CURSUL NR.

2
POPULAIA CELULAR NORMAL este format din: 1. celule germinale 2. celule stem, cu funcia de reproducere i de a produce celule difereniate. Aceste celule au un numr limitat de cicluri de reproducere. 3. celule parial difereniate, cu capacitate limitat de reproducere 4. celule mature specializate care nu se mai pot reproduce. Celula normal are un ceas biologic care msoar numrul de diviziuni celulare, care este fix pentru fiecare celul n parte, dup care celula moare. 1. 2. 3. 4. 5. CICLU CELULAR NORMAL: Faza G0: faza de repaus Faza G1: interfaza, se sintetizeaz proteine i ARN, precum i enzime necesare sintezei de ADN Faza S : sinteza ADN Faza G2: se sisteaz sinteza AND, dar continu sinteza de proteine, ARN, precursori microtubulari ai fusului mitotic Faza M : mitoza, se formeaz 2 celule fiice, care vor intra n faza G0 sau G1.

Celulele capabile s se reproduc prolifereaz ca rspuns la stimuli externi, factori de cretere, hormoni, antigene de histocompatibilitate care se leag la suprafaa celular. Tirozinkinazele sunt pri eseniale ale cascadei de transmitere a semnalului de la exteriorul n interiorul celulei(nucleu). Ciclinele sunt proteine care activeaz variate faze ale ciclului celular. Ciclinele interacioneaz cu tirozinkinazele, ciclin dependentkinaze, i particip la ciclul desfurarea ciclului celular. Punctele de control ale ciclului celular: sunt situate naintea sintezei ADN sfritul fazei G1 i imediat naintea mitozei( 2 inspecii pentru a verifica i corecta orice defect genetic naintea mitozei celulare). Celula normal are mecanisme de detectare a anormalitilor n secvena ADN . Detectarea de leziuni ale ADN va fi urmat de repararea lor sau celula va suferii procesul de apoptoz( acest proces este controlat de gena p53- paznicul genomic). CARCINOGENEZA CANCERUL= boal genetic a celulelor somatice care se manifest printr-o acumulare de celule ca rezultat al unei expansiuni clonale, i o boal a diferenierii celulare, aceste celule rmnnd imature funcional, ieind de sub controlul mecanismelor care n mod normal regleaz funcia i structura esuturilor organismului. TEORIILE CLASICE ALE CANCEROGENEZEI I. TEORIA MUTAIEI GENETICE- atribuie originea cancerului unor anomalii structurale ale genelor care regleaz creterea i diferenierea celular. II. TEORIA DIFERENIERII ABERANTE= TEORIA EPIGENETIC Consider originea cancerului secundar unor tulburri funcionale ale mecanismelor de reglare genetic. Conform acestei ipoteze, fenotipul malign poate fi considerat ca fiind rezultatul unui deranjament reversibil al reglrii genetice i nu obligatoriu o modificare 1

structural. Multe experimente cu celule tumorale de diverse origini, introduse ntr-un mediu fetal, au demonstrat posibilitatea relurii procesului de difereniere de ctre celulele tumorale cu pierderea fenotipului malign. Diferenierea spontan a unor tumori maligne n forme benigne(neuroblastom-neurinom, c. embrionar testicular-teratom) este un argument n favoarea acestei ipoteze. III. TEORIA VIROTIC Infecia virotic prin integrarea propriei informaii genetice n genomul celulei gazd, poate iniia carcinogeneza prin exprimarea direct a propriilor gene(v-onc), fie indirect prin transformarea protoncogenelor normale ale gazdei n oncogene(c-onc). IV. TEORIA SELECIEI CELULARE Conform acestei teorii cancerizarea este rezultatul seleciei unei populaii celulare cu autonomie i malignitate crescnd datorit unor mutaii care intervin pe toat durata existenei procesului neoplazic.

TEORIA MULTISTADIAL ACTUAL A CANCEROGENEZEI Conform teoriei multistadiale etapele de evoluie a cancerului sunt reprezentate de: iniiere, cretere, promoie, conversie, propagare, progresie. Pentru iniiere, promoie i progresie datele clinice i experimentale sunt edificatoare, pentru celelalte informaiile sunt reduse. 1. INIIEREA, prima etap, se datoreaz unor mutaii ce apar n celulele stem ca urmare a aciunii unui agent carcinogen( iniiator) viral, chimic, fizic. Se produc modificri de obicei ireversibile ale ADN-ului, cu apariia unei celule iniiate care se poate transforma malign ulterior. 2. CRETEREA urmeaz iniierii, fiind considerat ca o expansiune clonal selectiv a celulelor iniiate favorizat de factori fizici, chimici, virali, microbieni. 3. PROMOIA const n: - aciunea continu, ndelungat a unui agent promotor asupra unei celule iniiate, - este un proces reversibil, - are o evoluie lung, - depinde de doza prag a agentului promotor, - dependena de factori exogeni( tutun, alcool, alimente, mediu) i endogeni ( hormonali) - rezultatul fiind apariia celulei maligne. n prezent se consider c iniierea este un eveniment genetic pur, iar promoia este un fenomen epigenetic. Primele faze au o durat de pn la 15-30 ani. 4. CONVERSIA este mai puin argumentat pn n prezent, se consider c n acest stadiu exist 10-10000 celule maligne care ar putea avea o evoluie reversibil, ns sub aciunea unor factori interni evolueaz ctre un cancer manifest. 5. PROPAGAREA const n creterea numrului celulelor maligne, fiind condiionat de factor interni(ex. factori hormonali- estrogeni, testosteron). Masa de celule crete de la 103 la 105 celule, nefiind nc clinic manifest boala(105 celule corespund unui carcinom in situ).

6. PROGRESIA corespunde creterii masei tumorale, creterii autonomiei celulare, invaziei i metastazrii. Reprezint trecerea de la faza preclinic la cea clinic a cancerului. CARCINOGENEZA: INIIEREA este procesul prin care o celul n urma aciunii unor ageni chimici, fizici, biologici prezint o alterare ireversibil a materialului genetic, cu formarea celulei iniiate cu potenial de a dezvolta o clon de celule neoplazice. Celula iniiat este format n urma urmtoarelor mecanisme genotoxice: a)aciunea direct a virusurilor, radiaiilor, substanelor chimice Virusurile oncogene cu ADN numite oncodnavirusuri i cele cu ARN numite retrovirusuri oncogene au capacitatea de a se integra n genomul celulei gazd. Ca urmare materialul genetic viral devine nemuritor fiind de acum un parazit cromozomial. Se sintetizeaz polipeptide care produc transformarea malign direct dac gena viral transcris este oncogen(v-onc) sau pe cale indirect prin activarea unei oncogene celulare(c-onc) ca urmare a transformrii protoncogenelor n oncogene( prin mutaii, deleii, aprute ca urmare a unor replicri infidele a celulelor n cursul infeciei virale). Radiaiile produc leziuni specifice ale ADN-ului, care atunci cnd nu sunt letale, pot iniia carcinogeneza. Leziunile produse sunt rupturi simple sau dublu catenare, translocaii, mutaii punctiforme, erori de reparare a ADN. Substanele chimice n cursul metabolizrii lor produc reactani electrofili care se combin cu ADN-ul. Generic substanele chimice strine organismului sunt numite xenobiotice. mpotriva acestora organismul utilizeaz sisteme enzimatice cu rol n epurarea lor din organism. Transformarea n substane hidrofile care sunt eliminate prin urin se face sub aciunea sistemelor enzimatice de-a lungul a dou etape: o faz iniial de activare sub aciunea citocrom P450, urmat de o faz de conjugare n care intervin alte enzime( epoxid hidroxilaza, glutation-S-transferaza, acetil-transferaza, glucoronil-transferaza, sulfotransferaza, NADPH quinone-reductaza. Deoarece exist o mare variabilitate genetic a expresiei enzimatice doar unii din cei expui la aciunea carcinogenilor chimici vor dezvolta cancer de-a lungul vieii. O susceptibilitate mai mare pentru cancer pulmonar a fost constat la cei cu metabolizare rapid a debrisoquinei, iar la cei cu metabolizare rapid a arilaminei s-a remarcat o inciden mai mare de cancere mamar, colon. b)transcrierea eronat a ADN-ului originar, unii ioni metalici carcinogeni determin operarea defectuoas a polimerazei ADN c)erori n activitatea polimerazelor reparatorii ale ADN-ului, deficiene n activitatea acestor polimeraze pot amplifica n continuare anomaliile ADN-ului, constituind unul din mecanismele prin care celule tumorale progreseaz spre forme mai puin difereniate n cursul creterii i dezvoltrii lor. Lezarea ADN-ului poate rmne fr efect, poate fi reparat sau poate s conduc la moartea celulei. Datorit faptului c multe din poriunile genomului pot fi inactive, dormante, multe leziuni nu devin manifeste, fiind fr consecin asupra carcinogenezei. Reparea ADN-ului este un proces foarte eficient, care poate reface poriunea afectat. Cnd capacitatea de reparare e depit celula moare, iar prin scderea inhibiiei de contact se produce o stimulare a creterii celulelor nvecinate, proces denumit hiperplazie reactiv.

Dac celula e forat s se divid naintea reparrii complete, erorile sunt atunci frecvente i riscul mutaiilor ridicat. Rezultatul final al acestor procese este apariia unei celule cu material genetic alterat, celul iniiat. PROMOIA este a doua etap a procesului de cancerizare, stadiul n care alterarea cronic a expresiei informaiei genetice a celulei iniiate duce la apariia celulei neoplazice, celul capabil de cretere autonom. Promoia cuprinde totalitatea condiiilor i situaiilor care favorizeaz sau foreaz proliferarea celulelor iniiate. Promoia tumoral este n mare parte asociat cu mecanisme epigenetice. Un promotor este un agent care prin aplicare prelungit crete frecvena cancerului la animalele tratate experimental n prealabil cu un iniiator. Un iniiator sau promotor, aplicai izolai sau n ordine invers, nu induc cancerul. Sunt cazuri cnd pentru anumite doze i moduri de administrare, aciunea promotorului nu e necesar, agentul carcinogen respectiv fiind considerat complet. Promoia este un fenomen reversibil cel puin parial, capabil de modulare prin alimentaie, factori hormonali, factori de mediu. n cancerele de sn, colon, plmn, prostat factorii promotori par decisivi. Frecvena c. prostatic in situ este asemntoare n diferite pri ale lumii, dar manifestarea clinic, respectiv leziunile invazive se ntlnesc cu frecven crescut n rile industrializate, probabil legat de consumul crescut de grsimi. Faptul c riscul carcinogen al tutunului diminu pe msura creterii intervalului de la suspendarea fumatului, sugereaz c o parte a perioadei de laten este reversibil, timp n care se poate aciona n sensul unei profilaxii. PROGRESIA unei celule neoplazice ntr-o tumoare malign este ultimul stadiu al cancerogenezei, care se desfoar pn la moartea gazdei sau pn la vindecarea bolii. Caracteristica esenial este instabilitatea cariotipului: alterri continue ale materialului genetic, evenimente genice care conduc la apariia unor subclone cu agresivitate mai mare. Fenotipic se manifest prin ritm rapid de proliferare, invazivitate i metastazare. Importana alterrii genetice n trepte( stadial) este demonstrat de faptul c neoplaziile maligne apar mai frecvent la persoanele n vrst, care au o instabilitate genetic mult mai mare, iar n unele cazuri, alturi de focarul de cancer, se ntlnesc i leziuni precursoare reprezentate de leziuni premaligne (displazii). MECANISME GENETICE I EPIGENETICE ALE CARCINOGENEZEI MECANISMELE GENETICE sunt modificri mutaionale cantitative i, sau calitative ale cariotipului celular. Anomaliile cantitative sunt variaiile numrului de cromozomi, malignitatea fiind expresia direct a aneuploidiei tumorale. Cu ct celulele maligne au o aneuploidie(numr diferit de cromozomi care nu este multiplu exact de N- numr de cromozomi dintr-un gamet haploid normal)cantitate modificat de material genetic) mai mare cu att prognosticul bolii este mai nefavorabil. Amplificarea ADN-ului poate interesa cromozomii n ntregime sau segmente cromozomiale:

trisomia 12: LLC, trisomia 8: cea mai ntlnit anomalie cromozomial singular pentru sdr. mielodisplazice primare, monosomia 7 prezent n aceeai afeciune - trisomia 2q: rabdomiosarcomul embrionar Unele anomalii genetice se coreleaz cu evoluie i prognostic nefavorabil. Anomaliile cromozomiale preced i predispun la apariia unor cancere : sindromul Down trisomia 21 se asociaz de 10-20 ori mai frecvent cu tumori solide i leucemii acute; femeile cu cariotip 46xy fac mai frecvent gonadoblastoame i disgerminoame; etc. Anomalii calitative: Modificri de structur ntr-un singur cromozom sau n mai muli: a. Deleia- pierderea unei poriuni dintr-un cromozom b. Inversia c. Cromozomi inelari d. Translocaia implic participarea a doi cromozomi neomologi. - Translocaia reciproc, fr pierdere de material genetic, prin schimbarea de material genetic se ntlnete n.: Limfomul Burkitt- translocaia reciproc a cromozomului 8 la cromozomul 14 - LMA promielocitar- translocaia reciproc de la cr. 15 la cr. 17 afectnd gena ce codific receptorul alfa pentru acidul retinoic - LMC- translocaia reciproc ntre cr. 9 i cr. 22 cu apariia cr. Philadelphia. Translocaia nereciproc, cu pierdere de material genetic se ntlnete n retinoblastom, tumora Wilms. e. Amplificarea genic const n activarea unei protoncogene cu supraexprimarea produsului ei proteic prin multiplicarea secvenelor de ADN ale unei oncogene. n cazul multor tumori maligne s-a observat susceptibilitatea cromozomilor de a se rupe n anumite zone constante, specifice, numite situsuri fragile. Indivizii care prezint aceast fragilitate, de obicei constituional, sunt predispui la apariia cancerelor. Anomaliile calitative descrise sunt reprezentate de modificri cariotipice primare, care sunt constante i specifice ptr. diferitele tipuri de tumori, servind i la diagnosticarea unor subgrupe de prognostic: - cromozomul Philadelphia t(9,22) prezent n LMC, are loc o fuziune ntre gena bcr de pe cromozomul 22 cu gena abl de pe cromozomul 9, gena fuzionat este responsabil de sinteza unei tirozinkinaze implicate n transformarea malign a celulelor stem precursoare mielocitare. - translocaia t(8:21) n cazul LMA tip M2 prezint un prognostic mult mai bun dect t(9,11) din LMA tip M5 - t(8,14) din LLA tip L3 se coreleaz cu un prognostic ru; t(4,11) din LLA tip L2 cu prognostic mai ru fa de L1, L2 la care se constat hiperploidie sau 6q- Sdr. 5q-, deleia 7q- apar n sdr. mielodisplazice - Limfom Burkitt- t(8,14) Modificrile cariotipice primare sau specifice, ca unic anomalie citogenetic, sunt mai frecvent ntlnite n leucemii i limfoame dect n tumorile solide.

Acest fapt este explicat prin apariia manifestrilor clinice ntr-un moment mult mai precoce al evoluiei dect n cazul tumorilor solide. n acest caz celulele tumorale nu au avut nc posibilitatea s dezvolte i modificri secundare cariotipice. Modificrile cariotipice secundare variaz cu stadiul de evoluie al bolii, variaz de la o celul la alta pentru aceeai tumor ori tip histologic. n tumorile solide modificrile cariotipice primare pot preciza celula de origine pentru leziuni cu aspecte histologice apropiate. Urmrirea modificrilor citogenetice n cursul afeciunilor benigne poate indica potenialul lor de malignizare (ex. adenoamele colorectale) Studiile de citogenetic a tumorilor solide au evideniat prezena aproape constant a anomalilor cromozomiale n celulele sarcomatoase, mai frecvent de tipul translocaiilor: - liposarcom: t(12:16) - rabdomiosarcom alveolar: t(2:13) - sinovialosarcom: t(x, 18) - histiocitom fibros malign: t( 19p,13), acest tip de translocaie se pare c se asociaz cu un risc crescut de recidive i metatstazare - sarcom Ewing: t(11,22), prezent la 88-95% din cazuri, care conduce la apariia unei gene de fuziune ntre gena EWS de pe cromosomul 22 i gena FLI 1 de pe cromosomul 11 cu sinteza unei proteine himerice Modificri genetice prezente n alte tumori solide: - adenocarcinom pulmonar: cea mai ntlnit modificare citogenetic const n deleia hemizigot a braului scurt al cromozomului 3 - retinoblastom: gena Rb modificat aprut printr-o deleie 13q14 sau printr-o mutaie punctiform n gen. - t. Wilms: del(11)(p13) corespunztoare genei WT-1 - neuroblastom: del(1)(p36) MECANISMELE EPIGENETICE sunt dereglri n funcionalitatea aparatului genetic, modificri care intereseaz expresia genelor, fenotipul malign fiind rezultatul a numeroase leziuni produse prin mecanisme diferite i care ctig substrat structural tot mai evident. MODIFICRI GENICE I CROMOZOMIALE N CELULA MALIGN ONCOGENE I PROTONCOGENE Apariia celulelor maligne are la baz existena a 2 mari categorii de gene: oncogenele, n general cu caracter dominant, cu rol n proliferarea celular, i antioncogenele care au n general caracter recesiv, cu rol n inhibarea proliferrii celulare. PROTONCOGENELE sunt gene celulare normale cu potenial de a contribui la inducia sau promoia unei celule maligne cnd structura sau expresia lor este alterat. Protoncogenele sunt gene care codific proteine cu rol n creterea, proliferarea, diferenierea celular normal( factori de cretere, receptori ai acestora, reglatori ai sintezei ADN, etc). Proteinele codificate de protoncogene, aproximativ 1700, se gsesc n toate compartimentele celulare( nucleu, citoplasm, membran celular, mitocondrii) Produii protoncogenelor intervin n receptarea i transmiterea semnalelor de la exterior spre nucleu, orice dereglare a acestui mecanism de comunicare intercelular determin tulburri funcionale ale celulei normale. Protoncogenele pot deveni oncogene prin : - mutaia punctiform( gena ras) - translocaie 6

amplificare genic( gena myc) rearanjare genic- cr. Philadelphia( oncogena bcr fuzioneaz cu protoncogena c-abl), hemopatii maligne - inseria genomului viral n apropierea unei protoncogene( virusul hepatitei B se inser ntr-una din genele care codific receptorii acidului retinoic- hepatocarcinom) Activarea protoncogenelor n oncogene este posibil prin: modificri structurale ale genei ( alterri calitative: mutaii punctiforme ale ADNului, translocaii genice). Exemple: - Gena ras prin mutaia unei singure baze din totalul de 3000 (nlocuirea glicinei cu valina) este implicat n cancerul vezical, - Gena ras prin 2 mutaii n structura sa este implicat n c. colon, c. pulmonar. Produii genei ras sunt GTP-aze membranare i intervin n proliferarea celular. - LMC- cromozomul Philadelphia, t(9:22), corespunde unei alterri a genei c-abl fuzionat cu gena bcr, rezultatul fiind o protein cu activitate tirozinkinazic crescut fa de cea a proteinei normale. modificri n expresia genei ( alterri cantitative: apropierea unei protoncogene de o gena normal sau prin amplificarea protoncogenei ) Exemple: - Apropierea unei protoncogene de o gen normal o aduce pe aceasta sub controlul unei gene active. Limfomul Burkitt: prin translocaia 8:14 protocongena myc devine dependent de locusul care codific secreia de imunoglobuline, fr ca structura ei sau a proteinei s fie modificat. Amplificarea protoncogenei, respectiv creterea numrului de copii ale acesteia, implic de ex gena myc n mai multe tipuri de cancer. Transformarea unei protoncogene printr-o mutaie genic ntr-o oncogen are ca urmare apariia unei celule maligne. De obicei sunt necesare mai multe oncogene dei uneori este suficient o singur oncogen pentru declanarea mecanismului de producere a cancerului. ONCOGENELE sunt gene a cror expresie proteic este asociat cu transformarea celulelor normale n celule neoplazice. Proteinele oncogene influeneaz nefavorabil procesele de cretere i difereniere celular, prin dereglarea mecanismului de comunicare intracelular i sinteza de mesageri proteici modificai fa de cei normali celula normal poate deveni malign. Oncogenele codific urmtoarele tipuri de proteine: - factori de cretere( gena sis- PDGF, gena int- EGF) - receptori membranari( erb B- EGF, fsm- CSF) - proteine plasmatice( src, abl, fes) - proteina G- gena ras - proteine nucleare( myc, myb, fes, p53) ONCOGENELE concur prin produii lor la apariia alte celule maligne, respectiv cancer: - c-abl- LMC; - c-erb B1- cancere epidermoide, glioblastoame; - c-erb B2- adenocarcinomul mamar, ovarian, gastric; - c-myc- cancer pulmonar, sn, col uterin; - c-myc- cancer pulmonar; 7

- c-ras- cancer vezic urinar, pancreatic, colon, plmn O oncogen poate realiza transformarea unei celule normale numai atunci cnd p53( gena supresoare, antioncogen) este nefuncional. n situaia n care acioneaz 2 sau mai multe gene oncogene, chiar dac p53 este funcional, celula normal se transform malign. P53 reprezint paznicul genomic inducnd apoptoza n celulele modificate genic. ANTIONCOGENELE sunt gene supresoare, cu rol de inhibare a proliferrii celulare, fiind implicate n apariia cancerului cnd ambele alele sunt inactivate Conform teoriei mutaionale sunt necesare 2 evenimente genetice succesive n mecanismul carcinogenezei. Antioncogenele pot inactivate astfel: - fie o alel inactiv este prezent n linia germinal fiind trecut la descendeni, se creeaz un risc crescut pentru un cancer motenit, o singur modificare ulterioar a genei alele inactiveaz gena; - fie prin inactivarea succesiv a ambelor alele ntr-o celul somatic. Pentru oncogene persistena unei copii normale a genei nu este suficient pentru a menine fenotipul normal cnd una din copii este activ. Pentru antioncogene conservarea unei copii a genei este suficient, fenotipul malign aprnd doar n absena ambelor copii ale genei normale. Transformarea celulei normale ntr-una malign se face alterarea mai multor gene. De ex. o oncogen poate realiza transformarea unei celule normale numai atunci cnd gena p53 este nefuncional. n situaia n care acioneaz 2 sau mai multe gene oncogene, chiar dac p53 este funcional, celula normal se transform malign. P53 reprezint paznicul genomic inducnd apoptoza n celulele modificate genic. Gena supresoare p-53, numit i paznicul genomic, are rol n controlul ciclului celular. Ea induce apoptoza celulelor cu material genetic modificat dac aceste leziuni nu se pot repara. Sindromul Li-Fraumeni n care gena p-53 este deficitar se caracterizeaz prin apariia mai multor tipuri de cancere: mamar, colon, sarcoame, leucemii, etc. Exemple de gene supresoare: - p53 este implicat prin inactivarea sa n apariia c. pulmonar cu celule mici, sdr. Li-Fraumeni, c. sn, colon - MEN I modificat determin tumori endocrine multiple - FAP modificat n polipoza colic familial, cancer colorectal - Gena Rb modificat a fost identificat n retinoblastom, tumora Wilms, osteosarcom - WT1- n tumora Wilms

n cursul evoluiei bolii se produc alte evenimente genice care vor determina apariia unei subclone celulare maligne cu agresivitate mai mare. Importana alterrii genetice n trepte( stadial) este demonstrat de faptul c neoplaziile maligne apar mai frecvent la persoanele n vrst, care au o instabilitate genetic mult mai mare, ct i de faptul c n unele cazuri se ntlnesc alturi de focarul de cancer se ntlnesc i leziunile precursoare reprezentate de leziuni premaligne( displazii).