Professional Documents
Culture Documents
IETS ao 2007
EMBRIONES BOVINOS (IN VIVO+IN VITRO) TRASFERIDOS EN SURAMERICA EL 35% DE LA ACTIVIDAD GLOBAL 823.160 285.387
ThibIER 2008
INCREMENTO DEL 2008 AL 2009 EN BIOTECNOLOGIA DEL 12%. EN EL 2009 SE REPORTARON 5.282 COLECTAS CON 13 .161 PREECES CON UN INCREMENTO DEL 2,9% 3.358 EMBRIONES FIV 134 EMBRIONES CONGELADOS. GOMEZ 2010
1- PROPOSITOS.
COMERCIAL. GENETICO. ANIMALES EXPOSICION. CREAR REBAO PURO A PARTIR DE 2 HEMBRAS PURAS. CREAR REPRODUCTORES. MULTIPLICAR LAS HEMBRAS ELITE.
2- USOS T.E.
-COMERCIO DE GENETICA SUPERIOR. -MULTIPLICAR ANIMALES FISICAMENTE IMPEDIDOS. -PRUEBAS DE PROGENIE. - SEMEN DE ALTO COSTO. -TRANSPORTE DE MATERIAL GENETICO. - 2 O MAS ANIMALES IDENTICOS(BIPARTICION) -CONSERVAR MATERIAL GENETICO -
3 - LIMITACIONES T.E.
-COSTOS. -TIEMPO. -RECEPTORAS DISPONIBLES. -EL 20% DE LA RECEPTORAS NO SE PREA X T.E. -NO TODAS LAS VACAS SON BUENAS DONADORAS. -PERSONAL DE FINCA CAPACITADO Y MOTIVADO. -INSTALACIONES BASICAS. - PROGRAMA NUTRICIONAL ADECUADO.
HISTORIA REPRODUCTIVA PROGRAMA SANITARIO CICLOS REGULARES >A 60 DIAS POST PARTO INTERVALO ENTRE PARTOS CONDICION CORPORAL BALANCE ENERGETICO POSITIVO EDAD MAX 13-15 AOS NOVILLAS CICLANDO
EVALUACION REPRODUCTIVA PERMEABILIDAD CERVICAL ULTRASONIDO CUERNOS UTERINOS ESTROMA OVARICO (FOLL) VAGINA NOVILLAS CTR > 3 OVIDUCTOS
Fisiologa Reproductiva
BOS INDICUS
1-DINAMICA FOLICULAR DOS y TRES ONDAS el 60% 2-FOLICULO DOMINANTE Y CUERPO LUTEO DE MENOR TAMAO 3-CUERPOS LUTEOS INTRAESTROMALES SE PRESENTAN EN UN 50%. 4 NIVELES DE E 2 Y P 4 CIRCULANTES BAJOS 5-FOLICULOS A 5 mm MAYOR CANTIDAD 6-FOLICULOS A 5 mm MENOR CANTIDAD 7-RESPUESTA A GONADOTROPINAS EX. CON DOSIS BAJAS MEJOR RESPUESTA 8-DURACION ESTRO ENTRE 4 Y 10 HORAS 9-PRESENTACION ESTRO NOCTURNO SE PRESENTAN EN UN 56% 10- REINICIO ACTIVIDAD OVARICA POST PARTO ENTRE 45 - 70
BOS TAUROS
1-DINAM ICA FOLICULAR DOS A TRES ONDAS 2-FOLICULO DOMINANTE Y CUERPO LUTEO DE MAYOR TAMAO 3-CUERPOS LUTEOS INTRAESTROMALES SE PRESENTAN EN UN 10%. 4 NIVELES DE E 2 Y P 4 CIRCULANTES ALTOS 5-FOLICULOS A 5 mm MENOR CANTIDAD 6-FOLICULOS A 5 mm MAYOR CANTIDAD 7-RESPUESTA A GONADOTROPINAS EX. CON DOSIS ALTAS MEJOR RESPUESTA 8-DURACION ESTRO ENTRE 10 Y 18 HORAS 9-PRESENTACION ESTRO NOCTURNO SE PRESENTAN EN UN 36% 10- REINICIO ACTIVIDAD OVARICA POST PARTO ENTRE 35-45
DONADORAS
RESPUESTA DE LAS VACAS BRAHMAN EN LA CALIDAD DE EMBRIONES DE ACUERDO A LA HORMONA UTILIZADA. Tratamiento N de Vacas Estructuras Colectadas Embriones Calidad 1 Embriones Calidad 2 Embriones Calidad 3 -4 UFOs
2.480
12.400 (5/vaca) 5.175 (4,14/ vaca) 1.485 (5,5 vaca) 19.060 (4,76 vaca)
4.960 (2 / vaca) 3.105 (2,5 vaca) 661 (2,45/vaca) 8.726 (2,18 vaca)
4.320 (1,7/ vaca) 1.242 (1/ vaca) 204 (0,76 vaca) 5.766 (1,44 vaca)
1.250
270
2.430 (9 /vaca)
4.000
LH
FSH Celo 5 10
Prog. 21
Superovulacin donadoras
CONCLUSIONES:
-
Superovulacin de donadoras
SINCRONIZACION DE LA ONDA FOLICULAR: - Progestgenos y estrgenos - P4 + 17 estradiol 50-100mg p4 + 2,5 - 5mg 17 estradiol Nueva onda 4,3 das despus - P4+EB (benzoato estradiol) 50-100mg p4 + 2,5 - 5 mg estradiol Nueva onda 4-5 das despus Iniciar 4 das despus con FSH
BO ET AL 1995-2006- A PARTIR DEL 2002
DIA 0
HORA 8:00 am
DOSIS
2 ,5ml 4 6:00 am 6:00 pm 5 6:00 am 6:00 pm 6 6:00 am 2 ml 2 ml 1,5 ml 1,5 ml 1 ml 7 ml 6:00 pm 1 ml 3 ml 7 6:00 am 6:00 pm 8 6:00 am 6:00 pm 9 15 6:00 am 6:00 am 0,5 ml 0,5 ml 3000 UI
Pluset Pluset Pluset Pluset Pluset Lutalyse Pluset Lutalyse + retirar implante Pluset Pluset HCG ( Chorulon ) + I.A. I.A. I.A. Colecta de Embriones
Superovulacin donadoras
- Progestgenos y estrgenos - P4+ EV ( Valerato de Estradiol ) Crestar ( 3mg norgestomet +5mg EV) Nueva onda 4 a 6 das Iniciar FSH 5-6 das despus - P4 + ECP( Cipionato de Estradio l) 50-100mg p4 + 2-4 mg ECP muy variable ( No recomendable)
DIA 0 8 9 -10 15 20 21 22
HORA 8:00 am 8:00 am 8:00 am Celo detectado Palpar C. L. 6:00 am 6:00 pm 6:00 am 6:00 pm 6:00 am 6:00 pm
DOSIS
Preloban Conceptal Implante crestar ( V.E.) completo Pluset Pluset Pluset Pluset Pluset lutalyse Pluset Lutalyse + retirar implante Pluset Pluset HCG ( Chorulon) + I.A. I.A. I.A. Colecta de Embriones
23 24 25 31
Superovulacin donadoras
Alternativas independientes al uso de estrgenos: Prohibicin de esteroides en la cadena alimenticia. - Inicio de SOV en la primera onda folicular. - Ablacin folicular.
NUEVA ONDA FOLICULAR APARECE 1 A 2 DIAS DESPUES RESPUESTA VARIABLE. PURSLEY et al, 1995.
pLH 25 mg - P4 + GnRh
- GnRh 2009
y SOV 2 das despus no tubo diferencias con P4 y E2 y SVO 4 das despus en ganado de leche .Wock et al, 2008
DIA 0 7 8 9
HORA 8:00 am
DOSIS 2 ml
HORMONA Aplicar dispositivo ( P4 ) + Cloprostenol Conceptal ( GnRh ) Folltropin 36 h. Folltropin Folltropin Folltropin Folltropin Folltropin Folltropin lutalyse Folltropin Lutalyse + retiro dispositivo Lutropin I.A.12h. I.A.24 h. Colecta de Embriones
10
6:00 am 6:00 pm
11
6:00 am 6:00 pm
12
6:00 am
0,5 ml 3 ml
13
6:00 am 6:00 pm
12,5 mg
14 20
6:00 am 6:00 am
Reuben J. Mapletoft, et al, 2010
Superovulacin donadoras
SINCRONIZACIN DE LA ONDA FOLICULAR: - Ablacin folicular, Bungartz y Niemann et al 1997. Aspiracin de foliculos mayores a 5 mm. Inicia onda 1,5 dias Si no hay C.L. aplicar progestageno. Iniciar 2 Dias despus con FSH - Limitante : Equipo de aspiracion folicular
Ablacion folicular
DIA 0 1
DOSIS
2 ml 2 ml 1,5 ml 1,5 ml 1 ml 7 ml
Pluset dispositivo p4 Pluset Pluset Pluset Pluset lutalyse Pluset Lutalyse Pluset+ retirar dispositivo p4 Pluset HCG ( Chorulon) + I.A. I.A. I.A. Colecta de Embriones
6:00 am 6:00 pm
6:00 am
6:00 pm
1 ml 3 ml
6:00 am 6:00 pm
6:00 am 6:00 pm
6 12
6:00 am 6:00 am
Chvez, et al, 2008
n: 20
P4-B.E.-HCG -IATF
8,38
4,76
6,5
%VIABILIDAD
72%
89.7%
167
244
del folliculo y > de receptores LH. Y L.H. 48h PF2 2 i.a. Modificaciones : -LH 60 horas despues de PF2 en tauros- mejora pero no en b. indicus. Baruselli et al.2006 - En el 2007 nelore P36 LH 48- ecg.2 i.a. Barcelos et el
DIA 0 5
HORA 7:00 am
DOSIS 2 ,5ml
7:00 am 7:00 pm
Pluset Pluset Pluset Pluset Pluset lutalyse Pluset eCG eCG y retirar implante Lutropin I.A. I.A. Colecta de Embriones
7:00 am 7:00 pm
7:00 am
BARCELOS, 2007
N=20
P-36-LH
P36/ECG-LH
6,65
10
5,1
7,3
76,7%
73%
102
146
Desarrollo embrionario
Ovocito 150-190m Da 1 ovulacin fimbrias infundibulum Da 2 2 clulas oviducto Da 3 4 clulas oviducto Da 4 8 clulas oviducto Da 5 16 clulas cuerno uterino Da 6 32-64 clulas mrula compacta Da 7 100-200 clulas blastocisto temprano Da 8 100-200 clulas blastocisto Da 8 100-200 clulas blastocisto expandido mayor dimetro Da 9 200-800 clulas blastocisto protruido
Cuerpo Lteo (CL). Instalaciones y Condiciones de Manejo. Condiciones climticas y estacin del ao.
PORCENTAJE DE PREEZ DE EMBRIONES BRAHMAN FRESCOS DE ACUERDO A LA CALIDAD DEL EMBRION .CHAVEZ 2009
Embriones transferidos
1.800 3.420 5.400 4.580 1.800 17.000
Receptoras preadas
990 2.017 1.890 2.748 756 8.401
Receptoras vacas
810 1.403 3510 1832 1044 8.599
% efectividad
.
NOVILLAS PESO > 320 KG CICLANDO IDEAL CRUCE LECHERO BALANCE E + PELVIS AMPLIA TEMPERAMENTO SANIDAD,VACUNAS
PRUEBAS SANITARIAS
VACAS. CERVIZ. > 60 DIAS PARTO. C.C. CICLANDO IDEAL. BALANCE E+. SANIDAD. HABILIDAD MATERNA.
1 230 44
2 460 53 *
3 633 55 *
4 175 47
RECEPTORAS
RECEPTORAS CEBUINAS
DIA 0
PF2,UN DIA
ANTES DE LA APLICA CION DE PF2 A LA DONADORA
PF2 2 DOSIS
Da 2-3-4 Da 14 Da 16 Da 23
DIA 0
GnRh
GnRh+ P4
P4+ B.E.
GnRh+ P4
Da 6
Retiro P4+ecp 1 mg
Dia 8 Dia 15
celo t.e.
celo t.e.
Conclusiones
-
La sanidad, nutricin y manejo son fundamentales para obtener buenos resultados. Realizar evaluacin ovrica y tracto reproductivo con ultrasonido a donadoras y receptoras para evitar los animales problema , la condicin corporal exagerada es un indicativo. En cuanto a la SOV. es fundamental que su inicio concuerde con al arranque de la onda folicular, en la primera si es posible. o con p4 + E2 . La hormona utilizada no es tan importante , se deben ajustar los protocolos a las vacas no al contrario. Personalizar tratamientos de vacas de alto merito y costo.
Evaluar los resultados de los trabajos por preez obtenidas de acuerdo al numero donadoras el mnimo deben ser de 3/donadora para justificar la T.E. frescos - Existen normas, formatos, reglas internacionales propuestos por la IETS. Utilizar inductores de la ovulacin ya sea con hcg-o Lh y realizar IATF
Criopreservacin
Congelacin de embriones.
Vitrificacin.
-7 c (10 min. )
0,5 C/minuto
-35c
Nitrgeno liquido
TASA DE PREEZ EN NOVILLAS TRATADAS CON GNRH, HCG, LH Y CIDR AL TRASFERIR EMBRIONES CONGELADOOS EN ETHYLEN-GLYCOL MARQUES 2002
CONTROL
GNRH 10g
LH 25mg
P4 Cidr 1,9g
TASA PREEZ N H.
TRANSFERIDAS
28,6% 98
53,5% 99
51% 96
45,4% 41,1% 97 95
Vitrificacin
DESVITRIFICACION DE EMBRIONES
EMBRIONES VITRIFICADOS (BIONICHE)
PAJILLA 5-10 SEGUNDOS AL AIRE (DESHELAR) PASAR A AGUA A 35 C POR 20 SEGUNDOS AGITAR LA PAJILLA COMO BAJANDO UN TERMOMETRO SUMERGIR LA PAJILLA HORIZONTALMENTE POR 3 A 5 MINUTOS EN AGUA 20-25 C. CARGARLA LA PAJILLA EN LA PISTOLA DE TRANSFERENCIA REALIZAR LA TRANSFERENCIA EN 5 MINUTOS LLENAR EL FORMATO DE TRANSFERENCIA
Conclusiones de la criopreservacin
Es mejor la congelacin de embriones jvenes mrulas y blastocitos jvenes independientemente del mtodo utilizado. Colecta el da 6. La calidad del embrin es fundamental solo debemos congelar embriones tipo 1 Los embriones no deben permanecer ms de dos horas post colecta e iniciar su congelacin. La conservacin de los embriones en los termos es fundamental por ningn motivo deben ser expuestos a la boca del termo salvo si se va a realizar la descongelacin. El equipo de congelacin debe ser chequeado y calibrado anualmente. Los porcentajes de prees con embriones brahmn congelados oscilan entre 20 y 50% no crear falsas expectativas
BIPARTICION DE EMBRIONES
til para aumentar el nmero de cras , o para producir animales genticamente idnticos y realizar pruebas de comportamiento. Morulas o blastocistos de excelente calidad pueden ser utilizados Es mas fcil partir embriones en estado blastocisto ,dejando la mitad de la masa celular interna a cada mitad, se utiliza una cuchilla adaptada a un microscopio de fase invertida, y el embrin puede ser trasferido sin zona pelucida. Hay dos mtodos Micromanipuladores de un brazo o de dos brazos Micromanipulador de un brazo , el embrin se fija a la caja de petri con una solucin especial que forma una carga elctrica entre la zona pelucida y la caja de petri.
BIPARTICION DE EMBRION
Biparticin de embriones
Sexaje de embriones
Biopsia Mrula 28-38 clulas muestra 4 clulas Es el 15% embrin PREFERIBLEMENTE BLASTOCISTOS Tiene 45 a 100 clulas (- 10 % embrin) LEJOS DE LA MASA CELULAR
Prueba de sexaje
Reaccin en cadena con polimerasa PCR
AMPLIFICACION IN VITRO DE SECUENCIAS ESPECIFICAS DE DNA PRIMERS ,NUCLEOTIDOS, SLN TAMPON Y POLIMERASA TERMOESTABLE ( DNA taq) EL DNA DEL CROMOSOMA ES AMPLIFICADO - LA PRUEBA ES MUY SENSIBLE SE HA PODIDO SEXAR UN ESPERMATOZOIDE. SIEMPRE SE HACEN CONTROLES PARA EVITAR POSIBLES CONTAMINACIONES EN LAS MUESTRAS. EL EQUIPO SE LLAMA UN TERMOCICLADOR Y LUEGO SE REALIZA UNA ELECTROFORESIS PARA INTERPRETAR LA PRUEBA . DURACION PRUEBA 2-3 HORAS. Y SE TOMA UNA FOTOGRAFIA
ELECTROFORESIS
INTERPRETACION DE LA FOTOGRAFIA
The SEX-Y Kit SEX-Y Probe labeled Y chromosomes in embryo blastomeres Biopsy Medium Buffer 1 Buffer 2 Mounting Medium SEX-Y Probe Fixative Vessel Product No. 19982/5010 Bright red fluorescent signal indicates Y chromosome within nuclear DNA Simple, rapid detection allows for immediate visual identification of Y chomosomes Kit contains materials for up to ten tests