Kim sot sinh hc i vi bnh ho Fusarium da trn Bacillus pumilus, Pseudomonas Alcaligenes, v Rhizobium sp. trn cy u lng.

Mohd Sayeed Akhtar *, Uzma Shakeel, Cc Thc vt hc Zaki Anwar Siddiqui, trng i hc Hi gio Aligarh, Aligarh - n Nhn : 2008/12/09

Tm tt: Nghin cu ny xem xt cc tc ng ca Bacillus pumilus, Pseudomonas Alcaligenes, v Rhizobium sp.trn bnh ho do Fusarium oxysporum f. sp. lentis v s tng trng ca cy u lng. S tc ng vi F. oxysporum gy ra ho ng k, v tng trng thc vt, s lng ca qu, v nt sn gim. Phng nga vi B. pumilus cng vi P. Alcaligenes gy ra mt s gia tng cao hn trong s pht trin ca thc vt, s lng ca qu, nt sn, v xm nhp r bi rhizobacteria, v ho Fusarium cng gim n mt mc ln hn so vi s dng ring bit.S dng Rhizobium sp.dn n s gia tng ln hn trong s pht trin ca thc vt, s lng ca qu, v nhng nt sn, v gim ho nhiu hn so vi B.pumilus lm. Kt hp ng dng ca B. pumilus v P. Alcaligenes vi Rhizobium sp.dn n s gia tng ln nht trong s pht trin ca thc vt, s lng v qu, nt sn, v xm np r bi rhizobacteria, v ho Fusarium cng gim cc cy trng c tim phng. Key words: Bacillus, biocontrol, Fusarium, Pseudomonas, Rhizobium, wilting Plant growth-promoting rhizobacteria(PGPR)

Gii thiu u lng (Lens culinaris Medik) l mt loi cy trng c gi tr v c trng n . Ho Fusarium, gy ra ra bi Fusarium oxysporum Schlecht. Tu ch nh Snyder & Hansen f. sp. lentis Vasudeva v Srinivasan l mt trong nhng bnh quan trng nhiu nht trn cy u lng., v l yu t chnh hn ch vic trng thnh cng loi cy trng quan trng ny (1,2). Mt s vi khun c lin quan vi r ca cy trng, c tc dng c li trn vt ch ca mnh, v c gi l Vi khun cng sinh r thc y tng trng thc vt (PGPR) (3).Vng r b thay i mnh m v tnh nng ng ca cc vng r to ra tng tc dn n kim sot sinh hc ca cc bnh (4,5-8).PGPR l cc vi khun sng t do m c th c nh hng c li trn cy trng, tc.trn cy xut hin, r c cc nt sn, kch thch sinh trng ca cy tng th, dinh dng khong, v s dng nc, cng nh c ch bnh.S vn ng ca vng r cy trng vi PGPR

cho kim sot sinh hc gy bnh cy cho thy ha hn ng k (9). Tng t nh vy, s hin din ca rhizobia trong vng r cng c th bo v r cy khi tc hi gy ra bi cc tc nhn gy bnh (10-12). Ni chung, tc nhn kim sot sinh hc duy nht c s dng kim sot sinh hc ca mt bnh thc vt gy ra bi mt tc nhn gy bnh duy nht (13).iu ny i khi c th gii thch cho vic thc hin khng nht qun, bi v tc nhn kim sot sinh hc khng phi l hot ng trong tt c cc mi trng t hoc chng li tt c cc tc nhn gy bnh tn cng cy ch.Mt khc, hn hp ca cc tc nhn kim sot sinh hc vi cc mu thc vt khc nhau xm np c th hu ch cho vic kim sot sinh hc ca cc tc nhn gy bnh khc nhau thng qua c ch c ch bnh khc nhau (13).Hn na, hn hp ca cc tc nhn kim sot sinh hc vi sinh vt phn loi khc nhau m yu cu nhit khc nhau ti u, pHs, v cc iu kin m c th xm np r tch cc hn, nng cao tc tng trng v hiu qu ca cc tc nhn kim sot sinh hc thc vt.S gia tng n p v thng nht tng cng chng li mm bnh nhiu da chut c quan st bng cch s dng hn hp chng PGPR (14). Nghin cu ny nhm kim tra nhng nh hng ca Bacillus pumilus v Pseudomonas Alcaligenes, n c v trong xm nhp kt hp vi Rhizobium sp, tng trng cy trng, s lng ca qu, s lng nt sn trn mt h thng gc, r bi rhizobacteria, v ho do F. oxysporum f. sp. lentis.

Vt liu v phng php Chun b v kh trng cc hn hp t mn Sandy (pH 7,2) qua thu qua t mt khu vc thuc Aligarh B i hc Hi gio Thc Vt (AMU) c thng qua mt sng li 10. Ny t ct sng, v phn bn hu c c trn ln trong t l 03:01:01 v cc chu t st ng knh 9-cm c lp y vi 1 kg hn hp. Nc c vo ni mi ch lm t b mt t trc khi kh trng ti 137,9 kPa trong 20 pht 121,9 C. Ni tit trng c php lm mt nhit phng trc khi s dng. Nui trng v bo dng cc cy trng th nghim. u lng (Lens culinaris Medik) cv. K-75 ht ging b mt tit trng vi sodium hypochlorite 0,1% trong 2 pht v cc ra 3 ln vi nc v trng. Nm ht ging c gieo trong t hi kh trng trong ni t st c ng knh 9-cm, 1 tun sau khi ny mm mng c thc hin duy tr 1 cy con trong mt chu. Hai ngy sau khi t a tha cy con nhn c cc phng php iu tr c lit k trong Bng 1 v cha c tim phng cc cy trng phc v nh iu khin. Cc cy trng c ti nc khi cn thit v gi trong mt nh knh 20 2 C. Chun b nm cy

Fusarium oxysporum f. sp. lentis c phn lp t r cy u lng b nhim bnh thu c t Chherat v cc Aligarh (CA) c duy tr trn mi trng thch ng khoai ty (PDA). F. oxysporum f. sp. lentis CA c gi ti b su tp nui cy ca Ban Thc vt, AMU. Nui cy cc loi nm ny c chun b bng cch nui cy phn lp trong mi trng lng ca Richard (15) trong 15 ngy 25 C. Si nm c thu thp trn giy thm, nc v cc cc cht dinh dng d tha c loi b bng cch nhn gia 2 np gp trn giy thm. Si nm (100 g) c ngm trong 1 lt nc ct v 10 mL tm ngng ny c cha 1 g nm si nm c xung quanh r, nh c m t trong k thut s dng. Nui cy Rhizobacterial Bacillus pumilus (MTCC s 1640) v Pseudomonas Alcaligenes (MTCC s 493) thu c t cc loi vi sinh vt B su tp nui cy v Ngn hng Gene, Vin Cng ngh vi sinh vt, Chandigarh, n . Nhng vi khun ny biu hin hot ng kim sot sinh hc i vi tuyn trng r trong nghin cu trc y ca chng ti (16). Nhng phn lp c cy truyn vo nc dng cht dinh dng (phng th nghim Hi-Media, Mumbai, n ), v 37 1 C trong 72 gi. Mt ml nc dng cht dinh dng b nh ch cha khong 1,5 x 107 CFU / mL ca mi c lp; 10 mL nh ch ny c vo ni mi xung quanh cy ging cy u lng. Nui cy Rhizobium Nui cy bng than hot tnh thng mi cho Rhizobium sp. (Lentil cng thng AQ07) (100 g) thu c t nng tri nng nghip Quarsi, Aligarh, n . Nui cy than thc hin trong nm 1000 mL nc ct v 10 ml (tng ng vi 1 g cht tim chng) c c cy truyn xung quanh vng r trong mi ni sau khi t a tha. K thut tim chng Cy u lng mt tun tui khe mnh c s dng gy nhim. i vi s dng vi F. oxysporum, B. pumilus, P. Alcaligenes, v cho Rhizobium sp. t xung quanh r cy c cn thn chuyn sang mt bn m khng lm tn hi r. huyn ph nui cy c xung quanh gc v t c thay th. Mt lng tng ng nc v trng c vo cc iu khin. Thit k th nghim Th nghim c thc hin trong mt thit k khi hon ton ngu nhin, vi 2 khi nh chnh: A) khng c nm v B) c nm. Mi khi chnh c th nghim c v khng c cho Rhizobium, tc l a) m khng cho Rhizobium b) vi cho Rhizobium (2 x 2 = 4). Subblock tng c c cy truyn ring bit vi 4 nghim thc sau y: 1) kim sot (C); 2) B. pumilus (Bp); 3) P. Alcaligenes (Pa); 4) Bp + Pa (4 4 = 16 phng php iu tr). Mi iu tr c lp li 5 ln.

Quan st Cy c thu hoch 90 ngy sau khi tim chng. Chiu di cy trng, trng lng kh cy trng, s lng v qu, s lng nt sn, xm nhp r bi rhizobacteria, v ch s ho c ghi nhn. xc nh trng lng kh (g), mng c sy kh trong l khng kh nng 60 C trong 48 h. R u lng cy vi rhizobacteria c thu thp mt phn 1 thng sau khi gieo. Mt gram r l kh trng b mt v nghin nt trong dung dch v trng bnh thng (NSS), v 0,1 ml serially chit xut pha long c t trn a thch dinh dng v 37 1 C trong 72 gi.Nhng a ny c t trn mt b m khun lc Quebec m cc khun lc ca vi khun.Khun lc thuc phm vi 30-300 c la chn v nhn bi cc yu t pha long i ng c c s lng cc thuc a ca vi khun (17) biu din nh l cc n v khun lc hnh thnh (CFU) cho mi gram ca gc.Ch s ho cc cy trng tim F. oxysporum f. sp.lentis c ghi li bng bn thng nng ca bnh trn thang im t 0-5, trong 0 l khng c ho v 5 l nghim trng ho.Ho c quan st trn c s t l phn trm ca hoi t trong xylem nh sau: 0 l khng c hoi t, 1 l ln n hoi t 20%, 2 l hoi t% -40 21%, 3 l hoi t -60% 41%, 4hoi t -80% 61%; 5 l hn 80% hoi t. Phn tch thng k Tt c cc d liu c phn tch thng k l mt th nghim 3-yu t (nm Rhizobium PGPR) v nht l s khc bit ng k c tnh ton mc P = 0,05 (18). Th nghim Tukey c thc hin biu th s khc bit ng k gia cc nghim thc.

Kt qu Cy vi B. pumilus v P. Alcaligenes gy ra s gia tng ng k trng lng kh shoot cc cy trng m khng c nm, so vi cc cy trng cha cy ging, v tim chng vi c hai gy ra s gia tng ln hn trng lng kh shoot hn l do tim chng ca mi cy truyn c lp (Bng 1). Cy bng Rhizobium sp. gy ra s gia tng ln hn trng lng kh shoot hn B. pumilus, tuy nhin, s gia tng trng lng kh shoot cc cy trng m khng c loi nm gy bi P. Alcaligenes thng k tng t c gy bi Rhizobium sp. Cy c Rhizobium sp. v B. pumilus cng vi P. Alcaligenes gy k s gia tng ln nht trong shoot trng lng kh cc cy trng m k k nm (Bng 1). Cy vo cc cy trng bng F. oxysporum gy ra gim ng k trng lng kh shoot so vi cc cy trng b c cy (Bng 1).Cy vo cc cy trng tc nhn gy bnh c cy truyn bng B. pumilus P. Alcaligenes, hoc c hai gy ra mt s gia tng ng k trng lng kh shoot so vi cc cy trng c cy bng F. oxysporum mt mnh.Cy vo cc cy trng tc nhn gy bnh cy vi Rhizobium sp.gy c s gia tng cao hn trong trng lng kh shoot

hn bi B. pumilus, tuy nhin, s gia tng trng lng kh shoot cc cy trng tc nhn gy bnh c cy gy ra bi P. Alcaligenes l tng t gy ra bi Rhizobium sp. Vic s dng Rhizobium sp.B. pumilus cng vi P. Alcaligenes dn n s gia tng ln nht trong trng lng kh shoot trong cc cy trng sch bnh c ly bnh (Bng 1). ng k s lng ca qu mi cy t chi khi cy trng c cy bng F.oxysporum (Bng 1). cc cy trng khi F. oxysporum c cy c iu tr bng Rhizobium sp.+ B. pumilus + P. Alcaligenes s gia tng ng k v s lng ca qu cho mi nh my c quan st.Kt hp s dng ca Rhizobium sp.B. pumilus cng vi P. Alcaligenes hiu qu hn trong vic tng s lng ca qu cho mi nh my hn so vi ng dng n c tng loi (Bng 1). Cy bng Rhizobium sp.gy ra mt s gia tng ng k s lng nt sn trn mt h r, c hai cy trng sch bnh c cy v cha c cy (Bng 2).Khng c s khc bit ng dng c quan st thy trong s lng nt sn trn mt h r gia thc vt cy vi B. pumilus v P. Alcaligenes n hoc kt hp (Bng 2). S dng Rhizobium sp.B. pumilus hoc P. Alcaligenes gy ra xm nhp r hn so vi s vng mt ca Rhizobium vi rhizobacterium, c trong cc cy trng sch bnh c cy v cha c cy (Bng 2).Cy c cy bng F. oxysporum n c c ch s ho trn 4.Ch s ho c gim xung cn 3 khi cy trng sch bnh c cy c iu tr bng B. pumilus + P. Alcaligenes v c gim xung cn 2 khi cy trng sch bnh c cy c iu tr bng Rhizobium sp.Vi phng php iu tr khc ch s ho l 1 (Bng 2).

ho lun PGPR l xm nhp r hiu qu tn ti v sinh si ny n cng vi r cy, kt qu l nng cao kh nng tng trng thc vt (19,20). Egamberdieva (21) quan st nh hng tch cc ca PGPR trn s pht trin ca la m v u H Lan, trong khi ht ging cy ci thin tng trng cy ging trong ng (22). Kt qu ca chng ti l trong tha thun vi cc kt qu nghin cu trc y (23-26). Nghin cu ny chng minh rng vic s dng B.pumilus, P. Alcaligenes, v Rhizobium sp.ci thin s pht trin ca F. oxysporum c cy vo cy trng.Nhng kt qu ny c th l do s i khng trc tip ca cc tc nhn gy bnh, sn xut thuc khng sinh, hoc cnh tranh vi cc tc nhn gy bnh cho cc cht dinh dng cn thit (27). Bacillus spp.c bit l lm gim ch s ho trong F. udum c cy vo cy trng (23).Ci thin trong tng trng thc vt c th l do tc dng c ch ca Bacillus spp. trn cc tc nhn gy bnh (28-30). S dng Bacillus spp.dn n xm nhp nhanh chng ca tt c cc m trong c chua, bao gm c bia mch mu, v kh nng chng cm ng chng li F. oxysporum (31).Gim bnh thi r trn u xanh ca Bacillus sp. (B22) trong Macrophomina phaseolina nhim vo cy trng cng c bo co (32). Tng t nh vy, Pseudomonas spp.cng c kh nng ngn chn k sinh trng gy bnh r (33,34) thng qua vic sn xut cc cht c hot tnh sinh hc (27,34), chng cng tng hp cc enzyme iu ch nh hm lng hoc mn, hn ch st c sn thng qua vic sn xut cc siderophores, v tiu dit mm bnhbng cch sn xut khng sinh (9).

Siddiqui et al.(35) bo co rng ch s ho c gim bi cc ng dng ca hunh quang Pseudomonads andBacillus spp. trong ht u pigeon. Cc kha cnh chnh ca s trao i cht ca cy thay i cm ng ca mt phn ng cu trc ti a im gia nhp ca tc nhn gy bnh v tch ly bt thng ca cc cht in t dy c trong khu vc xm nhp.Trc khun c bit l ngn chn bnh bng cch c ch cc tc nhn gy bnh thng qua cc sn phm d bay hi hoc diffusible, cm ng ca khng thuc trong cc cy trng, xm nhp gc r tch cc, v kch thch tng trng thc vt (9,12,19).Ngoi ra, do h thng khng bng PGPR cng c coi l mt c ch kim sot sinh hc gy bnh cy (36).Nghin cu ny nhn mnh vai tr ca PGPR trong vic tng hp cc enzyme c th iu ch nh mc hoc mn thc vt, hn ch st c sn bng cch sn xut siderophores, v c ch cc tc nhn gy bnh bng cch sn xut khng sinh (9). S dng vi Rhizobium sp.n c dn n tng trng tt hn trong c hai trng hp-c cy v cha c cy vo cy trng F., oxysoprum bi v vi khun ny hch gc r nit trong kh quyn v c bo co sn xut cc cht chuyn ha c hi c ch nhiu tc nhn gy bnh (37).Chakraborty v Purkayastha (38) bo co rng Rhizobium tit ra rhizobitoxine, trong khi Rhizobium leguminosarum c bo co l sn xut cc mc tng ca phytoalexin (4-hydroxy2,3,9-trimethoxy pterocarpan) trong ht u (39).Roslycky (40) bo co sn xut ca mt bacteriocin khng sinh rhizobia.Tt c iu ny cho thy rng vic s dng rhizobia lm tng hm lng nit v tng trng thc vt cng c th lm gim nng ca bnh (10,23).iu tra chi tit hn v cc mi quan h trong pathosystems khc nhau, v tng tc gia cc vi sinh vt v cy ch l cn thit pht trin cc phng php kim sot sinh hc i vi cc bnh lin quan.

Kt lun Cc kt qu ca nghin cu ny cho thy rng nhn mnh vo s pht trin ca cc hn hp ca cc tc nhn kim sot sinh hc l cn thit, bi v chng c th etter thch ng vi thay i mi trng xy ra sut ma pht trin v bo v chng li mt phm vi rng ln hn ca cc tc nhn gy bnh. Sinh vt nhiu c th nng cao mc v tnh thng nht ca kim sot sinh hc thng qua mt cng ng vng r n nh hn, v nng cao hiu qu trong mt lot cc iu kin mi trng. Hn hp ca B. pumilus, P. alcaligene, v Rhizobium l iu tr hiu qu nht chng li bnh ho u lng ca. Nghin cu su hn l cn thit xc nhn nhng kt qu trong iu kin thc.

Tng ng vi tc gi: Mohd. Sayeed Akhtar

B Thc vt hc, trng i hc Hi gioAligarh, Aligarh-202 002, Uttar Pradesh - n E-mail: sayeedbot@yahoo.co.in