BRUCELLA,BORDETELLA, HAEMOPHILUS

GENUL BORDETELLA

Clasificarea bordetellelor n trei specii:

B. pertussis, B.parapertussis i B.bronchiseptica Habitat:

Bordetellele se izoleaz numai de la animale cu snge cald

Morfologie.

Speciile genului Bordetella sunt: cocobacili foarte mici (0,2-0,5 micro-m diametru i 1 micro-m lungime), gram-negativi. Se coloreaz foarte slab prin metoda Gram i pot fi vizualizai mult mai uor prin coloraia cu albastru de toluidin. Sunt nesporulai. Bordetella pertussis este imobil.

Diagnosticul de laboratorbacteriologic

Recoltarea. -Tehnica "plcilor tuite", const din nsmnarea direct a produsului patologic de la nivelul tractului respirator pe mediul BordetGengou, fr a se utiliza instrumentar de recoltare. Placa se ine la o distan de 30 de centimetri de gura pacientului, iar acesta expectoreaz pe suprafaa mediului. recoltarea exudatului nasofaringian cu ajutorul unui tampon special, confecionat din alginat de calciu sau dacron (vata este toxic pentru germen), nfurat pe o srm subire, flexibil. Tamponul se introduce n nar pn cnd ntmpin rezisten, se menine pe loc 1530 de secunde pentru a se ncrca cu secreie, apoi este retras i introdus n eprubeta protectoare. Se mai pot recolta aspirate bronice sau nasofaringiene. Examenul direct. Aspiratele bronice sau nasofaringiene se preteaz la examinarea direct prin imunofluorescen. Produsele se etaleaz pe lam, se usuc, se fixeaz i se coloreaz cu anticorpi anti-pertussis sau anti-parapertussis marcai cu fluorescein. Chiar dac specificitatea metodei este bun, sensibilitatea las de dorit, fiind n funcie de numrul de germeni de pe preparat. O imunofluorescen negativ nu exclude prezena bordetellei.

Izolarea. Mediile utilizate sunt mediul BordetGengou i agarul cu snge i crbune. Celelalte bordetelle sunt mai puin pretenioase, ele putndu-se izola pe agar-snge sau MacConkey. Mediile nsmntate se incubeaz n atmosfer umed, la 35 C, timp de cel puin 7 zile. Identificarea. Cractere de cultura. Pe mediul BordetGengou, dup 3-6 zile, se dezvolt colonii cu aspect caracteristic. Privite la microscop coloniile tinere sunt convexe, strlucitoare, semnnd cu picturile de mercur iar cele mbtrnite se albesc i au aspect perlat. Caractere biochimice. Diferenierea speciilor are n vedere caracterele metabolice (prezena oxidazei, hidroliza ureei), mobilitate i creterea pe medii uzuale

Sensibilitatea la antibiotice. Antibioticul de

elecie este eritromicina. Antibiograma pentru Bordetella nu a intrat n rutina de laborator.

Semnificaie clinic i patogenitate.

Agentul cauzal al tusei convulsive este Bordetella pertussis.

Bordetella parapertussis produce o form uoar

sau medie de tuse convulsiv.

Bordetella bronchiseptica este patogen pentru

animale iar la om produce ocazional infecii bronho-pulmonare.

Genul Brucella
Germenii din genul Brucella sunt parazii facultativ intracelulari. Genul Brucella include ase specii, patru dintre ele fiind asociate cu boala uman numit bruceloz: B. abortus, B.melitensis, B.suis i B. canis. Habitat. Rezervorul de germeni este reprezentat de animale. Gazdele naturale sunt: vitele (bovinele) pentru B. abortus, caprele i oile pentru B.melitensis, porcinele pentru B.suis i cinii, vulpile i coioii pentru B. canis. Boala uman se produce prin contactul direct uman cu animalele sau produsele animale infectate

Morfologie.
Morfologie. Brucelele sunt bacili de dimensiuni mici (0,5-0,6 m diametru i 1,5 m lungime), gramnegativi, imobili, necapsulai, nesporulai, dispui izolat, n perechi sau lanuri scurte. Formele cocobacilare sunt predominante, dar se pot observa i coci sau bacili lungi pe frotiurile efectuate din culturi tinere

Diagnosticul de laborator- este bacteriologic i serologic.

Diagnosticul bacteriologic nu se practic n laboratoarele obinuite din cauza riscului mare de infecie. Recoltarea. - se recolteaz cteva probe de snge pentru hemocultur, n faza acut a bolii + dou seruri pentru diagnosticul serologic, unul de debut i unul ncepnd cu a 21-a zi de boal. Din abcese, infecii tisulare i osoase se recolteaz produsele corespunztoare. Mai rar este necesar recoltarea LCR, a lichidului pleural, peritoneal sau a urinii. Dei brucelele au rezistena relativ crescut la condiiile de mediu, transportul prelevatelor trebuie s se fac ct mai repede. Dac se impune expedierea la un laborator central n vederea cultivrii, conservarea probelor se va face la frigider. Izolarea. Brucelele sunt germeni pretenioi. Cresc n atmosfer de CO2 i au nevoie de vitamine (tiamin, niacin, biotin) i adaos de ser. Izolarea se practic n laboratoare
speciale, personalul fiind protejat cu echipament adecvat pentru a se evita infecia accidental.

Identificarea. Identificarea preliminar. Din coloniile suspecte se fac frotiuri colorate Gram, care evideniaz un pleomorfism accentuat (cocobacili gram negativi). Coloniile de brucele apar dup 2-3 zile, sunt nehemolitice, au 2-3 mm diametru. Prezena unor colonii nehemolitice, oxidazonegative, strict aerobe ce nu fermenteaz lactoza sau glucoza, ureazo-pozitive, ntr-un context clinic corespunztor pledeaz pentru Brucella. Coloniile se vor testa cu un ser anti-brucella polivalent, n prezena unei tulpini martor. Dac pe lng testele enunate, bacteriile aglutineaz, ele pot fi ncadrate n genul Brucella

Sensibilitatea la antibiotice. Nu este necesar determinarea de rutin a sensibilitii, deoarece brucelele sunt de obicei sensibile la tetraciclin i streptomicin i sunt rezistente la peniciline i cefalosporine.

Diagnosticul serologic. Ca test de rutin se practic reacia de aglutinare n tuburi (procedeul Wright). Dac titrul anticorpilor este peste 1/1.600 se confirm cert diagnosticul de bruceloz. Este necesar determinarea n dinamic a titrului anticorpilor, de aceea testarea se face pe probe perechi de seruri recoltate de la acelai bolnav (prima prob se recolteaz n ziua a 14-a de la debut i a doua n ziua a 21-a). n formele suspecte clinic, dar la care nu s-au izolat i identificat brucele prin metode bacteriologice, un titru mai mic de 1/1.600 este interpretabil. n laboratoarele de sntate public se poate corela testul Wright cu o metod de microaglutinare pe lam ca test screening cantitativ, prin care se pot investiga un numr mare de seruri. Dac prin metoda microaglutinrii se obine un titru egal sau mai mare de 1/80, proba trebuie retestat prin testul de rutin. Profilaxie i tratament. Tratamentul brucelozei este dificil datorit creterii intracelulare a brucelelor. Bruceloza uman poate fi controlat controlnd boala la animale. Pasteurizarea produselor lactate ajut scderea incidenei bolii umane.

GENUL HAEMOPHILUS
DEFINIIE, NCADRARE reunete un grup larg de: cocobacili polimorfi, imobili, nesporulai, Gram negativi, aerobi i facultativ anaerobi i carboxifili

 cresc pe medii cu sange multe specii de Haemophilus au strict nevoie de doi factori de cretere factorul X factorul V FACTORUL X (hemina, feroprotoporfirina) component termostabil, rezist 45 minute la 120oC, este prezent in sange i in derivatele sale cu hemin;

factorul V component termolabil, rezist 15 minute la 90oC eliberat din hematii, este distrus repede de pirofosfataza i ADN-aza prezente in sangele de om, oaie, capr, bovin este alctuit din coenzime din clasa dehidrogenazelor prezente in globulele roii, esuturile animale i vegetale majoritatea bacteriilor (stafilococ, enterococ, E.coli, levuri etc.). In componena sa intr: fie nicotinamid adenin - dinucleotid (NAD) sau diphosphonucleotid (DPN) sau coenzima I; fie nicotinamid adenin dinucleotid - phosphat (NADP) sau triphosphonucleotid (TPN) sau coenzima II

 Specia care necesit pentru cretere numai factorul V primete la denumire prefixul para (H.parainfluenzae). Mediile geloza chocolat; geloza Fildes; geloza Levinthal; Haemophilus Test Medium (HTM) etc.

H.influenzae pe mediu bazal cu X,V i XV discuri. 5%CO2, 37 C, 24 ore. Acestea au crescut numai in jurul discului XV.

 H. parainfluenzae pe mediu bazal cu X,V i XV discuri.

Aceste specii necesit doar factorul V pentru cretere

 Unele bacterii cum este Staphylococcus aureus produc o cantitate mare de NAD Se poate obine o cultur de Haemophilus pe geloza sange (care furnizeaz factorul X) de-a lungul unui striu de cultur de S.aureus care furnizeaz factor V. Acest fenomen se numete satelitism.

Satelitism cu Staphylococcus sp. pe G-sg. H. influenzae a fost trasat lang o dung trasat cu stafilococi Coloniile de H. influenzae sunt mai mari in apropierea stafilococilor,datorit difuziei factorului V de la acetia.

inhibarea microorganismelor de contaminare mediile pot fi suplimentate cu substane antibiotice: - bacitracin, - vancomicin, - lincomicin, - oxacilin etc. Din punct de vedere medical - importante speciile pe care omul le adpostete in patru ecosisteme: faringe, cavitatea bucal, placa dentar sporadic intestinul aparatul uro-genital

 Haemophilus influenzae specia cel mai frecvent implicat in infecii umane in special la copii Celelalte specii izolate de la om sunt comensale oportuniste pot fi implicate ocazional in infecii din sfera oto-rino-laringian la pacieni imunodeprimai in septicemie in endocardit

Haemophilus aegyptius, H.ducreyi, H.haemolyticus, H.parainfluenzae, H.aphrophilus, H.parahaemolyticus, H.paraphrophilus, H.segnis, H.paraphrohaemolyticus

Haemophilus ducreyi i Haemophilus aegyptius patogeni ai mucoaselor genito-urinar conjunctival nu au fost izolai de la persoane sntoase Haemophilus nu se gsete liber in natur

BACILI GRAM POZITIVI

GENUL CORYNEBACTERIUM GENUL LISTERIA

Genul Corynebacterium DEFINITIE SI INCADRARE

bacili mici, gram-pozitivi, usor ncurbai form de mciuc aezati sub form de - litere - palisade nesporulati necapsulai, imobili aerobi i facultativ anaerobi. n genul Corynebacterium se distinge grupul

coryne = mciuc bakterion = baston mic

Corynebacterium diphtheriae specia cea mai importantCorynebacterium diphtheriae (bacilul difteric) C. ulcerans, C. pseudotuberculosis.

HABITAT

Habitatul este strict uman

Corynebacterium diphtheriae - prezent

n: tractul respirator superior uman la 3-5% din persoanele sntoase la nivel tegumentar.

CARACTERE MORFOTINCTORIALE

bacil gram pozitiv nesporulat necapsulat imobil form de mciuc dispui sub form de grmezi asemntoare : cu palisada, cu pachete de ace cu gmlie, cu literele alfabetului latin (V, L) cu literele chinezesti. Coloraia Neisser evideniaz - Granulaii metacromatice n interiorul corpului bacterian (granulaii Babe-Ernst). Aspectele morfologice - caracteristice permit diferenierea de corynebacteriile comensale (bacili difteroizi) mai scuri i mai groi.

Gram stain of Corynebacterium

C.diphtheriae Coloraia Neisser

CARACTERE DE CULTURA
Mediul Loeffler cu ser coagulat este mediul clasic utilizat pentru izolarea C.

diphtheriae.

Coloniile
se dezvolt n 8-12-18 ore sunt colonii R alb-glbui, lucioase, bombate

Mediu de mbogire - OCST (ou-cistein-ser-telurit) Medii selective Mediul Gundel-Tietz (geloz, snge, cistin si telurit) crete sub form de colonii negre datorit reducerii teluritului la telur metalic Mediul Tinsdale (agar, ser, cistin, telurit, tiosulfat) producerea de H2S imprim o culoare brun mediului din jurul coloniei negre de diphtheriae

Dup aspectul coloniilor - 3 tipuri de C. diphtheriae, cu grade diferite de patogenitate:

tipul gravis

colonii nehemolitice, mari, cu suprafa granular, gri-negre n "margaret cu margini crenelate (colonii R)

tipul mitis
colonii hemolitice, convexe, cu margini circulare, negre de tip S

tipul intermedius
colonii nehemolitice, mici, cu margini circulare, negre, cu suprafata granular S-R

Corynebacterium colonies on blood agar.

CARACTERE BIOCHIMICE SI METABOLICE

catalaz pozitiv ureaz negativ. descompune glucoza, dextrina nu descompune zaharoza reduce nitraii, descompune cistina cu eliberare de H2S produce bacteriocine.

STRUCTURA ANTIGENICA
posed antigene O polizaharidice - comune tuturor tulpinilor antigene proteice de suprafa K -cu specificitate de tip. C. diphtheriae produce bacteriocine -permit tiparea tulpinilor Cea mai important structur antigenic - toxina difteric -identic la toi bacilii difterici toxigeni

CARACTERE DE PATOGENITATE

Bacilul difteric poate fi patogen prin: - multiplicare la poarta de intrare -Toxinogenez Toxina difteric este aceeasi pentru toate tulpinile productoare exotoxin de natur proteic blocheaz sinteza proteinelor celulare o testul Elek reacie de precipitare n gel se toarn geloz peste o hrtie de filtru impregnat n ser antidifteric se insmneaz n striuri tulpinile de cercetat dac o tulpin produce exotoxin difteric (Ag) aceasta este eliberat n mediu i apare o band de precipitare o testul Ramon reacie de floculare prin care se dozeaz putere toxic a toxinei

BOALA LA OM
Boala este specific omului difterie - se manifest prin leziuni locale datorate colonizrii tesuturilor prin leziuni generale, la distant datorate actiunii exotoxinei Poarta de intrare a bacilului difteric - tractul respirator (faringe, nas) -leziuni tegumentare - mai rar, de mucoasa genital Toxina elaborat local induce apariia unei structuri - falsa membran

La adpostul falsei membrane bacilul continu multiplicarea i sinteza de toxin -toxina difuzeaz pe cale sanguin conduce la aparitia unor tulburri la distant: tulburri de ritm cardiac miocardit dificultti vizuale, de vorbire, de nghitire, etc

DIAGNOSTICUL INDIRECT
IDR Shick IDR de neutralizare o se injecteaz strict intradermic 1 unitate de toxin dac organismul nu are anticorpi toxina i exercit efectul eritematos i la locul inoculrii apare un eritem organism receptiv. dac organismul are anticorpi acetia vor neutraliza toxina deci nu apar modificri la locul inoculrii organism imun - Reacii de hemaglutinare pasiv determinare cantitativ a antitoxinelor

Tratament
Decizia administrrii de ser antidifteric trebuie luat urgent pentru c antitoxina neutralizeaz numai toxina difteric circulant seroterapia este cu att mai eficace cu ct este utilizat mai precoce Antibioticele sunt indicate -poate aprea o ameliorare local -contagiozitatea scade

Genul Listeria

In acest gen sunt cuprinse 6 specii de bacterii dintre care numai o specie Listeria monocytogenes este patogena pentru om.

Diagnostic de laborator
Prelevate :LCR,sange,urina,avorton. Caractere morfotinctoriale:bacili scurti,forme cocobacilare,gram poz, flageli subterminali 2-4 vizibili daca sunt incubati la 18-22C Nu are capsula ,fara spori

Caractere de cultura
O bacterie nepretentioasa,creste pe medii obisnuite,la temp de 20-37C Aerob,facult anaerob Dupa 24 ore la 37 C coloniile apar de 1-2 mm de dimens de 0,2-0,4mm, Colonii translucide ,de tip S cu un pigment bleu-verde,cu posibila hemoliza beta difuza

Caractere biochimice
Catalaza pozitiv ,oxidaza negativ Glucoza pozitiv Este foarte rezistenta la conditiile de mediu Rezista la actiunea unor dezinfectante ca:formolul timp de 20 min.

Patogenie
Patrunde in organism pe cale digestiva, Are capacitatea sa strabata 3 bariere din corpul uman :intestinala, hematoencefalica,fetoplacentara Prezinta un tropism accentuat pentru placenta si SNC Sunt 2 forme de listerioze:la gravide si nou-nascuti,la adulti.

Tratament
Cel mai des folosit este penicilina si ampicilina cu un aminoglicozid Se mai poate folosii si eritromocina ,cloramfenicolul