de aproximadamente 2,3 a 7,3 kPa (20 a 55 mm Hg). A urndade na cmara de esterilizaa-o equilibrada entre 50 a 60%, em 60 minutos. Introduz-se a rnstura gasosa, que pode atingir a presslIo da ordem de 100, 200 ou 300 kPa (1,2 ou 3 atmosferas). A exposio do material realizada em perodo de 3 a 8 horas, dependendo do gs, do nmero inicial de microrganismos presentes no material e da penetrabilidade do produto ao agente qumico. Finda a operalIo a autoc1ave evacuada; em seguida, introduzido ar filtrado, at que se atinja a presso atmosfrica, proporcionando a dissipao do xido de etileno dos materiais. Certos plsticos, borrachas e couros apresentam forte afinidade pelo xido de etileno, necessitando de perodo de 12 a 24 horas de aerao, antes do emprego. O xido de etileno lquido, que pode substituir a rnstura gasosa na esterilizao de produtos, vaporizado na cmara de esterilizao colocada sob presso de 5,3 kPa (40 rnrn Hg); a temperatura do processo mantida ao redor de 25C, durante 4 horas a 200 kPa (2 atmosferas de presso) ou 1 hora a 600 kPa (6 atmosferas de presso). Aps a esterilizao, deve ser respeitado intervalo de tempo para que haja dissipao completa do xido de etileno e de resduos volteis do produto. A comprovao do processo feita avaliando-se o efeito letal que provoca no indicador biolgico. Dez tiras de papel de alumnio, no mnimo, impregnadas com cerca de 1 milho de esporas viveis secos de Bacillus subtilis, devem ser distribudas por toda a carga.

A eficcia de um ciclo de esterilizao descrita em termos de valor F, que determinado utilizando-se termopares; e a certeza da esterilidade do processo, conferida por esse intervalo de tempo de esterilizao, validada, biologicamente, pelo emprego de indicadores biolgicos. O indicador biolgico, suspenso de esporas resistentes ao processo de esterilizao especfico, adicionado diretamente s unidades representativas da carga a ser esterilizada; ou embebido por tiras de papel de filtro, de alumnio ou metal, prolas de vidro ou plstico, que so secas temperatura ambiente. O tipo de veculo do indicador biolgico deve ser to semelhante quanto possvel s embalagens ou aos itens sob esterilizaio e no interferir na resistncia do microrgani~~o. Por isso, empregado nas determinaes dos valores Dez do indicador biolgico, nos estudos preliminares vali dao do ciclo de esterilizao. Esporos viveis de microrganismos - considerados indicadores adequados validalo do sistema em autoclavesdevem sobreviver ao tratamento de 100 c durante 10 horas, processo este em que se eliminam os esporos founadores de mesfllos. Um indicador biolgico satisfatrio deve apresentar maior termorresistncia ao processo de esterilizao do que os microrganismos originalmente existentes no material a esterilizar. Aps a operao de esterilizao, os indicadores biolgicos so semeados e incubados, durante vrios dias, em meios de cultura apropriados para se determinar sua sobrevivncia. O nmero de esporas para avaliar o ciclo de esterilizao depende da letalidade esperada, conferida pelo valor F, e da resistncia trmica do microrganismo. Esta relao descrita pela equao

Indicadores biolgicos podem ser designados para avaliar se o valor F do ciclo de esterilizao suficiente para garantir probabilidade de falha de 10-6 microrganismos sobreviventes no produto. Para atender a este objetivo, o nmero inicial de organismos no indicador biolgico determinado pela equalo Ds (log N em que Ni Ds No ~i
=

+ 6)

Db Qog No

+ 1)

(7)

carga de microrganismos no produto a ser esterilizado, valor do tempo de reduo decimal do microrganismo mais resistente, nmero de organismos no indicador biolgico, valor do tempo de reduo decimal do indicador biolgico.

Para produtos termoestveis, quando o valor F deve ser sufidente para assegurar reduo de 12 ciclos logartmicos e h probabilidade de falha de pelo menos 10-6 sobreviventes, independentemente do nmero inicial e da resistncia trmica dos microrganismos que ocorrem naturalmente no produto, o nmero de e~oros, no indicador biolgico, da ordem de 10 por tira de papel ou qualquer outro veculo. As preparaes comerciais de indicadores devem incluir: - nmero de esporos por veculo, - nmero do lote, - data da expirao, condies adequadas de armazenagem, valores de D e de z caractersticos e as condies da determinao dos parmetros da resistncia trmica, indicaes de uso, incluindo o meio de subcultura e condies de incubao.

em que QogA -10gB) a reduo logartmica de esporos.

Resistncia trmica de esporos de microrganismos empregados como indicadores biolgicos em diferentes processos de esterilizaio.
Cultura Esporas de 8acillu. sttIBrothermophilu. Esporos de Clo.tridium sporogtlntJ. Esporas de 8acillu. subtili. Esporos de 8acillus pum/lu. ProCt1S$otl tI.tf/rillzalo d Vapor saturado a 121 C Vapor saturado a 112 C 121 DC Calor seco a 121 C 170C Radiao gama: Esporos de 8acillu ubtili. pt'eparaes midas preparaes secas Valor D aproximado 1,5 minutos 3,2 minutos 0,7 minutos 60 minutos 1 minuto

0,2 Mrad 0,15 Mrad

Oxido de etileno (umidade relativa de 50%; temperatura de 54 C)

600 rng/l 1200 mg/l

3 minutos 1,7 minutos

XI. SUBSTNCIAS CORANTES

Substncia corante qualquer composto org- via oral, retal, vaginal ou cutnea podem ser nico ou inorgnico, natural, sinttico ou idntico adicionadas substncias corantes constantes da ao natural reproduzido por sntese que, indepen- relao abaixo ou da mistura destas substncias dente de possuir ou nlio atividade farmacol6gica, nos casos e em quantidades compatveis com as adicionado s formas farmacuticas com a finali- boas prticas de fabricao farmacutica. As dade nica de cor-Ias ou de alterar a sua cor substncias corantes empregadas devem satisfaoriginal. zer as exigncias descritas nas respectivas monoAos medicamentos destinados aplicalio por grafias.

Carbonato de clllcio Di6xido de titnio Amarela Amarela Amarela Amarela Fosfato de riboflavina Amarelo crepsculo

72.220 77.891 75.300

Carbonato de clcio CaCO. Dixido de titnio Ti01 obtido por srntese 1,7-8i'- (4-h idrox i-3-metoxifen il)-1,6-heptadieno-3,5-diona 7,8-Dimetil-1 0-( D-ribo-2 ,3,4 ,5-tetraidrox ipentil) isooloxazina Riboflavi na-5' -fosfato Sal dissdico -sulfnico do cido 1-p-sulfofenilazo-2-naftol-6de fontes de

J3-Carotano obtido naturais tI-Apo-S'-carotenal fontes naturais

por s(ntesa ou extra(do obtido por s(ntese

ou extra(do

tlJl-Carotano-4,4'-diona de fontes naturais

obtida por sfntesa ou extra(da

Extrato obtido pelo tratamento de 8ixa onllana L. por solventes orgnicos, 61eos e gorduras vegetais comest(veis, mono e diglicer(deos obtidos por hidr61isa destes 61eos ou por solues aquosas, alcolicas ou propilenoglic6licas de lcalis, ou saus componentes principais, bixina lster monomat(ljco do cido 6,6' -diapo->II,>11carotenodinbico) e norbixina lcido 6,6' -diapo->II ,>11carotenodi6ico) isolados ou reproduzidos por s(ntese e seus seis sdicos ou potssicos Vermelho Amarelo Preto xidos de ferro 77.491 77.492 77.499 xidos de ferro obtidos por sfntesa, inclusive suas formas hidratadas ou combinaes de mais de um destes xidos Extrato aquoso ou aquoso-alco6lico concentrado at eliminaio do lllcool de cochonllha, Dacry/opu, CllCti Costa ICoccu, cecti L). componente corante principal do extrato de cochonilha o cido cerm(nico

Laca de alumnio ou de clcio e alumnio, em substrato de hidr6xido de alumnio, de cido carmnico e outros componentes obtidos pela extrao aq~osa da cochonilha, Dactylopus cacti Costa (Coccus CllCti L) Sal dissdico monoldratado de 3',6'-diidroxi-2',4',5',7' -tetraiodospiro( isobenzofuran1 (3H) ,9' -(9 H Ixanten 1-3-ona Mistura de clorofilas a e b. Clorofila a: C Hn MgN. O.' ster fitlico do complexo magnesiano de (11,3,5,8-tetrameti I-4-eti1-2-vi i 1-9-()xo-1 n O-metox icarbon il )forbinill-7-propionato. Clorofila b: C H7oMgN.0., ster fitlico do complexo magnesiano de [( 1,5,8-trimetil-3formil-4-eti 1-2-vin 1-9-oxo-l o-metoxicarboni I) forbini 11i -7-propionato Clorofilina cupro-sdica Azul brilhante 75.810 42.090 Sal sdico do complexo cprico da clorofila Sal dissdico do sal interno de hidrxido de N-etil-N-[4-[ [4-[ etil [(3-sulfofenill metillamino Ifenil 112-sulfofenil )metileno 1-2,5-eicloexadien-l-ilideno 1-3-sulfobenzenometanam nio Produto obtido pelo aquecimento de sacarose ou outros acares de uso alimentar ou por tratamento controlado de glicdeos de q:Jalidade alimentar com um ou mais de um dos seguintes reagentes: cidos actico, ctrico, fosf6rico, sulfrico e sulfuroso, di6xido de enxfre, hidr6xidos de sdio e de potssio, carbonatos, fosfatos, sulfatos e sulfitos de sdio e de potssio Carvo vegetal farmacopeico

Observao: Alm dos corantes referidos na relaao. pennanecem em uso os seguintes:

Cor Amarela

Nome Oficial Amarelo cido Sal dissdico fnico do cido 5-(4-sulfofenilazo)-2-naftolsul-

Amarela Azul Azul Laranja

Tartrazina

Sal trissixlico do cido 1-p-sulfofen il-4-p-sulfofenilazo5h idroxipirazol-3-carbox 1ico 69.800 73.015 15.980 N,Ndiidro-1 ',2'-antraquinonazina Sal dissdico do cido indigotin-5,5-dissulfnico Sal dissdico fnico do cido 1-(3-sulfofenilazo)-2-naftolsul-

Azul de indantreno Indigotina Laranja GGN

Marrom

Cacau

Extrado das cascaspulverizadas do fruto de Theobroma caeaoL. Sal dissdico do cido 2-(4'-sulfo-l'-naftilazo)-1-naftol 4-sulfnico Sal dissdico -do cido 2-16'-sulfo-2'-4'-dimetilfenilazol1-naftol-5' -sulfnico Sal trissdico do cido 1-14'sulfo-1'-naftilazol-2naftol6,8-dissuIfnico Sal dissdico do cido 6-hidroxi-5-12-metoxi-5metil-4suIfofeni I)azo-2-naftalenossuIfnico Sal dissdico sulfnico do cido H4-sulfonaftilazol-2naftol-6-

Vermelha

Azorubina

Vermelha

Escarlate GN Ponceau 4R Vermelho 40 Vermelho s61ido E

Vermelha Vermelha Vermelha

XII. REAGENTES

So corantes empregados para indicar o ponto final de uma anlise volumtrica ou para avaliar o pH de solues no coradas. Os indicadores de uso mais freqente esto listados no quadro a seguir, em ordem crescente do limite inferior de sua faixa de ao de pH: INDICADORES Vennellio cresol PlIpura de metacresol Tropeolina 00 Azul de timol Amarelo naftol Amarelo de dinletila Azul de bromofenol Alaranjado de metila Vermellio de metila Vennellio de congo Verde de bromocresol Resazurina Tomassol PlIpura de bromocresol Vennellio de fenol Azul de bromotimol Fenoltalena Azul do Nilo A Timolftaiena Amarelo de alizarina GG Tropeolina O Amarelo titan FAIXAS DE pH 0,2-1,8 e 7,2-8,8 0,5-2,5 e 7,5-9,2 1,0 - 2,8 1,2-2,8 e 8,0-9,6 2,0 - 3,2 2,8 - 4,6 2,8 - 4,6 2,9 - 4,0 3,0 - 4,4 3,0 - 5,0 3,6 - 5,2 5,0 - 7,0 5,0 - 8,0 5,2 - 6,8 6,8 - 8,4 6,0 - 7,0 8,3 -10,0 9,0 -13,0 9,3 -10,5 10,0 -12,0 11,0 -12,7 12,0 -13,0

Soluo de alaranjado de xilenol Soluo a 0,1 % (p/V) em etanol.

P amarelo-laranja, lcool.

facilmente

solvel em gua e

Soluo de alizarlna Soluo aquosa a 0,1 % (p/V). AMARELO DE AUZARINA GG (CuH.N,NaO.) (CI 14025) Fornece colorao amarelo-plida em solues fracamente alcalinas e colorao marrom em solues fortemente alcalinas (faixa de pH: 10,0-12,0). Soluo de amarelo de alizarina GG Soluo aquosa na concentrao de 0,1 % (p/V).

AMARELO DE DlMETILA (C14HuN,) (CI 11020) Fornece colorao vennellia em solues moderadamente cidas e colorao amarela em solues fracamente cidas (faixa de pU: 2,8-4,6) e alcalinas. Soluo de amarelo de dimetila Soluo a 0,2% (p/V) em etanol a 90%. - Ensaio de homogeneidade Preparar soluo a 0,01 % (p/V) em diclorometano e aplicar 0,01 ml desta soluo em cromatoplaca de slica-gel G. Usar como eluente o diclorometano. O cromatograma deve mostrar uma nica mancha. Enwio de sensibilidade Preparar soluo de 2 g de cloreto de amomo em 2S ml de gua isenta de dixido de carbono. Esta soluo, adicionada de 0,1 ml da soluo de amarelo de dirnetila, deve apresentar cor amarela. A colorao passa a vennellia pela adio de no mais que 0,1 ml de cido clordrico 0,1 M.

ALARANJADO DE METILA (C14H14N3Na03S) (el 13025) Fornece colorao vennellia em meio moderadamente cido (faixa de pU: 2,9-4,0) e colorao amarela em meio fracamente cido e alcalino. Soluo de allzranjado de metillz a 0,1%. Soluo a 0,1 % (p/V) em etanol a 20%. Ensaio de sensibilidade A mistura de 0,1 ml de soluo indicadora com 100 ml de gua isenta de dixido de carbono apresenta cor amarela. So necessrios no mais que 0,1 ml de cido clordrico 0,1 M para determinar a mudana de cor para vennellio. Soluo de alaranjado de metillz Dissolver 20 mg de alaranjado de metila e 0,1 g de verde de bromocresol em 1 ml de hidrxido de sdio 0,2 M e gua at o volume de 100 ml. Esta soluo fornece colorao laranja em solues moderadamente cidas (faixa de pH: 3,0-4,0) e colorao verde-oliva em solues fracamente cidas e alcalinas.

AMARELO DE METANILA (CI4H14N,NaO,S) (CI 13065) Em titu1aes desenvolvidas em meio no-aquoso muda a colorao de amarela (meio bsico) para carmirn (meio cido). Soluo de amarelo de metanillz Soluo a 0,1 % (p/V) em metanol. Enwio de sensibilidilde Dissolver 0,1 ml da soluo de amarelo de metanila em 50 ml de cido actico glacial anidro. Esta soluo deve apresentar colorao vermellio-rosada. Adicionar 0,05 ml de cido perclrico 0,1 M. A colorao deve mudar para violeta.

ALARANJADO DE XILENOL (C'I Has N, Na. 013 S) Em meio cido apresenta cor amarela-plida. Reagindo com certos metais (tais como chumbo e zinco), forma complexo de cor vennellia intensa. Em presena de excesso de EDTA dissdico adquire cor amarela.

AMARELO NAFTOL (CIOH, NaO,) (CI 10315) Fornece soluio incolor em meio fortemente cido e colorao amarela em solues menos cidas (faixa de pH: 2,fH,2). AMARELO TlTAN (Cu HuN, Na2 0, S,) (CI 19540) Em solues cidas e moderadamente alcalinas fornece colorao amarela. Em solues fortemente alcalinas (faixa de pH: 12,0-13,0) apresenta cor vermellia. Soluo de amt11'elotitan Soluo aquosa a 0,05% (p/V). Papel de amarelo titan Impregnar papel de dtro comum com soluo de amarelo titan. Secar ao ar temperatura ambiente. En$l1iode sensibilidade Preparar mistura de 10 ml de gua, 0,2 ml de soluo padro de sulfato de magnsio (l0 ppm de Mg) e 10 ml de hidrxido de sdio 1 M. Adicionar 0,1 ml de soluo de amarelo titan. Preparar prova em branco de maneira anloga, porm omitindo o padro de magnsio. Comparar as duas solues: colorao rosa intensa desenvolv~ em comparao prova em branco. AMIDO (Amido solvel) P branco. Soluo de amido: Preparar soluo a 2% (p/V) em gua quente. A soluo pode apresentar pequena opalescncia. Soluo de amido iodetado Misturar 1,0 g de amido em 5 ml de gua, verter sobre 100 ml de gua fervente, agitando constantemente. Adicionar 10 mg de-iodeto mercIico. Ensaio de sensibilidade Juntar 1 ml de soluo de amido, 20 ml de gua, aproximadamente 50 mg de iodeto de potssio e, finalmente, 0,05 ml de iodo 0,01 M. H desenvolvimento de cor azul. Papel de amido iodetado Usar a soluo de amido, recm-preparada, acrescida de 0,5 g de iodeto'de potssio.

Soluo de azul de bromotimol Aquecer 1 g de indicador com 3,2 ml de soluo 0,05 M de hidrxido de sdio e 5 ml de etanol a 90%. Aps dissoluo completar o volume a 250 ml com etanol a 90%. Ensaio de sensibilidade A mistura de 0,3 ml de soluo de azul de bromotimol e 100 ml de gua isenta de dixido de carbono apresenta colorao amarela. A colorao muda para azul pela adio de no mais que 0,1 ml de soluo de hidrxido de sdio 0,02 M.

Na faixa de pH entre 12 e 13, sua soluo possui cor rosa-avermelhada em presena de ons clcio. Diante de excesso de EDTA dissdico, apresenta cor azul intensa. Soluo de azul de hidroxinaftol Soluo a 0,1 % (p/V) em etanol. AZUL DO NILO A (C2oH21 N.O, S) (CI 51180) Confere colorao azul a solues fracamente alcalinas e colorao vermellia a solues fortemente alcalinas (faixa de pH: 9,0-13,0). Soluo de azul do Nilo A Soluo a 1% em cido actico glacial anidro. Ensaio de sensibilidade A mistura de 0,25 ml da soluo de azul do NUo A em 50 ml de cido actico glacial anidro apresenta cor azuL A colorao passa a azul-esverdeada pela adio de no mais que 0,1 ml de cido perclrico 0,1 M. - Ensaio de identificao A soluo a 0,0005% (p/V) em etanol a 50% mostra mximo de absoro em 640 nm.

Constitui-se em mistura de l-metilamin0-4-anilinantraquinona e l-amin0-4-anilinantraquinona. Quando utilizado em titulaes em meio no-aquoso muda de colorao azul (meio bsico) para prpura (meio neutro) e para rosa (meio cido). Soluo de azul de oracet B Soluo a 0,5% (p/V) em cido actico glacial anidro.

Fornece cor amarela em solues moderadamente cidas e cor violeta-azulada em solues fracamente cidas (faixa de pH: 2,8-4,6) e alcalinas. Soluo de azul de bromofenol Dissolver, aquecendo brandamente, 0,2 g de azul de bromofenol em 3 ml de hidrxido de sdio 0,1 MeiO ml de etanol a 96%. Deixar esfriar e completar o volume de 10 ml com etanol a
96%.

Apresenta colorao vermellia em solues fortemente cidas (faixa de pH: 1,2-2,8), colorao amarela em solues fracamente cidas e alcalinas e colorao azul em solues mais alcalinas (faixa de pH: 8,0-9,6). Soluo de azul de timol Aquecer 0,1 g do indicador com 4,3 ml de hidrxido de sdio a 0,05% e 5 ml de etanol a 90%. Aps dissoluo completar o volume a 250 ml com etanol a 20%. Ensaio de sensibilidade A mistura de 0,1 ml da soluo de azul de timol,

Fornece coloralo amarela em solues fracamente cidas e colorao azul em solues fracamente alcalinas. Em meio neutro (faixa de pH: 6,0-7,0) fornece colorao verde.

100 ml de gua isenta de dixido de carbono e 0,2 ml de hidrxido de sdio O,02Mapresenta cor azul. A colorao altera para amarela pela adio de no mais que 0,1 ml de cido clordrico 0,2 M.

Soluo de difenilcorbazida Dissolver 1 g de difenilcarbazida em 100 ml de etanol a quente. Armazenar ao abrigo da luz.

P pardo-negro com nuances violceas. Bastante solvel em gua e facilmente solvel em etanol e acetona. Fornece cor vermelho-prpura com (ons clcio em meio alcalino. Em presena de excesso de edetato dissdico, a soluo adquire cor azul. - Soluo de calcona Soluo a 0,1 % (p/V) em metanol anidro. - Mistura composta de calcona Misturar uma parte de calcona com 99 partes de sulfato de sdio. - Ensaio de sensibilidade Dissolver 0,2 g de mistura composta de calco lU' em S ml de gua. Juntar 1 ml da soluo do corante, SO ml de gua, 10 ml de hidrxido de sdio Mel ml de sulfato de magnsio 1% (PN). A soluo azul, tornando-se violeta pela adio de 0,1 ml de cloreto de clcio 0,1 S% (p/V). A adio de 0,1 ml de EDTA dissdico 0,01 M fornece cor azul intensa.

Cristais de colorao laranja-avermelhada. Insolvel em gua e solvel em etanol, clorofrmio e benzeno. Solutio de difenilcarbazona Dissolver 0,1 g do indicador em etanol. zenar ao abrigo da luz.

Arma-

EOSINA Y (C20 H6 Br, Na2 O,) (CI 4S.380) A soluo a 1,0% (p/V) acidificada com cidos minerais forma precipitado laranja a laranja avermelhado de tetrabromofluorescena. A adio de 20 ml de hidrxido de sdio a 40,0% (p/V) sobre 10,0 ml da soluo de eosina Y a 1,0% (p/V) forma precipitado vermelho. Soluo de eosina Y Soluo aquosa a 1,0% (p/V).

Massa cristalizada amarelo-laranja, deliqescente, muito solvel em gua e solvel em etanol e ter etl1ico. O sal e suas solues, expostos luz, sofrem reduo parcial. Soluo de cloreto frrico Soluo aquosa a 10,S% (p/V).

Fornece solues incolores em meio cido e fracamente alcalino. Apresenta colorao vermelha em solues alcalinas mais fortes (faixa de pH: 8,3-10,0). Solutio de fenolftalena Soluo a 0,1 % (p/V) em etanol a 80%. Ensaio de sensibilidade A mistura de 0,1 ml de soluo de fenolftalena e 1000 ritl de gua isenta de dixido de carbono incolor. So necessrios no mais que 0,2 ml de uma soluo de hidrxido de sdio 0,02 M para o aparecimento de coloraio rsea. Papel de fenolftaleina Imergir tiras de papel de filtro comum em soluo de fenolftalena por alguns minutos e secar ao ar temperatura ambiente.

CLORETO DE METILROSANILINIO (C25H30CIN~ (CI 42SSS) Em titulai5es em meio no-aquoso a colorao muda de violeta (meio bsico) para azul~sverdeada (meio neutro) e para verde-arnarelada (meio cido). Soluo de cloreto de metilrosani/inio Soluo a O,S% (p/V). em cido actico glacial anidro. Ensaio de sensibilidJlde A mistura de 0,1 ml de soluo indicadora com SO ml de cido actico glacial anidro mostra colorao prpura-azulada. A adio de 0,1 ml de uma soluo de cido perclrico 0,1 M altera a colorao para verde.

Em titulaes de meio no-aquoso muda a colorao laranja (meio cido) para azul (meio bsico), passando pela colorao rosa. Soluo de magneson Soluo a 0,2% (p/V) em tolueno. Reagente de magneson Soluo de magneson a 0,1% (p/V) em hidrxido de sdio a 1% (p/V).

Constitui-se de indicador azul de bromotimol. . . vermelho de metila . . . fenolftalena. . . . . . . etanol q.s.p. Filtrar.

misto, . . . . . . . . . . . .

obedecendo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

formulao: . . 0,10 g . . 0,02 g . . 0,20 g 100,0 ml

P branco cristalino, adquirindo coloraio rsea. Muito pouco solvel em gua; solvel em etanol quente, acetona e cido actico glacial.

Quando utilizado em titulaes no-aquosas, muda a colorao azul ou verde-azulada (meio bsico) para laranja (meio neutro) e para verde~scura (meio cido).

SolutIo de l-na!tolbenze/na Soluo a 0,2% (p/V) em cido actico glacial anidto. EnSllio de sensibilidade Adicionar 0,25 ml de soluo de 1-naftolbenzena a 50 ml de cido actico glacial anidro. So necessrios no mais que 0,05 ml de cido perclrico 0,1 M para efetuar a mudana da colorao amarelo-marrom para verde.

cresol em 30 ml de gua, adicionar 6,3 ml de hidrxido de sdio 0,1 M e completar o volume a 500 ml com gua. Reagente: misturar volumes iguais da soluo "A", soluo "B" e clorofrmio. Agitar durante 5 minutos, deixar decantar e desprezar a camada clorofrmica.

Fornece soluo incolor ou vermelha plida nos meios cido e neutro e colorao azul em solues moderadamente alcalinas. SolutIo de lna!tol!tale(na Soluo a 0,5% (p/V) em etanol a 96%. NEGRO DE ERIOCROMO T (ClOH12N3Na07S) (CI 14.645) Em meio cido clordrico produz precipitado violetamarrom; tratado com cido sulfrico forma precipitado azul-escuro que, diludo, muda para cor marrom. Em soluo aquosa de hidrxido de sdio apresenta cor violeta. Soluo de negro de eriocromo T Dissolver 0,5 g de negro de eriocromo e 4,5 g de clorldrato de hidroxilarnina em metanol a 100ml. Preparar no momento do uso.

Apresenta colorao vermelha em solues fortemente cidas (faixa de pH: 0,5-2,5), colorao amarela em solues menos cidas e neutras e coloraio violeta em solues moderadamente alcalinas (faixa de pH: 7,5-9,2). Soluo de prpura de metacresol Soluo a 0,1 % (p/V) em hidrxido 0,001 M.

de sdio

Fornece colorao rsea em solues fracamente cidas (faixa de pH: 5,0-7,0) e colorao violeta em solues fracamente alcalinas. Soluo de reSllzurina Soluo a 0,1 % (p/V) em hidrxido de sdio 0,02 M. Esta soluo indicadora deve ser de preparao recente.

P ou cristais incolores Solvel em gua e lcool.

ou ligeiramente

rosados.

Soluo de resoTeinol Colocar 0,2 g de resorcinol em 100 ml de benzeno. Deixar decantar. Soluo de oxalato de amnia Soluo aquosa a 4% (P/V). PRPURA DE 8ROMOCRESOL (Cu H" 8r2 O, S) ~ incolor em meio cido e fracamente alcalino. Fornece colorao azul em solues alcalinas mais intensas (faixa de pH: 9,3-10,5). SolutIo de timol!tale{na Soluo a 0,1 % (p/V) em etanol a 96%. EnSllio de sensibilidade A mistura de 0,05 ml de soluo de tirnolftalena com 100 ml de gua isenta de dixido de carbono incolor. So necessrios no mis que 0,05 ml de hidrxido de sdio 0,1 M para mudar a colorao para azul.

Fornece colorao amarela em solues fracamente cidas e colorao azul-violeta em solues alcalinas, neutras e cidas muito prximas neutralidade (faixa de pH: 5,2-6,8). Soluo de prpura de bromocresol Aquecer 0,1 g de prpura de bromocresol com 5 ml de etanol a 90% at dissoluo. Adicionar 3,7 ml de hidrxido de sdio 0,05 M e etanol a 20% para completar o volume de 250 ml. - EnSllio de sensibilidade Misturar 0,2 ml da soluo de prpura de bromocresol e 100 ml de gua isenta de dixido de carbono. Adicionar 0,05 ml de hidrxido de sdio 0,02 M. Esta soluo possui a colorao azul violcea. Para alterar a colorao para amarela so necessrios no mais que 0,2 ml de cido clordrico O,02M. - ReaKente de prpura de bromoeresol Soluo "A": dissolver 38 g de fosfato de sdio monobsico (NaH2 PO.) e 2 g de fosfato de sdio dibsico lNa2 HPO.) em gua e completar o volume a 1000 ml. Ajustar o pH a 5,3. Soluo "B"; dissolver 0,4 g de prpura de bromo

Cristais incolores e deliqescentes. em gua e solvel em etanol.

Muito

solvel

Solu"ode tiocianato de amnia Soluo a 7,6% (p/V) em gua (aproximadamente 1 M).

~ constitudo de pigmento ndigo azul preparado a partir de vrias espcies de Rocella. LecanoSll ou outros lquens. O pigmento possui odor caracterstico.

Fornece colorao vermelha com Os cidos e azul com os lcalis (faixa de pH: 5,O-S,O).

Soluo de verde de bromocresol

Aquecer 0,1 g do corante com 2,9 ml de hidr xdo de sdio 0,05 M e 5 ml de etanol a 90%. Aps dissoluo, adicionar etanol a 20% at o volume de 250 ml.

Soluo de tomassol
Ferver sob refluxo, durante uma hora, 25 g de tomassol, finamente pulverizado, com 100 ml de etanol a 90%. Desprezar o etanol e repetir a operao por duas vezes, utilizando em cada extrao 75 ml de etanol a 90%. Tratar o tomassol extrado com 250 ml de gua. Filtrar.

Ensaio de sensibilidade
A mistura de 0,2 ml da soluo de verde de bromocresol e 100 ml de gua isenta de dixido de carbono apresenta cor azul. So necessrios no mais que 0,2 ml de cido clordrico 0,02 M para alterar a colorao para amarela. VERDE DE METILA (Cu Hss BrC1Ns) (CI 42.590) Em soluo de cido sulfrico apresenta cor amarela. Pela diluio retoma colorao verde.

- Papel de tomassol azul

Ferver 10 partes de tomassol, finamente pulverizado, com 100 partes de etanol a 96%, sob refluxo, por uma hora. Decantar e desprezar o etanol, adicionar ao resduo mistura de 45 partes de etanol e 15 partes de gua. Deixar macerando por dois dias. Decantar o sobrenadante e impregnar tiras de papel de I1tro comum com o extrato. Secar temperatura ambiente.

- Enlllio de sensibilidade
Mergulhar tira de papel de tomassol azul, medindo 10 mm x 60 mm, em 100 ml de mistura de 10 ml de cido clordrico 0,02 M e 90 ml de gua. Agitar. O papel adquire cor vermelha ao f'Jm de 45 segundos.

- Solupfo de lIerde de metila

Soluo a 0,1 % (p/V).

VERMELHO DE CONGO (CS2Hn N. NaO. S2) (CI 22120) Apresenta colorao azul em solues moderadamente cidas (faixa de pH: 3,0-5,0) e colorao vermelha em solues fracamente cidas e alcalinas.

- Papel de tomassolllermelho
Adicionar cido clordrico 2 M ao extrato obtido no processo de preparao do papel azul, gota a gota, at que a soluo apresente colorao vermelha. Impregnar tiras de papel de I1tro com esta soluo e deixar secar temperatura ambiente.

Solut1o de vermelho de Congo

Dissolver 0,25 g de vermelho de Congo em 50 ml de etanol a 90% e gua at completar 250 ml.

Enlllio de sensibilidade
Mergulhar tira de papel de tomassol vermelho em 100 ml de soluo de hidrxdo de sdio O,002M. Agitar. O papel deve ficar azul ao final de 45 segundos. TROPEOLINA O (CI 14270) Fornece solues de colorao amarela em meio moderadamente alcalino e colorao laranja em solues fortemente alcalinas (faixa de pH: 11,0-12,7).

- Papel de vermelho de Congo

Mergulhar tiras de papel de filtro comum em soluo de vermelho de Congo e deixar secar temperatura ambiente.

Ensaio de sensibilidade
A mistura de 0,2 ml de soluo indicador&. 100 ml de gua isenta de dixido de carbono e 0,3 ml de cido clordrico 0,1 M possui colorao azul. So necessrios no mais que 0,3 ml de hidrsido de sdio 0,1 M pua alterar a colorao para rsea.

- Soluo de tropeolina

Soluo a 0,025% (p/V) em 50 ml de metanol e ~gua para completar 100 ml.

- Enlllio de homogeneJllde
Aplicar 0,01 ml da soluo a 0,025% em cromatoplaca de celulose G. Desenvolver o cromatograma com a. mistura l-propanol, acetato de etila e gua (5:1 :4). O crothatograma deve mostrar uma nica mancha com Rf aproximadamente 0,9. TROPEOLINA 00 (C 11 H14 Ns NaOs S) (CI 13080) Fornece colorao vermelha em solues fortemente cidas (faixa de pH: I,O-2,S) e colorao amarela em solues menos cidas.

Fornece colorao vermelha em solues fortemente cidas (faixa de pH: O,2-I,S), colorao amarela em solues menos cidas e neutras; em solues moderadamente alcalinas apresenta cor vermelha (faixa de pH: 7,2-S,S).

s"luio de vermelho crelOl

Aquecer 50 1111 de vermelho cresol com 2,65 ml de hidrxido de sdio 0,05 Me 5 ml de etanol a 90%. Aps dissoluo, adicionar etanol a 20% at completar 250 ml.

Ensaio de sensibilidade
A mistura de 0,1 ml da soluio de vermelho cresol e 1000 ml de gua, isenta de dixido de carbono, adicionada de 0,15 ml d~ hidrxido de &dio 0,02 M apresenta colorao vermelhoprpura. A colorao muda para amarela pela adio de nio mais que 0,15 ml de cido clordrico 0,02 M.

Fornece colorao amarela em solues moderadamente cidas (faixa de pH: 3,6-5,2) e azul em solues fracamente cidas e alcalinas.

Solul1o de vermelho de rru:tilil

Fornece coloraio amarela em meio neutro e ftrmelha em soluio fracamente alcalina (faixa de pH: 6,8-8,4).
Solul1o de vermelho de fenol

Aquecer 0,1 g de vermelho de fenol com 1,42 mI de hidroxido de !dio 0,2 M e S mI -de etanol a 90%. Aps dlssoluio, adicionar etanol a 2M. para completar 250 mI. EIIIIIiD de ."lIbiIldiIde A mistura de 0,1 ml de vermelho de fenol e 100 ml de pa isenta de dixido de carbono apresenta cor amarela. SIo necessrios RIo mais que 0,1 ml de hidrxido de sdio 0,02 M para alterar a colorafo para Yioleta-avermelhada. VERMELHO DE METILA (CuHu N.O.) (CI 13020) Fornece coloralio vermelha em solues fracamente cidas (faixa de pU: 3,0-4,4) e coloralio amarela em solues muito fracamente cidas e alcalinas.

Aquecer 0,1 I de vermelho de metila com l,8S ml de hidroxido de Idio 0,2 M e S mI de etanol a 90%. Aps dissolulio, completar o volume de 2S0 ml com etanol a SO%. Enlllio de ,enlibiJidllde A mistura de 0,1 mI da soIuio indicadora, 100 ml de aua isenta de cxido de carbono e O,OS ml de cido clordrico 0,02 M apresenta cor vermelha. 810 nec:eurios Rio mais que 0,1 ml de hidlxido de Idio 0,02 M para mudar a coloraio para amarela.

Utilizado em titulaes de bases com cido percl6rico. ocorrendo mudana de coloraio carmim para quase incolor.
SolllflIo de IIf!rmelho de quinllldbul

Solulio a 0,1 % (P/V) em metanol.

XII.2. REAGENTES E SOLUES REAGENTES

Reagentes so substncias utilizadas, quer como tais quer como constituintes de solues, na realizao dos e~saios farmacopicos.

Acetato de amlO
F6rmula ti m_ EsptICifica60 molecular - Cz H, NOz - 77,08

ConIBrvs60 - Recipientes bem fechados. Sflgurana - Txico. Poluente.

Contm,

no mnimo, 98,0 por cento Acetato de clorexidina

Frmula e m_ moltICular -

(p/p).
Dtlscrilo - Cristais incolores, muito deliqescentes, de fraco odor actico. Con.rva60 - Recipientes bem fechados. ArmazenagtNTI - Proteger da umidade.

CuHsa ClzN1oO.

- 625,58
DtI,cri60 - Cristais ou p cristalino branco a creme plido; inodoro. CartICttlrsticss ff,iclIIPonto de fuso: 154-155 e Conserva60 - Em recipientes bem fechados. Proteger da luz. Sflgurana - Irritante. Categoria - Antimicrobiano.

Acetato de amnio 2 M Usar acetato de amnio SR. Acetato de amnio SR - Contm 15,0 g de acetato de amnio em gua a 100 ml. Con.rvs60 - Recipientes bem fechados. E,tabilidadtl - Preparar para uso imediato.
E$ptICificalo

Acetato de celu10H - Celulose parcialmente acetilada, com graus de acetilao variados. Ot1scrl6o - Slido amorfo branco. Caracttlrf,tlcs, ff,ical - No apresenta pontos de fuso definidos. Categoria - Adsorvente em cromatografla em camada delgada.
ElPtICificalo

Acetato de clorexidina 0,1 por cento (P/V). ElPtlCifica60 - Contm 0,1 g em gua a 100 mL ConlBrllB60 - Recipientes bem fechados. Sflgurana - Txico. Categoria - Antimicrobiano. Acetato de cortisona -CuHIOO. - 402,49 no mnimo, 96,0 por cento (p/p), calculado sobre a substncia dessecada. De,cri60 - Cristais incolores fracamente amarelados ou p cristalino branco ou quase branco. Inodoro; inicialmente inspido, depois amargo. CartICttlr,tica, f,icas - Ponto de fuso: aproximadamente 240C. Rotaio ptica: + 209 a + 219 (1,0 por cento (P/V) em dioxana). Con.rwIo - Recipientes bem fechados. Armazenegem - Proteger da luz. Categoria - Corticosteride.
F6rmulae m_molecular EsptICificalo - Contm,

Acetato de chumbo(ll), trlidratado

F6rmula ti mBlItI moltICular -

C. H. PbO 3Hz O

379,33
EsptICifica60

Contm,

no mnimo, 99,0 por cento

(P/p).
Ot1,cri60 - Cristais incolores, transparentes ou p cristalino branco, de odor actico fraco. EOorescente. Caractfmtical ff,lcaI - Ponto de fudo: 75C (aquecimento rpido); decompe-se completamente a 200C. Con.rvalo - Recipientes hermticos. Sflgurana - Txico. Poluente.

Acetato de chumbo, papel Impregnar papel adequado (geralmente no tamanho 6x80 mm) com a soluo de acetato de chumbo SR. Secar o papel reagente a 100 C, evitando contato com metal. Con.f'IIlIC6n - Recipientes bem fechados. ArmBZfl1lBf1"'" - Proteger da luz e da umidade.
PrfJlJflfB60 -

Acetato de cortilona, injetvel DfJIcri60 - Consiste de suspenso em meio aquoso adequado, em pH entre 5,0 e 7 p. E$ptICifica6o - Contm, no mnimo, 90p por cento
(p/p). ConIBrvalo - Em ampolas de dose nica.

Acetato de desoxicortona
SinonfmII - Acetato de desoxicorticosterona. F6rmule e m_ molacular - CnHuO. - 372,50 EsptICifica60 - Contm, no mnimo, 96,0 por cento

Acetato de chumbo(ll) SR. (aproximadamente 0.25 M) - Contm 9,5 g em gua isenta de dixido de carbono a 100,0 ml. Con.rva60 - Recipientes bem fechados. rSBgurana - Txico. Poluente.
ElPtlCifica60

ElPtlCificalo

Acetato de chumbo(ll), soluio saturada - Contm aproximadamente isenta de dixido de carbono a 50,0 ml.

35 g em gua

(p{p), calculado sobre a substncia dessecada. Cristais incolores ou p cristalino branco. Inodoro. Caracterstica, fsicas - Faixa de fuso: 157-161 oCo RotaiO ptica: + 171 a + 179 0,0 por cento (p/V) em dioxana). ConlBrvalo - Recipientes bem fechados. Armazenll{/flfTl - Proteger da luz. Categoria - Corticosteride.
D6scri60 -

Acetato de etila
Frmu/a e mBSSB mo/ecu/ar - C. Ha O. - 88,11 Espscificao - Contm, no mnimo, 99,9 por cento

(p/V).
Dsscri60 -

Acetato de sdio SR (aproximadamente 0,02 M) Especificao - Contm 0,272 g de acetato de sdio triidratado em gua a 100 ml. Conservao - Recipientes bem fechados. Acetato de uranila
Frmu/a e meSSll mo/ecu/ar -

Lquido lmpido, incolor, voltil, de odor C. H. O. U 2H. O -

caracterstico.
flsicss Densidade: aproximadamente 0,90. Ponto de ebulio: aproximadamente 77 oColndice de refrao (n'D): 1,371 a 1,373. ConservalJo - Recipientes bem fechados. Armazenagem - Proteger do calor. Segurana - Inflamvel. Caracttlrfsticas

424,15.
Descrilo - P cristalino amarelo, de odor actico fraco. Conservao - Recipientes bem fechados. SeguTlma - Substncia radioativa.

Acetato de fenilmercrio
Frmu/a e m_ mo/ecu/ar - CaHaHgO. - 336,74 Espscifica60 - Contm, no mnimo, 98,0 por cento (p/p). Descrio - Cristais pequenos ou p cristalino, branco a

branco-creme, brilhante.
Caracttlrlsticas flsicas - Faixa de fuso: 149-153C. Conservao - Recipientes bem fechados. Armazenagem - Proteger da luz. Segurana - Txico. Poluente.

Acetato de uranila e zinco SR Misturar 10 g de acetato de uranila em 50 ml de gua quente e 5 ml de cido actico 30 por cento (p/V). Misturar 30 g de acetato de zinco em 30 ml de gua quente e 3 ml de cido actico 30 por cento (p/V). Juntar as preparaes anteriores. Deixar esfriar. Filtrar. Conserve6o - Recipientes bem fechados. Armazenagem - Proteger da luz. Ssgurena - Substncia radioativa.
Prepara60 -

Acetato de indofenol SR Sinonlmia 2,6-Diclorofenolindofenol em tampo acetato. Praparalo - Dissolver 12,0 ml da soluo padro de 2,6-diclorofenolindofenol em gua a 100 ml. A esta soluo juntar 100 ml de tampo acetato pH 7,0. ConservalJo - Recipientes bem fechados. Estabilidade - Limitada a duas semanas. Armazenagem - Sob refrigerao. Acetato de potssio
Frmula s maSSllmo/ecular - C.H.KO. - 98,14 Espscificalo - Contm, no mnimo, 99,0 por cento

Acetato de zinco
Frmu/a e msssa molacu/ar -

C.H.0.Zn.2H.0

219,50
E,pscificaao

Contm,

no mnimo,

98,0 por cento

(P/p).
- Cristais incolores ou brancos, ou escamas cristalinas ou grnulos, de odor actico fraco, de sabor metlico adstringente. Eflorescente. Caracttlrf,tica, fl,icas - Ponto de fuso: 237C. Con.rve6o - Recipientes bem fechados. Segurana - Irritante. Descri60

AcetiIacetona
Frmula e maSSllmo/ecu/er - CsH.O. - 100,11 Descriao - Lquido lmpido, incolor ou amarelado, de

(P/p), calculado sobre a substncia dessecada. Descrl60 - Cristais incolores ou p cristalino branco, inodoro ou de odor actico fraco, de sabor salino, fracamente alcalino. Deliqescente. Caracterfsticas flsicas - Ponto de fuso: 292 C. Conserva6o - Recipientes bem fechados. Acetato de prednilOIona
Frmula e massa molscu/ar - C H,o O. - 402,49 Espscifica'o - Contm, no mnimo, 96,0 por cento

odor aromtico.
CaraetBrf,ticas flsicas - Ponto de ebulio: aproximadamente 139C. Densidade: aproximadamente 0,97. Indice de refrao (il 1,451 a 1,453. Con.rvalo - Recipumtes bem fechados. Segurana - Irritante. Inflamvel.

p):

Acetona
Frmula e maSSllmolecu/ar - C, Ha O - 58,08 Espscifica60 - Contm, no mnimo, 98,0 por cento (p/V). Descrilo - Lquiao lmpido, incolor, voltil, de odor

(p/p) calculado sobre a substncia dessecada. Descrio - P cristalino branco ou quase branco. Inodoro. Amargo. Caractsrlsticas flsicas - Rotao ptica: + 112 a + 119 (1,0 por cento (p/V) em dioxana). Ponto de fudo - Aproximadamente 247C. Conserva'o - Recipientes bem fechados. Categoria - Corticosteride. Acetato de sdio Frmu/a e massa mo/ecu/ar - C. H, NaO.. 3H. O 136,08;anidro - 82,03 Espscifica'o - Contm, no mnimo, 99,0 por cento Cristais incolores ou p cristalino branco, inodoro ou de odor actico fraco, de sabor salino, fracamente amargo. Eflorescente. Conservalo - Recipientes bem fechados.
(p/p). Descrio -

caracterstico.
ffsiCII' - Densidade: 0,790 a 0,793. Indice de refrao (nj): 1,358 a 1,360. Ponto de ebulio: aproximadamente 56C. Conserva'o - Recipientes hermticos. Segurana - Inflamvel. Irritante e txico. Caracttlrfsticas

EspscificlI60

Acetona desidJ:atada _ Acetona, desidratada sobre sulfato de sdio anidro. Conserva60 - Preparar no momento de uso.

E,pacificallo

cido actico diudo - Contm 12 g de cido actico glacial em gua a 100 ml. ConseTVIw;60- Recipientes hermticos.

E,pecificalo

cido actico 5 M - Contm 300 g de cido actico glacial em gua a 1000 mI. ConlSrvalo - Recipientes hermticos.

cido brico
F6rmula e massa molecular - H. BO, - 61,83 Especifica60 - Contm, no mnimo, 99,5 por cento (p/p). Descrilo - Cristais incolores brilhantes ou p fIno

ErpllCifica60

cido actico 2 M - Contm 116 ml de cido actico glacial em gua a 1000 mI. Ajustar o volume, quando a soluo estiver temperatura ambiente. ConlSrvaio - Recipientes hermticos.

cristalino branco, untuoso ao tato, de sabor fracamente cido e amargo. Conservalo - Recipientes bem fechados.
Prepara60 -

cido actico M Contm 60 g de cido actico glacial em gua a 1000 ml. ConlSrvaSo - Recipientes hermticos. Informa6o BdicionalAo usar, confIrmar o ttulo.
E,pecifiCllo -

cidobrico, soluo saturada Dissolver 5,0 g em volume final de gua a 100,0 mI. Caracter(sticas flsicas Solubilidade em gua 1: 20 (20C). ConlSrvalo - Recipientes bem fechados.

cido actico 0,045 M - Contm 2,7 g de cido actico glacial em gua a 1000 mI. ConlSrvalo - Recipientes bem fechados.
ErpecificlIlo

cido actico SR
- Contm 30 g de cido actico glacial em gua a 100 ml. Corresponde ao cido actico 5 M. DelCri'o - Lquido lmpido, incolor, de odor irritante. Con rllfJ60 - Recipientes hermticos. ErpacificlIlo

cido bromdrico Frmula e malSll mo/ecular - HBr - 80,91 ErpecificlIlo - Contm 48,0 por cento (p/V). Descriio - Lquido incolor ou fracamente amarelo, de odor forte e irritante. Escurece lentamente pela exposio ao ar e luz. ConlSrva60 - Recipientes bem fechados. Armazenagem - Proteger do ar e da luz. Sagunlna - Irritante, corrosivo. cido calconcarboxlucO
Frmula e malSll molecular - C'I H N, O, S - 438,40 Descrio - P marrom-preto. ConlSrvao - Recipientes bem fechados.

cido &CticolIacial
Frmula e maus mo/ecular - C, H. O, - 60,05 ErpllCificalo - Contm, no mnimo, 98,0 por cenro (p/p). De,criio - Lquido lmpido, incolor, voltil, de odor

cido clordrico
Sinonfmia - cloreto de hidrognio. F6rmula e massa molecular - HCl - 36,46 - Contm, no mnimo 35,0 por cento (p/p) constitudo de soluo de HCI gasoso em gua. Descri'o - Lquido lmpido, incolor, fumegante, de odor irritante. Caracterlsticas ffsicas - Densidade: aproximadamente 1,18. Ebulio: azetropo com 20,2 por cento de HCl em gua (6,1 M): 109 oCo ConlSrvao Recipientes hermticos, de material inerte ao reagente. Ssgunlna - Proteger do calor 20C). Corrosivo. Evitar contato externo, olhos e pele, inalao e ingesto. Especifica/io

irritante e caracterstico. Apresenta sabor cido mesmo em grande diluio; cristalizvel a baixas temperaturas. Canlcterfstica, ff,ies, - Densidade: aproximadamente 1,05. Ebulio: aproximadamente 118C. Temperatura de congelamento: aproximadamente 14 oCo Con rvaSo - Recipientes hermticos. StlgUnlf1ll - Corrosivo. InflamveL Proteger olhos, pele e mucosas. cido ascrbico
Frmula e malSll molecular - C, H. O, - 176,13 ErpllCificalo - Contm, no mnimo, 99,0 por cento

ErpllCificalo

cido clordrico diludo - Usar cido clordrico SR.

(p/p). P cristalino branco ou cristais incolores. lnodoro e de sabor cido. Caracter(,ticlll f(,ica, - pH da soluo a 5,0 por cento (p/V): 2,2 a 2,5. Ponto de fuso: aproximadamente 190C, com decomposio. Rotao ptica especfIca (soluo a 1,0%): entre + 20,S e + 21,5. ConlSrlllllo - Recipientes bem fechados, no metlicos. Armazanagem - Proteger da luz.
DelCrilo -

cido clordrico 2 M - Contm 206,0 g de cido clordrico em gua a 1 000 ml. Con.rvalo - Recipientes bem fechados. Armllzenagam - Proteger do calor. Sagurana - Corrosivo.
ElpeCificalo

cido clordrico
E,pecifica'o -

M Contm 103 g de cido clordrico

em

cido benzico
Frmula a maus mo/ecular - C, H, O, - 122,12 ErpllCificalo - Contm, no mnimo, 99,0 por cento (p/p). DalCrilo - Cristais incolores ou p cristalino branco, de

gua a 1000 ml. ConlSrlla'o - Recipientes bem fechados. Estabilidade - Proteger do calor. Ssgunlna - Corrosivo. Informlllo adicional - Ao usar, confrrme o ttulo. cido clordrico 0,5 M - Contm 43 ml de cido clordrico em gua a 1000 mI. ConlSrvalo - Recipientes hermticos. Armazenf1(/fJm - Proteger do calor.
ErptICificao

odor caracterstico e de sabor cido adocicado a irritante. Caracterl,tica, f(,icas - Ponto de fuso: aproximadamente 122C. ConlSrllailo - Recipientes bem fechados. Catf1(/oria - Conservante.

cido clordrico SR Sinonlmia - cido clordrico 10 por cento (P/V). Especificalo - Contm 27,4 g de cido clordrico em gua a 100 ml. CIll7lctllrlsriClls flsiClls - Densidade: aproximadamente 1,05. Con.rva'o - Recipientes bem fechados. EstabilidlJde - Proteger do calor. Segul7lna - Corrosivo. cido crmico Onde constar, usar trixido de cromo (CrO,). cido edtico
Sinonlmia - cido etilenodiaminotetractico. Frmula e massa molecular - C1oH1,N,0. - 292,24 Especificalo - Contm, no mnimo, 98,0 por cento

Descri60 - Lquido lmpido, incolor, inodoro. Higroscpico; consistncia xaroposa. CIlracterlsticas flsic. - Densidade: aproximadamente 1,7. Conservalo - Em recipientes hermticos. Armazenar cuidadosamente. Segurana - Corrosivo! Evitar contato com pele, mucosas, membranas.

Preparallo

cido fosfrico 6 M - Misturar quantidade correspondente a 588,0 g de cido fosfrico concentrado com lpa at completar 1000 ml.

(p/p).
Oescrilo - Cristais incolores. CIlrllCterlsticas flsicas - Decompe-se ao redor de 220C,

cido fosfrico SR - Misturar quantidade correspondente a 15,0 g de cido fosfrico concentrado com pa at perfazer 100 ml. CIlracter{sticas f{sic.s - Densidade: aproximadamente 1,15.
Preparalo

podendo descarboxilar a 150C. Con.rva'o - Recipientes bem fechados. cido fenoldissulfnico SR

Oescrilo - Lquido lmpido a marrom claro. Pl7lpal7l'o - Dissolver 2,5 g de fenol em 15,0 ml de

cido phidroxibenzico Frmuhl e m_ moleculllr - C, H, 0. - 138,13 Ollscrilo - Cristais incolores. Cal7lcterlstica, fl,ic., - Ponto de fusfo: 213-214C. Con.rva60 - Recipientes bem fechados. ciclo metaf0lf6rico
Frmula li m_ molecuhlr - (HPO. )n:Monmero-79,98. Erpacific.lo - Contm certa proporo de metafosfato

cido sulfrico. Juntar 7,5 ml de cido sulfrico fumegante. Aquecer a 100C por duas horas. Transferir o produto fluido para recipiente adequado. Para uso, liquefazer em banho de gua. Con.rva'o - Recipiente de vidro com tampa esmerilhada. Segul7lna - Irritante e corrosivo. cido f6rmico
Sinonlmia - cido metanico. Frmuhl e m_ mohlculllr - CH, O, - 46,03 E",acificalo - A forma anidra contm, no mmlmO, 98,0 por cento (p/p). comercial contm em tomo de

de s6dio.
Ollscrilo - Slido ou massa vtrea, incolor. Higroscpico.

Em soluo aquosa, transforma-se lentamente em cido fosfrico (H.P04). CIlracter{,tic., ",ic. Volatiliza sob aquecimento intenso. Con.rvalo - Recipientes hermticos. cido metafosf6ricoactico SR - Contm 3,0 g de cido metafosfrico 8,0 ml de cido actico ,lacial em pa a 100 ml. Con.rvalo - Recipientes bem fechados. E,tabilidlldll - Limitada. Armazllnllf/tlfTl - Manter sob refrigerao.
E,peciflcalo

90,0 por cento (p/p). Ollscrilo - Lquido picante.

CIll7lCterl,tic.s

incolor, muito custico, de odor

flsic - Ponto de ebulio: 100,5 oCo Densidade: aproximadamente 1,22. Indice de refrao (n 0>:1,3714. Solidifica a 70C. Con.rvalo - Recipientes bem fechados. Segul7lna- Custico.

cido ntrico
Frmula li mlllsa molseular - HNO. - 63,01 Erpecificalo - Contm, no minmo, 63.0 por cento (p/p). Descri'o - Soluo lmpida, praticamente incolor, de

cido fOlfomoh"bdico
Sinonlmia - cido molibdofosfrico. Frmula li maSSllmolseular - Aproximadamente

odor caracterstico. 20 MoO.

Carllcterlstic., fI,iC81 - Densidade: 1,384 a 1,416Con'lIfWllo - Recipientes hermticos, ao abrigo da luz. Segurana - Corrosivo.

,P,Os .51H,0 - 3.939,48 Ollscrilo - Cristais fracamente amarelados. Con.rva6o - Recipientes bem fechados. cido 100Iomolbdico 3,5 por cento (p/V)em nproplico. EsplICific.Io - Contm 3,5 g de cido fosfomohbdico em l-propanol a 100 ml. Con.rvalo - Recipielltes bem fechados. Segul7lna - Inflamvel. cido fosfrico Sinonlmia - cido ortofosfrico Frmula e mllSSllmolllCular - H. P04 - 98,00 ES(JIICific.60 - Contm, no mnimo, 85,0 por cento
(p/p).

cido ntrico fumepnte - Contm, no mnimo, 95,0 por cento (p/p). Descrilo Lquido lmpido, levemente amarelado, fumegante no ar.
E,pecificalo

cido ntrico M - Diluir 9,66 g de cido ntrico em gua at 100 ml.

Preparalo

cido ntrico SR Especific.lo - Contm 12,6 por cento (p/V) de HNO .

OJrtlCterlstiCIII flsiCIII -

Densidade:

aproximadamen-

OtIscrilo

- Cristais incolores ou p branco.

te 1,5.

flsiCIIs cido monoidtatado p5Me sem fundir a aproximadamente 288C. OJraetllrfstiCIII

decom-

cido oxlico - cido etanodiico. F6rmulll li m molecular - C2 H2 0 . 2H2 126,07 EsptlCiflClllo - Contm, no mnimo, 99 por cento (p/p). Dtncrilo - Cristais inoolores ou p cristalino branoo. CartlCtllrlsticlII flsiCIII - Ponto de fusio: aproximadamente 101C. SlIgur.na - Veneno!
Sinonlmm

cido lUlfanlico SR EsptlCificalo - Contm 0,50 g de cido sulfanlico f'Inamente pulverizado, adicionados de 61J ml de cido clordrioo 6 M. Completar oom gua at 100 ml.

cido sulfrico
F6rmul. li m a molllcul.r EspecificlIlo - Contm, - H2 SO. - 98,07

cido oxlico SR EsptlCificalo -Soluo madamente 0,5 M).

no mnimo 95.0 por cento

a 6,3 por cento (p/V) (aproxi-

(P/p).
OtIscrlo - Lquido incolor, custico, de consistncia oleosa, muito higroscpico. OJrecterfstiCII' fl.ic. Conltlrvlllo - Densidade:

cido perclrico Frmula em_ molecular - HCl04 - 100,46 Espt1Cificalo - Contm, no mnimo, 70,0 por cento (p/p) e, no mximo, 72,0 por cento de HCI04' Dllscrilo - Lquido lmpido, incolor, voltil e de odor picante. HWroscpioo. OJraetllfl.ticllS flsica. - Densidade: aproximadamente 1,7. Conlllf'(alo - decomp5e-se espontaneamente, podendo explodir especialmente em oontato com substncias oxiaveis. Segurena - Irritante. Corrosivo! cido perclrico M EsptlCificalo - Contm 8,5 ml de HC104 em gua, perfazendo 100 ml. Estabilidade - Usar soluo recm-preparada. cido perclrico SR Usar cido perclrico M. cido perfrmico
Sinonlmi. - cido peroxifrmioo. F6rmul. li massa molllCular - CH203 - 62,03 PrtJPllrelo - Misturar 1,0 ml de perxido de hidrognio

1,834 a 1,839.

Recipientes bem fechados. Segurena - Irritante. Corrosivo.

cido lIIIf6rico M EsptlCificalo - Contm 110,4 g de cido sulfrioo em gua a 1000 ml. ConsllfVlllo - Recipientes bem fechados.

cido lUlfuroao F6rmul. li m_ molecular - H2 S03 - 82,07 EspecifiCIIIo - Contm 5,0 a 6,0 por cento (p/p) de di6xido de enxofre puro. Preparar de acordo oom o oonsumo. OtIscrilo - Lquido cido, lmpido, incolor, de odor sufocante de dixido de enxofre. Ao ar oxida-se paulatinamente a cido sulfrico. Consllrvalo - Recipientes quase cheios, bem fechados, em local frio. cido tiogliclico
Sinonlmie - cido mercaptoactico. F6rmul. e m_ molecular - C2 H. 02 S - 92,11 EsplICifiCIIIo - Contm, no mnimo, 79.0 por cento (p/p). OtIscrilo - Lquido inoolor ou prximo a inoolor, de

30,0 por cento (V/V), ou 9,0 por cento (p/p) , com 90 ml de cido frmico. Con.ervalo - Preparar no momento de uso. Proteger do calor. Segurana - Irritante. Pode explodir em oontato oom metais, seus xidos, substncias redutoras, ou na destilao. cido saliclioo Sinonlmi. - cido 2hidroxibenzico. Frmul.llm a molllCular - C,H.03 - 138,12 EspecifiCIIIo - Contm, no mnimo, 99,0 por cento (p/p), calculado sobre base seca. OtIscrilo - P cristalino branco ou agulhas cristalinas incolores. Inodoro e sabor cido adocicado e irritante. Caf'llCtllflsticllS flsiCIII - Faixa de fuso: 156-160 oCo Conservalo - Em fiasoos bem fechados. cido sulfanlico - cido 4-1lminobenzenossuifnico. Frmula moleculBr - C.H,N03S.H2 191,20; anidro - 173,84. El(JfICifi"f}lo - Contm, no mnimo, 99,0 por cento
Sinonlmia

odor forte desagradvel.

Carectllrfstic. flsic. -

Densidade:

aproximadamente

1,33.
Conltlrvlllo - Proteger do ar. Segurana - Pode causar graves queimaduras na pele. Informlllo adicional - Sua decomposifo libera gs

sulfdrico.

11",..

(p/p).

cido tricloroactico FrmuIB e m moIBculllr - C2 HCl302 - 163,39 Especificalo - Contm, no mnimo, 98,0 por cento (p/p). Ollscrilo - Cristais incolores ou massa cristalina, deUqescente, de odor caracterstico fracamente pungente, irritante. Carecterlstica fl.icll - Faixa de fuso: 55 a 61C. Conllllrvll6o - Em recipientes hermticos. Proteger do calor e da umidade. Sllgurena - cido muito corrosivo.

pr Sinonfmia - gar-agar, gelose. Especificalo - Polissacardeo extrado de Gelidium cartilagineum (L) Gaillon (Gelidiaceae), Gracilaria confervoides (L) Greville (Sphaerococcaceae) e algas vermell1as afins (Rhodophyceae). Descrilo - P rmo, incolor ou ligeiramente amarelado,

ConSllfllalo - Recipientes bem fechados. Armazenllf/6m - Proteger da umidade.

Amidos
Descrilo - Extrados de cariopses maduras de Zetl mays L., Triticum aestivum L. ou OryZll IItltilltl L. (fam. Graminiae). P branco, rmo, inodoro, inspido e que produz

seco, hidrofl1ico.
ConSllflla60 - Recipientes hermticos.

Prepara60 -

gua de bromo SR Misturar 3,0 ml de bromo com 100 ml de gua at saturao. Agitar antes do uso. Aps decantao, usar a soluo sobrenadante lmpida. ConIBfllalo - Recipientes hermticos. ArfTllJZenll(/flm - Conservar com excesso de bromo e ao abrigo da luz. SegullIna - Txico.

ligeira crepitao quando comprimido. ConltJrvaIo - Recipientes bem fechados. ArmazentIf/Bm - Proteger da umidade. Informalo adicional - A rotulagem deve indicar a origem botnica. Aminofenazona
Sinon{mia - Aminoantipirina. Frmula e mssse mo/ecular - Cu H13 N. 203,24 Descri'o - Cristais ou p cristalino, amarelo-claro. Carecter{sticas ffsicss - Ponto de fuso: aproximada-

mente 109C.
ConltJfllalo - Recipientes bem fechados.

gua isenta de dixido de carbono Especifica60 - gua fervida vigorosamente por 5 minutos ou mais e protegida da atmosfera, durante resfriamento e oonservao. Conseflla60 - Proteger do ar (da absoro de CO2 ). lcool isopropJ1ico
Sinonfmia - Isopropanol, 2-propanol. F6rmulaemllSSamolecular - C.H80 - 60,10 Especificalo - Contm, no mnimo, 99,0 por cento. Descri60 - Lquido incolor, de odor caracterstico. CaracterfsticBS ffsicBS Ebulio: aproximadamente

AmniaSR
Descri'o - Contm 37,5 ml da soluo concentrada de amnia em 100 ml de soluo aquosa. Esta contm, no mnimo, 10,0 por cento (p/V) de hidrxido de amnio (aproximadamente 6 M).

Amnia6M Usar amnia SR. Amnia, soluio concentrada Sinonfmia - Hidrxido de amnio. F6rmula e massa molecular - NH, - 17,03 Especificelo - Contm, no mnimo, 28,0 por cento (P/p) e, no mximo, 30,0 por cento (p/p). Descrilo - Lquido lmpido, incolor, de odor caracterstico e asfixiante. Armazenagem - Em recipientes hermticos, no completamente cheios. Proteger do ar e da luz. Segulllns - Custico. Anidrido actico
Frmula e mBSsamo/ecular - C4 H6 O, - 102,09 Especificalo - Contm, no mnimo, 97,0 por cento (P/p). Descrilo - Lquido mvel, incolor, odor actico intenso

82C. Densidade: aproximadamente 0,785. fndice ae refrao (nO): 1,376 a 1,378. Conserllalo - Recipientes bem fechados. Segulllns - Inflamvel. lcool n -propllico
Sinonfmia - 1-Propanol. F6rmula e mssse moleculBr - C, H8 0- 60,10 Descrilo - Lquido lmpido, incolor, de fraco odor

alcolico. Ebulio: aproximadamente 97C. Densidade: 0,803 a 0,805. ConSllfllalo - Recipientes bem fechados. Segulllna - Inflamvel.
Caracterfsticas ffsicM -

e irritante.
f{sicM - Densidade: aproximadamente 1,075. Faixa de ebulio: 136 a 142C. Conservao - Recipientes hermticos. Segulllna - Facilmente combustvel. Irritante forte. Call1cterfsticas

Amaranto - C.I. 16.185

Frmula e massa molecular -

C2oHuN2Na,OlOS,

604,06
- P fino, facilmente solvel em gua, praticamente insolvel em lcool, acetona, ter e clorofrmio. Conserllao - Recipientes bem fechados. Descrilo

AmidoSR
- Dissolver 2,0 g em gua quente. Completar a 100 ml com gua. Se necessrio, filtrar. ConSllflla,o - Recipientes bem fechados. EstBbilidade - Limitada: trs dias. Armazenagem - Sob refrigerao. Preparalo

Anidrido actico-piridina SR - 25 g (ou 23 ml) de anidrido 50 ml de piridina anidra. Armazenllf/Bm - Proteger do ar e da luz. Segulllns - Txico.
Descrilo

actico em

Anisaldedo
Sinon{mia - Aldedo ansico. F6rmula e massa mo/ecular - C. H8 O2 - 136,14 Descrilo - Lquido oleoso, incolor e amarelado, de odor

Amido solvel
Sinonfmia - Amilodextrina, amilognio. Descrilo - P branco, fino, inodoro, inspido.

aromtico.
Caracterfsticas ffsicas - Densidade: aproximadamente 1,12. Ponto de ebulio: aproximadamente 248C.

Conaerlla6o - Recipientes bem fechados. Armazen8gf1fTl - Proteger da luz.

F6rmula e massa molecular - C. Hs KO. - 204,22 Especificaio - Contm, no mnimo, 99,9 por cento e,

Anisaldedo, soluo Prt1pllf7llo - Misturar, na ordem, 0,5 ml de anisaldedo, 10,0 ml de cido actico glacial, 85,0 ml de metanol e 5,0 m1 de cido sulfrico. Asparagina
F6rmule e massa molecular - C.H.N201

no mximo, 100,3 por cento (p/p), calculado em relao substncia dessecada a 120C durante duas horas. Dtlscrilo - Cristais incolores ou p cristalino branco. Conaervalo - Recipientes bem fechados. Biftalato de potssio O,OS M

.H20

- 150,H

Preparalo - Dissolver 10,21 g em gua a 1000 ml ConserllaSo - Recipientes bem fechados.

Descrilo - Cristais incolores, inodoros. Caractersticas ffsicas - Ismero L: Ponto

de fuso: 234-235 oCoIsmero D: Ponto de fuso: 215C.

Bissulfato de potssio Hidrogenossulfato de potssio.

Sinonlmia: Frmula e m_ Especificalio:

de potssio; sulfato cido

Barbital
F6rmula e massa molecular - C. HI2 N2 01 - 184,19 EspecifiCll60 - Contm, no mnimo, 99,0 pot cento

(p/p), calculado em relao substncia dessecada. Descrilo - Cristais incolores ou p cristalino branco, inodoro, de sabor fracamente amargo. Caracterlstica ffsicas - Ponto de fuso: aproximadamente 190C. Barbital sdico
F6rmula e massa molecular - C.HlI N2NaOl - 206,18 Especifica60 - Contm, no mnimo, 99,0 por cento

moltlcular - KHS04 - 136,16. Contm, no mnimo, 98,0 por cento (p/p), calculado sobre a substncia dessecada. Descrilo: Cristais incolores ou massa branca; higroscpico. Caracteristicas ffsicas: Soluo aquosa com carter fortemente cido. Ponto de fuso: 197C. Conserllalo: Recipientes bem fechados.

(p/p), calculado em relao substncia dessecada. Descrilo - Cristais incolores ou p cristalizado branco, inodoro, de sabor amargo e fracamente custico. Conaervaio - Recipientes bem fechados. Brio SRA - 1 mg/ml Especificalo - Contm 1,775 g de cloreto de brio em gua a 1000 ml Conserlla6o - Recipientes bem fechados, inertes (tipo polietileno ). Benzeno
Sinonfmia - Benzo!. F6rmula e massa molecular - C6 H6 - 78,11 Descrilo - Lquido lmpido, incolor, refrativo, voltil,

Bissulflto de sdio - Hidrogenossulfito de sdio, sulfito cido de sdio. F6rmula e massa molecular - NaHSO, - 104,06 Especificalo - Usar metabissulfito sdico Na2 S2 Os (PM 190,10), onde for indicado o emprego de bissulfito sdico.
Sinonlmia

Brometo de iodo SR Prepara60 - Dissolver 13,2 g de iodo em cido actico glacial a 1000 ml. Determinar o teor de iodo em 20,0 ml desta soluo, mediante titulao com tiossulfato de sdio 0,1 M SV. Ao restante da soluo de iodo (980 ml), adicionar quantidade de bromo equivalente ao iodo determinado. Conaerllalo - Recipientes de vidro bem fechados. Armazen8gf1fTl - Proteger da luz. Brometo de potssio
F6rmula e massa molecular - KBr - 119,00 EsptICificalo - Contm, no mnimo, 98,0 por cento

de odor caracterstico.
f/sicas - Faixa de ebulio: 79-81C. Densidade: 0,878 a 0,880.lndice de refrao: 1,5016. Conferllalo - Recipientes bem fechados. ArmazenlJflf1"' - Proteger do calor. Segurana - Altamente inflamvel. Cancergeno. Informlllo adicional - Sempre que possvel usar tolueno. Caracrerlsticas

(p/p), calculado em relao substncia desseca da. - Cristais incolores ou p cristalino branco, de sabor acentuadamente salgado. ConaerllaSo - Recipientes bem fechados.
Dtlscrilo

Bromo
Frmula e massa molecular - Br2 -159,80 Descrilo - Lquido vermelho-marrom, irritante,

sufo-

Bicarbonato de sdio Sinonfmia - Carbonato cido de sdio, hidrogenocarbonato de sdio. F6rmula ti massa molecul. - NaHCO, - 84,01 EsptICificalo - Contm, no mnimo, 99,0 por cento e, no mximo 101,0 por cento (p/p), calculado em base seca. Descrilo - P cristalino branco, inodoro, de sabor salgado e fracamente alcalino. Pelo aquecimento, transforma-se em carbonato de sdio. Biftalato de potssio - Ftalato cido de potssio, hidrogenoftalato de potssio, diftalato de potssio.

cante e fumegante.
Caracrerlsticas flsicas -

Densidade:

aproximadamente

3,1.
Conservalo - Recipientes hermticos ou ampolas. Ssgurana - Txico.

Sinonlmi.

Bromo 0,2 M em cido actico glacial - Juntar 15,0 g de brometo de potssio e 5,5 ml de bromo em cido actico glacial a 1 000 ml. Agitar e deixar em repouso por 24 horas. Titular antes do uso. Conserlllllo - Recipientes hermticos. Armaztlnagtlm - Proteger do calor. SlIf/uranll - Txico.
Preparalo

1- ButaDol
Sinonfmia - lcool butlco normal ou primrio, n-buta

nol, lcool n-butlico.

Frmula li maSA molecular - C. H1 oO -14,12 Ollscri60 - Lquido Impido, incolor, refratlvo, de odor

EII'flCfiealo - Contm, no mnimo, (p/p), calculado em base seca. Oescri'o - P branco, higroscpico. Con.rvalo - Recipientes hermticos. Armazenagem - Proteger da umidade.

99,0 por cento

caracterstico.
Carwcterfltieal fflieal - Ponto de ebulio: 111-118C. Densidade: 0.810. fndice de refrao (n10): 1,3993. Con.rvalo - Recipientes bem fechados. StlfluranII - Irritante. Inflamvel.

Carbonato de sdio decaidratado Frmula li maua molllcular - Na2 C03 10H2 O - 286,09 E"'flCificalo - Contm, no mnimo, 36,1 por cento
- Cristais transparentes, incolores, eflorescentes, ou p cristalino branco; inodoro, de sabor alcalino e salgado. Con.rvallo - Recipientes bem fechados. (p/p). Olllcri'o

caIciferol
Sinonfmia - Ergocalciferol, vitamina D2 . Frmula li maSA molecular - Cu H O - 396,65 EII'flCificalo - Um grama corresponde em atividade

anti-raqutica a 40 milhes de U.I. Descri'o - Cristais incolores ou p cristalino branco. Con.rvalo - Recipientes hermticos, sob gs inerte. ArrMzenllf/flm - Proteger do calor e da luz. Clcio SRA - 400 ~i1ml
EII'flCifiea6o - Contm 1,001 g de carbonato de clcio R

Carbonato de sdio monoidratado Frmula e maUlJ molecular - Na2 CO, H2 O - 124,00 ElPBCiflcBIo - Contm, no mnimo, 83,0 por cento

(p/p)
- Cristais incolores ou p cristalino branco; inodoro, de sabor alcalino e salgado. Con.rva6o - Recipientes bem fechados. Informalo adicional - Quando prescrito carbonato de sdio para mistura em p, usar Na2 C03 H2 O. Oescrilo

em 25 ml de cido clordrico M. Ferver. Completar com gua a 1000,0 ml. Con.rva6o - Recipientes bem fechados, inertes (tipo polietileno). Carbonato de amnio
Frmula li maUlJ molllcular - (NH. >aC03 - 96,09 EII'flCifealo - Mistura em propores variveis de bicar-

Cefalina
- Consiste em steres de cido glicerofosfrico com cidos graxos de cadeia longa, sendo o grupo fosfato eserificado com etanolamina. Descrilo - Substncia amorfa amarelada, de odor e sabor caractersticos. Categoria - Hemosttico local e reagente laboratorial em testes de funo heptica. ElpflCifica'o

bonato de amnio (NH.HC03 - 19,06) e carbamato de amnio (H2NCOONH. - 18,01). Contm, no mnimo, 30,0 por cento de NH3 (MM - 11,3) (p/p). OlllCrilo - Massas cristalinas brancas, translcidas, de odor arnoniacal forte. Con.rlfB60 - Recipientes bem fechados. Armazenagem - Proteger da luz e do calor. Carbonato de amnio SR - Contm 15,8 g de carbonato de amnio (p/V) em gua a 100 ml (aproximadamente 2 M). Con.rvB'o - Recipientes bem fechados. ArmaztlnagtJm - Proteger da luz e do calor.
EII'flCificalo

Chumbo SRA - 100 ~i1ml - Contm 0,160 g de nitrato de chumbo(lI) em 5,0 ml de cido ntrico. Completar com gua a 1000 mI. Con.rlfalo Recipientes bem fechados, inertes (tipo polietileno).
EII'flCificalo

Carbonato de clcio
Frmula li maSA molecular - CaC03 - 100,09 ElptlCificBIo - Contm, no mnimo, 98,5 por cento

(p/p), allculado em substncia seca. Delcrlo - P branco, inodoro e inspido. Con.rlllllo - Recipientes bem fechados. Carbonato de estroncio
Frmula li maSA molecular - SrC03 - 141,64 Ollscrlo - P branco, inodoro e sem sabor. Co~rvalo - Recipientes bem fechados.

Cianeto de potssio Frmula e maUlJ molecular - KCN - 65,12 Especifica'o - Contm, no mnimo, 96,0 por cento (P/p), calculado sobre a substncia desiICcada. Oescri60 - P cristalino, ma..as ou grnulos brancos; deliqescente. Caracterfltieas fflieas - Ponto de fuso: 634C. Con.rlfa'o - Recipientes hermticos. Armazenagem - Proteger da luz. Estabilidadll - Decompe-se gradualmente por exposio ao ar, dixido de carbono e umidade. SeguranII - Veneno violento! Cicloexano F6rmula e maUlJ molecular - C6 Hu - 84,16 Oelcri6o - Lquido Impido, incolor, voltil, de odor caracterstico (semelhante ao da gasolina). Carwcterfsticas ffsicas - Ponto de ebulio: aproximadamente 80C. Densidade: aproximadamente 0,18. fndice de refrao (nO): 1,426 a 1,421. Con.rva6o - Recipientes bem fechados. SeguranII - Inflamvel. Citrato de l6dio Citrato trissdico.

cirbonato de ltio
Frmula li maSA molacular - UaCO, - 13,89

Coiltm, no mnimo, 98,5 por cento, calculado em base seca. Ollscrilo - P branco, leve, inodoro. Con.rvalo - Recipientes bem fechados.
EII'flCifCBIo -

Carbouto

de l16dioanidro Na2CO, -105,99

Frmula e masu molacular-

Sinonfmia -

Frmula

e massa molecular
-

C,HsNasO,

2H.0-

Cloreto de clcio
F6rmula e massa molecular - CaCl 2H. O - 147,02 Especificalo - Contm, no mnimo, 96,0 por cento (p{p). Descrio - P cristalino ou grnulos brancos, inodoro,

294,10
Especificalo

Contm, no mnimo, 99,0 por cento (p{p), calculado sobre a substncia dessecada. Descrilo - Cristais ou p cristalino branco, inodoro, de sabor salgado, refrescante. Deliqescente. Conservalo - Recipientes bem fechados.

de sabor salgado e fortemente amargo. Higroscpico; Conservao - Recipientes bem fechados. Armazenagem - Proteger da umidade. Cloreto de clcio, anidro
Frmula e massa molecular - CaCl. - 110,99 Especificalo - Contm, no mnimo, 98,0 por cento

Cioreto cobaltoao
Frmula e massa molecular - CoCI 6H. O - 237,93 Especificalo - Contm, no mnimo, 99,0 por cento (p{p). Descrio - P cristalino ou cristais vermelho-violceos. Conserva/io - Recipientes bem fechados.

(p{p), calculado sobre a substncia dessecada.

Descrilo - Grnulos brancos, secos. Deliqescente. Conservao - Recipientes hermticos. Armazenagem - Proteger da umidade. Categoria - Dessecante.

Cloreto cobaltoso SR Especificao - Contm 6,5 g, adicionados de 70 ml de cido clordrico SR, em gua a 100 ml. Conservao - Recipientes bem fechados. Cloreto de amnia
Frmula e massa molecular - NH4 CI - 53,49 Especificalo - Contm, no mnimo, 99,5 por cento

Cloreto de clcio SR (aproximadamente 0,5 M) E,pecificao - Contm 7,35 g de cloreto de clcio em gua a 100,0 ml. Conservao - Recipientes bem fechados. Cloreto de clcio, lIOIuio'O,025 M EspflCificalo - Contm 0,367 g de cloreto de clcio em gua a 100 mI. Con.rvao - Recipientes bem fechados. Cloreto de mapsio
F6rmula e massa molecular - MgCl. 6H. O - 203,30 ElPecificeJo - Contm, no mnimo, 98,0 por cento

(p{p), calculado sobre a substncia dessecada. Descrilo - Cristais incolores ou p cristalino branco, inodoro, de sabor salgado. Higroscpico. Caracterfsticas fl,icas - Sublima sem fundir a 338C. ConservaiJo - Recipientes hermticos. Armazenagtlm - Proteger da umidade. Cloreto de amnio SR (aproximadamente 2 M) Especificalo - Contm 10,7 g em gua a 100 mI. ConservaJo - Recipientes bem fechados. Cloreto de brio
F6rmula e massa molecular - BaCl 2H. O - 244,27. Especificalo - Contm, no mnimo, 99,0 por cento (P{p). Descrilo - Cristais incolores ou p cristalino branco. Con.rvalo - Recipientes bem fechados. Segurana - Txico.

(p{p).
De,cri'o -

Cristais incolores, de sabor amargo. Higros-

cpico.
ConservaJo - Recipientes bem fechados. Armazenagem - Proteger da umidade.

Cloreto de brio SR E,pecificalo - Contm 10,0 g em gua a 100 ml. Con.rvaJo - Recipientes bem fechados. Cloreto de beazalcnio
F6rmula e massa molecular -

Cloreto de mercrio(Il) Sinonlmia - Cloreto mercrico. Frmuku masa molecular - HgO. - 271,50 Especificalo - Contm, no mnimo, 99,0 por cento (p{p), calculado sobre a substncia dessecada. Descri'o - Cristais incolores ou p cristalino branco ou quase branco, ou massa cristalizada; inodoro. Caracterl,tica, fl,ica, - Ponto de fuso: 277 C (volatiliza como tal a aproximadamente 300C). Con.rvaJo - Recipientes bem fechados. Armazenagem - Proteger da luz. SeguranII- Irritante. Custico. Txico. Poluente. Informalo adicionalAntdoto: dimercaprol. Cloreto de metileno Sinonlmia - Diclorometano. F6rmula a m_ molecular - CH. CI. - 84,94 Descrilo - Lquido J{mpido, incolor, voltil, de odor semelhante ao do clorofrmio. Caracter(,ticas f(sica, - Ponto de ebulio: aproximadamente 40C. Densidade: aproximadamente 1,32. Indice de refrao (n20):I,424. Con.rva60 - Recipientes bem fechados. Armazenagem - Proteger da luz. SeguranII- Irritante. Txico. Cloreto de p-"dio
Frmula e ma molecul.r - PdCl. - 177,31 EspecificeJo - Contm, no mnimo, 59,0 por cento

(C. HsCH.N(CHs)2 RJ+ CI - 360 (mdia) Camposico Qu(mica - Mistura de cloretos de alquildimetilbenzilamnio, em que R representa alquila, a partir de n-C.H17 e homlogos superiores: n-C12H2S' n-C14H., e n-e16Hu+ em maior proporo. E,pecificalo - Contm, no mnimo, 95,0 por cento em relao mistura dessecada. Contedo dos homlogos alquados presentes, em relao ao total calculado sobre base seca: n-e12H2S: no mnimo 40,0 por cento (p{p); n-e14H.,: no mnimo 10,0 por cento (p{p); a soma dos dois homlogos acima: no mnimo 70,0 por cento P amorfo ou maSsa gelatinosa branca ou branco-amarelada, de odor aromtico e de sabor amargo. ConserveJo - Recipientes bem fechados. Armazenagem - Proteger da luz e do ar. Catllf/Oria - Desinfetante. Detergente. Conservante.
(p{p). DescriJo -

(p{p) em paldio.

Descrio - P cristalino marrom. CBracterlsticas f{sicas - A altas temperaturas

decompe-

se em paldio e cloro. Conservao - Recipientes bem fechados. Segurana - Txico. aoreto de potssio
Frmula e massa mofecular - Ka - 74,55 Espacifica60 - Contm, no mnimo, 99,0 por cento

Cloreto mercrico SR (aproximadamente 0,2 M) Especificao - Contm 5,4 g em gua a 100 mL ConIBrva60 - Recipientes bem fechados. Segurana - Txico. Poluente. Ooridrato de hidroxilamina
Frmula e maua molecular - NH. CIO - 69,49 Espacificalo - Contm, no mnimo, 96,0 por cento (p/p). Descrilo - Cristais incolores ou p cristalino branco. CBrsctfJr{sticas f(sicas - Ponto de fuso: aproxima-

(p/p), calculado sobre a substncia dessecada. Descrio - Cristais incolores ou p cristalino branco, inodoro, de sabor salino, fracamente amargo. ConlBrvaio - Recipientes bem fechados. Ooreto de potssio, soluo saturada
Especifica60 - Contm 17,0 g em gua a 50 ml. ConlBrvao - Recipientes bem fechados.

damente 151C.
ConIBrvalo - Recipientes bem fechados. Armazenagem - Proteger da umidade.

Cloreto de sdio Frmula e massa molecular - NaCI - 58,44 Espacifica60 - Contm, no mnimo, 99,0 por cento (p/p) calculado sobre a substncia dessecada. Descrio - Cristais incolores ou p cristalino branco, inodoro, de sabor salino. ConlBrva8o - Recipientes bem fechados. InformalJo adicional - Sal isento de aditivo. Ooreto de sdio 0,9 por cento (P/V) - Cioreto de sdio aproximadamente 0,15 M, soluo de c1oreto de sdio isotnica, soluo fisiolgica, soluo salina. DelCfio - Contm 9,0 g de cloreto de sdio em gua a 1000 ml. Conservalo - Recipientes bem fechados.
Sinon{mia

aoridrato de hidroxilamina SR Prsp.ralo - Dissolver 5,0 g em 5,0 ml de gua quente. Completar a 100 mI com etanol. Conservalo - Recipientes bem fechados. Segurana - Inflamvel. aorobenzeno
Frmula e meISB mofecul.r - C.H.CI112,56 Descri60 - Lquido incolor, refringente, de odor carac-

terstico.
f{sicas - Ponto de ebulio: aproximadamente 132C. Densidade: aproximadamente 1,11. {ndice de refrao (n20): 1,5251. Conservao - Recipientes bem fechados. Seguf'Sna - Txico. Inflamvel. Caracter(sticas

Cobaltinitrito de sdio FrmuM e f118ISlI molecular - Na, CoN. 012 Descrio - P cristalino amarelo-alaranjado. Con.rvaio - Recipientes bem fechados. Cobre

403,94

Ooreto estanoso
Frmula e massa molecular - SnCI2 2H2 O - 225,63 Especifica60 - Contm, no mnimo, 97,0 por cento

(p/p).
Descri60 - Cristais incolores ou quase incolores. ConIBrvalo - Recipientes bem fechados. Armazenagem - Proteger do ar e do calor.

Frmula a m_ atmica - Cu - 63,546. Descrilo - Lmina, fio, p ou fragmento, de cor averme-

lhada e lustro metlico. Conservao - Recipientes no metlicos. Cobre SRA - 1 mllml Especificalo - Contm 1,000 g de cobre dissolvido no menor volume possvel de cido ntrico a 50,0 por cento (VIV). Completar 0010 cido ntrico a 1,0 por cento (VIV) a 1000 mI. Conservao - Recipientes bem fechados, inertes (tipo polietileno). o-Cresol
Sinon(mia - 2-Metilfenol. Frmula e masss molecular - C1H. O - 108,14. Descrilo - Lquido ou slido, incolor a amarelo-marrom,

estanoso SR (fortemente cido) Epecificalo - Contm 10,0 g em cido clordrico a 100 mI. ConIBrvao - Preparar no momento de uso. Armazenagem - Proteger da luz. Ooreto frrico
Frmula e massa molecular - FeCI, 6H2 O - 270,30 Espacificaio - Contm 99,0 por cento (p/p) calculado

aoreto

sobre a substncia dessecada. - Massa cristalizada, arnarelo-alaranjada ou marron. Deliqescente. CBracter{sticas f(sicas - Ponto de fuso: aproximadamente 37C. Conservalo - Recipientes bem fechados. Armazenagem - Proteger da luz.
Descrilo

Cloreto frrico SR (aproximadamente 0,4 M) Espacifica60 - Contm 10,5 g em gua a 100 mI. ConlBrveilo - Recipientes bem fechados. Armazenegem - Proteger da luz.

que se cora pela luz e na presena de oxignio; de odor fenlico. Deliqescente. CBr.cter(sticas f{,ica' - Ponto de fuso: aproximadamente 30C. Ponto de ebulio: aproximadamente 191C. Densidade: aproximadamente 1,03. {ndice de refrao (n2): 1,540-1,550. Conservao - Recipientes hermticos. Armazenagem - Proteger da luz, umidade e oxignio. Segurana - Irritante. Custico. Txico. CBttlf/oritJ - Desinfetante.

Cromato de potssio
Frmula e massa molecular - K~CrO4 - 194,19 Especifica60 - Contm, no mnimo, 99,0 por cento

Difenilcarbazida
Frmula e massa molecular - C13 H'4N40 - 242,28 Dflscri60 - P cristalino branco; torna-se rseo pela

(p/p), calculado sobre a substncia dessecada.

Descri60 - Cristais ou p cristalino amarelo. ConSllrvaio - Recipientes bem fechados. Segurana - Oxidante. Poluente.

exposio ao ar.
CarBCtersticas ffsicas - Faixa de fuso: Conserva60 - Recipientes hermticos. Armazenagem - Proteger da luz e do ar.

168-171 oCo

Cromato de potssio 8R
Especifica60 - Contm 10,0 g em gua a 100 m1. ConSllrvao - Recipientes bem fechados. Segurana - Oxidante. Poluente.

Dextrose - ver Glicose Dextrose 0,1% (P/V) - ver Glicose 0,1% (P/V). Diacetato de Clorexutma Usar acetato de c1orexidina. Dicloreto de etileno
F6rmula' e massa molecular -' C. H4 C1~ - 98,96 Descrilo - Lquido lmpido, incolor, voltil, de odor

Difenilcarbazida SR ' - Contm 1,0 g de difenilcarbazida em etanol a 100 ml. Conservaio - Recipientes bem fechados. Armazenagem - Proteger da luz. Segurana - Inflamvel.
Especificeiio

Difenilcarbazona
F6rmula e massa molecular - Cu Hu N4 0- 240,26 Descrio - Cristais de cor alaranjado-avermelhada. Caractersticas fsicas - .ponto de fuso: aproximada-

mente 157C (decomposio).

Conservaio - Recipientes bem fechados.

semelhante ao do clorofrmio. ffsicas - Ponto de ebulio: aproximadamente 83 C. Densidade: aproximadamente 1,25. Indice de refrao (nO): 1,444. Conservao - Recipientes bem fechados. Segurana - Irritante. Txico. Inflamvel.
Caractersticas

p-Dimetilaminobenzaldedo
F6rmula fi massa molecular - C.H" NO - 149,19 Descriio - P cristalino, branco a fracamente amarelado. Caractersticas fsicas - Ponto de fuso: aproximadamente

74'C.
ConSllrvalo - Recipientes bem fechados. Armazsnagem - Proteger da luz. Informao adicional - Reagente de Ehrlich.

2,6-Dicloroindofenol

sdico

Sinonlmia - 2,6-Diclorofenolindofenol sdico. Frmula fi massa moleculflr - Cu H, a:, NNaO~ - 290,08. Dflscrilo - P verde escuro. A soluo aquosa apresenta

cor azul intensa; a acidificao altera a cor para vermelho. Conservao - Recipientes bem fechados. Informao adicional - Dessecar sobre a mistura cal/ hidrxido de sdio. Dicromato de potssio
F6rmula e massa molecular - K~Cr~ O. - 294,18 Especifica60 - Contrn, no mnimo, 99,8 por cento

p-Dirnetilaminobenzaldedo 5 por cento (p/p) em cido clordrico Espacifica'o - Contm 1,6 g em cido clordrico a 30 m1. Conservao - Preparar no momento de uso. <;egurana - Corrosivo. p-Dimetilaminobenzaldedo 0,1 por cento (p/V) em etanol Especifica60 - Contm 0,05 g em etanol a 50 ml. ConSllrva60 - Recipientes bem fechados. ArmaZfmagsm - Proteger da luz. Segurana - Inflamvel. Dimetilfonnamida
F6rmuls emallllmoleculllr-CsH.NO - 73,09 Descri60 - Lquido lmpido, incolor, oom odor seme-

(p/p), calculado sobre a substncia dessecada.

Dflscrilo - Cristais vermelho-alaranjados, inodoro. Conservallo - Recipientes bem fechados. Segurana - Custico. Oxidante. Poluente.

Dicromato de potisio 8ft

Especifica60 - Contm 5,0 g em gua a 100 m1. Conserva60 - Recipientes bem fechados. Segurana - Custico. Oxidante. Poluente.

lhante ao de aminas.
fsiclIs - Ponto de ebulio: aproximadamente 153 C. Densidade: aproximadamente 0,95. Indice de refrao (n~): 1,428. ConSllrvao - Recipientes bem fechados. Segurana - Irritante. Txico. Caracterl,tica,

Dietilamina
F6rmula e n?flssamolecular - C4 H" N - 73,14 Descri60 - Lquido Impido, incolor, voltil, de odor

amoniacal. Reao fortemente alcalina. fsicas - Faixa de ebulio: 55-58 "C. ndice de refrao (n20): 1,386. Densidade: aproximadamente 6,702. Conservao - Recipientes bem fechados. Segurana - Irritante. Inflamvel.
Caractersticas

Dimetilsulfxido (DM80)
Frmula e masu molecular - C~H, OS - 78,13 Descri60 - Lquido incolor e inodoro. Higroscpico. Caractersticas ff,'cas - Ponto de ebulio: aproxima-

Dietilditiocarbamato

de prata

F6rmula e massa molacular - C5H,oAgNS~ - 256,13 ,Descrilo - P amarelo claro a amarelo acinzentado. Conserva60 - Recipientes bem fechados.

Dietilditiocarbamato

de prata SR

damente 189 C. Densidade: aproximadamente Indice de refrao (n~D): 1,479. ConSllrva60 - Recipientes bem fechados. ArmllZllnagem ..Proteger da umidade. Segurana - Irritante. Dioxana
F6rmulll e massa molsculllr - C4H. O~ - 88,11

1,10.

Espeifica60 - Contm 0,25 g em piridina a 50 rril. Conservallo - Preparar para uso imediato. Segurana - Txico.

DeICrilo - Lquido lmpido, incolor, com odor semelhante ao de ter. Cancttlrl,tica, f(,ica, - Ponto de ebulio: aproximadamente 101C. Densidade: aproximadamente 1,0l Indice de refrao (n2D): 1,421-1,424. Conlltlrvalo - Recipientes bem fechados. Segurana - Irritante. Txico. Inflamvel.

E,tabilidade - Preparar no momento do uso. Segurana - Txico.

Sinonlmia F6rmula

Edetato dissdico - EDTA dissdico.

11

malla molacular - C1oH14 N2Na2 O.' 2H2 0-

372,24
- Contm, no mnimo, 97,0 por cento (p/p), calculado sobre a substncia dessecada. Da,crilo - P cristalino branco, de sabor salino fraco. Conservallo - Recipientes bem fechados. Categoria - Quelante. E,pseificao

Dixido de enxofre Sinonlmill - Anidrido sulfuroso. F6rmulll e massa molecular - S02 - 64,06 E,pseificalo - Contm, no mnimo, 97,0 por cento (V/V) Descrio - Gs incolor, de odor caracterstico, sufocante. Conlltlflllllo - Em cilindros pressurizados. Ssgurana -Irritante. Txico. Dixido de manpns
F6rmula ti mall8 moltICular - Mn02 - 86,94 DeICrilo - P fmo preto ou marrom escuro. ConlltlfVlllo - Em recipientes bem fechados. ArlTlllZtlnBgtlm - Proteger do calor. SsguranllOxidante enrgico.

Edetato dissdico, soluo 0,05 M Contm 1,861 g, adicionados de 10 ml de hidrxido de IldioM, em g~ a 100,0 ml. Conservao - Recipientes bem fechados.
Espaeificallo -

Estearato de metila
F6rmullla DaICrilo ma.a molecular - C1,H,. O2 - 298,50 - Cristais brancos ou massa cristalina branca ou f,.,ica, - Ponto de fuso: aproximadamente - Recipientes bem fechados.

amarelo-plida.
Caracttlrl,tica,

38C.
Con,arvallo

Ditiol
SinonfmB 1,2-Dimercapto-4-metilbenzeno; tolueno-3,4-ditiol. F6rmulll e mllSSlI moltICular - C7 H. S2 - 156,27 De,crilo - Cristais. ClIraettlr/,ticlII fI,iclII - Ponto de fuso: 31 C.

Ditiol SR
E$pfICificalo - Contm 0,5 por cento (P/V) em etanol. E,t8bilidBda - Preparar no momento de uso. Ssgurana - Inflamvel.

Eatolato de eritromicina F6rmulll e malla mol6cular - Cu H" NO S - 1056,43. Car:tarl,ticas fI,iCll' - Faixa de fuso: 135-138 oCo Conlltlrvalo - Recipientes hermticos. ArlTlllZtlnagem - Proteger da luz e calor. Categoria - Antibitico. Estrncio SRA - 1 ml/ml - Contm 1,685 g de carbonato de estrncio em 10,0 ml de cido clordrico a 50,0 por cento (V/V). Completar com gua a 1000 ml. Conlltlrvao - Recipientes bem fechados, inertes (tipo polietileno ).
Espselflcalo

Ditizona
Sinonlmia - Difeniltiocarbazona. F6rmulll elTlll$$ll molecular - C13 H12 N4 S - 256,32 Espseificalo - Contm, no mnimo, 98,0 por cento

(p/p).
DeICrilo - P cristalino marrom escuro. Caracttlrl,ticlII f/,ica, - Ponto de fuso: 168C (decom-

Etanol
Sinonmia - lcool etlico. F6rmullla massa molecular - C2 H, O - 46,07 E,pscificallo - Contm, no mnimo 96,0 por cento

posio).
Con.rvalo - Recipientes bem fechados.

(V/V).
Descrilo -

Lquido lmpido, incolor, voltil, de odor

DitizonaSR Contm 0,05 por cento (p/V) em tetracloreto de carbono. D81Crilo - Para uso, diluir com tetracloreto de carbono na proporo 1 :30. ConlltlrvB6o - Recipientes hermticos. ArlTlllZtlfllJflfNTl - Proteger do calor. Ssgurana- Veneno!
E$pBCifiCBlo -

caracterstico.
f,.,icas - Ponto de ebulio: aproximadamente 78C. Densidade: 0,803 a 0,808. Conlltlrvalo - Recipientes bem fechados. ArlTlllZtlntlfl/lm - Proteger do calor. Segurana - Txico. Inflamve. Caracttlrl,tica,

Etanol absoluto
Sinonlmia - lcool anidro. F6rmuls e mS$$lI motecular - C2 H, O - 46,07 Espseificao - Contm, no mnimo, 99,5 por cento

Ditizou 0,025 por cento ~/V) em etanol

ElPlflcalo - Contm 25,0 mg em etanol a 100 mL Conlltlrvalo - Recipientes bem fechados. E,tllbilidBde - Preparar no momento do uso. Ssgurana - Inflamvel.

(V/V).
- Lquido lmpido, incolor, voltil, de odor caracterstico. Higroscpico. Caracttlrl,tica, f,icas - Ponto de ebulio: 78-79C. Densidade: 0,790 a 0,794. Indice de refra'o: (n2D): 1,361. Conlltlrvao - Recipientes hermticos. ArlTlllZtlnsgem - Proteger do calor e da umidade. Ssgurana - Txico. Inflamvel. Descrilo

Espscificalo

Ditizona 0,002 por cento ~/V) em tetracloreto de carbono Contm 2,0 mg em tetracloreto de carbono a 100 mL Conlltlrvao - Recipientes bem fechados.

tter etalico
Sinonlmia - ter sulfrico. F6rmula a massa mol"ular - C.H1oO- 74,12 Espacificlllo - Contm, no mnimo, 96,0 por cento (V/V). Dsscri60 - Lquido Impido, mcolor, muito voltil, de

1,11. Ponto de ebulio: aproximadamente fndice de refrao (n' 1,534. Con.rvlllo - Recipientes bem fechados. CIItegoria - Con~rvante.

O):

245C.

Ferricianeto de potssio
F6rmulll B mll.a moleculllr - K.Fe(CN)6 - 329,25 EspecificlIlo - Contm, no mnimo, 99,9 por cento

odor caracterstico, pungente. Higroscpico. CllractSr/stiClls flsicllS - Ponto de ebulio: aproximadamente 35C. Densidade: aproximadamente 0,715. fndice de refrao (nI); 1,355. Conservlllo - Recipientes bem fechados. ArmllzenBf/fIfTI - Proteger da luz e do calor. (no exceder al50C). Clltegoria - Anestsico. Segurana - Inflamvel. Risco de exploso. ter de petrleo - Benzina. - Lquido lmpido, incolor, voltil, de odor caracterstico. No fluorescente. CIIracter{sticas flsiClls - Faixa de ebulio: 40-60C. Densidade: 0,630 a 0,656. Conservll6o - Recipientes bem fechados. ArmazenBf/fIfTI- Proteger do calor. Seguf7lna - Inflamvel.
Sinonlmia Dsscri60

(P!p), calculado sobre a substncia dessecada.

Descrilo - Cristais vermelhos. Conservlllo - Recipientes bem fechados. Armllzenegem - Proteger da luz.

F~ianetodepotssioSR
Especificlllo - Contm 5,0 g em gua a 100 mI. ConserVIIIo - Preparar no momento de uso. ArmazenB(Jtlm - Proteger da luz.

Ferrocianeto de potssio
F6rmula B m_1I molecular -

K. Fe(CN), .3H. O -

422,39
- Contm, no mnimo, 99,0 por cento (P/p), calculado sobre a substncia dessecada. De.crilo - Cristais transparentes ou p cristalino, amarelo. Eflorescente. Torna-se anidro a 100 oCo Con.flllllo - Recipientes bem fechados. Especificalo

Fenol
F6rmula s mllSSBmolecular - C6 H6 O - 94,11 EspecifiClllo - Contm, no mnimo, 98,0 por cento

Ferrocianeto de potsio SR (aproximadamente

0,125 M)

Especificalo - Contm 5,3 g em gua a 100 mI. ConserVIIIo - Preparar no momento de uso.

(P!p). cristalina ou cristais incolores ou fracamente rseos ou amarelados, de odor caracterstico. Deliqescente. CIIracter{stiC/lS f{sicas - Ponto de fuso: aproximadamente 43C. Ponto de ebulio: aproximadamente 180C. Conservlllo - Recipientes hermticos. ArmazenBf/fIfTI - Proteger da luz e do calor. RotulB(Jtlm - Deve indicar o nome e a quantidade do estabilizante. Seguranll- Custico. Txico. Clltegoria - Desinfetante. Fenolfta&ena
F6rmula s maSSB molscular EspecifiClllo - C'OH140. Dsscri60 - Massa

Fluoreto de clcio
F6rmula B mllSSBmolscular - CaF. - 78,08. DtllCrilo - Cristais ou p branco. Conservsio - Recipientes bem fechados.

Formaldedo, IOluio
Sinonlmia - Formol, formalina. F6rmula ti massa mol"uler - CH. O - 30,03 .. Esp"ifica6o - Contm, no mnimo, 34,0 por cento

(P/V) e, no mximo, 37,0 por cento (P/V).

/!)tlscrilo - Lquido incolor, lmpido; vapores irritantes. CIIf7lcterl,tica, fl,icss Densidade: aproximadamente

1,08. fndice de refrao (nO): 1,374.

- 318,33

- Contm, no mnimo, 97,0 por cento (p!p), calculado sobre a substncia dessecada. DBscrilo - P cristalino ou amorfo, branco ou levemente amarelado. Inodoro. CllracterlsticlIs flsicas - Ponto de fuso: aproximadamente 258C. Conservlllo - Recipientes bem fechados. Clltegoria - Indicador cido-base.

Conservlllo - Recipientes bem fechados. Armazef1ll(/tlfTl - Proteger da 'luz, do ar e de temperatura

abaixo de 9C.
E,tllbilidlldtl - Pode conter metanol como estabilizante. $tIguf7lna - Irritante. Txico. Clltegoria - Desinfetante.

Formamida
F6rmu1ll ti ma molscular - CH. NO - 45,04 Dtlscrilo - Lquido Impido, incolor, viscoso, de odor

Fenolftalena 0,1 por cento (p/V) Especificalo - Contm 0,1 g em etanol 80 por cento (V/V) a 100 ml. Conservs60 - Recipientes bem fechados. Seguf7lna - Inflamvel. InformsiolldicionlllPara preparao de papel indicador. 2-Fenoxietanol
F6rmula B massa molscular - C. H1oO. - 138,17 DBSCrilo - Lquido incolor, fracamente viscoso, de odor

amoniacal fraco.
CIIf7lcterlsticss flsicas - Ponto de ebulio: aproximadamente 210 oCo Densidade: aproximadamente 1,13. rndice de refrao (n'o): 1,447. Conservaio - Recipientes hermticos. ArmazenllgtlfTl - Proteger da umidade. Seguf7lna - Irritante.

aromtico fraco e de sabor ardente. Caf7lcterlrticas flsicas - Densidade:

aproximadamente

FOIfato de potaio monobico - Bifosfato de potssio, ddrogenofosfato de potssio, fosfato cido de potssio, fosfato monopotssico. fosfato potssico de Srensen. F6rmula s maSSBmolecul.r - KH2PO. - 136,09
Sinonlmia

E,pecificaio

- Contm, no mlmmo, 98,0 por cento, calculado sobre a substncia dessecada. De,crio - Cristais incolores ou p cristalino branco. Con!t1rvaio - Recipientes bem fechados.

GalactOIe 0,1 por cento (p/V)

Especificao - Contm 0,1 g em piridina a 100 ml. Con!t1rvao - Recipientes bem fechados. Armazenll(/Bm - Proteger do calor. Segurana - Txico.

Fosfato equimolal 0,05 M - Contm 3,53 g de fosfato de sdio dibsico (NaaHP04) e 3,39 g de fosfato de potssio rnonobsico (KH. P04) em gua a 1000 ml. Con!t1rvao - Recipientes fechados.
E,pecifica6o

Gelatina
- f mistura de protenas hidrossolveis obtidas por extrao de material contendo colgeno. Descrio - P, grnulos, escamas ou folhas transparentes, brilhantes, incolores ou levemente amarelados. Higrosc6pico, de odor caracterstico e sabor pouco pronunciado. Con!t1rvao - Recipientes bem fechados. Armazen8flB"' - Proteger do calor e umidade. Especificallo

Fosfato de sdio dib.c:o ddratado

Frmula e ma$$Bmo/ecu/ar - NaaHP04 2H.O - 178,00 Especifica60 - Contm, no mnimo, 99,5 por cento

(p/p), calculado sobre a substncia dessecada.

Descri/lo - Cristais incolores. Con!t1rvalo - Recipientes bem fechados. Armazenagem - Proteger do calor e da umidade.

Glicerol
Frmu/a e massa mo/ecu/ar - C3 H. 03 - 92,09 Especificeo - Contm, no mnimo, 97,0 por cento (p/p). Descrilo - Lquido viscoso, lmpido, incolor, inodoro,

Fosfato de sdio dibaico dodecaidratado Frmu/a e ma"a mo/eeu/ar - Na. HP04 .12HaO 358,08 Especificalo - Contm, no mnimo, 98,5 por cento (p/p), calculado sobre a substncia dessecada. De,crio - Cristais ou grnulos incolores, transparentes, inodoros, de sabor salino, fracamente alcalino. Eflorescente. Con!t1rvao - Recipientes bem fechados. Armazenagem - Proteger do calor. Fose.to de sdio dibico dodecaidratado SR E,pecifica'o - Contm 9,0 g em gua a 100 ml. Con!t1rlfe/lo - Recipientes bem fechados. Fose.to de sdio triblico dodecakhato
Sinon/mia - Fosfato tribsico sdico, fosfato trissdico. Frmu/II li m_ molecu/llr - Na3P04 .12HaO - 380,12 DlIscrilo - Cristais incolores ou brancos. Eflorescente. ClIrllctllr{,ticll$ f{,ica, - Funde a 75 C por aquecimento

higroscpico, de sabor adocicado. ClIfllcterstiClls f{sicas - Densidade: 1,255-1,263. Indice de refrao (nO): 1,470-1,474. Conservao - Recipientes hermticos. Armazenagem - Proteger de oxidantes. Glicose
Sinonmill - Dextrose. Frmu/II li massa mo/ecu/llr - C, H1 0, - 180,16 Descrio - P cristalino branco, inodoro, sabor adoci-

cado.
fsiClls Poder rotatrio + 52,5 a + 53,0. Conltlrve6o - Recipientes bem fechados. ClIfllctllrsticas

especfico

la]a 10%:

Glicose 0,1 % (P/V)

E,pecificslo - Contm 0,1 g em piridina a 100 ml. ConltlrllB6o - Recipientes bem fechados. - Proteger do calor. Segurana - Txico. Armszen8flB"'

rpido.
Conltlflmo - Recipientes bem fechados. Armllzllnll(/Bm - Proteger do calor.

Frutole
Sinon{mis - .B-D-Frutose, levulose. - C, Hu 0, - 180,16 Frmu/II s mll$$B mo/ecu"'r Especlfica/lo - Contm,

no mnimo, 98,0 por cento, calculado sobre a substncia dessecada. Dsscriio - P cristalino branco, inodoro, de forte sabor adocidado. ClIfllctllr(,ticss f(siCIIS Poder rotatrio especfico (al~10%: -91,0 a -93,5 (aps uma hora de preparo da soluo). Ponto de fuso com decomposio: aproximadamente 103 C. Conservalo - Recipientes bem fechados. Frutole 0,1 p~ cento (pIV) Especifica/lo - Contm 0,1 g em piridina a 100 ml. Con!t1rlfao - Recipientes bem fechados. Segufllna - Txico. Galactole
Frmu/a e maslB mo/scu/ar - C,HuO, - 180,16 DlIscrio - P branco cristalino. ClIractllrsticas flsicas - Ponto de fuso: 167C.

Heparina sdica Descrio - Consiste em mistura de princlplOs ativos, possuindo a propriedade de prolongar o tempo de coagulao do sangue. Obtida, normalmente, de mucosa intestinal, pulmes ou outro tecido adequado de mamferos domsticos usados para alimento do homem. Conservao - Recipientes hermticos. Rotu/agem - A rotulagem deve indicar o orgao e a espcie de origem. A potncia deve ser indicada em V.I. ClItegoria - Anticoagulante. Heptano
Especificalo

bonetos n-heptano.
Descri60 -

- Contm usualmente mistuta de hidrocarfrao de petrleo - com predomnio de

Poder

rotatrio especfico (alo 10%: + 80,2. Con!t1rva6o - Recipientes bem fechados.

Lquido lmpido, incolor, voltil, altamente inflamvel, de odor caracterstico. ClIracterlstiClls flsicas - Faixa de ebulio: 95 a 99C. Densidade: aproximadamente 0,69. Conltlrvalo - Recipientes hermticos. Armazenagem - Proteger do calor. Manter distante de chama/ centelha. Ssgurana - Irritante do trato respiratrio. Inflamvel.

n-Heptano
Frmula e massa molacular - C7H16 - 100,20 Especificalo - Principal componente de heptano. Caraet8rfsticas flsicas - Ponto de ebulio: 98,4 oCoDen-

Hidrxido de c:lcio SR
EspIJCifica'o - Contm 0,15 g em gua isenta de dixido

de carbono a 100 ml (soluo saturada).

ConSllrvaltJ - Recipientes bem fechados. Estabilidade - Preparar no momento de uso. ArmaZfJnagam - Proteger do dixido de carbono. Catagoria - Adstringente.

sidade: 0,684. Indice de refrao (nD"): 1,3855. Hexano

EspIJCificaio - Contm usualmente mistura de ismeros

de C, H14, predominantemente n -hexano e metilciclopentano (C,H ). Descri60 - Lquido Impido, incolor, voltil, altamente inflamvel, de odor caracterstico. Caracterlsticas flsicas - Faixa de ebulio: 67 a 70C. Densidade: 0,66. ConSllrvao - Recipientes hermticos. Armaunagam - Proteger do calor. Manter distante de chama/centelha. Sagurana ~ 1rritante do trato respiratrio. Inflamvel.

Hidrxido de clcio, saturado a 25C - Adicionar cerca de I g de hidrxido de clcio a 50 ml de gua. Agitar e deixar decantar a 25C. Usar o sobrenadante. ConSllrvallo - Recipientes bem fechados e apropridos. Segurana - Custico. Informalo adicional - Calibrao de medidor de pH.
Prepara60

Hidrxido de potQsio
Frmula e massa molacular - KOH - 56,11 EspIJCificao - Contm. no mnimo, 85,0 por cento

n-Hexano
Frmula e massa molecular - C, H - 86,18 Especificalo - Principal componente de ter de petr-

leo e de hexano. Descri60 - Lquido lmpido, voltil, de odor semelhante ao do petrleo. Caracterlsticas flsicas - Ponto de ebulio: 69C. Densidade: 0,66. Indice de refrao (n'i: 1,375. ConSllrva60 - Recipientes hermticos. Armazenagem - Proteger do calor. Manter distante de chama/ centelha. Saguflma - Inflamvel. Hidrato de cloral
Sinonlmia - Cloral hidratado. Frmula e massa molacular - C. Ha Cla O. - 165,40 EspIJCificalo - Contm, no mnimo, 98.5 por cento

(P/p), calculado como KOH, e, no mximo, 3,5 por cento de K.CO . Descri60 :.. Massa branca, dura, seca, de estrutura cristalina, inodora, muito higroscpica e vida por CO. Liquefaz-se ao ar. Apresentado nas formas de lentilhas, cilindros ou escamas. ConSllrva//o - Recipientes hermticos, inertes. Armazllnagem - Proteger da umidade e do dixido de carbono. Segurana - Muito custico. Hidrxido de potssio alcolico 0,5 M - Dissolver 34,04 g de hidrxido de potssio em 20 ml de gua; completar a 1000 ml com lcool (isento de aldedo). Repouso de 24 horas em recipientes hermticos. Decantar. Usar o sobrenadante lmpido. ConSllrva60 - Recipientes hermticos. Armazenagem - Proteger da luz.
Prepara'o

(p/p).
- Cristais transparentes, incolores, de odor pungente caracterstico e de sabor picante e fracamente amargo. Deliqescente. Caractersticas f(sicas - Ponto de fuso: 57C. ConSllrva60 - Recipientes bem fechados. Armaunagem - Proteger da luz e do calor. $llgurana - 1rritante pele. Catf1{Joria - Sedativo, hipntico. Descri'o Preparelo

Hidrxido de potssio aproximadamente 0,5 M - Dissolver 3,0 g em S ml de gua e completar a 100 ml com etanol, isento de aldedos. ConSllrva6o - Preparar para consumo imediato.

Hidlxido de sdio
Sincmlmia - Soda custica. Frmula e massa molecular - NaOH - 40,00 EspIJCifica60 - Contm, no mnir;.o, 95,0 por cento

Hidrxido de amnio Usar amnia, soluo concentrada. Hidrxido de amnio 6 M - Contm 400 ml de soluo concentrada de amnia em gua a 1000 ml. ConSllrvalo - Recipientes bem fechados. Armazenllf/fHT1- Proteger do calor.
Especifica60

(p/p) de lcali total, calculado como NaOH, e, no mximo, 3,0 por cento (p/p) de Na.CO . Descri60 - Massa dura, de estrutura cristalina, branca~ sob a forma de pedaos, lentilhas e bastonetes. Deliqescente e absorve dixido de carbono. ConSllrva6o - Recipientes hermticos. Armazenagem - Proteger da umidade e do dixido de carbono. Segurana - Custico, corrosivo. Hidrxido de sdio SR Espscificalo - Contm 8,0 por cento (p/V) de NaOH em gua. Consef'tlalo - Vide hidrxido de sdio M. Hidrxido de ldio M EspIJCificalo - Contm 40,0 g em gua isenta de dixido de 'carbono a 1 000 ml. ConSllrva6o - Recipientes de vidro lcali-resistentes ou de polietileno.

Hidrxido de clcio
Frmula e massa molacular - Ca(OH). - 74,09 EspIJCificao - Contm, no mnimo, 93,0 por cento (p/p). Descri'o - P ou lP'nulos.brancos moles, inodoros. ConSllrva60 - Recipientes bem fechados. Armazenagam - Proteger do dixido de carbono.

Hidrxido de clcio - soluio .turada Usar hidrxido de clcio SR.

Armazenagem

Proteger da umidade e do dixido de

Iodeto de potssio SR
Especifica/Jo - Contm 16,5 g de iodeto de potssio

carbono. Hidrxido de sdio, soluo concentrada SR (aproximadamente 10M) Especifica60 - Contm 20,0 g de hidrxido de sdi em gua a 50 ml. Conservao - Recipientes bem fechados. Armazenagem - Proteger do dixido de carbono. Segurana - Custico. Hidrxido de tetrabutilamnio
Frmula e massa molecular - (C.H. ).NOH - 259,47

em gua a 100 ml. Conservalio - Recipientes opacos bem fechados. Armazenagem - Proteger da luz. Iodeto de potssio aproximadamente M Usar Iodeto de potssio SR. lodeto de potssio mercrico, alcalino de potssio em 10 ml de gua e adicionar lentamente, sob agitao, soluo saturada de cloreto mercfico at pequeno precipitado vermelho. A esta mistura, adicionar a soluo gelada de 30 g de hidrxido de potssio em 60 ml de gua. Juntar mais 1 ml da soluo saturada de cloreto merClico. Diluir com gua a 200 mI. lodeto de sdio
Frmula e massa molecular - NaI - 149,89 Especificalio - Contm, no mnimo, 99,0 por cento Sinonlmia - Reagente de Nessler. Prt1fJaralo - Dissolver 10 g de iodeto

Usar grau pr-anlise ou grau adequado. Hidroxitolueno butilado Sinonlmia - BHT.

Frmula e massa molscular - CIS H 0- 220,34 Especifica/Jo - Contm, no mnimo, 99,0 por cento (p/p). Descrio - Cristais. Caracterlsticas Usicas - Temperatura de congelamento:

no menos do que 69,2C; temperatura de ebulio: 265C; densidade: 1,048. Segurana - Pode causar dermatite por sensibilizao. Hipofosfito de sdio
Frmula e massa molscular - NaH. P02 H2 O - 105,99 Especifica/Jo - Contm, no mnimo, 99,0 por cento

(p/p), calculado em relao substncia dessecada. - P cristalino branco ou cristais incolores, higroscpicos, inodoros, de sabor salgado e amargo. Conservalio - Recipientes hermticos.
Descrilio

(P/p), calculado sobre a substncia dessecada.

DBscrilo - P granulado ou cristalino branco ou cristais

incolores, inodoros, de sabor salino. Higroscpico. Con.rvalo - Recipientes bem fechados. Armazenagem- Proteger do calor. Hipofosfito de sdio SR - Contm 5,0 g em 10 ml de gua, acrescidos a 50 mI com cido clordrico. Separar eventuais cristais formados. A soluo deve ser lmpida e incolor. ImidlZol
Sinonlmia - Glioxalina. Frmula s massa molecular - CsH.N. - 68,08 DB,cri'o - P cristalino branco. Caracterl,tica, fl,icas - Ponto de fuso: 90-91C.

Iodeto de sdio em cido actico Contm 10,0 g em cido actico glacial a50 mI. Conservalio - Recipientes bem fechados. Armazenagem - Proteger da luz.
EsptJCificalo -

lodo
F6rmula e massa molecular - I. - 253,80 Descri,o - Escamas, placas ou cristais pequenos, preto-

Especificlt.o

azulados ou violeta-acinzentados; brilho metlico, de odor irritante. Caracter(,tica, f(,ica, - Sublima lentamente temperatura ambiente; aquecido, libera vapores violeta. Ponto de fuso: 113,6C. Conserva'o - Em recipientes de vidro hermticos. Segurana - Vapores corrosivos. lodoSR
Sinonlmia - Soluo aquosa de iodo-iodetada. EsptlCificalo - Contm IIJ g de iodo e 2,0 g de iodeto

ladeto de memdo(Il) Sinonlmia - Bi-iodeto de mercrio, iodeto de mercrio vermelho. Frmula s tmISSB molecular - HgI. - 454,40 o.scrilo - P cristalino, vermelho escarlate, denso, inodoro e quase inspido. Caracter(,ti", fl,i", - Ponto de fuso: 259C. Conservao - Em recipientes bem fechados. Armuen/I(/tJfTI - Proteger da luz. Categoria - Veneno! lodeto de potssio no mnimo, 99,0 por cento (p/p), calculado sobre a substncia dessecada. o.scrilo - Cristais incolores, ou p cristalino branco, inodoro, de sabor salgado e amargo. Fracamente deliqescente. Caracterl,tica, fl,ica, - Ponto de fuso: 680C. Con.rvaSo - Recipientes bem fechados. Armazanllfltl"' - Proteger da luz e umidade.
Frmula s maUB molecular EsptlCificalo - Contm, - KI - 166,00

de potssio em gua a 100 ml. Conservltlo - Recipientes. de vidro bem fechados. Armazanagem - Proteger da luz. Iodo 0,5 por cento SR - Contm 0,5 g de iodo em clorofrmio a 100,0 ml. Conserva'o - Recipientes bem fechados. Armazenagem - Proteger da luz. Segurana - Txico.
EsptJCificalo

Sinonlmill

lodo 1 por cento em etanol - Soluo alcolica de iodo, soluo etanlica de iodo.
-

Especifica60

Contm

1,0 por cento (p/V) de iodo

em etanol.
Constlrvalo - Recipientes de vid!o bem fechados. Armazenll(lflffl - Proteger da luz. Segurana - Inflamvel.

Iodobismutato de potssio Usar iodobismutato de potssio aquo-actico. Iodobismutato de potssio aquo-actico - Contm 58 ml de gua, 1,21 g de subni trato de bismuto, 14 ml de cido actico glacial e 28 ml de soluo de iodeto de potssio 40 por cento (p/V).
Especificalo

Conserva60 - Recipientes bem fechados. Segurana - Txico.

Laurato de metila
Frmula e massa molecular - Cl3H2602 - 214,40 Especificalio - Contm, no mnimo, 98,0 por .cento (p/V). Descrio - Lquido incolor ou alnarelado. Carac~rltiClls flsiClls Densidade: aproximadamente

Iodobismutato de potssio SR - Dissolver 16,6 g de cido tartrico em 67 ml de gua e juntar 1,41 g de subnitrato de bismuto. Agitar durante uma hora, adicionar 33 ml de soluo de iodeto de potssio 40 por cento (p/V). Agitar durante mais uma hora. Deixar em repouso por 24 horas. Filtrar. ConSllrva/io - Recipientes bem fechados. ArmazenagfNTI - Proteger da luz.
Prepara60

0,870. Indice de refrao (n'O): aproximadamente Ponto de fuso: aproximadamente S' C. Conservao - Recipientes bem fechados. LaurilJulfato de ldio

1,431.

Sinonmia - Sulfato dodecil sdico. Frmula e massa molecular - Cu H25 Na04 S - 288,38 Especifica'o - Mistura de, no mnimo, 85,0 por cento

Irganox 1010
Sinonlmia

Ester 3-propinico do cido pentaeritritilte trakis(3,5-di-~n:- bu til)-4-hidroxi benz ico. Frmula e massa molacular -C'3 "101 012 -1177,81 Descri/o - P branco a ligeiramente amarelado. Inodoro, inspido. Caractersticas fsicas - Faixa de fuso: 110-125C. Cristaliza em duas formas: forma Cl', faixa de fuso 120-125C; forma (3, faixa de fuso 110115C. A faixa de fuso varia de acordo com a proporo das formas cirstalinas na mistura; esta proporo no influi na eficincia do produto. InforfTlll60 adicional - Estabilizador para substncias orgnicas, tais como polietileno e polipropileno, protegendo-as contra degradao termo-oxidativa.
-

(p/p), de alquilsulfatos de sdio, consistindo principalmente de Iaurilsulfato de sdio (CH.(CH.)aoCH.OSO Na). contedo combinado de NaCl e Na.S04 , no mximo, de 8,0 por cento (p/p). Descri/io - P, escamas ou cristais brancos ou amareloplidos; odor fraco e caracterstico. ConSllrvaiio - Recipientes bem fechados.

Laurilsulfato de:Jdio SR
Descri60 - Contm 1 g em 100 ml de gua. Con_rvao - Recipientes bem fechados.

Irganox 1076
Sinonlmia - Propionato de 3,5-di-terc-butil-4-hidroxifenil)-3-<>ctadecila. Frmula e massa molecular - C3SHu 0. - 530,97 De.crilo - P branco a ligeiramente amarelado. Inodoro, estvel luz. C.racterlsticas fI.icas - Faixa de fuso: 49-54 oCo Informalo adicional - Antioxidante para substratos orgnicos, tais como polietileno e polipropileno, protegendo-<>sde degradao termo-<>xidativa.

- Mistura de diglicerdeos, principalmente dos cidos esterico, palmtico e olico, ligados ao ster fosfIco da colina. Estrutura e composio variveis de acordo com a fonte de obteno. Descrio - Massa.gordurosa amarelo-marrom a marrom, d e odor fraco caracterstico. Conservalo - Recipientes bem fechados. Rotulagsm - Especicar origem. Especifica60

SinonlmlB

Irganox PS 800 - t;ster didodecilico do cido 3,3',-tiobispropanico; ster dilaurlico do aCldo 13, 3'-tiodipropinico. j Frmula em.,. molacular - C'OHsa04S - 514,94 Descri60 - Cristais brancos. Caracterlsticas fsicas - Faixa de fuso: 38-40 oCo Informa60 lIdiclolNl! - Estabilizador de poliolefmas, especialmente polipropileno e polietileno de alta densidade.

Litio SRA - 2 mg/ml - Contm 1,064 g de carbonato de ltio em 5,0 ml de cido clordrico. Completar com gua a 100 ml. ConSllrvao - Recipientes bem fechados, inertes (tipo polietileno ).
Espacifica60

Lactose
Sinonlmia - Lactose monoidratada. Frmula e massa molacultlr -CUHUOll.H.O - 360,31 Descrio - P cristalino ou grnulos brancos. Inodoro,

de fraco sabor adocicado. Rotao ptica especfica [a)'O +52,2 a +52,8. Ponto de fuso: 202C. Con_rvalo - Recipientes bem fechados. Informalo adicional - Adsorve odores estranhos.
CaracterlstiClls flicas -

10%:

Macrogol 300 - PEG 300, polietilenoglicol 300. ma_ molecular - H(OCH. CH. )nOH Massa molecular no inferior a 95 por cento do valor nominal rotulado. Apresenta o nmero mdio de grupos oxietileno: n 6 ou 7. Especificao - Mistura de produtos de policondensao de xido de etileno e gua. Descri'o - Lquido viscoso, lmpido, incolor ou quase, de odor fraco e caracterstico, higroscpico. Carac~rstiClls fsiClls - Densidade: aproximadamente 1,125. fndice de refrao (ni): aproximadamente 1,465. Viscosidade: aproximadamente 80 cP. Conserva'o - Recipientes hermticos. RotulBgem - Deve conter a massa molecular mdia. Armazenagem - Proteger da umidade.
Sinonmia Frmulllll

Lae:tole 0,1%
EspllCifica/o - Contm 0,1 por cento (p/y) em piridina.

Especificao

Magnsio SRA - 1 mg/ml - Contm 9,0 g de cloreto de magnsio

em gua a 500 mI. Esta soluo contm 4,595 mg/mI.

Padronizao - a 25,0 ml desta soluo, adicionar 25,0 ml

Descrio - P cristalino incolor. CIIractersticas flsicas - Sublima sem fundir e com parcial

de gua, 10,0 ml de tampo amnia pH 10,9 e 0,1 g do indicador, mistura de negro de eriocromo T. Titular com edetato dissdico 0,05 M SV. Cada ml do titulante corresponde a 0,001215 g de Mg. Para uso diluir concentrao de 1 mg/mI. ConSIJrvllo - Recipientes bem fechados, inertes (tipo polietileno ). MagnellOn
F6rmulllllmIlSSllmoleculllr-C12H.N.0. - 259,22 Descrio - P castanho-avermelhado. Clltegorill - Indicador para magnsio e molibdnio.

decomposio a aproximadamente 263C; pH da soluo 0,2M: 8,4. Conltlrvao - Recipientes bem fechados. Clltegoria - Anti-sptico urinrio. Metoxiazobenzeno F6rmula e ma$$Bmolecular - C13H13N~O - 212,3 Descrio - Lminas alaranjadas, praticamente insolveis em gua, solveis em lcool, em ter de petrleo e outros solventes orgnicos. Cromlltografia em camada delgada - Aplicar, em placa de slica-gel G, soluo de 5 mg de metoxiazobenzeno em benzeno e desenvolver cromatograma com o mesmo solvente. Aparece uma nica mancha com Rf em torno de 0,6. Metoxiazobenzeno SR E$pfICificao - Soluo a 0,2 por cento (p/V) em mistura de I volume de benzeno e 4 volumes 'de ter de petrleo. Mefxido de potssio F6rmula e maS/lBmolecular - CH.OK - 70,13
Prtlperalo extemporinea.

Mercrio
F6rmulll e mllSSalltmica - Hg - 200,59 NmfJf'o atmico - 80 Especificlllo - Metal lquido, mvel, denso, prateado, de

superfcie espelhada.
flsicas Densidade: aproximadamente 13,5. Ponto de ebulio: aproximadamente 357C. Conltlrvlllo - Recipientes bem fechados. Segurana - Veneno! Voltil temperatura ambiente. CIImcterlsticas

Mercrio SRA - 1 mg/ml - Contm 1,080 g de xido de mercrio (lI) dissolvido no menor volume possvel de cido clordrico 2 M. Completar com gua a 1000 mI. Conltlrllll6o - Recipientes bem fechados, inertes (tipo polietileno).
Especifica60

Metabissulfito sdico
Sinonlmia - Dissulfito de sdio, pirossulfito de sdio. F6rmulll e mll$$8 molecular - Na~S~ Os -190,10 Especificalo - Contm, no mnimo, 95 por cento

Met6xido de sdio F6rmula e ma$$Bmolecular - CH.ONa - 54,02 Descrio - P branco rmo. Reage violentamente com a gua com evoluo de calor. Sensvel ao ar. Pode apresentar-se na forma de solvato: CH. ONa 2CH. OH, p branco. Em soluo pode ser preparado in situo Conlllrvalo - Recipientes hermticos. Armllzenagem - Proteger da umidade. Miristato de metila
F6rmula 11 mllna molecular - Cu H.o O~ - 242,40 Especificalo - Contm, no mnimo, 98,0 por cento (p/V). Descrio - Lquido incolor ou fracamente amarelado. CllracterlsticB$ f{siCIIS Densidade: aproximadamente

(p/p). Contm quantidade de metabissulfito sdico equivalente a, no mnimo, 65,0 por cento e, no mximo, 67,4 por cento de SO~. Descrio - Cristais incolores ou p cristalino branco ou branco-creme, de odor sulfuroso e de sabor cido e salino. Conlllrvalo - Recipientes bem fechados, bem cheios. Armazenagem - Proteger do caIor excessivo, do ar e da umidade. Estabibilidade - Oxida lentamente a sulfato, por exposifo ao ar e umidade, com desintegraio dos cristais. Metanol
Sinonlmill - lcool meh1ico. F6rmula e ma$$8 molecular - CH. 0- 32,04 EspecifiClllo - Contm, no mnimo, 99,5 por cento

0,868. Indice de refrao (nO): aproximadamente 1,437. Ponto de fuso: aproximadamente 20C. ConltlrvB60 - Recipientes bem fechados. Mistura anidrido actico-piridina SR - Misturar cautelosamente, e sob refrigerao, 10 ml de anidrido actico e 30 ml de piridina. ConlllrvalJo - Recipientes hermticos. Estabilidade - Preparar no momento de uso.
Preparelo

(p/V).
Descrio - Lquido Impido, incolor, inflamvel, de odor

caracterstico.
CarllCtfJf'l'tiCB$ tlsicas

Densidade: 0,790 1,328 a 1,330. Conltlrvao - Recipientes hermticos. $egumna - Txico. InOamvel. Metenamina

Ponto de ebulio: 64-65C. a 0,793. Indice de refrao (n3o):

-

Preparalo

Mistura de negro de eriocromo T - Misturar 0,2 partes de negro de eriocromo T com 100 partes de cloreto de sdio. Conservao - Recipientes bem fechados. Categoria - Indicador para clcio e magnsio.

Molibdato de amnio
F6rmula li massa molacular -

(NH.), Mo, 014 4H2 O -

Sinonlmia - Hexametilenotetramina. F6rmula e massa molecular - C,H12N. - 140,19 E$pf1CifiCII60 - Contm, no mnimo, 99,0 por cento

1235,86
E,pecifica6o - Contm, no mnimo, 99,0 por cento (p/p). DIIscrilJo - Cristais incolores at levemente amarelos ou

(p/p), aps dessecao sob pentxido de fsforo durante 4 horas.

verde-azulados, brilhantes.

Caractersticas

fsicas -

Pelo aquecimento perde gua e

amnia.
Conservallo - Recipientes bem fechados.

Molibdato de amnio SR - Contm 10,0 g de molibdato de amnio em gua a 100 ml. Conservao - Recipientes bem fechados.
Especificallo

Nitrato de amnio F6rmula e mllSSamolecular - NH. NO. - 80,04 Descrillo - Cristais incolores, deliqescentes, ou p branco, de sabor salgado. Carllctersticas fsicas - Ponto de fuso: aproximadamente 155C; decompe-se ao redor de 210 c em.gua e xidos de nitrognio. Conservallo - Recipientes bem fechados. Nitrato de amnio, IIOluio saturada
EspecificaiJo - Contm 20,1 g em 10 m1 de gua. ConsBrvllllo - Recipientes bem fechados.

Molibdovandio SR - Reagente molibdatovanadato, reagente molibdovandio. Preparallo - Usando substncias fmamente pulveriiadas, preparar suspenso de 4,0 g de molibdato de amnio e 0,1 g de vanadato de amnio em 70 ml de gua. Juntar 20 ml de cido ntrico. Completar o volume de 100 m1 com gua. Conservslo - Recipientes bem fechados. Armazenagem - Proteger da lu:!.
Sinonfmia

Nitrato de amnio SR Especificslo - Contm 5,0 g de nitrato de amnio em gua a 100 mi. Nitrato de brio F6rmulll e mllssa molecufar - BaNo O. - 261,34 Descrilo - Cristais ou p cristalino. CBractersticIIs fsicas - Ponto de fuso: aproximadamente 590C. Conserva6o - Em recipientes bem fechados. Segufllna - Veneno! Nitrato de brio 0,05 M Especificlllo - Contm 13,067 g em gua a 1000 ml. Conservslo - Recipientes bem fechados. Segurllna - Veneno! Nitrato de cobalto(I1)

1-Naftamina
Sinonmia - a-Naftilamina. F6rmula e massa molecular - C'o H, N - 143,12 Descrillo - Cristais incolores ou p cristalino branco.

Pela exposio ao ar e luz, torna-se avermelhado. Odor desagradvel. Caractersticas fsicas - Faixa de fuso: 49 - 51 C. Conservallo - Recipientes bem fechados. Armazenagem - Proteger da luz e do ar. Segurana - Vapor e p nocivos. 2Naftol
Sinonmia - Betanaftol, fj.naftol F6rmula e massa moltICular - C'o H. O - 144,17 DescriiJo - P cristalino branco a levemente rseo, de

Sinonmill - Nitrato cobaltoso. F6rmulll e mllssa moltICulllr - CoNo O 6Ho 0- 291,03 EsptICiflcalo - Contm, no mnimo, 99,0 por cento

(P/p).
Descrillo - Cristais pequenos, vermelhos, higroscpicos. Cafllctersticas fsiCas - Ponto de fuso: aproximada-

odor fenlico fraco.

Caractersticas ffsicas -

Ponto de fuso:

aproximada-

mente 122C.
Conserva6o - Recipientes bem fechados. Armazenagem - Proteger da luz.

mente 55C.
Conservalo - Recipientes bem fechados. Armazenagem - Proteger do calor. Informll6o lIdicional - Identificao do cloridrato

2-Naftol SR
Sinonlmia - Betanaftol SR, fj.naftol SR. Especifica60 - Contm 1,0 g em hidrxido

lidocana. sacarose. de sdio a

Identificaio

de barbituratos,

fenitona

de e

1,0 por cento (p/V)a 100 ml. ConservaiJo - Recipientes bem fechados. Estabilidade - Preparar para uso imediato. Armazenagem - Proteger da luz. Ninidrina
Sinonlmia - Ninhidrina. F6rmula e mllssa mofecufllr - C, H. O Ho 0- 178,14 ESPtICificallo - Contm, no mnimo, 96,0 por cento (p/p). Descrillo - P cristalino branco a amarelo fracamente

Nitrato de cobalto(I1) SR Descrilo - Contm 1,0 g por cento (p/V) em metanol. Conservalo - Recipientes bem fechados. Segufllna - Inflamvel. Txico. Nitrato de chumbo
Sinonlmill - Nitrato de chumbo(lI). F6rmula e massa molecular - Pb(NO.)o - 331,21 Especifica60 - Contm, no mnimo, 99,0 por cento (p/p). Descrilo - Cristais incolores, translcidos ou p crista

plido.
ConservaiJo - Recipientes bem fechados. Armllzenagem - Proteger da luz.

lino branco.
Conservalo - Recipientes bem fechados. Segufllnll - Veneno!

Ninidrina SR
Sinonmia - Ninhidrina SR. EsptICificalo - Contm 0,2 g por cento (P/V) em mistura

Nitrato de lantnio
F6rmulllll mllssa moleculllr - LaNo O, 6Ho O - 433,05 Descrilo - Cristais incolores, deliqescentes. Conservllllo - Recipientes bem fechados.

de n-butanol e cido actico a 12 por cento (p/V) (95 + 5; V/V). Conservallo - Recipientes bem fechados. Armazenagem - Proteger da luz. Segurana - Inflamvel.

Nitrato de lantnio SR
EsptICificaiJo - Contm 5,0 por cento (p/V). Conservll6o - Recipientes bem fechados.

Nitrato de mercrio(I) Sinonfmia - Nitrato mercuroso. Frmula e maUlJ moleculer - Hg. N, O 2H, O - 561,22 Descrio - Cristais incolores, normalmente com fraco odor de cido ntrico. Caractersticas ffsicas - Ponto de fuso: aproximadamente 70C, com decomposio. Conservalo - Recipientes bem fechados. Armazenagem - Proteger da luz. Segurana - Veneno! Nitrato de mercrio(l) SR
Sinonfmia - Nitrato mercuroso SR. EspecificalIo - Contm 15,0 g em mistura de 90 ml de

Nitrito de Sdio SR Especificao - Contm 10,0 g (p/V) em gua a 100 ml. Conservao - Preparar para consumo imediato.

Nitrobenzeno
Sinonfmia - Nitrobenzol. Fnnu/a e massa mo/ecular - C. Ho NO. - 123,11 Descrio - Lquido incolor a amarelo plido, de odor

semelliante ao de leo de amndoas. Caracterfsticas ffsicas - Ponto de ebulio: aproximadamente 211 oCODensidade: aproximadamente 1.20. Conservalo - Recipientes bem fechados. Segurana - Veneno!

gua e 10 ml de cido ntrico a 10 por cento (VIV) Conservaio - Recipientes de vidro mbar. Estabilidade - Adicionar um pequeno glbulo de mercrio metlico. Armaz'lnagem - Proteger da luz. Nitrato de mercrio(lI) Sinonfmia - Nitrato mercrico. Frmula e maUlJ molecular - HgN, O H. O - 342,62 Descrio - Cristais incolores ou fracamente corados. Higroscpico. ConSl/1rvaio- Recipientes hermticos. Armazenagem - Proteger da luz e da umidade. Segurana - Veneno! Nitrato de prata
Frmula e maUlJ molecular - AgNOs - U;9,87 Especificao - Contm, no mnimo, 99,0% (p/p). Descrio - Cristais incolores transparentes ou p crista-

Nitrato fenilmercrico
Sinonfmia - Nitrato bsico de fenilmercrio. Fnnula e massa mo/ecu/ar - C.HoHgOHC.HoHgNO,

- 634,45
- Consiste em mistura de nitrato e hidrxido de on fenilmercrio (C. Ho Hg+). Contm, no mmo, 87,9 por cento de on fenilmercrico (p/p) e, no menos, de 62,75 por cento de mercrio (Hg) (p/p). DlIscrlo - P cristalino branco ou escamas brancas lustrosas. Inodoro. Caractllrfsticas ffsicllS - Faixa de fuso: entre 175 e 190C (decomposio). ConSl/1rva'o - Recipientes hermticos. ArmaZllnagem - Proteger da luz. ElPBCificaio

Oxalato de amnio
F6rmula e mBUlJ mo/ecu/ar - C.HaN.O H. 0- 142,11 EsptICificalo - Contm, no mnimo, 99,0 por cento

lino branco. InOOoro

Caractarlsticas ffsicas - Ponto de fuso: 212C. ConservaBo - Proteger da luz. SlIgUrana - Custico. Veneno!

(P/p).
DtJscrilo - Cristais incolores transparentes

ou p crista-

lino branco. lnodoro.

Caracterfsticas ffsicas - Ponto de fuso: 212C. ConSl/1rva6o- Recipientes bem fechados. Segurana - Custico. Corrosivo. Veneno!

Nitrato de prata 0,1 M

E$pecifica6o - Contm 17,0 g em gua a 1000 ml. ConSl/1rvalo - Recipientes bem fechados. Armazenagem - Proteger da luz.

Nitrato de prata SR (aproximadamente

0,25 M)

Especificalo - Contm 4,25 g por cento (p{V). ConSl/1rvaio - Recipientes bem fechados. Armazenagem - Proteger da luz.

Oxalato de amnia SR Especificao - Contm 4,0 g de oxalato de amnio em gua a l00ml.

Nitrato de trio
Frmula fi maUlJ molecu/ar - ThN.012 .4H. O - 5~3,12 Descri,o - Cristais ou p cristalino branco, levemente

Oxalato de potssio K.C.O H.O - 184,23 anidro 166,22 DtJscri60 - Cristais incolores, inodoros, eflorescentes ao ar seco e quente. Caracterfsticas flsicas - Perde sua gua a aproximadamente 160C. ConSl/1rvao- Recipientes hermticos. Armazen8fJ8m - Proteger da umidade. Segurana - Veneno!
Frmula 11mllSsa mo/ecular -

deliqescente.
ConSl/1rvaio - Recipientes bem fechados. Armazenagem - Proteger da umidade. /nfonnaio adiciona/Determinao de flor.

Nitrito de ldio
Frmula e maUlJ molecular - NaNO, - 69,00 Especificao - Contm, no mnimo, 97,0 por cento

(p/p). Cristais incolores, ou p granulado branco, levemente amarelados. Higroscpico. Caracterlsticas ffsicas - Ponto de fuso: 271 oCoDecompe-se acima de 320C. ConSl/1rvao- Recipientes bem fechados. Estabilidade - Oxida-se ao ar muito lentamente a nitrato.
Descrio -

xido de alumnio
Sinonlmia - Alumina. Frmula e massa molecular - AI203 - 101,96 Descri60 - P granulado Imo, branco. Caracterlsticas ffsicas - pH da suspenso a 10,0 por cento Con.rvao

(p/V): entre 9 elO. - Recipientes hermticos.

xido de hlmio
F6rmula e mllSSBmolecular - HO,03 - 371,85 E$pecifica'o - Contm, no mnimo, 99,9 por cento

Con.rvalo - Recipientes hermticos. Armazenagem - Proteger da umidade. SeguranII - Irritante. Corrosivo pele, mucosa e olhos.

(p/p).
Descri60 - P amarelado. Conl6rva/io - Recipientes bem fechados.

xido de magnsio
Sinonlmia - xido de magnsio leve ou pesado. F6rmula e massa molecular - MgO - 40,30 Especifica'o - Contm, no mnimo, 95,0 por cento (p/p). Descrillo - P amorfo rmo, branco, inodoro, de sabor

Pentxido de vandio F6rmula e massa molecular - V, O. - 181,88. Especificao - Contm, no mnimo, 99,5 por cento (p/p). Oescri'o - P fino amarelo a amarelo-laranja. Carecterfsticas fsiclIs - Ponto de fuso: 690 oCo ConSIBrvao- Recipientes bem fechados. Peptona
E$pllCifica/Jo - Mistura de produtos de natureza polipeptdica oriundos de protenas animais (carne, casena). A origem determina as caractersticas fsicas, composio e processo de produo. Descri'o - P de cor amarelo-clara a marrom. Odor e sabor caractersticos. Teor'em nitrognio mnimo: 12,0 por cento (p/p) de casena e 14,2 por cento (p/p) de carne. ConSIBrva6o- Recipientes bem fechados. Rotulagem - Deve expressar origem e teor em nitrognio. Armazenagem - Proteger da umidade.

alcalino fraco.
ConSIBrva/Jo- Recipientes bem fechados. Armazenllf/8trl - Proteger do ar e da umidade.

Sinonfmia Clrio(I1).

xido mercrico - xido amarelo de mercrio, xido de.mer-

Permanpnato de potssio F6rmula e mllSSBmolecular - KMn04 - 158,03 Paldio SRA - I ml/ml EsplICifica'o - Contm, no mnimo, 99,0 por cento E$pecific/I1lo - Contm 1,670 g de cloreto de paldio em 200 ml de cido clordrico a 50,0 por cento (VIV). (p/p), calculado sobre a substncia dessecada. Descri'o - Cristais violeta escuros, com brilho metlico, Aquecer at dissoluo completa. Resfriar e completar inodoros, de sabor adocicado, adstringente. com gua a 1000 mI. ConSIBrva/io - Recipientes bem fechados. ConSIBrva6o - Recipientes bem fechados, inertes (tipo Armazenagem - Proteger da luz. polietileno ). Segurana - A substncia e suas solues apresentam risco de exploso, quando em contato com materiais Palmitato de metila oxidveis. F6rmule e massa molecular - C1,H,. O, - 270,50 Categoria - Oxidante enrgico. Descri/io - Cera slida, incolor. CarecterfstiCIIS ffsicas - Densidade (30C): aproximaPermanganato de potssio SR (aproximadamente 0,2 M) damente 0,86. ConSIBrva/Jo- Recipientes bem fechados. EsplICifica60 - Contm 3,0 por cento (p/V) em pa. Estabilidade - Preparar para consumo imediato. ConSIBrva/io - Recipientes bem fechados. Papel de prata-manpns PrtlparaSo - mistura de volumes iguais de nitrato de Armazen8f/8m - Proteger da luz. prata 0,1 M SV e de sulfato de mangans (15811) SR Segurana - Irritante. Custico. adicionar, gota a gota, hidrxi<lo de sdio 0,1 M SV at que se forme precipitado persistente. Filtrar. A seguir, Peroxidissulfato de amnia mergulhar tiras de papel de filtro (por exemplo, Whatman Sinonfmia - Persulfato de amnia. N'? I) na soluo, durante 15 minutos. Secar tempera- F6rmule e massa molecular - H. N, O. S, - 228,10 tura ambiente, ao abrigo da luz e de vapores cidos ou Especifica'o - Contm, no mnimo, 95,0 por cento alcalinos. O papel de prata-manpns deve ser incolor. (p/p). EnSllio de SlBnsibilidllde - Em proveta de aproximadaDescri'o - Cristais ou p granulado branco. Inodoro. mente 40 ml de capacidade introduzir 1,0 ml de cloreto Estvel durante meses quando puro e seco; decompe-se de amnia (l0 /lg/ml NH4) SR. Adicionar 9 ml de gua e em presena de umidade. 1 g de xido de magnsio. Fechar imediatamente o Con.rva/io - Recipientes hermticos. recipiente com tampa de polietileno, sob a qual se coloca Armazenegem - Proteger da umidade, do calor e de o papel de prata-mangans. Agitar a soluo, tomando-se matria orgnica. o cuidado para que as partculas de magnsio no entrem Informa/io adicional - Agente fortemente oxidante. em contato com o papel. Manter a proveta a 50-60 uc durante I hora. Aparece cor cinza no papel reagente. Perxido de hidro,snio, concentrado Pentxido de fsforo Sinonfmia - Anidrido fosfrico. F6rmule e mllssa molecular - P, O. - 141,94 Descri/Jo - P branco, amorfo, muito deliqescente. CIIrecterfstiCIIS ffsiCIIS - Ponto de fuso: 340 oCo Temperatura de sublimafo: 360 oCo
Sinonlmia - PeridroJ. F6rmula e massa molecular - H, O, - 34,01. E$pecifica'o - Contm, no mnimo, 29,0 por cento

F6rmula e massa molecular - HgO - 216,59 E$pecifica/Jo - Contm, no mnimo, 99,5 por cento (p/p). Descrilo - P amarelo-alaranjado, denso, inodoro. Armazenagem - Proteger da luz. SegunmII- Veneno!

(p/p) de H, O,. Corresponde a aproximadamente 100 partes em volume. Pode conter estabilizante. Descrilo - Lquido incolor, irritante, de fraco odor. OIracterlstiCM fl,icas - Densidade: 1,11.

- Recipientes preenchidos parcialmente, providos de fecho de alvio. Armazenagem - Proteger da luz e do calor. Segurana - Oxidante forte. Conservao

Perxido de hidrognio, 30 volumes, SR Frmu/a e massa mo/ecu/ar - H. O. - 34,0 I. EspecificalJo - Contm, no mnimo, 9,7 por cento (p/V) e, no mximo, 10,7 por cento (p/V) de H. 0., correspondendo a aproximadamente 30 partes em volume. Pode conter estabilizante. DelCrilo - Diluir o perxido de hidrognio, concentrado. Conservao - Recipientes fechados. Estabilidade - Evitar perodos longos de armazenagem. Armazenagem - Proteger da luz e do calor. Perxido de hidrognio 3 por cento (P/V) SR Frmu/a e massa mo/ecu/ar - H. O. - 34,01 Especifica60 - Contm, no mnimo, 2,5 por cento (p{V) e, no mximo, 3,5 por cento (p{V) de H. 0., correspondendo a aproximadamente 10 partes em volume. Pode conter estabilizante. Descrillo - Lquido lmpido, incolor. Conservao - Recipientes fechados. Evitar perodos longos de arrnazenamento. Armazenagem - Proteger da luz e do calor. Persulfato de sdio Frmula e massa mo/ecu/ar - NazOsSz - 238,13 DeICri60 - P cristalino branco. Decompe-se lentamente com umidade e pelo calor. Conservao - Recipientes hermticos. Armazenagem - Proteger da umidade e do calor. Segurana - Irritante. Piridina
Frmu/a e massa mo/ecu/ar - C. Hs N - 79,10 Descrio - Lquido incolor, de odor caracterstico

moles de xido de etileno para cada moi de sorbitol e anidrido. Descri60 - Lquido claro, amarelado ou amarelo escuro. Oleoso. Fraco odor caracterstico. Caracterlsticas flsices - Densidade: em torno de 1,08. Viscosidade (25 DC): aproximadamente 400 cP. Conservao - Recipientes bem fechados. Categoria - Tensoativo. Potssio SRA - 600 ~g/ml Especificao - Contm 1,144 g de cloreto de potssio em gua a 1000 ml. Conservao - Recipientes bem fechados, inertes (tipo polietileno). Prednisolona
Frmu/a e massa mo/ecu/ar - C'l H O. - 360,45 Especificao - Contm, no mnimo, 97,0 por cento

(p/p), calculado sobre a substncia dessecada. Descrio - P cristalino branco ou quase branco. Higroscpico. Apresentado na forma anidra ou contendo uma ou meia molcula de gua de hidratao. Caractersticas fsices - Ponto de fuso: 240-241 c, com decomposio. Conservao - Recipientes bem fechados. Categoria - Corticide. Prednisona
Frmu/a e massa mo/ecu/ar - C'l H O. - 358,43. Especificao - Contm, no mnimo, 97,0 por cento

(p/p), CZIH260S, calculado sobre a substncia dessecada.

Descri60 - P cristalino branco ou quase branco. Caracterlsticas ffsicas - Ponto de fuso: aproximadamen-

te 233 DC,com decomposio. Conservao - Recipientes bem fechados. Categoria - Corticide. Preto brilhante BN

Frmu/a

e massa mo/ecu/ar

desagradvel.
Caracterlrticas

C.e Hl, N s Na. 01

s. -

868,00

({sicas - Ponto de ebulio: 115-116 oCo Descrio - Cristais fmos, p azul violceo ou preto Densidade (25C): aproximadamente 0,980. (ndice de acinzentado. Indicador de xido-reduo: forma oxidada: refrao (nO): 1,5092. azul violcea; forma reduzida: amarelo-marrom. Caracter(sticas flsicas -- Absorvnca da soluo a 1,0 Conservao - Recipientes bemfechados. por cento (espessura 1,0 em) a 570 nm ~ 0,390. Armazenagem - Proteger da umidade. Conservao - Recipientes bem fechados. Segurana - Inflamvel. Txico.

Poliacrilamida Sinonlmia: Acrilamida. Frmu/a e massa mo/ecu/ar - (C3H.NO)n; monmero -71,08. Especificao - Polmero de vrias formas, solveis e insolveis em gua, obtidos pelo aquecimento com vrios catalisadores de polimerizao. DelCri60 - P cristalino branco ou escamas incolores ou brancas. Caracterstcas fscas - Ponto de fuso: aproximadamente 84C. Conservao - Recipientes bem fechados. Segurana - Altamente txico e irritante. Causa paralisia do sistema nervoso central. Pode ser absorvido pela pele ntegra. Polissorbato 80
- ~ mistura de oleatos do sorbitol e seus anidridos copolimerizados com aproximadamente vinte Especifica60

Propilenoglicol
Sinonfmia - l,2-Propanodiol. Frmu/a e massa mo/ecu/ar - C. H, O. - 76,09 Descri60 - Lquido incolor, viscoso, higroscpico. Caracterlsticas ffsicas - Densidade (25C): 1,035

1,037. Faixa de ebulio: 187-189DC. Con!ll#1rva60- Recipientes bem fechados. Armazenagem - Proteger da umidade. Quinalizarina-C.I.58500
Sinon(m;a - Mordente violeta 26 Frmula e massa mo/ecu/er - C H,O. - 272,20. Descri60 - P vermelho escuro. Conservao - Recipientes bem fechados.

Resazurina
Sinonfmia - DiazorresorcinoL F6rmu/a e massa mo/ecu/ar - C12H,NO. - 229,18. Descri60 - Cristais ou p cristalino vermelho escuro. ConlBrvalJo - Recipientes bem fechados.

Resorcinol
Sinonmia - Resorcina. Frmula B massa molBcular - C,H, O2 - 110,11 Espacifica60 - Contm, no mnimo, 99,0 por cento

Slica-gel "GF-254" 13,0 por cento (p/p) de sulfato de clcio hemiidratado e aproximadamente 1,5 por cento (p/p) de indicador de fluorescncia de intensidade mxima a 254 nm. Descri/Jo - P fino branco de granulometria varivel entre 10 e 40 jJm, homogneo. Csrscter/sticas flsicas - pH: ver slica-gel "G". Conservlllo - Recipientes bem fechados. Catagoria - Suporte para cromatografia. St1ica-gel"H"
Sinonlmia Descrilo - Gel de slica "H". - P fino branco, de granulometria Sinonlmia - Gel de slica GF-254. EspecificlI60 - Contm aproximadamente

(p/p). Cristais ou p cristalino incolor ou amarelo plido; exposto luz e ao ar, adquire colorao rsea. Caracterlsticas fsicas - Faixa de fuso: 109-111C. Con$8rva60 - Recipientes bem fechados. Armazenagem - Proteger da luz e do ar.
DBscri60 -

Sacarose
Frmula e m/J$samolecular - Cu H22 Ou - 342,30 Especiflcs60 - ~ obtida da Ssccharum officinarum Linn (Famfiia GraminBIIB), BBtlI lIulgaras Linn (Famlia ChenopodisctNIB) e outras fontes. Descri60 - Cristais brancos ou incolores; p cristalino ou massa cristalina ou blocos brancos. Inodoro. Sabor adocicado. Estvel ao ar. Finamente dividido higroscpico e absorve at 1 por cento de umidade. No contm aditivos. CarsctBrlsticss fsicas - Decomposio: entre 160 e 186C. ConsBrvll60 - Recipientes bem fechados.

varivel

entre 10 e 40 jJm, homogneo. Carscteristicas "sicas - Ver slica-gel ''O''. Conserllll60 - Recipientes bem fechados. Catagoria - Suporte para cromatografia. St1ica-sel "HF 254" 1,5 por cento (P/V) de indicador de fluorescncia de intensidade mxima a 254 nrn. Descri60 - P fino branco de granulometria varivel entre 10 e 40 jJm, homogneo. Caractersticas fsicas - pH: ver slica-gel "G". ConsBrllll1Jo- Recipientes bem fechados. Categoria - Suporte para cromatografia. Sdio SRA - 200 jJg/ml EspecificlI60 - Contm 0,5084 g de cloreto de sdio em gua a 1 000 ml. Conserva60 - Recipientes bem fechados, inertes (tipo polietileno) . Soluo de brio 10 ppm - Contm 1,779 g de BaCl2 2H2 O em gua a 1000 ml. Para uso, diluir 1 : 100. Conssrvalo - Recipientes bem fechados e inertes (tipo polietileno). Informaao adicional - Soluo padro para ensaiolimite.
Especificalo Sinonlmia - Gel de slica "HF 254". EspecificlI60 Contm aproximadamente

Sacarose 0,1 por cento (p/V) em piridina - Contm 0,1 g de sacarose em piridina a 100 ml. ConsBrvll1o - Recipientes bem fechados. Segurana - Txico.
EspacificlI60

SafraninaO P vermelho escuro. Consiste de mistura de cloreto de 3,7-diamino-2,8-dimetil-5-fenilfenaznio (C:ZOHI9QN4 - 350,85) e cloreto de 3,7-diamino-2,8dimetil-5,o-tolilfenaznio (C21H21ClN4 - 364,88). Indicador de xido-reduo - forma oxidada: pH cido, violetaazulado; pH alcalino, parda; forma reduzida: incolor tanto na acidez quanto na alcalinidade. Caractllrlsticas fsicas - Absoro mxima: 530-533 nm. Conrerva6o - Recipientes bem fechados.
DBscri60 -

Slica-sel, dessecada
Frmula e massa molBcular - Si02 - 60,08 Espacificalo - cido silcico coloidal, polimerizado,

previamente desidratado; contm cloreto de cobalto como indicador. Descri60 - Grnulos vtreos, amorios, de granulometria varivel, com grnulos impregnados com indicador de capacidade de adsoro pela cor azul a Isea. Conrervalo - Recipientes hermticos. Armazenagem - Proteger da umidade. Categoria - Dessecante. Slica-gel "G" 13,0 por cento (p/p) de sulfato de clcio hemdratado. Descrilo - P fino branco de granulometria varivel entre 10 e 40 jJm, homogneo. CsrsctBr/sticas "sicas - pH: suspenso a 10,0 por cento (p/V) em gua isenta de dixido de carbono, obtida por agitao durant~ 15 minutos; determinao potenciomtrica aproximadamente 7. Consarvalo - ReciPientes bem fechados. CatllflOria - Suporte para cromatografia.
Sinonlmia - Gel de slica "G". EspecificlI60 - Contm aproximadamente

Soluio de cdmio 5 ppm Especifics'o - Contm 0,229 g de sulfato de cdmio em gua a 100 ml, corresponde a 1000 ~/ml de cdmio. Para uso, diluir 1:200. Conserva60 - Recipientes bem fechados e inertes (tipo polietileno ). Informalo adicional - Soluo padro para ensaio-limite. Soluo de c1oreto 5 ppm EspacificlIio - Contm 0,824 g de cloreto de sdio em gua a 1000 ml. Para uso diluir 1: 100. Contlllrvalo - Recipientes bem fechados. Informsao adicional - Soluo padro para ensaio-limite. Soluio de eltanho 5 ppm Espacificso - Contm 1,2253 g de acetato de estanho. 1/2 H20 em 25,0 ml de cido clordrico em gua a 1000 mI. Para uso, diluir 1 :100 em cido clordrico 2,5 por cento (P/V).
Conssrva60 - Recipientes bem fechados. Informalo adicional - Soluo padro para ensaio-limite.

Soluio de KulFischer Snonfma - Reagente iodo-sulfurado. Especifical10 - Constitudo de duas solues: Soluo I: a mistura de 70 ml de metanol e 35 ml de piridina, isenta de gua. adicionu, sob refrigerao e ausncia de umidade, dixido de enxofre seco at obter acrscimo em peso de 9 g. Misturar; Soluo 2: Contm 12,6 g de iodo em metanol a 100 mI. Conservalo - Em recipientes de vidro hermticos. Estabilidade - Decompe-se continuamente. Armazensgem - Proteger da umidade e da luz. Manter sob refrigerao. Segurana - Txico. Inflamvel. Informalo adicional - Para determinao do teor de

Sulfato de cdmio

Frmula e massa molecular - 3CdSO 8H, 769,49 Especifica60 - Contm, no mnimo, 99,0 por cento (p/p). Descrio - P cristalino, incolor e inodoro. Conservao - Recipientes bem fechados.

Sulfato de clcio, hemdratado no mnimo, 98,0 por cento (pip), calculado sobre base seca. Descrilo - P branco, fino; contm aproximadamente 7,0 por cento de gua. Conservalo - Recipientes bem fechados. Sulfato de clcio, soluio saturada, SR - Agitar 5,0 g de sulfato de clcio hemiidratado com 100 ml de gua, durante uma hora. Filtrar antes do uso. Conservalo - Recipientes bem fechados. Sulfato cprico, pentaidratado
Frmula e massa molecular - CuSO . 5H, 0- 249,68 Especificalo - Contm, no mnimo, 98,5 por cento Frmula e massa molecular Especificalo - Contm, - CaSO . 1/2H, 0- 145,14

gua.
Soluo de zinco 10 ppm - Contm.4.398g de ZnSO 7H,O em cido &Ctico a 1,0 por cento (V/V) a 100 ml. Para uso, diluir I: 100. Conservao - Recipientes bem fechados e inertes (tipo polietileno). Informao adicional - Soluo padro para ensaio-limite.
Especificao Sinonfmia Frmula

Prepara'o

Subnitrato de bismuto - Oxinitrato de bismuto.

e massa molecular -

BisO(OH).(NO,).

- 1461.99.
- ~ sal bsico que contm. no mnimo, o equivalente a 79,0 por cento de trixido de bismuto (Bi,03) (p/p). Descrilo - P branco, denso, higroscpico, inodoro e sem gosto. Apresenta reao alcalina diante do papel de tornassol. Conservalo - Recipientes bem fechados. Armazenagem - Proteger da luz. Categoria - Anticido. Especifica/io

(p/p) calculado sobre a substncia dessecada a 250C. Descrilo - Cristais, p ou grnulos azuis. Em contato com o u efloresce lentamente. Caractersticas fsicas - Aquecido a 250 C, at peso constante, perde entre 33,0 a 36,5 por cento de seu peso. Conservalo - Recipientes bem fechados. Armazenagem - Proteger do ar. SlIf/ufJIna - Irritante. Sulfato cprico SR - Contm 10,0 g sulfato cprico pentaidratado em gua a 100 ml. Conservalo - Recipientes bem fechados.
EspecifiCIIIo

Sudan III
Frmula e massa molecular - C H'6 N. Descriio - P vermelho-marrom ConservalJo - Recipientes bem fechados.

- 352,40

Sulfato de mangans

F6rmula e maSlll molecular - MnSO. 4H, 223,14 EspecificalJo - Contm, no mnimo, 98,0 por cento

Sulfanilamida
Frmula e massa molecular - C6 H8 N, 0, 5 - 172,20 Descrilo - P cristalino branco ou quase branco. Caracterfsticas ffsicas: Ponto de fuso: aproximadamente

165C.
ConservalJo - Recipientes bem fechados. Categoria - Antibacteriano.

Sulfato de amnio
Frmula e massa molecular(NH.), 50. - 132,13 EspecificalJo - Contm, no mnimo, 99,0 por cento (p/p). Descrilo - Cristais incolores, inodoros. CanlCtersticas ffsicas - Decompe-se acima de 280C. Conservalo - Recipientes bem fechados.

(p/p) de MnSO calculado sobre a substncia dessecada a 450-500 0c. Descri60 - Cristais ou p cristalino de cor rsea. Inodoro. Efloresce lentamente. CaracterfsticM ffsicM - Perde gua a aproximadamente 450 C. Conservalo - Recipientes bem fechados. Informa6oadicionalproduto comercial normalmente mistura de sulfato de mangans tetra e pentaidratado.

Sulfato de potssio
Frmula e massa molecular - K, SO. - 174,25 Especifica60 - Contm, no mnimo, 99,0 por cento

Sulfato de brio
Frmula e massa molecular - Ba 504 - 233,39 Especificalo - Contm, no mnimo, 97,5 por cento (p/p). Descrilo - P branco. fino e denso. Inodoro e inspido. Conservao - Recipientes bem fechados. Categoria - Contraste radiolgico para o trato gastrin-

(p/p) , calculado sobre a substncia dessecada. Descri/Jo - Cristais incolores ou p cristalino branco, de sabor amargo. Caracterfsticas fsicas - Soluo aquosa com carter neutro. Ponto de fuso: 1.067 C. Conservalo - Recipientes fechados. Sulfato de protamina Especificao - Consiste em mistura de protenas simples, obtidas de esperma e testculos de espcies adequadas de peixes. Possui a propriedade de neutralizar a heparina.

testinal.

DtI.crilo

- P cristalino fino, branco ou amodo fraca mente corado. Con.tlrVIIIo - Recipientes bem fechados, sob refrigerao. ArmllZtlflllg8fTI - Proteger do calor.

CsrtlCtflrf.tiCll'

ffsicas

Ponto de fuso: aproximada

mente 37C.
Conservs60 - Recipientes bem fechados.

Sulfato de sdio anidro

Frmuls ti mas. molecular - Preparado a partir do Na2SO . 10 H2 O por aquecimento a aproximadamente 100 oCo Contm, no mnimo, 99,0 por cento (pjp), calculado sobre a substncia dessecada. OtIlCri60 - P fino, branco, "solto", inodoro, de sabor salgado fracamente amargo. HigroSCpico. CartlCtflrlltiCll' f(.iClls - Ponto de fuso: aproximadamente SOOC. Conserva60 - Recipientes bem fechados. ArmsztlnBf/tIfI'! - Proteger da umidade.

Sulfato frrico amoniacal SR Especifics60 - Contm 10,0 g em gua a 100 ml. Conservs60 - Recipientes bem fechados. Sulfato frrico-ferricianeto de potaio SR - Misturar volumes iguais da soluo 0,5 por cento (P/V) de sulfato frrico em cido sulfrico 0,5 M e da soluo a 0,2 por cento (p/V) de ferricianeto de potssio. Esrabldsde - Preparar no momento de uso. Sulfato ferroso, heptaidratado
Snonfmia - Sulfato de ferro, heptaidratado. F6rmula emBlSBmolecular - FeSO . 7H20 - 278,01 Especifics60 - Contm, no mnimo, 98,0 por cento

Prepara60

Sulfato de s6dio decaidratado

Sinonlmia - Sal de Glauber. Frmula ti mBlSs molecular - Na2 SO. 10H2 O - 322,19 E.pecifiCII60 - Contm no mnimo 99,0 por cento

(pjp) de Na2SO., calculado em relao substncia dessecada. OtI.crilo - Cristais incolores transparentes ou p cristalino branco, eflorescente, inodoro, de sabor salgado fracamente amargo. c.,..c,.,.fltiCll$ f/siClls - Ponto de fuso: 32,5 oCo (Di5solve-se a aproximadamente 33C em sua gua de cristalizau) Conservalo - Recipientes bem fechados. Armszenag8fTI - Proteger do calor. Sulfato de zinco, heptaidratado Frmula ti mas. molecular - znSO . 7H2 O - 287,58 Especi(ics60 - Contm, no mnimo, 99,0 por cento (pjp) de ZnSO . 7H20 ou, no mnimo, 55,6 por cento (pjp) de ZnSO . DelCri60 - P cristalino branco ou cristais incolores transparentes. lnodoro, de gosto adstringente. Eflorescente. Caracttlrlsticas ffsicas - temperatura de 280C torna-se anidro. Con.ervs60 - Recipientes no-metlicos bem fechados. ArmszBnagsm - Proteger da umidade. Sulfato de zinco 0,1 M Descri60 - Contm 28,75 g de sulfato de zinco heptaidratado em gua a 1000 ml.
Constlrvs60 - Recipientes no-metlicos bem fechados.

(pjp) de FeSO . 7H2 O. Descrilo - Cristais azul-esverdeados; grnulos ou p cristalino verde. Inodoro. Eflorescente. Oxida-se pela umidade e luminosidade a sulfato bsico de ferro(llI) de cor marrom. Caracterlsticas (isic. - A 65 C transforma-se em monoldratado. ConsBrvs60 - Recipientes bem fechados. Armszenagem - Proteger do ar e da umidade. Informa60 adicional - No usar quando tiver cor mar rom [sulfato bsico de ferro(lII)]. Sulfato ferroso SR Especifics60 - Contm 8,0 g de sulfato ferroso heptaidratado em gua fria, recentemente fervida, a 100 ml. Preparar no momento de uso. Conserva60 - Recipientes bem fechados. Armszensgem - Proteger da luz, do ar e do calor. Sulfato ferroso 0,5 M - Contm 139,0 g de sulfato ferroso heptaidratado em gua a 1000 mI. Preparar 100 ml, no momento de uso. Conservslo - Recipientes bem fechados. Armszenagsm - Proteger da luz, do ar e do calor.
Especifica60

Sulfeto de amnio, em soluio

Frmuls ti mB11i8 molecular - (NH.)2 S - 68,14 E.pecificalo - Contm usualmente entre 16 a 20 por

Sulfato frrico 5inonlmia - Persulfato frrico. F6rmula ti massa molecular - Fe2(SO.),.xH20 Espeeificslo - O produto comercial contm normalmente cerca de 20 por cento de gua (pjp). OtIscri60 - P branco a amarelo, muito higroscpico; decompe-se em presena do ar. Constlrvs60 - Recipintes bem fechados. ArmszBnag8fTI - Proteger da luz e do ar. Sulfato frrico amoniacal
Frmula ti ma moleeular - FeNH.(SO.)2

cento equivalente em suifeto de enxofre expresso em (NH.)2S, Descrilo - Lquido de colorao amarela at vermelha, com odor amoniacal e de suifeto de hidrognio. Cristaliza a temperaturas inferiores a O oCo InformaiJtII adicionais - Para rotina analtica, use sulfeto de amnio SR.

.12H2 O -

-482,18.
Descri60 - Cristais transparentes -plido. lnodoro. Eflorescente.

incolores a violeta-

Sulfeto de amnio SR Prepsf'8io - Saturar 60 ml de amnia SR com sulfeto de hidrognio e juntar 40 ml de amnia SR. Usar soluo de preparo recente. Conserva60 - Recipiente pequeno, bem cheio. Armszenagem - Proteger da luz e do calor. Estabilidade - Diante de precipitao abundante de enxofre, desprezar a soluo.

Sulfeto de hidroJnio
Sinonlmia - cido sulfdrico Frmula, mlJSla molecular - H2 S - 34,08 E,pecificlIlo - Produzido pelo tratamento

de sulfeto ferroso (ou outros sulfetos) com cidos sulfrico ou clordrico diludos. DelCrilo - Gs incolor de odor caracterstico e sabor adocicado; mais denso do que o ar. Caracterf,ticas flsicas - Densidade relativa ao ar: 1,19. Temperatura de igniio: 260C. Consarvlllo - Disponvel tambm em cilindros pressurizad01. Ssgurene - Txico. Veneno. Inflamvel. Sulfeto de hidrognio SR El{JIJCificlI'o - A soluo aquosa saturada a 20C contm em torno de 0,4 a 0,5 por cento (p/V). Preparada pela passagem de H2 S em gua fria. Caracterf,ticIJ' fI,ica, - pH da soluio aquosa recm-preparada: 4,5. E,tabilidada - Preparar para uso imediato. Ssgurana - T6xico. Veneno! Inflamvel. Sulfeto de &dio
Frmule e malSa molecular -Na2 S.9H2 0- 240,18 Dercrilo - Cristais mcolores deliqescentes que se am.

E,ptIClflclIlo - Contm 84,34 por cento de C. H. 0, Na2 e 15,66 por cento de H20. Aquecido a 150C, perde, no m{nimQ, 15,6 e, no mximo, 15,7 por cento de seu peso. DelCrllo - Cristais transparentes. Con.rvll'o - Recipientes bem fechados.

Tartarato de !dio e potssio - Sal de RocheUe ou de Seignette, tartarato duplo de potssio e s6dio, trtaro emtico. Frmula e masSll molaculllr - C4H4KNa06' 4H~ 0282,22; anidro - 210,16
Slnonfmla - Contem, no mnimo, 99,0 por cento (p/p), calculado em base seca de C.H.KNaO,. Descrllo - Cristais incolores ou p6 cristalino branco, inodoro, de sabor salgado. Eflorescente ao ar quente. Con.rvalo - Recipientes hermticos. Arrntlzenllgem - Proteger do calor. Especlficll'o

Tartarato de !dio e potssio SR ElPtlClficlllo - Contm 20,0 por cento (p/V). Con.rvalo - Recipientes bem fechados. Tetraborato sdico
Sinonfmia - Borato sdico, brax. Frmula e massa mo/ecular - Na2 8.07

.10H20 - 381,37; 99,0 por cento

anidro - 201,22
EsptIClficlIio - Contm,

relam pelo ar e pela ao da luz; de odor semelhante ao do sulfeto de hidrognio. Caract,rfsticas fl,icas - Ponto ae fuso: aproximadamente 50C. Con,ervll'o - Recipiente bem fechado, no frio. ArmuenBfJem - Proteger do ar, da luz e do calor. Sulfeto de &dioSR E,peclfica'o - Contm 1,0 g (p/V) em gua a 10 ml. Estabilidade - Preparar para consumo imediato. Tanino
Sinonlmla - cido tnico. Especlfica'o - Obtido de cascas de diversas plantas,

no mnimo,

(p/p).
- Cristais incolores ou p cristlino branco, inodoro, de sabor custico. Eflorescente. ConSBrJIIIIo - Recipientes bem fechados; efloresce ao ar seco. Armazentlf/em - Proteger do ar. DelCrllo

Tetraborato Idico 0,01 M - Dissolver 3,80g de Na28.0,.10H20 em gua a 1000 ml. Con.rvlI'o - Recipientes bem fechados. Arrntlzenllflllm - Proteger do dixido de carbono. Informlllo adlcionalCalibrao de medidor de pH.
PrllpafBlo

consistindo, especialmente, de mistura de substncias polifen6licas. De,crllo - P6 amarelo a marrom. Odor fracamente caracterstico e sabor adstringente. Con.rvalo - Recipientes bem fechados. ArmazenBfJflm - Proteger da luz. Rotulaflllm - A rotulagem deve indicar a fonte botnica. Tartarato cido de epinefrina Slnonlmia - Bitartarato de epmefrina. Frmula e massa molecular - eu H" NO, - 333,29 Especlflcalo - Contm, no mnimo, 97,0 por cento (p/p), calculado sobre a substncia dessecada. DelCrl'o - Cristais ou p cristalino branco a brancocinza. Inodoro. CafBcterlsticas flslcas - Ponto de fuso: aproximadamente 150C, com decomposio. Con.rva'o - Recipientes hermticos. Estabilidade - Escurece lentamente pela exposio ao ar e luz. ArmazenBfJflm - Proteger do ar e da luz. Cattlfloria - Adrenrgico. Tartarito de sdio FrmulB e massa molecular 230,08

Tetracloreto de carbono
Frmula 11 maSSllmolecular - CCl. - 153,82. EsptICificlI'o - Contm, no mnimo, 99,0 por cento

(p/p).
DII,cri'o -

Lquido incolor, lmpido, denso e de odor

ffsicas -

caracterstico.
Carscterf,ticlIs

Densidade: 1,4607.

1,588

Ponto de ebuliio: 76-77 oCo a 1,590. Indice de refrao (n20):

Con.rvlllo - Recipientes hermticos. ArmazenBfJflm - Proteger da luz e do calor. Segurana - Veneno (nas formas lquida e gasosa)! Informalo adicional - No inflamvel, porm libera

fosgnio (t6xico) em presena de chama. Tetrafenilborato de sdio

FrmulB a rntISSIImolllcul.r - C2 H20 BNa - 342,22 DlIscri'o - P ou cristais brancos ou quase brancos. Con.rvalo - Recipientes bem fechados.

Tetra\drofurano
Frmula 11 massa molecular - C. H, O - 72,11. EsptICificlllo produto adicionado de establlizantes

C. H. 0. Na2 .2H2

(p-cresol, hidroquinona) na proporo 0,05.{1,1 por cento para evitar a formao excessiva de perxidos.

D.lCri,o

Lquido incolor. Odor intenso e semelhante

Tlopcoiato

de s6dio

ao do ter.
~f8Ct.rl'tic.' ff,ic - Ponto de ebulio: 65-66C. Densidade: aproximadamente 0,889. fndice de refralo (nO): 1,4070. Con.rll.lo - Recipientes bem fechados: pequenos e repletos. Armsnnllf/tlm - Proteger da luz. SegunJns- Irritante pele, olhos e mucosas.

Frmul mll"lI molecul.r - C.H,NaO,S - 114,09 E,pecifiell6o - Contm, no mnimo, 95,0 por cento (p/p). Deserilo - P cristalino branco, higroscpico, de odor

fraco caracterstico.
Conservalo - Recipientes hermticos. Armszenegem - Proteger da luz e do ar.

Tiouulfato de Idio Tetnoxalato

F6rmuls. D.lCri'o

de potslo

msWl mol.cul.r - C4 H, KO 2H, 254,20 - P cristalino branco ou cristais incolores ou - Recipientes bem fechados.

Sinonfmi. - Hipossulfito de sdio R. Frmul mil'" mol.eul.r - Na, S, 0, .5H, 0- 248,17 Especifieslo - Contm, no mnimo, 99,0 por cento

brancos.
':on.rIlB'o

Tetnoxalato
Prep.r.lo

de potslo 0,05 M
- Dissolver 12,71 g de tetraoxalato

de potssio dUdntado em a 1 000 ml. Con.rIlB'o - Recipientes bem fechados. Informslo .dicionslCalibralo de medidor de pH.

'aua

(P/p), calculado sobre a substncia dessecada. - Cristais incolores, ou p cristalino branco, facilmente eflorescentes, de sabor fracamente amargo. ClInJcterf,tic., fl,icBl - Ponto de fuso: aproximadamente 48C (aquecimento rpido). Dissolve em sua gua de cristalizao a aproximadamente 49 oCo Consertlllio - Recipientes bem fechados.
DelCri'o

Tioacetamida
F6rmuls. D.lCri'o m.". mol.cul.r - C, H. NS - 75,13. - Cristais ou p cristalino branco. Fraco odor

TlolSUlfato de sdio 0,1 M Prt1psnJio - Dissolver 2,5 g de tiossulfato de sdio e 0,02 g de carbonato de sdio em gua isenta de dixido de carbono a 100 mL ConSllrllBio - Recipientes bem fechados. Tolueno
Sinonimis - Metilbenzeno, toluol. Frmula" m.sSll moleculsr - C,H. - 92,14 Dflscri'o - Lquido incolor de odor caracterstico.

de mercaptana.
ClIrsct.r1ltic fl,ic - Ponto de fuso: 113-114 oCo Con.rtmlo - Recipientes bem fechados.

Tioacetamlda SR
P,.,p.nJ'o - Misturar 0,2 ml da soluo de tioacetamida

Inflamvel.
ClIraeterlsticlIs fsicas ~ Ponto de ebulio: 110-111

a 4,0 por cento (p/V) e 1,0 ml da seguinte mistura: 1,5 ml de hidr6xido de sdio 1 M, 0,5 ml de gua e 2,0 ml de glicerol. Aquecer em banho-maria durante 20 segundos E,t.bilid.de - Preparar no momento de uso.

0c.

Densidade: aproximadamente 0,87. fndice de refrao (nO): 1,4967. SegunJns- Txico! Inflamvel! Torina

Tioclanato de Imnlo SinonfmiB - Sulfocianato de amnio. Frmul., m." molecul.r - N14SCN - 76,12 Descrilo - Cristais deliqescentes. ClInJCterl,tic. ff,ies, - Ponto de fuso: aproximadamente 149C. Con~rvslo - Recipientes hermticos. ArmllZflnllgtlfTl - Proteger da umidade. Tloclanato de am6nlo SR E,pecifieslo - Contm 8,0 g em gua a 100 mL Conserll.lo - Recipientes bem fechados. Tloclanato de amnio 0,5 M Especiflc.lo - Contm 3,8068 em sua a 100 ml. Con.rvslo - Recipientes bem fechados. TIoclanato de potssio Sinonfmill - Sulfocianato de potssio. Frmulll mu" molllculer - KSCN - 97,18 E$pecfficBIo - Contm, no mnimo, 99,0 por cento (p/p). ClInJcter{,ticn ff,icu - Ponto de fuso: aproximadamente 173C. Con.rllslo - Recipientes bem fechados. SegunJn. - Pode causar erupes cutneas, psicose! Tioclanato de potsio aproximadamente M Especifics'o - Contm 9,7 por cento em sua (p/V).

F6rmul.

fi

mBISII moleculBr - CUHIIAsN,Na1010S,

530,19 Trixido de arsnio

Sinonlmi. - xido arsenioso. F6rmul. e m.SI' molecul.r - As,O, Descr;'o - P cristalino branco

- 197,84 ou transparente,

ou

massa amorfa.
CBracterf,tieBl fl,icBl - Aquecimento rpido determina fusfo ou sublimao. Con.rIlB'o - Recipientes bem fechados. Stlf/UnJnll- Veneno!

Trixido de cromo
SinonfmB - Anidrido clmico. F6rmullI" mil'" mol.eulllr - CrO, - 99,99 D.scrilo - Cristais ou p granulado ou escamas marrom

avermelhadas, deliqescentes. CBrllCterlltic., flsie - Ponto de fuslo: aproximadamente 197 C. Con.rva'o - Recipientes de vidro hermticos. Armllzenl{/flm - Evitar proximidade com inflamveis. Segurens - Oxidante enrgico. Irritante. Trombina
- Preparado biolgico obtido de plasma humano, por tcnicas de fracionamento apropriadas. D"lCri'o - Pamorio de cor creme. Con.rlllllo - Recipientes bem fechados, sob refrigerao, especificando data de preparao e potncia. E,pecificlI'o

ArrNzllnegem

Proteger da luz, da umidade e do oxi

gnio.
ClItegorill - Enzima. Hemosttico local.

Tromboplutina
Sinonmill - Fator 111 (coagulao sangUnea). .ElfHJCifiCIIIo - Preparado biolgico de origem animal,

- Contm, no mnimo, 97,0 por cento (p/p), calculado em relao substncia dessecada. DelCl'ilo - P cristalino ou amorfo, de sabor fracamente amargo. Con.rvlllo - Recipientes bem fechados. ArlTlllzenllgtlm - Proteger da luz . ClItegoris - Anticoagulante. ElPecificBlo

obtido por extrao de determinados rgos: crebro, pulmlo. DIIscrilo - P ou suspenso de cor amarelada, de odor caracterstico. ClIrectrlr,tic., ff,ic.l - Na presena de concentraes apropriadas de ons clcio, apresenta atividade tromboquinase na coagulao sangUnea. Co".rvIIIo - Recipientes hermticos. Rotulegem - Especificar na composio: ons e qentes antimicrobianos, suas concentraes, bem como orilem, data de preparao, atividade. Armazenllgem - Proteger do calor e umidade. Manter sob refrilerao . ClItegorill - Preparao com atividade enzimtica. Hemosttico local. Trometamina
F6rmulll li msus moleculsr - C.Hu NOs - 121,14 ElPecifiClllo - Contm, no mnimo, 99,0 por cento,

Zinco, ativado
Prtlpsflllo - Cobrir uma quantidade

de zinco granulado com soluo de cido cloroplatnico(lV) contendo SO/lg/ml. Deixar em repouso durante 10 minutos. Aps lavar, escorrer e secar imediatamente. Con.rtlll60 - Recipientes bem fechados.

Zinco, panulado Estvel ao ar seco. Converte-se em carbonato bsico quando exposto umidade. ClI,.ctrlrf,tics, f,ics, - Toma-se malevel a 100-150 oCo Queima em presena do ar com chama verde-azulada. Con.rvlllo - Recipientes bem fechados. Armuenlll/flm - Proteger da umidade. Stlgurtlnll - Txico! Zinco SRA - 5 malml ElP;ifiCII'o - Contm 2,50 g de zinco granulado em 20 mI de cido clordrico 5 M. Completar com gua a SOOmL Con.rtllllo - Recipientes bem fechados, inertes (tipo polietileno ).
Sfmbolo li mBUlIst6mics - Zn - 65,38 DelCl'ilo - Metal lustroso branco-azulado.

calculado sobre a subltncia dessecada.

DII,crilo - Cristais brancos. ClIrectrlr,tics, ff,ic., - Faixa

de fuso: pU da soluo 0,1 M: 10,4. Con.rvalo - Recipientes bem fechados. Vufuina l6dica

168-172 oCo

F6rmule li m_

moleculsr - C1 H1 5 NaO. - 330,31

XII.3. SOLUES VOLUMTRICAS

As solues volumtricas (SV) esto acompanhadas de mtodo de padronizao, embora possam existir outros que conduzam ao mesmo grau de exatido. Os valores obtidos na padronizao so vlidos para todos os usos farmacopicos. Os reagentes empregados devem possuir grau quimicamente puro e, quando necessrio, ser submetidos dessecao. As solues volumtricas so padronizadas e usadas a temperaturas ao redor de 25C. Diante de variaes significativas de temperatura, a soluo volumtrica deve ter ttulo conllmado na mesma temperatura ou ser aferi da mediante fator de correo.

cido clordrico M SV Elf)flCiflCtllo - Contm 85,0 ml de cido clordrico em gua a 1000,0 ml. PJronizslo - Pesar exatamente cerca de 1,5 g de carbonato de sdio anidro. Juntar 100 mI de gua e duas gotas de vermelho de metila SI. Adicionar o cido lentamente, a partir de bureta, at colorao rsea fraca .. Aquecer a solu;to at ebulio; esfriar e continuar a titulao. Repetir esta seqncia de operaes at que o aquecimento no afete a colorao rosea. Calcular a molaridade. Cada 52,99 mg de carbonato de sdio anidro equivale a 1 ml de cido clordrico M. Con.rva'o - Recipientes hermticos. Armuenegem - Proteger do calor. cido perclrico 0,1 M em cido actico - Contm 10,0 g em cido actico a 1000 ml. PlldronizlIio - Dissolver, sob agitao, 8,5 ml de cido perclrico em 200 a 300 mI de cido actico glacial. Acrescentar 20 ml de anidrido actico, diluir a mistura a 1000,0 mI com cido actico glacial e deixar em repouso por 24 horas. Deternnar o teor de gua, que deve situarse entre 0,02 e 0,05%. Pesar exatamente cerca de 700 mi de biftaJato de potssio previamente pulverizado e de. secado a 120C por 2 horas e dissolv-Io em 50 ml de cido actico glacial em frasco de erlenmeyer de 250 ml de capacidade. Adicionar 2 gotas de cloreto de metllrosanilnio e titular com a soluo de cido perclrico at que a colorao violeta mude para verdtHlsmeralda. Cada 20,42 mi de biftalato de potssio equivale a 1 ml de cido perclrico 0,1 M.
Espificaio

Aguardar 5 minutos e titular o iodo liberado com tiossulfato de sdio 0,1 M, usando 3,0 ml de amido SR como indicador. Preparar um branco. Corrigir e calcular a molaridade. Cada ml de bromato de potssio correspondc a 6 ml de tiossu1fato de sdio 0,1 M. Con.rvalo - Recipientes bem fechados. Armazenagem - Proteger da luz. DiclorofenoI-indofenol, soluio padrio Prepartlio - Dissolver 0,05 i de 2,6-diclorofenol-indofenol sdico em 50 ml de gua com 0,042 mg de bicarbonato de sdio. Agitar Yigorosamente. Aps dissoluo, completar com gua a 200 ml. filtrar. Plldronizalo - Pesar exatamente 50 mg de cido ascrbico e duir com cido metafosfrico-actico SR a 50 ml. Para balo de 50 ml, transferir imediatamente 2 mI da soluo de cido ascrbico e adicionar 5 ml de cido metafosfrico-actico SR. Titular rapidamente com a soluo de diclorofenol-indofenol at persistir cor rsea por, pelo menos, 5 segundos. Fazer determinao em branco, titulando 7 ml de cido metafosfrico~ctico SR, adicionada de quantidade de gua igual da solu;to de diclorofenol-indofenol usada na titulao do cido ascrbico. Expressar a concentrao da soluo padro em termos de seu equivalente em mg de cido ascrbico. Con.rv~o - Recipientes bem fechados. Edetato disldico 0,05 M SV Sinonlmla - EDTA dissdico 0,05 M, etilenodiaminotetraacetato dissdieo 0,05 M. EsptICific~o - Contm 18,6 i de edetato dissdico diidratado em gua a 1000 ml. PadronizBIo - Pesar exatamente cerca de 200 mg de carbonato de clcio. Transferir para copo de bquer de 400 ml e adicionar 10 ml de gua. Agitar e cobrir o copo com vidro de relgio. Juntar 2 ml de cido clordrico dlludo e agitar at dissoluo do carbonato de clcio. Lavar as paredes do copo de bquer e o vidro de relgio com gua at cerca de 100 mI. Continuar agitando, mapeticamente. Adicionar 30 ml da soluio de edetato dissdico a partir de bureta de 50,0 mI. Juntar 15 ml de hidrxido de sdio SR e 300 mg do indicador azul de hidroxinaftol. Continuar a titulaio da soluo de edetato dislldico at cor azul. Calcular a molaridade. Con.rvtlIo - Recipientes bem fechados. Hidrxido de potaio M SV Preparao - Dissolver 60 g de hidrxido de potssio em gua a 1000 ml. Adicionar soluo saturada de hidri>Xldo de bario, recentemente preparada, at que no se forme mais precipitado. Agitar e deixar em repouso durante aproximadamente 12 horas. Decantar o lquido

cido lUlfrico M SV - Contm 9~,07 g de cido sulfrico em gua a 1000,0 mI. PlHironlzalo - Adicionar lentamente, sob agitao, 60,0 ml de cido sulfrico sobre 1020 mI de gua. Esfriar 'a temperatura ambiente. Determinar a mo\aridade por titulao com carbonato de s dia, conforme descrito para cido clordrico M, porm pesando exatamente cerca de 3,0 g de carbonato de sdio anidro. Cada 105,98 mg de carbonato de sdio anidro equivale a 1 ml de cido sulfricoM.
Elf)flCific~o

8romato de potssio 0,1 M SV EspflCificaio - Contm 16,704 i de bromato de potssio em gua a 1 000 ml. PJroniza6o - Medir exatamente volume em torno de 40 ml da soluo de bromato de potssio. Juntar 3,0 g de iodeto de potssio e 3,0 ml de cido clordrico SR.

lmpido, ou filtrar, e transferir para recipientes de mate rial inerte (tipo polietileno). PMJroniz~o - Usar o mesmo procedimento adotado para o hidr6xido de 56dio M; Con.rll~lo - Recipientes bem fechados, Inertes (tipo polietileno). s.,urena - Custico. Hidrxido de sdio M SV

cor azul permanente. Calcular a molaridade. Cada 4,946 ma de tri6xido de arsnio equivale a 1,0 ml de iodo O,lM. Con.rv.lo - Recipientes de vidro bem fechados. Arm.nn.m - Proteler da luz. Metxido de Idlo 0,1 M SV Esptlclfic.lo - Contm 5,402 g em soluo tolueno metanol a 1000 ml. Aldronjz~o - Esfriar em banho de gelo 150 ml de metanol, contidos em balo volumtrico de 1 000 ml. Adicionar, em pequenas pores, cerca de 2,5 g de sdio metlico recm-cortado. Aps a dissolu'o do metal, adicionar tolueno at completar 1000 ml e misturar. Manter esta soluo em recipiente ao abrigo do dixido de carbono. Pesar exatamente cerca de 400 ml de cido benzico, dissolver em 80 ml de dimetilfonnamida, adicionar 3 gotas de soluo de azul de timol em dimetilformamida a 1% (PN) e titular pela soluo de metxido de sdio at o aparecimento de colorafo azul. Cada 12,21 mg de cido benzico equivale a 1 ml de metxido de sdio 0,1 M. Nitrato de mercrio(lI) 0,1 M SV
Sinonlmia - Nitrato mercrico 0,1 M. Preperao - Dissolver cerca de 35 g de nitrato de merc-

Prtp.re'o - Preparar soluo de hidrxido de s6<110 SO% (pN) com gua isenta de dixido de carbono. Esfriar
temperatura ambiente e deixar sedimentar. RetUar 82 ml do sobrenadante e duir com gua a 1000 ml. PMJroniz.lo - Pesar exatamente cerca de S I de birta lato de potssio dessecado e dissolver em 7S ml de lua isenta de dixido de carbono. Juntar duas gotas de fenolfta1ena SI e tituJu com a soluio de hidr6xido de sOdio at. ronnalo pennanente de cor rosea. Cada ml de hidlxido de s6dio M SV equivale a 204,22 ml de bifta. lato de potssio. Con.rvelo - Recipientes bem fechados, inertes (tipo polietileno). Rolhas providas de tubo contendo a mistura hidr6xido de sdio e xido de clcio. ArfTIIIZtm.!/f1ITIProteger do dixido de cubono. SlIfIurens - Custico. Inform.o lIdicio~1 - Conferir o ttulo com freqncia. Hidrxido de tetrabutillUllnlo 0,1 M Especificec60 - Contm 25,95 g em metanoJ.tolueno a 1000ml. PffJDllriI60 Dissolver 40 g de iodeto de tetra-n butilamnio em 90 ml de metanol anidro, em frasco de edenmeyer provido de rolha esmerilhada. Colocar em banho de gelo, adicionar 20 g de xido de prata pulverizado, tampar o frasco e agitar vigorosamente por 60 mio nutos. Retirar alguns ml e centrifugar. Verificar presen. a de iodeto no lquido sobrenadante. Seo teste positivo, adicionar mais 2 g de xido de prata e deixar em repouso por 30 minutos, agitando ocasionalmente. Filtrar atravs de funil de placa porosa, lavar o erlenmeyer e o funi com 3 pores de 50 ml de tolueno e juntar o tolueno de lavagem ao filtrado. Completar o volume a 1000 ml com a mistura de trs volumes de tolueno anidro e um volume de metanol anidro. Passar sobre a sol'ufo,por 10 minutos, corrente de nitrognio isento de dixido de carbono. Guardar em recipiente protegido do dixido de carbono e da umidade. Consumir em 60 dias. Determinar a molaridade no dia de uso, dissolvendo cerca de 400 mg de cido benzico exatamente pesados, em 80 ml de dimetilformamida. Adicionar a esta soluo 3 gotas de soluo de azul de timol em dimetilforrnamida a 1% (pN) e titular com soluo de hidlxido de tetnbuti/amnio at colorao azul. Utilizar bureta provida de tubo de absoro de dixido de carbono. Efetuar ensaio em branco. Cada ml de hidrxido de tetnbutDamnio equivale a 12,21 mg de cido benzico.
10<100.1 MSV PlTIfJereo- Dissolver cerca de 13 g de iodo em t 00 ml

rio(lI) em 5,0 ml de cido ntrico e 500 ml de gua. Completar com gua a 1000 ml. Pedronizalo - A 20,0 ml desta soluo, adicionar 2 ml de cido ntrico SR e 2 ml de sulfato frrico amoniacal SR. Resfriar temperatura inferior a 20C e titular com tiocianato de amnio 0,1 M at aparecimento permanente da colorao marrom. Calcular a molaridade. Conservao - Recipientes bem fechados. Nitrato de prata 0,1 M SV Preperalo - Dissolver cerca de 17,5 g de nitrato de prata em gua a 1000 ml. Pedronizelo - Pesar exatamente cerca de 100 mg de cloreto de sdio, dessecado; transferir para copo de bquer de 150 ml e dissolver em 5 ml de gua. Juntar 5 ml de cido actico SR, 50 ml de metanol e trs gotas de eosina Y SI. Agitar, de preferncia com agitador magntico, e titular com a soluo de nitrato de prata. Calcular a moluidade. Cada ml de nitrato de prata 0,1 M SV corresponde a 5,844 mg de cloreto de sdio.
ConllBrvalo - Recipientes bem fechados. Armazenegem - Proteger da luz.

Nitrito de sdio 0,1 M SV

Especificao - Contm 6,900 g de nitrito

de sdio em

gua a 1000 ml.

PadronizeJo - Dissolver 7,5 g de nitrito de sdio em gua e completar o volume a 1000 ml. Pesar exatamente cerca de 500 mg de sulfanilamida previamente dessecada por 3 horas aiOS oCo Transferir para bquer, adicionar 20 ml de cido clordrico e 50 ml de gua. Agitar at dissoluo e esfriar a 15C. Mantendo a temperatura em torno de 15 e, titular lentamente com soluo de nitrito de sdio usando como indicador externo amido iodetado, at viragem. Cada 17,22 mg de sulfanilamida equivalem a 1 ml de nitrito de sdio 0,1 M.

de iodeto de potssio 3,6 por cento (p/V). Juntar trs gotas de cido clordrico e completar com qua a 1000 ml. PMJronizeio - Pesar exatamente cerca de 150 mg de trixido de arsnio. Dissolver em 20 ml de hidrxido de sdio M, aquecendo se necessrio. Adicionar 40 ml de gua, duas gotas de alaranjado de metila SI e cido c1or drico diludo at cor rsea. Juntar 50 ml de carbonato de sdio a 4,0 por cento (pIV) e 3,0 ml de amido SI. Titular com a soluo de iodo. a partir de bureta, at

Sulfato de zinco 0,1 M SV Especificao - Contm 16,144 g de sulfato de zinco heptaidratado em gua a 1000 ml. Preparao _. Dissolver 28,8 g de sulfato de zinco em

lua e completar o volume a 1 000 rnl. Pipetar 20 ml da soluA'o de edetato diss6dico 0,05 M para um frasco de Erlen meyer de 250 niJ. e adicionar, nesta ordem, 20 ml de solufo tampao cido actico-acetato de amnio. 100 ml de lcool e 2 ml de ditizona SR. Titular pela solulo de sulfato de zinco at a colorao rosa claro. Calcular a molaridade. Tetrafenilborato sdio em de ldio 0,02 MSV de ml. PMJronlz~ - Plpetar duas pores de 15 rol em dois copos de bquer. A cada um deles, adicionar 1,0 ml de cido actico SR, 25 ml de gua e, lentamente, sob agitafo, 25 ml de blftalato de potssio a 5,0 por cento (p/V). Deixar em repouso por duas horas. Filtrar uma das misturas em cadinho fl1trante, de vidro sinterizado (porosidade 100-160 micrmetros) e lavar o precipitado com gua fria. Transferir o precipitado com 50 ml de gua e agitar intermitentemente por 30 minutos. Filtrar e usar o fl1trado como soluio saturada de tetrafenllborato de potssio no seguinte procedimento de padronizaio. Filtrar a segunda mistura em cadinho filtrante, de vidro sinterizado, tarado, e lavar com trs pores de 5 ml da solulo saturada de tetrafenilborato de potssio. Secar o precipitado a 105C durante uma hora. Cada g de tetrafenilborato de potssio equivale a 955,1 mg de tetrafenilborato de s6dio. A partir do peso do tetrafenilborato de sdio obtido, calcular a molari,dade da soluo. COnllBrvlJ'o Recipientes bem fechados. -

E,tellldlld.

- Usar solues recentes.

Preper.Io - Dissolver 6,845 g de tetrafenilborato

aua a 1 000

Tiocianato de am6nio 0,1 M SV Dissolver cerca de 8,0 g de tioclanato de amnio em aua a 1000 ml. PMJronlz~ - Misturar exatamente 3011 ml de nitrato de prata 0,1 M com 50,0 ml de gua, 2,0 ml de cido ntrico SR e 2,0 ml de sulfato frrlco amoniacal SR. Titular com a solulo de tiocianato de amnio at aparecimento da cor castanho . vermelhada. Calcular a molaridade. Con.rv.'o - Recipientes bem fechados.

p,.".,.lo -

TIosaulfato de sdio, 0,1 M SV Prepers'o- Dissolver cerca de 25 g de tiossulfato de sdio pentaidratado e 200 mg de carbonato de sdio em gua, recentemente fervida e resfriada, a 1000 ml. Padronlzalo - Pesar exatamente cerca de 210 mg de dicromato de potssio, pulverizado e dessecado, e dissolver em 100 ml de gua. Transferir para bailo de 500 ml e adicionar 3,0 g de iodeto de potssio, 2,0 g de bicarbonato de sdio e 5,0 ml de cido clordrico SR. Agitar e deixar em repouso por 10 minutos no escuro. Titular o iodo liberado com a soluo de ossulfato de sdio at cor verde-amarelada. Adicionar 3,0 ml de amido SR e continuar a titulao at desaparecimento da cor BZUl. Calcular a molaridade. Cada ml de tiossulfato de sdio 0,1 M SV corresponde a 4,903 mg de dicromato de potssio. Con.rvalo - Recipientes bem fechados. Informlllo .dicionalConferir o ttulo com freqncia.

Certos ensaios fannacopicos exigem o ajuste ou a manuteno de pH. Para tal, empregam~e solues denominadas tampes, capazes de suportar variaes na atividade de ons hidrognio. Os componentes requeridos esto descritos no item Reagentes. Os de natureza cristalina devem ser previamente dessecados a 110-120 c por uma hora; utilizar gua isenta de dixido de carbono. A armazenagem deve ser feita em recipientes hermticos e apropriados. Considerar a estabilidade no preparo das quantidades para consumo. A seguir, relacionam-se as solues 'em ordem crescente de valores de pH. Outros tampes com caractersticas particulares so descritos nos textos dos respectivos ensaios.

Tampo acetato - cido clordrico - pU 3,5 Dissolver 25,0 g de acetato de amnio em 35,0 mI de gua. Adicionar 38,0 ml de cido clordrico 7 M. Ajustar o pH com cido clordrico 2 M ou com hidrxido de amnio 5 M e diluir a 100 ml com gua.
PrePBra60 -

dissolver 2,38 g de fosfato de sdio dibsico em gua e diluir a 100 ml. Misturar 38,9 ml da soluo de fosfato de potssio monobsico com 61,1 ml de soluo de fosfato de sdio dibsico. Tampio fosfato - pH 7,2 - Juntar 250,0 ml de fosfato de potssio monobsico O,2M e 175,0 ml de hidrxido de sdio 0,2 M. Completar o volume a 1000 ml.

Tamplo acetato - pU 4,4 PrePBrBIo - Dissolver 136,0 g de acetato de sdio e 77 g de acetato de amnio em gua e diluir a 1000 mI. Adicionar 250 ml de cido actico glacial e homogeneizar. Tampio cido actico - acetato de amnio - Dissolver 77,1 g de acetato de amnio em gua, adicionar 57,0 ml de cido actico glacial e completar com gua a 1000,0 mI.

Prepartllo

Preparao

Tampio a1bumina- fosfato - pU 7,2 - Dissolver 4,26 g de fosfato de sdio dibsico anidro, 7,6 g de cloreto de sdio e 10 g de albumina srica bovina em gua. Completar o volume a 1 000 ml e antes de usar ajustar o pH com hidrxido de sdio 2 M ou com cido fosfrico a 100,0 por cento (P/V).
Preparalo

PrePBrelo

Tamplo follato - pU 6,0 - Misturar 50,0 ml de fosfato de potssio monobsico 0,2 M e 5,70 ml de hidrxido de sdio 0,2 M. Completar o volume a 200 ml com gua.

Tamplo imidazol - pH 7,4 - Dissolver 3,40 g de irnidazol e 5,84 g de cloreto de sdio R em gua. Adicionar 18,6 ml de cido clordrico 1 M e completar com gua a 1000 mI.
PrePBrsio

Pre".ralo

Tamplo fOlfato - pU 6,8 - Dissolver 28,80 g de fosfato de sdio dibsico e 11,45 g de fosfato de potssio tribsico em gua e completar o volume a 1000 ml. Tamplo fosfato equimolar 0,025 - pH 6,86 Pre".rslo - Dissolver 3,53 g de fosfato de sdio dibsico e 3,39 g de fosfato de potssio monobsico em gua a completar o volume a 1 000 mI.

Pre".ralo

Tamplo tria-cloreto de sdio - pH 7,5 - Dissolver 7,27 g de trometamina e 4,97 g de cloreto de sdio em 950 ml de gua. Ajustar o pH em 7,5 com cido clordrico 2 M e completar com gua a 1000 ml. Tampo barbital - pH 8,6 - A 129,0 ml de Cido clordrico 0,1 M adicionar volume suficiente de barbital sdico 0,1 M para completar 1000 ml.

Preparalo

Tamplo acetato pH 7,0 Preparao - Dissolver 2,73 g de acetato de sdio em aproximadamente 70 ml de gua. Ajustar o pH a 7.0 com cido actico 0,5 M. Completar com gua a looml. Consertlao - Recipientes bem fechados. Tamplo fosfato M/15 - pH 7,0 - Dissolver 0,908 g de fosfato de potssio monobsico em gua e diluir a 100 ml. Separadamente,
PrtlPBrelo

Prtlparlllo

Tampo cloreto de amnio - pH 10,0 - Dissolver 5,4 g de cloreto de amnio em 70 ml de hidrxido de amnio 5 M e diluir com gua a 100 ml.

TamploaIDnia - pH 10,9 PrePBrs'o - Dissolver 67,5 g de cloreto de amnio em 650 mI de amnia 13,5 M e diluir com gua ai 000 ml.

XUI.ANEXOS
o contedo da monopatW CODItantes tfo-tOmente i orientalo dOI usurios.
_01

DIo COIIItitui em exilncia farmacopica. deatiDmdo-te

XlII.l. METODOLOGIA PARA O TESTE DE SENSIBILIDADE AOS ANTIBACTERIANOS (ANTIBIOGRAMA)

Utilizar os discos de sensibilidade aos antibacterianos que satisfaam s exigncias descritas na seo VIII. O armazenamento dos discos em seu recipiente original deve ser feito entre as temperaturas de -20 aIO oCo Antes de usar os discos, o recipiente deve ser mantido em temperatura ambiente por 20 a 30 minutos para descongelamento. Discos que contm penicilinas ou cefalosporinas, quando em recipientes que j foram abertos, no devem ser usados alm de uma semana. O meio de cultura recomendado para o teste do antibiograma o meio de gtll' MuelleT-Hinton, contendo 20 a 35 rng de Mga+/litro e 50 a 100 rngdeCaa+jlitro cuja composio por litro a seguinte: infuso de carne, 300 g; hidrolisado de casena, 17,5 g; amido solvel, 1,5 g; e gar,10,0 g; pH 7,2-7,4 aps a esterilizao. Na preparao do inculo recomendado o meio de caldo MuelleT-Hinton.

inibio. Recomenda-se colocar apenas um disco de antibacteriano de cada grupo. 1.7 - Incubar a placa em posio invertida por uma noite (16-18 horas) temperatura de 35-37C. Incubaes em anaerobiose e COa devem ser padronizadas. Em caso de emergncia, podero ser consideradas leituras feitas antes do tempo estipulado, mas as leituras definitivas s o sero aps o tempo estabelecido. 1.8 - Proceder s leituras dos halos de inibio com o auxlio de rgua comum, paqumetro ou aparelho ptico, visualizando os referidos !ralos sempre da mesma posio. Interpretar os halos de acordo corri as Tabelas 1 e 2. 1.9 Expressar os resultados das leituras dos halos de inibio usando os seguintes cdigos: S, MS, I e R. "S" - Sens(l1el: Esta categoria infere que a cepa testada pode ser apropriadamente tratada com dose do agente antibacteriano recomendada para esse tipo de infeco e espcies infecciosas, a menos que seja contra-indicado. "MS" - Moderadamente Seru(l1el: Esta categoria inclui cepas que podem ser inibidas por concentraes de certos agentes antibacterianos (ex.: beta-lactmicos), os quais podem ser usados em altas doses ou ainda em stios corporais onde os antibacterianos se concentram mais. No caso de enterococos moderadamente sensveis sugere-se o uso de altas doses de penicilina associada a aminoglicosdio, se proveniente de infeco sistmica grave. "I" -IntermedJrio: Esta categoria interpretativa estabelece limites dentro dos quais so includos erros incontrolveis de tcnica. Zonas de inibio que caem dentro destes limites so consideradas equvocas. Se outros antibacterianos no puderem ser usados, recomenda-se o teste de sensibilidade por diluio seriada. "R" - Resistente: Nesta categoria enquadram-se as cepas que no so inibidas pelos antibacterianos que, administrados em doses normais, no alcanam nveis sricos e teciduais satisfatrios.

1.1 - Preparar e esterilizar 60 ml de gaT MuelleTHinton e passar para placa de Petri de 150 mm de dimetro, ou 25 ml, se a placa de Petri for de 90 mm de dimetro. Aguardar 30 minutos para completa solidificao. Esta solidificao pode ser feita em incubadora a 37C, para total evaporao das gotas de gua de condensao formadas sobre a superfcie do meio de cultura. 1.2. - Para microrganismos de difcil crescimento, como estreptococos, gonococos e Haemophilus, podem ser adicionados ao meio 5% de sangue desfibrinado de cavalo, carneiro ou humano (se isento de substncias inibidoras), "achocolatando-<>", se for o caso. 1.3 - Repicar, com auxilio de ala, quantidade no inferior a trs colnias idnticas do microrganismo a ser testado, para 5 ml de meio de cultura em caldo (Caldo MuellerHinton). Incubar o caldo inoculado por 2 a 8 horas temperatura de 35-37 oCoNo usar mistura de microrganismos na preparao do antibiograma nem ineulos obtidos por crescimento microbiano de 16-18 horas, a no ser para microrganismos de difcil crescimento. Contudo, deve ser observada a turbidez padro. 1.4 - Ajustar a turbidez do crescimento em caldo, comparando-a turbidez de soluo de sulfato de brio, assim preparada: 0,5 ml de cloreto de brio ddratado (SaCa' 2Ha O) a 1,175% (p/V) e 99,5 ml de soluo de cido sulfrico (Ha SO.) a 1% (0,18 M). 1.5 - Umedecer zaragatoa de algodo estril (50-100 mg/algodo) no caldo inculo ajustado, pressionando-<> contra as paredes do tubo para remover o excesso de caldo, e, em seguida, esfreglo nas vrias direes sobre a superfcie do meio contido na placa. Entreabrir a tampa desta por 3 a 5 minutos para a secagem do esfregao. 1.6 - Depositar os discos sobre a superfcie inoculada com o auxlio de pina flambada e fria. Pressionar os discos para melhor aderncia ao meio, mantendo-<>s distncia suficiente para evitar a superposio de zonas de

a) Na leitura dos halos de inibio podero ser observados alguns fatos, como, por exemplo, o aparecimento do vu do Proteus dentro do haJo, quando este microrganismo testado, fato este que deve ser desconsiderado. b) No caso de vrias colnias se desenvolverem dentro do halo de inibio, dever ser investigada a pureza da cepa sob teste. Se a cepa for realmente pura, comunicar o fato ao clnico. c) Certos antibacterianos produzem balos duplos, sendo um claro interno e outro turvo logo a seguir; considerar o balo turvo. d) Modificaes na preparao do inculo, bem como

ZOfM

de inibllo em mm fel Moda",. damente nrlvel

An ribactlJrianos

Owntidada

no
di,co

Cdigo

Resi,tlneie

fel Intermedl4ria
16-16

S6ns/IIIJ'

Amicacina (b) Ampicilina (el

301AO

AMI

< 14

~ 17

pl Gram-negetlvOI entrieos pl Steph'lJococeu,

(dI

10llg 101AO 10jlg 10 IAO 101AO

AMP AMP AMP AMP AMP

< 11 <28 < 19 < 16 < 21

12 - 13

~ 14 ~29 ~20

pl Heemophllu, sp (el pl Enteroeoeos (t, g) pl Estreptococoa nlio enterococoa (f, g)

Senzilpenicilina

~17
22 -29

20-27 14-17

~ 30

p/St~h'l'ococeus(dl pl N. gonorrhOHtl pl EnterococO$ (f. g) pl oytros cocos Gram-positivos (t, g)

Cenamieina Cerbenicilina

10U. 10 U. 10U. 10 U. 301AO

PEN PEN PEN PEN CAN

<28 <19 < 14 <19 <13

~ 15

~29 ~20

~28 ~18

pl Enterobactrias pl Pwut/omOnBI
e.telotlna e.tezolina Cefotaxima Cafoxltina Cefuroxlma (hl (h) (hl (hJ (h)

ld)

100 IAO 100 IAO 30 "9 301AO 301AO 30 "9 30/011I 2 "9 30 "9

CAR CAR CFL CFZ CTX CFO CRX CU eLO DOX ERI EST GEN MIN NAL NET NIT

<17 <13 <14 <14 < 14 < 14 <14 < 14 <12 < 12 < 13 < 11 <12 <14 <13 < 12 <14

1a - 22 14 - 15 16 - 17 16 - 17

~23 ~17 ~1a ~1a ~23 ~ 1a ~18 ~17 ~ 18 ~ 16 ~ 18 ~ 16 ~ 16 ~19 ~19 ~16 ~ 17

15 - 22

16 - 17 15 -17 15 - 16 13 - 17 13-15 14-17 12 - 14 13 - 14 16 - 18 14 -1a 13 - 14 16 - 16

C1lndamicina (fI Cloranfenicol Doxlclclina Erltromicina EstrtJ)tomlcina Oentamlclna Mlnaclcllne Nelid(xico, Netllrnieina (b) 11I 6cido li) (b)
(j)

Ul

30 jlg 15 fJll 10"g 10jlg 30fJll 30 119 30 119 300 fJll

Nltrofuranto(na Oxacilina

pl St~h'l'ococeus

(ml .nalval. {" I (aI

1 119 1/19 25119 300"" 30 "9 10 fJll 6"" 30/011I

OXA OXA SUT SUL TE.T TOS TRI VAN

<10 <19 <10 <12 <14 < 12 <10 < 9

11-12

~13 ~20 ~16 ~ 17 ~19 ~16 ~16 ~12

pl flneumococos-penlcllina
Sulf8metOlUIzol Sultonamidas Tltreclellna Tobramlclna Trlmetoprima Vancomlclna

11 - 16 13 - 16 15 -18 13 - 14 11 - 16 10 - 11

+ Trlmetoprima

li. nl
Ul (bJ li, nl

Zone de inibilo em mm AntibecterienOl Quentidedeno disco

10 U.1. 30j,lg 10 j.ig 30j,lg 100j,lg 50 j.ig 30j,lg 30j,lg 20j,lg 50 j.ig 3001'll 60/019 3Oj,iD 6j.ig 30/019 35 j.ig 10j,lg

C6di,o

Resistlneie

reI Intermedilrie
9 -12 14-17 9 -10 14 -17 16 - 21 12 -17 13 - 16 18 -; 21 14 - 18 9 -14 9 - 11 10 - 14

reI Moderedemente SBn.ftltll

SensltleJ
;> 13 ;> 18 ;> 11 ;;.18 ;;. 22 ;>18 ;>17 ;> 22 ;>19 ;>15 ;>12 ;>16 ;>34 ;> 25 19 ;> 15 ;> 20

Bacitracina Becanamicine Colistine Dibececine Espiramicina Fosfomicina Neomicina Novobiocina Pipem(dico. cido Pirom(dico. Polimixine cido B

BAC BEC COl DIB ESP FOS NEO NOV PIP PIR POl RIB RFM RIF RIF RIT SIS
I

<

'" 13 8

'"

'" 13 '" 15

"'''
'" 12 '" 17 '" 13 8

Riboltamicine Rifamicina Rifempicina B

'" '" '"

8
9

'" 33 '" 24 '" 11 '" 11 '" 14

12 - 18 12 - 14 15 - 19

pl N. meningitidis
outros organismos Rifempicine Sisomicina

+ Trimetoprima

Tabela 3 - Limites pua o controle l.bor.t~a1 dos dilcos em meio de pr Mueller-Hinton sem nJUe ou suplementos AntibecterienOl Quentidede no di.co
30j.lg 10 j,lg 10 U.1. 3Oj.lg 100j,lg 30j.lg 30j,lg 30j.lg 30j.lg 30j,lg 2 j.lg 3Oj.lg 10141 30 ,lg 16 j.lg 10j,lg 10 j.lg 30 j.lg E. coli S. aureuI

ATCC25.922 rmml
19 -26 16 - 22

ATCC25.SJ23 (mml
20 - 26 27 - 35 2637

Amlcacina Ampiclline Blnzilpenicilina Cenemiclna Cerbenlcilina Cefalotina Cefazolina Cefotlxlma Cefoxitina Cefuroxlma Clindemlcina Cloranfenicol ColIstlna Doxicicllna Erltromicina Estrlptomicine Glntamicinl Minoclcline

17 - 26 23 - 29 17 - 22 23 - 29 29-36 23 - 29 20 - 26

19 -26

29-37 29 - 35 25-31 23 - 29 27 - 36 24 - 30 19 - 26

21 - 27 11 -16 18 - 24

23 - 29 22 -30 14 - 22 19 - 27 26 -30

12 - 20 19 - 26 19 - 25

A ntilulctflriano6

QUMtidlldtl nodi6Co

E.coli
ATCC25.922 (mm)

S. aureus
A TCC 25.923 (mm)

Nalidlxico, cido Neomicina Netilmicina Nitrofurantolna Oxacilina Polimixina El Sulfametoxazol + Trimetoprima Sulfonamides Tetreciclina Tobramicina Trimetoprima Vancomicina

3O~ 3O~ 30 1'9 3001'9 1~ JOOU.I. 25~ 300~ 3O~ 10"9 51'9 30"9

22-28 17 - 23 22-30 20 -25

18- 26 22 - 31 18 - 22 18- 24 7-13 24 - 32 24 - 34 19- 28 19 - 29 21-28 15 - 19

12 - 16 24- 32 18 - 26 18 - 25 18 - 26 21 - 28

Tabela 4 - Umites pua controle laboratorial de diIcoa em meio de pr Mueller-Hinton sem sanaue ou suplementos - outros IpIltes antibacterianos
Quantidade no dilco

P. aeruginosa
ATCC27.853 (mm)

S. faecalis
ATCC 29.2;~ou ATCC33.t86 (mm)

Antibacterian06

Amieacina Carbenicilina Cefotaxima Gentemicina Netilmicina Polimixina B - Sulfametoxazol + Trimetoprima Tobramicin.

301'9 100~ 3O~ 10 "9 30 1'9

300UI

18 -26 18 -24 18 - 22 16 - 21 17 - 23 11 -16

251'9 101'9

19 - 25

(-I Para determinar se o meio de MuellerHinton possui nlvel de timina ou timidina, testar os discos de sulfametoXlzol + trimetoprirna frente cepa de StreptOCOCCU6faecalil. ATCC 29.212 ou ATCC 33.186. Zon. de inibilo entre 24 e 32 mm. essencialmente isenta de tAnues colnias bacterianas. indica nvel suficientemente baixo dOI referidos compostos qulmicos.

o uso de camada de superfcie em placas com base, podem ser empregadas se estes procedimentos forem padronizados com culturas de controle de modo que os resultados obtidos possam ser considerados equivalentes queles obtidos com ~zaragatoa de algodo. 1.10 - Controle IaboratoriaI dos discos. Controlar a validade do antibiograma atravs de testes dos discos. utilizando as seguintes cepas bacterianas: StreptococcuI !aeca!il ATce 29212 ou 33186. Os halos ATCC25922, Pseudomonar aerug;nOltl ATce27853, StreptococcuI !aecaJil ATce 29212 ou 33186. Os halos de inibio devero estar dentro dos limites estabelecidos para os principais antibacterianos constantes das Tabelas 3 e 4. a) A categoria "intermediria" deve ser informada, pois ela indica geralmente resultado equvoco. A categoria "moderadamente sensvel" deve ser informada para indicar sensibilidade sob certas condies. Outros betaIactmicos esto sendo considerados, por definio, como enquadrados na categoria de "moderadamente sensvel". b) O tamanho das zonas obtidas com os aminoglicosdios, particularmente no teste para Pseudomonas, depende muito da variao do contedo de ctions divalentes contidos no meio de cultura. Este padro interpretativo deve ser usado somente com o meio de Mueller-Hinton, o qual no teste de controle produz zonas de inibio que caem dentro dos limites recomendados na Tabela 3 quando se usa a P. aelUginola ATCC 27853. Organismos enquadrados na categoria "Intermediria" podem ser sensveis ou resistentes quando testados pelo mtodo de diluio seriada e neste caso devem ser classificados como indeterminados quanto sua sensibilidade. c) Disco referncia para ampicilina, amoxicilina, bacampicilina, epicilina, hetacilina, metampicilina. d) Cepas de S. aureus resistentes produzem beta-lactamase, sendo preferido o disco de 10 VI de penicilina. A benzilpenicilina deve ser usada para testar a sensibilidade de todas as penicilinas penicilinase-sensveis, tais como ampicilina, amoxicilina, bacampicilina, hetacilina, carbenicilina, epicilina e metampicilina. Os resultados podem ser aplicados tambm fenoximetilpenicilina e feneticilina. e) Ao testar HaemophiluI usar o meio de gar Mueller-Hinton suplementado com 1% de hemoglobina (ou 5% de sangue de cavalo) e 1% de suplemento de enriquecimento sinttico ajustando o pH para 7,2. Pre parar o inculo suspendendo com caldo de Mueller Hinton o crescimento bacteriano contido em placa de gar chocolate de modo a obter a turbidez padro do sulfato de brio (1-4). Grande maioria de Haemophilus ampicilina-resistente produz quantidade detectvel de beta-Iactamase. O Para enterococos, outros Streptococcus sp e organismos sensveis a penicilinas no produtores de penicilinase, a interpretao "intermediria" deve ser informada como sendo "moderadamente sensvel".

Resultados dentro desta categoria incluem enterococos contidos no sangue ou em tecidos gravemente infectados para os quais so exigidas altas doses de penicilinas ou ampicilina, geralmente combinada com um aminoglicosdio, para melhorar a resposta teraputica e ao bactericida. g) Para estreptococos, estafilococos e outros organismos sensveis a penicilinas o resultado "sensvel" deve ser informado como sendo "muito sensvel". Cepas de enterococos (S. taeciu11l,S. !aeca/is. e S. duram) que produzem zonas de imbio ;;. 30 mm para a ampicilina ou ;;. 28 mm para a benzilpenicilina so bastante incomuns e neste caso <leve ser reexaminada a especificao do procedimento para os estreptococos. h) Cefazolina, cefotaxima e cefoxitina so betaIactmicos com largo espectro de atividade contra bacilos Gram-negativos em relao a outras cefalosporinas previamente aprovadas. Portanto, o disco de cefalotina no pode ser uS/Jdo como disco referncia para estes antibacterianos. O disco de cefalotina usado para testar sensibilidade cefalotina, cefaeior, cefadroxila, cefalexina, cefaIoridina, cefapirina e cefradina. Cefazolina, cefotaxima e cefoxitina devem ser testadas separadamente. Estafilococos que mostram resistncia oxacilina devem ser informados corno resistentes a antibacterianos tipo cefalosporina, independente do dimetro da zona, uma vez que na maioria dos casos infeces causadas por estes organismos so clinicamente resistentes s cefalosporinas. i) Dados de sensibilidade ao cido nalidxico, nitrofurantona, sulfonamidas e trimetoprima so aplicveis somente a organismos isolados de infeces do trato urinrio. j) O disco de clindamicina usado para testar a sensibilidade de ambas, clindamicina e lincomicina. I) Tetraciclina o disco referncia para todas as tetracieiinas e os resultados podem ser aplicados clortetraciclina, doxiciclina, minociclina, oxitetraciclina, rolitetraciclina. Todavia, certos organismos podem ser mais sensveis doxiciclina e minociclina do que tetraciclina. m) Os resultados obtidos com a oxacilina, penicilioa resistente beta-Iactamase, podem ser aplicados cloxacilina e dicloxacilina. Oxacilina o disco preferido devido maior resistncia degradao na armazenagem na sua aplicao nos testes com pneumococos e ainda detecta cepas heterorresistentes mais facilmente. Quando resultados intermedirios forem obtidos com estaf"tlococos estas cepas devero ser posteriormente IDvestlgadas para determinar se elas so heterorresistentes. n) Em lugar de qualquer outra sulfonamida pode-se usar o disco de sulfadiazina. Meio de cultura contendo sangue, exceto meio contendo sangue lisado de cavalo, no recomendado para testar sulfonamidas. O meio de gar Mueller-Hinton deve ser to isento de timidina quanto possvel para testar as sulfonamidas e/ou trimetoprima.

XIII.2. ANIMAIS DE LABORATRIO

Os animais de laboratrio so empregados em ensaios farmacopicos com a finalidade de avaliar limites de contaminantes indesejveis ou como reagentes para anlises quantitativas de princpios ativos. Entre os fatores que alteram as respostas dos sistemas biolgicos, podem ser mencionados: condies sanitrias,

ambientes, nutricionais e genticas. Estes t"atores devem ser controlados durante a criao e a experimentac para a obteno de animais padronizados. Todas as caractersticas mencionadas devem ser descritas perfeitamente nos protocolos dos ensaios.

XIII.2.1. CONDIES SANITRIAS

Os animais de laboratrio so classificados em diversas categorias sanitrias, de acordo com sua carga parasitolgica, bacteriol6gica, micol6gica e viral. AdotHe classicao de cinco categorias, sendo descritos os microrganismos que devem estar ausentes em cada categoria (Tabela 1). Recomenda-se o emprego das categorias I e 11 no ensino e em experimentos de curta durao. As categorias 1Il e IV devem se constituir no animal padro a ser usado em toda atividade biomdica e imprescindvel seu emprego em investigaes de longa durao, como, por exemplo, em estudos farmacotoxicol6gicos pre-clnicos. A categoria V de difcil obtenlo, no sendo empregada em ensaios farmacopicos de rotina. Descrevem-se a seguir recomendaes para obteno de animais em condies aceitveis de sade para os ensaios biolgicos farmacopicos, de modo a assegurar eficincia, reprodutibilidade e at validade.

Corredore,: Os corredores devem possuir pelo menos

dois metros de largura para facilitar o movimento de pessoas e o transporte de cargas e animais. A juno dos pisos com as paredes deve ser abaulada. As salincias expostas devem estar recobertas com barras de metal para proteger as paredes. Sempre que possvel, encanamentos de gua, extintores de incndio, instalaes eltricas e drenos devem estar situados nos corredores e no no interior das salas dos animais. Os ralos devem ser sifonados para evitar refluxo de lquidos. Piso,; Os pisos devem ser resistentes, lisos, impermeveis, nio absorventes, no escorregadios e resistentes a cidos e solventes. A unio dos pisos com as paredes deve ser com acabamento abaulado. Devem ser lavveis com escova, detergente e desinfetantes. Os materiais empregados devem ser do tipo monoltico ou possuir o mnimo de juntas. Parede,; Devem ser lisas, impermeveis, sem fendas ou buracos e sem imperfeies nas junes com o piso ou o teto. Todos os ngulos devem ser abaulados. Devem ser lavveis com gua e detergentes e suportarem esterilizao com formol, cido peractico, parabenos ou outros agentes qumicos providos de igual enccia. A instalao eltrica deve ser vedada entrada de insetos e possuir tampa prova de gua. Sala de animlli,: A sala deve ser dotada de vestbulo, ou as portas devem abrir-se para o interior. As dimenses mnimas das portas devem ser 1 m de largura por 2 m de altura. Os marcos devem ser confeccionados em metal e bem ajustados s paredes, com acabamento perfeito, de modo a evitar o acJnulo de insetos e p. As portas providas de visores devem ajustar-se aos. marcos e ao piso com adequada vedafo. t conveniente que as portas sejam de metal ou recobertas com metal na superfcie inferior at a metade e que se fechem automaticamente. t recomendvel a adofo de fechaduras embutidas. As salas nlo devem possuir janelas para o exterior. Teto,: Devem aer lisos. impermeveis e isel1tos de juntas imperfeitas. O material de acabamento deve resistir a esoovagens com detergentes e desinfetantes. Sendo empregados canos aparentes. estes devem estar separados do teto para permitir limpeza manual ou com aspirador. Circulll60; O planejamento das edicaes dever ser feito de modo que as reas em contato imediato com os animais (reas limpas) estejam isoladas de outras com rudos ou contaminadas (reas sujas). Ao admitir pessoal, equipamento, instrumentos, animais, raes, gua e ar em rea limpa, esses devem atnvessar barreiras que minimizem a possillilidade de contaminao cruzada ou de introduo de enfermidade e que impeam a entrada de insetos, roedores selvagens etc. Barreirrl'; As salas dos animais devem ser desinfectadas antes de cada experincia ou rotineiramente nos setores de criaio e manuteno. Recomenda-se utilizar 5 g de formalina (40% de formaldedo) por m1 e umidade relativa de 70%, durante 6 a 24 horas. Pode-se conseguir a evaporao misturando-se 30 ml de formalina com 20 g de permanganato de potssio por m1 de rea a desinfectar. Este processo deve ser realizado com as saias vazias e com precaues cabveis para proteger a sade do pessoal. Tambm as salas de experincia e criao de animais devem ser lavadas pelo menos uma vez por semana, ou com maior freqnCia, e desinfectadas com aplicao nas

Os biotrios de criao e experimentao devem estar isolados da circulao geral e de perigos potenciais como animais selvagens ou animais infestados.

Tabela I - CIasaificaio sanitria de roedores e lIaomorfos

Se/mone/la 'P Sh/fIB/a Ip MyctJbBctBrlum tubercu/Mi, PRteuf'fl/iB PlSUdotubercU/Mi.

Oermat6fltos plItoglnicos
Sercopttll

"*,iei

Todos os da categoria I Es~gios intermedi6rios de c.todll Artr6podes (parasitas obri9lltriosl V(rus de ectromelia (camundongosl Mixometose (coalhosl Todos os de categoria 11
Bordlltella bronchiaMPtlclI

Pasteurelas (excluindo cricato e cobaiel Cocc(dios Helmintos patognicos Streptobacilfu. monififormes (retos e camundongos) CorynebBcterium munI (camundongos I Pneumococos (cobaias/coalhos) Trepo".",a paflidum (coalhol
Mycop/asmll

Todos os da categorielll Pneumococos

K/ebliefla pnsumoniae Li.teria monocytOflBnes

Helmintos Protozorios plItognicos MyctJpla,ma (criceto e cobaia) Fu,iformes necrophoru, (coalho)

paredes, tetos e pisos, de germicida como formalina a 0,5-1%, parabenos* a 1%, compostos de amnio quaternrio em concentraes de 1 :5000 e 1 :2000, hipocloritos em concentraes de 100 a 1000 ppm etc. As entradas externas devem possuir barreiras contra roedores com no menos de 40 em de altura. As entradas e sadas do edifcio tambm devem possuir barreiras contra insetos, sendo mais recomendveis as constitudas por lmpadas ultravioleta para atrao de insetos, acompanhadas de mecanismo para eletrocussio. No recomendvel o uso de inseticidas qumicos, pois seus resduos podem afetar os animais ou suas respostas s drogas ensaiadas. A entrada de pessoas nas reas limpas deve restringir-se ao mnimo compatvel com os trabalhos experimentais e o cuidado dos animais. Para o pessoal deve ser estabelecida rotina, consistindo no uso de: botas, galochas, uniforme incluindo gorro, mscara e luvas. Ao pessoal que ter contato direto com os animais recomendvel realizar minuciosa higiene atravs de ducha, antes de iniciar as tarefas, ou realizar, pelo menos, adequada lavagem das mos e escovagem das unhas, preferentemente com detergente esterilizante como parabenos a 1%, ou outro de atividade semelhante. A lavagem das mos obrigatria aps a utilizao de banheiro e operaes de limpeza, a manipulao de animais de diferentes espcies ou categorias sanitrias, ou depois das refeies. Os uniformes devem ser confeccionados em cor clara e laVados freqUentemente, para melhor controle da higiene. Dentro do possvel, devem ser submetidos a processo rotineiro de desinfeco ou esterilizao. As luvas devem ser adequadamente desinfeetadas. As raes comercializadas para animais de laboratrio podem apresentar contaminaes microbianas excessivas, pelo que se faz necessrio tratamento prvio que pode consistir em: a) pasteurizao, como, por exemplo, submetB-las a autoclave durante 5 minutos a 121C, ou b) esterilizalo realizada por irradiao com raios gania, usando cobalto 60 como fonte e uma dose de 2,5 Mods, ou por autoclavqem de 132 c durante 5 a 10 minutos. Pode-se tambm empregar fumlplo com xido de etileno (6-12 horas de exposio, 20C, umidade relativa 33%). Devem-se tomar precaues em razlo das caractersticas txicas, explosivas e Inflamveis do gs. As raes submetidas a este tratamento necessitam ser suficientemente ventiladas para remover todo o gs

absorvido. Chama-se ateno especial para a necessidade de remoo total do gs absorvido, dada a possibilidade cancergena de qualquer presena residual na rao. A gua destinada ao consumo dos animais deve ser, pelo menos, potvel. Procedimento recomendado a autoclavagem das garrafas com gua. No caso deste tratamento no ser possvel, as garrafas e os bicos devem ser lavados e fervidos pelo menos uma vez por semana e a gua trocada diariamente. f; recomendvel adio de cloro para alcanar nveis de cloro livre de 1 a 10 ppm e a adio de cido clordrico para obter pH 2,5-3,0 e assim reduzir o desenvolvimento bacteriano durante a permanncia da gua nas gaiolas. Quando se julgar conveniente, pode-se empregar a esterilizao da gua por filtrao, o que requer adequada combinao de mtros e complexo sistema de manuteno. As maravalhas devem ser esterilizadas por autoclavagem, recomendando-se o emprego de 132C durante 20 minutos. Todos os demais materiais, incluindo gaiolas, estantes, artigos de limpeza e aparelhos devem ser. desinfectados, se possvel por autoclavagem. Os materiais que no resistem ao calor podem ser tratados com germicidas, tais corno cido peractico, xido de etileno, formalina, ou colocados em recipientes com germicidas quidos que devem permanecer em contato com o material o tempo suficiente para que a esterilizao seja realizada. Neste ltimo caso empregar produtos que no deixem resduos txicos. Podem igualmente ser utilizados produtos indicados para o tratamento de paredes, pisos e tetos. No usar, simultaneamente, produtos para lavagem e desinfeco que sejam antagonistas, como por exemplo, substAncias orginicas e cloro. f; recomendvel a filtrao do ar para !ivr-lo de microrpnismos que, em geral, so transportados sob a forma de agregados ou em associao com partculas de 4 a 20 lIJIl de dimetro. Os procedimentos de limpeza e desinfeco devem obedecer a rgida rotina, determinada conforme o tipo e forma de materiais, a quantidade de animais por superfcie de gaiola e o volume ambiente. ReallZU quarentena com os animais que no so de produlo do biotrio e estabelecer procedimento de controle de qualidade para verificar, permanentemente, o estado sanitrio das colnias. As carcaas dos animais e os detritos devem ser incinerados ou eliminados de acordo com disposies legais vigentes em cada municpio.

Os animais de laboratrio necessitam de ambiente adequado e constante, a fun de evitar enfennidades, estados de tensio emocional ou alteraes comportamentais, flSiolgicas. anatmicas etc. Os roedores comumente empregados em laboratrio do homeotermos, apresentando, frente a condies variveis, adaptaes homeostticas que podem alterar o estado metablico, a temperatura, a atividade, o consumo de alimento, as concentraes hormonais, o aumento de peso, a fertilidade etc. Estas alteraes podem diminuir a preciso e at mesmo invalidar os ensaios biolgicos. Portanto, indispensvel manter constantes os fatores ambientes e, quando isto no for totalmente possvel, recorrer-se a planejamento estatstico, descrito na parte correspondente desta farmacopia, que pennita o controle de fontes de variaio conhecidas. Entre os fatores ambientes que devem ser controlados destacam-se:
- Recomenda-se o emprego de lmpadas fluorescentes tipo "luz do dia" para evitar o calor das lmpadas de filamento. Prover ciclo alternado de luz (12 ou 14 horas) e de escuridio (12 a 10 horas), sempre no mesmo horrio. A intensidade nio deve exceder de 300 lux a 1m de altura do pisO. As limpadas devem estar distribudas homogeneamente no ambiente. A intensidade dentro das pioias MO deve exceder a 60 lUXoObservar que o grau de iluminaio em gaiolas de plstico, pouco transpareotes, pode variar '80 vezes entre a estante superior e a inferior. Luz

uma temperatura, deve-se empregar 20C:I: toda as espcies de roedores e lagomorfos.

Ru{do - Os rudos

2 c para

60 dB. Os rudos os contnuos.

devem ser controlados abaixo de intermitentes so mais nocivos que

Amnio - A concentrao depende nio s da quantidade de animais e bactrias, como tambm das condies de temperatura e umidade. A concentrao de amnio deve permanecer abaix de 2S ppm.
Vmtil40 - Prover de 10 a 20 trocas de ar por hora, evitando-se a recirculao. Os aparelhos de ar condicionado, de uso comum, Do so adequados.

T,mperatura - Cada espcie de animal requer temperatura ambiente tima (cobaios e coelhos 17C - 20 c, otos e camundo~os 20C - 24 C). Quando se adotar somente

Camtll - Seu emprego necessrio em alguns tipos de gaiolas para que certas espcies faam o ninho e para absorver a umidade, urina e fezes. No empregar material abrasivo, txico ou comestvel para camas de contato. Esta especificao torna-se menos importlU\te quando a cama nfo entrar em contato direto com o animal. Os produtos residuais da madeira, como a maravalha, so os mais usados e devem ser peneirados para evitar exeesso de p ete. As camas devem estar livtes de pintura, conservantes de madeira, produtos qumicos e agrot6xicos. Para evitar a transmisslo de enfermidades decorrentes do contato com roedores selVllens ou animais domsticos durante o seu processameato, as camas devem ser esterilizadas e depositadas sobre estrados, em sacos fechados, afastadas das paredes em lupr isento de animais. Alluns tipos de madeira podem induzir enzimas microssamicas metabolizadoras de frmacos.

XIII.2.3. NUTRIO

Recomenda-se o uso de raes balanceadas em fOnDa de granuJados. Estes devem possuir consistncia adequada para que no se desagreguem e no dificultem a mastigaio. Em geral so constitudas por produtos naturais compostos de protenas animais ou vegetais, leos vegetais ou animais, sementes oleosas, legumes e grfos de cereais. Devem ser adicionados minerais e vitaminas. Devem ser consideradas a composio centesimal, a digestibilidade e a relao protena/energia. Devem ser especificados os limites para contaminantes como metais pesados, produtos qumicos txicos, inseticidas, estrognios, antibiticos, microrganismos, parasitos e fUIll0S. No se aconselha a suplementaO das raes com alimentos frescos, pela possibilidade de desequilibrar a

dieta e introduzir contaminaes. Caso existam dvidas quanto composio da rao para as cobaias, aconselha-se a adio de vitamina C gua, na proporo diria de 200 mg/1. A dieta das cobaias, excepcionalmente, pode ser suplementada com verduras frescas, ricas em vitamina C. Estas, porm, devem ser meticulosamente lavadas, preferencialmente com dispositivo mecnico e gua clorada. Aconse1ha-se o consumo das raes dentro do prazo de 60 dias da data de sua fabricao, a qual obrigatoriamente deve ser declarada, no em cdigo, na embalagem individuaL As raes que necessitem autoclavagem para seu emprego devem possuir fonnulao especial para prevenir a fuso dos granulados e perdas dos nutrientes termoIbeis. Devem ser acondicionadas em embalapns especiais.

Os animais de laboratrio, de acordo com o sistema de criao, se classificam em: a) endocriados: que so obtidos por cruzamento contnuo entre irmos ou entre pais e ftlhos. Com este tipo de cruzamento, aps 20 geraes alcana-se gentipo altamente homozigtico; b) exocriados: animais procriados de modo a evitar a consanginidade. Os mtodos utilizados dependem diretame~te do tamanho da cOlnia; c) reproduzidos seletivamente: so obtidos atravs de cruzamento de animais no-consang11neos que possuam as caractersticas desejadas; d) hfbridos: so obtidos por cruzamento de duas diferentes populaes endocriadas. So, em geral, vigorosos e, para muitos propsitos, mais uniformes que qualquer de seus ascendentes. No devem ser usados como reprodutores. A constituio gentica um dos fatores mais importantes a ser considerado na seleo de animais para .ensaios farmacotoxicolgicos.

Os sistemas responsveis pela atividade farmacolgica e pelos efeitos txicos dos frmacos so, em geral, interaes complexas de processos bioqumicos e metablicos sujeitos a mecanismos reguladores que variam, no somente nas diferentes espcies, como apresentam diferenas acentuadas entre colnias e cepas de uma mesma espcie. Na atualidade, para a maioria dos estudos farmacotoxicolgicos, empregam-se roedores exocriados. Para cada tipo de ensaio a adequabilidade de cada colnia de animais deve ser validada por ocasio da padronizao do mtodo no laboratrio. Os animais, quando transferidos de laboratrio, sob condies diferentes, podem ter suas caractersticas genticas totalmente modificadas. Para a denominao das colnias exocriadas de roedores, recomenda-se a adoo das normas padronizadas para a nomenclatura, conforme o Comit Internacional de Animais de Laboratrio (ICLA-Bulletin n930, 1972). Para a designao de cepas endocriadas, recomenda-se, igualmente, a adoo da nomenclatura descrita em Cancer ResetU'ch, 36, 4.333 (1976).

Os animais usados nos ensaios farmacopicos sfo mamferos capazes de sentir medo e dor. Devem ser manipulados com cuidados e albergados sob condies adequadas s suas necessidades f'lSiolgicas. Na Tabela 2, constam as recomendaes sobre IISdimeDICIdas piolas para camundongos, ratos, cobaias e coelhos. Antes de submet-Ios a qualquer tknica passvel de provocar dor, de~ administrar anestesla apropriada, e a recuperaio pa-cirdrgica deve ser processada de modo a evitar dor desnecessria. Aps 01 experimentos, eliminar 01 uimais, sem lbes causar sofrimento, emprepncio tcnicas eutanicu adequadas para cada espcie, tomando a pftlClUlo de certif'1Car-SC morte dOI mesmos. da Todos os ensaios que envolvam o uso de uiDWs de laboratrio devem ser superintendidos diretamente por prof'wional da rea biolgica, com qualificalo e treinamento adequados. Devem ser cumpridas as disposlGes da Lei n9 6.638, de 18 de maio de 1979, que estabelece notmaS para a prtica didtico~t{fica da vivissec:lo de animais e d outras providncias.

Tabela 2 - DimODlelrecomendadas para pioW de animais de laboratrio Ani"",/ Pelo

< 10g 10-15g 16-25 9 >25g < 100g 100-200g 201-300g >300g Areado

/lJt-n/"",/
39cm2 52cm2 77 cm2 97 cm2 110em2 148em2 187 cm2 258em2 277 cm2 652 cm2 1400em2 2800cm2 3700cm2 4600cm2

A/tu'"
12.7cm 12,7cm 12,7cm 12,7cm 17,8cm 17,8em 17,8cm 17,8 em 17,8em 17.8em 35,6cm 35,6 em 35,6cm 35,6 em

Camundongo

Rato

Cobaia

< 350g
>350g <2 kg 2-4 kg 4-6 kg >6kg

Coelho

XIII.3. NOMES, SMBOLOS E MASSAS ATOMICAS

A tabela que segue a recomendada pela Intemational Union o/ Pure and Applied Chemistry

de 1978. As massas atmicas baseiam-se na massa atmica do 12C = 12.

Tabela de mlllU atmicas relativas

Nome 51mbolo N/mero st6mico M_ et{j'mica flIlstillB Nome Smbolo Nmero st6mico Massast6mica flIlativa

r---

Aetnio Alumnio Amer(cio Antimnio Atgnio Arsnio Astat(nio Brio Serlio Berqulio Bismuto Boro Bromo Cdmio Clcio Calif6rnio Carbono Crio Csio Chumbo Cloro Cobalto Cobre Criptnio Cromo Crio Dispr6sio Einsteinio Enxofre E:rbio Escndio Estanho Estrncio Eur6pio Frmio Ferro Flor Fsforo Frncio GadoUnio Glio Germnio Hfnio Hlio Hidrognio Hlmio fndio lodo Irdio Itrbio ftrio Lantnio

Ac AI Am Sb Ar As At Ba Se Bk Bi B Br Cd Ca Cf C Ce Cs

Pb
CI Co Cu Kr Cr Cm Dy Es S Er Se Sn Sr Eu Fm Fe F P Fr Gd Ga Ge Hf He H Ho In I Ir Yb V La

r-

89 13 95 51 18 33 85 56 4 97 83 5 35 48 20 98 6 58 55 82 17 27 29 36 24 96 66 99 16 68 21 50 38 63 100 26 9 15 87 64 31 32 72 2 1 67 49 53 77 70 39 57

227,0278 26,98154 (2431 121,75 39,948 74,9216 (210) 137,33 9,01218 (2471 208,9804 10,81 79,904 112,41 40,08 (2511 12,011 140,12 132,9054 207,2 35,453 58,9332 63,546 83,80 51,996 (247) 162,50 (2541 32,06 167,26 44,9559 118,69 87,62 151,96 (257) 55,847 18,998403 30,97376 (223) 157,25 69,72 72,59 178,49 4,00260 1,0079 164,9304 114,82 126,9045 192,22 173,04 88,9059 138,9055

Laurneio Ltid Lutcio Magnsio Mangans Mendelvio Mercrio Molibd'nio Neod(mio Ne6nio Netnio Ni6bio Nquel Nitrognio Noblio Osmio Ouro Oxignio Paldio Platina Plutnio Polnio Potssio Praseod(mio Prata Promeio Protaetnio Rdio Radnio Rnio Rdio Rub(dio Rut'nio Samrio Selnio Silcio Sdio Tlio Tantlio Tecncio Telrio Trbio Titnio Trio Tlio Tungat'nio Urnio Vandio Xen6nio Zinco Zirc6nio

Lr Li Lu Mg Mn Md Hg Mo Nd Ne Np Nb Ni N No Os Au O Pd Pt Pu Po K Pr Ag Pm Pa Ra Rn Re Rh Rb Ru Sm Se Si Na TI Ta Te Te Tb Ti Th Tm W U V Xe Zn Zr

103 3 71 12 25 101 80 42 60 10 93 41 28 7 102 76 79 8 46 78 94 84 19

59

47 61 91 88 86 75 45 37 44 62 34 14 11 81 73 43 52 65 22 90 69 74 92 23 54 30 40

(2601 6,941 174,967 24,305 54,9380 (258) 200,59 95,94 144,24 20,179 237,0482 92,9064 58,70 14,0067 (259) 190,2 196,9665 15,9994 106,4 198,09 (244) (209) 39,0983 140,9077 108,868 (145) 231,0359 226,0254 (222) 186,207 102,9055 85,4678 101,07 150,4 78,96 28,0855 22,98977 204,37 180,9479 ( 97) 127,60 158,9254 47,90 232,0381 168,9342 183,85 238,029 50,9415 131,30 63,38 91,22

F. BRAS. IV, 1988

XIII.4. UNIDADES DO SISTEMA INTERNACIONAL (SI) USADAS NA FARMACOPIA E EQUIV AL:eNCIA COM OUTRAS UNIDADES

O Sistema Internacional de Unidades compreende trs classes de unidades: unidades bsicas, unidades derivadas e unidades complementares (I). As unidades bsicas e suas definies encontram-se na Tabela 1.

As unidades derivadas podem ser formadas pela com binaio de unidades bsicas mediante relaes algbricas. Algumas dessas unidades derivadas tm nomes e smbolos especiais. As unidadl:s SI usadas na Farmacopia Brasileira constam da Tabela 2. Unidades importantes e amplamente empregadas no constantes do Sistema Internacional estio arroladas na Tabela 3. Os prefIXOS indicados na Tabela 4 so usados para formar os nomes e smbolos dos mltiplos e submItiplos decimais das unidades do Sistema Internacional.

(I) As definies das unidades usadas no Sistema Internacional constam da obra "u Systeme International d'Units (SI)", publicada pelo Bureau de Pois et Mesures, Pavillon de Breteuil, F-92310 Sevre" Frana.

Qu."tid6dB Nome Sfmbolo

Unidsde DefiniiJo Nome Sfmbolo

Comprimento

metro

Massa

quilograma

kg

Comprimento igual a 1 650763,73 comprimentos de onde no vcuo da radiao correspondente transi60 entre os nveis 2p,o e 5d. do tomo de criptnio 86. Massa do prot6tipo internacional do quilograma. Durao de 9 192631 770 perfodos da radiao corraspondente transio entre dois n(veis hiperfinos do estado fundamental do tomo de csio 133. Corrente eltrica invarivel que, mantida em dois condutores retiHneos, paralelos, de comprimento infinito e de raa de selo transversal desprez(vel e situados no vcuo a um metro de distncia um do outro, produz entre esses condutores uma fora igual a 2 x 10-7 newtons por metro de comprimento desses condutores. Frao 1/273,16 da temperatura do ponto tr(p1ice da gua. termodinmica

Tempo

segundo

Corrente eltrica

ampre

Temperatura termodinmica

kelvin

Quantidade de materia

mole

moi

Quantidade de matria de um sistema que contm tantas entidades elementares quantos do os tomos contidos em 0,012 quilogramas de carbono 12. Intensidade luminosa, na direo perpendicular, de uma superf(cie plana de 1/600 000 m2 de rea de um corpo negro temperatura de solidificeo da platina, sob press4'o de 101 325 pescals.

Intensidade luminosa

Iv

candela

c:d

(1) Quando se usa o moi, as entidades elementares devem ser especificadas; podem ser tomos, molculas, (ons, .,trons ou outras part(culas. bem como agrupementos especificados de tais part(culas.

UNIDADES DO SISTEMA INTERNACIONAL (SI) USADAS NA FARMACOpelA E EQUIVALNCIA COM OUTRAS UNIDADES

Quantidade

Unidadtt

ConvenS o de outra, unidade, para o SI Expre,slo em outras unidade, SI

Nome

Smbolo

Nome

Sfmbolo

Expre,slo em unidades SI bsicas m -I 10 -9m 10 -6m m2 m3 s -I

Nmero de onda Comprimento de onda Area Volume Freqncia

11

1 por metro nanmetro micrrnetro metro quadrado metro cbico hertz quilograma por metro cbico metro por segundo newton

11m
nm "m m2 m3 Hz

A,S V
11

1ml=1cm3

= 10 -6 m 3

Massaespecffica

kg/m3

kg'm -3 m's -I

1 g/ml = 1 g/cm 3 = = 103 kg.m-3

Velocidade

11

m/s

Fora

m'kg's -2

1 di na = 1 g.cm's -2 = = 10 -s N 1 kp = 9,80665 N 1 dina/cm 2 = 10-1 = 10-1 Nm-2

Pa=

Presso

pascal

Pa

m-I'kg.s

-2

N'

m-2

1 atm = 101325 Pa = = 101,325 k Pa 1 bar = 10 s Pa = 0,1 MPa 1 mmHg = 133,322387 Pa 1 Torr = 133,322368 Pa 1 psi = 6,894757 kPa Viscosidade dinmica Viscosidade cinemtica Energia pascal'segundo
11

Pas m-I'kg.s-I

Nsm-2 Pa. s.lm3'kg-1 N'm's'kg-I Nm -I

1 P '" 10.-1 Pa S '" '" 10-1 N .s.m-2 1 cP = 1 mPas 1St = 1 cm2's-1 = 10-4 m2's-1

11

metro quadrado por segundo joule

m2/s

m2's-1

m2'kg's-2

Fluxo radiante

watt

m2'kg's-3

Nms J '5-I

1 erg = 1 cm2.g's-2 = = 1 dina'cm = 10-7 J 1 cal =4.1868J 1 erg/s = 1 dina.cms-I = 7 '" 10- W '" 7 Nms-1 '" 10-7 J.s-1 '" 101 rad = 10-2 Gy

Dose absorvida (de energia radiante) Potencial el'trico, fora eletromotriz Resistncia el6trice Quantidade de eletricidade Atividade de um radionucHdeo Concentrafo (quantidade de substncias) Concentraio molar

gray

Gy

m2s-2

J'kg-I

volt

m2'kg.s-3 A-.1

W.A-1

ohm

fi

m2'klls-3 'A-2 A's

V.A-1

a
A

coulomb

becquerel

Bq

S-I

1 Ci = 37 x 101' Bq = =37x109s-1

moi por rnetro cbico

moi 1m

moi.

m-J

1mol/I= 1 M.3 1 mol/dm = 3 mol'm-3 10

= =

UNIDADES DO SISTEMA INTERNACIONAL (SI) USADAS NA FARMACO~IA E EQUIVAL~NCIA COM OUTRAS UNIDADES

Quantidade

Unidade Nome Sfmbolo

Valor em unidade. SI

1. Na Farmacopia a temperatura usada a Celsius (smbolo t). Ela definida pela equao t = T-To em que, por definio, To = 273,15 K. A temperatura Celsius ou centgrada expressa em graus Celsius (smbolo DC). A unidade "graus Ceisius" igual unidade "Kelvin". 2. As expresses prticas das concentraes usadas na Farmacopia esto definidas nas Generalidades. 3. O radiano o ngulo plano, entre 2 raios de um crculo, que corta a circunferncia determinando um arco de comprimento igual ao do raio. 4. Na Farmacopia, as condies de centrifugao so definidas com referncia acelerao da gravidade
(gn) gn

Tempo

minuto hora dia

min h d
o

1 min = 60 s 1 h = 60 min = = 3600 s 1 d=24h= = 86400 s 1 =

0

ngulo plano Volume Massa Velocidade angular

grau litro tonelada rotao por minuto

(n

/180) rad

11 = 1 dm3 = = 10-3 m3 lt=103kg rpm = !lI' /301 rados-1

t rpm

= 9,80665

,-2

Tabela 4 de unidades
Fator Prefixo

Mltiplos e sub-mltiplos

decimais

Sfmbolo E

Fator

Prefixo

Sfmbolo d

1018 10'5 1012 109 106 103 102 10'

exa
peta tera
giga
1Tlllg8

quilo heeto deca

P T G M k
h

da

10-1 10-2 10-3 10~ 10-9 10-12 10-15 10-18

deci centi mili micro nano pico femto atto

c m
I"

S. Na Farmacopia usam-se grandezas adimensionais, a saber, densidade relativa, absorvncia, absorvncia especfica e ndice de refrao, bem como grandezas expressas em outras unidades, tais como rotao ptica especfica. 6. Define-se microlcatal como a atividade enzimtica que, sob condies definidas, produz a transformao, (hidrlise por exemplo), de 1 micromol de substrato por segundo.

n
P

f
8

XIII.S. MICRORGANISMOS EMPREGADOS

EM TESTES E ENSAIOS
Os miaorganismos relacionados a seguir so indicados pua ensaios e testes preconizados pela Farmacopia. Outros microrganismos podem ser empr.dos, desde que se comprove sua sensibilidade ao antibitico a ler exami nado, e uados em condies adequadu de temperatura epH. Principais toatel de microrpnilmol: ATCC American Type Culture CoUection (1) OP INCQS NOB Collection de 1'Institut luteur (2) Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Sade (3) Nationl1 Collection of Industrial Bacteria (4) National Collection of Pathogenic Fungi (5) Natioual Collection of Type Cultures (6) National CoUection of Yeast Cultures (7) Statens Serum Institut (8)

NCPF
NCTC NCYC SSI

(1) (2)

American Type Culture CoUection 12301 Parklawn Drive, Rockville, MO 20852 USA CoUection de l'Institut Pastem Service de Ia CoUection Nationale de Cultures de Microolganismes (C.N.C.M.) 25, rue du Docteur Roux, F 75015 Paris, France Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Sade Avenida Bram. 4365, 21040 - Rio de Janeiro, R.J., Bras Natioual CoUection of Industrial Bacteria Torry Research Station, PO Box 31, 135 Abbey Road, Aberdeen AB9 800

(5)

National Collection of Pathogenic Fungi London School of Hygiene and Tropical Medicine K-eppel Street, London WCIE 7HT, Great Britain National Collection of Type Cultures Centrll Public Health Laboratory Colindale Avenue, London NW9 5HT, Great Britain National Collection of Yeast Cultures ARC Food Research Institute Colney Lane, Norwich NR 4 7UA, Great Britain Statens Serwp Institut 80 Amager Boulevard, Copenhqen, Denmark

(6)

(3)

(7)

(4)

(8)

A - Fungos. Lwendur.
Mlcrolf/flflilmos SM:c1wromvc- CtNfII/6i. S1IcchMomvc- ctmWisillfl SM:c1wfOm'fCtlluNrum Trlchophyton mfJfItllf/rophyttlS M1crrporum gy".eum CMdid" elbAns CMdidll Mbw.ns A6pwpillUl niger ATCC CIP INCOS NCIB NCTC NCYC

U. ",

=
N

2601 9763 9080 9533 14683 10231 2091 16404

1432.83

40001 40002 40003 40004 40005 40006

87

I: (5

B - 8IIct6rias
MIcro"."ilm06 &lcillU6 subtilil s.cillU6 subtilil s.c;lIus CfHWU6 r. mycoide6 N Clonrldium St.""ylOCOCCUl Mlrt1U6 LJJctob:illUl ~(J/ 6p. m.mnosus LM:tob:ill pllllftMIm Lsetob:i li leichmfJfIii Micrococcus lut6U6 MicfOCOCCU6 luteus MicfOCOCCUS lut6U6 MicfOCOCCUS flllllus rtlSistllnte i1lH1Omlcina St""'ylococcus IlUr6U6 St.""yIOCOCCU6 Mlreus St""'ylococcus eureus SIIph/(lococcus epidtl""idis Strtlptococcus fa_lis St1rIptoeoecUl flHlClllis sr,.""tococcus ftltlCium MycobtIctllrium bovis MycolMcterlum Imegmatis Stephy'ococcIIS MlrtlUS Bordtlt""a bronchiStlptica ATCC CIP INCOS NCIB NCTC NeYC

" " ~
O Z

i
~ ~ t!1 ~
ti)

6/JO"".,.

6633 19659 11778 3584 14458 7469 8014 7830 7468 9341 10240 14452 6538p 13150 25923 12228 4083 14506 10541 19274 607 12598 4617

52.62 64.52

53.65 53.160 53.156

68.21

53.157

001 002 003 004 005 006 007 008 009 010 011 012 013 014 015 016 017 018 019 020 021 022 023

8054

10400 10230

8
~
8340 7743 8625 7447

;l
~ t!1
ti)

t!1 t!1

ti)

ti)
8853

>

8347

/)

)
:zl
CIll

)
024 025 026 027 028 029 030 031 032 033 034 035 036 037 038 039 040 041 042 043 044 045 046 047 048 049 050 051 052 053 054 055 056 057 058 059 060

~<

\O Oll Oll

N";'ltJrill gonorrho88" PNudomonllS _uginO$ll PsflUdomo". IlllrUginolll PNudomonllS .ruginoSll SIIImonell" choler_,ui, SII'mon""e typhi Klflbsi",III pneumonillfl Eschflrichill coli Eschflrichie coli Eschflrlchie coli Eschflrichill coli LlICtObIIcillus IIIichmlllJni StreptocoCCUI fHcium Mycobecterium bovi. SIIImonelle typhi St""'ylococcus 8Urt1U6 SII'mon""1I typhi 8ordet",III pertussis Slril/fllle dY6fll'/teriH &chfIrichie coli Eschflrichlll col ElChflrichie coli Eschflrichill coIi Eschflrichill col ElChflrichie coli E.chflrichie coli ElChflrichie coli Esch"richie col ClOItridium perlri1lfl#Jfls Oostrdium perfringeM ClOItridium botulnum tipo ClOItridium bott,llnum tipo ClOItridium botulinum tipo ClOItridium botulnum tipo ClOItridium botulinum tipo 811cteroidelllUlgetu, Ooltridium ,porOflMltll ClOItridium ,poro,."'" 1'Nudomo". lIfITUIinolll Escherichill col Slllmonellellbony

A O E G F

9826 15442 25619 29336 10708 6539 10031 10536 11229 25922 29214 4797 8043 27291 10749 6538 19214 18323 13313 23229 27065 23230 11303 15669 23724 23226 13706 13863 3626 3624 19397 27517 17786 27322 23387 8482 11437 19404 9027 8739

53.153 54.127

7427 8879

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c;')

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4.83

9518

~ ~ '"Cl
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t!l t!l

Z ~

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~

~
80.39 6017

U.

NDICE

Absorlo atmica, espectrofotometria '.' . Ao, uso e doses . Aoetato, reaes de identificalo . Aoetato de amnio . Aoetato de amnio SR .................................... Aoetato de amnio 2M , . Aoetato de celulose . Acetato de chumbo(Il) triidratado ....................... Acetato de chumbo, papel ... . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Acetato de chumbo(Il) SR ................................ Aoetato de chumbo (11), solulo saturada . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .... Aoetato de clorexidina 0,1% ................................ Aoetato de cortisona . Acetato de cortisona injetvel . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Acetato de desoxicortona . Acetato de etila ........... Acetato de fenilmercrio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Acetato de indofenol SR . Aetato de potssio . Acetato de prednisolona . Aoetato de s6dio . Aoetato de sdio SR . Aoetato de uranila . Aoetato de uranila e zinco SR . Aoetato de zinco . Aoetila, determinalo do ldice em gorduras e 6leos . Aoetila, reaes de identificalo . Acetilacetona ......................................... Aoetona . Aoetona desidratada .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Acidez e alcalinidade, ensaios rpidos . Acidez, c1eterminalo do ndice em gorduras e 6leos . . . . . . . . cido actico diludo . cido actico glacial . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . cido actico 0,045 M . . . ';'cido actico M , . Acido actico 2 M . cido actico 5 M . cido actico SR . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . cido ascrbico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . cido benz6ico . cido orico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . cido b6rico, solulo saturada " . cido bromdrico . cido calconcarboxlico . cido clordrico . cido clordrico diludo . cido clordrico 0,5 M . cido clordrico M ; . cido clordrico M SV . cido clordrico 2 M . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . cido clordrico SR . cido crmico .

V.2.13.

IV.
V.3.1.

XII.2. XII.2. XII.2. XII.2. XII.2. XII.2. XII.2. XII.2. XII.2. XII.2. XII.2. XII.2. XII.2. XII.2. XII.2. XII.2. XII.2. XII.2. XII.2. XII.2. XII.2. XII.2.
V.3.3.l3. V.3.1.

XII.2. XII.2. XII.2. IV. 3.3.7. XII.2. XII.2. XII.2. XII.2. XII.2. XII.2. XII.2. XII.2. XII.2. XII.2. XII.2. XII.2. XII.2. XII.2. XII.2. XII.2. XII.2. XII.3. XII.2. XII.2. XII.2.

(1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988)

cido edtico cido fenoldissu1fnico SR cido frmico cido fosfomolibdico cido fosfomolhdico 3,5% cido fosfrico cido fosfrico 6 M .. cido fosfrico SR cido p-hidroxibenzico cido metafosfrico cido metafosfrico-actico SR cido ntrico . . . . . . . . . . . . . . . cido ntrico fumegan te cido ntrico M cido ntrico SR cido oxlico cido oxlico SR cido perclrico cido perclrico M . . . . . . . . . . . cido perclrico 0,1 M SV em cido cido perclrico SR cido perfrnrico cido salicllico cido sulfanl1ico cido sulfanilico SR . . . . . . . . . . cido sulfrico cido sulfrico M cido sulfrico M SV cido sulfuroso cido tiogliclico . . . . . . . . . . . . cido tricloroactico

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. .. .. . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . actico glacial

. . . .. . . . . . . . .. . . . . . . . . .. . . .

.. . .. . . .. . . . . . . . . .. . .. . .. .. .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

gar

"

'"

gua, deternrinao . gua e sedimentos, determinao em gorduras e leos . gua em drogas vegetais, determinao . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . gua, generalidades . gua de bromo SR . Agua isenta de dixido de carbono . guas aromticas . Alaranjado de metila I . Alaranjado de xilenol I . Alcalinidade e acidez, ensaios rpidos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Alcalide, reaes de identificao . lcool, determinao . lcool isopropilico . lcool n-proplico . Alizarina I . Alumnio, reaes de identificao . Alumnio, tituIao por complexometria . Arnaranto S . AInarelo de alizarina GG I . AJIlarel0 de dimetila I . AJIlarelo de metanila I . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . AJIlarelo naftol I . AJIlarelo titan I . Ambiente, animais de laboratrio . Amido I . . " . Amido SR . Amido iodetado . Amido solvel . Amidos. . . .

XII.2. XII.2. Xll2. XII.2. Xll2. XII.2. XII.2. XII.2. XII.2. Xll2. XII.2. XlI.2. XII.2. XII.2. XII.2. XII.2. XII.2. Xll2. Xll2. XII.3. XII.2. Xll2. XlI.2. Xll2. Xll2. XlI.2. XII.2. XlI.3. Xll2. XlI.2. XlI.2. XII.2. V.2.20. V.3.3.6. V.4.2.3. IV. XII.2. XlI.2. IV. Xll1. XII. 1. IV. V.3.1. V.3.4.8. XlI.2. XlI.2. XlI.1. V.3.1. V.3.4.4. XlI.2. XlI.1. XII. 1. XII. 1. XII. 1. XII. I. XIII.2.2. XII. I. XlI.2. XII. I. XII.2. XlI.2.

(1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (198"8) (1988) (1988) (l988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (l988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (l988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988)

Amina aromtica primria, reaes de identificao . Aminocidos, anlise . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Aminofenazona . . Amnia e amina aliftica voltil, reaes de identificao . Amnia, ensaio-limite . Amnia 6 M . Amnia, soluo concentrada . Amnia SR . Amnio, reaes de identificao . Amostragem, mtodos de anlise de drogas vegetais. . . . . . . . . . . . . . . . .. Anlise de arninocidos . Anlise de drogas vegetais, mtodos . Anlise de solubilidade por fases . . . . . . . . . . . . . Anlise de varincia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Anexos . . . Anidrido actico ; . Anidrido actico-piridina SR '. Animais de laboratrio . Anisaldedo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Anisaldedo, soluo . Antibacterianos, produo de discos e metodologia para teste de sensibilidade . . . . Antibiograrna, metodologia para o teste de sensibilidade aos antibacterianos . Antibiticos, ensaio microbiolgico . . . . . . . . . . . . . . . . . Antibiticos, ensaio microbiolgico, anlise estatstica . Antimnio(lII), on, reaes de identificao . Ao acaso, tipos de delineamento . Aparelhos volumtricos . Arsnio, reaes de identificao . Arsnio, ensaio-limite . Asparagina . Avaliao fsica e qumica, recipientes de vidro . Avaliao visual, recipientes de vidro . Azul de bromofenol I . Azul de bromotimol I . Azul de hidroxinaftol I . AzuldoniloAl . Azul de oracet B I . Azul de timol I. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

V.3.I. V.3.4.9. XII.2. V.3.1. V.3.2.6. XII.2. Xl1.2. Xl1.2. V.3.1. V.4.2.I. V.3.4.9. V.4.2. V.2.2I. VI.5.2. XIII. XII.2. Xl1.2. XIII.2. Xl1.2. Xl1.2. VIII. XlII.I. V.S.2.!7. VI.10.2. V.3.I. VI.S.I.
IV.

(1988) (l988) (l988) (1988) {I988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988)

V.3.I. V.3.2.5. Xl1.2. IX.2.1. IX.2.l. XI!.1. XII.1. XlI.1. XlI.l. XlI.l. XI!.I.

Banho-maria e banho a vapor Barbital Barbital sdico ' Barbitrico sem substituirite no nitrognio, Blio, reaes de identificao Blio SRA. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Benzeno Benzoato, reaes de identificao Bicarbonato, reaes de identificao Bicarbonato de sdio . . . . . . . . . . . . . . Biftalato de potssio . . . . . . . . . . . . . . Biftalato de potssio 0,05 M Biolgicos, mtodos Bismuto, reaes de identificao Bismuto, titulaes complexomtricas Bissulfato de potssio Bissulfito, reaes de identificao Bissulfi to de sdio Blocos ao acaso, tipos de delineamento

reaes de identificao . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ..

. . . . . . . . . . . . . . . . . .

IV.

. . . . .. . . . . . . . .. . . . . . . . . .. . .. . . . . . . :

XI1.2. Xl1.2. V.3.I. V.3.I. XII.2. Xl1.2. V.3.I. V.3.I. Xl1.2. Xl1.2. XlI.2.
V.5.

V.3.l. V.3.4.4. Xl1.2. V.3.l. XII.2. V1.5.1.

(1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988)

Borato, reaes de identificao Bromato de potssio 0,1 M SV Brometo,reaesdeidentificao Brometo de iodo SR . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. Brometo de potssio. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. Bromo Bromo 0,2 M . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. Butanoll

V.3.1. XlU. V.3.1. XlI.2. XlI.2. XlI.2. XlI.2. XlI.2.

(1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988)

XII.2. Calciferol ............................................ Clcio, reaes de identificao . V.3.1. Clcio SRA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . XlI.2. Clcio, titulaf5es complexomtricas . V.3.4.4. Calcona I . XlU. Carbonato de clcio . XlI.2. Carbonato de estrncio . XII.2. Carbonato de ltio . XlI.2. Carbonato de s6dio anidro . XlI.2. Carbonato de sdio decaidratado . XII.2. Carbonato de s6dio monoidratado . XlI:2. V.2.17. 'Carboximetilce1ulose (veja cannelose) ......................... Carmelose, para cromatografia em coluna . V.2.l7. XII.2. Cefalina .................................'............. 11I. Comissio permanente de revislo da farrnacopica brasileira e colaboradores .. Chumbo, reaes de identificalo . V.3.1. V.3.l. Chumbo SRA ......................................... Chumbo, titulaes complexomtricas . V.3.4.4 Cianeto, reaes de identificao . V.3.1. Cianeto de potssio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . XlI.2. Cicloexano ..................................... '. . . . . XlI.2. Cineol, determinalo . V.4.2.8 Cinzas insolveis em cido, determinao em drogas vegetais . V.4.2.5 Cinzas sulfatadas, (resduos por incinerao), determinao . V.2.10. Cinzas totais, determinao em drogas vegetais . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . V.4.2.4 Citrato, reaes de identificao . V.3.1. Citrato de sdio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . XII.2. Clorato, reaes de identificao . V.3.l. Cloreto, reaes de identificao . V.3.1. Cloreto cobaltoso . XII.2. Cloreto cobaltoso SR . XII.2. Cloreto de amnio . XII.2. Cloreto de amnio SR . XII.2. Cloreto de brio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . XII.2. Cloreto de brio SR ..................................... XII.2. Cloreto de benzalcnio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . XlI.2. XlI.2. Cloreto de clcio ....................................... Cloreto de clcio anidro . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . XlI.2. Cloreto de clcio SR . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . XlI.2. XlI.2. Cloreto de clcio 0,025 M ................................. .Cloreto de magnsio . XlI.2. XlI.2. Ooreto de merc1rio(Il) ................................... Cloreto de metileno . XlI.2. Cloreto de metilrosanilnio I . XlI.I. Cloreto de paldio . XII.2. Cloreto de potssio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . XlI.2. Cloreto de potssio, soluo saturada . XII.2. Cloreto de s6dio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . XlI.2. Cloreto de sdio 0,9% . XII.2. Cloreto estanoso . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . XII.2.

(1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988)

(1988)
(1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988)

Cloreto estanoso SR . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Cloreto frrico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Cloreto frrico I . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Cloreto frrico SR . Cloreto mercrio SR . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Cloretos, ensaios-limite . Cloridrato de hidroxilamina . Cloreto meICUrio(Il) SR .................................. Clorobenzeno . Cobaltinitrito de sdio .................................... Cobre . Cobre SRA " . Cobre(ll), 10n, reaes de identificao ........................ Colrios .......................................... Combinaio de estimativas de potncia, exemplos . Combinao de estimativas de potncia ...................... Combustlo em frasco de oxignio, mtodo ...................... Com~exonretricu,tit~~s ............................ Condies sanitrias, animais de laboratrio . Conservao .......................................... Contagem de microrganismos viveis . Controle de qualidade de frascos de vidro ..................... Controle dos discos contendo antibacterianos . Corante BRP . Corantes . Corantes, substncias . Cor de lquidos . Corticotrofina, ensaio biolgico . CreJIles ............................................. o-Cresol ........................................... Cristal violeta . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . CroIDato de potssio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . CroIDato de potssio SR " . Cromatografla ." '.' . CroJIUltografia a gs . CroJIUltografia em camada delgada . CroJIUltografia em coluna . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . CroIDatografia em papel ~ . CroJIUltografia lqUida de alta presso '.' . Cruzado, tipo de delineamento ..............................

XlI.2. XlI.2. XII. I. XlI.2. XlI.2. V.3.2.1. XlI.2. XII.2. XII.2. XlI.2. XII.2. XlI.2. V.3.I. IV. VI.10.4. VI.8. V.3.4.3. V.3.4.4. Xlll.2.I. IV. V.5.I.6. 1X.2.I. VIlI.2. XlI.l. IV. XI. V.2.12. V.5.2.2. IV. XlI.2. XII. I. XlI.2. XlI.2. V.2.17. V.2.17.S. V.2.17.1. V.2.17.3. V.2.17.2. V.2.17.4. VI.5.1.

(1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988)

Defmies . Densidade de massa, determinao ............................ Densidade de massa, generalidades . Densidade relativa, determinao . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Densidade relativa, detenninalo em gorduru e leos ..... ........... Densidade relativa, generalidades . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Descrio de substncia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Descrio dos meios de cultura e reagentes, mtodo geral para pesquisa e identificao de pat6genos . Desintegrao de comprimidos e cpsulu . Desintegralo de supositrios, vulos e comprimidos vaginais . Desintegrafo, testes ... " .................................. Dessecaio at peso constante ............................... Dessecafo, detenninao da perda . Dessecador ., '.' . Detenninafo da densidade de massa e densidade relativa . . . . . . . . . . . . . . Detenninao da densidade relativa em gorduras e leos . Detenninafo da granulometria dos ps .......................

IV. V.2.5. IV. V.2.5. V.3.3.l. IV. IV. V.S.I.7.3. V.I.4.1. V.1.4.2. V.1.4. IV. V.2.9. IV. V.2.5. V.3.3.1. V.2.II.

(1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988)

Determinao da massa . .. . . .. . . . . . . . . . .. . . .. . . .. . . Determinao da metoxila . . . . . . . . . .. .. . . . . . . . . Determinao da perda por dessecao . Determinao da resistncia mecnica em comprimidos . Determinao da temperatura de congelamento . .. . . DeterminalIo da temperatura de ebulio e faixa de destilao . Determinao da temperatura e faixa de fuso . Determinao da temperatura de fuso em gorduras e leos . Determinao da temperatura de solidificao em gorduras e leos . Determinao da viscosidade . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . Determinao de gua . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Determinao de gua em drogas vegetais . Determinao de gua e perda por dessecao . Determinao de gua e sedimentos em gorduras e leos . Determinao de cinzas insolveis em cido em drogas vegetais . Determinao de cinzas sulfatadas (resduo por incinerao) . Determinao de cinzas totais em drogas vegetais . Determinao de matria insaponificvel em gorduras e leos . Determinao de material estranho em drogas vegetais . Determinao de nitrognio pelo mtodo de Kjeldahl . Determinao de leos essenciais em drogas vegetais . Determinao de leos fixos em drogas vegetais . Determinao de peso em formas farmacuticas . Determinao de resistncia mecnica em comprimidos . Determinao de substncias extraveis por lcool em drogas vegetais . Determinao de volume em formas farmacuticas . Determinao do lcool . Determinao do cineol em drogas vegetais . . . . . . . . . Determinao do dixido de enxofre . Determinao do ndice de acetila em gorduras e leos . Determinao do ndice de acidez em gorduras e leos . Determinao do ndice de espuma em drogas vegetais . Determinao do ndice de steres em gorduras e leos . DeterrInao do ndice de hidroxila em gorduras e leos . . . . . . . . . Determinao do ndice de iodo em gorduras e leos . Determinao do ndice de perxidos em gorduras e leos . Determinao do ndice de refrao . Determinao do ndice de refrao em gorduras e 4leos . Determinao do ndice de saponificao em gorduras e leos . Determinao do pH . Determinao do poder rotatrio e do poder rotatrio especfico . Determinao do poder rotatrio em gorduras e leos . Determinao do tempo de desintegrao de supositrios, vulos e comprimidos vaginais ..... _. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Determinao do tempo de desintegrao para comprimidos e cpsulas ..... Determinao do tempo de dissoluo para comprimidos e cpsulas . . . . . . . Determinaes em gorduras e leos . Diacetato de clorexidina . Diazotao, titulaes . Dicloreto de etileno . Diclorofenol-indofenol, soluo padro . 2,6-Dicloroindofenol, sal sdico . Dicromato de potssio . Dicromato de potssio SR . Dietilamina . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Dietilditiocarbamato de prata . Dietilditiocarbamato de prata SR . Difenilcarbazida . Difenilcarbazida I . Difenilcarbazida SR . Difenilcarbazona .

V.2.1. V.3A.6. V.2.9. V.1.3. V.2.4. V.2.3. V.2.2. V.3.3.2. V.3.3.3. V.2.7. V.2.20 V.4.2.3. IV. V.3.3.6. VA.2.5. V.2.10. V.4.2A. V.3.3.14. VA.2.2. V.3A.2. V.4.2.6. VA.2.7. V.1.1. V.1.3. V.4.2.1O. V.1.2. V.3.4.8. VA.2.8. V.3A.7. V.3.3.13. V.3.3.7. V.4.2.9. V.3.3.9. V.3.3.12. V.3.3.10. V.3.3.11. V.2.6. V.3.3.4. V.3.3.8. V.2.19. V.2.8. V.3.3.5. V.IA.2. V.1.4.1. V.1.5. V.3.3. XII.2. V.3.4.1. XlI.2. XlI.3. XII.2. XlI.2. XII.2. XlI.2. XlI.2. XlI.2. XlI.2. XII.1. XlI.2. XlI.2.

(1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988} (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988)

Difenilcarbazona I . Diftalato de potssio 0,05 M (veja biftalato) . Difuso em gar, ensaio microbiolgico . Digital, ensaio biolgico . Digital, ensaio estatstico . p-Dimetilaminobenzaldedo . p-Dimetilaminobenzaldedo 5% em cido clordrico . p-Dimetilaminobenzaldeco 0,1% . . Dimetilformamida . Dimetilsulfxido (DMSO) . Dioxana . Dixido de enxofre, determinao . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Dixido de enxofre . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Di6xido de mangans . Dissoluo, determinao do tempo para comprimidos e cpsulas . Ditiol '.' . Ditio1 SR . Ditizona . . . . . . . . . . . . . ; . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Ditizona SR. . . Ditizona 0,025% em etanol ................................. Ditizona 0,002% em tetracloreto de carbono ..................... Doses . Doses e medidas aproximadas . Drogas vegetais, mtodos de anlise . Durao do efeito da insulina . Dureza, determinao em comprimidos .

XII. L XlI.2. V.5.2.17.I. V.S.2.12. VI.lO.1. XlI.2. XlI.2. XlI.2. XlI.2. XlI.2. XlI.2. V.3.4.7. XlI.2. XII.2. V.1.S. XlI.2. XlI.2. XlI.2. XlI.2. XlI.2. XlI.2. N. N. V.4.2. V.S.2.4. V.1.3.I.

(1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988)

Edetato dissdico Edetato dissdico 0,05 M Edetato dissdico, 0,05 M SV Eletroforese Elixires . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Embalagem, material de acondicionamento Eosina YI Emulses Enriquecimento no seletivo, para pesquisa e identificao Ensaio biolgico de corticotrofma . . . . . . . . . . . . . . . Ensaio biolgico de digital Ensaio biolgico de felipressina Ensaio biolgico de glucagon Ensaio biolgico de gonadorelina Ensaio biolgico de gonadotrofina corinica Ensaio biolgico de gonadotrofma srica . . . . . . . . . . . Ensaio biolgico de heparina . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Ensaio biolgico de insulina . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Ensaio biolgico de lipressina .... .. . .. . .. . .. .. . Ensaio l:iiolgico de menotrofina . . . . . . . . . . . . . . . . Ensaio biolgico de oxitocina ~ Ensaio biolgico de somatotrofma Ensaio biolgico de sulfato de protamina Ensaio biolgico de vasopressina . . . . . . . . . . . . . . . . Ensaio-limite para amnia Ensaio-limite para arsnio Ensaiolimite para cloretos ................................. Ensaio-limite para ferro Ensaio-limite para metais pesados Ensaio-1imite para sulfatos Ensaio microbiol6gico de antibiticos Ensaio microbiolgico por difuso em gar

. . . .. . . .. . . . .

de patgenos .. .. . . . . . .. . .

. . . . .

. . . . .

. . . . .

. . . . .

. . . . .

. . . . .

. . . . .

. . . . .

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. . . . .

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.. . .. . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

XlI.2. XlI.2. XII.3. V.2.22. IV. IV. XII. L N. V.S.1.7.1. V.S.2.2. V.5.2.12. V.5.2.1S. V.5.2.5. V.5.2.10. V.S.2.9. V.S.2.8. V.S.2.6. V.S.2.3. V.S.2.14. V.S.2.1I. V.5.2.1. V.5.2.16. V.S.2.7. V.S.2.13. V.3.2.6. V.3.2.5. V.3.2.I. V.3.2.4. V.3.2.3. V.3.2.2. V.5.2.17. V.S.2.17.1.

(1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988)

Ensaio Dcrobiolgico por turbidimetria . Ensaios qunucos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Ensaios biol6gicos ...................................... Ensaios biol6gicos, precislo . Ensaios biol6gicos, procedimentos estatsticos . Ensaios diretos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Ensaios estatsticos, exemplos . Ensaios indiretos quantitativos . Ensaios indiretos "tudo ou nada" . Ensaios-limite para impurezas inorgnicas . Espec.trofotometria de absorlo atmica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Espectrofotometria de absorA'ono ultravioleta, visvel e infraverme1ho . Espectrofotometria de fluorescncia . Espritos . Estatsticas, tabelas . Estearato de metila ..................................... ~ster, reaes de identificalo . ~steres, deterDnalo do ndice em gorduras e 6leos . Esterilidade, teste . Esterilizao e acondicionamento dos meios de cultura, mtodo geral de pesquisa e identificao de pat6genos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Esterilizalo, mtodos . Ester6ides estranhos, pesquisa . Ester6ides, identificao . Estimativa da potncia e limites de confiana . Estimativa de erro residual . Estimativa de potncia, combinao . Estolato de eritromicina . Estrncio SRA . Etanol . Etanol absoluto . ~ter de petrleo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ~ter etlico . ~tica, animais de laboratrio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Exemplo de combinalo de estimativas de potncia . Exemplo de ensaio direto . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Exemplo de ensaio indireto "tudo ou nada" . Exemplos de ensaios estatsticos . Exemplos de ensaios indiretos quantitativos ~ . Extratos fluidos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Extratos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Extratos moles . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Extratos secos .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

V.5.2.17.2. V.3.4. V.S.2. IV. VI. VI.4. VI.I0. VI.5. VI.7. V.3.2. V.2.l3. V.2.14. V.2.1S. IV. VI.lO. XlI.2. V.3.l. V.3.3.9. V.S.l.l. V.S.l.7.4.

X.
V.3.l.3. V.3.1.2. VI.S.4. VI.9.11. VI.8. XII. 2. XlI.2. XlI.2. XlI.2. XlI.2. XlI.2. XlII.2.S. VI.lO.4. VI.I0.l. VI.I0.3. VI.lO. VI.lO.2. IV. IV. IV. IV.

(1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) {I 988) (1988) (1988) (1988) {I 988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988)

"'

Faixa de destilao e temperatura de ebulio, determinao Farmacognosia, mtodos .................................. Felipressina, ensaio biolgico Fenol Fenolftalena ' Fenolftalena I Fenolftalena 0,1% Fenotiazinas, identificao Fenotiazinas, pesquisa de impurezas 2Fenoxietanol Ferricianeto de potasslo Ferricianeto de potssio SR Frrico, reaes de identificalo Ferrocianeto de potssio Ferrocianeto de potssio SR . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . .

V.2.3. V.4. V.S.2.1S. XlI.2. XlI.2. XlI.l. XlI.2. V.3.1.S.

V.3.1.6.
XlI.2. XlI.2. XlI.2. V.3.l. XlI.2. XlI.2.

(1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (l988) (1988) (1988) (1988)

Ferro, ensaio-limite o o o ooo oo o Ferro(ico), reaes de identificao. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. Ferro(oso), reaes de identificao .. o ........... o ...... o .. o Fitofnnacos, veja preparo de material vegetal . o o oo o oo Fluoreto de clcio .. o o o. oo. o o o Fluorescncia, espectrofotometria o ...... o ... o o .. o o o o o .. Formaldedo ................................ o . o o .. Formamida . o .................................. o o . .. Formas farmacuticas, determinalo de peso . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. Formas farmacuticas, determinalo do volume. . . . . . . . . . . . . . . . . . .. Frmula qumica ........... o . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. Fosfato ou ortofosfato, reaes de identifica'o .................. , Fosfato de potssio monobsico ........................ o o, Fosfato de sdio dibsico, ddratado . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Fosfato de sdio dibsico, dodecaidratado o . . . . . . . . . .. Fosfato de sdio dibsico, dodecaidratado SR . . . . . . . . . . . . . . . . . .. Fosfato de sdio tribsico, dodecaidratado .................... o' Fosfato equimolal 0,05 M .... o o . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. Friabidade, determinao em comprimidos o. o o Frutose o o. ooo o . .. Frutose 0,1% o . o o o ................ o o .. o o .. o Fundamentos dos procedimentos estatsticos o o o o . . . .. Fuso, determinaio de temperatura em gorduras e leos .. o o . . . . . .. Fuso, determinaio da temperatura e faixa . o o . . . . . ..

V.3.2.4o V.3.l. V.3.I. V.4oI. XII. 2. V.2.15. XII.2. XlI.2. V.I.I. V.l.2.
N.

V.3.1. XlI.2. XlI.2. XII.2. XlI.2. XII.2. XII.2. V.l.3.2. XII.2. XlI.2. VI.2o V.3.3.3. V.2.2.

(1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) {I 988) (1988)

Galactose '" o o . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. Galactose 0,1 % ...... o o o . . . . .. Gis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. Gelatina o o . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. Generalidades o . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. Gentica, animais de laboratrio ............ o ........ o o .. , Glicerol o .. o o o o o o' Glicose o . o .. o . o o .. o o o o ....... o oo o Glicose 0,1% o o .. o . o o Glossrio de smbolos ... o . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . o . . . . . .. Glucagon, ensaio biolgico ......................... o . . . . .. Gonadorelina, ensaio biolgico .. o o .. Gonadotrofma corinica, ensaio biolgico. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. Gonadotrofma, ensaio estatstico ..................... o . . . .. Gonadotrofina srica, ensaio biolgico o o .. o Gorduras e leos, determinaes ................. o . o . . . . . . . .. Granulometria dos ps, determinallo .................... o . . . ..

XII.2. XII.2. IV. XlI.2. IV. XlII.2.4o XlI.2. XlI.2. XII.2. VI.1. V.5.2.5. V.5.2.1O. V.5.2.9o V1.10.2. V.5.2.8. V.3.3. V.2.1I.

0988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988)

Heparina, ensaio biolgico ..... . . .. . . . . . . . . . . . . . . . Heparina, ensaio estatstico o..... oo. . . . . . . . o. . . . . o. . Heparina sdica o . o. . . oo. . . . . . . . . . . . oo . . . . . . Heptano o o n-Heptano o o Hexano ........ o ........................ n-Hexano .. o ........... o ................. Hidrato de cl5>ral oo o . o . o o . o o o o .. o Hidrxido de lUIlnio o. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Hidrxido de lUIlnio 6 M o. . . . . . . . o. . . . Hidrxido de clcio o . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . o . . . o . Hidrxido de clcio SR . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Hidrxido de clcio saturado a 25C Hidrxido de clcio, soluo saturada

. . . . . . . . V.5.2.6. . . . . . . . o VI.10.2. . . o . . . . o XlI.2. o . XlI.2. . XII.2o XII.2. o .. XlI.2. o o o . XlI.2. . . o . . . o o XlI.2. o . . o . . . . XlI.2. . . . . o . . o XlI.2. . . . . . . . . XII.2. o XlI.2. o . XII.2.

(1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988)

Hidr6xido de potssio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Hidr6xido de potssio alcolico 0,5 M . Hidr6xido de potssio aproximadamente 0,5 M . Hidr6xido de potssio M SV . Hidr6xido de sdio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Hidr6xido de s6dio M . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Hidr6xido de s6dio M SV . Hidr6xido de s6dio SR . Hidrxido de s6dio, soluo concentrada SR . Hidrxido de tetrabutilamnio . Hidrxido de tetrabutilamnio 0,1 M SV . Hidroxila, determinao do ndice em gorduras e 61eos . Hidroxitolueno butilado . . Hipofosfito de s6dio . Hipofosfito de s6dio SR. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Hipofosfito, reaes de identificaio . Histanna, teste para . Hist6rico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Hormnio do crescimento, veja somatotrofma .

XlI.2. XII.2. XII.2. XlI.3. XlI.2. XlI.2. XlI.3. XII.2. XII.2. XII.2. XII.3. V.3.3.12. XII.2. XII.2. XII.2. V.3.l. V.5.l.5.

11.
V.5.2.16.

( 1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) ( 1988) (1988)

Identificao de esterides por cromatografla em camada delgada . Identificao de fenotiazinas por cromatografla em camada delgada . Identificao, reaes . Identificao e pesquisa de pat6genos, mtodo geral . Irnidazol . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Impurezas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . Impurezas inorgnicas, ensaios-limite . Incinerao at peso constante . Indicadores . Indicadores biolgicos . Indicadores, generalidades . ndice de acetila, determinao em gorduras e leos . ndice de acidez, determinao em gorduras e leos . ndice de steres, determinao em gorduras e leos . ndice de espuma, determinao em arogas vegetais . ndice de hidroxila, determinao em gorduras e leos . . . . . . . . . . . . . . . . ndice de iodo, determinao em gorduras e leos " . ndice de perxidos, determinao em gorduras e leos . ndice de refrao, determinao . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . (ndice de refrao, determinao em gorduras e leos . ndice de saponificao, determinao em gorduras e leos . Infravermelho, espectrofotometria de absoro . Injetveis . lodeto de mercrio(lI) ................................ . Iodeto de potsSIO . lodeto de potossioaproximadamente M . lodeto de potssio SR . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . lodeto de potssio mercrico alcalino . Iodeto de sdio . lodeto de sdio em cido actico ............................ lodeto, reaes de identificao . Iodo, determinao do ndice em gorduras e leos . Iodo . Iodo SR . Iodo 0,5% SR . Iodo 0,1 M SV . Iodobismutato de potssio SR . Iodobismutato de potssio, aquo-actico .

V.3.l.2. V.3.l.5. V.3.l. V.5.1.7. XII.2.

IV.
V.3.2.

IV. X.2.
IV. XII.l. V.3.3.13. V.3.3.7. V.3.3.9. V.4.2.9. V.3.3.12. V.3.3.10. V.3.3.1l. V.2.6. V.3.3.4. V.3.3.8. V.2.14.

IV.
XII.2.

XII.2.
XlI.2. XII.2. XII.2. XII.2. XII.2. V.3.l. V.3.3.10. XII.2. XII.2. XlI.2. XII.3. XlI.2. XlI.2.

(1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (988) (1988) (1988) (1988)

Iodo 1% em metanol ons, grupos e funes, reaes de identificao .. . . . . . . . . . . Insulina, durao do efeito Insulina, ensaio biolgico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Insulina, ensaio estatstico (ensaio duplo cruzado) Insulina, ensaio estatstico (ensaio "tudo ou nadalt) Interpretao da preciso dos dados numricos e limites de tolerncia Irganox 1010 Irganox 1076 Irganox P S .800

. . . . . . . . .

XlI.2. V.3.1.1. V.5.2.4. V.5.2.3. VI.lO.2. VI.lO.3. IV. XII.2. XlI.2. XlI.2.

(1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (l988) (1988) (1988)

Lactato, reaes de identificao . . . . . . . . . . . . . . . . Lactose .............................................. Lactose 0,1% Laurato de metila . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Laursulfato de sdio Laurilsulfato de sdio SR . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Lecitina Limites de confiana e potncia mdia ponderada Limites de tolerncia, interpretao dos dados numricos Limpidez de solues, reaes qumicas Lipressina, ensaio biolgico Lquidos, cor . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Ltio, reaes de identificao Ltio SRA Loes

. . . . . . . . . . .... . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. .. . . . . . . . . . .

V.3.1. XlI.2. XlI.2. XlI.2. XII. 2. XII.2. XlI.2. VI.8.1. IV.

IV.
V.5.2.14. V.2.12. V.3.1. XII.2. IV.

(1988) (l988) (1988) (l988) (l988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988)

Macrogol 300 . XII.2. Magnsio, reaes de identificao . V.3.!. Magnsio SRA . XlI.2. Magnsio, ~tuIaes complexomtricas . V.3.4.4. Magneson , . XlI.2. Magnesonl . XlI.l. Massa atmica relativa . IV. Massas atmicas, slmbolos e nomes . XlII.3. Massa, deternlinao . . . . . . .. ' . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . V.2.!. Matria insaponificvel, determinao em gorduras e leos . . . . . . . . . . . . . V.3.3.l4. Material de acondicionamento e embalagem . IV. Material para cromatografia . V.2.17.6. Material plstico . IX.1.!. Material plstico, recipientes . IX.2.2. Materiais empregados na fabricao de recipientes . IX.l. Materiais estranhos, determinao em drogas vegetais . V.4.2.2. Materiais plsticos base de cloreto de polivinila (PVC) . IX.!.!.!. Materiais empregados na fabricao de recipientes . IX.!. Mdiasmveis " ., . VI.6. Medicamentos pressurizados . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . IV. Medidas aproximadas e doses . IV. Medidas de press'o . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . IV. Meio nio-aquoso, titulaes . . . . V.3.4.5. Meios de cultura recomendados para ensaios microbiolgicos de antibiticos . V.S.2.!7. Meios de cultura, para pesquisa e identificalo de patgenos . V.S.!.7.4. Meios de cultura, teste de esterilidade . V.S.l.!.

(l988) (1988) (l988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988)

Menotrofma, ensaio biolgico . . . . , . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Mercrio, reaes de identificao . Mercrio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Mercrio SRA . Metabissulfito sdico . Metais pesados, ensaiolimite . Metanol . Metenarnina. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Mtodo da destilao azeotrpica, determinao de gua . Mtodos biolgicos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Mtodo de combusto em frasco de oxignio . Mtodo de flltrao por membrana, teste de esterilidade . Mtodo geral para pesquisa e identificao de patgenos . Mtodo gravimtrico, determinao de gua . Mtodo de inoculao ou direto, teste de esterilidade . Mtodos qumicos . Mtodos qumicos, esterilizao . Mtodo volumtrico, determinao de gua . Metodologia para o teste de sensibilidade aos antibacter!anos, antibiograma .. Metodologia para teste de sensibilidade aos antibacterianos . Mtodos de anlise . Mtodos de anlise de drogas vegetais . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Mtodos de esterilizao . Mtodos fsicos e fsico-qumicos . Mtodos fsicos, esterilizao . Mtodos de farmacognosia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Mtodos de preparao . Mtodos qumicos, esterilizao . Metoxiazobenzeno . Metoxiazobenzeno SR . Metxido de potssio . Metxido de sdio . Metxido de sdio 0,1 M SV . Metoxila, determinao . Microrganismos recomendados para ensaio microbiolgico de antibiticos . Microrganismos empregados em testes e ensaios . Microrganismos viveis, contagem . Miristato de metila . Mistura anidrido actic~piridina SR . Mistura composta de calcona, indicador . Mistura indicadora ABT, VM, F . Mistura de negro de eriocromo T . Molibdato de amnio . Molibdato de amnio SR . Molibdovandio SR .

V.S.2.11 V.3.l.
XlI.2. XlI.2. XlI.2. V.3.2.3. XII.2. XII.2. V.2.20.2.

V.S.
V.3.4.3.

V.S.I.I.
V.s.I.7. V.2.20.3.

V.S.I.I.
V.3.

X.l.2.
V.2.20.I. XIII. I. VIII.

V.
V.4.2.

X.l. V.2. X.l.I. V.4.

X.
V.3. XII.2. XII.2. XII.2. XII.2. XII.3. V.3.4.6. V.5.2.17. XlII.5.

V.S.I.6.
XII.2. XlI.2. XII. I. XII. I. XII.2. XlI.2. XII.2. XII.2.

(1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988)

INaftilamina ......................................... 2Naftol 2Naftol SR INaftolbenzena I INaftolftalena I ...................................... Nefelometria e turbidimetria Negro de eriocromo TI Negro de eriocromo T Ninidrina N'midrina SR Nitrato, reaes de identificao .............................

. . . . . . . .

XlI.2. XlI.2. XlI.2. XII. I. XlI.1. V.2.16 XII.1. XII.2. XlI.2. XII.2.

V.3.1.

(1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988)

XlI.2, Nitrato de amnio ...................................... Nitrato de amnio, solu'o saturada . XlI.2. Nitrato de amnio SR . XlI.2. Nitrato de birio . XII.2. Nitrato de birio 0,05 M . XlI.2. Nitrato de cobalto(I1) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . XII.2. Nitrato de cobalto(Il) SR . XII.2. Nitrato de chumbo . XlI.2. XlI.2. Nitrato de lantnio ' Nitrato de lantnio SR . XlI.2. Nitrato de mercrio(I) . XlI.2. Nitrato de mercl1rio(I) SR . XlI.2. Nitrato de mercrio(Il) . XII.2. Nitrato de mercrio(Il) 0,1 M SV . XlI.3. Nitrato de prata 0,1 M . XII.2. Nitrato de prata 0,1 M SV . XII.3. Nitrato de prata . XII.2. Nitrato de prata SR : . XlI.2. Nitrato de t6rio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . XlI.2. Nitrato fenilmercrico . XII.2. Nitrito de ~ . XlI.2. Nitrito de sdio ~ ...................................... XlI.2. Nitrito de s6dio 0,1 'M SV ................................. XlI.3. V.3.1. Nitrito, reaOes de identificalo ............................. XII.2. Nitrobenzeno .................................... NitroFnio, determinalo pelo m6todo de Kjeldahl ................ V.3.4.2. V.3.4.1. Nitr<>Fnio em aminas aromticas primrias .................... NOJne quD1ico ......................................... IV. Nomenclatura ......................................... IV. Nomes, smbolos e massasatmicas ......................... XIII.3. Nutriio,animaisdelaborat6rio ............................. XIII.2.3.

(1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988)

Odor, generalidades. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . leos essenciais, deterD1inalo em drogas vegetais leos flXos, detennina'o em drogas vegetais . . . VUlos Oxalato, reaes de identificalo . . . . . . . . . . . Oxalato de amnio .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . Oxalato de amnio I Oxalato de amnio SR . . . . . . . . . . . . . . . . . . Oxalato de potssio. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Xido de alumnio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . xido de h6lmio xido de magnsio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . xido Jnercrico Oxitocina, ensaio biolgico. . . . . . . . . . . . . . . Oxitocina, ensaio estatstico. . . .. . . . . ... . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . .. , . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . ..

IV. V.4.2.6. V .4.2.7. N. V.3.1. XlI.2. XlI.I. XlI.2. XlI.2. XlI.2. XII.2. XlI.2. XII.2. V.S.2.I. VI.lO.2.

(1988) (1988) (1988) (1988) (l9a8) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988)

Padres e substncias de referncia Paldio SRA Palmitato de metila Papel de amarelo de titan . . . . . . Papel de amido iodetato . . . . . . . Papel de fenolftalena . . . . . . . . Papel de prata-mangans Papel de tomassol azul . . . . . . . . Papel de tomassol vermelho

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. , . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . ..

IV. XlI.2. XlI.2. XII.l. XII.I. XII.I. XII.2. XII. I. XII.I.

(1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988)

Papel de vermelho de congo . . XlI.l. Pastas . IV. Patgenos, mtodo geral . V.5.1.7. Pentxido de fsforo. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . XlI.2. Pentxido de vandio . XlI.2. Peptona . XlI.2. Perda por dessecao, determinao . V.2.9. Perda por dessecao, determinao de gua . IV. Permanganato, reaes de identificao . V.3.1. Permanganato de potssio . XlI.2. Permanganato de potssio SR . XlI.2. Peroxidissulfato de amnio . . . . . . . . XlI.2. Perxido de hidrognio 3% . XlI.2. Perxido de hidrognio concentrado . XlI.2. Perxido de hidrognio 30 volumes SR . . . . . . . . . . . . . XlI.2. Perxido, determinao do ndice em gorduras e leos . V.3.3.11. Perxido, reaes de identifica'o . V.3.l. Persulfato de sdio . XlI.2. Peso constante, dessecao . IV. Peso, determinao em formas farmacuticas . V.1.1. Pesos e medidas . IV. Pesquisa de esterides estranhos por cromatografia em camada delgada . V.3.1.3. Pesquisa de impurezas relacionadas a fenotiazinas por cromatografia em camada delgada . V.3.1.6. Pesquisa de substncias relacionadas a sulfonamidas por cromatografia em camada delgada . V.3.l.4. pH, determinao . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . V.2.19. Piridina . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . XIl.2. Pirognios, teste . V.5.1.2. Plstico, material . IX. 1.1. Poder rotatrio, determinao em gorduras e leos . V.3.3.S. Poder rotatrio e poder rotatrio especfico, determinao . V.2.8. Polarografia : . V.2.18 Polarografia de pulso . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . V.2.18. Poacrilarnida . XlI.2. Poestireno . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . IX.l.1.2.4. Poestireno opaco . IX.1.1.2.S. Poetileno de alta densidade . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . IX. I. 1.2 .2. Poetileno de baixa densidade . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . IX. 1. 1.2. I. Poolefmas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . IX. I. 1.2. Popropileno . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . IX.l.l.2.3. Possorbato 80 . XII.2. Pomadas . IV. Porcentagens . IV. PS,determinao da granulometria . V.2.11. Potssio, reaes de identifica'o . V.3.l. Potssio SRA . XlI.2. Potncia e limites de confllUla,estimativa . VI.S.4. Potncia mdia ponderada e limites de confiana . VI.8.1. Prata, reaes de identificao . V.3.1. Prazo de validade . IV. Preciso dos ensaios biolgicos . IV. Prednisolona . XII.2. Prednisona . XlI.2. Prefcio . I. Preparo de solues . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . IV. Preparaes tpicas semisdas . IV. Preparo de material vegetal para observao e estudos histolgicos . V.4.l. Presso reduzida . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . IV. Preto brilhante BN . XlI.2. Procedimentos estatsticos apcveis aos ensaios biolgicos . VI.

(1988) ( 1988) ( 1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) ( 1988) (1988) (1988) (1988) ( 1988) ( 1988) (1988) (1988)

""""'I

Procedimentos tcnicos aplicados a medicamentos . Processos de fabricao . . . . . . . . . Produio de discos . Produo de discos e metodologia para teste de sensibilidade aos antibacterianos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Propilenoglicol . Protamina (sulfato), ensaio biolgico . Prova em branco . Prpura de bromocresol I . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Prpura de metacresol I .

V.I. IV. VIII. I. VIII. Xl1.2. V.5.2.7. IV. XII. I. XII. I.

(1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988)

Quadrado latino, tipos de delineamento Quinalizarina . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ..

VI.5.1. Xl1.2.

(1988) (1988)

,-...

Radiofnnacos. . .. . . . . . . .. .. . .. . .. . . .. . . . .. . .. . . . . . . . . . Reaes de identificao (Conceito) . Reaes de identificao . Reaes qumicas e limpidez de solues . Reagentes . Reagente de prpura de bromocresol . Reagentes e solues reagentes .............................. Reagentes, indicadores, solues reagentes, solues indicadoras, solues colorimtricas e solues volumtricas . Recipientes . Recipientes de material plstico . Recipientes de vidro . Recipientes e materiais empregados na sua fabricao . Refrao, determinao do ndice . Requisitos para a produA'o de discos e metodologia para teste de sensibilidade aos antibacterianos . Resazurina . Resazurina I . Resduo por incinera'o, determinaA'o . Resistncia mecnica em comprimidos, determinalo . Resorcinol . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . '.' Resorcinol I . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Rotulagem .

VII. IV. V.3.I. IV. XII. XII. I. Xl1.2. IV. IX.2. IX.2.2. IX.2.l. IX. V.2.6. VIII. XII.2. XlI.l. V.2.10. V.1.3. XlI.2. XII. I. IV.

(1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988)

Sacarose . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Sacarose 0,1 % Safranina O . . . .. .. . . . . . . .. . . . .. . .. . .. . .. . Salicilato, reaes de identificaio Saponificao, determinao do ndice em gorduras e leos Segurana biolgica, testes . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Slica-gel dessecada Slica-gel "G" Slica-gel "GF 254" Stllca-gel "H" Slica-gel "HF 254" Smbolos, glossrio de procedimentos estatsticos aplicveis biolgicos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . S6dio, reaes de identificao Sdio SRA Solidificao, determinao da temperatura em gorduras e leos Solubilidade por fases, anlise

. . . .. . .. .

.
. . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . aos ensaios . . . . . . . . . . . . .. .

XII.2. XlI.2. XlI.2. V.3.l. V.3.3.8. V.5.l. XlI.2. XII.2. XlI.2. XlI.2. XlI.2. VI. I. V.3.1. XlI.2. V.3.3.3. V.2.2I.

(1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988)

Solubilidade . Soluo de brio 10 ppm . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Soluo de cdmio S ppm . Soluo de cloreto S ppm . Soluo de estanho S ppm . Soluo de Karl-Fischer . _ . Soluo de zinco 10 ppm . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Solues e reagentes . Solues empregadas nos ensaios microbiolgicos de antibiticos . Solues indicadoru (veja indicadores) ........................ Solues reagentes, indicadoras, colorimtricas e volumtricas . Solues voluIDtricas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Sornatotrofma, ensaio biolgico . Subnitrato de bismuto . Substncias adjuvantes . Substncias corantes . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Substncias extraveis por lcool, determinao em drogas vegetais . Substncias pressoras, teste . Substncias relacionadas a sulfonamidas, pesquisa por cromatografia em camada delgada '. Substncias vasodepressoras, teste . . .. . . Succinato, reaes de identificao . Sudanlll . Sulfanilamida . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Sulfato cprico pentaidratado . Sulfato cprico SR . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . Sulfato de amnio . Sulfato de brio . Sulfato de cdmio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Sulfato de clcio hemiidratado . Sulfato de clcio soluo saturada SR . Sulfato de rnangans ..................................... Sulfato de potssio ...................................... Sulfato de protamina . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Sulfato de sdio anidro ...................... . . Sulfato de sdio decaidratado . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Sulfato de zinco heptaidratado . . .. . . . . . .. .. .. . .. . .. . .. . . .. .. . Sulfato de zinco 0,1 M .................................... Sulfato de zinco 0,1 M SV .............................. Sulfato frrico ......................................... Sulfato frrico amoniacal . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . Sulfato frrico amoniacal SR . Sulfato frrico-ferricianeto de potssio SR . Sulfato ferroso heptaidratado , . Sulfato ferroso SR . Sulfato ferroso 0,5 M ................................ Sulfato, reaes de identificao . Sulfatos, ensaio-limite .................................... Sulfeto de amnio em soluo .............................. Sulfeto de amnio SR .................................... Sulfeto de hidrognio .................................... Sulfeto de hidrognio SR . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Sulfeto de sdio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Sulfeto de sdio SR ..................................... Sulfito, reaes de identificao . Sulfonamidas, substncias relacionadas, pesquisa por cromatografia em camada delgada . Supositrios . Suspenses .

IV. XlI.2. XlI.2. XlI.2. XlI.2. XII.2. XlI.2. XlI.2. V.S.2.17. XII. I. IV. XlI.3. V.5.2.l6. XII.2. IV. XI. V.4.2.l0. V.S.1.8. V.3.1.4. V.S.1.4. V.3.1. XlI.2. XlI.2. XlI.2. XlI.2. XlI.2. XlI.2. XII.2. XlI.2. XlI.2. XII.2. XlI.2. XII.2. XlI.2. XlI.2. XII.2. XlI.2. XI!.3. XlI.2. Xll.2. XlI.2. XlI.2. XlI.2. XlI.2. XlI.2. V.3.1. V.3.2.2. XII.2. XII.2. XlI.2. XlI.2. XlI.2. XlI.2. V.3.1. V.3.1.4. IV. IV.

(1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988)

Tabelas estatsticas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Tampo acetato-acetato de amnio . Tampo acetato-cianato de amnio . Tampo acetato-cido clordrico - pH 3,5 . Tampo acetato - pH 4,4 . Tampo acetato - pH 7,0 . Tampo alhumina-fosfato - pH 7,2 . Tampo amnia - pH 10,9 . Tampo barbital - pH 8,6 ................................. Tampo cloreto de amnio - pH 10,0 ......................... Tampo fosfato - pH 6,0 ................................ Tampo fosfato - pH 6,8 . Tampo fosfato - pH 7,2 ................................. Tampo fosfato equimolar 0,025 - pH 6,86 . Tampo fosfato M/15 - pH 7,0 ............................ Tampo imidazol - pH 7,4 ................................. Tampo tris-cloreto de s6dio - pH 7,5 ......................... Tanino .............................................. Tartarato cido de epinefrina ............................ Tartarato de sdio ................................ Tartarato de sdio e potssio .............................. Tartarato de sdio e potssio SR ............................. Tartarato, reaes de identificao .......................... Temperatura ambiente . Temperatura de congelamento, determinao . Temperatura de ebulilo, determinalo ........................ Temperatura de fuslo, determinalo . Temperatura de fuslo, determinalo em gorduras e leos . Temperatura de solidificao, determinao em gorduras e leos . Tempo de desintegralo para comprimidos e cpsulas, determinalo . Tempo de desintegralo de supositrios, vulos e comprimidos vaginais, determinao . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Tempo de dissoluo para comprimidos e cpsulas, determinalo . Teste de esterilidade .. . . .. . .. . . . . . . . . . .. . .. . . . . . . . . Teste de pirognios . Teste de toxicidade . Teste de valores aberrantes . Teste para histamina . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Teste para substncias pressoras .............................. Teste para substncias vasodepressoras ......................... Teste de confmnao para pesquisa e identificao de patgenos . Testes de desintegrao . Te~tes de segurana biol6gica . Testes de validade ....................................... Ttraborato sdico ' . Tetraborato s6dico 0,01 M . Tetracloreto de carbono . Tetrafl'!l1i1horato de sdio . Tetrafenilborato de sdio 0,02 M SV . Tetraidrofurano . Tetraoxalato de potssio . Tetraoxalato de potssio 0,05 M . Timolftalena I . Tinturas . Tioacetamida . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Tioacetamida SR . Tiocianato de amnio . Tiocianato de amnio I . Tiocianato de amnio SR .

VI.9. XlIA. XII.4. XlI.4. XII.4. XlI.4. XlI.4. XII.4. XlI.4. XlL4. XlL4. XlL4. XII.4. XII.4. XIlA. XlI.4. XlL4. XII.2. XII.2. XII.2. XlI.2. XII.2. V.3.1.
IV.

V.2.4. V.2.3. V.2.2. V.3.3.2. V.3.3.3. V. 1.4. 1. V.l.4.2.

V.1.5.

(1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988) (1988)

V.5.1.1. V.5.1.2. V.S.1.3. VI.9. V.S.1.S. V.5.l.8. V.S.l.4. V.S.1.7.2. V.l.4. V.5.l. VI.S.3. XII.2. XII.2. XlI.2. XlI.2. XlI.3. XlI.2. XlI.2. XlL2. XII.1.
IV.

XlI.2. XII.2. XlI.2. XlI.l. XlI.2.

Tiocianato de amnio 0,1 M SV Tiocianato de amnio 0,5 M Tiocianato de potssio Tiocianato de potssio aproximadamente M Tiocianato, reaes de identificao Tioglicolato de sdio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Tiossulfato de sdio Tiossulfato de sdio 0,1 M Tiossulfato de sdio 0,1 M SV. . Tiossulfato, reaes de identificafo Tipos de delineamento, ensaios indiretos quantitativos Tipos de vidro, recipientes de vidro ........................... Titulaes complexomtricas Titulaes em meio nf~aqoso Titulaes por diazotao . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Ttulo Tolueno Torina Tornassol I Toxicidade, teste Trixido de arsnio Trixido de cromo Tropeolina O I Tropeolina 00 I . . Trombina ; Tromboplastina .. .. . .. . . . . . . . . .. .. . . . . Trometamina Turbidimetria e nefelometria Turbidimetria, ensaio microbiol6gico . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. .. . . . . .. . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . .. .. .. . . . . . . .. .

XlI.3. XlI.2. XlI.2. XlI.2. V.3.I. XlI.2. XlI.2. XlI.2. XlI.3 V.3.1. VI.5.I. IX.2.1. V.3.4.4. V.3.4.5. V.3.4.I. N. XlI.2. XlI.2. XII.1. V.5.I.3. XlI.2. XlI.2. XII.1. XII.1. XlI.2. XI!.2. XlI.2. V.2.16. V.5.2.l7.2.

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""'

Ungentos, veja preparaes tpicas semi-s6lidu . Unidade de medida . Unidades do sistema internacional (SI) usados na fannacopia e equivalente com outras unidades . Uso e doses . Ultravioleta, visvel e infravermelho, espectrofotometria e absorlo .

N. IV. XlII.4. IV. V.2.14.

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Validade, testes Valores aberrantes Variincia, anlise Vuopressina, ensaio biolgico . . . . . . . . . . . Varfarina sdica Vegetal, preparo do material para observao e Verde de bromocresol I . . . . . . . . . . . . . . . Verde de metila I Vermelho cresol I . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Vermelho de congo I Vermelho de fenol I Vermelho de metila I Vermelho de quinaldina I Vidro, controle de qualidade de frascos Vidro, recipientes Viscosidade, determinalo Volume, determinaio em formas farmacutica

. . . . . . . . . . .. . . estudos histolgicos . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

VI.5.3. VI.3. VI.5.2. V.5.2.13. XlI.2. V.4.1. XI!.1. XI!. 1. XI!.1. XII. I. XII. 1. XII. 1. XI!. 1. IX.2.1. IX.2.1. V.2.7. V.1.2.

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'~

Xantina, reaes de identificalo Xaropes

............................. .

V.3.1. IV.

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Zinco ativado. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. Zinco panulado . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. Zinco, reaes de identificalo .................... Zinco SRA ........................... Zinco, titula~s oomplexOlD4tricu . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ..

XII.2. XII.2. V.3.1. XII.2. V.3.4.4.

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IMo foi lmpr-..o na US GAACA E EDrTORA LIDA. Rua FeMdo Antonio AMa, 370 - ,Id. Trilno - BonIuceao CEP 07175-450 - Guatuh: - SP - fone. (011) 8438-1000 Fu.: (011) &438-1538 - E. : -"OunNt.com.bf

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