Ctedra de Industrias y Servicios I

BIOTECNOLOGA

Autores:
vila, Ariel - L N 8723 Fajer, Emmanuel - L N 8652 Gabriac, Simon - L N 10271 Heinke, Toms - L N 8736 Lobato, Francisco - L N 8878 Martin, Miguel - L N 8805

Universidad Nacional de Cuyo Ao 2010

Biotecnologa - vila, Fajer, Gabriac, Heinke, Lobato, Martin

La Biotecnologa: lntroduccin
Industrias y Servicios I
1.Denicin Biotecnologa es el uso de organismos vivos o de compuestos obtenidos de organismos vivos para obtener productos de valor o servicios para el hombre. " OCDE, 1980
El trmino(plazo) "biotecnologa" ha sido imaginado en 1913 por un ingeniero agrcola hngaro, Karl Ereky, que quera transformar su pas natal, Hungra, en comarca rica y exportadora de productos agrcolas a la imagen de Dinamarca. Uno de los elementos de esta transformacin era, segn l, el advenimiento de un nuevo modo de produccin, una edad basada en bioqumica y en las diversas transformaciones de las materias primas que permite.

Consistiendo mayoritariamente en modicar los genes de estas Distinguimos hoy dos categoras de biotecnologa, a saber las ltimas, la biotecnologa verde es asimilada sobre todo al OGM o biotecnologas de primera generacin y las dichas de ltima El organismo genticamente modicado. As gracias a la biotecnologa verde, actualmente es posible pasarse sin abono y generacin. sin plaguicidas, cultivar sobre suelos no sanos o irrigar con agua salada. 1.Biotecnologa tradicional: 2.2.Biotecnologa roja Las biotecnologas de primera generacin, tambin En cuanto a la biotecnologa roja, interviene en el sector de calicadas de biotecnologas tradicionales, reagrupan a las tcnicas que explotan a los agentes biolgicos con el n de la salud, para que sea humana o veterinaria. La biotecnologa disponer de un producto nal que responde a las normas y las roja tiene como objetivo la comprensin del funcionamiento del exigencias de los consumidores. Basadas en tcnicas que no organismo, la bsqueda(investigacin) causas de ciertas necesitan la utilizacin de equipos modernos, la biotecnologa enfermedades y sobre todo, la produccin de nuevos tradicional posee como campo de aplicacin el sector de la tratamientos. Hay que saber que es en el sector de la salud que la industria agroalimentaria(agroalimentario). Podemos citar entre biotecnologa verdaderamente tiene su razn para estar debido a otras cosas a las tcnicas de vinicacin, de planeacin o de la las intervenciones genticas y que es admitida por el gran pblico. Podemos citar en calidad de ilustraciones de los produccin de cerveza a travs de las levaduras. intereses, acciones y productos de la biotecnologa en el dominio 2.Biotecnologa moderna: En cuanto a las biotecnologas modernas o en cuanto a la de la salud, las culturas celulares, los anticuerpos monoclonaux y ltima generacin y como lo subraya su calicacin, reposan en sobre todo, la produccin del 15 % de los nuevos productos la utilizacin de equipos sosticados y tienen como sector farmacuticos. 2.3.Biotecnologa blanca principal de aplicacin la gentica. Concerniendo a los Por n, concerniendo a la biotecnologa blanca, hace susodichos equipos, mayoritariamente son concentrados en los sectores de la nanotecnologa y de la bioinformtica. referencia a una utilizacin de estas tcnicas en el Actualmente, la biotecnologa contempornea decae en tres dominiocampo) industrial y utiliza de manera general las bacterias como los agentes biolgicos. Hay que saber que la grandes familias, a saber la biotecnologa verde, roja y blanca. biotecnologa blanca disponga de un dominio(campo) vasto de aplicacin si se cita slo los biocatalizadores, los procedimientos 2.1.Biotecnologa verde Concerniendo a la primera categora de biotecnologa, se dichos enzimticos, la modicacin de genes o la jacin del dene como siendo la utilizacin de tcnicas modernas por nitrgeno. Hay que anotar que en cierta medida, la medio de agentes biolgicos en el dominio(campo) agrcola con biotecnologa roja se encuentra en la categora blanca en este el n de obtener variedades de plantas excepcionales. sentido(direccin) que el dominio(campo) farmacutico es la aplicacin industrial superior de la biotecnologa.

2.Clasicacin

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3.Historia

La historia de la biotecnologa puede dividirse en cuatro perodos. El primero corresponde a la era anterior a Pasteur y sus comienzos se confunden con los de la humanidad. En esta poca, la biotecnologa se reere a las prcticas empricas de seleccin de plantas y animales y sus cruzas, y a la fermentacin como un proceso para preservar y enriquecer elcontenido protenico de losalimentos.Este perodo se extiende hasta la segunda mitad del siglo XIX y se caracteriza como la aplicacin artesanal de una experiencia resultante de la prctica diaria. Era tecnologa sin ciencia subyacente en su acepcin moderna. La segunda era biotecnolgica comienza con la identicacin, por Pasteur, de los microorganismos como causa de la fermentacin y el siguiente descubrimiento por parte de Buchner de la capacidad de las enzimas, extradas de las levaduras, de convertir azcares en alcohol. Estos desarrollos dieron un gran impulso a la aplicacin de las tcnicas de fermentacin en la industria alimenticia y al desarrollo industrial de productos como las levaduras, los cidos ctricos y lcticos y, nalmente, al desarrollo de una industria qumica para la produccin de acetona, "butanol" y glicerol, mediante el uso de bacterias. La tercera poca en la historia de la biotecnologa se caracteriza por desarrollos en cierto sentido opuestos, ya que por un lado la expansin vertiginosa de la industria petroqumica tiende a desplazar los procesos biotecnolgicos de la fermentacin, pero por otro, el descubrimiento de la penicilina por Fleming en 1928, sentara las bases para la produccin en granescalade antibiticos, a partir de la dcada de los aos cuarenta. Un segundo desarrollo importante de esa poca es el comienzo, en la dcada de los aos treinta, de la aplicacin de variedades hbridas en la zona maicera de los Estados Unidos ("corn belt"), con espectaculares incrementos en la produccin por hectrea, inicindose as el camino hacia la "revolucinverde" que alcanzara su apogeo 30 aos ms tarde. La cuarta era de la biotecnologa es laactual.Se inicia con el descubrimiento de la doble estructura axial del cido "deoxiribonucleico" (ADN) por Crick y Watson en 1953, seguido por los procesos que permiten la inmovilizacin de las enzimas, los primeros experimentos de ingeniera gentica realizados por Cohen y Boyer en 1973 y aplicacin en 1975 de la tcnica del "hibridoma" para la produccin de anticuerpos "monoclonales", gracias a los trabajos de Milstein yKohler.
Mujer egipcia elaborando cerveza

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Louis Pasteur, pionero de la microbiologa

Jardin de pruebas, mais clasico e hibride

ADN, soporte de la herencia

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Proceso Productivo: Esquema general

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Existen 4 etapas bien diferenciadas, a saber: 3.Operaciones y proceso de separacin y puricacin 1.Propagacin de cultivos: se realiza en el laboratorio y de los productos: estas etapas comprenden en forma general comienza generalmente en un tubo de ensayo que contiene un y sucesivamente: repique reciente del microorganismo o un tubo liolizado o s e p a r a c i n d e i n s o l u b l e s p o r l t r a c i n , congelado donde se conserva la cepa de inters o de una centrifugacin, o decantacin; colonia del microorganismo previamente seleccionada. Este separaciones primarias por extraccin, material microbiolgico seleccionado constituye el punto de absorcin, adsorcin, ultraltracin; partida con el cual se debe aumentar la cantidad del mismo puricacin por extraccin lquido-lquido, o mediante sucesivos pasajes en frascos de volmenes crecientes extraccin a dos fases acuosas, o cromatografa de que son generalmente operados en agitadores de vaivn o anidad rotatorios en cmaras de cultivo. aislamiento del producto. 2.Fermentacin: con el material obtenido anteriormente, se siembra el tanque de inoculo que puede tener un volumen de 50, 500 1000 1 segn la escala industrial posterior. Del tanque de inoculo se pasa posteriormente al fermentador industrial cuyo volumen, que vara de acuerdo al producto a obtener y a su concentracin, est comprendido comnmente entre 10,000 y 100,000 l. En algunos casos especiales, como en la produccin de protena unicelular, los tanques de fermentacin pueden llegar hasta 1,000,000 l. Un proceso esencial ligado a la produccin es la preparacin y esterilizacin de los medios que se lleva a cabo tambin en esta etapa (previamente a la inoculacin) ya sea en el tanque de inculo o en el reactor industrial. 4.Tratamiento de euentes: si bien no tiene una relacin directa con el producto, que es la razn de ser de la industria de fermentacin, representa una etapa imprescindible porque es fundamental controlar la calidad del euente que sale de la fbrica y que es enviado generalmente a un curso de agua, sea un canal, arroyo, un ro o al mar.

Esquema del Proceso Productivo en general

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Aplicaciones: Generalidades
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La biotecnologa se aplica a diversos sectores industriales, siendo una disciplina de carcter horizontal que combina conocimientos cientcos y tecnolgicos e implica la utilizacin de diversas tcnicas, para poder solucionar los diferentes problemas asociados a productos y procesos de los mltiples sectores de actividad: agropecuarios, alimentos, textil, salud, celulosa y papel, medio ambiente, entre otros

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Mltiples aplicaciones de la biotecnologa en la industria

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Aplicaciones: Agricultura al Las tcnicas de ingeniera molecular aplicadas

mejoramiento de cultivos y las biotecnologas incorporadas al manejo agrcola permiten un importante incremento en la productividad y la extensin de las fronteras agrcolas de manera ambientalmente sustentable. Los aportes de la biotecnologa al agro incluyen tcnicas de cultivo y propagacin; nuevas variedades (organismos genticamente modicados); bioherbicidas y biofertilizantes, mtodos de deteccin de enfermedades y plagas, etc.

1.Tcnicas de cultivo y propagacin

Se conoce como micropropagacin al conjunto de tcnicas y mtodos de cultivo de tejidos utilizados para la multiplicacin asexual de plantas. La micropropagacin se utiliza principalmente para multiplicar plantas nuevas (creadas por ejemplo por ingeniera gentica) o para obtener plantas libres de enfermedades. La multiplicacin vegetativa puede realizarse por mtodos relativamente sencillos como la propagacin por gajos o por tcnicas ms complejas como el cultivo in vitro o la 3.Biofertilizantes propagacin por apomixis (propagacin por semilla sin Bacterias como Rhizobium (presente en los suelos fecundacin de la clula sexual femenina, dando lugar a agrcolas) son utilizadas como biofertilizantes para facilitar la plantas genticamente iguales a la planta madre) asimilacin de nitrgeno en los cultivos de leguminosas. La inoculacin de las semillas antes de la siembra con bacterias y 2.Nuevas variedades de cultivos otros ingredientes permiten aumentar su poblacin y, en Tradicionalmente en el agro se han aplicado tcnicas de consecuencia, la capacidad de jacin de nitrgeno mejoramiento de cultivos: cruzamiento selectivo entre atmosfrico. De esta manera se reduce la necesidad de aplicar diferentes variedades vegetales para obtener nuevas variedades fertilizantes nitrogenados evitando la contaminacin asociada. de mayor rendimiento, hibridacin. Hoy en da, las tcnicas de ingeniera gentica permiten saltar las barreras entre especies y 4.Biocontrol obtener plantas mejoradas en sus propiedades agronmicas, o Los mtodos de control biolgico de plagas y en su calidad nutricional o industrial: enfermedades incluyen la utilizacin de microorganismos como Plantas tolerantes a herbicidas, de amplio espectro que Azotobacter, bacterias del gnero Bacillus y Streptomyces que asociados a sistemas de siembra directa evitan las tareas de compiten por los nutrientes con los patgenos u otorgan labranza que erosionan los suelos. resistencia a las plantas, por su capacidad de producir Plantas resistentes a enfermedades y plagas, como el sustancias con propiedades antimicrobianas. El Bacillus algodn Bt y el maz Bt a las que se les ha transferido el gen thuringiensis (BT) produce unos cristales constituidos por que codica para una toxina proveniente de Bacillus protenas que tienen propiedades insecticidas. Estas thurigiensis que provoca la muerte de las larvas de insectos. endotoxinas forman parte de formulaciones comerciales de En el caso del maz Bt la planta produce su propio bioinsecticidas plaguicida, letal para un acrido llamado barrenillo del maz. Plantas tolerantes a estrs abitico que pueden sobrevivir mejor en suelos salinos, a bajas temperaturas o en climas con lluvias escasas.
Arroz blaco (izq.) y arroz dorado (dcha.)

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Plantas con calidad nutricional mejorada: puede implicar el mejoramiento de la calidad de la planta como alimento (por ejemplo modicacin en la proporcin de nutrientes y vitaminas), la reduccin de alrgenos, la modicacin del tiempo de conservacin, de las caractersticas organolpticas, etc. Por ejemplo, el arroz dorado es una variedad de arroz a la que se le han introducido dos genes provenientes del genoma del narciso y otro gen bacteriano. Estos genes codican pasos de la ruta de sntesis de la provitamina A, lo que las variedades convencionales de arroz no tienen. Este arroz con provitamina A, permitira paliar en gran medida los problemas de avitaminosis. Plantas con propiedades nuevas: desarrolladas para trabajar como biofbricas produciendo frmacos, vacunas y plsticos. Por ejemplo, la produccin de anticuerpos monoclonales humanos para combatir el virus de la hepatitis B (VHB) a partir de clulas transgnicas de la planta del tabaco.

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Aplicaciones: Industria Alimenticia

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1.Introduccin
La biotecnologa relacionada con el sector de alimentos es la ms tradicional, los ms conocidos son los procesos de fermentacin en productos panicados, bebidas alcohlicas (vino, cerveza) y lcteos (quesos, yogures). Los cultivos microbianos asociados a estos tienen una larga tradicin de utilizacin y pueden ser mejorados utilizando mtodos de ingeniera gentica. Estas modicaciones pueden introducir cambios deseados en los productos mejorando por ejemplo parmetros de calidad sensorial, la capacidad para producir compuestos antimicrobianos, etc. Hace ya unos aos se lanz al mercado los alimentos bio, prebio y probio, que se promocionan como beneciosos para la salud humana. Los alimentos prebiticos son alimentos funcionales, denidos como ingredientes no digestibles que afectan beneciosamente al organismo mediante la estimulacin del crecimiento y actividad de una o varias cepas de bacterias en el colon, mejorando la salud. Los probiticos son microorganismos vivos que se adicionan a un alimento, permaneciendo activos en el intestino y ejerciendo importantes efectos siolgicos. Ingeridos en cantidades sucientes tienen efectos muy beneciosos, como contribuir al equilibrio de la ora bacteriana intestinal del husped y potenciar el sistema inmunitario. Son capaces de atravesar el tubo digestivo y recuperarse vivos en las heces, pero tambin se adhieren a la mucosa intestinal.

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2.Aplicaciones modernas de biotecnologa

Yogurts anti-cncer Se combina genticamente la bacteria Lactococcus Lactis (la cual se emplea en la industria lctea en la produccin de fermentados como quesos o yogures) y la alfa-sarcina, una protena txica producida por un hongo con una cierta especicidad por las clulas tumorales para la obtencin de yogures que permiten combatir tumores intestinales. Conservacin de alimentos La biotecnologa, adems, se aplica a la conservacin de alimentos, bsicamente de dos maneras: Mediante la produccin de bacteriocinas. Las bacteriocinas son pptidos de origen bacteriano con capacidad antimicrobiana, es por ello que tienen un gran potencial como agente conservante de alimentos. Las ms conocidas son la nisina, pediocina y la lactococcina. Estas sustancias son producidas por bacterias cido-lcticas y atacan a bacterias relacionadas con la cepa productora, entre las que se encuentran cepas alterantes y

patgenas frecuentes en los alimentos. En la actualidad, algunos de estos pptidos se estn utilizando en la conservacin de productos lcteos, crnicos y vegetales poco procesados. Se espera que un futuro reemplacen a los aditivos qumicos, es por eso que la biotecnologa est desarrollando bacterias recombinantes que produzcan mayores cantidades de estas sustancias para cubrir su demanda comercial. Mediante la prolongacin de la vida til. Cuando se obtienen frutas con vida til prolongada se incide indirectamente en la seguridad alimentaria ya que, al tener inhibido el proceso de maduracin, son productos con menor contaminacin microbiana. Actualmente se estn desarrollando plantas transgnicas cuyos frutos tienen maduracin retardada. Los cientcos estn logrando este objetivo a travs de diferentes estrategias: plantas con frutos con mayor resistencia fsica al ataque bacteriano, plantas con menor produccin de etileno (hormona responsable de la maduracin), plantas con bloqueo del proceso de senescencia que interviene en la maduracin del fruto antes y despus de la cosecha.

Bacteria Lactococcus Lactis

Alfa-Sarcina

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Aplicaciones: Aplicaciones Ambientales

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1. Plsticos Biodegradables
Una de las aplicaciones de la biotecnologa dentro de la preservacin del medio ambiente, es la posibilidad de crear polmeros para la fabricacin de plsticos biodegradables. El metabolismo de las plantas brinda la posibilidad de usar cultivos genticamente modicados para sintetizar nuevos polmeros con determinadas propiedades. Muchos alimentos se comercializan envasados en plstico. Estos envases protegen al producto, son baratos y parecen durar indenidamente. Sin embargo, su durabilidad es un problema serio para el medio ambiente. Adems, los plsticos tradicionales se fabrican a partir de derivados del petrleo, que son fuentes no renovables de energa. Un material es biodegradable cuando puede ser degradado a sustancias ms simples por la accin de organismos vivos, y de esta manera ser eliminado del medio ambiente. En el caso de los plsticos derivados del petrleo, no son biodegradables porque est compuesto por polmeros demasiado largos y compactos como para ser atacados y degradados por los organismos descomponedores. Este tipo de plstico biodegradable se obtiene a partir del almidn que es un polmero natural. El almidn puede ser procesado y convertido en plstico, pero como es soluble en agua se ablanda y deforma cuando entra en contacto con la humedad, limitando su uso. Este problema es solucionado modicando el almidn. Primero, el almidn se extrae del maz, trigo o papa, luego los microorganismos (Bacillus Delbrcki) los transforman en una molcula ms pequea (un monmero), el cido lctico. Despes este cido lctico es tratado qumicamente de manera de formar cadenas o polmeros, los que se unen entre s para formar el plstico llamado PLA. Otra manera de hacer polmeros biodegradables es empleando bacterias que fabrican grnulos de un plstico llamado polihidroxialcanoato (PHA). Las bacterias pueden crecer en cultivo y el plstico ser extrado fcilmente. Los cientcos identicaron los genes que llevan la informacin para fabricar el PHA y los transrieron al maz, para poder fabricarlo a partir de este cultivo.

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Procesos de produccin de polmeros biodegradables

inorgnicos (mercurio, plomo, cobre, cianuros, etc.) y gaseosos (metanos, compuestos voltiles, etc.) del medio ambiente. A partir de la modicacin gentica es posible incrementar su Otra aplicacin muy importante en cuanto al cuidado del capacidad de degradacin de los contaminantes medio ambiente, es la biorremediacin. Esto consiste en la utilizacin de microotanismos, enzimas, hongos o plantas especializados capaces de degradar deshechos peligrosos para remover los contaminantes orgnicos (euentes y residuos slidos domsticos e industriales, petrleo, pesticidas, etc.),

2. Biorremediacin

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Mtodos de biorremediacin de suelos

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Degradacin enzimtica: consiste en el empleo de enzimas en el sitio contaminado con el n de degradar las sustancias nocivas. Dichas enzimas son previamente producidas en bacterias transformadas genticamente. Esta aplicacin de la biotecnologa lleva dcadas en el mercado y hoy las compaas ofrecen las enzimas y los microorganismos genticamente modicados para tal n. Remediacin microbiana: se reere al uso de microorganismos directamente en el foco de la contaminacin. Estos microorganismos pueden ya existir en ese sitio o pueden provenir de otros ecosistemas, en cuyo caso deben ser inoculados en el sitio contaminado. Cuando no es necesaria la inoculacin de microorganismos, suelen administrarse ms nutrientes con el n de acelerar el proceso. Hay bacterias y hongos que pueden degradar con relativa facilidad petrleo y sus derivados, benceno, tolueno, acetona, pesticidas, herbicidas, teres, alcoholes simples, entre otros. Tambin pueden degrar, aunque parcialmente, otros compuestos qumicos como el PCB, arsnico, selenio, cromo. Los metales pesados como uranio, cadmio y mercurio no son biodegradables, pero las bacterias pueden concentrarlos de tal manera de aislarlos para que sean aliminados ms fcilmente. Estas caractersticas tambin pueden lograrse por ingeniera gentica.

Fitorremediacin: es el uso de plantas para limpiar ambientes contaminados. Esto constituye una estrategia muy interesante, debido a la capacidad que tienen algunas especies vegetales de absorber, acumular y tolerar altas concentraciones de contaminantes, como metales pesados, compuestos orgnicos y radiactivos, etc.

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Aplicaciones: Otras aplicaciones

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1.Energa
Bioetanol: el bioetanol se obtiene a partir de la fermentacin de la biomasa. Se ha empleado la ingeniera gentica para obtener microorganismos ms productivos y tolerantes al etanol, o capaces de fermentar diversas materias primas. Puede sustituir a la nafta. Biodiesel: este combustible se produce por la transformacin qumica de aceites vegetales. El biodiesel est formado por steres (etlicos o metlicos) producidos a partir de la reaccin qumica entre aceites vegetales y el alcohol. El biodiesel puede usarse slo o mezclado con diesel convencional.
Proceso de Obtencin del bioetanol

Biogs: es el gas producido por la digestin microbiana de la materia orgnica en un biorreactor (o biodigestor) pueden ser utilizado como fuente de energa trmica, elctrica o combustible para transporte automotor. El proceso fermentativo se desarrolla sobre residuos rurales, agro industriales, domsticos, municipales y sobre plantas. Una vez nalizado el proceso de biodigestin, el biogas puede usarse directamente o almacenarse.

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2.Salud Humana
Produccin de insulina Entre todas las aplicaciones de la biotecnologa, el rea de la salud humana se han producido los avances ms importantes. Dentro de este sector se destacan el desarrollo de frmacos, reactivos para el diagnstico de enfermedades y vacunas. Produccin de insulina, la insulina es una hormona producida por el pncreas, cuya funcin es regular la concentracin de glucosa en la sangre. Con la biotecnologa tradicional se obtenia insulina vacuna o porcina a partir del pncreas de dichos animales. Con la biotecnologa moderna, a partir de la recombinacin de la bacteria Escherichia Coli recombinada se puede obtener insulina para uso humano, a travs de un biorreactor.

Diagnstico Una de las aplicaciones de mayor impacto de la tecnologa del ADN es el desarrollo de nuevas tcnicas para diagnstico clnico. Esto ha permitido contar con tecnologas ms ecientes para el reemplazo de las pruebas serolgicas clsicas, y nuevos mtodos para el diagnstico de enfermedades infecciosas y genticas. Entre stas se encuentran: Las tcnicas de base inmunolgica basadas en la reaccin antgeno-cuerpo. Los anticuerpos monoclonales tienen la propiedad de unirse al antgeno de forma muy especca con lo cual los mtodos de anlisis y diagnstico desarrollados a partir de ellos son muy precisos (tcnica ELISA, citometra de ujo, inmunouorescencia, etc.) Las tcnicas de base gentica como la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) que permite amplicar pequeas fracciones de ADN para su posterior anlisis.

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Vacunas: La tecnologa de ADN recombinante han permitido el surgimiento de una nueva generacin de vacunas: las vacunas recombinantes y las vacunas de ADN. En las vacunas recombinantes, los genes que codican para las protenas que provocan la respuesta inmune (el antgeno) son aislados y clonados y se introducen mediante tcnicas de ingeniera gentica en un husped alternativo no patgeno (bacterias, levaduras o clulas de mamferos) para que lo produzca en cantidad en el laboratorio.

En las nuevas vacunas de ADN desnudo se utiliza una porcin de ADN puricado que codique para la protena que estimula la respuesta inmune. El gen se introduce directamente en el individuo y son las propias clulas del individuo las que sintetizan el antgeno. Tambin se aplican tcnicas de ingeniera gentica para eliminar o inactivar selectivamente, los genes de virulencia de un agente infeccioso manteniendo la habilidad de provocar una respuesta inmune.

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Proceso de Obtencin de Insulina

3.Industria Textil y del Papel

El uso de enzimas en la industria textil ha tenido un fuerte impacto en los procesos productivos, en la produccin de hebra; el hilado, tejido; acabado y fabricacin del producto. En la industria textil las enzimas se pueden aplicar tanto al tratamiento de bras proteicas naturales (lana y seda), como en bras celulsicas (algodn, lino y camo) y en bras sintticas. Algunas de las enzimas utilizadas son las amilasas, para el tratamiento de la bra, actan extrayendo el almidn que la recubre (proceso llamado desengomado), las pectinasas para extraer pectinas de la pared de las clulas primarias del algodn, las lipasas para el desgrasado de las bras, las catalasas para descomponer en oxgeno y agua el perxido de hidrgeno residual despus del blanqueo de las bras de algodn, las peroxidasa para eliminar los restos de perxido de hidrgeno utilizados en la etapa de blanqueo, las celulasas para hacer a los tejidos ms lisos y blandos, las lacasas para la oxidacin de colorantes fenlicos utilizados en la preparacin de telas para jeans. La utilizacin de tecnologas enzimticas en la industria de pulpa y papel tiene amplias perspectivas a futuro; en la medida que se avance en las investigaciones, su incorporacin puede traer aparejado importantes benecios en cuanto a mejoras en Tambin se aplican tcnicas de ingeniera gentica para productos y procesos; reduccin de costos y disminucin del eliminar o inactivar selectivamente, los genes de virulencia de un impacto ambiental (menores requerimientos de energa y agente infeccioso manteniendo la habilidad de provocar una qumicos) respuesta inmune. Las aplicaciones ms frecuentes se dirigen a:

La reduccin del uso de agentes qumicos contaminantes en la etapa de pre blanqueo. (xilanasas). Blanqueamiento de pulpa. (xilanasas; celulasas). Reciclado de bras. (endoglucanasas para mejorar la velocidad de drenaje de bras recicladas; celulasas para incrementar la densidad de la hoja de papel y reducir su rusticidad; alfa amilasas para mejorar las propiedades del drenaje y para el destintado de bras recicladas, etc.). La disminucin de residuos y contaminantes en el proceso de reciclado. (esterasas para el control de stickies, amilasas y proteasas para la remocin del lodo; lipasas para controlar la acumulacin de lodo). Modicacin de bras. (celulasas para incrementar la exibilidad de las bras, celulasas, xilanasas y lacasas para incrementar la densidad de las hojas, etc.). Tratamiento de euentes de la industria (enzimas y biodispersantes).(bacterias, levaduras o clulas de mamferos) para que lo produzca en cantidad en el laboratorio. En las nuevas vacunas de ADN desnudo se utiliza una porcin de ADN puricado que codique para la protena que estimula la respuesta inmune. El gen se introduce directamente en el individuo y son las propias clulas del individuo las que sintetizan el antgeno.

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4.Produccin ganadera y Salud Animal

Produccin animal La ingeniera gentica permite modicar genticamente animales transrindose genes de una especie a otra diferente, integrarse a su genoma, ser funcional y transmitirse a la descendencia. La transgnesis animal puede tener objetivos diversos como el estudio de enfermedades humanas; como fuente de tejidos y rganos para trasplantes en humanos, el mejoramiento del ganado (aumento de la tasa de crecimiento corporal, modicacin de la relacin carne/grasa, resistencia a enfermedades, etc.) o la produccin de molculas de inters para diferentes industrias, como la farmacutica, la alimenticia, la qumica, etc. Protenas recombinantes de inters farmacolgico se obtienen a partir de la leche de animales transgnicos de granja (ovejas, vacas, cerdos, cabras, etc.). De esta manera, las protenas se pueden producir en grandes cantidades, su puricacin es relativamente sencilla, su produccin no interere con la biologa del animal y tanto su impacto ambiental como su costo es muy bajo. Una vez obtenido el animal transgnico, ste puede ser clonado para obtener una descendencia importante genticamente idntica que producir tambin la nueva molcula de inters. Entre los animales transgnicos utilizados para la produccin de protenas de inters farmacolgico se encuentran ovejas transgnicas que producen la protena alfa1proteinasa as como los factores de coagulacin VII y IX y vacas que producen la hormona de crecimiento humano. Algunos ejemplos de la produccin de animales son, vacas que producen ms leche, ovejas que producen ms lana, peces con mayor tasa de crecimiento, etc. Salud animal Tcnicas biolgicas aplicadas a ensayos de diagnsticos y vacunas para patologas animales; suplementacin con enzimas (amilasas, beta-glucanasas, xylanasas) para mejorar la digestibilidad de las mezclas nutricionales para animales, empleo de tasas exgenas para mejorar la biodisponibilidad de fsforo en las dietas.

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Proceso Productivo: Fermentacin (Biorreactores)

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1.Introduccin
Los biorreactores o fermentadores son contenedores que son usados para sintetizar productos por medio de reacciones qumicas, en la mayora de los casos el metabolismo de las clulas es explotado para convertir los substratos en productos deseados. Los microorganismos slo crecen y se reproducen bajo condiciones ptimas, los biorreactores proveen a los microorganismos con las cantidades correctas de substratos para evitar cambios metablicos no deseados. Un Biorreactor debe cumplir con las siguientes tareas: Mantener las clulas uniformemente distribuidas en todo el volumen de cultivoa n de prevenir la sedimentacin o la otacin. Mantener constante y homognea la temperatura. Minimizar los gradientes de concentracin de nutrientes. Suministrar oxgeno a una velocidad tal que satisfaga el consumo. El diseo debe ser tal que permita mantener el cultivo puro; una vez que todo el sistema ha sido esterilizado y posteriormente sembrado con el microorganismo deseado. Los hay de muy diversos tamaos, desde los pequeos a escala de laboratorio hasta los ms grandes destinados a la produccin industrial de 1000m3. Debe notarse que, debido a la delicadeza inherente a los procesos biolgicos, mientras mayor sea el reactor que estemos utilizando, mayor ser la dicultad para controlar todas las variables necesarias y obtener las condiciones deseadas.

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Biorreactores a escala de laboratorio (izq.) e industrial (dcha.)

2.Clasicacin

Hay varios criterios para la clasicacin de los biorreactores.

1.Distribucin de la Biomasa 1.1.Biorreactores de crecimiento suspendido. Son aquellos en que la biomasa se encuentra suspendida en el seno del biorreactor. Por esta razn los procesos de transferencia se vuelven mas dicultosos y es necesario generalmente la utilizacin de sistemas de agitacin para lograr condiciones mas homogneas. Existen dos tipos de agitacin: 1.1.1.Agitacin mecnica. Son los ms utilizados por su versatilidad, aunque poseen un consumo relativamente elevado de potencia. Se utilizan serpentines o camisas para realizar el intercambio de calor. 1.1.2.Agitacin neumtica. Se utiliza gas a presin pasando a travs del biorreactor para producir la agitacin y en caso de ser aire, al mismo tiempo proveer de oxgeno al sistema en caso de tratarse de un reactor aerbico. Los existen de diversos tipos, aqu se ilustra solamente uno de ellos, el ms comn, llamado Air-lift. 1.2.Biorreactores de biolm.

Son aquellos en que la biomasa forma una pelcula sobre algn tipo de empaquetamiento y se encuentra, por lo tanto, ja. En este tipo de Biorreactores se hacen ms fciles los procesos de transferencia. Se suelen utilizar para aquellas instalaciones en que la produccin debe hacerse bajo condiciones ms controladas con una calidad constante, como en la industria farmacutica. Consisten en un empaquetamiento de elevada supercie especca sobre la cual se establece una pelcula donde la biomasa crece. Los hay de tres tipos bsicos. 1.2.1.Reactor de empaquetamiento. Este tipo de reactores suele tener la desventaja del taponamiento y la dicultad en la esterilidad. Sin embargo es til en la produccin continua y de altas velocidades de reaccin. 1.2.2.Reactor de cilindro rotatorio. (ver imagen) 1.2.3.Reactor de lecho uidizado. Puede utilizarse pelets de carbn activado o plstico como material portador. Suele usarse un sistema recirculador, mediante el cual partculas todava activas del lecho se retornan al reactor aumentando as el tiempo de retencin de lodos (una de las variables operativas mas importantes). Tiene un gran uso en los procesos anaerbicos.

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3.1.Reactores aerbicos. Los procesos aerbicos son los ms comnmente utilizados debido a que pueden ser hasta 10 veces ms rpidos que los procesos anaerobios reduciendo considerablemente los costos de construccin y mantenimiento ya que pueden permanecer abiertos a la atmsfera. Su principal desventaja es que gran parte del substrato (es decir, los nutrientes agregados al reactor) se utilizar para el 2.1.Reactores continuos. En este tipo de crecimiento de biomasa a una tasa 4 veces ms rpida que en reactores, la biomasa permanece en el interior los organismos anaerobios. mientras que se extrae el producto. 3.2.Reactores anaerbicos. Reactores de tanque agitado y ujo continuo. Cuando existen ciertas necesidades especiales, como por Reactores de lecho empaquetado. ejemplo para el tratamiento de residuos peligrosos o la Reactores de lecho uidicado. produccin de biogs, los anaerbicos presentan ventajas sobre Reactores de bra hueca. los aerbicos. Son sin embargo ms complicados en su operacin para mantener las condiciones anaerbicas. 3.Aerbicos o anaerbicos Los distintos microorganismos necesarios para obtener el resultado deseado pueden ser aerbicos, es decir que necesitan la presencia de oxgeno para sus actividad metablicas, o anaerbicos. 2.Modo de operacin 2.1.Reactores discontinuos (modo Batch). La caracterstica particular de estos reactores es que una vez nalizada la operacin son vaciados completamente para separar el producto de la biomasa o enzima utilizada. Reactores de tanque agitado tipo batch

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Biorreactor con agitacin mecnica

Biorreactor Air-Lift

Biorreactor de empaquetamiento

Biorreactor de cilindro rotatorio

Biorreactor de lecho uidizado

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Proceso Productivo: Separacin y Purificacin

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Una de las partes ms difciles de la produccin es la separacin del producto y su puricacin. Este proceso depende absolutamente del producto nal que se quiera obtener y por lo tanto es muy especco de cada proceso. En la imagen presente abajo se listan algunas actividades utilizadas para la separacin y puricacin del producto. Como podemos observar, la economa de los procesos biotecnolgicos depende en gran medida de las operaciones de bioseparacin que involucran, de tal manera que la correcta seleccin de estas operaciones tiene un fuerte impacto en el xito del proceso.

Actividades de separacin y puricacin

BIOTECNOLOGA
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Caso de estudio: Biorremediacin de suelos

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1.Introduccin
Un rea muy importante en el uso de la biotecnologa es la de tratamiento de euentes y remediacin de sitios contaminados. Como sitio contaminado se dene aqul que como resultado de la actividad humana ha sido alterado de alguna manera y representa por ello un peligro. Los contaminantes mas comunes se detallan en el grco a continuacin. La remediacin de estos sitios contaminados puede llevarse a cabo de diferentes formas, pero nos centraremos sobre la biorremediacin. La biorremediacin consiste en la utilizacin de microorganismos para la degradacin de compuestos peligrosos; esto sin embargo puede solo lelvarse a cabo en el caso de compuestos orgnicos como BTEX (siglas de Benceno, Tolueno, Eteno Xyleno), PAH (siglas de Hidrocarburos poli-halogenados) y dems. La primer instancia es la de laboratorio; se toma una muestra del suelo y agua del sitio y se la coloca en un reactor pequeo. Primero debe probarse que la degradacin es posible. Una vez superada esta etapa se evaluarn las condiciones del caso especco para determinar las condiciones ptimas a lograr para la degradacin ms rpida. Una vez que se ha determinado las condiciones ptimas debe seleccionarse el tipo de biorremediacin a utilizar. Los modos operativos se describen a continuacin.

BIOTECNOLOGA

Principales contaminantes del suelo Fuente: LfU BadenWrttemberg

Tratamiento de BTEX usando Fe(III) como aceptor de electrones. A la derecha se encuentra la muestra original y en el extremo izquierdo luego de 5 semanas de actividad.

2.Biorremediacin ex situ
Como su nombre lo indica, esta tcnica requiere la excavacin total del suelo contaminado para su tratamiento. Naturalmente esto aumenta considerablemente el costo de la operacin, pero tambin se aumenta la velocidad de la remediacin as como tambin su efectividad.

El mtodo ms utilizado es el de biopila, esquematizado a continuacin Pueden usarse bien microorganismos contenidos en el suelo como cepas especiales creadas u obtenidas para el n especco.

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Proceso de biopila

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3.Biorremedacin in situ
Este mtodo no requiere la remocin del suelo contaminado sino que se trata en su propia ubicacin. Los tipos disponibles son: Bio aumentacin. Se agregan microorganismos especcos que degraden las sustancias contaminantes, previamente asegurndose que estos organismos no puedan representar un peligro biolgico. Bio ventilacin. Se instalan caeras de succin de aire que llegan hasta la zona insaturada.

Bio slurping. Se instala una tubera de succin hasta la zona saturada. Se combina con la succin de aceite, de modo que la zona saturada es parcialmente tratada. Bio Sparging. Inyeccin de aire dentro del acufero, debajo del punto de contaminacin. Adems de la degradacin de los compuestos, se facilita la eliminacin de ellos por favorecer la volatilidad. Suelen instalarse tuberas de succin adicionalmente.

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Bioventilacin

Bio-slurping

Bio-sparging

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Caso de estudio: Produccin de semillas transgnicas

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1.Introduccin
En 1983 se cre la primera planta transgnica, y en 20 aos los cultivos transgnicos, impulsados por unas pocas multinacionales, pasaron de la nada a ms de 67,7 millones de hectreas en el ao 2003, sin que an se conozcan sus consecuencias sobre la salud y el medio ambiente, y en contradiccin con el ms elemental principio de precaucin. Segn el Servicio Internacional para la Adquisicin de Aplicaciones Agrobiotecnolgicas (ISAAA), el rea mundial de cultivos transgnicos se multiplic por 40 desde 1996. La progresin ha sido espectacular, desde el primer cultivo transgnico de tabaco en 1992 en China, y las primeras plantaciones comerciales en Estados Unidos en 1994. En 1995 se cultivaron apenas 200.000 hectreas, en 1996 se pas a 1,7 millones de hectreas, en 1997 a 11 millones, en 1998 se cultivaron 27,8 millones, en 1999 se plantaron 39,9 millones, 43 millones en 2000, 52,6 millones en 2001, 58,7 millones en 2002 y en el ao 2003 se alcanzaron los 67,7 millones de hectreas, con un crecimiento mundial del 15%). Argentina ocupa el segundo puesto, luego de los EE.UU. en la produccion de agrcola transgnica. Las plantas transgnicas son mayoritariamente resistentes a los herbicidas, y se venden formando parte de un paquete de tecnologa que incluye la semilla transgnica y el herbicida al que es resistente. Los dos productos ms difundidos actualmente son el Roundup Ready de Monsanto que tolera su herbicida Roundup (glifosato), y el Liberty Link de AgrEvo que tolera su herbicida Liberty (glufosinato). gentica. Para ello, primero debe identicarse el gen de inters en algn organismo que presente la carcterstica deseada. Se aisla mediante el uso de enzimas de restriccin y se integran al tejido celular de la planta. Para sto, una de las tcnicas ms utilizadas es la de disparar a las clulas con microproyectiles metlicos recubiertos del ADN que penetran en la clula e integran el nuevo ADN en su genoma. Una vez que una clula vegetal ha sido transformada, es necesario regenerar la planta entera a partir de ella. Este proceso se realiza en el laboratorio, cultivando los fragmentos de tejido vegetal que han sido inoculados con Agrobacterium o disparados con microproyectiles en medios de cultivo que favorecen la regeneracin de nuevas plantas. Es importante que en este paso slo se regeneren las clulas del tejido que han sido transformadas. Esto se consigue introduciendo junto con el transgn un gen adicional (gen marcador) que conera una caracterstica selectiva. Por ejemplo, se han utilizado genes de resistencia a antibiticos para que slo las clulas modicadas sean capaces de sobrevivir en presencia del antibitico. Estos genes responsables de caracteres selectivos estarn presentes posteriormente en todas las clulas de la planta transgnica regenerada o pueden ser eliminados por diversos procedimientos.

BIOTECNOLOGA

2.Proceso Productivo
a. Produccin de la primera planta (en laboratorio)
La produccin de una planta transgnica en laboratorio consta de dos etapas fundamentales denominadas transformacin y regeneracin. Se denomina transformacin al proceso de insercin del gen que se pretende introducir (tambin llamado transgn) en el genoma de una clula de la planta a transformar. La regeneracin consiste en la obtencin de una planta completa a partir de esa clula vegetal transformada. Para introducir el nuevo gen en el genoma de la clula vegetal se utilizan fundamentalmente dos mtodos. El ms comn utiliza una bacteria del suelo, Agrobacterium, que en condiciones naturales es capaz de transferir genes a las clulas vegetales. El mtodo alternativo consiste en la introduccin directa de los genes en el ncleo de la clula vegetal, un proceso de construccin
Proceso de produccin de construccin gentica en laboratorio

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b. Proceso productivo de semillas (en planta de produccin)

Una vez obtenida la planta transgnica se realizan plantaciones, se cosecha, y se procesan las semillas segn el siguiente procedimiento: Recepcin: pesaje, toma de muestra, sustraccin de los diversos lotes de semilla. El prealmacenamiento pueden hacerse a granel, en contenedores o en sacos Secado: El exceso de humedad luego de realizada la cosecha es una de las causas principales de prdidas importantes en la produccin de los semilleros. De ah que el objetivo inmediato a la cosecha, ser lograr el contenido adecuado de humedad de las semillas. El secado debe iniciarse en el campo, inmediatamente despus de la colecta y/ o de la extraccin de las semillas. Las semillas se pueden secar con ayuda de equipos que permiten la circulacin de aire a diferentes temperaturas o con gel de slice, un mtodo fcil y efectivo. Existen secadores electrnicos que permiten programar los ciclos de secado, la temperatura, el ujo y la velocidad del aire de secado. El tiempo total que consume el secado depende del porcentaje de humedad inicial de la semilla, de la velocidad de secado y del porcentaje de humedad nal deseado. Limpieza: Se eliminan contaminantes como paja, granza y semillas de malezas. Las tcnicas de limpieza se basan en las diferencias entre distintos caracteres fsicos de las semillas tales como tamao, longitud, forma, peso, textura supercial, color, anidad por los lquidos y conductividad. las principales operaciones de limpieza son: En primer lugar el aventado, en el que la semilla sucia se somete a la

accin de una corriente de aire que separa los componentes ligeros de los pesados. Posteriormente el cribado, en el que las semilla sucia se hace pasar a travs de cribas dotadas de oricios y aberturas de distintas formas y tamaos para separar los componentes grandes de los pequeos. Por ltimo la separacin por longitud en la que se separan los componentes cortos de los largos. Tratamiento: El tratamiento de semillas es la aplicacin de tcnicas y agentes biolgicos, fsicos y qumicos, que proveen a la semilla y a la planta proteccin frente al ataque de insectos y enfermedades transmisibles por semilla as como frente a aquellas que atacan en etapas tempranas del cultivo y que provocan consecuencias devastadoras en la produccin de los cultivos cuando no son controladas. En el caso de semillas transgnicas estos tratamientos son en general menores o inexistentes. Envasado: Cuando todos los posibles materiales inertes y semillas de hierbas u otros cultivos han sido removidos, las semillas estn listas para envasarse. Algunas veces se aplica un tratamiento de fungicida o insecticida antes de ser envasadas. Las semillas pueden enseguida envasarse directamente a otras compaas de semillas o ser conservadas en el almacn hasta que se necesiten. Las semillas de plantas de cultivo que se producen, limpian y venden en grandes volmenes, se envasan al nal de la cadena de limpieza. La semilla, generalmente tratada, se acumula en un silo-tolva colocado sobre una balanza automtica de la que cuelga un saco de papel; una vez vaciada en el saco, automticamente, la cantidad correspondiente al peso elegido, el saco se suelta y cae en una cinta transportadora que lo conduce hasta la cosedora manual.

BIOTECNOLOGA

Esquema del proceso productivo

Recepcin

Secado

Limpieza

Tratamiento

Envasado

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Caso de Estudio: Produccin de inoculantes

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1.Introduccin 2.Proceso Productivo
La tcnica de inoculacin consiste en el uso de Por un lado se realiza en laboratorio el cultivo del microorganismos bencos para reducir la necesidad de microorganismo y se realiza la multiplicacin del mismo en un aplicacin de fertilizantes qumicos en la produccin agrcola. bioreactor obteniendo un caldo del microorganismo. Por otro lado se realiza la extraccin y procesamiento de la Un inoculante es un concentrado de bacterias especcas, turba, que ser el sostn de los microorganismos y provee una que aplicado convenientemente a la semilla poco antes de su alta tasa de aereacin y permeabilidad. Los yacimientos de sembrado, mejora el desarrollo del cultivo. Su empleo es una donde se extrae la turba usada en el pas se encuentran prctica agronmica reconocida en el mundo por sus benecios pricipalmente en Tierra del Fuego. La turba, en bruto (turba productivos y econmicos (principalmente en gramneas y virgen), es procesada (secado, molienda y envasado). leguminosas), a tal punto que desde hace algunas dcadas se Posteriormente, las bolsitas con turba no estril son lleva a cabo en pases de los cinco continentes (Mxico, esterilizadas por radiacin con una dosis mnima de 5 Mrad. Holanda, Brasil, Japn, Bulgaria, Colombia, Australia, A continuacin se inyecta el caldo con el microorganismo. Canad, Estados Unidos, Repblica Checa, Argentina, etc.). Es El material esterilizado es inyectado con caldo puro de en otro de los principales productos biotecnolgicos producidos en forma asptica, identicado y almacenado en cmaras el pas. especiales para la vericacin de su calidad por muestreo estadsticamente representativo de cada lote por estirpe. Inoculante para soja Slo cuando el laboratorio de control de calidad verica la Para cada leguminosa existe una bacteria determinada aptitud de un lotes) se procede a colocar las dos bolsitas con las para que nodule, con la que establece naturalmente una estirpes separadas dentro del sobre de inoculante con su estricta dependencia siolgica como respuesta funcional para identicacin correspondiente. sobrevivir: una simbiosis. La bacteria especca para la Finalmente se utilizan mquinas inoculantes para realizar inoculacin en soja es el Bradyrhizobium japonicum. la inoculacin de la semilla. En stas se introducen las semillas, Gracias al proceso de la simbiosis se genera una buena adhesivos, aditivos y nalmente el inoculante. Es sencillamente nodulacin en la raz de una leguminosa, logrndose un buen un recipiente en donde se controla la temperatura y el tiempo follaje para ser usado como alimento para animales o un necesario para la transferencia de nutrientes hacia las semillas. ptimo rendimiento de grano. Ventajas de su uso Las principales ventajas de la inoculacin en cultivos de soja, extensivas a todas las otras leguminosas, son: Asegura una temprana formacin de ndulos que garantizan un adecuado abastecimiento de nitrgeno para el cultivo durante todo su ciclo de crecimiento. Aporta a la leguminosa ms del 70 % del nitrgeno necesario; el resto lo proporcionan el suelo y el fertilizante complementario. Aumenta los rendimientos. Al mejorar el tenor de protenas en pastos y granos, mejora la calidad de la cosecha. A travs de la Fijacin Biolgica del Nitrgeno, enriquece el suelo en nitrgeno que queda en races y restos de cosecha, que se incorpora en el laboreo para su descomposicin. Asegura un excelente abono orgnico que aumenta la fertilidad del suelo y los rendimientos de los cultivos siguientes. Contribuye a preservar el medio ambiente, no contaminando aguas ni aire. Es econmico, pues permite ahorrar inversiones en equipamiento y mano de obra. Una correcta inoculacin proporciona un elevado retorno por peso invertido.
Esquema del proceso productivo

BIOTECNOLOGA

Obtencin de microorganismo

Procesamiento de Turba

Cultivo y obtencin del caldo

Esterilizacin

Inyeccin del caldo en turba

Inoculacin de semillas

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Caso de estudio: Produccin de levaduras vnicas transgnicas

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1.Introduccin
Se trata de un proyecto de aplicacin biotecnolgico a cargo del Dr. Ivn Ciklic, del INTA. Se busca la obtencin en laboratorio de una cepa de levadura Saccharomyces cerevisiae que produzca en la fermentacin del mosto un nivel de alcohol inferior al que producen las levaduras actuales, con el n de facilitar la comercializacin de vinos en el exterior. La glucosa, durante la fermentacin, es degradada en una serie de compuestos que incluyen el Etanol, el Glicerol y el cido actico. stas transformacines se realizan mediante una serie de reacciones de Reduccin-Oxidacin en delicado equilibrio. Dado que el Glicerol otorga elementos benecos al vino ( como un mejor sabor, textura ms acabada y mayoir cuerpo) se busc desviar la transformacin de glucosa en Etanol hacia una mayor proporcin de glicerol.

BIOTECNOLOGA

2.Fundamentos y conclusiones
Se logr identicar el gen PDC2 cmo el responsable de la transformacin de la fraccin de glucosa en etanol. En base a sto, se realizaron una serie de experimentos. En primer lugar se logr la eliminacin del Gen PDC2. El resultado fue la produccin nula de alcohol, lo cul no es deseado evidentemente.

Posteriormente se busc la mutagnesis (transformacin) del Gen. Algunos efectos indeseables comenzaron a aparecer como la produccin excesiva de cido actico o de anhdrido carbnico. Hasta el momento no se ha encontrado la mutacin justa que produzca los efectos deseados pero se contina la investigacin y los pronsticos son alentadores

Metabolismo anaerobico de glucosa en S. cerevisiae y disponibilidad de NADH/NAD+

Aqu podemos apreciar el complejo equilibrio entre los dintintos productos de la fermentacin vnica

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Adaptado de D. Kutina et al., 2010

Contextualizacin: Biotecnologa en Amrica Latina

Industrias y Servicios I BIOTECNOLOGA
Sin embargo, la Biotecnolgica an no ha llegado a despegar en forma sostenida en esta zona del mundo, debido en parte a la falta de polticas nacionales coherentes En comparacin con otras regiones del mundo, el que incentiven la innovacin, la transferencia de tecnologa desarrollo de la biotecnologa moderna en el sector y a la comercializacin. empresarial en Amrica Latina, empez relativamente tarde, a nales de los aos 80. Hacia 1996 existan cerca de 500 empresas

1.Estructura de la bioindustria

biotecnolgicas en Amrica Latina. Sin embargo, slo una Pero, desde nales de los aos 90, muchas empresas decena de rmas estaba involucrada en actividades de innovadoras en el rea de biotecnologa se han biotecnologa moderna, es decir aquellas que utilizan multiplicado y algunas han logrado desarrollar tcnicas de biologa molecular e ingeniera gentica en sus productos importantes y comercializarlos a nivel mundial. principales procesos industriales.
N de empresas biotecnolgicas por pas

Las actividades biotecnolgicas ms voluminosas de la regin son la comercializacin de semillas transgnicas y la micropropagacin de plantines, las aplicaciones en el sector de la salud y animal (principalmente en Argentina, Brasil y Cuba), as como tambin, las aplicaciones alimentarias e industriales y en el sector ambiental en el tratamiento de euentes.

muestran un ms alto progreso en la aplicacin de la biotecnologa moderna en el sector empresarial.

Y por otra parte mencionar que solamente en Brasil y Cuba se puede hablar de la presencia de una industria biotecnolgica dinmica, debido a la existencia de clsters que agrupan centros de investigacin y produccin especializados con altos niveles de cooperacin entre s: en Es importante destacar que los pases con capacidades Brasil, el clster de Minas Gerais, y en Cuba, el Polo universitarias de I+D mayores (Argentina, Brasil, Mxico) Biotecnolgico del Oeste de La Habana.

2.Polticas e incentivos

biotecnologa en Amrica Latina provienen de fuentes pblicas.

Casi todos los pases de Amrica Latina cuentan con Por otra parte, la infraestructura de investigacin y algn programa nacional de promocin, orientacin, desarrollo biotecnolgico en Amrica Latina es priorizacin y nanciacin de la actividad biotecnolgica o esencialmente de carcter pblico, pero vara mucho de cientco-tecnolgica con especial nfasis a todas las pas a pas. actividades que se reeren a biotecnologa. En todo caso, en biotecnologa agrcola, en el campo En casi todos los pases existen, adems, incentivos de salud humana, salud animal, alimentos y medio tributarios para donaciones o inversiones en ciencia y ambiental, la mayora de los pases latinoamericanos tecnologa. Y es de destacar que las mayores inversiones en cuenta, al menos, con una institucin slida.

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Contextualizacin: Biotecnologa en Argentina

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1.Economa y bioindustria
La situacin econmica argentina denota una notable mejora desde que se impusiera el corralito a nales de 2001. As, en los ltimos aos, la economa del pas ha alcanzado incrementos del PIB cercanos al 8-9%. El Gobierno argentino dise un Plan de Accin 2005-2007 que pretendi ser una gua que impulsara el desarrollo de la industria biotecnolgica en el pas durante los prximos aos. Se establecieron una serie de objetivos de cumplimiento a largo plazo, y que dieron lugar a un conjunto de acciones, actividades y medidas para poder llevarlos a la prctica. El Plan Estratgico Nacional de Biotecnologa Industrial (PENBio) es el instrumento mediante el cual el Estado argentino acta como elemento aglutinante de los diversos sectores y agentes que conforman la industria biotecnolgica. 1.Sector agrcola El mercado de semillas argentino tiene un volumen anual de unos U$S 670 millones, e involucra a ms de 22 empresas que desarrollan actividades de mejoramiento gentico, micro-propagacin vegetal, proteccin frente a herbicidas e insecticidas y desarrollo de inoculantes. Argentina entr en la era de los OGM inicialmente con la comercializacin de semilla de soja transgnica Round Up Ready que representa resistencia al glifosato. Actualmente se comercializan otras variedades desarrolladas adems de la soja resistente a lepidpteros (Bt), algodn resistente a lepidpteros (Bt) y maz resistente a glufosinato de amonio (LL). En Entre Rios se est innovando con la plantacin de una variedad de arroz creada por mutagnesis de lata calidad y resistencia a herbicidas. Es importante resaltar que el 70% de la produccin de soja se industrializa a travs del complejo sojero constituido por 54 plantas aceiteras con una capacidad de molienda instalada de 93 mil tons/da. El complejo sojero argentino es responsable de un total de exportaciones por U$S 4.979 millones durante la campaa 2001/02, con una participacin del 26% del mercado mundial, de cuyo volumen el 63% corresponde a harinas (pellets), 23% grano y 14% aceite. Los principales compradores son la UE (harinas), China (grano) e India (aceite). Cinco empresas (Cargill, Bunge, Dreyfus, AGD y Vincentn) son responsables del procesamiento del 70% de la cosecha.

2.Aplicaciones Biotecnolgicas
El pas centra gran parte de sus exportaciones en el sector agropecuario. Las distintas aplicaciones de la biotecnologa en ese campo podran suponer un importante revulsivo a la economa del pas. Y as est ocurriendo. Argentina es en la actualidad el segundo productor del mundo de cultivos transgnicos, slo superado por los EE.UU. El 98% de la soja cultivada, el 50% del maz y el 9% del algodn proceden de cultivos OGM. La apuesta clara por la biotecnologa verde se ha basado en diferentes factores: una legislacin tolerante, una aceptacin por parte de la opinin pblica y la existencia de multinacionales dispuestas a realizar importantes inversiones. La suma de todos estos factores ha permitido que, en los momentos difciles por los que atravesaba el pas, la biotecnologa haya acudido en auxilio de su maltrecha economa. En el sector ganadero destaca la produccin de vacunas recombinantes y la utilizacin de animales como biofactoras (primeros ejemplares en el mundo de ganado bovino modicados genticamente para la produccin de hormona de crecimiento humana por la empresa Biosidus). Por otro lado, la industria farmacutica y de diagnstico argentina es una de las ms desarrolladas de Latinoamrica y con una gran vocacin exportadora.
Comparacin del \ rea cultivada con AGM en los ltimos aos

BIOTECNOLOGA

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Supercie \ sembrada con transgnicos

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2.Alimentacin Se producen enzimas de uso industrial, algunas de ellas mediante el uso de tcnicas de la biotecnologa. Estas enzimas son utilizadas en procesos de fermentacin, principalmente en la produccin de jarabe de maz de alta fructosa y jarabe de glucosa. Tambin se observan en industrias productoras de productos lcteos, alimentos y bebidas. Si bien se muestra inters en las tcnicas de la biotecnologa, solo un bajo porcentaje de industrias las utilizan. La principal aplicacin de la biotecnologa en Mendoza es la fermentacin de vinos. Se utilizan levaduras naturales para vinos de alta gama, y comerciales para el resto. Estas ltimas en la actualidad son importadas, principalmente de Francia y Australia. Se desarrollaron en laboratorio cepas locales, que son especcas para los vinos de la regin. Estas no son producidas a nivel industrial en la provincia, si no que se vendi la patente a empresas internacionales para su desarrollo. Tambin hay un proyecto de desarrollo de levaduras que reduzcan el contenido alcohlico del vino, que permitiran la entrada a nuevos mercados. 3.Salud humana La aplicacin industrial de la biologa ha tenido su mayor impacto local en el sector de la industria farmacutica, la que representa an el 50% del total de lo comercializado en el marcado en relacin a la biotecnologa. La mayora de los productos son resultado de

la aplicacin de la tecnologa de ADN recombinante. Los principales productos se venden en Asia, Oriente y Latinoamrica. En el 2000 se exportaron cerca de U$S 30 millones en productos para el rea de salud obtenidos por la tcnica de ADN recombinante. En la actualidad en Mendoza se est desarrollando un microemprendimiento para la fabricacin de neurotoxinas botulnicas para el uso medicinal, mediante tcnicas de biotecnologa. 4.Salud animal La industria farmacutica veterinaria ha ido evolucionando desde los cultivos en lneas celulares al desarrollo de antgenos vacunales producidos mediante tecnologa de ADN recombinante. El sector productor de vacunas veterinarias representa un mercado de $158 millones anuales. Se destaca la produccin de vacunas contra la diarrea neonatal del bovino y contra la aftosa. 5.Medio ambiente En la Argentina la aplicacin de tcnicas biotecnolgicas destinadas al medioambiente se encuentran poco desarrolladas. Se puede mencionar el desarrollo de plantas y bacterias para la biorremediacin (limpieza) de suelos contaminados con metales pesados (cadmio) y petrleo, respectivamente. En Mendoza se investiga la utilizacin de microalgas destinadas a la captura de CO2 y produccin de biocombustibles.

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3.Fondos de nanciacin

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FONTAR: Financia proyectos de empresas, instituciones pblicas o privadas destinados a promover la innovacin o modernizacin tecnolgica. A su vez, apoya FONCyT: Apoya proyectos y actividades cuya nalidad son la proyectos con diferente nivel de riesgo mediante el uso de generacin de nuevos conocimientos cientcos y modalidades de nanciacin en funcin de dicho riesgo. tecnolgicos tanto en investigacin bsica como Financiacin privada aplicada desarrollados por investigadores pertenecientes a La inversin privada es ms bien escasa. Esta instituciones pblicas y privadas sin nes de lucro radicadas constituida principalmente por fondos ngeles destinados en el pas. La nanciacin de proyectos se concreta a travs de fondos no reintegrables (subsidios) cuya adjudicacin se a inversiones de riesgo y convenios con bancos realiza por convocatorias pblicas, en las que las internacionales, como es el caso del convenio BIDpropuestas presentadas se evalan siguiendo criterios de Credicop. transparencia, calidad y pertinencia de los proyectos a nanciar. Financiacin pblica
Fondos de \ nanciacin

4.Polos Biotecnolgicos, Parques Industriales e Incubadoras de empresas

Las incubadoras de empresas son consideradas una pieza clave del desarrollo econmico, ya que apuntan a producir negocios exitosos que resulten viables y autnomos desde el punto de vista nanciero, tras un tiempo acotado de incubacin o desarrollo. Tienen por objeto proveer las condiciones adecuadas para que los emprendedores que se radiquen en ese espacio fsico puedan llevar a cabo de manera exitosa la creacin de una nueva empresa. De ese modo, la incubadora brinda el lugar fsico y el tiempo necesario para que el germen de una idea pueda crecer hasta convertirse en un producto comercializable, facilitando adems todas las herramientas de gerenciamiento para que esa idea se constituya en un buen negocio. En Argentina, y desde la SeCyT se est trabajando para aumentar los incentivos scales destinados a las empresas que aporten capital de riesgo al desarrollo de estos proyectos. Adems, existen varias empresas en el rea de biotecnologa vegetal que cuentan con sus propios laboratorios de I+D. Si bien el advenimiento del uso de la biotecnologa en los procesos productivos de cada sector ha sido una consecuencia de las mejoras productivas desarrolladas por las empresas, en los ltimos aos la

dinmica de creacin de polos, parques e incubadoras de empresas, ha favorecido el desarrollo de un reducido nmero de nuevas rmas en el campo de la biotecnologa. Se destaca el caso de empresas instaladas en los Parques de Innovacin Tecnolgica INTA y las creadas por los alumnos de la carrera de Licenciatura en Biotecnologa de la Universidad Nacional de Quilmes. El ltimo estudio realizado en 2005, seal la existencia de 58 incubadoras de empresas, centros de innovacin, parques y polos tecnolgicos concentrados en la ciudad de Buenos Aires y en las provincias de Buenos Aires, Santa Fe, Crdoba, Entre Ros y Mendoza, Misiones, Ro Negro y San Luis. Se destacaron 9 empresas de base biotecnolgica albergadas, 5 en la incubadora de empresas de la Universidad Nacional de Quilmes, 2 en la del Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires y 2 en el Parque Tecnolgico del Litoral del Centro SAPEM (Santa Fe).9% del algodn proceden de cultivos OGM. La apuesta clara por la biotecnologa verde se ha basado en diferentes factores: una legislacin tolerante, una aceptacin por parte de la opinin pblica y la existencia de multinacionales dispuestas a realizar importantes inversiones. La suma de todos estos factores ha permitido que, en los momentos difciles por los que atravesaba el pas, la biotecnologa haya acudido en auxilio de su maltrecha economa.

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Anlisis FODA de la \ biotecnologa en Argentina

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Informe de visita: Laboratorio Biotecnolgico del INTA

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Los equipos que observamos en el laboratorio que administra el Dr. Ivn Ciklic son los siguientes. Campana para trabajar con gases txicos Este equipo posee una compuerta corrediza verticalmente, se baja y tiene un tope dejando un espacio que nos permite ingresar las manos para poder manipular el instrumental dentro de l. En la parte superior tiene un ventilador, que al activarlo, succiona el aire circundante y nos permite manipular los gases txicos, ya que estos ascienden. Los gases que usan frecuentemente son el cloroformo, bromuro de etidio, formaldehido, etc. Termociclador Este equipo permite realizar los ciclos de temperatura necesarios para una reaccin en cadena de la polimerasa de amplicacin de ADN. El sistema consiste en un bloque de resistencia elctrica que distribuye a travs de una placa una temperatura homognea durante tiempos que pueden ser programables, normalmente con rangos de temperatura de 4C a 96C. La reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) es una tcnica cuyo objetivo es obtener un gran nmero de copias de un fragmento de ADN particular, partiendo de un mnimo, lo que se llama amplicacin del ADN. Su utilidad es que tras la amplicacin resulta mucho ms fcil con una muy alta probabilidad virus o bacterias causantes de una enfermedad, identicar personas o hacer investigaciones cientcas con el ADN amplicado, donde el ltimo es el uso que le dan en este laboratorio. Esta tcnica se fundamenta en la propiedad natural de las ADN polimerasas para replicar hebras de ADN, para lo cual emplea ciclos de altas y bajas temperaturas alternadas para separar las hebras de ADN recin formadas entre s tras cada fase de replicacin y, a continuacin, dejar que vuelvan a unirse. Para llevar a cabo la reaccin se debe preparar lo que se llama Mix de reaccin, que se introducir al termociclador, y esto necesita: Los desoxinucleotidos, que es el sustrato para polimerizar el nuevo ADN, esto vendra a ser las piezas necesarias para llevar a cabo la reaccin. Contiene 4 bases adenina, guanina, timina y citosina. ADN polimerasa que contiene la enzima que va a realizar las funciones de corte y adhesin. ADN molde, contiene la regin del ADN que se va a amplicar. Buffers, tienen una cierta cantidad de sales y detergentes, que mantiene el pH adecuado para el buen funcionamiento de la polimerasa. Primers (cebadores), esto es una pequea parte del ADN normalmente de doble cadena, que acta como punto de inicio para la adicin de nucletidos con el n de copiar la hebra molde.

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Ciclo de amplicacin: el proceso de PCR por lo general consiste en una serie de 20 a 35 cambios de temperatura llamados ciclos, cada ciclo suele consistir de 2 a 3 pasos diferentes de temperaturas. Las etapas del ciclo son: 1.Inicializacin, esta etapa es slo necesaria para aquellas ADN polimerasas que requieran activacin por calor, y consiste en llevar la reaccin hasta una temperatura de 94-96C que se mantiene durante 1 a 9 minutos. 2.Desnaturalizacin, en esta etapa se separan las dos hebras de las cuales est constituido el ADN, a esto se le llama desnaturalizacin del ADN, para ello es necesario una temperatura de 94-96C. 3.Alineamiento Unin del cebador, en esta etapa el cebador se unir a su secuencia complementaria en el ADN molde. Para ello es necesario bajar la temperatura a 40-68C durante 20-40 segundos, segn sea el caso, permitiendo as el alineamiento. La polimerasa es la que se encarga de unir la cadena del ADN molde con el cebador. 4.Extensin Elongacin de la cadena, acta el ADN polimerasa, tomando el ADN molde para sintetizar la cadena complementaria y partiendo del cebador como soporte inicial necesario para la sntesis de nuevo ADN. La temperatura para este paso depende del ADN polimerasa usada como de la longitud del fragmento de ADN que se va a amplicar. 5.Por ltimo, estos ciclos se vuelven a repetir, amplicndose exponencialmente el producto.

Incubadora termo regulable

Micro centrifuga

Es un equipo cerrado que permite controlar la Es una mquina que pone en rotacin los tips puntas temperatura, humedad y otras condiciones necesarias para para separar por fuerza rotatoria sus componentes o fases, el desarrollo de un cultivo microbiolgico. en funcin de su densidad. La temperatura de cultivo ms comn que usan es de 36C a 37C.

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Thermomixer

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El equipo se usa para poder regular la temperatura entre 0C y 100C, y tambin se puede regular la agitacin, se puede regular por pequeos periodos o se puede regular para que este agitando constantemente a ciertas revoluciones. Esto se usa para reacciones de biologa molecular, por ejemplo, para reacciones de restriccin (digestin del ADN), es decir que agarramos el ADN y lo cortamos con enzimas de restriccin. Estas son enzimas que se aslan de bacterias y que cortan el ADN en determinadas secuencias especcas de corte, esto depende de que enzima de restriccin usemos. Esto es muy til para los anlisis de restriccin, que sirve para saber si la secuencia del ADN es realmente la que uno quiere o comparar la secuencia de ADN con un patrn que se sabe. Si cortas con tales enzimas te da un patrn especco de corte para esa secuencia. Se realiza la reaccin a 37C, algunas reacciones se realizan a otra temperatura pero en general es a 37C, y luego se aumenta la temperatura a 70C a 75C para desactivar la enzima, luego el ADN se corta para analizar el gen y as analizamos el patrn de bandas. Se somete el ADN cortado a un campo elctrico y va a ir migrando distintos fragmentos y de acuerdo al tamao van a migrar ms o menos. De acuerdo al patrn de bandas podemos sacar mucha informacin. Por ejemplo el estudio del ADN se basa en esta tcnica de patrn de bandas. Este tema lo llevan a cabo en el laboratorio de geles. Micro pipetas y puntas Las micro pipetas es un instrumento de laboratorio empleado para absorber y transferir pequeos volmenes de lquidos y permitir su manejo adecuadamente. Los volmenes captables por estos instrumentos varan segn el modelo, por ejemplo, se pueden captar 20 ul, 200 ul y 1000 ul. Las micro pipetas permiten emplear distintos lquidos sin tener que lavar el aparato, para ello, se emplean puntas desechables de plstico, que son estriles. Autoclave elctrica Este dispositivo sirve para esterilizar el material de laboratorio, utilizando vapor de agua a alta presin y temperatura (2 atm y 120C). El fundamento del autoclave es que coagula las protenas de los microorganismos debido a la presin y temperatura. El laboratorio del INTA esteriliza los medios de cultivos, todo el material de vidrio, como pipetas, tips puntas, probetas, etc.

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Laboratorio de Electroforesis

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En este laboratorio se realiza el anlisis de bandas, de los fragmentos de ADN que obtuvimos en la reaccin de restriccin con el thermomixer. Primero se prepara la mezcla de agarosa con buffer, la agarosa es un polisacrido que forma una matriz inerte y no txica que nos permite separar fragmentos de ADN mediante electroforesis. Esta mezcla se pone a calentar, agitndose frecuentemente hasta que llegue al punto donde comienza a hervir. Una vez enfriada la mezcla se vierte con cuidado en una bandeja y se deja solidicar. Una vez que solidica el gel se pone en la cuba de electroforesis. Estas cubas tienen dos polos, un nodo y un ctodo, que se conectan con la fuente que genera el campo elctrico. Se hacen unos pocillos (huecos) al gel donde se carga el ADN, y adems el bromuro de etidio, este qumico se engancha en las bases del ADN y es uorescente a luz ultravioleta. Gracias a esto podemos marcar el ADN, por as decirlo, con un color. Al aplicar el campo elctrico se puede observar cmo van migrando los fragmentos. Una vez que corri lo suciente, dependiendo del tamao de la banda, tambin depende de la concentracin de agarosa en el gel, mientras ms agarosa tenga menos poroso es el gel y ms dicultoso es para el ADN migrar por l (mala solucin del gel). Luego se lleva la cuba a un equipo que realiza la foto documentacin, este equipo tiene incorporado una cmara arriba de l que saca fotos a la cuba, donde se registra y se guarda en la computadora, en esta proceso entra en juego el bromuro de etidio, se excita con rayos UV, uno puede hacer visible la banda y despus se hace el anlisis correspondiente. Para este anlisis se usan unos marcadores de tamao, estos marcadores tienen las bandas marcadas de un tamao que ya est estandarizado que sirve como referencia, donde se sabe el tamao y la concentracin. Junto con las muestras y el marcador se puede sacar informacin valiosa. El bromuro de etidio es una sustancia fuertemente mutagnica y es irritante a los ojos, piel, mucosas y el tracto respiratorio. Se sospecha que puede ser cancergeno y teratognico por su cualidad de mutagenicidad. Si se ingiere, se inhala o se absorbe por la piel, esta sustancia puede tener efectos nocivos. El bromuro de etidio se meten en los espacio del ADN donde se unen las dos bases, dentro de all puede generar mutaciones, o sea, que es altamente cancergeno, tanto para el contacto como la inhalacin.

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Heladeras de conservacin Estas heladeras se usan para guardar placas donde crecen los microorganismos, bacterias y cepas que incuban. A la temperatura que trabajan estas heladeras permiten mantener estos microorganismos, de tal forma que desarrollo bacteriolgico es mnimo. A 4C las bacterias duran hasta dos meses, en cambio las levaduras duran hasta 1 ao en estas condiciones. Tambin tienen un freezer que esta a -20C, ac se guarda todo lo que se necesita que este congelado, por ejemplo, reactivos y muestras de ADN y enzimas. La idea es evitar la degradacin, y el ADN es muy sensible a la

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degradacin, por lo tanto si o si hay que tenerlo a esta temperatura de -20C. En caso de que queramos mantener por ms tiempo estas muestras, podemos tener la temperatura a -80C, pero en este caso tenemos que preparar el cultivo de las clulas en un medio de glicerol, porque el glicerol protege a las clulas de los efectos del congelamiento, ya que a -80C las clulas pueden tener consecuencias fatales. Hay que tener especial cuidado con las enzimas, ya que si las tenemos a temperatura ambiente en un par de das quedan totalmente en inactividad, y son muy caras adems. Un tubo de polimerasa sale $800.

Cmara de ujo laminar Una cmara de ujo laminar es un receptculo en forma generalmente prismtica (forma parecida a la campana para gases) con una nica cara libre (la frontal) que da acceso al interior, donde se localiza la supercie de trabajo. La esterilidad de la zona de trabajo se consigue porque se hace circular a travs del interior de la cmara una corriente de aire que previamente ha sido microltrada para eliminar toda partcula extraa. Para evitar que el aire del exterior pueda entrar en la cmara de ujo sin pasar previamente por los ltros se procura que la presin interior sea ligeramente superior a la presin exterior, con lo cual el aire siempre circula de dentro hacia fuera y nunca al revs. Existen dos tipos de cmaras de ujo laminar segn sea la forma en la que se hace circular el aire: cmaras de ujo horizontal y cmaras de ujo vertical

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