CITOCINAS Introduccion Grupo de protenas y pptidos que actan como reguladores humorales sistmicos a muy bajas concentraciones (picogr/mL),

modulando la actividad de un amplio nmero de tipos celulares. Producidas por cualquier tipo de clula cuando es estimulada convenientemente (destacan en especial los Macrfagos y Linfocitos T), intervienen como mediadores de la respuesta inmunolgica e inflamatoria, como factores de crecimiento y diferenciacin (sobre todo de clulas hematopoyticas), y participan en la apoptosis, reparacin tisular (sobre todo por angiognesis) y fibrosis celular. Generalidades Su sntesis es temporalmente breve y transitoria, derivada de un proceso de activacin celular, y su produccin cesa al desaparecer el estmulo activador. Si bien pueden ejercer su efecto a distancia como las hormonas (aunque su espectro de accin es mucho ms amplio que el de stas), por lo general, actan de forma local mediante un mecanismo autocrino (sobre la misma clula), paracrino (sobre clulas vecinas), yuxtacrino (sobre clulas vecinas pero interactuando intercelularmente) o retrocrino (sobre la misma clula o sobre clulas vecinas, pero a travs de formas solubles de ciertos receptores de membrana),

por medio de receptores de membrana capaces de convertir una seal extracelular en intracelular.

El efecto que ejercen las diferentes citocinas sobre las clulas diana puede ser redundante o coincidente (p.ej. IL-1, IL6 y TNF-a), pleiotrpico (mltiples efectos de una misma citocina segn el tejido involucrado), sinrgico o agonista, antagonista, o dependiente de otras circunstancias contextuales (concentracin, estado de la clula diana, presencia de otras citocinas, segn secuencia temporal de actuacin con respecto a otras citocinas). Respuesta inmune A groso modo, y teniendo en cuenta los 2 tipos celulares mayormente involucrados en la produccin de citocinas y sus principales efectos, los Macrfagos (en respuesta a endotoxinas y peptidoglucanos bacterianos, ARNviral e/o IFNg median la inmunidad innata e inflamacin por medio de citocinas como la IL-1, IL-12 y TNF-a, y los Linfocitos T (en respuesta a antgenos proteicos propios o extraos) median la inmunidad adaptativa y la proliferacin y diferenciacin de clones de Linfocitos, por medio de citocinas como la IL-2, IL-4 e IL-5. Los primeros pueden ser inhibidos por los Corticosteroides y los ltimos por la Ciclosporina y el Tacrolimus. Adems, ciertas citocinas son capaces de regular, modular y favorecer una determinada respuesta (en detrimento de otra) a un estmulo adecuado por interaccin con las clulas productoras de stas, como as ocurre, p. ej., con la IL-10 e IL-13 que inhiben la respuesta inmune celular debida

a las clulas LTh1 y con el IFN-g, IL-12 e IL-18 que inhiben la respuesta inmune humoral debida a las clulas LTh2.

Grupos Las citocinas pueden dividirse en funcin de su origen, estmulo y efectos biolgicos en 5 grupos: * Interleucinas * Factores de necrosis tumoral * Factores estimuladores de colonias * Interferones * Quimiocinas Interleucinas * IL-1: Es proinflamatoria. Se divide en IL-1a, que acta a nivel intracelular y no se detecta en suero, IL-1b, capaz de activar Linfocitos T, Macrfagos y Clulas del endotelio vascular e IL-1RA, que es antagonista del receptor de la IL-1, compitiendo con la IL-1a e IL-1b por su receptor (por lo que tiene carcter inhibidor de sus acciones). Las principales clulas productoras son, entre otras, los Macrfagos.

* IL-2: Promueve la proliferacin de clulas T (LTh0 --> LTh1; inmunidad celular). Ejerce su accin a travs de un receptor de membrana formado por 3 subunidades (a, b y g). Tras su accin se libera y solubiliza la fraccin a (p55), como sIL-2R, que compite con el receptor por la IL-2, disminuyendo su biodisponibilidad. Las principales clulas productoras son, entre otras, los Linfocitos LTh0 activados y los LTh1. * IL-3: Estimula el crecimiento y diferenciacin de las clulas precursoras hematopoyticas. Las principales clulas productoras son, entre otras, los Linfocitos T. * IL-4: Promueve la proliferacin de clulas T (LTh0 --> LTh2; inmunidad humoral) y la activacin, proliferacin y diferenciacin de los Linfocitos B. Al igual que la IL-2, al unirse a su receptor se solubiliza una cadena a de ste, como sIL-

4R, la cual disminuye su biodisponibilidad. Las principales clulas productoras son, entre otras, los Linfocitos Th0 activados y los Mastocitos. * IL-5: Activacin, proliferacin y diferenciacin de Linfocitos B, y principal factor regulador de la eosinofilia (por esto en algunos tumores productores de IL-5 aparece una franca eosinofilia). Las principales clulas productoras son, entre otras, los Linfocitos Th2 y los Mastocitos. * IL-6: Principal regulador de la respuesta inmunolgica y de reacciones de fase aguda, interviene tambin en la hematopoyesis. Acta a travs de un receptor formado por 2 subunidades (R-IL-6 y gp130). Ambas subunidades se solubilizan tras unirse la IL-6, como sIL-6R y gp130 soluble, pero mientras el sIL-6R acta como agonista de la IL-6, el gp130 soluble acta como antagonista y reduce su biodisponibilidad. Tiene propiedades proinflamatorias y antiinflamatorias, predominando (al igual que otras citocinas que se unen al receptor gp130) la accin antiinflamatoria. Las principales clulas productoras son mltiples y de muy diferentes tipos, destacando los Macrfagos activados, Monocitos, Fibroblastos y las Clulas del endotelio vascular.

* IL-7: Estimula el desarrollo de Linfocitos pre-B y pre-T, y aumenta la produccin de LT8 y clulas NK (las 2 clulas con actividad anti-tumoral). Las principales clulas productoras son, entre otras, las Clulas del Timo, Mdula sea y Queratinocitos.

* IL-8: Moviliza (factor quimiotctico) y activa a los Neutrfilos, estimulando la fagocitosis. Es tambin angiognico. Las principales clulas productoras son, entre otras, los Monocitos.

* IL-9: Es un mitgeno, induciendo la proliferacin de Linfocitos T. Ha sido implicada en el desarrollo de tumores de clulas T. * IL-10: Tiene efecto antiinflamatorio. Inhibe la expresin de IFN-g e IL-2 por parte de los LTh1, y la sntesis de IL-1, IL6 y TNF-a por parte de los Macrfagos. Es tambin co-estimulador del crecimiento de varias clulas hematopoyticas, incluyendo Linfocitos B y T. Las principales clulas productoras son, entre otras, los Linfocitos Th2. * IL-11: Efectos antiinflamatorios, disminuyendo la sntesis de IL-1 y TNF-a por parte de los Macrfagos. Induce la produccin de las protenas de fase aguda por las clulas Hepticas (junto con la IL-6), acta sobre el desarrollo de clulas hematopoyticas y protege y regenera las clulas epiteliales intestinales. Tiene escaso efecto sobre Linfocitos. Las principales clulas productoras son, entre otras, las Clulas de la Mdula sea y Mesenquimales. * IL-12: Induce la sntesis de IFN-g e IL-2 por los LTh1 e inhibe la produccin de IL-4, IL-5 e IL-10 por los LTh2. Adems activa las clulas NK y aumenta la expresin de receptores para la IL-18. Las principales clulas productoras son, entre otras, los Linfocitos B. * IL-13: Estimula e incrementa la produccin de citocinas por los LTh2, e inhibe las citocinas proinflamatorias sintetizadas por los LTh1 y Macrfagos, y factores quimiotcticos secretados por Monocitos y Linfocitos B. Induce la expresin de CD23en Linfocitos B, Eosinfilos y Macrfagos. Del cribaje proteoltico del CD23 se solubilizan varias protenas, denominadas todas ellas como sCD23, que son capaces de actuar como citocinas y regular la respuesta inmune (se consideran citocinas multifuncionales). Las citocinas sCD23 se han relacionado con una amplia variedad de enfermedades como las alrgicas (por su importante papel en la sntesis de IgE por parte de los Linfocitos B), artritis reumatoide, rinitis, hepatitis y diversas hemopatas (tienen valor pronstico en la leucemia linftica crnica). Las principales clulas productoras son, entre otras, los Linfocitos Th2 y Mastocitos.

* IL-14: Factor de crecimiento de elevado peso molecular de los Linfocitos B. Muestra una elevada homologa con el factor Bb del sstema del complemento (va alternativa). * IL-15: Actividad biolgica similar a la IL-2, pero actuando sobre clulas diana distintas. Su receptor es igual al de la IL-2, salvo por su cadena a que es distinto.

* IL-16: Es proinflamatoria. Tambin denominada factor quimioatrayente de Linfocitos, aumenta la expresin de receptores para la IL-2 en Linfocitos B y T, clulas NK, Macrfagos y Monocitos. Las principales clulas productoras son, entre otras, los Linfocitos T8 activados.

* IL-17: Aumenta la expresin de molculas ICAM-1 en la membrana de Fibroblastos y estimula la secrecin de IL-6, IL-8 y G-CSF por parte de Clulas epiteliales, Endoteliales y Fibroblastos. Las principales clulas productoras son, entre otras, los Linfocitos T4 estimulados.

* IL-18: Accin similar a la IL-12 con la que acta sinrgicamente. Es la mayor inductora de la produccin de IFN-g. Las principales clulas productoras son, entre otras, los Macrfagos activados. Factores de necrosis tumoral * TNF-a: Tambin denominado Caquectina. Tiene efecto anti-tumoral (por 2 mecanismos: necrosis hemorrgica del tumor [es anti-angiognico] y por aumento de la inmunidad anti-tumoral [en sinergia con el IFN-g]), y acta como mediador en el desarrollo del shock sptico y de la caquexia en enfermedades crnicas. Adems activa potentemente a los Macrfagos, estimula la produccin de citocinas por muchos tipos celulares e incrementa la permeabilidad vascular. Las principales clulas productoras son, entre otras, los Macrfagos, Monocitos y los Linfocitos T. * TNF-b: Tambin denominado Linfotoxina. Tiene actividad citotxica sobre algunos tipos tumorales, mediado solo por necrosis hemorrgica. Las principales clulas productoras son, entre otras, los Linfocitos T activados. Factores estimuladores de colonias * GM-CSF: Estimula de forma preferencial la formacin de clulas de Granulocitos y Monocitos, y en menor medida de eosinfilos. En combinacin con la Eritropoyetina interviene en el desarrollo de los Eritrocitos. Las principales clulas productoras son, entre otras, los Linfocitos Th1 y Th2, y Macrfagos. * G-CSF: Interviene tardamente en la hematopoyesis induciendo de forma especfica la formacin de colonias de Granulocitos. Las principales clulas productoras son, entre otras, los Monocitos, Clulas endoteliales y epiteliales. * M-CSF: Interviene tardamente en la hematopoyesis induciendo de forma especfica la formacin de colonias de Monocitos. Las principales clulas productoras son, entre otras, los Monocitos, Clulas endoteliales y Fibroblastos. Interferones Constituidos por un amplio grupo de protenas caracterizadas por tener una potente accin antiviral y antineoplsica, as como por su efecto regulador de las clulas del sistema inmune. Estan: * IFN-a: Formado por una familia de unas 14 protenas, tiene actividad antiviral y estimula la expresin celular del CMH de clase I. Al igual que el IFN-b, ambos se unen al mismo receptor, por lo que se les denomina IFN tipo I. Las principales clulas productoras son, entre otras, los Macrfagos y Linfocitos B. * IFN-b: IFN tipo I, con cierta homologa estructural y funcional al IFN-a. Las principales clulas productoras son, entre otras, los Fibroblastos y Clulas epiteliales.

* IFN-g: Acta sobre un receptor distinto a los anteriores, por lo que tambin se le denomina IFN tipo II. Interviene en la activacin de Macrfagos, clulas NK, LT8 y LAK, induce la expresin celular del CMH tipo I y II e intensifica la secrecin de mediadores de inflamacin en muchos tipos celulares. Adems, incrementa la expresin de la subunidad a del receptor para la IL-2 y acta sinrgicamente con el TNF-a como anti-tumoral. Las principales clulas productoras son, entre otras, los Linfocitos T activados y clulas NK. Quimiocinas Citocinas de pequeo tamao mediadoras de la inflamacin por inducir la quimiotaxis y activacin celular de muchos tipos celulares. Actan a nivel de receptores pertenecientes a la superfamilia de receptores que se unen a la protena G. Generalmente no inducen la produccin de otras citocinas, no generan fiebre ni son reactantes de fase aguda. Se dividen en 4 familias: * a-quimiocinas o CXC: Est formada por 2 subgrupos. El 1 de ellos es quimioatractor y activador de los neutrfilos (al igual que la IL-8); el 2 es quimioatractor y activador de muchos tipos celulares (Monocitos, Linfocitos T y B, Clulas dendrticas, clulas NK, Eosinfilos). Muchos tipos celulares del organismo son productoras de estas Quimiocinas. * b-quimiocinas o CC: Entre otras, forman parte de esta familia el MIP (que acta sobre Macrfagos), RANTES (sobre Linfocitos T) y Eotaxin (sobre LTh2 y Eosinfilos). Son quimiotcticos y modulan la apoptosis, entre otros efectos. * g-quimiocinas o C: Formadas por la Linfotactina y el SCM-1 (motivo C solitario). Activan e inducen la quimiotaxis de Linfocitos T y clulas NK. * d-quimiocinas o CX3C o CXXXC: Familia formada por un solo miembro, la Fractalquina o Neurotactina. Es la nica quimiocina de membrana. Est implicada en la adherencia y quimiotaxis de Monocitos y Linfocitos T. Las principales clulas portadoras de esta quimiocina son las Clulas endoteliales. Metodologia Las metodologas mas empleadas en la deteccin de citocinas actualmente son los inmunoensayos, ya sean ELISA en microplaca, o ensayos automatizados para algunos autoanalizadores. Tambin existe un test para la interleucina 6 en tira inmunorreactiva con un punto de corte fijo. La sensibilidad y especificidad analtica de la mayora de estas tcnicas son elevadas, permitiendo detectar niveles inferiores incluso al pg/mL, pero su gran problema actual es su falta de estandarizacin. Hay que tener en cuenta tambin que las muestras de sangre deben de procesarse rpidamente, tanto para evitar la produccin de citocinas por parte de las clulas sanguneas, como para evitar la degradacin enzimtica de las mismas. Asmismo, los actuales avances en bioinformtica estn permitiendo el desarrollo de arrays que facilitan la deteccin de varias citocinas por pocillo de la placa de ensayo, con un sistema de deteccin especial de la seal luminiscente que ofrece la resolucin necesaria para discriminar las lecturas independientes de cada citocina. El empleo de la citometra de flujo permite identificar mediante el empleo de marcadores de superficie especficos, clulas individuales en las que podemos examinar la expresin de una o varias citocinas (diferenciacin entre linfocitos Th1 y Th2, ...). Utilidades diagnosticas En la actualidad existen diferentes propuestas con futuro en el empleo de las citocinas como herramienta pronstica y diagnstica. El conocimiento detallado de muchos de los procesos fisiopatolgicos en los que intervienen, as como el desarrollo de tcnicas analticas para su deteccin, nos permiten elaborar mltiples hiptesis sobre su empleo como marcadores con una elevada sensibilidad. Algunos de estos planteamientos parecen haber llegado a un punto sin salida, es posible que ello se deba a que la relacin entre la deteccin de estas citocinas no sea, actualmente, extrapolable a su actividad

biolgica real. Sin embargo, en otros casos los actuales estudios nos ofrecen mejores esperanzas de futuro. En general, tienen inters en procesos infecciosos e inflamatorios y cancerosos, por su implicacin como mediadores del sistema inmune, factores de crecimiento celular e inhibicin de la apoptosis. Al respecto, hay diversos estudios que nos hablan de: * El elevado valor predictivo negativo del TNF-, para infecciones por M. tuberculosis en inmunodeprimidos. * La deteccin precoz de la spsis bacteriana mediante la IL6 (en puertas de urgencias y UCIs), en 1-3 horas, frente a la PCR o la Procalcitonina. Aunque, hoy por hoy, no existe consenso en el empleo de un punto de un corte adecuado. * El empleo de la IL8 en orina, para la discriminacin de bacteriuria relevante de la contaminacin, debido a la produccin local de la misma. * La valoracin de la IL6 e IL8 en el rechazo en el trasplante cardaco, como alternativa a la biopsia endomiocrdica. * La relacin de la elevacin precoz de los niveles de sICAM-1 e IL6 en el sdrome isqumico agudo coronario. * El uso del TNF- en patologas reumticas destructivas bsicas como la artritis reumatoide y las espondiloartropatas, debido al paralelismo de las mismas con procesos tumorales y al empleo de frmacos anti-TNF- para su tratamiento. Aunque parece ser que sus niveles no se corresponden demasiado con el estadio de la enfermedad y el seguimiento de la terapia. * El empleo del la IL6 como diferenciador de gammapatas monoclonales benignas y malignas, o de ambos con pacientes sin estas alteraciones, ya que acta como factor de crecimiento de clulas de procesos linfoproliferativos de clulas B. Pero no nos ofrece ninguna ventaja aparente con respecto al arsenal diagnstico actual. * IL6, IL4, IL10, TNF- y diversos factores de crecimiento (fibroblstico, insulinoide, ...), en una gran variedad de procesos metastticos. * El empleo del cociente entre sRANKL/Osteoprotegerina como valoracin de los procesos de resorcin (aumento) y formacin (disminucin) sea, ya que son marcadores solubles que se encuentran sobreexpresados en estas situaciones. Aunque no est claro que la valoracin de los mismos posea una correcta relacin con su actividad biolgica. Hoy en da, el empleo de las citocinas como marcadores analticos de pronstico, diagnstico y seguimiento no est ni mucho menos generalizado, siendo todava (y en dichos sentido) sus posibilidades futuras una incgnita. Por ello su desarrollo en el campo de la investigacin, es por ahora el mas frecuentado.