Universidad Nacional Mayor De San Marcos Universidad del Per, Decana de Amrica FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA E.A.P.

DE FARMACIA Y BIOQUMICA Departamento Acadmico de Qumica Bsica y Aplicada

D4VI INFORME 6 RECONOCIMIENTO Y ANLISIS DE KETAMINA

MESA 4
CALIXTO FLORES, David. ESPINOZA MINAYA, Mara Isabel. ROMERO BUSTINZA, Isabel. SENZ HOLGUN, Vanessa.

QUIMICA MEDICINAL

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RECONOCIMIENTO Y ANLISIS DE KETAMINA

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INTRODUCCIN

La Ketamina, es un derivado de la Fenciclidina o comnmente llamado PCP, y fue el primer frmaco usado con una finalidad anestsica, pero la manifestacin frecuente de alucinaciones desagradables y problemas psicolgicos hizo que se abandonara muy pronto. La Ketamina como anestsico general de accin ultracorta, fue aprobada para uso en humanos en el ao 1965 y para animales en 1970. En la actualidad en Chile es usado en el uso de la medicina veterinaria. En el ao 1999, se estableci que existan en nuestro pas productos farmacuticos veterinarios que contenan ketamina, como ya sabemos, un anestsico disociativo de uso en medicina humana y veterinaria, que dentro de sus efectos produce analgesia, prdida de conocimiento, amnesia, aumento de la presin sangunea, frecuencia cardaca, delirio y alucinaciones. Segn el Servicio Agrcola y Ganadero, y en virtud a los efectos peligrosos de esta droga, exista el riesgo de una venta indiscriminada de productos farmacuticos que contienen ketamina, y por ende grave dao a la salud, para lo cual segn Decreto Nro. 2464 del 13.AGO.1999, del Servicio Agrcola y Ganadero, se estableci una condicin de venta de receta retenida para productos farmacuticos de uso veterinario que contenan Ketamina y para los establecimientos fabricantes, importadores y distribuidores se estableci que deberan tener a disposicin del servicio un consolidado de las cantidades importadas, fabricadas o adquiridas de cada producto y de los lugares y cantidades distribudas.

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2. MARCO TERICO La ketamina es un antagonista del receptor NMDA no competitivo. La Ketamina es un agente anestsico no voltil que se introdujo potente agente hipntico y analgsico y produce un estado de inconsciencia llamado anestesia disociativa, la cual se caracteriza por un estado de inmovilidad catalptica de las extremidades, acompaado de una profunda analgesia somtica, de prdida de la capacidad de responder a los estmulos fsicos dolorosos y de amnesia.

SINONIMIA: Cetamina, Quetamina NOMBRE DCI: Ketamina. NOMBRES COMERCIALES: Ketalin, Ketalar, Ketina, Ketamin, Ketolar, Imalgene, Ketavet, Ketanarkon, Ketanest, Vetalar.

ESTRUCTURA QUMICA:

Estructura molecular de la KETAMINA NOMBRE QUIMICO: Hidrocloruro de (RS)-2-(2-clorofenil)-2-(metilamino) ciclohexanona. FRMULA MOLECULAR: C13H17Cl2NO PESO MOLECULAR : Mr 274,2 PUNTO DE FUSION: Aproximadamente 260 C, con descomposicin. SOLUBILIDAD: Fcilmente soluble en agua y en metanol, soluble en alcohol.

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RELACIN DE ESTRUCTURA QUMICA Y PROPIEDADES:

La ketamina es una mezcla racmica de los ismeros R(-) ketamina y S(+) ketamina. El segundo es cuatroo veces ms potente como analgsico y su depuracin es 35% mayor, pero los volmenes de distribucin son similares. El principal metabolito es la norketamina, que tiene una potencia analgsica cercana a la ketamina R(-) y puede contribuir significativamente a la analgesia cuando la ketamina se administra por va oral , y por lo tanto, es sometida a un alto grado de metabolismo de primer paso. La S(+)ketamina es cuatro veces ms potente que el R(-)-enantimero y posee ventajas clnicas significativas, tiene mayor eficacia y menor nmero de efectos adversos que la mezcla racmica. Han sido reportadas diferencias farmacocinticas y farmacodinmicas en las propiedadeas de ambos. La S(+)ketamina es un antagonista no competitivo del receptor Nmetil-D-aspartato (NMDA) y representa el enantimetro levgiro de la ketamina racmica. El S(+)-enantimero se une al receptor NMDA con mayor avidez que el R(-)-enantimero produciendo un efecto hipntico ms potente. Posee un mayor ndice teraputico comparado con la mezcla racmica o el R(-)-enntimero en dosis hipnticas equipotentes. En anestesia neuroquirrgica, el rol de la ketamina debe ser reevaluado, ya que varios experimentos indican que dicha droga brinda proteccin neuronal, habindose demostrado que la S(+)-ketamina reduce el dao histopatolgico, y el dficit neurolgico luego de una isquemia cerebral incompleta. Tambin protege del dao de la injuria por reperfusin a nivel cardaco al evitar la adhesin de los neutrfilos polimorfonucleares al endotelio. En sntesis, las potenciales ventajas de usar enantimeros puros con respecto a la mezcla racmica incluyen un perfil farmacodinmico menos complejo y ms selectivo, un mayor ndice teraputico, farmacocintica ms simple e interacciones menos complejas con otras drogas. La S(+)-ketamina est disponible en algunos pases de Europa hace varios aos.

El distmero puede causar efectos indeseables que no presenta el eutmero.

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OBTENCIN Y SNTESIS:

3. OBJETIVOS GENERALES
Determinar la concentracin y naturaleza de la ketamina. Comprobar si la muestra cumple con las especificaciones de la Farmacopea Americana. Reconocer los procedimientos de los anlisis cualitativos mediante reacciones de identificacin necesarios para controlar el buen estado de la muestra. Reconocer los procedimientos de los anlisis cuantitativos necesarios para controlar el buen estado de la muestra.

4. MATERIALES
Reactivos: Solucin inyectable de ketamina. Estndar de ketamina. Revelador de vapores de yodo. Agua. Alcohol. cido actico. Reactivo de Dragendorff. Reactivo de nitrato de plata 1%. cido perclrico (HClO4). -naftol bencena. Material de laboratorio: Bureta Matraz Tubos de ensayo Microscopio Capilares Portaobjetos Cromatofolio Cuba cromatogrfica Mortero y piln.

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5. DISEO DE ANLISIS
Nombre DCI: Estructura Qumica: Ketamina

Nombre Qumico: Hidrocloruro de (RS)-2-(2-clorofenil)-2 (metilamino)ciclohexanona.

Peso molecular:
274,2

Descripcin y Solubilidad: Fcilmente soluble en agua y en metanol, soluble en alcohol.

Relacin entre estructura y propiedades: Accin anestsica. accin antagnica competitiva. Derivado de la ciclohexilamina.

Tiene una

Pureza cromatogrfica establecida: La mancha principal del cromatograma obtenido con la disolucin problema es similar en posicin, color y tamao a la mancha principal del cromatograma obtenido con la disolucin de referencia.

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OLOR

ANLSIS ORGANOLPTICO
COLOR SABOR

ASPECTO

SOLUBILIDAD Y OBSERVACIN MICROSCPICA

DISEO DE ANLISIS

ENSAYO CROMATOGRFICO
REACCIN DE DRAGENDORFF

ANLISIS
CUALITATIVO

REACCIN DE MAYER

REACCIN DE Nitrato de plata 1%

ANLISI S VOLUMTRICO

ANLISIS CUANTITATIVO

I.R HPLC ESPECTROFOTOMETRA

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6. PROTOCOLO DE ANLISIS N6
ANESTSICOS

D4 - VI

Sustancia a analizar: Forma Farmacutica: Concentracin: N de lote: Fecha de vencimiento: Fecha de Anlisis: Analistas Responsables:

Ketamina Solucin Inyectable 10 mg/mL 1010021 Enero del 2016 10/06/2011

Calixto Flores, Vctor David Espinoza Minaya, Mara Isabel Romero Bustinza, Isabel Senz Holgun, Vanessa

Aspecto de la ampolla: Aspecto de la solucin: Color: Olor: Transparente Inodoro

Blster en buen estado

Anlisis Organolptico (ampolla) Olor: Color: Inodoro Blanco

Solubilidad:

Fcilmente soluble en agua y en metanol. Soluble en alcohol, moderadamente soluble en cloroformo.

Observacin microscpica:

Cristales alargados

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Ensayo cromatogrfico Soporte Silicagel Sistema de solventes Metanol: Agua Proporcin 20:1 Revelador Vapores de yodo

Rf:

0,5882

Anlisis Cualitativo Reacciones Reaccin de Dragendorf Reaccin de Mayer Reaccin con Nitrato de plata 1 % Resultado (+) (+) (+) Caractersticas Precipitado anaranjado Precipitado blanco Precipitado marrn

Anlisis Cuantitativo Mtodo: Valoracin de bases en medio no acuoso Solucin valorante HClO4 0,104 N Indicados naftol bencena Solvente cido Actico

Resultados:

Porcentaje de principio activo por tableta: 119.76%

Conclusin: La muestra de Ketamina en solucin inyectable no cumple con las especificaciones de la Farmacopea Espaola 32, por tanto no se aprueba.

Analista: Vanessa Senz Holgun

Analista: Mara Isabel Espinoza M.

Analista: Isabel Romero Bustinza

Analista: David Calixto Flores

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7. RESULTADOS 7.1 ANLISIS ORGANOLEPTICO

Solucin inyectable Olor: Inodoro Color: Transparente Aspecto: Lquido

7.2 ANLISIS MICROSCPICO

Se procedi a la disolver la tableta en agua, luego se realiz un filtrado con la finalidad de separar las partculas groseras de los cristales en solucin. Se deposit el filtrado en un portaobjetos y se procedi a secar. Una vez evaporada toda el agua se coloc una lmina cubreobjetos y se llev la muestra para su observacin en el microscopio. Se observaron cristales alargados.

7.3 SOLUBILIDAD
Soluble en agua, Soluble en metanol Soluble en etanol. Moderadamente soluble en cloroformo.

7.4 ANLISIS CROMATOGRFICO

Soporte: Silicagel Sistema de Solventes: Metanol: Agua(20:1) Revelador: vapores de yodo.

Se hicieron dos siembras de la muestra problema en la placa de silicagel porque no se cont con un estndar. Luego de aplicado el revelador, las medidas obtenidas de la placa se detallan: La corrida del solvente se dio en una distancia de 4.0 cm. La corrida de las muestras fueron en una longitud promedio de 3.28 cm. Con lo que se obtiene un Rf de 0.82.

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Segn la Real Farmacopa Espaola 3ra Edicin: Cromatografa en capa fina Comparacin: Ketamina SQR Para el ensayo cromatogrfico se recurri a la Farmacopea, con la que se plante el uso de:

Disolucin problema. Disolver 50,0 mg de la sustancia a examinar en la fase mvil y diluir hasta 50,0 ml con la fase mvil. Disolucin de referencia (a). Disolver 25,0 mg de la impureza A de ketamina SQR en la fase mvil y diluir hasta 50,0 ml con la fase mvil (utilizar ultrasonidos, si es necesario). Aadir 0,5 ml de la disolucin problema a 1,0 ml de esta disolucin y diluir hasta 100,0 ml con la fase mvil. Preparar inmediatamente antes de su uso. Disolucin de referencia (b). Diluir 1,0 ml de la disolucin problema hasta 10,0 ml con la fase mvil. Diluir 1,0 ml de esta disolucin hasta 20,0 ml con la fase mvil.

Precolumna: tamao: l = 4 mm, = 4,0 mm , fase estacionaria: gel de slice octadecilsililada para cromatografa R esfrico (5 m), Columna: tamao: l = 0,125 m, = 4,0 mm, fase estacionaria: gel de slice octadecilsililada para cromatografa R esfrico (5 m), Fase mvil: disolver 0,95 g hexanosulfonato de sodio R en 1 litro de una mezcla de 25 volmenes de acetonitrilo R y 75 volmenes de agua R y aadir 4 ml de cido actico R. Caudal: 1,0 ml/min. Deteccin: espectrofotmetro a 215 nm. Inyeccin: 20 l.

Tiempo de recorrido: 10 veces el tiempo de retencin de la ketamina. Idoneidad del sistema: disolucin de referencia (a): tiempo de retencin: ketamina = de 3 min a 4,5 min, resolucin: como mnimo 1,5 entre los picos correspondientes a la impureza A y a la ketamina. Lmites: totales: como mximo el rea del pico principal del cromatograma obtenido con la disolucin de referencia (b) (0,5 por ciento), lmite de exclusin: 0,2 veces el rea del pico principal del cromatograma obtenido con la disolucin de referencia (b) (0,1 por ciento).

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7.5 ANLISIS CUALITATIVO

FUNDAMENTO Reactivo de Dragendorff Comprende dos soluciones: Solucin a: 0.85 g de subnitrato de bismuto disueltos en una mezcla de 10 ml de cido actico y 40 ml de agua. Solucin b: 8 g de yoduro de potasio disueltos en 20 ml de agua. Se mezclan 5 ml de solucin a con 5 ml de solucin b y 20 ml de cido actico para luego completar a 100 ml con agua.

Precipitado naranja

Reactivo de Mayer Se prepara disolviendo 1.3 g de bicloruro de mercurio en 60 ml de agua y 5 g de yoduro de potasio y se afora a 100 ml. Los alcaloides se detectan como un precipitado blanco o de color crema soluble en cido actico y etanol.

Precipitado blanco

Precipitado blanco

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Estos dos reactivos reconocen la presencia de nitrgenos terciarios. En el anlisis cuantitativo se obtuvo los siguientes resultados: Prueba con el Reactivo de Dragendorff: Evidencia un cambio de coloracin, precipitado anaranjado. Prueba con el Reactivo de Mayer: Se evidencia un cambio de coloracin y precipitado blanco.

Reaccin con Nitrato de Plata 1%

AgNO3 (ac) +

HNO3 (ac) +
2

Ag (s)

Prueba con Nitrato de plata: Se observ un precipitado blanco

7.6 ANLISIS CUANTITATIVO

Valoracin de Ketamina en medio no acuoso Para el anlisis cuantitativo se utiliz volumetra de bases en medio no acuoso, para lo que se procede a estandarizar el cido perclrico tomando como patrn primario al biftalato de potasio, donde se obtuvo una normalidad de 0.1 N.

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Luego se procede a titular la ketamina, se agrega cido actico y disolver; aadir 5 gotas de Naftol bencena (indicador) y proceder a titular con el cido perclrico previamente estandarizado, la solucin cambiar de un color rojo a uno verde. Debido a ser una titulacin en medio no acuoso se utiliz como valorante el cido perclrico, este mtodo se basa en el nitrgeno amnico ; en la titulacin se puede observar las siguientes reacciones:

HClO4 + CH3COOH

CH3COOH2+ + ClO4 -

CH3COO- + CH3COOH2+

2 CH3COOH

Por consiguiente el gasto obtenido del cido perclrico es igual a la cantidad de hidrocloruro de ketamina que hay en la muestra problema.

Tcnica Operatoria

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Muestra Problema Solucin inyectable de ketamina Valorante: cido perclrico 0.104 N

M.P: Ketamina Hidrocloruro Masa = 274.2 Peso equivalente = 274.2

Gasto = 2.3 mL. mg = N x mL x PEq

mg = 0.104 * 2.3 * 274.2 mg = 65.5886 Este ltimo, 65.58es el contenido de Ketamina en la muestra problema: 65.5886 mg m 0.547 ml 1 ml

m: 119.76 es el contenido de Ketamina Hidrocloruro en la ampolla. Por otro lado se tiene que: 100 mg 119.76 mg 100% X %

X: 119.76 % es el porcentaje de principio activo por ampolla

Como se puede apreciar la cantidad de 119.76 % de principio activo por ampolla no cumple con los requerimientos de la farmacopea USP 30 que seala que el valor debe variar entre el 95 % y el 105 %.

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7.7 ESPECTROFOTOMETRA DE ABSORCON EN LA LUZ UV-VISIBLE

RESULTADOS Se realiz el anlisis espectrofotomtrico UV a la ampolla de Ketamina, con lo que se obtuvieron las siguientes medidas de los picos:

MP

ESTANDAR

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Pico

Muestra Longitud de onda Absorbancia

Estndar Longitud de onda 204 nm Absorbancia

202 nm

3.155 A

3.069 A

2 3
4 5

270 nm 276 nm
352 nm 470 nm

0.286 A 0.289 A
0.104 A 0.068 A

268 nm 276 nm
338 nm 354 nm

0.279 A 0.259 A
0.112 A 0.104 A

DISCUSIN Como se detallan en ellas, la muestra de la ampolla (KETAMINA 2.dsp MP) present 5 picos, al igual que en el estndar (KETAMINA 2.dsp ESTANDAR), de los que se observa gran similitud en las medidas de las absorbancias y las longitudes de onda, lo que se refleja en el parecido de las grficas. CONCLUSIN Segn Farmacopea, el reconocimiento del espectro de absorcin de la Ketamina se mide en la regin entre 250nm y 350nm, con lo que se comprueba por medio de los picos 2 y 3 la presencia de Ketamina en la ampolla debido a la similitud de las longitudes de onda y las aborbancias respectivas.

7.8 ESPECTROFOTOMETRA DE ABSORCON EN EL INFRARROJO (IR)

MOLCULA: Ketamina clorhidrato

Absorcin infrarroja (340) - En fase slida. No secar las muestras.

El espectro de absorcin ultravioleta de una solucin 1 en 3000 en cido clorhdrico 0,1 N presenta mximos y mnimos a las mismas longitudes de onda que una solucin similar de Clorhidrato de Ketamina SR-FNA medida en sucesin inmediata, y las absortividades respectivas, a las longitudes de onda de mxima absorcin, aproximadamente 269 y 276 nm, no difieren en ms de 3,0%. El espectro de absorcin ultravioleta de una solucin 1 en 1250 en hidrxido de sodio 0,01 N, en una mezcla de agua y metanol (1 en 20), presenta mximos y mnimos a las mismas longitudes de onda que una solucin similar de Clorhidrato de Ketamina SR-FNA medida en sucesin inmediata, y las absortividades respectivas, a la longitud de onda de mxima absorcin, aproximadamente 302 nm, no difieren en ms de 3,0%.

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CONCENTRACIN: 20 mg / 100 ml OBSERVACIONES La frecuencia de 1600 cm-1 corresponde a la tensin de C=C aromtico La frecuencia de 1710 cm-1 corresponde a la tensin de C=O (grupo cetona del anillo) La frecuencia de 2800 cm-1 3000 cm-1 corresponde a la tensin de C-H del anillo carbonado La frecuencia de 3300 cm-1 corresponde a la tensin de N-H (grupo amina)

N-H 3300

C-H 3000

C=O 1710 C=C 1600

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7.9 HPLC
Procedimiento

Se acondiciona la columna con el pasaje de 1 mL de metanol seguido de 1 mL de agua.

Se hace pasar luego 2 mL de suero seguido de 1 mL de agua hasta sequedad.

Seguidamente, se aade a la columna 1 mL de metanol y se recupera el eluato en un tubo de ensayo.

Se seca el eluato bajo corriente de nitrgeno y se reconstituye en 0,5 mL de fase mvil.

Condiciones Cromatografcas Fase Mvil: Metanol: Agua (50:50 v/v) Flujo: 1,00 mL/min Volumen de inyeccin: 20 microlitros Columna: C-18 (12,5 cm x 4,6 mm D.I.) Temperatura: ambiente Deteccin: UV - 210 nm Rango de absorbancia: 0,010 aufs Cromatograma HPLC

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9. BIBLIOGRAFA

The

United States Pharmacopeial Convention. Farmacopea de los Estados Unidos de Amrica USP 30 NF 25. Baltimore: Port City Press; 2006. Flores, Jess. Frmacos antiepilpticos y anticonvulsivos. Farmacologa Humana. 3ra ed. Barcelona: Masson, S.A.; 1997. p. 489-511. R.S. Vardanyan, V.J. Hruby. Synthesis of Essential Drugs. Elsevier; 2006. p. 151-152. Remington. Anestsicos Generales. Remington Farmacia. 17va ed. Buenos Aires: Editorial Mdica Panamericana S.A.; 1987. p. 1418-1427. L. G. Wade, Jr. Espectroscopa de infrarrojo y espectrometra de masas. Qumica Orgnica. 5ta ed. Madrid: Pearson Prentice Hall; 2004. p. 490-519.