Universidad de Alcal Departamento de Bioqumica y Biologa Molecular Bioqumica. 2 de Farmacia.

Curso 2010/11

Problemas de cintica enzimtica 1.- En un cultivo de bacterias, la velocidad de reaccin de un enzima E fue de
20 g/min para una concentracin de sustrato de 3 mM. Si la concentracin de sustrato es igual o superior a 7 mM, la velocidad no supera los 40 g/min. Al aadir un inhibidor competitivo, la velocidad de la reaccin fue de 20 g/min para una concentracin de sustrato de 8 mM. Calculese la Km, la Vmax y la Ki para este enzima, sabiendo que la concentracin de inhibidor aadido es de 6 mM.

a) Vmax: Si para una [S] 7 mM la velocidad es 40 g/min, la Vmax=40 g/min b) Km: Vmax ser 20 g/min, como esta velocidad se consigue con una [S]
= 3 mM, la Km = 3 mM Otra forma es utilizando la ecuacin de Michaelis:
V= Vmax [S] Km + [S] 40 = 20 x 3 Km + 3

c) Como es un inhibidor competitivo Vmax = Vmax= 40 g/min y Vmax= 20

g/min. Esta velocidad se alcanza con una [S] de 8 mM en presencia de inhibidor, por lo tanto Km= 8 mM. Adems sabemos que Km = Km

Km =

1+

[I] Ki

Km

Por lo tanto Ki = 3,6 mM

2.- Las velocidades iniciales a varias concentraciones de sustrato para una

reaccin catalizada por un enzima hipottico son: [S] (moles/l) 5x10-2 5x10-3 5x10-4 5x10-5 5x10-6 5x10-7 V (moles/min) 0.25 0.25 0.25 0.20 0.071 0.0096

a) Cul es la velocidad mxima para esta reaccin?

b) Por qu la velocidad inicial permanece constante a una [S] mayor de 5x10-4 M c) Cul es la concentracin de enzima libre para una [S] de 5x10-4 M? d) Cul es la Km de la enzima? e) Calcular la velocidad inicial para [S]=1x10-6 y [S]=1x10-1 f) Calcular la concentracin de producto formado en los cinco primeros minutos de reaccin utilizando 10 ml de una disolucin de sustrato 2x10-3 M

a) Vmax = 0.25 mol/min, ya que por encima de [S] de 5x10-4 no aumenta b) Porque todos los enzimas est ocupados transformando un sustrato c) Cero, todos los enzimas ocupados, a esa [S] se da la Vmax d) Empleando la ecuacin de Michaelis, utilizando la velocidad 0.20, 0.070
0.0096 y sus correspondientes [S], como sabemos la Vmax, obtenemos una Km 0 1,25 x 10-5 moles/l

e) Sabiendo la Km y Vmax, aplicamos Michaelis utilizando esas [S] y

obtenemos: [S]=1x10-6 [S]=1x10-1 una V = 0,018 mol/min una V = 0,25 mol/min

f) A [2x10-3] la V = Vmax = 0,25 mol/min

En 5 min 0,25 x 5 = 1,25 mol Tenemos 10 ml de sustrato, luego 1,25 mol / 10-2 l = 1,25 x 102 mol/l

3.- A partir de los siguientes datos de una reaccin enzimtica, determinar de

que manera est actuando el inhibidor. Determinar la Km para el enzima y la Ki para el complejo enzima-inhibidor. Cul es la velocidad mxima? [S] mM 2 3 4 10 15 g producto/h (sin inhibidor) 139 179 213 313 370 g producto/h (6 mM inhibidor) 88 121 149 257 313

Se calculan los inversos de [S], producto sin inhibidor y producto con inhibidor, se representa y = 1/V frente a x = 1/[S] Sin inhibidor: La lnea corta en y = 2x10-3, entonces 1/Vmax = 2x10-3, luego Vmax = 0,5x103 g/h La lnea corta en x = -2x10-1, entonces -1/Km = -2x10-1, luego Km = 5 mM

Con inhibidor: Como es un inhibidor competitivo la Vmax es la misma en presencia y ausencia de inhibidor. La lnea corta en x = -1,1x10-1, entonces -1/Km = -1,1x10-1, luego Km=9 mM La Ki se calcula como en el ejercicio 1 Ki = 7,5 mM

4.- Habindose conseguido aislar de Salmonella tyfpimurium una enzima que cataliza
la reaccin AP, se decidi hacer un estudio estructural y cintico de dicha enzima: [A] mM V(mmol P/ min) V (nmol P/min) con J 1,00 1,00 0,66 0,55 0,71 0,41 0,25 0,50 0,25 0,20 0,41 0,20

donde J es un inhibidor de E cuya influencia como tal se quiere estudiar. [J] = 0,25mM a) Km de la enzima estudiada para A, y Vmax para la transformacin A--P en presencia de E b) Que tipo de inhibidor es J?. Calcula la Ki. c) Cul seria el efecto sobre la Vmax de la enzima, de un aumento de la concentracin de J?

Se calcula siguiendo el mismo procedimiento que el problema 4 a) Vmax = Vmax = 1.66 mmol P/min b) KM = 0.5 mM c) KM = 1.25 mM (con inhibidor) d) Ki = 0.16 nM (Inhibicin Competitiva)

5.- La cintica de una enzima viene determinada como funcin de la concentracin de

sustrato en presencia y ausencia del inhibidor I. [S], Mx10-5 V(mol/min) sin inhibidor V(mol/min) con inhibidor 10 M
-4

0.3 10.4 2.1

0.5 14.5 2.9

1.0 22.5 4.5

3.0 33.8 6.8

9.0 40.5 8.1

a) Calcular la Km y la Vmax en presencia y ausencia de inhibidor b) Que tipo de inhibidor es? Calcular la Ki

Se calcula siguiendo el mismo procedimiento que el problema 4 a) Vmax = 50 mol/min b) Vmax = 9.5 mol/min c) KM = 1.1x10-5 M d) Ki = 2.3x10-5 M (Inh. No Competitiva)