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SNTESIS DE PROTENAS Iniciacin.

Complejo de iniciacin 30S
f-Met

AUG ARNm

f-Met

3 AUG 1 ARNm 2 3 3 1 2

1 Factor de iniciacin 1 f-Met 2 3 Factor de iniciacin 2 Factor de iniciacin 3 GTP ARNm 2 AUG

Complejo de iniciacin 70S

f-Met

AUG ARNm

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SNTESIS DE PROTENAS Elongacin.

TS

TU

TS

TU

TU TU

TS

Sitio P Sitio A

ARNm

ARNm

Translocacin Transferencia del peptidilo FE-G

ARNm TS Factor termoestable TU Factor termosensible FE-G Factor de elongacin G GTP

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Diferencias en la sntesis de protenas entre procariotas y eucariotas. Componentes que intervienen Tamao de los ribosomas Composicin de los ribosomas ARN ribosmicos Aminoacil-ARNt iniciador Factores de iniciacin Factores de elongacin En eucariotas 80 S Protenas ARN 60% 40% En procariotas 70 S Protenas ARN 40% 60%

5 S, 29 S, 18 S* 5 S, 25 S, 16 S** met-ARNti IF1, IF2, IF3, IF4 EF-1, EF-1, EF2; EF3 (en levaduras)

5 S, 23 S, 16 S F-met-ARNti IF1, IF2, IF3 EF-Tu, EF-Ts, EFG

(*) animales; (**) vegetales.

Especificidad de los antibiticos que inhiben la sntesis de protenas. Antibitico Estreptomicina Tetraciclinas Eritromicina Cloranfenicol Ribosomas 70 S 70 S y 80 S 70 S 70 S Subunidad 30 S 30 S y 40 S 50 S 50 S

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Efecto de un antibitico que inhibe la sntesis de protenas sobre la incorporacin de precursores de peptidoglucano, ARN, ADN y protenas. Tomar muestras a distintos tiempos Centrifugar Cultivo + *trp Cultivo + *trp Tomar muestras a distintos tiempos Centrifugar Cultivo + *trp Cultivo + *trp + antibitico

Medir la radiactividad en el precipitado (clulas).

Antibitico

Medir la radiactividad en el precipitado (clulas).

Radiactividad incorporada. (Pared).

Radiactividad incorporada. (ARN).

tiempo Radiactividad incorporada. (ADN). Radiactividad incorporada. (Protenas).

tiempo

tiempo

tiempo

Lnea de trazos: cultivo al que se le aade el antibitico (flecha). Lnea continua: cultivo sin antibitico.

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MODO DE ACCIN DE LA ESTREPTOMICINA.

1) Extracto libre de clulas SmS Extracto libre de clulas SmS ARNm poliU Sm Sm No snt. de protenas Polipptido sin phe con ile,lys, ser,tyr Errores Snt. de protenas Poliphe

2) Extracto libre de clulas SmR Extracto libre de clulas SmR ARNm poliU Sm Sm

Estreptomicina: Impide la lectura o provoca errores de lectura 3) Sobrenadante SmS Sobrenadante SmR Sobrenadante SmS Sobrenadante SmR ARNm ARNm ARNm ARNm Sm Sm Sm Sm No snt. de protenas No snt. de protenas Snt. de protenas Snt. de protenas

Estreptomicina: Acta sobre los ribosomas 4) Sobrenadante SmS Sobrenadante SmS ARNm ARNm Sm Sm Snt. de protenas No snt. de protenas

Estreptomicina: Acta sobre la subunidad 30S Unin a la subunidad 30S Al ARNr 16S La protena S12 facilita la unin Distorsin del sitio A Impide la colocacin correcta del aa-ARNt

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Genotipo estreptomicina dependiente (SmD) Crecimiento - Sm + Sm + + + +

Cultivo Bacteria SmS Bacteria SmR Bacteria SmD

f-Met

Lectura Estreptomicina
AUG

f-Met

No lectura
ARNm

ARNm

Ribosoma SmS. Lectura

f-Met f-Met

Estreptomicina
AUG ARNm ARNm AUG

Lectura

Ribosoma SmR.

f-Met

No lectura Estreptomicina

f-Met

Lectura
AUG ARNm

ARNm

Ribosoma SmD.

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NH NH H2N C H2N HO HN O CHO H3C OH HO H2C HO OH O NH CH3 O O C NH OH OH

Estreptomicina

H3C R2 H3C OH H C R1 N H B

CH3 H OH

A CO O NH2

OH OH O OH

Tetraciclina Clortetraciclina Oxitetraciclina

R1 = R2 = H R1 = H, R2 = Cl R1 = OH, R2 = H

Tetraciclinas

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CH3 O H3C HO H3C HO H2C H3C O CH3 O O OCH3 OH CH3 O CH3 OH CH3 O O OH CH3 CH3

N(CH3)2

Eritromicina A

OH O2N CH

NH CH

CO CH2

CHCl2 OH

Cloranfenicol

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Principales antibiticos que inhiben la sntesis de protenas. Antibitico Estreptomicina Naturaleza qumica Aminoglucsido (con estreptidina) Cuatro anillos condensados linealmente Diana Bases especficas del ARNr 16 S Ribosomas 70 S y 80 S (se unen reversiblemente al ARNr) Se une directamente a una regin especfica del ARN 23 S Acta sobre la 50 S: se une al ARN 23 S Factores extrarribosmicos Modo de accin Bloquea la iniciacin Impiden la acomodacin de los aminoacil-ARNt Bloquea la translocacin. Utilidad clnica Mucha, Pero puede producir sordera. Mucha (permeabilidad selectiva)

Tetraciclinas

Eritromicina

Macrlido

Mucha (Streptococcus, Neisseria, clamidias, Bordetella) Cada vez menos (puede producir aplasia medular) Tiene (permeabilidad selectiva)

Cloranfenicol

Estructura tan sencilla que se obtiene por sntesis

Inhibe la accin de la peptidil transferasa "Congela" el factor EF-G. In vitro, tambin el EF-2.

Otros

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Mecanismos bioqumicos de resistencia frente a antibiticos producidos por otros microorganismos (antibiticos algenos) 1. Transformacin del antibitico en una forma inactiva 2. Modificacin de la permeabilidad de la clula microbiana. Ej.: estirpes resistentes a tetraciclinas, fosfomicinas (modificacin de transportasas) y a lactmicos (alteracin de las porinas). 3. Modificacin de la "diana" celular del antibitico: PBPs (-lactmicos), subunidad la ARN polimerasa (rifampicinas), ARNr 23 S (cloranfenicol), S12 y/o ARNr 16 S (estreptomicina). 4. Superproduccin de la "diana". Ej.: D-alanina racemasa, D-alanil-D-alanina sintetasa (D-cicloserina).

Principales enzimas inactivantes de los antibiticos

-lactamasas. Son peptidasas que abren el anillo -lactmico de las penicilinas

y de las cefalosporinas. Las -lactamasas producidas por las estirpes resistentes no son todas idnticas. Por ejemplo la -lactamasa estafiloccica hidroliza las penicilinas pero no es activa contra las cefalosporinas; en cambio, la de Escherichia coli inactiva ambas clases de antibiticos. Acetil-transferasas. Inactivan los antibiticos transfiriendo un grupo acetilo desde un donador (como la Acetil-CoA) a un grupo funcional del antibitico. Un ejemplo es la conversin del cloranfenicol en acetil- o diacetilcloranfenicol. Fosforil-transferasas. Ligan covalentemente un grupo fosfato al antibitico. Los aminoglucsidos pueden sufrir esta modificacin. Adenil-transferasas. Inactivan el antibitico transfirindole un grupo adenilo. Muchos aminoglucsidos se inactivan de este modo.

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Resistencia frente a los propios antibiticos (antibiticos autgenos): Mecanismos bioqumicos de autoproteccin 0. Algunos productores no necesitan protegerse porque carecen de la diana. Por ejemplo: Penicillium, Cephalosporium y otros hongos productores de antibiticos -lactmicos son insensibles a stos, porque en su pared celular no hay murena. 1. Represin de la sntesis durante la trofofase. Este es el caso ms frecuente, ya que los antibiticos suelen ser metabolitos secundarios o idiolitos (se producen durante la idiofase). 2. Exclusin del antibitico. Tienen enzimas que intervienen en el transporte activo del antibitico, favoreciendo su rpida excrecin e impidiendo su reentrada en la clula. As se protegen Streptomyces aureofaciens y S. rimosus contra las tetraciclinas que producen. 3. Modificacin del antibitico. Poseen enzimas altamente especficas que introducen cambios moleculares (fosforilacin de hidroxilos y/o acetilacin de grupos amino) en los antibiticos autgenos, con la consiguiente destoxificacin de los mismos. Por ejemplo: Streptomyces griseus puede inactivar la estreptomicina por fosforilacin y por acetilacin. 4. Modificacin de la diana. Hay productores que modifican dianas ribosmicas y otros que modifican dianas no ribosmicas. En el primer caso estn los actinomicetos productores de inhibidores de la sntesis de protenas, que pueden metilar el ARNr (los ribosomas metilados son resistentes al antibitico autgeno). El segundo caso se refiere a la modificacin de enzimas que intervienen en la sntesis de los cidos nucleicos o en la del pptidoglucano. As, la ARN polimerasa de Nocardia mediterranei tiene modificada la subunidad de modo que no se puede unir a las rifamicinas. Asimismo, los actinomicetos productores de antibiticos -lactmicos tienen PBPs modificadas; por ejemplo, en Streptomyces clavuligerus y S. griseus las PBPs presentan modificaciones estructurales que imposibilitan su unin a tales antibiticos.

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Mecanismos de resistencia bacteriana a los antibiticos. Mecanismo de resistencia Permeabilidad reducida Ejemplo Penicilinas Base gentica de Presente en la resistencia Cromosmica Plasmdica / Cromosmica Plasmdica / Cromosmica Cromosmica Pseudomonas aeruginosa Bacterias entricas Bacterias entricas Bacterias entricas Bacterias entricas, Staphylococcus aureus Bacterias entricas

Inactivacin del Penicilinas antibitico (penicilinasas,...) Cloranfenicol

Aminoglicsidos Plasmdica Alteracin de la diana (ARN polimerasa,...) Desarrollo de una va bioqumica Bombeo hacia fuera del antibitico Rifampicina, Eritromicina, Estreptomicina Sulfonamidas

Cromosmica

Tetraciclinas, Cloranfenicol

Plasmdica Cromosmica

Bacterias entricas, Staphylococcus aureus