Fundamentos Fisicoqumicos de las Tcnicas Instrumentales.

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TEMA 4. ESPECTROSCOPA MOLECULAR (II): espectroscopa UV-Visible

1.- Dos sustancias de importancia biolgica, el NAD+ y el NADH, tienen coeficientes de absorcin molar iguales de 1.8 104 dm3 mol-1 cm-1, a 260 nm (la longitud de onda a la cual los coeficientes de absorcin son iguales se conoce como punto isosbstico). A 340 nm, el NAD+ no absorbe, pero el NADH tiene un coeficiente de absorcin molar de 6.22 103 dm3 mol-1 cm-1. Una disolucin que contiene ambas sustancias presenta una absorbancia de 0.215 a 340 nm y de 0.850 a 260 nm. Calcule la concentracin de cada sustancia. R.: NADH 3.46 10-5 mol/L; NAD+ 1.26 10-5 mol/L.

2.- Se obtuvieron los siguientes datos de transmitancia para disoluciones acuosas de oxihemoglobina (66500 g/mol) a pH=7 en una cubeta de 1 cm de paso de luz: C/(g/100 mL) %T 0.030 53.5 0.050 35.1 0,071 22.5 0.102 12.3

Comprobar si se cumple la ley de Beer y, en su caso, determinar el coeficiente de absorcin molar de la oxihemoglobina y la transmitancia de una disolucin de concentracin 0,15 g/L. R.: 59019 M-1 cm-1; 73.6 %.

3.- Se ioniza un cido HA en disolucin acuosa dando iones H+ y A-. A una longitud de onda de 430 nm HA no absorbe luz, pero A- presenta un coeficiente de absorcin molar de 458 dm3 cm-1 mol-1. Se observa que una disolucin del cido a concentracin 0.1 M tiene una transmitancia de 1.47% a 430 nm con una trayectoria lumnica de 1 cm y temperatura de 25 C. Calcule la constante de disociacin del cido HA a 25 C y G para el proceso de disociacin. R.: 1.668 10-4; 21.6 kJ mol-1

4.- Dos especies no coloreadas A y B reaccionan para formar un complejo coloreado AB que absorbe a 550 nm con un coeficiente de absorcin molar de 450 L mol-1cm-1. La constante de disociacin para este complejo es 4 10 -3 Cul sera el valor de la absorbancia de una disolucin que se prepara mezclando volmenes iguales de disoluciones 0.01 M de A y B? R.: 0.945

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5.- Determnese la Kd de un cido dbil HB a partir de los datos siguientes obtenidos al disolver 0.3251 g de dicho cido en 250 mL de agua y diluyendo muestra de 1 mL hasta 100 mL con disolucin tampn. pH A 4 0.0 5 0.0 6 0.11 7 0.61 8 1.14 9 1.24 10 1.25 11 1.25

Determnese tambin su coeficiente de absortividad molar sabiendo que las medidas se hicieron en celdas de 1 cm. La masa molecular es 160 g/mol. R.: a) 9.52 10-8 M; b) 15380 L mol-1cm-1

6.- Una disolucin es analizada para determinar su contenido en Ga3+, para lo que se aade un reactivo orgnico que forma un complejo fuertemente coloreado con el Ga 3+, a 50 mL de la disolucin. La absorbancia medida fue de 0.656. Posteriormente se aadieron sucesivamente 5 alcuotas de 10 mL de una disolucin estndar 10-4 M en Ga3+ y se midieron sus absorbancias, siendo stas las indicadas en la tabla. Determinar la concentracin de Ga3+ en la disolucin problema. V aadido /mL Absorbancias R.: 2.5 10-4 10 20 30 40 50

0.591 0.544 0.509 0.481 0.459

7.- Se pipetean varias alcuotas de 10 mL de una muestra de un agua mineral en matraces aforados en 50 mL. A cada uno se adicionan exactamente 0.00, 5.00, 10.0, 15.0 y 20.0 mL de una disolucin patrn que contiene 11.1 ppm de Fe 3+ seguido de un exceso de ion tiocianato para dar el complejo rojo Fe(SCN)2+ y se enrasan hasta 50 mL. Las seales del fotmetro para las cinco disoluciones fueron: 0.240, 0.437, 0.621, 0.809 y 1.009, respectivamente. Qu concentracin de Fe3+ hay en la muestra de agua?. R.: 7.01 ppm

8.- Para valorar unos inyectables de aspirina, se tomaron 2 mL de uno de ellos y se diluyeron a 100 mL con etanol. La absorbancia a la mxima de absorcin fue 0.350. La disolucin patrn se prepar triturando 2.618 mg de una tableta de aspirina al 20 % y disolvindolos en 100 mL con etanol. La absorbancia de esta disolucin result ser de 0.543. Calcular la concentracin de cido acetil saliclico en el inyectable, suponiendo que en estas condiciones se cumple la ley de Beer y que b = 1 cm. R.: 0.16 g/L.
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9.- Una serie de disoluciones de cafena C8H10O2N4.H2O ( M : 212.1 g/mol) en medio cido, dan las siguientes medidas de absorbancia a 272 nm en cubeta de 1 cm de paso ptico: C ( mg/ 100mL) 0.200 0.500 0.600 0.900 1.00 A 272nm 1.20 1.50 2.00 0.100 0.250 0.310 0.465 0.510 0.625 0.760 1.05

Una muestra de 2.50 g de un caf soluble comercial de determinada marca, se disolvi en 500 mL de agua. Una parte alcuota de 25 mL se transfiri a un matraz que contena 25 mL de cido sulfrico 0.1 M, se someti a un proceso de clarificacin y posteriormente se enras hasta un volumen de 500 mL. Una parte de esta disolucin mostr una absorbancia de 0.415 a 272 nm. a) Determinar la absortividad molar de la cafena en estas condiciones. b) Determinar la cantidad de cafena presente en el caf soluble, expresada en gramos de cafena por cada kg de producto. .c) Si para una taza de caf se utilizan 2 gramos de caf soluble, determinar la cantidad de cafena que contiene, expresada en mg. R.: a)1.10 104 L mol-1 cm-1 b) 32 g c) 64 mg 10.- Para determinar la concentracin de un derivado de eritromicina en un inyectable se procedi de la siguiente manera; a cinco porciones de la muestra de 25 mL cada una de ellas, se les aadi distintas cantidades del compuesto puro en estado slido, midindose a continuacin las absorbancias de cada disolucin. Las lecturas, realizadas a 233 nm fueron: Absorbancia 0.224 0.314 0.405 0.476 0.614 mg aadidos 0 1.1 2.0 2.9 4.2 Calcular la concentracin del compuesto en el inyectable. R.: 0.09 g/L 11.- El fsforo en orina puede ser determinado por tratamiento con molibdeno y reduciendo a continuacin el complejo fosfomolbdico con cido aminonaftolsulfnico para dar el azul de molibdeno. Este absorbe a 660 nm. Un paciente excret 1270 mL de orina en 24 horas. Una alcuota de 1 mL de orina fue tratada con reactivo de molibdato y cido aminonaftolsulfnico y diluida a un volumen de 50 mL. Una serie de estndares de fsforo fueron tratados de la misma forma, y las absorbancias de las disoluciones a 660 nm, fueron las siguientes: Conc.de fsforo (ppm) Absorbancia 1 2 3 4 Muestra de orina 0.205 0.425 0.610 0.830 0.625

Calcular el nmero de gramos de fsforo excretados por da y su concentracin en la muestra en mmoles/L. Peso atmico del fsforo 31 g/mol. R.: 0.194 g; 4.92 mmoles/L.

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12.- Un preparado farmacutico contiene dos principios activos ( A y B ) y un excipiente inerte. Los dos principios activos absorben en radiacin visible, mientras que el excipiente slo absorbe radiacin UV. Se disuelven 0.7 g del preparado en 250 mL de disolucin etanlica cida. De esta disolucin se toman 3 mL y se diluyen hasta 500 mL con el mismo disolvente. A una alcuota de 1 mL de esta ltima disolucin se le miden las absorbancias a 450 nm (A=0.233) y 580 nm (A=0.166). Sabiendo que una disolucin de 1 mg de A en 250 mL de la disolucin etanlica cida absorbe 0.860 a 450 nm y 0.068 a 580 nm, y que una disolucin de 1 mg de B en 250 mL del mismo disolvente absorbe 0.028 a 450 nm y 0.156 a 580 nm, calcule el nmero de gramos de A y de B por cada 10 g del preparado original. Se han utilizado cubetas con 1 cm de paso luminoso. R.: 0.57 de A; 2.3 g de B 13.- Con objeto de determinar las concentraciones de Co(II) y Cr(III) en una mezcla, se realizaron medidas de absorbancias de disoluciones estndares de ambos compuestos a 510 nm y 408 nm, obtenindose los siguientes resultados: Cr(III)/mol l-1 0.01 0.04 0.06 0.08 0.1 A510 0.049 0.180 0.300 0.420 0.510 408 A 0.151 0.603 0.910 1.196 1.500 Co(II)/mol-1 A510 A408 0.02 0.04 0.07 0.09 0.11 0.099 0.199 0.352 0.455 0.553 0.010 0.021 0.036 0.046 0.057

Calclese la concentracin de Cr(III) y Co(II) en la mezcla, sabiendo que una alcuota de 3 mL de la muestra, diluida a 10 mL con agua dio lugar a las siguientes absorbancias: 0.535 (a 510 nm) y 1.07 (a 408 nm). R.: 0.23 M, 0.12 M 14.- Para analizar una muestra dbilmente cida, se realiz la siguiente curva de calibracin con disoluciones patrones de dicha sustancia a pH = 8 y una longitud de onda de 400 nm Cx103 (g/l) A 1 2 3 4 5 6 0.050 0.095 0.150 0.205 0.250 0.301

0.664 g de la muestra se diluyeron hasta 1 litro con agua y se tomaron de esta disolucin porciones de 1 mL diluyndolas hasta 100 mL con disoluciones tampn de distintos pH; dichas disoluciones dieron a 400 nm los siguientes valores de absorbancias: pH A 1 0.016 2 3 4 5 6 78 0.016 0.028 0.099 0.224 0.261 0.266 0.266

Suponiendo que la forma cida no absorbe, y la cubeta usada es de 1 cm, calcular: (a) Absortividad especfica de la sustancia. R: 50.7 l g-1cm-1

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(b) Porcentaje de pureza de la muestra. R: 74.2%. (c) La constante de acidez de la sustancia. R: 5x10-5 15.- La forma reducida del dinucletido de adenina y nicotinamida (NADH) es una importante coenzima y altamente fluorescente. Tiene un mximo de absorcin a 340 nm y un mximo de emisin a 465 nm. Unas disoluciones patrn de NADH dieron las siguientes intensidades de fluorescencia: [NADH]/ mol L-1 0.10 0.20 0.30 0.40 0.50 0.60 0.70 0.80 Intensidad 2.24 4.74 6.59 8.98 10.93 14.01 15.49 18.02

Una disolucin problema presenta una fluorescencia de 12.16. Calcular la concentracin de NADH. R.: 0.541 mol / L

16.- Los siguientes volmenes de una disolucin que contena 1.10 ppm de Zn2+ se pipetearon en embudos de decantacin que contenan, cada uno, 5.0 mL de una disolucin de Zn2+ desconocida: 0.0; 5.0; 10.0 y 15.0 mL. Cada uno de ellos fueron extrados con tres alcuotas de 5 mL de CCl 4 que contena un exceso de 8-hidroxiquinolina. Los extractos se diluyeron a 25.0 mL y se midi su fluorescencia con un fluormetro. Los resultados fueron: Volumen de Zn2+/mL Lectura del fluormetro 0.0 6.08 5.0 11.24 10.0 15.47 15.0 20.84

Calcular la concentracin de Zn2+ en la muestra. R.: 1.39 ppm

17.- Se propone un mtodo para determinar la concentracin de quinina en una bebida comercial por fluorimetra. La longitud de onda de excitacin es de 350 nm y la longitud de onda de medida de 450 nm. A partir de una disolucin A de quinina de 0.1 mg/L se hacen una serie de cinco disoluciones patrn para establecer una curva de calibrado: Disolucin Patrn 1 Patrn 2 Patrn 3 Volumen de A/mL 20 16 12 H2SO4 (0.05 M) 0 4 8 Fluorescencia 182.0 138.8 109.2

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Patrn 4 Patrn 5 Blanco analtico

8 4 0

12 16 20

75.8 39.5 0.0

A continuacin se toma 0.1 mL de la bebida a determinar y se diluye a 100 mL con H2SO4 0.05 M. La seal obtenida para esta disolucin es 113. Calcular la concentracin de quinina, expresada en ppm . R.: 62.5 ppm.

18.- El oxgeno molecular es un eficaz amortiguador de fluorescencia. La intensidad de fluorescencia de una disolucin acuosa de un fluorforo es de 825 antes de desoxigenar y 1026 una vez desoxigenada. Calcular la constante de amortiguacin sabiendo que la solubilidad del oxgeno en agua es 1.275 10-3 M. El tiempo de vida del fluorforo es de 4.3 ns. El oxgeno es cinco veces ms soluble en etanol que en agua. En que porcentaje se reducira la fluorescencia de este fluorforo en etanol? Suponga que los valores de la constante de amortiguacin y el tiempo de vida del fluorforo en etanol son los mismos que en agua. R.: 4.4 1010 M-1 s-1; 55%

19.-En la siguiente tabla se recogen los datos de la intensidad de fluorescencia de un fluorforo F en presencia de un amortiguador Q a 20 y 40 C. 103 Q/M I (20C) I (40C) 0 1826 1796 1 1815 1788 2 1803 1780 4 1782 1762 8 1738 1732 10 1719 1716

Calcule las constantes de amortiguacin a dichas temperaturas. R.: 6.26 M-1 y 4.66 M-1.

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PROBLEMAS AVANZADOS A.1.- El quelato CuA22- presenta un mximo de absorcin a 480 nm. Cuando el reactivo quelante est presente en un exceso de al menos 10 veces el ion metlico, la absorbancia depende solo de la concentracin analtica del Cu(II) y se cumple la ley de Beer en un amplio intervalo de concentraciones. Una disolucin en la que la concentracin analtica de Cu2+ es de 2.30 10-4 M y la de A2- es 8.60 10-3 M tiene una absorbancia de 0.690 cuando se mide en una cubeta de 1 cm a 480 nm. Una disolucin en la que las concentraciones analticas de Cu2+ y A2- son 2.30 10-4 M y 5.00 10-4 M, respectivamente, tiene una absorbancia de 0.540 cuando se mide en las mismas condiciones. Utilizando esta informacin, calcular la constante de formacin del proceso: Cu2+ + 2A2- CuA22R.: 1.8 108

A.2.- Dada la siguiente tabla, calcular los datos que faltan sabiendo que 300 nm es un punto isosbstico y el compuesto A no absorbe a 400 nm. Disoluciones [A] [B] A300 A400 1 -2 10-4 M 0.937 0.814 2 2.5 10-4 M 7.4 10-5 M 0.481 -3 --0.820 0.550

A.3.- De una disolucin 8 10-5 M de una base dbil, se tomaron tres porciones de 25 mL, a las cuales se le agregaron 10 mL de NaOH 1 M, 10 mL de HCl 1 M y 20 mL de una disolucin tampn de pH = 8, respectivamente. Una vez enrasadas a 50 mL, se midi la absorbancia a 680 nm, con los siguientes resultados: Disolucin cido fuerte Base fuerte pH = 8 Absorbancia 0.028 0.596 0.396

Calcular: a) La constante de ionizacin de la base; b) El pH de una disolucin de la base cuya absorbancia a 680 nm es de 0.420 en las mismas condiciones. R.: a) 5.44 10-7; b) 8.08
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A.4.- El antineoplsico mercaptopurina (M= 152.19 g/mol) presenta carcter cidobase en disolucin acuosa. La absorbancia de una disolucin de concentracin 5 g/mL a 323 nm, en cubeta de paso ptico de 1 cm, es de 0.550 en medio HCl 0.1 M, de 0.020 en medio 0.1 M de Na OH y de 0.196 en disolucin tampn de pH = 8. Determinar: a) los coeficientes de extincin molar de ambas especies b) el pKa del frmaco c) la absorbancia de la disolucin a pH = 6.5. R.: a) 16768 M-1cm-1 610 M-1cm-1; b) 7.70; c) 0.540

A.5.- En una sntesis orgnica de un determinado principio activo se detect la presencia de un cido dbil monoprtico de M = 200 g/mol. Para el estudio espectrofotomtrico en cubetas de 1 cm de longitud, se disolvieron 10 mg de cido en 100 mL de HCl (pH=1). Sus absorbancias a 515 y 590 nm resultaron ser 0.50 y 0.10 respectivamente. A continuacin se disolvieron 20 mg del mismo cido en 50 mL de una disolucin de NaOH (pH = 13), y sus absorbancias a las mismas longitudes de onda fueron 0.30 y 1.60 respectivamente. Por otro lado se tomaron 16 mg del cido y se disolvieron en 100 mL de una disolucin tampn de pH = 5.53, mostrando esta disolucin absorbancias de 0.60 y 0.30 a 515 y 590 nm respectivamente. Calcular: a) Las concentraciones de las formas cidas y su base conjugada en la ltima disolucin. b) La constante de disociacin del cido. R.: a) 0.565 mM; b) 1.22 10-6

A.6.- 397.4 mg de una sustancia que contiene un 63% de una amina y un 37% de otro compuesto X, que no posee carcter cido ni bsico, se disuelven en 100 mL de agua. Con esta disolucin se preparan otras ocho, diluyendo alcuotas de 10 mL a 50 mL en disoluciones tampn de diversos pH. Dichas mezclas dieron los siguientes valores de absorbancia a 590 nm al medirse en cubetas de 1 cm: pH A 3 4 5 6 7 8 9 10

0.231 0.231 0.277 0.534 1.157 1.405 1.450 1.450

Si la forma protonada de la amina es incolora, calcular: a) La constante K b de la amina; b) Las absortividades especficas para la amina y el compuesto X. R.: a) 3.16 10-8; b) 2.43 L g-1 cm-1; 0.786 L g-1 cm-1

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